PROPOSAL PENELITIAN TUGAS AKHIR

BIOAKTIVITAS ANTI BAKTERI DAN ANTI INFLAMASI EKSTRAK

ETANOL DAUN KETEPENG CINA (CASSIA ALATA)

Disusun oleh:
AHCMAD TAUFIK
3212181015

Jurusan Kimia
Fakultas Sains dan Informatika
Universitas Jenderal Achmad Yani
Cimahi
2023

i
 HALAMAN PENGESAHAN
Proposal Penelitian

BIOAKTIVITAS ANTI BAKTERI DAN ANTI INFLAMASI EKSTRAK

ETANOL DAUN KETEPENG CINA (CASSIA ALATA)

Diusulkan oleh:
Ahcmad Taufik
3212181015

Menyetujui,

Cimahi, Januari 2023

Dosen Pembimbing Utama Dosen Pembimbing Pendamping

Dr. Dr. Lilis Siti

Valentina Aisyah,
Adimurti K., S.Si., S.Pd.,
Dra., M.Si M.Si.
NID.
Mengetahui,
Ketua Jurusan Kimia

Dr. Jasmansyah,Drs., M.Si.

NID. 412114964

i
 RINGKASAN
Ketepeng Cina (Cassia alata Linn) merupakan tanaman yang berasal dari daerah tropis
khususnya Amerika Selatan, Afrika Timur, Asia Selatan-Tenggara. Di Indonesia tanaman
Ketepeng Cina tumbuh subur dan mudah dibudidayakan. Masyarakat Indonesia sering
memanfaatkan daun dari tanaman Ketepeng Cina ini untuk dijadikan obat tradisional dalam
permasalahan penyakit kulit seperti panu,kadas, maupun kurap. Daun Ketepeng Cina diketahui
mengandung berbagai senyawa metabolit sekunder seperti flavonoid, steroid, saponin serta
alkaloid yang sangat berperan penting dalam sifat antibakteri yang dimilikinya. Selain sifat
antibakterinya, daun Ketepeng Cina juga diketahui memiliki senyawa antiinflamasi. Penelitian
ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun Ketepeng Cina terhadap
bakteri Streptococcus pyogenes. Pengujian aktivitas antimikroba dilakukan secara in vitro
dengan metode difusi agar menggunakan kertas cakram untuk mengetahui nilai daya hambat
serta konsentrasi hambat minimum nya. Serta aktivitas antiinflamasi yang dilakukan dengan
menggunakan metode karagenan yang diinduksi pada hewan mencit (tikus).
Kata Kunci : Antibakteri, Streptococcus pyogenes, Antiinflamasi, Cassia alata

ii
 Daftar Isi

HALAMAN PENGESAHAN.........................................................................................................i
RINGKASAN..................................................................................................................................ii
BAB 1. Pendahuluan.......................................................................................................................1
1.1. Latar Belakang..................................................................................................................1
1.2. Identifikasi Masalah..........................................................................................................3
1.3. Maksud dan Tujuan Penelitian..........................................................................................3
1.4. Manfaat Penelitian............................................................................................................3
BAB 2. Tinjauan Pustaka................................................................................................................4
2.1. Tanaman Ketepeng Cina (Cassia alata)...........................................................................4
2.2.1 Klasifikasi Tumbuhan...................................................................................................4
2.2.2 Morfologi Tumbuhan....................................................................................................5
2.2.3 Kandungan Fitokimia Ketepeng Cina Serta Manfaatnya..............................................5
2.2. Bakteri Streptococcus pyogenes........................................................................................5
2.3. Antibakteri........................................................................................................................7
2.4. Metode Pengujian Antibakteri..........................................................................................7
2.5. Antiinflamasi.....................................................................................................................8
BAB 3. Metodologi Penelitian......................................................................................................10
3.1. Diagram Alir Penelitian..................................................................................................10
3.2. Alat dan Bahan................................................................................................................11
3.2.1. Alat yang digunakan...................................................................................................11
3.2.2. Bahan yang digunakan................................................................................................11
3.3. Prosedur Kerja Penelitian................................................................................................11
3.3.1. Preparasi Sampel.........................................................................................................11
3.3.2. Tahap Ekstraksi Daun.................................................................................................11
3.3.3. Skrining Fitokimia......................................................................................................12
3.3.4. Uji Aktivitas Antibakteri............................................................................................13
3.3.5. Uji Aktivitas Antiinflamasi.........................................................................................14
BAB 4. Hasil dan Pembahasan......................................................................................................16
4.1. Determinasi Tumbuhan...................................................................................................16

iii
 4.2. Ekstraksi Daun Ketepeng Cina.......................................................................................16
4.3. Skrining Fitokimia..........................................................................................................16
4.4. Skrining KLT..................................................................................................................17
Lampiran........................................................................................................................................19

iv
 Daftar Tabel
Tabel 1. Anggaran biaya penelitian............................................................................................................15
Tabel 2. Jadwal kegiatan penelitian............................................................................................................16

v
 Daftar Gambar
Gambar 2.1. Tanaman Cassia alata……………………………………………………………….4
Gambar 2.2. Bakteri Streptococcus pyogenes……………………………………………………..6

vi
 BAB 1.

PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang

Penyakit infeksi merupakan salah satu masalah kesehatan dikala

musim pancaroba seperti saat ini. Penyakit infeksi terjadi karena proses saat
organisme yang merupakan bakteri, virus, dan jamur yang dapat
menyebabkan penyakit, masuk ke dalam tubuh atau jaringan dan
menyebabkan kerusakan (Grace et al., 2007). Salah satu penyakit infeksi yang
sering menyerang manusia yaitu radang tenggorokan. Radang tenggorokan
termasuk ke dalam penyakit infeksi saluran pernapasan (ISPA) yang menurut
Departemen Kesehatan Republik Indonesia Pada Tahun 2020 Indonesia
memiliki prevalensi sebesar 25% pada kasus ISPA. Radang Tenggorokan bisa
terjadi diakibatkan oleh virus dan bakteri. (Cook et al., 2009) telah meneliti
dari 100 kasus radang tenggorokan 20 diantaranya disebabkan oleh bakteri
Streptococcus pyogenes.

Bakteri Streptococcus pyogenes termasuk ke dalam kategori grup A

hemolitik streptococcus yang dimana merupakan bakteri gram positif yang
sering terdapat ada pada saluran pernafasan bagian atas. Indikasi radang
tenggorokan yang disebabkan oleh infeksi S. pyogenes ditandai dengan rasa
sakit atau tidak nyaman pada tenggorokan, pembesaran tonsil yang disertai
eksudat, rasa perih, panas, dan bisa menyebabkan rasa tidak enak badan
(Madigan et al., 2009). Cara yang ampuh untuk mengobati radang
tenggorokan yang disebabkan oleh bakteri adalah dengan menggunakan
antibiotik yaitu substansi organic yang dihasilkan oleh mikroorganisme dan
dalam konsentrasi rendah ia dapat menghambat bahkan membunuh
mikroorganisme lainnya (Chinedum et al., 2005).

1
 Penggunaan obat antibiotik sintesis terus menerus ternyata dapat
menimbulkan beberapa efek samping yang serius diantaranya reaksi
hipersensitifitas, demam, dan hipertensi, serta gangguan pendengaran dan
nefrotoksisitas (disfungsi ginjal) (Kemenkes, 2011). Di era ekonomi global
saat ini obat antibiotik yang berasal dari tumbuhan sangat penting dan
dibutuhkan, karena sekitar 85% sediaan obat tradisional melibatkan
penggunaan ekstrak tumbuhan bahkan penggunaan tumbuhannya itu sendiri.
Tumbuhan merupakan sumber obat yang penting bahkan memegang peran
sebagai kunci dalam Kesehatan dunia. (Lai et al., 2010)

Salah satu tumbuhan yang memiliki potensi besar sebagai obat

antibiotik tradisional yaitu Ketepeng Cina. Ketepeng Cina dengan nama latin
Cassia Alata Linn dari family Caesalpiniaceae merupakan tanaman tropical
berbentuk tegak yang tumbuh setinggi 2-3 m dengan bentuk daun majemuk,
serta bunga yang berwarna kuning. Tanaman ini terdistribusi secara luas di
negara-negara tropis khususnya Amerika bagian selatan, India, Fiji, Indonesia,
Malaysia dan Afrika. Bagian daun, bunga serta benih tumbuhan Ketepeng
Cina dilaporkan mengandung beberapa senyawa dengan kadar tinggi seperti
antrakuinon, krisofanik, napthokuinon atau asam hennotanik (Fernand et al.,
2008).

Pada penelitian yang dilakukan oleh (Paul et al., 2013) telah berhasil
mengisolasi senyawa Asam 3,4 dihidroksisinamat dari daun Cassia alata yang
memiliki aktivitas antibakteri terhadap empat bakteri gram positif
(Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Streptococcus pyogenes dan
Bacillus magetrium) serta empat bakteri gram negatif (Shigella flexneri,
Escherichia coli, Pseudomonae aeruginosa dan Salmonella typhi).
Sedangkan pada penelitian yang dilakukan oleh (Y. U. Dabai, 2012)
mendapatkan hasil bahwa ekstrak kasar daun dan akar Cassia alata dengan

2
 pelarut air, methanol dan kloroform terbukti dapat menghambat pertumbuhan
bakteri Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenese, Escherichia coli,
Pseudomonas aeruginosa, dan Proteus mirabilis.

Selain anti bakteri ternyata Daun Cassia alata juga memiliki

bioaktivitas sebagai anti inflamasi. Inflamasi atau peradangan itu sendiri
merupakan suatu proses protektif normal (reaksi) terhadap trauma fisik atau
zat-zat mikrobiologik yang dapat menyebabkan terjadinya luka jaringan,
terjadinya inflamasi biasanya ditandai dengan timbulnya kemerahan,
pembengkakan, panas, nyeri, dan hilangnya fungsi (Mycek et al., 2001)
Antiinflamasi adalah sebutan untuk agen/obat yang dapat bekerja melawan
atau menekan proses peradangan. Daun ketepeng cina ternyata memiliki
kandungan serta aktivitas antiinflamasi berdasarkan dari penelitianP yang
dilakukan (Moriyama et al., 2003) yang dimana ditemukannya senyawa
flavonoid gikosida Kaempferol-3-O-gentiobioside (K3G) hasil isolasi dari
daun Cassia alata yang memiliki aktivitas sebagai anti inflamasi.

Pada penelitian ini digunakan ekstrak etanol daun Cassia alata. Etanol
dipilih sebagai pelarut karena etanol telah dikenal sebagai pelarut yang
mampu mengekstraksi komponen yang memiliki aktivitas antimikroba serta
selain dari fungsinya etanol juga merupakan pelarut yang mudah ditemui serta
harganya terjangkau. Penelitian ini berfokus pada bagaimana potensi daun
Cassia alata dalam melawan infeksi yang disebabkan oleh bakteri
Streptococcus pyogenes serta daya pada aktivitas anti inflamasinya.

1.2. Identifikasi Masalah

Dari latar belakang di atas, maka permasalahan yang muncul dapat dirumuskan
yaitu:

1. Bagaimana aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun ketepeng cina

(Cassia alata) terhadap bakteri Streptococcus pyogenes?

3
 2. Bagaimana aktivitas antiinflamasi ekstrak etanol daun ketepeng
cina (Cassia alata)?

1.3. Maksud dan Tujuan Penelitian

Maksud dan tujuan dari penelitian ini adalah:

1. Untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun

ketepeng cina Cassia alata terhadap bakteri Streptococcus
pyogenes
2. Untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi ekstrak etanol daun
ketepeng cina Cassia alata

1.4. Manfaat Penelitian

Manfaat penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi baru mengenai
manfaat aktivitas antibakteri dan antiinflamasi dari daun ketepeng cina serta
diharapkan pula dapat menjadi sediaan obat tradisional dalam mengobati
radang tenggorokan.

4
 BAB 2.

TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Tanaman Ketepeng Cina (Cassia alata)
2.2.1 Klasifikasi Tumbuhan

Gambar 2.1 Tanaman Cassia alata

(Sumber : Dokumentasi Pribadi)
Klasifikasi tumbuhan ketepeng cina (Cassia alata L)
Kingdom : Plantae
Subkingdom : Tracheobionta
Super Divisi : Spermatophyta
Divisi : Magnoliophyta
Kelass : Magnoliopsida
Ordo : Fabales
Famili : Fabaceae
Genus : Senna

5
Spesies : Senna alata L
Sinonim : Cassia alata L

Tanaman ketepeng cina dengan nama inggris seven golden candlestick sendiri
memiliki berbagai macam nama daerah di Indonesia, seperti daun kurap,
ura’kap (Sumatera), ki manila, ketepeng gede, katepeng (Sunda), ketepeng cina,
ketepeng badak (Jawa Tengah), tabakum (Tidore), daun kupang-kupang
(Ternate).
2.2.2 Morfologi Tumbuhan

6
 Tanaman ketepeng cina adalah semak hias yang dapat tumbuh setinggi 12
m dan banyak tersebar di Negara tropis seperti Indonesia, Amerika Latin, dan
Afrika Barat. Tanaman ketepeng cina memiliki daun yang berbentuk jorong
sampai bulat oval, merupakan daun majemuk menyirip genap yang berpasangan
sekitar 5-12 baris, memiliki daun yang kaku sepanjang 5-15 cm, dan lebar 2,5-9
cm. memiliki tepian daun yang rata serta ujung daunnya tumpul dengan pangkal
daun yang runcing. Ciri-ciri pertulangan daunnya menyirip dengan tangkai anak
daun yang pendek dengan panjang ± 2 cm dan berwarna hijau tua. Tanaman ini
juga memiliki bunga berwarna kuning dan kuncup pada tandan berwarna
cokelat muda. (Sesa et al., 2014).
2.2.3 Kandungan Fitokimia Ketepeng Cina Serta Manfaatnya
Tanaman Ketepeng Cina mengandung beberapa golongan senyawa kimia
seperti alkaloid, saponin, tannin, steroid, antrakuinon, dan flavonoid.
Kandungan kimia tersebut tenyata yang menjadi peran utama dalam aktivitas
antibakteri yang bukan hanya bermanfaat bagi kesehatan manusia yaitu sebagai
obat untuk penyakit kulit, tetapi juga untuk membasmi virus pada tumbuhan
penyebab tumbuhan mati. (Egra et al., 2019). Pada penelitian yang dilakukan
oleh (El Mahmood et at., 2008) daun Cassia alata mengandung antrakuinon:
rheib, aloe-emodin, chrysophanol, emodin, dan physcion serta flavonoid dan
kaempferol senyawa-senyawa tersebut yang memiliki aktivitas antibakteri dan
antiinflamasi.
2.2. Bakteri Streptococcus pyogenes

7
 Gambar 2.2 Bakteri Streptococcus pyogenes

(Sumber : https://paramediesworld.com)

Kingdom : Bacteria

Phylum : Firmicutes

Class : Bacilli

Order : Lactobacillales

Family : Streptococcaceae

Genus : Streptococcus

Species : Streptococcus pyogenes (Stephen et al., 2006)

Streptococcus pyogenes merupakan bakteri gram positif fakultatif anaerob

penghasil asam laktat. Bakteri ini berdiameter 0.5 – 1.0 µm, berbentuk cocci atau
sphere (bulat) yang tidak menghasilkan spora. Streptococcus pyogenes tumbuh
menyusun seperti bentuk rantai yang khas. Streptococcus pyogenes dapat membentuk
rantai panjang yang terdiri atas 8 buah kokus atau lebih jika dalam media pembenihan
cair yang tepat. (Radji et al., 2011)

Streptococcus pyogenes bereproduksi di sepanjang poros tengah menciptakan

pasangan bakteri atau rantai panjang, secara khas menghasilkan zona-zona β

8
hemolisis yang memiliki ukuran (diameter 1cm) di sekitar koloni pada media agar
yang mengandung darah. Bakteri ini bersifat PYR-positif (menghidrolisis 1-
pyrrolidonyl-2-naphtylamide) dan biasanya sensitif terhadap basitrasin (Jawetz et al.,
2013)

Streptococcus pyogenes terdistribusi secara luas di antara makhluk hidup

khususnya manusia. Penyebarannya dapat terjadi melalui udara, pernafasan, kontak
langsung atau tidak langsung. Salah satu penyakit yang disebabkan oleh virus bakteri
Streptococcus pyogenes adalah Radang Tenggorokan. Secara medis, radang
tenggorokan adalah suatu kondisi ketika tenggorokan terinfeksi virus dan bakteri.
Pada kondisi tersebut tenggorokan mengalami beberapa gejala seperti iritasi pada
kulit, peradangan, suara serak, batuk, gatal dan terasa sakit saat menelan (Gayatri et
al., 2022)

2.3. Antibakteri
Antibakteri merupakan zat yang memiliki peran yang dapat mengganggu
pertumbuhan bahkan dapat membunuh bakteri dengan cara mengganggu sistem
metabolismenya. Suatu bahan yang dapat dikategorikan sebagai antibakteri harus
memiliki sifat penghambat (bakteriostatik) juga pembunuh (bakterisidal) pathogen
tanpa merusak hospes, tidak menyebabkan terjadinya resisten, dan tidak bersifat
alergik (Brooks et al., 2013).

Uji aktivitas antibakteri meruakan suatu metode untuk menentukan tingkat

kerentanan bakteri terhadap zat bakteri dan untuk mengetahui senyawa murni yang
memiliki aktivitas antibakteri. Mekanisme kerja senyawa antibakteri terhadap
bakteri yaitu dengan mendenaturasi protein, yang caranya merusak molekul asam
nukleat dan protein sehingga sel-sel menjadi rusak dan tidak dapat diperbaiki lagi.
Membuat pembentukan dinding sel terhambat dan mengubah struktur dinding sel
setelah dibentuk merupakan cara antibakteri merusak dinding sel, lalu membuat

9
permeabilitas membrane sel terganggu dan menghambat kerja enzim (Pelu et al,
2022)

2.4. Metode Pengujian Antibakteri

Uji aktivitas antibakteri secara in vitro atau secara eksperimen diluar tubuh
mahluk hidup mempunyai beberapa faktor yang dapat mempengaruhi
keberhasilannya yaitu komponen media, ukuran inoculum, stabilitas inoculum, pH
lingkungan, waktu inkubasi, dan aktivitas metabolic bakteri. (Tanu et al., 2007).
Metode yang digunakan dalam menguji aktivitas antibakteri yaitu :

2.4.1 Metode Dilusi

Metode dilusi ini bertujuan untuk menentukan zat antibakteri yang

dibutuhkan untuk menghambat pertmbuhan atau mematikan bakteri yang akan
diuji. Hasil pengamatan pada metode ini dapat diukur dengan istilah Kadar
Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM). Metode dilusi
ini meliputi 2 cara, yaitu:

A. Metode Dilusi Cair (Broth Dilution Test)

Prosedur dari metode ini yaitu pertama-tama dengan mengencerkan zat
antibakteri yang kemudian bakteri dimasukkan ke dalam berbagai
konsentrasi zat antibakteri yang akan diuji pada media cair kemudian
media yang ditanami bakteri dan zat antibakteri diinkubasi selama 18-24
jam, dan diamati pertumbuhan bakteri dengan melihat indikasi kekeruhan
dari cairan.
B. Metode Dilusi Padat (Solid Dilution Test)
Pada metode ini, zat antibakteri yang akan diuji dicampurkan ke dalam
media agar yang selanjutnya ditanami oleh bakteri di atas permukaannya.
Konsentrasi dari masing-masing zat antibakteri dibagi denganmembuat
permukaan agar menjadi kotak-kotak. Inkubasi selama 24 jam atau lebih,
dan dapat dihitung pertumbuhan dari bakteri yang akan diuji tersebut.

10
 2.4.2 Metode Difusi
Pada metode difusi ini zat antibakteri diletakan pada media pembenihan
yang telah diinokulasi oleh bakteri, kemudian diinkubasi dan dihitung
zona jernih di sekitar zat antibakteri yang diinterpretasikan sebagai daya
hambat pertumbuhan bakteri oleh zat antibakteri. Terdapat beberapa cara
(metode) dari metode difusi ini diantaranya metode disc diffusion, metode
E-Test, Ditch-plate Technique, Cup-plate Technique, dan Gradient-plate
Technique. (Dorland et al., 2012)

2.5. Antiinflamasi
Antiinflamasi adalah zat yang bekerja dengan cara melawan atau menekan
proses peradangan. Zat tersebut bisa dikatakan juga obat antiinflamasi yang
termasuk ke dalam golongan obat yang memiliki mekanisme kerja umum berupa
penghambatan sintesis prostaglandin via penghambatan enzim siklooksigenase.
Biosintesis prostaglandin sangat dipengaruhi oleh siklooksiganase. Berdasarkan
mekanisme kerjanya, obat obat antiinflamasi dibagi menjadi dua kelompok besar
yaitu: obat antiinflamasi golongan steroid yang memiliki kinerja menghambat
pelepasan prostaglandin dari sumber sel nya, dan obat antiinflamasi golongan non
steroid yang memiliki cara kerja melalui mekanisme yang lain seperti inhibisi
siklooksigenase yang berperan pada biosintesis prostaglandin (Katzung et al., 2001)

2.5.1 Uji Antiinflamasi dengan Karagenan

Metode uji untuk menentukan aktivitas antiinflamasi dari suatu zat salah
satunya adalah dengan cara megujinya pada hewan mencit (tikus) yang
diinduksikan dengan karagenan. Karagenan adalah rumput laut dari family
euchema, chondrus, gigartina yang diekstraksi menghasilkan sebuah polisakarida.
Berbentuk serbuk putih hingga kuning kecoklatan, dan tidak berbau, bersifat larut
dalam air pada suhu 80℃ (Rowe et at., 2009)

11
 Fungsi dari karagenan itu sendiri adalah dapat menstimulasi pelepasan
prostaglandin setelah disuntikkan ke hewan uji. Peran dari karagenan dalam
pembentukan edema dalam model inflamasi akut. Maka dari itu, karagenan sering
digunakan sebagai iritan dalam metode uji yang bertujuan untuk mencari obat-obat
antiinflamasi, tepatnya yang bekerja degan menghambat sintesis prostaglandin
(Winter et al., 1962)

12
 BAB 3.

METODE PENELITIAN
3.1. Diagram Alir Penelitian

13
3.2. Alat dan Bahan
3.2.1. Alat yang digunakan
1. Gelas kimia 9. Termometer
2. Gelas ukur 10. Pembakar spirtus
3. Labu ukur 11. Cawan petri
4. Pipet ukur 12. Neraca analitik merk ME204
5. Mikropipet dan 13. Magnetic Steerer
tips 14. Autoklaf
6. Tabung reaksi 15. Laminar Air Flow (LAF)
7. Spatula 16. Satu set alat evaporator
8. Batang 17. Oven Inkubator
pengaduk 18. Plathysmometer

3.2.2. Bahan yang digunakan

Pada penelitian ini bahan-bahan yang digunakan adalah Simplisia Daun
Ketepeng Cina, Ethanol 96% pa, Muller Hinton Blood Agar, Cakram disc
steril, NaCl steril, karagenan, Na-CMC, tablet obat Natrium Diklofenak

3.3. Prosedur Kerja Penelitian

3.3.1. Preparasi Sampel
Daun ketepeng cina diambil dari perumahan di daerah Bogor, Jawa
Barat. Sebanyak 1 kg sampel daun dikumpulkan. Daun yang telah
dikumpulkan dibersihkan secara menyeluruh dan dikeringkan menggunakan
oven. Sampel yang telah kering digiling menjadi serbuk simplisia oleh Miller
Machine dan serbuk simplisia disimpan dalam wadah kedap udara.

3.3.2. Tahap Ekstraksi Daun

Simplisia daun ketepeng cina ditimbang sebanyak 200 g, kemudian
dimaserasi masing-masing dalam 1000 mL, 500mL, dan 500 mL etanol 96%

14
 selama 3 x 24 jam sambil sesekali diaduk pada suhu ruang. Maserat yang
dihasilkan kemudian disaring untuk memisahkan filtrate dari residunya.
Filtrat yang diperoleh kemudian dipekatkan dengan rotary evaporator
hingga diperoleh ekstrak pekat.

3.3.3. Skrining Fitokimia

3.3.3.1. Alkaloid
Larutan uji sebanyak 2 ml diuapkan diatas cawan porselin
hingga diperoleh residu. Residu kemudian dilarutkan dengan
5 mL HCl 2N. Setelah dingin, larutan disaring. Larutan yang
didapat dibagi ke dalam 3 tabung reaksi. Tabung pertama
berfungsi sebagai kontrol. Tabung ke 2 ditambahkan 3 tetes
pereaksi dragendroff dan tabung ketiga ditambahkan 3 tetes
pereaksi mayer (melalui dinding tabung). Terbentuknya
endapan jingga pada tabung kedua dan endapan kuning pada
tabung ketiga menunjukan adanya alkaloid (Farnsworth, 1966
dalam Putri dkk., 2015).
3.3.3.2. Flavonoid
Sebanyak 1 ml larutan uji masing-masing dimasukkan ke
dalam 3 tabung reaksi. Tabung 1 sebagai kontrol, tabung 2
ditambah dengan 1 mL larutan Pb Asetat (timbal asetat) 10%,
positif flavonoid jika terdapat endapan kuning (Raphael,
2012). Tabung 3 ditambah dengan beberapa tetes NaOH 20%
terbentuk warna kuning jika mengandung flavonoid
(Ugochukwu dkk., 2013).
3.3.3.3. Terpenoid/Steroid
Larutan uji sebanyak 2 mL diuapkan dalam cawan penguap.
Residu dilarutkan dengan 0,5 mL kloroform, dipindahkan ke
tabung reaksi, ditambahkan 0,5 mL asam asetat anhidrat dan 2

15
 mL asam sulfat pekat melalui dinding tabung. Terbentuknya
cincin kecoklatan atau violet pada perbatasan larutan
menunjukkan adanya triterpenoid, sedangkan bila muncul
cincin biru kehijauan menunjukkan adanya steroid (Ciulei,
1984 dalam Putri dkk., 2015).
3.3.3.4. Saponin
4 mL larutan uji ditambahkan dengan 5 mL aquadest, kocok,
lihat adanya busa yang stabil. Sedikit ekstrak ditambahkan 5
mL air, kocok dalam tabung reaksi, terbentuk busa stabil
(busa setinggi 1 cm dan stabil selama 30 menit). 4 mL larutan
uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi sebagai kontrol
(Depkes RI, 1995 dalam Putri dkk., 2015).
3.3.3.5. Tanin
Sebanyak 2 mL larutan uji dimasukkan ke dalam 2 tabung
reaksi, tabung 1 sebagai kontrol dan tabung 2 ditambahkan
beberapa tetes larutan FeCl3 5% atau FeCl3 10%, tanda
positif Tanin jika terbentuk warna hijau gelap/biru (Robinson,
1911 dalam Putri dkk., 2015)

3.3.4. Uji Aktivitas Antibakteri

3.3.4.1 Pembuatan Suspensi Mikroba Uji
Bakteri Streptococcus pyogenes hasil kulturasi diencerkan
dengan cara diambil 1 ose suspensi bakteri ke dalam tabung
reaksi yang berisi NaCl 0,9% steril, lalu di-vortex mixer
hingga himogen. Kemudian dibandingkan kekeruhannya
dengan Larutan Standar McFarland 0,5 yang setara dengan
konsentrasi 108 CFU/mL.
3.3.4.2 Pembuatan Larutan Konsentrasi Pada Sampel

16
 Ekstrak sampel daun Ketepeng Cina disiapkan, lalu ditimbang
sebanyak 5 gram ke dalam Erlenmeyer 100mL. Ditambahkan
DMSO 10% sebanyak 5 gram, sehingga diperoleh konsentrasi
sampel 50%. Dilakukan pengenceran konsentrasi hingga
diperoleh variasi konsentrasi 25%, 12,5% dan 6,25%..
3.3.4.3 Pengujian Diameter Daya Hambat (DDH)
Larutan bakteri Streptococcus pyogenes dioleskan
menggunakan ose pada agar Muller Hinton Agar. Cakram uji
kosong direndam disalam masing-masing stok konsentrasi
ekstrak daun ketepeng cina (Cassia alata) selama 10-15 menit
dan dibiarkan kering. Lalu cakram uji yang telah dicelupkan
ke ekstrak daun ketepeng cina (Cassia alata) dan ke kontrol
negatif diletakkan ke atas permukaan agar darah secara
higienis di dalam laminar air flow. Kemudian diinkubasi
dalam inkubator pada suhu 37℃ selama 20-24 jam. Setelah
itu dilakukan pengamatan dengan mengukur diameter zona
terang (clear zone) yang mengelilingi cakram yang telah
direndam ekstrak daun ketepeng cina dengan menggunakan
penggaris. Jika tidak terdapat zona hambat maka tidak terlihat
zona terang di sekitar cakram.

3.3.5. Uji Aktivitas Antiinflamasi

3.3.5.1 Persiapan Bahan Uji
a. Pembuatan Larutan Koloidal Na-CMC 1%
Sebanyak 1 gram Na-CMC dimasukkan sedikit demi sedikit
ke dalam gelas kimia 100 ml yang berisi 50 ml air suling
(70˚C) sambil diaduk dengan batang pengaduk hingga
terbentuk larutan koloidal, lalu volumenya dicukupkan
dengan air suling hingga 100 ml.

17
 b. Pembuatan Suspensi Karagenan 1%
Karagenan 1% diperoleh dengan mensuspensikan 1 gram
karagenan dalam Natrium klorida 0,9% sampai 100 ml
dalam beker gelas.
c. Pembuatan Suspensi Natrium Diklofenak
Sebanyak 10 tablet Natrium Diklofenak (setiap tablet
mengandung natrium diklofenak 25 mg) ditimbang,
kemudian dihitung bobot rata-rata lalu digerus. Natrium
diklofenak ditimbang kemudian disuspensikan dengan
dalam larutan NaCMC 1% sedikit demi sedikit sambil
diaduk hingga homogen kemudian dimasukkan ke dalam
labu tentu ukur 100 ml kemudian volumenya dicukupkan
sampai 100 ml.
3.3.5.2 Pemilihan dan Persiapan Hewan Uji
Hewan uji yang digunakan adalah mencit (Mus musculus),
berat badan 20-30 gram, umur 2-3 bulan. Kondisi hewan
sehat. Jumlah mencit putih (Mus musculus) yang digunakan
sebanyak 15 ekor yang dibagi menjadi 5 kelompok dan tiap
kelompok terdiri atas 3 ekor. Kemudian mencit diadaptasikan
dalam kandang kurang lebih selama 1 minggu untuk proses
aklimatisasi. Selama proses tersebut, dijaga agar kebutuhan
makan dan minum tetap terpenuhi. Mencit dipuasakana
selama 8 jam sebelum perlakuan, namun air minum tetap
diberikan (ad libitium) (Parveen dkk et al., 2007). Setiap
mencit diberi tanda dengan spidol pada sendi belakang kiri
agar pemasukan kaki ke dalam platysmometer air raksa setiap
kali selalu sama.
3.3.5.3 Perlakuan Terhadap Hewan Uji

18
Sebelum pengujian, mencit ditimbang terlebih dahulu
kemudian masing-masing mencit diinduksi dengan larutan
karagenan 1% secara intraplantar lalu diukur volume awal
kaki mencit. Setelah itu, diukur volume udema kaki mencit 60
menit setelah penyuntikan karagenan 1% dengan cara
mencelupkannya ke dalam alat platysmometer. Kemudiaan
sediaan diberikan peroral dengan volume pemberian pada
mencit sebanyak 1 ml sesuai dengan kelompok perlakuan
yang telah dibuat sebelumnya. Kemudian diukur volume
udem telapak kaki mencit setelah perlakuan setiap selang
waktu 15 menit selama 3 jam. Volume udem ditentukan
berdasarkan kenaikan raksa pada alat plathysmometer. Data
yang dihasilkan kemudian dikumpulkan dan dilanjutkan
dengan analisa data secara statistik.

19
 BAB 4.

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Determinasi Tumbuhan

Daun Ketepeng Cina diperoleh dari Bogor, Jawa Barat. Hasil determinasi
di Laboratorium Departemen Biologi FMIPA Unpad menyatakan bahwa
tumbuhan yang digunakan adalah Ketepeng Cina (Cassia Alata)

4.2. Ekstraksi Daun Ketepeng Cina

Pada penelitian ini, Ekstraksi daun Ketepeng Cina menggunakan metode
ekstraksi dingin yaitu Maserasi. Metode Maserasi dipilih karena mampu
menjaga stabilitas kandungan dari simplisia itu sendiri. Simplisia yang telah
dikeringkan di udara terbuka selanjutnya di giling hingga menjadi serbuk
kasar. Selanjutnya dilakukan ekstraksi dengan menggunakan pelarut Etanol
absolut. Pelarut Etanol digunakan karena sebagian besar senyawa metabolit
sekunder dapat larut dengan baik pada pelarut etanol. Ekstraksi dilakukan
sebanyak tiga kali dengan total volume pelarut sebanyak 2 L. Dilakukan
penyusutan sample hingga menjadi ekstrak kental dengan Rendemen yang
didapat sebesar 18.6%. Ekstrak kental etanol daun ketepeng cina berwarna
hijau gelap kehitaman.

4.3. Skrining Fitokimia

Skrining Fitokimia adalah tahapan yang biasanya dilakukan sebagai
pendahuluan dalam suatu penelitian yang bertujuan untuk mengidentifikasi
senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam suatu tanaman. Dan
dalam penelitian ini dilakukan skrining fitokimia terhadap Ekstrak Etanol
Daun Ketepeng Cina. Data hasil skrining fitokimia daun ketepeng cina
terlampir dalam tabel dibawah :

20
 Golongan Hasil Ekstrak Etanol

Flavonoid ++
Alkaloid -
Tanin +
Saponin +
Triterpenoid/Steroid ++
Tabel 4.1 Hasil Skrining Fitokimia

Uji golongan senyawa dilakukan pada masing-masing sampel ekstrak

etanol daun ketepeng cina dan ditandai adanya perubahan warna sebagai tanda
positif. Dari tabel diatas dapat dilihat reaksi positif (terjadinya perubahan
warna) pada saat pengujian golongan senyawa flavonoid, tannin, saponin, dan
triterpenoid/steroid.

Ngebahas tentang positif senyawa metabolit sekunder yaitu flavon sama

steroid terus dibandingin sama hasil literature.

4.4. Skrining KLT

21
 DAFTAR PUSTAKA

Brooks G.F., Carroll K.C., Butel J.S., Morse S.A., and Mietzer T.A., (2013). Jawetz,
Melnick, & Adelberg’s Medical Microbiology, 26th Ed., The Mcgraw-Hill
Companies Inc., New York
Dorland, Newman. (2012) Kamus Kedokteran Dorland, edisi ke-31 alih bahasa Alifa
Dimanti, dkk. Jakarta, Penerbit Buku Kedokteran EGC
Egra, S., Mardiana, M., Kurnia, A., Kartina, K., Murtilaksono, A., & Kuspradini, H.
(2019). UJI POTENSI EKSTRAK DAUN TANAMAN KETEPENG (Cassia
alata L) DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI Ralstonia
solanacearum dan Streptococcus sobrinus. ULIN: Jurnal Hutan Tropis, 3(1), 25–
31. https://doi.org/10.32522/ujht.v3i1.2059
Fajrin, F. I., & Susila, I. (2019). Uji fitokimia ekstrak kulit petai menggunakan
metode maserasi. e-Prosiding SNasTekS, 1(1), 455-462.
Fernand, V. E., Dinh, D. T., Washington, S. J., Fakayode, S. O., Losso, J. N., van
Ravenswaay, R. O., & Warner, I. M. (2008). Determination of
pharmacologically active compounds in root extracts of Cassia alata L. by use of
high performance liquid chromatography. Talanta, 74(4), 896–902.
https://doi.org/10.1016/j.talanta.2007.07.033
Gayatri, S. W., Sanna, A. T., Nasruddin, H., Fujiko, M., & Syamsu, R. (2022).
Hubungan Pengetahuan Pola Makan Terhadap Kejadian Radang Tenggorokan
pada Siswa Sekolah Dasar. 7(2), 105–113.
Jawetz, Melnick, Adelberg, (2008). Mikrobiologi Kedokteran, Edisi 25. Alih bahasa:
Huriwati Hartanto dkk., EGC, Jakarta

22
Lai, H. Y., Lim, Y. Y., & Kim, K. H. (2010). Blechnum Orientale Linn - a fern with
potential as antioxidant, anticancer and antibacterial agent. BMC
Complementary and Alternative Medicine, 10. https://doi.org/10.1186/1472-
6882-10-15
Moriyama, H., Iizuka, T., Nagai, M., Miyataka, H., & Satoh, T. (2003).
Antiinflammatory activity of heat-treated Cassia alata leaf extract and its
flavonoid glycoside. Yakugaku Zasshi, 123(7), 607–611.
https://doi.org/10.1248/yakushi.123.607
Paul, B., Mitra, P., Ghosh, T., Salhan, R., & Singh, T. A. (2013). Isolation and
Structural Determination of an Anti Bacterial Constituent from the Leaves of
Cassia alata Linn . Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry, 2(1), 326–
333.
PELU, A. A. D., & Farm, S. (2022). MIKROBIOLOGI AKTIVITAS ANTIBAKTERI.
CV Literasi Nusantara Abadi.
Radji, M., (2011), Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa Farmasi dan
Kedokteran, 14, 35, 107, 194, Jakarta, Penerbit Buku Kedokteran EGC
Rowe, R.C., Paul, J.S., and Marian, E.Q. (2009) Handbook of Pharmaceutical
Excipients. Royal Pharmaceutical Society of Great Britain. London
Tanu I., (2007). Farmakologi dan Terapi, Edisi 5, Jakarta, Balai Penerbit FK UI
Y. U. Dabai. (2012). Phytochemical screening and antibacterial activity of the leaf
and root extracts of Senna italica. African Journal of Pharmacy and
Pharmacology, 6(12). https://doi.org/10.5897/ajpp11.852
Sesa, O. E., Sulastry, T., & Muharram, M. (2014). Isolasi Dan Identifikasi Senyawa
Metabolit Sekunder Ekstrak Metanol Daun Ketepeng Cina (Cassia alata
Linn). Chemica: Jurnal Ilmiah Kimia dan Pendidikan Kimia, 15(1), 136-143.
Winter, C. A., Risley, E. A., & Nuss, G. W. (1962). Carrageenin-induced edema in
hind paw of the rat as an assay for antiinflammatory drugs. Proceedings of the
society for experimental biology and medicine, 111(3), 544-547.

23
 Lampiran
Biodata Mahasiswa

Nama Lengkap : Ahcmad Taufik

NIM : 3212181015
Email : ahcmadtfk@gmail.com
NO . Tlp HP : 085156432771
Alamat Tinggal : Jl. Sasakgantung no VI D kota Bandung
No TLP Rumah : -
Pendidikan : TK : TK. Assalam Bandung Tahun Lulus 2004
SD : SDN. Kebon Gedang Tahun Lulus 2010
24
SMP : SMP Assalam Bandung Tahun Lulus 2013
SMK : SMKN 13 Bandung Tahun Lulus 2017