Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

SayaNFEKSI DANSayaKOMUNITAS, Mei 2003, hal. 2839–2858 0019-9567/03/$08.00-0 Jil. 71, No. 5
DOI: 10.1128/IAI.71.5.2839–2858.2003 Hak Cipta © 2003, American Society for
Microbiology. Seluruh hak cipta.

Pretreatment Tikus dengan Streptomisin MemberikanSalmonella enterica

Model Kolitis Serovar Typhimurium Yang Memungkinkan Analisis
Baik Patogen maupun Host
Manja Barthel,1,2Siegfried Hapfelmeier,1,2Leticia Quintanilla-Martínez,3Marcus Kremer,3,4
Manfred Rohde,5Michael Hogardt,2Klaus Pfeffer,6Holger Russmann,2
dan Wolf-Dietrich Hardt1*
Institut Mikrobiologi, ETH Zürich, 8092 Zürich, Swiss,1dan Max von Pettenkofer-Institut, Ludwig Maximilians
Universitt, 80336 Munich,2Institut Mikrobiologi Medis, Imunologi, dan Kebersihan6dan Institut Patologi,4
Universitas Teknik Munich, 81675 Munich, Pusat Penelitian GSF untuk Lingkungan dan Kesehatan,
85764 Neuherberg,3dan GBF, 38124 Braunschweig,5Jerman

Diterima 25 November 2002/Dikembalikan untuk modifikasi 16 Januari 2003/Diterima 6 Februari 2003

Salmonella entericasubspesies 1 serovar Typhimurium adalah penyebab utama enterokolitis pada manusia. Untuk
alasan yang tidak diketahui, pada tikus serovar Typhimurium tidak memicu peradangan usus melainkan menargetkan
jaringan limfatik terkait usus dan menyebabkan infeksi seperti tipus sistemik. Kurangnya model murine yang cocok telah
membatasi analisis mekanisme patogenetik salmonellosis usus. Kami menjelaskan di sini bagaimana tikus yang diberi
streptomisin menyediakan model tikus untuk kolitis Typhimurium serovar. Kolitis serovar Typhimurium pada tikus yang
diberi streptomisin menyerupai banyak aspek infeksi manusia, termasuk ulserasi epitel, edema, induksi molekul adhesi
antar sel 1, dan infiltrasi masif PMN/ CD18-sel. Patologi ini sangat bergantung pada translokasi protein melalui sistem
sekresi serovar Typhimurium SPI1 tipe III. Menggunakan limfotoksin--regangan tikus knockout reseptor yang tidak
memiliki semua kelenjar getah bening dan jaringan limfatik terkait usus yang terorganisir, kami menunjukkan bahwa
patch Peyer dan kelenjar getah bening mesenterika dapat dibuang untuk inisiasi murine serovar Typhimurium colitis.
Hasil kami menunjukkan bahwa tikus yang diberi streptomisin menawarkan model infeksi unik yang memungkinkan
untuk pertama kalinya menggunakan mutan patogen dan inang untuk mempelajari mekanisme molekuler salmonellosis
enterik.

Salmonellasp. adalah enterobakteri gram negatif yang menyebabkan
penyakit mulai dari enterokolitis yang dapat sembuh sendiri hingga
infeksi sistemik (demam tifoid).Salmonella entericaserovar Typhimurium
membangkitkan bentuk umum enterokolitis nonsistemik pada manusia
dan sapi, sedangkan tikus secara intrinsik resisten terhadap serovar
Typhimurium enterocolitis (68, 81). Meskipun resisten terhadap
salmonellosis usus, strain tikus rentan tertentu yang membawa mutasi
pada gen NRAMP mengembangkan penyakit yang mirip dengan demam
tifoid (30, 75).
Setelah infeksi oral pada tikus yang rentan, serovar Typhimurium
tidak bereplikasi secara efisien di usus tetapi menembus
penghalang epitel dengan invasi sel M (12, 41, 64) atau (kurang
efisien) dengan transportasi melalui CD18-/ sel dendritik (67, 80) dan
kemungkinan melalui penetrasi enterosit (72). Setelah penetrasi
penghalang epitel,Salmonellasp. menjajah patch Peyer dan kelenjar
getah bening mesenterika dan kemudian menyebar ke hati dan
limpa, dan tikus akhirnya menyerah pada infeksi sistemik (10, 35, 75,
81). Namun, tikus menunjukkan beberapa tanda peradangan usus
yang diamati pada sapi atau manusia.
Karena kurangnya model hewan serbaguna, lebih sedikit
yang diketahui tentang mekanisme salmonellosis enterik (21,
33, 62, 75, 81). Untuk mengatasi keterbatasan ini, patogenesis
salmonellosis enterik telah dipelajari dengan mengekstrapolasi
data dari kultur jaringan (review oleh Galan [26]) atau dari kultur
organ usus (1) atau dengan infeksi ligated murine dan kelinci.
* Penulis yang sesuai. Alamat surat: Institut Mikrobiologi, ETH
Zürich, Schmelzbergstr. 7, 8092 Zürich, Swiss. Telepon:
41-1-632-5143. Faks: 41-1-632-1129. Email: hardt@micro.biol.ethz.ch.
loop ileum (11, 12, 20, 41, 63, 64). Namun, masih belum jelas bagaimana
hasil ini berhubungan dengan salmonellosis enterik.
Untuk alasan ini, model infeksi sapi dengan serovar
Typhimurium (dan serovar Dublin) telah dibuat baru-baru ini
untuk dipelajariSalmonellaenterokolitis terkait (diulas
sebelumnya [68, 75, 81]). Model sapi telah memungkinkan
identifikasi beberapaSalmonella-faktor terkait yang diperlukan
untuk menimbulkan enterokolitis, termasuk flagela (71),sebuah
jalan(42, 73), lipopolisakarida (LPS) (73), dan sistem sekresi SPI1
tipe III (75, 81, 86). Sistem sekresi tipe III ini memungkinkan
Salmonella sp. untuk menyuntikkan (mentranslokasi) toksin
bakteri (protein efektor) langsung ke dalam sitosol sel inang (13,
83) untuk memanipulasi respons inang (23, 26) untuk
menyerang epitel usus sapi dan patch Peyer dan menginduksi
respons inflamasi (28 , 73, 74, 82). Namun, karena keterbatasan
teknis yang parah, model sapi hanya memungkinkan analisis
terbatas dari kontribusi inang dalam interaksi kompleks dengan
serovar Typhimurium yang mengarah ke enterokolitis. Sebagai
contoh, masih menjadi perdebatan apakah peradangan usus
diprakarsai oleh interaksi langsung dengan sel epitel (ditinjau
dalam referensi 26) atau oleh kolonisasi jaringan limfatik terkait
usus (GALT; lihat ulasan dalam referensi 79 dan 81).
Sistem imun terkait usus terdiri dari sel yang terdistribusi secara
difus (dendritik, B, T sitotoksik, dan NK) dan jaringan limfoid
terorganisir (yaitu, patch Peyer dan kelenjar getah bening
mesenterika) dan mengkoordinasikan respons yang sesuai terhadap
antigen yang berasal dari makanan, bakteri komensal, dan
mikroorganisme patogen (32, 58). Organogenesis jaringan limfoid
terkait usus ditentukan oleh program perkembangan,

2839
2840 BARTHEL ET AL.
sitokin, dan paparan antigen (46). Penargetan gen telah
menunjukkan bahwa reseptor interleukin-7, faktor nekrosis
tumor (TNF), limfotoksin (LT-3, LT-2-1, dan LT-1-2), dan
superfamili reseptor TNF (TNFR) sangat penting dalam
proses ini (24). Namun, hanya tikus knockout reseptor
limfotoksin (LT-R; anggota superfamili TNFR) (LT-R/) benar-
benar tidak memiliki patch Peyer, jaringan limfoid terkait
usus besar, patch limfatik terkait sekum, dan semua kelenjar
getah bening (25). Oleh karena itu, LT-R/
tikus memungkinkan seseorang untuk menganalisis kebutuhan fungsional
GALT terorganisir dalam infeksi bakteri.
Kami telah menemukan bahwa tikus yang diberi streptomisin
mengembangkan kolitis pada infeksi dengan serovar Typhimurium.
Peradangan ini dipicu oleh faktor virulensi bakteri tertentu.
Selanjutnya, data kami menunjukkan bahwa GALT terorganisir
dapat dibuang untuk kolitis Typhimurium serovar murine. Karena
ketersediaan berbagai jenis tikus knockout, model tikus yang diberi
perlakuan streptomisin akan sangat menguntungkan dibandingkan
dengan model hewan yang ada: model ini memungkinkan studi
tentang peran mekanisme pertahanan inang dalam salmonellosis
usus dengan sangat rinci.
BAHAN DAN METODE
Strain bakteri.Strain tipe liar yang resisten terhadap streptomisin secara alamiS.
entericaserovar Typhimurium SL1344 (36) dan mutan isogenik SB161 (SL1344,invG[
43]), SB302 (SL1344,invJ::aphT[15]), dan SB241 (SL1344, sipD::aphT[44]) disediakan
dengan murah hati oleh JE Galan. Yang nonpatogen Lactobacillusketegangan adalah
hadiah dari A. Macpherson.
Strain Serovar Typhimurium ditanam selama 12 jam pada suhu 37°C dalam kaldu Luria-
Bertani yang dilengkapi dengan 0,3 M NaCl, diencerkan 1:20 dalam media segar, dan
disubkultur selama 4 jam di bawah aerasi ringan. Bakteri dicuci dua kali dalam phosphate-
buffered saline (PBS) dingin dan kemudian disuspensikan dalam PBS dingin (2 103atau 108
CFU/50 liter).
Lactobacillussp. ditumbuhkan pada agar MRS (Biolife, Milano, Italia) pada suhu 37°C di
bawah CO . anaerob2-suasana yang diperkaya (Anaerocult A; Merck, Darmstadt, Jerman).
Bakteri dikerok dari piring, dicuci dengan PBS dingin, dan disuspensikan kembali dalam PBS
untuk menghasilkan konsentrasi akhir 108CFU/50 liter.
Eksperimen hewan.Tikus betina bebas patogen spesifik (SPF) berasal dari
Harlan Winkelmann (C57BL/6; usia 6 hingga 8 minggu; Borchen, Jerman) atau
Charles River (LT-R/tikus, latar belakang C57BL/6; 6 sampai 8 minggu; Sulzfeld,
Jerman [25]). Genotipe diverifikasi dengan mengetik PCR dengan primer 5-CGG
GTC TCC GAC CTA GAG ATC-3 dan 5-GAG GTG GGT GGA TTG GAA AGA G-3 .
Untuk percobaan, hewan ditempatkan secara individu atau dalam kelompok
hingga lima hewan di bawah kondisi penghalang standar di kandang berventilasi
individual (Tecniplast, Buguggiate, Italia) yang dilengkapi dengan lantai kisi baja dan
kertas saring yang diautoklaf di Institut Max von Pettenkofer (Munich, Jerman ) atau
BZL (Zurich, Swiss).
Air dan makanan diambil 4 jam sebelum perawatan per os (po) dengan 20
mg streptomisin (75 l larutan steril atau 75 l air steril [kontrol]). Setelah itu,
hewan diberikan air dan makanan ad libitum. Pada 20 jam setelah pengobatan
streptomisin, air dan makanan ditarik kembali selama 4 jam sebelum tikus
diinfeksi dengan 108CFU dari serovar Typhimurium (suspensi 50 l dalam PBS
po) atau diobati dengan PBS steril (kontrol). Setelah itu, air minum ad libitum
segera ditawarkan dan makanan 2 jam pascainfeksi (pi). Pada waktu yang
ditunjukkan pi, tikus dikorbankan oleh CO2sesak napas, dan sampel jaringan
dari saluran usus, kelenjar getah bening mesenterika, limpa, dan hati
dikeluarkan untuk analisis.
Eksperimen hewan telah disetujui oleh otoritas Jerman dan Swiss dan
dilakukan sesuai dengan persyaratan hukum.
Analisis beban serovar Typhimurium di usus, kelenjar getah bening
mesenterika, limpa, dan hati.Dua pelet feses segar ditempatkan dalam 500 l PBS
dingin 4°C dan disuspensikan secara homogen di atas es dengan cara divorteks dan
dipipet. Isi usus dari ileum, sekum, atau kolon dikumpulkan pada waktu yang
ditunjukkan pi dan ditimbang sebelum disuspensikan kembali dalam 500 l PBS dingin
4°C. Jumlah CFU ditentukan dengan melapisi pengenceran yang sesuai pada pelat
agar Mac-Conkey (streptomisin pada 50 g/ml). Nilai minimum yang dapat dideteksi
SayaNFECT. SayaMMUN.
adalah 5 CFU/pelet tinja dan 10 CFU/sampel (antara 25 dan 150 mg)
kandungan usus.
Kolonisasi usus olehLactobacillussp. ditentukan dengan mensuspensi ulang 50 mg
kandungan cecal dalam 500 l PBS dingin, melapisi pengenceran yang sesuai pada
agar MRS (Biolife, Milano, Italia) tanpa penundaan, dan inkubasi selama 48 jam pada
37°C di bawah CO anaerob2-suasana yang diperkaya (Anaerocult A).
Untuk menganalisis kolonisasi, kelenjar getah bening mesenterika, limpa, dan hati
diambil secara aseptik dan dihomogenkan dalam PBS dingin 4°C (0,5% Tergitol, 0,5%
albumin serum sapi) dengan menggunakan homogenizer Potter. Jumlah CFU
ditentukan dengan melapisi pengenceran yang sesuai pada pelat agar MacConkey
(streptomisin pada 50 g/ml). Nilai minimal yang dapat dideteksi adalah 20 CFU/organ
di limpa, 100 CFU/organ di hati, dan 10 CFU/organ di kelenjar getah bening
mesenterika.
Prosedur histologis.Segmen ileum, sekum, dan usus besar difiksasi dan
disematkan dalam parafin sesuai dengan prosedur standar. Sebagai alternatif,
sampel jaringan disematkan dalam OCT (Sakura, Torrance, California), dibekukan
dalam nitrogen cair, dan disimpan pada 80 ° C. Cryosections (5 atau 30 m) dipasang
pada slide kaca, dikeringkan di udara selama 2 jam pada suhu kamar, dan diwarnai
dengan hematoxylin dan eosin (H&E). Evaluasi patologis dilakukan oleh dua ahli
patologi secara buta.
Berdasarkan penelitian sebelumnya (49), kami mengembangkan skema penilaian
untuk analisis patologis kuantitatif inflamasi cecal. Bagian yang diwarnai H&E (5 m)
dinilai secara independen oleh dua ahli patologi secara buta sebagai berikut.
(i) Edema submukosa.Edema submukosa dinilai sebagai berikut: 0 tidak
ada perubahan patologis; 1 edema ringan (lebar submukosa 0,20 mm dan
menyumbang 50% dari diameter seluruh dinding usus [tunika muskularis
hingga epitel]); 2 edema sedang; submukosa lebarnya 0,21 hingga 0,45 mm
dan mencakup 50 hingga 80% dari diameter seluruh dinding usus; dan 3
edema berat (lebar submukosa 0,46 mm dan merupakan 80% dari diameter
seluruh dinding usus). Lebar submukosa ditentukan dengan mikroskop
kuantitatif dan mewakili rata-rata 30 pengukuran radial jarak yang merata
antara tunika muskularis dan lamina mukosa mukosa.
(ii) infiltrasi PMN ke dalam lamina propria.Granulosit polimorfonuklear
(PMN) di dalam lamina propria dicacah dalam 10 bidang berdaya tinggi
(perbesaran 400; diameter bidang 420 m), dan dihitung jumlah rata-rata PMN/
bidang daya tinggi. Skor didefinisikan sebagai berikut: 0
5 PMN/bidang berdaya tinggi; 1 5 hingga 20 PMN/bidang berdaya tinggi; 2 21
hingga 60/bidang berdaya tinggi; 3 61 hingga 100/bidang berdaya tinggi; dan 4 100/
bidang berdaya tinggi. Transmigrasi PMN ke lumen usus secara konsisten diamati
ketika jumlah PMN adalah 60 PMN/bidang daya tinggi.
(iii) Sel goblet.Jumlah rata-rata sel goblet per bidang daya tinggi (perbesaran, 400)
ditentukan dari 10 daerah berbeda dari epitel cecal. Skoring adalah sebagai berikut: 0
28 sel goblet/bidang daya tinggi (perbesaran, 400; dalam sekum tikus SPF normal
kami mengamati rata-rata 6,4 kripta/bidang daya tinggi dan ruang bawah tanah rata-
rata terdiri dari 35 hingga 42 sel epitel , 25 hingga 35% di antaranya berdiferensiasi
menjadi sel piala); 1 11 hingga 28 sel piala/bidang daya tinggi; 2 1 hingga 10 sel piala/
bidang daya tinggi; dan 3
1 sel piala / medan daya tinggi.
(iv) Integritas epitel.Integritas epitel dinilai sebagai berikut: 0 perubahan Tidak
patologis yang dapat dideteksi pada 10 bidang berdaya tinggi (1 perbesaran
deskuamasi 400);
epitel; 2 erosi permukaan epitel (celah 1 to
10 sel/lesi epitel); dan 3 ulserasi epitel (celah 10 epitel)
sel/lesi; pada tahap ini, umumnya terdapat jaringan granulasi di bawah epitel).
Kami menghitung rata-rata dua skor independen untuk edema submukosa,
infiltrasi PMN, sel goblet, dan integritas epitel untuk setiap sampel jaringan. Skor
patologis gabungan untuk setiap sampel jaringan ditentukan sebagai jumlah dari
skor rata-rata ini. Ini berkisar antara 0 dan 13 unit sewenang-wenang dan mencakup
tingkat peradangan berikut: 0 usus utuh tanpa tanda-tanda peradangan; 1 sampai 2
tanda peradangan minimal (ini sering ditemukan pada ceca tikus SPF; tingkat
peradangan ini umumnya tidak dianggap sebagai tanda penyakit); 3 sampai 4
peradangan ringan; 5 sampai 8 peradangan sedang; dan 9 sampai 13 peradangan
yang mendalam.
Analisis statistik.Analisis statistik berat sekum, skor patologis individu
untuk edema submukosa, infiltrasi PMN, sel goblet, dan integritas epitel dan
untuk skor patologis gabungan dilakukan dengan menggunakan uji Mann-
Whitney U yang tepat dan perangkat lunak SPSS versi 11.0.Pnilai 0,05 dianggap
signifikan secara statistik. Prosedur ini diadopsi dari Madsen et al. (49).
Untuk memungkinkan analisis statistik dari beban bakteri, nilai untuk hewan yang
menghasilkan "tidak ada CFU" ditetapkan ke nilai minimal yang dapat dideteksi (pelet tinja 5
CFU; limpa 20 CFU; hati 100 CFU; kelenjar getah bening mesenterika 10 CFU;
VOL. 71, 2003
ARA. 1. Pretreatment Streptomisin memungkinkan kolonisasi usus murine yang efisien oleh serovar Typhimurium. (A) Infeksi dengan
inokulum 2 103serovar Typhimurium. Lima tikus (C57BL/6) diobati dengan 20 mg streptomisin (F)atau air (E)po Setelah 24 jam, mereka
terinfeksi 2 103CFU dari serovar Typhimurium SL1344. (B) Infeksi dengan inokulum 108CFU dari serovar Typhimurium. Enam tikus (C57BL/6)
diobati dengan 20 mg streptomisin (F)atau air (E)po Setelah 24 jam, mereka terinfeksi 108CFU dari serovar Typhimurium SL1344. Kami
memantau ekskresi serovar Typhimurium (CFU per pelet tinja) pada hari 1 dan 2 pi (lihat Bahan dan Metode). Garis putus-putus menunjukkan
batas deteksi; bar menunjukkan median; dan "P" mengacu padaPnilai (uji Mann-Whitney U; lihat Bahan dan Metode). Panah menunjukkan
tikus yang dipilih untuk analisis histopatologis (lihat Gambar 2).
isi usus antara 67 dan 400 CFU [lihat di atas]). Setelah itu,
nilai median dihitung dengan menggunakan Microsoft Excel XP, dan analisis statistik
dilakukan dengan menggunakan uji Mann-Whitney U yang tepat dan perangkat
lunak SPSS versi 11.0.Pnilai 0,05 dianggap signifikan secara statistik.
Prosedur imunohistologis.Cryosections (5 m) sampel jaringan tertanam OCT dari ileum, sekum, dan usus
besar setiap hewan dipasang pada slide kaca (Sigma), dikeringkan di udara pada suhu kamar selama 2 jam,
difiksasi (PBS, 3,7% formaldehida; 1 jam pada suhu kamar), dicuci dalam PBS, permeabilisasi dengan Triton X-100
(0,1% dalam PBS, 10 menit pada suhu kamar), dicuci dalam PBS, dan diblokir dengan serum kambing (20% dalam
PBS, semalam pada 4°C). Tikus monoklonal -CD18 (1:100), hamster --intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1;
1:100), dan kelinci poliklonal --SalmonellaAntiserum golongan O antigen B (faktor 1, 4, 5, dan 12) (1:300) berasal
dari Becton Dickinson (San Diego, California). Kambing terkonjugasi Fluorescein isothiocyanate (FITC) --kelinci
(1:200), kambing terkonjugasi FITC --tikus (1: 100), dan antibodi poliklonal kambing terkonjugasi Cy3 --hamster
(1:200) berasal dari Dianova (Hamburg , Jerman). Kontrol dengan antibodi monoklonal yang sesuai dengan
spesies dan isotipe (Becton Dickinson) dilakukan untuk memastikan deteksi spesifik antigen. DAPI (4 ,6
-diamidino-2-phenylindole; 0,5 g/ml; Sigma) digunakan untuk pewarnaan asam nukleat. Pewarnaan dilakukan
dengan PBS (20% serum kambing). Bagian dicuci dengan PBS dan dipasang dengan Vectashield (Vector
Laboratories, Inc., Burlingame, California). Gambar (lihat Gambar. 11E dan F dan 14) diperoleh dengan mikroskop
epifluoresensi Leica DM dan sistem kamera perangkat yang dipasangkan dengan biaya spot Visitron. Gambar lain
(lihat Gambar 9I hingga P dan 11G dan H) direkam dengan menggunakan sistem pencitraan confocal Perkin-
Elmer Ultraview dan mikroskop Zeiss Axiovert 200: fluoresensi merah dan hijau direkam secara confocal, dan
fluoresensi biru ditentukan dengan mikroskop epifluoresensi . Setelah itu, gambar merah, hijau, dan biru
ditumpangkan dengan menggunakan perangkat lunak Adobe Photoshop, memastikan bahwa semua panel dari
setiap gambar diproses dengan cara yang sama. dan fluoresensi biru ditentukan dengan mikroskop
epifluoresensi. Setelah itu, gambar merah, hijau, dan biru ditumpangkan dengan menggunakan perangkat lunak
Adobe Photoshop, memastikan bahwa semua panel dari setiap gambar diproses dengan cara yang sama. dan
fluoresensi biru ditentukan dengan mikroskop epifluoresensi. Setelah itu, gambar merah, hijau, dan biru
ditumpangkan dengan menggunakan perangkat lunak Adobe Photoshop, memastikan bahwa semua panel dari
setiap gambar diproses dengan cara yang sama.
HASIL
Serovar Typhimurium menjajah usus bawah tikus yang
diberi streptomisin dan menyebabkan kolitis.Salmonellosis
murine umumnya tidak terkait dengan kolonisasi usus yang
efisien dan perubahan patologis yang nyata pada mukosa usus.
Namun, telah lama diketahui bahwa pengobatan oral dengan
streptomisin mengurangi dosis infeksi oral 50% dari serovar
Enteritidis atau serovar Typhimurium sebesar 105- sampai 106
-lipat dan sangat meningkatkan kolonisasi usus (2, 3, 9, 53, 54,
57, 66). Efek ini telah dikaitkan dengan penghapusan bakteri
usus komensal (4, 5, 55, 65). Namun, untuk kami
MODEL KOLITIS SEROVAR TYPHIMURIUM MURINE 2841
pengetahuan belum pernah ditentukan apakah tikus yang diberi
streptomisin yang dikolonisasi dengan serovar Typhimurium
mengalami enterokolitis.
Dalam percobaan pertama, lima perlakuan awal streptomisin (20 mg
po) dan lima tikus C57BL / 6 yang diberi perlakuan air ditempatkan
di kandang terpisah. Pada 24 jam setelah perlakuan awal mencit
diinfeksi po dengan dosis 2 103CFU dari strain Typhimurium serovar
virulen SL1344. Sesuai dengan laporan sebelumnya (2, 3, 9, 53, 54,
57, 66), kami menemukan bahwa tikus yang diberi perlakuan
streptomisin mengeluarkan jumlah yang jauh lebih besar (107
ke 1010CFU / pelet tinja) dari serovar Typhimurium daripada
tikus kontrol yang diberi air pada hari 1 dan 2 pi (Gbr. 1A;P
0,032). Namun, salah satu dari lima tikus yang diberi perlakuan
streptomisin tidak mengekskresikan serovar Typhimurium dalam jumlah
yang dapat dideteksi (5 CFU/fecal pellet) (Gbr. 1A). Oleh karena itu, kami
mengulangi percobaan dengan enam hewan per kelompok dengan
inokulum yang lebih tinggi (108CFU dari serovar Typhimurium po;
Gambar 1B). Sekali lagi, kami menemukan bahwa tikus yang diobati
dengan streptomisin mengeluarkan jumlah yang jauh lebih tinggi (107ke
1010CFU / pelet 0,002)
tinja;P dari serovar Typhimurium daripada air-
tikus kontrol pra-perawatan pada hari 1 dan 2 pi (Gbr. 1B).
Dalam percobaan ini kami mendeteksi sejumlah besar serovar
Typhimurium dalam tinja keenam hewan yang diberi
streptomisin. Oleh karena itu, kami telah menggunakan
inokulum 108CFU po sepanjang sisa penelitian ini.
Untuk menganalisis patologi usus yang diinduksi serovar
Typhimurium, dua tikus yang diberi perlakuan streptomisin (Gbr.
1B) dan satu tikus dari kelompok kontrol (Gbr. 1B) dikorbankan 2
hari pi, dan organ internal difiksasi dan disematkan dalam parafin
( lihat Bahan dan Metode). Analisis histopatologi dari irisan tipis 5 m
mengungkapkan peradangan sekum yang jelas (Gbr. 2A dan C) dari
tikus yang diberi perlakuan streptomisin yang dikolonisasi dengan
serovar Typhimurium. Pada sekum kedua tikus, kami mengamati
edema yang nyata di submukosa, perubahan edema pada lamina
propria, pemanjangan kripta, gangguan arsitektur kripta,
penurunan jumlah goblet.
2842 BARTHEL ET AL. SayaNFECT. SayaMMUN.

ARA. 2. Analisis histopatologi mengungkapkan kolitis pada tikus yang diberi streptomisin yang terinfeksi serovar Typhimurium. Usus dari tiga mencit dari
percobaan yang ditunjukkan pada Gambar 1B difiksasi, dibenamkan dalam parafin, dan bagian setipis 5 m diwarnai dengan H&E. (A dan C) Peradangan sekum
tikus yang terinfeksi serovar Typhimurium yang diobati dengan streptomisin pada 2 hari pi (ditandai dengan panah terbuka pada Gambar. 1B). (B dan D) Usus
besar yang meradang dari tikus yang sama seperti pada panel A dan C; respon inflamasi identik diamati pada tikus yang ditandai dengan panah hitam pada
Gambar. 1B (data tidak ditampilkan). (E) Tidak ada tanda-tanda peradangan parah yang dapat diamati pada sekum (dan usus besar; data tidak ditampilkan) dari
tikus kontrol yang terinfeksi serovar Typhimurium yang telah diberi perlakuan air (panah bergaris; lihat Gambar 1B). (F) Intususepsi diamati di usus besar. Jaringan
tersebut berasal dari tikus yang terinfeksi serovar Typhimurium yang diberi perlakuan streptomisin yang ditandai dengan panah hitam pada Gambar 1B. L, lumen
usus; e, edema; hal, PMN; lp, lamina propria; eh, erosi lapisan epitel; c, ruang bawah tanah; ce, perpanjangan ruang bawah tanah; g, sel piala; sa, submukosa.
Perbesaran ditunjukkan oleh bilah hitam.

sel, erosi epitel dan/atau ulserasi dan infiltrasi PMN yang jelas
pada submukosa, lamina propria, dan lapisan epitel, serta
transmigrasi PMN ke dalam lumen usus (Gbr. 2A dan C;
bandingkan dengan Gbr. 2E). Meskipun tidak terlalu parah, usus
besar tikus-tikus ini juga meradang, sebagaimana dinilai dari
edema dan infiltrasi PMN di lamina propria dan erosi epitel dan/
atau ulserasi (Gbr. 2B dan D). Sebaliknya, tidak ada tanda-tanda
peradangan yang diamati pada ilea tikus-tikus ini (data tidak
ditampilkan). Data ini menunjukkan bahwa serovar
Typhimurium menyebabkan kolitis pada tikus yang diberi
streptomisin.
Enterokolitis sering dikaitkan dengan peningkatan
motilitas otot polos usus. Dalam kasus yang parah ini bisa
menyebabkan intususepsi, komplikasi serius yang diakibatkan oleh
terlipatnya satu segmen tuba usus ke depan ke dalam segmen usus
yang berdekatan. Hal ini diamati pada salah satu tikus yang diberi
perlakuan streptomisin yang dikolonisasi dengan serovar
Typhimurium (Gbr. 2F). Selama seluruh studi kami, intususepsi
terjadi di usus bagian bawah ca. 3% dari semua tikus yang diberi
streptomisin yang dikolonisasi dengan serovar Typhimurium tipe
liar (data tidak ditampilkan).
Analisis kuantitatif kolitis Typhimurium serovar pada tikus yang
diberi streptomisin.Untuk mengeksplorasi apakah tikus yang diberi
streptomisin dapat memberikan model yang berguna untuk mempelajari
kolitis Typhimurium serovar, kami melakukan analisis yang lebih rinci.
Sebanyak 24 ekor mencit dibagi menjadi empat kelompok 6
VOL. 71, 2003 MODEL KOLITIS SEROVAR TYPHIMURIUM MURINE 2843

ARA. 3. Pengaruh pretreatment streptomisin pada kolonisasi usus dan organ dalam oleh serovar Typhimurium. Empat kelompok enam mencit
(C57BL/6) diberi perlakuan awal dengan streptomisin (simbol padat) atau air steril (simbol terbuka) dan diinfeksi 108CFU dari serovar Typhimurium
SL1344 (lingkaran) atau tiruan yang terinfeksi PBS steril (segitiga; lihat Bahan dan Metode). Tikus dikorbankan 2 hari pi, dan kami menganalisis
kolonisasi bakteri. (A) Beban bakteri dalam isi usus ileum medial (panel kiri), ileum terminal (panel tengah), dan sekum (panel kanan). (B) Beban bakteri
di kelenjar getah bening mesenterika (panel kiri), limpa (panel tengah), dan hati (panel kanan; lihat Bahan dan Metode). Garis putus-putus menunjukkan
batas deteksi; bar menunjukkan median beban bakteri; dan "P" menunjukkanPnilai (uji Mann-Whitney U; perbedaan antara air dan tikus yang diberi
perlakuan streptomisin yang terinfeksi serovar Typhimurium). NS, tidak signifikan secara statistik. Simbol: , tiruan tikus yang diberi perlakuan air
terinfeksi PBS;E,tikus yang diberi perlakuan air yang terinfeksi serovar Typhimurium; ,tikus tiruan yang diberi perlakuan streptomisin yang terinfeksi
PBS;F,tikus yang diberi perlakuan streptomisin yang terinfeksi serovar Typhimurium.

tikus. Kelompok pertama diobati dengan streptomisin 24 jam ilea terminal dua, dan dalam ceca lima dari enam tikus yang diberi
sebelum infeksi po dengan 108CFU dari serovar Typhimurium (Gbr. perlakuan air (Gbr. 3A).
3). Satu kelompok kontrol diberi perlakuan awal dengan air 24 jam Pada tikus yang diobati dengan streptomisin, kami mengamati sedikit tetapi tidak
sebelum infeksi po dengan 108CFU dari serovar Typhimurium. Dua signifikan (P 0,24;P 0,065) peningkatan jumlah bakteri
kelompok kontrol lainnya diberi perlakuan awal baik dengan di tengah (P 0,24) dan terminal (P 0,065) ilea dan
streptomisin atau dengan air 24 jam sebelum infeksi tiruan dengan meningkat secara signifikan (ca. 105-lipat) beban bakteri dalam
pengobatan oral dengan PBS steril. Tikus dibunuh 2 hari pi, dan isi sekum (P 0,002; Gambar 3).
kami menganalisis kolonisasi bakteri (Gbr. 3) dan perubahan Kami mengamati peningkatan secara signifikan beban serovar
patologis di ceca (Gbr. 4, 5, dan 6). Typhimurium di kelenjar getah bening mesenterika tikus yang diberi
Seperti yang diharapkan, serovar Typhimurium hanya streptomisin (P 0,002; Gambar 3B). Kolonisasi sedikit meningkat-
terdeteksi di usus dan organ tikus yang telah terinfeksi (Gbr. 3). tion juga terdeteksi di limpa (P 0,002) dan hati
Kami mendeteksi tidak ada serovar Typhimurium dalam isi ilea (P0,009) dari tikus yang diberi streptomisin. Namun, bahkan pada
medial dan terminal dari sebagian besar tikus yang diberi tikus yang diberi perlakuan streptomisin, beban bakteri di limpa dan
perlakuan air yang terinfeksi serovar Typhimurium. Beban hati hanya sekitar ca. 10 kali lipat di atas batas deteksi. Secara
bakteri rendah (-105CFU/g) terdeteksi di ileum medial satu, di keseluruhan, data ini sejalan dengan pengamatan sebelumnya (57)
2844 BARTHEL ET AL.
ARA. 4. Serovar Typhimurium menginduksi perubahan makroskopik pada
sekum mencit yang diberi perlakuan streptomisin pada hari ke-2 pi Kami
menghilangkan seka mencit dari percobaan yang ditunjukkan pada Gambar 3
untuk analisis makroskopik. (A) Morfologi sekum. Sekum satu ekor tikus dari
masing-masing kelompok diambil untuk dokumentasi fotografi. Foto tersebut
mewakili keenam hewan dari masing-masing kelompok. Skala sentimeter
menunjukkan perbesaran. (B) Berat total sekum. Kami menentukan berat ceca
dari lima tikus yang tersisa dari masing-masing kelompok. P,Pnilai (uji Mann-
Whitney U; perbedaan antara hewan yang terinfeksi serovar Typhimurium
atau tiruan yang terinfeksi PBS steril); NS, tidak signifikan secara statistik. “S.
Tm - atau ” dan “sm
- atau ” menunjukkan apakah mencit diberi perlakuan awal dengan
streptomisin (sm) atau air dan apakah hewan tersebut terinfeksi serovar
Typhimurium (S.Tm). Batang menunjukkan berat median sekum. Simbol: ,
tiruan tikus yang diberi perlakuan air terinfeksi PBS;E,tikus yang diberi
perlakuan air yang terinfeksi serovar Typhimurium;,tikus tiruan yang diberi
perlakuan streptomisin yang terinfeksi PBS;F,tikus yang diberi perlakuan
streptomisin yang terinfeksi serovar Typhimurium.
dan menyarankan bahwa bahkan pada tikus yang diobati dengan
streptomisin, infeksi sistemik masih pada tahap yang sangat awal pada 48 jam
pi Oleh karena itu, infeksi sistemik pada tikus ini tidak mungkin
mempengaruhi perubahan patologis yang diamati pada usus bagian bawah.
Selama diseksi, kami tidak mengamati tanda-tanda
makroskopik peradangan ilea, ceca, dan kolon tikus yang diberi
perlakuan air yang terinfeksi serovar Typhimurium atau tiruan
yang terinfeksi PBS steril. Sesuai dengan hasil sebelumnya (69),
mencit yang diberi perlakuan streptomisin yang diinfeksi tiruan
dengan PBS steril mengalami pembesaran ceca. Berbeda
dengan tiga kelompok kontrol, pembentukan pelet tinja
terganggu pada kolon proksimal dari keenam tikus yang diberi
perlakuan streptomisin yang terinfeksi serovar Typhimurium,
dan jaringan kolon proksimal tampak pucat dan bengkak pada
lima dari enam hewan (data tidak ditampilkan ). Selanjutnya,
ceca dari keenam tikus yang terinfeksi serovar Typhimurium
yang diobati dengan streptomisin dikerutkan menjadi ukuran
kecil, pucat, dan diisi dengan eksudat purulen (Gbr. 4A, sisi
kanan). Untuk mendokumentasikan perbedaan makroskopik ini,
SayaNFECT. SayaMMUN.
kelompok untuk dokumentasi fotografi (Gbr. 4A) dan
menentukan berat sekum, termasuk isi lima hewan yang tersisa
dari setiap kelompok (Gbr. 4B). Pada tikus yang diberi perlakuan
air, infeksi dengan serovar Typhimurium tidak secara signifikan
mempengaruhi berat total sekum (Gbr. 4B;P 0,458). Namun,
pada tikus yang diberi perlakuan streptomisin, kami mengamati
penurunan berat cecal yang signifikan pada tikus yang
terinfeksi serovar Typhimurium (Gbr. 4B, panel kanan;P 0,002).
Untuk analisis histopatologi, sampel jaringan usus
dikrioembedded, dan bagian setipis 5 m diwarnai dengan H&E
(lihat Bahan dan Metode). Usus dari ketiga kelompok kontrol
tampak normal secara histologis (Gbr. 5A hingga C dan E hingga
G dan data tidak ditampilkan). Namun, sejalan dengan
pengamatan awal kami (Gbr. 2), peradangan yang nyata
terdeteksi di ceca dan, pada tingkat lebih rendah, juga di titik
dua semua tikus yang diberi perlakuan streptomisin yang
dijajah dengan serovar Typhimurium (Gbr. 5D dan H; data tidak
ditampilkan). Ini termasuk edema yang nyata di submukosa dan
lamina propria, pemanjangan kripta, gangguan arsitektur
kripta, pengurangan jumlah sel goblet, erosi epitel, dan infiltrasi
PMN yang jelas pada submukosa, lamina propria, dan lapisan
epitel, serta transmigrasi PMN ke dalam lumen usus. Tidak ada
tanda-tanda peradangan parah yang diamati pada ilea tikus-
tikus ini (data tidak ditampilkan).
Untuk meningkatkan perbandingan respons inflamasi antara
kelompok tikus yang berbeda, kami merancang skema penilaian
histopatologis untuk bagian jaringan cecal yang diwarnai H&E (lihat
Bahan dan Metode). Skema ini mempertimbangkan luasnya edema
submukosa (0 hingga 3 [unit sewenang-wenang]), infiltrasi PMN (0
hingga 4), hilangnya sel goblet (0 hingga 3), dan integritas epitel (0
hingga 3) dan menghasilkan total skor patologis 0 sampai 13 U
(Bahan dan Metode). Dengan menggunakan skema penilaian ini,
kami tidak menemukan perbedaan yang signifikan antara tikus yang
diberi perlakuan air yang telah terinfeksi serovar Typhimurium atau
tiruan yang terinfeksi PBS steril (Gbr. 6, panel kiri). Tanda-tanda
minimal peradangan cecal yang diamati pada tikus ini dan pada
tikus yang diberi perlakuan streptomisin yang telah terinfeksi PBS
steril sering ditemukan pada tikus SPF yang tidak diobati dan
umumnya tidak dianggap sebagai tanda penyakit. Sebaliknya, tikus
yang diobati dengan streptomisin yang terinfeksi dengan serovar
Typhimurium menunjukkan peradangan mendalam yang secara
signifikan lebih kuat daripada pada hewan dari kelompok kontrol
(Gbr. 6, panel kanan;P 0,008). Data ini sejalan
dengan pengamatan makroskopik (Gbr. 4) dan menunjukkan bahwa
tikus yang diberi streptomisin menawarkan model yang kuat untuk
mempelajari serovar Typhimurium colitis.
Lactobacillussp. tidak menginduksi kolitis pada tikus yang diberi
streptomisin.Pengobatan streptomisin diketahui mengurangi flora usus
dan membuat tikus rentan terhadap kolonisasi usus oleh berbagai
mikroorganisme. Dapat dibayangkan bahwa setiap perubahan dramatis
dalam komposisi mikroflora usus dapat menyebabkan peradangan dan
bahwa kolitis yang disebabkan oleh serovar Typhimurium mungkin tidak
disebabkan oleh faktor virulensi tertentu. Untuk menguji hipotesis ini,
kami melakukan pra-perlakuan dua kelompok tikus dengan 20 mg
streptomisin diberikan po 24 jam sebelum infeksi oral dengan 108CFU
nonpatogenikLactobacillussp. atau serovar Typhimurium SL1344. Tikus
dikorbankan 2 hari pi, dan kami memverifikasi kolonisasi yang efisien
oleh kedua spesies bakteri dengan melapisi sampel isi sekum pada pelat
agar yang sesuai (lihat Bahan dan Metode; 104
VOL. 71, 2003 MODEL KOLITIS SEROVAR TYPHIMURIUM MURINE 2845

ARA. 5. Peradangan cecal pada 2 hari pi Ceca dari lima dari enam hewan dari setiap kelompok percobaan yang ditunjukkan pada Gambar. 3 adalah
cryoembedded, dan bagian tipis 5 m diwarnai dengan H&E untuk analisis histopatologi. (A dan E) Sekum tikus tiruan yang diberi perlakuan air yang
terinfeksi PBS; (B dan F) sekum tikus yang diberi perlakuan air yang terinfeksi serovar Typhimurium; (C dan G) sekum tikus tiruan yang diobati dengan
streptomisin yang terinfeksi PBS; (D dan H) tikus yang diberi streptomisin yang terinfeksi serovar Typhimurium. Gambar-gambar tersebut mewakili
semua hewan dari setiap kelompok. Kotak di panel A, B, C, dan D menunjukkan area yang ditunjukkan pada perbesaran yang lebih tinggi. L, lumen
usus; e, edema; hal, PMN; eh, erosi lapisan epitel; g, sel piala; sa, submukosa. Perbesaran ditunjukkan oleh bilah hitam.

CFU/gLactobacillussp. atauSalmonellasp.). Sampel jaringan usus

dikrioembedded, dan kami menganalisis bagian tipis yang diwarnai
dengan H&E setebal 5 m untuk tanda-tanda peradangan. Dalam
Lactobacillustikus yang terinfeksi kami tidak mengamati peradangan
yang signifikan di usus kecil atau besar (Gbr. 7A, C, dan E; data tidak
ditampilkan), sedangkan tikus yang terinfeksi serovar Typhimurium
menunjukkan peradangan parah pada sekum dan kolon proksimal (Gbr.
7B , D, dan E). Hal ini menunjukkan bahwa kolitis pada mencit yang diberi
perlakuan streptomisin merupakan respon spesifik terhadap kolonisasi
oleh serovar Typhimurium.
Perjalanan waktu kolitis Typhimurium serovar pada tikus
yang diberi streptomisin.Untuk menganalisis tahap awal
kolitis serovar Typhimurium, kami menyelidiki perjalanan waktu
infeksi. Kelompok lima tikus diberi perlakuan awal dengan
streptomisin, terinfeksi 108CFU dari serovar Typhimurium
SL1344 (lihat Bahan dan Metode), dan dikorbankan pada 2, 8,
20, dan 48 jam pi Kami menganalisis perubahan patologis, serta
jumlah bakteri di hati, kelenjar getah bening mesenterika, dan
isi usus.
Pada 2 jam pi beban bakteri tertinggi hadir di usus kecil,
dan hanya beban rendah (104CFU/g) terdapat pada isi cecal
ARA. 6. Penilaian perubahan inflamasi pada 2 hari pi Untuk mengukur
(Gbr. 8A dan B). Sesuai dengan hasil sebelumnya (66), perubahan patologis, kami menilai bagian ceca yang diwarnai H&E dari
jumlah bakteri di sekum meningkat secara signifikan antara lima dari enam tikus dari setiap kelompok percobaan yang ditunjukkan
2 jam dan 8 jam pi (P 0,008). Bahkan lebih tinggi pada Gambar. 3 seperti yang dijelaskan dalam Bahan dan Metode.
beban bakteri terdeteksi di sekum pada 20 jam pi (P 0,008; Edema pada submukosa (hitam), infiltrasi PMN (abu-abu sedang),
pengurangan jumlah sel goblet (abu-abu tua), dan erosi atau ulserasi
median 4.4 107CFU/g) (Gbr. 8B; Tabel 1). Antara 20 jam dan 48
lapisan epitel (abu-abu muda) diberi skor secara terpisah dan diplot
jam pi kami tidak mengamati peningkatan lebih lanjut dalam sebagai batang vertikal bertumpuk. Skor gabungan sama dengan jumlah
beban serovar Typhimurium di sekum (P 0,841; Tabel 1), skor terpisah. “S. Tm - atau ” dan “sm - atau ” menunjukkan apakah
yang menunjukkan bahwa kolonisasi ceca mencit yang diobati mencit diberi perlakuan awal dengan streptomisin (sm) atau air dan
dengan streptomisin oleh serovar Typhimurium telah mencapai apakah hewan tersebut terinfeksi serovar Typhimurium (S.Tm). Analisis
statistik ditampilkan untuk skor terpisah dan untuk skor gabungan. P,P
tingkat kondisi mapan dalam waktu 20 jam setelah infeksi oral. Kami
nilai (uji Mann-Whitney U; lihat Bahan dan Metode; perbedaan antara
tidak mengamati pengayaan spesifik serovar Typhimurium pada tikus yang terinfeksi serovar Typhimurium dan tikus tiruan yang
epitel usus setiap saat antara 8 jam dan 48 jam pi dan terinfeksi PBS steril); NS, tidak signifikan secara statistik.
2846 BARTHEL ET AL. SayaNFECT. SayaMMUN.

ARA. 7. Infeksi pada tikus yang diberi perlakuan streptomisin denganLactobacillussp. tidak menyebabkan kolitis. Kelompok tiga tikus yang diberi
perlakuan streptomisin (C57BL/6) terinfeksi 108CFU dariLactobacillussp. atau 108CFU dari serovar Typhimurium. Pada 48 jam pi hewan dikorbankan dan
cryosection 5 m dari sekum diwarnai dengan H&E. (A dan C) Sekum tikus yang diberi perlakuan streptomisin yang terinfeksiLactobacillussp.; (B dan D)
sekum tikus yang diberi streptomisin yang terinfeksi serovar Typhimurium. Gambar-gambar tersebut mewakili ketiga hewan dari setiap kelompok.
Kotak di panel A dan B menunjukkan area yang ditunjukkan pada perbesaran yang lebih tinggi di panel C dan D. L, lumen usus; e, edema; hal, PMN; eh,
erosi lapisan epitel; g, sel piala; sa, submukosa. Perbesaran ditunjukkan oleh bilah hitam. (E) Skoring perubahan inflamasi seperti yang dijelaskan dalam
Bahan dan Metode. Edema di submukosa (hitam), infiltrasi PMN (abu-abu sedang), pengurangan jumlah sel goblet (abu-abu tua), dan erosi atau
ulserasi lapisan epitel (abu-abu muda) diberi skor terpisah dan diplot sebagai batang vertikal bertumpuk. Skor gabungan sama dengan jumlah skor
terpisah.S. Tm, tikus yang terinfeksi serovar Typhimurium; sm, tikus diberi perlakuan awal dengan streptomisin.

mengamati bahwa hanya sebagian kecil bakteri ( 5%) berada
di kripta (Gbr. 9J, K, dan L).
Pada pemeriksaan makroskopik 2 jam pi tidak mengungkapkan
tanda-tanda peradangan di usus kecil dan usus besar (berat rata-
rata sekum 0,59 g; Gambar 8D; data tidak ditampilkan). Ini
dikonfirmasi oleh analisis histopatologi (Gbr. 8F dan 9A dan E). Pada
8 jam pi dua tikus tampak normal, dan analisis histopatologi tidak
mengungkapkan tanda-tanda penyakit inflamasi (Gbr. 8F).
Menariknya, kedua tikus ini juga membawa serovar Typhimurium
paling sedikit dalam isi cecalnya (Gbr. 8C), menunjukkan bahwa
kolonisasi bakteri yang lebih lambat dapat mengakibatkan
timbulnya respon inflamasi yang tertunda. Ceca dari tiga hewan lain
yang dikorbankan 8 jam pi berwarna pucat, mengerut hingga
berukuran kecil, dan berisi eksudat purulen (Gbr. 8E). Analisis
histopatologi menegaskan bahwa ceca tikus ini meradang, seperti
yang dinilai dari edema submukosa, infiltrasi PMN ke dalam lamina
propria, erosi epitel atau ulserasi, dan penurunan jumlah sel goblet
(Gbr. 8F dan 9B dan F). Infiltrasi substansial PMN (CD18-, inti
tersegmentasi) ke dalam lamina propria dikonfirmasi oleh
mikroskop imunofluoresensi (Gbr. 9N). Selain itu, kami mengamati
di-
ekspresi berkerut ICAM-1 (bandingkan Gambar 9M dan N),
reseptor transmembran kunci yang mengikat CD18--2integrin
dimer dan terlibat dalam ekstravasasi leukosit dari pembuluh
darah kapiler ke jaringan.
Pada 20 jam pi ceca dari kelima tikus menunjukkan tanda-tanda
karakteristik peradangan, termasuk ukuran sekum berkurang
secara signifikan (Gbr. 8E dan Tabel 1) dan perubahan histopatologi
seperti edema submukosa, penurunan jumlah sel goblet, dan erosi
epitel atau ulserasi (Gbr. 8F dan 9C dan G). Berbeda dengan tiga
tikus yang menunjukkan peradangan usus pada 8 jam pi, PMN hadir
dalam jumlah tinggi tidak hanya di lamina propria tetapi juga di
submukosa dan di lumen usus (Gbr. 9G dan O), dan kami
mengamati a peningkatan bersamaan dalam ekspresi ICAM-1
(bandingkan Gambar 9O dan N).
Sesuai dengan pengamatan pertama kami, ceca dari kelima tikus
yang dikorbankan pada 48 jam pi menunjukkan tanda-tanda
peradangan yang mendalam (Gbr. 8E dan F dan 9D, H, dan P).
Dibandingkan dengan temuan pada 20 jam pi, kami mengamati
perkembangan lebih lanjut dari gangguan arsitektur vili
(bandingkan Gambar 9C dan G dengan 9D dan H), peningkatan
0,032)
ekspresi ICAM-1, dan eksaserbasi signifikan dari infiltrasi dan
PMN (P
VOL. 71, 2003 MODEL KOLITIS SEROVAR TYPHIMURIUM MURINE 2847

ARA. 8. Waktu perjalanan serovar Typhimurium colitis pada tikus yang diberi streptomisin. Kelompok lima tikus yang diberi perlakuan streptomisin
terinfeksi selama 2, 8, 20, atau 48 jam dengan 108CFU dari serovar Typhimurium SL1344 po Kami menentukan kolonisasi bakteri dan perubahan
patologis seperti yang dijelaskan dalam Bahan dan Metode. (A) Beban bakteri di berbagai daerah usus pada 2 jam pi (panel kiri) dan 8 jam pi (panel
kanan). (B) Waktu perjalanan bakteri dalam kandungan sekum. (C) Perjalanan waktu beban bakteri di kelenjar getah bening mesenterika. (D) Waktu
perjalanan bakteri di hati. (E) Perjalanan waktu dari berat total sekum (ditentukan sebelum pengambilan sampel untuk analisis bakteriologis atau
histopatologis). (F) Perjalanan waktu perubahan histopatologi. Sampel jaringan cecal dikrioembedded dan bagian setipis 5 m diwarnai dengan H&E.
Edema pada submukosa (hitam), infiltrasi PMN (abu-abu sedang), pengurangan jumlah sel goblet (abu-abu tua), dan erosi atau ulserasi lapisan epitel
(abu-abu muda) dinilai secara terpisah (lihat Bahan dan Metode) dan diplot sebagai batang vertikal bertumpuk. Skor gabungan sama dengan jumlah
skor terpisah. Untuk analisis statistik, lihat Tabel 1.S. Tm, serovar Typhimurium; garis putus-putus, batas deteksi; batangan, median beban bakteri;
panah abu-abu, nilai yang ditentukan untuk dua tikus tanpa peradangan cecal pada 8 jam pi Panah hitam menunjukkan skor patologis dari bagian
jaringan yang ditunjukkan pada Gambar. 9.

hilangnya sel goblet (P 0,008) (Gbr. 8F; Tabel 1; lihat juga Gbr.
9L dan P).
Untuk menilai kemungkinan korelasi antara peradangan usus dan
TABEL 1. Analisis statistik parameter penyakit di
timbulnya infeksi sistemik, kami memantau perjalanan waktu kolonisasi
perjalanan waktu serovar Typhimurium colitis di
kelenjar getah bening mesenterika dan hati. Serovar Typhimurium tidak tikus yang diberi streptomisinsebuah
dapat dideteksi pada kelenjar getah bening mesenterika dan hati tikus
Ppada waktu (h) pi
mana pun hingga 8 jam pi (Gbr. 8C dan D). Namun, pada 8 jam pi tiga Perbandingan
dari lima tikus sudah memiliki sekum yang meradang (lihat di atas). Hal 2 vs 8 2 vs 20 2 vs 48 8 vs 20 20 vs 48
ini menunjukkan bahwa kolonisasi kelenjar getah bening mesenterika
Sekum CFU 0,008 0,008 0,008 0,008 NS
atau menyebar ke organ internal bukanlah prasyarat untuk peradangan mLN CFU NS 0,032 0,008 0,032 0,008
usus. Pada 20 jam pi kami mendeteksi peningkatan yang signifikan CFU hati NS NS 0,008 NS 0,032
dalam beban median serovar Typhimurium di kelenjar getah bening Sekum wt NS 0,008 0,008 0,032 NS
mesenterika (P 0,032) dan Skor gabungan NS 0,008 0,008 NS NS
Busung 0,032 0,008 0,008 NS NS
peningkatan lebih lanjut pada 48 jam pi (P0,008; Gambar 8C; Tabel 1). Di infitrasi PMN NS 0,008 0,008 NS 0,032
hati kami mendeteksi serovar Typhimurium hanya pada satu dari lima sel goblet NS 0,008 0,008 NS 0,008
hewan pada 20 jam pi (P 0,690; Gambar 8D; Tabel 1). Namun, epitel NS 0,008 0,008 NS NS
beban bakteri di hati meningkat secara signifikan pada 48 sebuahData yang ditunjukkan pada Gambar. 8 dianalisis dengan menggunakan uji Mann-Whitney U
jam pi (Gbr. 8D dan Tabel 1). Kesimpulannya, penjajahan (lihat Bahan dan Metode). NS, tidak signifikan; mLN, kelenjar getah bening mesenterika.
2848 BARTHEL ET AL. SayaNFECT. SayaMMUN.

ARA. 9. Analisis perjalanan waktu murine serovar Typhimurium colitis dengan histologi dan mikroskop imunofluoresensi. Jaringan sekum tikus dari
percobaan yang dijelaskan pada Gambar. 8 (dikorbankan pada 2, 8, 20, atau 48 jam pi) dikrioembedded, dipotong, dan diwarnai seperti yang dijelaskan
dalam Bahan dan Metode. (A sampai H) Histopatologi sayatan tipis (5 m) dari sekum mencit yang terinfeksi selama 2 jam (A dan E), 8 jam (B dan F), 20
jam (C dan G), atau 48 jam (D dan H, ditandai dengan panah hitam pada Gambar 8F). (I ke L) Lokalisasi bakteri. Bagian tipis (30 m) dari sekum pada 2
jam (I), 8 jam (J), 20 jam (K), atau 48 jam (L) pi (ditandai dengan panah hitam pada Gambar. 8F) diwarnai dengan DAPI, TRITC (tetramethyl rhodamine
isothiocyanate)-phalloidin, seekor kelinci --SalmonellaAntiserum LPS, dan konjugat --rabbit-FITC sekunder (DNA biru; aktin merah; serovar Typhimurium
green fluorescence). (M ke P) Ekspresi ICAM-1 dan infiltrasi CD18-sel. Bagian tipis (5 m) dari sekum pada 2 jam (M), 8 jam (N), 20 jam (O), atau 48 jam (P)
pi (ditandai dengan panah hitam pada Gambar. 8F) diwarnai dengan DAPI, tikus --mouse CD18, hamster --mouse ICAM-1, dan antibodi IgG-FITC dan --
hamster IgG-Cy3 preadsorbed poliklonal (DNA biru; ICAM-1 merah, fluoresensi hijau CD18; lihat Bahan dan Metode). Kotak di panel A, B, C, dan D
menunjukkan area yang ditunjukkan dengan perbesaran lebih tinggi di panel E, F, G, dan H. Sisipan di panel K adalah perbesaran yang lebih tinggi dari
area yang ditandai dengan kotak putih di bagian atas sudut kanan panel. L, lumen usus; e, edema; hal, PMN; eh, erosi lapisan epitel; g, sel piala; sa,
submukosa; c, ruang bawah tanah. Perbesaran ditunjukkan oleh bar.

kelenjar getah bening mesenterika dan hati tampaknya tidak diperlukan
untuk inisiasi peradangan cecal. Namun, kami tidak dapat
mengesampingkan bahwa kolonisasi kelenjar getah bening mesenterika
atau infeksi sistemik awal mungkin memainkan peran dalam eksaserbasi
respon inflamasi yang diamati antara 8 jam dan 48 jam pi.
Secara keseluruhan, perubahan patologis yang diamati
berkorelasi baik dengan kinetika kolonisasi usus tikus yang diobati
dengan streptomisin oleh serovar Typhimurium. Pada beberapa
hewan kami mengamati peradangan cecal sedini 8 jam pi Hewan-
hewan ini membawa banyak bakteri ca. 107CFU/g dalam isi cecal.
Pada 20 jam pi sekum sepenuhnya dijajah (median 4 108
CFU/g; Gambar. 8B), dan tingkat maksimum peradangan
cecal dicapai antara 20 dan 48 h pi Gejala yang diamati ini
merupakan indikasi peradangan dan regenerasi cepat epitel
cecal sebagai respons terhadap kolonisasi oleh serovar
Typhimurium dan menyerupai banyak aspek manusia
( nontyphoid) salmonellosis dan model sapi dan kelinci dari
Salmonellaenterokolitis. Oleh karena itu, tikus yang diberi perlakuan
streptomisin mungkin menawarkan model alternatif serbaguna untuk
mempelajari patogenesis infeksi serovar Typhimurium gastrointestinal.
Peran sekresi SPI1 tipe III pada murine serovar Typhimurium
colitis.Sistem sekresi SPI1 tipe III memainkan peran kunci pada
tahap awal infeksi terkait usus pada hewan yang rentan (75, 81).
Pada pedet, sistem sekresi SPI1 tipe III memainkan peran kunci
dalam induksi diare inflamasi. Namun, masih belum jelas apakah
sistem sekresi SPI1 tipe III dapat memainkan peran serupa pada
tikus. Untuk mengeksplorasi pertanyaan ini, kami menggunakan
SB161 (SL1344,invG), mutan isogenik yang tidak memiliki subunit
esensial dari peralatan SPI1 tipe III dan tidak mampu mensekresi
dan mentranslokasi protein apa pun melalui rute ini (14, 43).
Delapan tikus C57BL/6 yang diberi perlakuan streptomisin terinfeksi
dengan serovar Typhimurium SL1344 tipe liar, dan delapan tikus
terinfeksi dengan SB161 (108
VOL. 71, 2003 MODEL KOLITIS SEROVAR TYPHIMURIUM MURINE 2849

ARA. 10. Peran sistem sekresi SPI1 tipe III pada kolitis Typhimurium serovar. Delapan tikus C57BL/6 yang diobati dengan streptomisin terinfeksi
po dengan 108CFU dari serovar Typhimurium SL1344 tipe liar (lingkaran hitam di panel A, B, dan C; sisi kiri panel D) atau dengan SB161 (SL1344 invG;
lingkaran terbuka di panel A, B, dan C; sisi kanan panel D) dan dianalisis pada 2 hari pi (A) Banyak serovar Typhimurium hadir dalam konten sekum. (B)
Kolonisasi kelenjar getah bening mesenterika (panel kiri), limpa (panel tengah), dan hati (panel kanan). (C) Berat total sekum, termasuk isi sekum
(ditentukan sebelum pengambilan sampel untuk analisis bakteriologis atau histopatologis). (D) Analisis histopatologi. Sampel jaringan cecal
dikrioembedded, dan bagian setipis 5 m diwarnai dengan H&E. Edema di submukosa (hitam), infiltrasi PMN (abu-abu sedang), pengurangan jumlah sel
goblet (abu-abu tua), dan erosi atau ulserasi lapisan epitel (abu-abu muda) diberi skor secara terpisah (lihat Bahan dan Metode) dan diplot sebagai
batang vertikal bertumpuk. Skor gabungan sama dengan jumlah skor terpisah. Panah hitam dan putih menunjukkan skor patologis bagian jaringan
dari tikus yang terinfeksi tipe liar dan SB161, masing-masing, ditunjukkan pada Gambar. 11. Untuk analisis statistik, lihat Tabel 2. P,Pnilai (uji Mann-
Whitney U; lihat Bahan dan Metode). NS, tidak signifikan secara statistik; S. Tm, serovar Typhimurium; garis putus-putus, batas deteksi; batang, median
beban bakteri atau berat.

CFU po). Pada 48 jam pi, tikus dikorbankan dan dianalisis.
Beban bakteri dalam isi sekum, kelenjar getah bening
mesenterika, dan di hati tidak berbeda secara signifikan
antara tikus yang terinfeksi serovar Typhimurium tipe liar
dan tikus yang terinfeksi SB161 (Gbr. 10A dan B). Namun,
beban SB161 yang jauh lebih rendah daripada serovar
Typhimurium tipe liar terdeteksi di limpa P
0,015;(Gambar 10B, tengah
panel). Pengamatan ini sejalan dengan temuan sebelumnya (27,
57) dan menunjukkan bahwa sistem sekresi SPI1 tipe III
berperan dalam membangun infeksi sistemik pada tikus yang
diberi streptomisin. Namun, terlepas dari pola interaksi yang
serupa dengan dinding usus selama tahap awal kolonisasi (Gbr.
11G dan H) danSalmonellamuatan dalam isi cecal (Gbr. 10A),
hanya gejala ringan kolitis yang terdeteksi di ceca (dan kolon
proksimal) dari kedelapan tikus yang dikolonisasi dengan
SB161. Ini termasuk bobot cecal yang secara signifikan lebih
tinggi (P 0,001; Gambar 10C) dan penurunan histopatologis
tanda-tanda peradangan (skor gabungan P 0,001; Gambar 10D,
bandingkan Gambar 11A dan C dengan 11B dan D; Meja 2).
Infiltrasi dan transmigrasi CD18-sel / PMN dan ekspresi
ICAM-1 juga berkurang pada ceca tikus yang terinfeksi
serovar Typhimurium mutan SB161 (bandingkan Gambar 11E dan
F). Ini menunjukkan bahwa serovar Typhimurium membutuhkan
alat sekresi fungsional SPI1 tipe III untuk menimbulkan peradangan
usus yang mendalam.
Eksperimen kultur jaringan telah menyarankan bahwa sekresi
belaka (dan bukan injeksi langsung ke dalam sel inang) dari
beberapa protein efektor (yaitu, SipA) mungkin cukup untuk
menimbulkan respons proinflamasi pada epitel monolayer
terpolarisasi (47). Untuk menilai apakah sekresi protein atau injeksi
langsung (translokasi) protein efektor bakteri ke dalam sel inang
diperlukan untuk induksi kolitis, kami menganalisis dua mutan
serovar Typhimurium yang tidak mampu menyuntikkan protein
efektor ke dalam sel inang tetapi masih mempertahankan kapasitas
untuk mensekresi beberapa atau semua protein melintasi selubung
sel bakteri. Berbeda dengan SB161, regangan SB302 (SL1344,invJ::
aphT) dapat mensekresi beberapa protein (InvJ dan SpaO [14]) dan
strain SB241 (SL1344,sipD::aphT) bahkan lebih efisien daripada
serovar Typhimurium tipe liar dalam mensekresi semua protein
efektor yang diketahui ke dalam supernatan kultur bakteri (44).
Kelompok lima tikus C57BL/6 terinfeksi mutan isogenik
SB161, SB302 (SL1344,invJ::aphT), atau SB241
2850 BARTHEL ET AL. SayaNFECT. SayaMMUN.

ARA. 11. Peran sistem sekresi SPI1 tipe III pada inflamasi cecal. (A sampai F) Ceca dari semua 16 tikus dari percobaan yang ditunjukkan pada Gambar.
10 yang cryoembedded dan dipotong untuk evaluasi histopatologi dan analisis dengan mikroskop imunofluoresensi. (A sampai D) SB161 menyebabkan
peradangan cecal yang kurang jelas. Bagian tipis (5 m) diwarnai dengan H&E. (A dan C) Gambar representatif dari tikus yang terinfeksi selama 2 hari
dengan serovar Typhimurium SL1344 tipe liar (ditandai dengan panah putih pada Gambar 10D); (B dan D) perwakilan gambar tikus yang terinfeksi
selama 2 hari dengan SB161 mutan SPI1 (ditandai dengan panah hitam pada Gambar. 10D); (E dan F) induksi ICAM-1 dan infiltrasi CD18-sel. Bagian tipis
(5 m) ceca mencit yang diinfeksi selama 48 jam dengan serovar Typhimurium SL1344 (E) atau SB161 (F) tipe liar diwarnai dengan DAPI, rat --mouse
CD18, hamster --mouse ICAM-1, dan poliklonal preadsorbed --rat IgG-FITC dan --hamster IgG-TRITC antibodi (DNA biru; ICAM-1 merah, CD18 fluoresensi
hijau; lihat Bahan dan Metode). (G dan H) Interaksi awal serovar Typhimurium tipe liar dan SB161 dengan epitel usus. Kelompok dua tikus yang diberi
perlakuan streptomisin terinfeksi dengan 108CFU dari serovar Typhimurium (G) atau SB161 (H) tipe liar dan dikorbankan pada 8 jam pi Pemeriksaan
makroskopik dan penilaian histopatologi menegaskan bahwa ceca semua tikus tidak meradang (data tidak ditampilkan). Potongan tipis (30 m) dari ceca
diwarnai dengan DAPI, TRITC-phalloidin, kelinci --Salmonellaantiserum LPS, dan sekunder
- - konjugat kelinci-FITC (DNA biru, aktin merah; serovar Typhimurium green fluorescence). Sisipan menunjukkan tampilan perbesaran yang lebih tinggi
dari area yang ditandai oleh panah putih. L, lumen usus; e, edema; hal, PMN; eh, erosi atau ulserasi lapisan epitel; g, sel piala; sa, submukosa; c, ruang
bawah tanah; f, autofluoresensi partikel makanan. Perbesaran ditunjukkan oleh bar.

(SL1344,sipD::aphT) atau dengan serovar Typhimurium tipe SB241 untuk mengkolonisasi sekum, kelenjar getah bening, dan hati
liar (108CFU po). Pada 48 jam pi tikus dikorbankan untuk dan menyebabkan perubahan inflamasi pada jaringan sekum tidak
analisis beban bakteri di organ internal, kolonisasi usus, dan berbeda secara signifikan dari serovar Typhimurium mutan yang
gejala patologis. Kapasitas SB302 dan kekurangan sekresi dan translokasi SB161 (Gbr. 12A
VOL. 71, 2003 MODEL KOLITIS SEROVAR TYPHIMURIUM MURINE 2851

TABEL 2. Perbandingan infeksi dengan defisiensi sekresi menunjukkan tanda-tanda peradangan. Tidak ada perbedaan
SB161 mutan dan serovar Typhimurium tipe liar: signifikan yang terdeteksi antara bobot cecal dan skor patologis
Analisis statistiksebuah
dari kedua galur tikus (panel kiri Gambar 13D dan E; Tabel 4).
Perbandingan P Pada kedua strain kami mengamati edema, erosi atau ulserasi
Sekum CFU................................................................ ..................................... mLN NS epitel, gangguan arsitektur vili, hilangnya sel goblet (Gbr. 13
CFU.............. ................................................................... ................................. CFU NS dan 14A dan C), migrasi sejumlah besar PMN/ CD18-sel ke
limpa ........................ ................................................................... .............. CFU 0,015 dalam lamina propria dan lumen usus (Gbr. 14E dan G), dan
hati .................................. ................................................................... .... Cecum NS
meningkatkan ekspresi ICAM-1 (Gbr. 14I dan K). Hanya
wt ................................................. ........................................................ Skor 0,001
gabungan... ................................................................... .................................. 0,001 distribusi B220tinggiSel B berbeda antara C57BL/6 dan LT-R/tikus.
Edema ........................ ................................................................... ..................... 0,001 Dalam submukosa cecal tikus kontrol C57BL/6 yang tidak
infitrasi PMN ............................. ................................................................... .. Sel 0,001 terinfeksi, kami mendeteksi kelompok kecil B220tinggiSel B yang
goblet .............................................. ........................................ 0,001 tidak ada di LT-R/tikus (bandingkan Gambar 14P dan N). Pada 48
Epitel ................................................... ................................................................... ... 0,001
jam pi dengan serovar Typhimurium, kelompok sel B kecil ini
sebuahData yang ditunjukkan pada Gambar 10 dianalisis dengan menggunakan uji Mann-Whitney U telah menghilang pada tikus C57BL/6 (Gbr. 14O). Kami telah
(lihat Bahan dan Metode). NS, tidak signifikan; mLN, kelenjar getah bening mesenterika.
berulang kali mengamati sejumlah besar B220tinggiSel B dalam
eksudat tikus C57BL / 6 yang dijajah dengan serovar
Typhimurium tipe liar (data tidak ditampilkan), menunjukkan
ke E dan Tabel 3). Secara keseluruhan, data ini sesuai dengan bahwa transmigrasi ke lumen usus mungkin berperan dalam
pengamatan dari model sapi (75, 81, 86) dan menunjukkan hilangnya kluster sel B cecal. Di LT-R/tikus, bagaimanapun, kami
bahwa sistem sekresi SPI1 tipe III dapat digunakan untuk mengamati infiltrasi besar-besaran B220tinggisel B ke dalam
membangun kolonisasi usus murine dan menyebar ke kelenjar lamina propria (Gbr. 14M), sedangkan tidak ada B220tinggiSel B
getah bening mesenterika. Namun, penyebaran yang efisien ke hadir di lumina usus tikus ini. Oleh karena itu, pensinyalan LT-R
situs sistemik dan timbulnya kolitis tergantung pada alat sekresi mungkin memainkan peran tidak hanya dalam pembentukan
fungsional SPI1 tipe III. Lebih lanjut, hasil yang diperoleh patch Peyer dan kelenjar getah bening mesenterika, tetapi
dengan SB241 menunjukkan bahwa sekresi in vivo belaka tidak mungkin juga memengaruhi perekrutan dan/atau fungsi sel B
mencukupi tetapi protein efektor SPI1 yang menginduksi (tetapi bukan PMN) selama respons inflamasi akut. Meskipun
respon inflamasi harus ditranslokasikan ke dalam sel inang demikian, data kami dengan jelas menunjukkan bahwa GALT
untuk menjalankan fungsi biologisnya. terorganisir dapat dibuang untuk induksi kolitis Typhimurium
Peran GALT di murine serovar Typhimurium colitis.Masih serovar murine.
menjadi masalah perselisihan bagaimana peradangan menjadi Dalam percobaan kontrol kami menganalisis efek LT-R/
primadona pada salmonellosis enterik. Data dari eksperimen mutasi pada infeksi serovar Typhimurium pada tikus yang
kultur jaringan menunjukkan bahwa interaksi langsung serovar diberi air. Seperti yang diharapkan, kolonisasi usus rendah,
Typhimurium dengan sel epitel dapat memicu respons dan kami tidak mendeteksi tanda-tanda penyakit inflamasi
inflamasi, sekresi klorida, dan kemotaksis PMN (19, 34, 47, 50, di ketujuh LT-R/dan tikus C57BL/6 tipe liar (Gbr. 13A, D, dan
51, 61; untuk ulasan, lihat referensi 26). Sebagai alternatif, telah E). Menariknya, terlepas dari kurangnya patch Peyer, dan
dikemukakan bahwa peradangan didahulukan dalam GALT (79) semua kelenjar getah bening di LT-R/hewan (25), jumlah
yang dikolonisasi sejak awal selama infeksi dan yang secara bakteri di hati dan limpa tidak berbeda secara signifikan
umum penting dalam inisiasi respon imun bawaan dan didapat antara dua strain tikus (Gbr. 13B dan C; Tabel 4). Namun,
(58, 60). Namun, karena kurangnya model hewan yang cocok, perlu dicatat bahwa varians jumlah bakteri di limpa dan hati
masalah ini tidak dapat ditangani secara langsung. lebih tinggi dalam percobaan ini daripada dalam percobaan
Kami menggunakan LT-R/ tikus knockout, yang tidak memiliki yang dijelaskan pada Gambar. percobaan yang ditunjukkan
patch Peyer, jaringan limfoid terkait usus, dan semua kelenjar pada Gambar. 3B (bandingkan hasil untuk tikus C57BL/6
getah bening (25), untuk menganalisis peran jaringan limfatik tipe liar). Alasan untuk hasil ini tidak jelas. Namun demikian,
terorganisir terkait usus dalam induksi kolitis Typhimurium data kami menunjukkan bahwa kolonisasi tambalan Peyer
serovar. Delapan LT-R . yang diobati dengan streptomisin tikus/ dan dan kelenjar getah bening mesenterika dapat diabaikan
delapan tikus C57BL / 6 tipe liar terinfeksi po dengan 108CFU untuk inisiasi infeksi sistemik.
dari serovar Typhimurium SL1344. Selain itu, tujuh LT-R . yang
diolah dengan air/tikus dan tujuh tikus C57BL / 6 tipe liar
terinfeksi po dengan 108CFU dari serovar Typhimurium SL1344.
DISKUSI
Selanjutnya, dua LT-R . yang diberi perlakuan streptomisin/
tikus dan dua tikus C57BL/6 tipe liar yang terinfeksi tiruan Telah lama dicatat bahwa berbedaS. entericaserotipe sering
dengan PBS steril. Tikus dikorbankan pada 48 jam pi dan memiliki preferensi inang yang berbeda dan bahwa jenis
dianalisis sehubungan dengan kolonisasi bakteri dan penyakit (yaitu, diare inflamasi atau infeksi sistemik) tergantung
peradangan usus (lihat Bahan dan Metode). padaS. entericaserotipe, serta pada spesies inang (75, 78).
Dalam C57BL/6 dan LT-R . yang diobati dengan streptomisin/tikus yang Konsep ini telah sering diilustrasikan oleh pengamatan bahwa
terinfeksi dengan serovar Typhimurium kami tidak mendeteksi perbedaan infeksi mulut manusia dan anak sapi dengan serovar
yang signifikan dari jumlah bakteri dalam tinja, limpa, dan hati (panel kiri Typhimurium menyebabkan enterokolitis, sedangkan tikus yang
Gambar 13A sampai C). Dalam semua delapan streptomisin yang diobati rentan menyerah pada penyakit seperti tifus sistemik tanpa
dengan C57BL/6 dan LT-R/mencit yang terinfeksi serovar Typhimurium sekum peradangan usus yang jelas. Fenomena terakhir telah melarang
berwarna pucat, mengerut hingga berukuran kecil, dan analisis rinci salmonellosis usus. Di sini, kami setan-
2852 BARTHEL ET AL. SayaNFECT. SayaMMUN.

ARA. 12. Pengaruh mutasi berbeda yang mengkompromikan translokasi protein efektor pada kolitis Typhimurium serovar murine. Kelompok lima
tikus C57BL / 6 yang diberi streptomisin terinfeksi po dengan 108CFU tipe liar serovar Typhimurium SL1344 (lingkaran hitam), SB161 (SL1344,
invG; lingkaran putih), SB302 (SL1344,invJ::aphT; lingkaran abu-abu), atau SB241 (SL1344),sipD::aphT; lingkaran bergaris), dikorbankan 48 jam pi dan
dianalisis seperti yang dijelaskan dalam Bahan dan Metode. (A) Beban bakteri dalam kandungan cecal; (B) beban bakteri di kelenjar getah bening
mesenterika (mLN); (C) beban bakteri di hati; (D) berat total sekum, termasuk isi sekum (ditentukan sebelum pengambilan sampel untuk analisis
bakteriologis atau histopatologis); (E) analisis histopatologi. Sampel jaringan cecal dikrioembedded, dan bagian setipis 5 m diwarnai dengan H&E.
Edema di submukosa (hitam), infiltrasi PMN (abu-abu sedang), pengurangan jumlah sel goblet (abu-abu tua), dan erosi atau ulserasi lapisan epitel (abu-
abu muda) diberi skor secara terpisah (lihat Bahan dan Metode) dan diplot sebagai batang vertikal bertumpuk. Skor gabungan sama dengan jumlah
skor terpisah.S. Tm, serovar Typhimurium. Untuk analisis statistik, lihat Tabel 3. Garis putus-putus, batas deteksi; bar, beban bakteri rata-rata.

menunjukkan bahwa tikus yang diberi perlakuan streptomisin menawarkan model
hewan serbaguna untuk mempelajari kolitis Typhimurium serovar.
Laporan sebelumnya telah menunjukkan bahwa pengobatan oral
dengan streptomisin membuat tikus sangat rentan terhadap infeksi
oral denganS. entericaserovar Typhimurium dan Enteritidis (2, 3, 9,
53, 54, 57, 66). Efek ini telah dikaitkan dengan penghapusan bakteri
usus komensal (4, 5, 55, 65). Memang, tikus gnotobiotik juga sangat
rentan terhadap infeksi berbagai bakteri, termasukSalmonellasp.
(16, 22, 38, 59). Banyak dari studi awal belum menggunakan galur
tikus inbrida yang terdefinisi dengan baik, dan hewan-hewan
tersebut ditempatkan di bawah kandang konvensional.
kondisi kebersihan nasional. Namun demikian, hasil kami dengan tikus
SPF C57BL/6 bawaan yang ditempatkan di bawah kondisi penghalang
sangat sesuai dengan laporan sebelumnya. Studi sebelumnya telah
difokuskan pada efek pengobatan streptomisin pada kolonisasi oleh
Salmonellasp. Pekerjaan kami memperluas studi ini dengan
menunjukkan bahwa tikus C57BL/6 yang diobati dengan streptomisin
mengembangkan kolitis pada infeksi oral dengan serovar Typhimurium.
Patologi murine serovar Typhimurium colitis sangat mirip
dengan yang diamati pada model sapi, infeksi loop ileum
kelinci, monyet rhesus, dan manusia (20, 42, 68, 73, 82, 84).
Ini termasuk edema di submukosa dan lamina
VOL. 71, 2003 MODEL KOLITIS SEROVAR TYPHIMURIUM MURINE 2853

TABEL 3. Analisis statistik parameter penyakit di murium untuk mentranslokasi protein efektor langsung ke sitosol
tikus yang diobati dengan streptomisin yang terinfeksi dengan mutan sel inang. Sejumlah besar bukti menunjukkan bahwa protein efektor
Typhimurium serovar yang kekurangan translokasi yang berbedasebuah
mengerahkan fungsi biologisnya di dalam sel inang. Namun,
P serovar Typhimurium juga dapat mensekresi protein efektor ke
Perbandingan
wt vs wt vs wt vs SB161 vs SB161 vs
dalam supernatan kultur melalui sistem sekresi SPI1 tipe III (39,
SB161 SB302 SB241 SB302 SB241 43-45, 83). Baru-baru ini, telah dilaporkan bahwa penambahan
protein efektor murni SipA ke media kultur cukup untuk
Sekum CFU NS NS NS NS NS
mLN CFU NS NS NS NS NS menginduksi transmigrasi PMN melintasi monolayer sel epitel usus
CFU hati 0,016 0,016 NS NS NS manusia yang terpolarisasi (47). Namun, pada tikus C57BL/6 yang
Sekum berat 0,008 0,008 0,008 NS NS diberi perlakuan streptomisin, serovar Typhimurium mutan SB241
Skor gabungan 0,008 0,008 0,008 NS NS (SL1344) yang kekurangan translokasi sipD::aphT), yang
Busung 0,008 0,008 0,008 NS NS
infitrasi PMN 0,008 0,008 0,008 NS NS mengeluarkan protein efektor seperti SipA bahkan lebih efisien
sel goblet 0,008 0,008 0,008 NS NS daripada strain tipe liar (44), dilemahkan pada tingkat yang sama
epitel NS NS NS NS NS seperti SB161 (SL1344,invG), mutan yang tidak mampu mensekresi
sebuahData yang ditunjukkan pada Gambar. 12 dianalisis dengan menggunakan uji Mann-
dan mentranslokasi protein efektor (43). Pada infeksi sapi asipD
Whitney U (lihat Bahan dan Metode). NS, tidak signifikan (P-0,05); wt, tipe liar. mutan juga sangat dilemahkan (74). Data ini tidak dapat
sepenuhnya mengesampingkan bahwa beberapa protein efektor
SPI1 juga dapat menjalankan fungsi dari luar. Namun, mereka
propria, gejala khas yang terkait dengan regenerasi cepat sangat menyarankan bahwa protein efektor yang terlibat dalam
epitel usus (yaitu, pemanjangan kripta dan hilangnya sel kolitis murine harus ditranslokasikan langsung ke sel inang.
goblet), ulserasi lapisan epitel, peningkatan regulasi Pengenalan pola molekuler terkait patogen oleh reseptor sistem
ekspresi ICAM-1 (37), dan infiltrasi PMN yang jelas pada imun bawaan diperkirakan memainkan peran penting selama
submukosa, lamina propria , dan lapisan epitel, serta respons awal terhadap infeksi bakteri (40, 77). Memang, serovar
eksudat inflamasi di lumen usus. Typhimurium diketahui mengekspresikan dan melepaskan sejumlah
Namun, perlu dicatat bahwa beberapa perbedaan dari besar LPS dan subunit flagela, dan faktor-faktor bakteri ini telah
infeksi sapi, kelinci, dan manusia mungkin juga ada. Pada terbukti menimbulkan respons "defensif" dalam berbagai uji in vitro
kelinci, anak sapi, dan primata, infeksi sering dikaitkan dan in vivo (29, 31, 85). Apakah mekanisme ini berkontribusi pada
dengan sekresi cairan luminal yang masif (75, 81). kolitis Typhimurium serovar pada tikus C57BL/6 yang diberi
Sebaliknya, tikus yang diobati dengan streptomisin yang streptomisin? Serovar Typhimurium mutan dengan sistem sekresi
terinfeksi serovar Typhimurium memiliki respon sekretorik tipe III yang rusak hanya menginduksi inflamasi ringan setelah 2
yang agak ringan yang terbatas pada gangguan hari infeksi (Gbr. 10D dan 12E). Namun, mutan ini melepaskan atau
pembentukan pelet tinja di usus besar. Selanjutnya, harus mengekspresikan jumlah LPS dan komponen flagela yang identik
disebutkan bahwa kompartemen usus yang paling (44; pengamatan tidak dipublikasikan), dan mereka menjajah usus
terpengaruh oleh infeksi serovar Typhimurium sering murine seefisien strain tipe liar isogenik (Gbr. 10 dan 12; Tabel 2 dan
berbeda antara host yang berbeda. Pada sapi, baik ileum 3). Data ini sejalan dengan hasil dari model ileal loop sapi dan kelinci
dan usus besar terpengaruh (76), sedangkan tikus yang (20, 28, 73, 82) dan menunjukkan bahwa respons sistem imun
diberi streptomisin mengembangkan kolitis. Meskipun bawaan terhadapSalmonellapola molekuler terkait patogen tidak
analisis sistematis kurang, laporan anekdot dari penyakit cukup untuk menyebabkan peradangan usus yang nyata,
manusia juga telah mengidentifikasi perubahan patologis setidaknya tanpa adanya sistem sekresi SPI1 tipe III fungsional.
yang paling parah di usus besar (8, 17, 52). Namun, mutan serovar Typhimurium dengan sistem sekresi SPI1
tipe III yang rusak tampaknya mempertahankan kapasitas residual
Faktor virulensi serovar Typhimurium mana yang untuk menyebabkan peradangan pada tikus C57BL/6 yang diberi
menginduksi peradangan usus? Kami menemukan bahwa perlakuan streptomisin (bandingkan Gambar 6 dan 13E dengan
mutan serovar Typhimurium dengan sistem sekresi SPI1 Gambar 10D dan 12E). Eksperimen di masa depan harus
tipe III yang rusak masih dapat menjajah saluran usus menentukan apakah respons imun bawaan dapat berkontribusi
bawah tikus yang diobati dengan streptomisin tetapi mutan pada peradangan yang bergantung pada SPI1 atau residu yang
menyebabkan kolitis yang jauh lebih ringan daripada strain tidak bergantung pada SPI1.
tipe liar isogenik. Pengamatan serupa telah dilakukan pada
model sapi dan loop ileum kelinci, di mana sistem sekresi Apa peran jaringan limfatik terorganisir pada penyakit sistemik?
SPI1 tipe III diperlukan untuk peradangan usus dan induksi Dalam model murine beberapa mekanisme berbeda telah
sekresi cairan masif (20, 28, 73, 82). Tidak ada bukti yang diidentifikasi yang memungkinkan serovar Typhimurium menembus
tersedia untuk infeksi pada manusia, tetapi penelitian pada penghalang usus dan menyebabkan penyakit sistemik. Secara
model kultur jaringan manusia menunjukkan bahwa sistem khusus, penetrasi sel M, dengan kolonisasi selanjutnya dari patch
sekresi serovar Typhimurium SPI1 tipe III dapat memicu Peyer dan kelenjar getah bening mesenterika (10-12, 35, 41, 64) dan
respons proinflamasi seperti ekspresi sitokin dan pengambilan sampel aktif serovar Typhimurium luminal oleh CD18-
transmigrasi PMN (19, 34, 47, 51). Karena itu, fagosit/sel dendritik (67, 80), telah dibahas baru-baru ini.
Namun, kontribusi relatif mereka tetap tidak jelas. Kami tidak
menemukan perbedaan yang signifikan dalam efisiensi infeksi
sistemik antara tikus C57BL/6 tipe liar dan LT-R/
Sistem sekresi SPI1 tipe III memungkinkan serovar Typhi- tikus (Gbr. 13C; Tabel 4). Sejak LT-R/ tikus kekurangan Peyer
2854 BARTHEL ET AL. SayaNFECT. SayaMMUN.

ARA. 13. Kolitis Typhimurium Serovar pada LT-R . yang diobati dengan streptomisin/tikus. (A hingga D) Di sisi kiri setiap panel, delapan tipe liar C57BL/
6 dan delapan LT-R/tikus (latar belakang C57BL / 6 genetik) diberi perlakuan awal dengan streptomisin dan terinfeksi 108CFU dari serovar Typhimurium
SL1344 po (lingkaran hitam dan segitiga hitam). Di tengah setiap panel, tujuh C57BL/6 dan tujuh LT-R/tikus diberi perlakuan awal dengan air dan
diinfeksi dengan 108CFU dari serovar Typhimurium SL1344 po (lingkaran terbuka dan segitiga terbuka). Di sisi kanan setiap panel, dua C57BL/6 dan dua
LT-R/tikus diberi perlakuan awal dengan streptomisin dan tiruan yang terinfeksi PBS steril (lingkaran abu-abu dan segitiga abu-abu). Tikus dikorbankan
48 jam pi dan kemudian dianalisis seperti yang dijelaskan dalam Bahan dan Metode. (A) Beban bakteri dalam tinja; (B) beban bakteri di limpa; (C) beban
bakteri di hati; (D) berat total sekum (ditentukan sebelum pengambilan sampel untuk analisis bakteriologis atau histopatologis); (E) analisis
histopatologi. Sampel jaringan cecal dikrioembedded, dan bagian setipis 5 m diwarnai dengan H&E. Edema di submukosa (hitam), infiltrasi PMN (abu-
abu sedang), pengurangan jumlah sel goblet (abu-abu tua), dan erosi atau ulserasi lapisan epitel (abu-abu muda) diberi skor secara terpisah (lihat
Bahan dan Metode) dan diplot sebagai batang vertikal bertumpuk. Skor gabungan sama dengan jumlah skor terpisah. Untuk analisis statistik, lihat
Tabel 4. NS, tidak signifikan secara statistik; garis putus-putus, batas deteksi; bar, beban bakteri rata-rata.
VOL. 71, 2003 MODEL KOLITIS SEROVAR TYPHIMURIUM MURINE 2855

TABEL 4. Analisis statistik parameter penyakit pada tipe liar patch dan kelenjar getah bening mesenterika, kolonisasi
C57BL/6 dan LT-R tikus yang terinfeksi selama 2 hari dengan
/
GALT ini tampaknya dapat diabaikan untuk inisiasi infeksi
serovar Typhimurium SL1344 tipe liarsebuah
sistemik. Agak lebih rumit untuk menilai keterlibatan sel M:
Pdi C57BL/6 vs LT-R/ tikusb karena kurangnya penanda sel M, sulit untuk secara formal
Perbandingan
- membuktikan tidak adanya semua sel M di LT-R/tikus. Selain
itu, peningkatan pesat jumlah sel M mungkin terjadi segera
Feses CFU NS NS
CFU limpa NS NS
setelah infeksi bakteri (6, 7, 70). Namun, LT-R/tikus mungkin
CFU hati NS NS memiliki setidaknya secara signifikan mengurangi jumlah
Sekum wt NS NS sel M (18, 25), yang menunjukkan bahwa jalur alternatif
Skor gabungan NS NS seperti CD18-transportasi sel fagosit/dendritik (67, 80)
Busung NS NS
mungkin mewakili rute utama untuk menembus
infitrasi PMN NS NS
sel goblet NS NS penghalang usus dalam inisiasi penyakit sistemik.
epitel NS NS Apa peran jaringan limfatik terorganisir di serovar
sebuahData yang ditunjukkan pada Gambar 13 dianalisis dengan menggunakan uji Mann-
Typhimurium colitis? Berbagai mekanisme pertahanan,
Whitney U (lihat Bahan dan Metode). NS, tidak signifikan (P-0,05). termasuk lapisan mukosa, peptida bakterisida, respon imun
b-,streptomisin pra-perawatan; , tidak diobati dengan streptomisin.
bawaan, dan sistem imun terkait usus, memastikan bahwa
mikroorganisme usus yang berpotensi patogen terdeteksi dan
dihilangkan (48, 58, 60). Seperti dibahas di atas, telah menjadi
masalah perselisihan apakah serovar Typhimurium colitis

ARA. 14. Inflamasi cecal pada serovar Typhimurium yang terinfeksi LT-R/dan tikus C57BL/6 tipe liar. Gambar representatif dari ceca LT-R/dan tikus
C57BL/6 tipe liar dari percobaan pada Gambar 13 diperlihatkan. Setiap sekum dikrioembedded, dan bagian setipis 5 m diwarnai dengan H&E (A sampai
D) atau diproses untuk mikroskopi imunofluoresensi (E sampai P). (A, E, I, dan M) LT-R . yang diobati dengan streptomisin/tikus yang terinfeksi serovar
Typhimurium; (B, F, J, dan N) LT-R . yang diberi streptomisin/tikus tiruan yang terinfeksi PBS; (C, G, K, dan O) tikus C57BL/6 tipe liar yang diberi perlakuan
streptomisin yang terinfeksi serovar Typhimurium; (D, H, L, dan P) tikus tiruan C57BL/6 tipe liar yang diberi perlakuan streptomisin yang terinfeksi PBS
steril. Pada panel A sampai D, bagian sekum dari LT-R/dan tikus C57BL/6 tipe liar diwarnai dengan H&E. Di panel E ke H, infiltrasi dan transmigrasi CD18-
sel ditampilkan. Bagian sekum diwarnai dengan antibodi DAPI, tikus --mouse CD18, dan --rat IgG-FITC (DNA biru; CD18 hijau). Pada panel I hingga L,
induksi ekspresi ICAM-1 ditampilkan. Bagian sekum diwarnai dengan antibodi DAPI, hamster --mouse ICAM-1, dan --hamster IgG-TRITC (DNA biru,
ICAM-1 merah). Di panel M ke P, distribusi B220tinggisel B ditampilkan. Bagian sekum diwarnai dengan antibodi DAPI, tikus --mouseB220, dan --rat IgG-
TRITC (DNA biru, B220 merah). L, lumen usus; e, edema; hal, PMN; eh, erosi atau ulserasi lapisan epitel; g, sel piala; sa, submukosa; lp, lamina propria; c,
ruang bawah tanah. Perbesaran ditunjukkan oleh bar. “S. Tm - atau ” menunjukkan apakah mencit terinfeksi serovar Typhimurium SL1344 atau tiruan
yang terinfeksi PBS steril; “Sm - atau ” menunjukkan apakah tikus-tikus itu diberi perlakuan awal dengan streptomisin atau dengan air.
2856 BARTHEL ET AL.
disebabkan oleh interaksi langsung bakteri dengan sel epitel usus
atau sebagai akibat dari kolonisasi bercak Peyer dan kelenjar getah
bening mesenterika (79). Kami menemukan bahwa peradangan
cecal sebenarnya mendahului kolonisasi kelenjar getah bening
mesenterika (Gbr. 8). Selanjutnya, kami menemukan bahwa serovar
Typhimurium colitis di LT-R/ tikus, yang tidak memiliki
semua GALT terorganisir, sama kuatnya dengan tikus C57BL/6 tipe
liar (Gbr. 13 dan Tabel 4). Hal ini menunjukkan bahwa patch Peyer
dan kelenjar getah bening mesenterika tidak penting untuk inisiasi
kolitis Typhimurium serovar.
Kesimpulannya, hasil kami memberikan bukti langsung pertama
bahwa baik kolonisasi tambalan Peyer dan kelenjar getah bening
mesenterika maupun respons inang yang bergantung pada struktur
limfoid ini tidak diperlukan untuk peradangan usus atau
penyebaran serovar Typhimurium ke organ internal. Ini selanjutnya
didukung oleh hasil awal yang diperoleh dengan tikus
imunodefisiensi (SCID, latar belakang genetik BALB/c; data tidak
dipublikasikan). Namun, keberadaan bakteri (dan presentasi
penentu antigeniknya) di GALT diperlukan kemudian untuk
pengembangan respons imun protektif yang efisien (56, 60). Efek
dari respons semacam itu diperkirakan tidak akan memengaruhi
eksperimen infeksi jangka pendek kami karena respons imun
adaptif umumnya membutuhkan waktu lebih lama untuk mulai
berlaku.
Singkatnya, pra-perawatan tikus SPF dengan streptomisin
membuat mereka rentan terhadap serovar Typhimurium colitis
yang sangat mirip dengan respon inflamasi yang diamati pada usus
manusia dan model hewan untuk salmonellosis usus. Cacat virulensi
yang telah kami amati dengan mutan serovar Typhimurium SPI1
memberikan dukungan lebih lanjut untuk gagasan ini. Berbeda
dengan model lain yang telah digunakan sejauh ini untuk
mempelajari patogenesis salmonellosis enterik, tikus yang diobati
dengan streptomisin menawarkan beberapa keuntungan penting. (i)
Ada berbagai macam alat untuk analisis imunohistologis dari respon
inflamasi. (ii) Tersedia banyak jenis tikus knockout yang tidak
memiliki organ, tipe sel, atau protein tertentu. (iii) Respon imun
bawaan dan adaptif telah dipelajari dengan sangat rinci pada tikus.
Ini memungkinkan untuk pertama kalinya analisis terperinci tentang
peran respons pejamu dalam salmonellosis enterik. Data kami
menunjukkan bahwa kemungkinan untuk menggabungkan
manipulasi kedua serovar Typhimurium dan inang murine
menyediakan sistem yang sangat kuat untuk mengungkap
patogenesis molekuler kolitis Typhimurium serovar.
UCAPAN TERIMA KASIH
MB dan SH berkontribusi sama dalam penelitian ini.
Kami berterima kasih kepada Andrew Macpherson untuk diskusi ilmiah,
bantuan dengan evaluasi histopatologi, dan komentar pada naskah; Burkhardt
Seifert untuk saran tentang analisis statistik; C. Künzel dan S. Brinkmann untuk
bantuan ahli dengan eksperimen hewan; dan JE Galan dan J. Heesemann atas
dukungannya yang berkelanjutan. Kami berterima kasih kepada R. Zinkernagel
dan H. Hengartner atas dukungan yang murah hati terhadap pekerjaan hewan
kami di BZL Zurich.
Pekerjaan yang dijelaskan di sini didanai sebagian oleh hibah dari DFG
dan Volkswagenstiftung (ke W.-DH).
REFERENSI
1.Baumler, AJ, RM Tsolis, dan F. Heffron.1996lpffioperon mbria memediasi
adhesiSalmonella typhimuriumuntuk murine patch Peyer. Prok. Natal
akad. Sci. Amerika Serikat93:279–283.
2.Bohnhoff, M., BL Drake, dan CP Miller.1954. Pengaruh streptomisin pada
kerentanan saluran usus untuk eksperimentalSalmonellainfeksi. Prok. Soc.
Eks. Biol.86:132–137.
SayaNFECT. SayaMMUN.
3.Bohnhoff, M., dan CP Miller.1962. Peningkatan kerentanan terhadapSalmonella infeksi
pada tikus yang diobati dengan streptomisin. J. Menginfeksi. Dis.111:117–127.
4.Bohnhoff, M., CP Miller, dan WR Martin.1964. Resistensi saluran usus
tikus terhadap percobaanSalmonellainfeksi. (I) Faktor-faktor yang
mengganggu inisiasi infeksi melalui inokulasi oral. J. Eks. Med. 120:805–
816.
5.Bohnhoff, M., CP Miller, dan WR Martin.1964. Resistensi saluran usus tikus
terhadap percobaanSalmonellainfeksi. II. Faktor-faktor yang bertanggung jawab
atas kehilangannya setelah pengobatan streptomisin. J. Eks. Med.120:817–828.
6.Borghesi, C., M. Regoli, E. Bertelli, dan C. Nicoletti.1996. Modifikasi epitel
terkait folikel oleh paparan jangka pendek terhadap bakteri non-usus.
J.Patol.180:326–332.
7.Borghesi, C., MJ Taussig, dan C. Nicoletti.1999. Penampilan sel M yang
cepat setelah tantangan mikroba dibatasi di pinggiran epitel terkait folikel
dari patch Peyer. Laboratorium. Selidiki.79:1393–1401.
8.Boyd, JF1985. Patologi saluran pencernaan diSalmonella typhimurium keracunan
makanan. Usus26:935–944.
9.Brown, KJ, GW Tannock, RA Eyres, RB Elliott, dan DR Lines.1979.
Kolonisasi olehSalmonella typhimuriumdanShigella flexneriIII dari saluran
pencernaan tikus diobati dengan -2-thienylalanine dan streptomisin.
Antonie Leeuwenhoek45:531–546.
10.Carter, PB, dan FM Collins.1974. Rute infeksi enterik pada tikus normal. J.
Eks. Med.139:1189–1203.
11.Clark, MA, BH Hirst, dan MA Jepson.1998. Komposisi inokulum dan
Salmonellapulau patogenisitas 1 mengatur invasi sel-M dan penghancuran
epitel olehSalmonella typhimurium. Menulari. kekebalan.66:724–731.
12.Clark, MA, MA Jepson, NL Simmons, dan BH Hirst.1994. Interaksi
preferensial dariSalmonella typhimuriumdengan sel M patch Peyer tikus.
Res. Mikrobiol.145:543–552.
13.Collazo, CM, dan JE Galan.1997. Sistem tipe III terkait invasi dariSalmonella
typhimuriummengarahkan translokasi protein Sip ke dalam sel inang. mol.
Mikrobiol.24:747–756.
14.Collazo, CM, dan JE Galan.1996. Persyaratan untuk protein yang diekspor
dalam sekresi melalui sistem tipe III terkait invasiSalmonella typhimurium.
Menulari. kekebalan.64:3524–3531.
15.Collazo, CM, MK Zierler, dan JE Galan.1995. Analisis fungsional dari
Salmonella typhimuriumgen invasitermasukdaninvJdan identifikasi target
aparatus sekresi protein yang dikodekan dalaminvtempat. mol. Mikrobiol.
15:25–38.
16.Collins, FM, dan PB Carter.1978. Pertumbuhan salmonella pada tikus bebas kuman yang
terinfeksi secara oral. Menulari. kekebalan.21:41–47.
17.Day, DW, BK Mandal, dan BC Morson.1978. Biopsi rektal muncul di
Salmonellaradang usus besar. Histopatologi2:117-131.
18.Debard, N., F. Sierro, J. Browning, dan JP Kraehenbuhl.2001. Pengaruh
limfosit dewasa dan limfotoksin pada perkembangan epitel terkait folikel
dan sel M pada patch Peyer tikus. Gastroenterologi120:1173-1182.
19.Eckmann, L., MF Kagnoff, dan J. Fierer.1993. Sel epitel mengeluarkan kemokin
interleukin-8 sebagai respons terhadap masuknya bakteri. Menulari. kekebalan.61:
4569–4574.
20.Everest, P., J. Ketley, S. Hardy, G. Douce, S. Khan, J. Shea, D. Holden, D.
Maskell, dan G. Dougan.1999. EvaluasiSalmonella typhimuriummutan
dalam model gastroenteritis eksperimental. Menulari. kekebalan.67:2815–
2821.
21.Fierer, J., dan DG Guiney.2001. Sifat virulensi yang beragam yang mendasari hasil
klinis yang berbeda dariSalmonellainfeksi. J.klin. Selidiki.107:775–780.
22.Filho-Lima, JV, EC Vieira, dan JR Nicoli.2000. Efek antagonis dari
Lactobacillus acidophilus,Saccharomyces boulardii, danEscherichia coli
kombinasi melawan infeksi eksperimental denganShigella flexneridan
Salmonella enteritidissubsp.typhimuriumpada tikus gnotobiotik. J. Aplikasi
Mikrobiol. 88:365–370.
23.Finlay, BB, dan JH Brumell.2000.Salmonellainteraksi dengan sel inang: in
vitro ke in vivo. Philos. Trans. R. Soc. London. B355:623–631.
24.Fu, YX, dan DD Chaplin.1999. Pengembangan dan pematangan jaringan
limfoid sekunder. annu. Pdt. Imunol.17:399–433.
25.Futterer, A., K. Mink, A. Luz, MH Kosco-Vilbois, dan K. Pfeffer.1998. Reseptor
beta limfotoksin mengontrol organogenesis dan pematangan afinitas dalam
jaringan limfoid perifer. Kekebalan9:59–70.
26.Galan, JE2001.Salmonellainteraksi dengan sel inang: sekresi tipe III bekerja.
annu. Pdt. Sel Dev. Biol.17:53–86.
27.Galan, JE, dan R. Curtiss III.1989. Kloning dan karakterisasi molekuler dari gen
yang produknya memungkinkanSalmonella typhimuriumuntuk menembus sel
kultur jaringan. Prok. Natal akad. Sci. Amerika Serikat86:6383–6387.
28.Galyov, EE, MW Wood, R. Rosqvist, PB Mullan, PR Watson, S. Hedges, dan TS
Wallis.1997. Protein efektor yang disekresikan dariSalmonella dublin
ditranslokasikan ke dalam sel eukariotik dan memediasi inflamasi dan sekresi
cairan pada mukosa ileum yang terinfeksi. mol. Mikrobiol.25:903–912.
29.Gewirtz, AT, TA Navas, S. Lyons, PJ Godowski, dan JL Madara. 2001.
Keunggulan: flagelin bakteri mengaktifkan TLR5 yang diekspresikan secara
basolateral untuk menginduksi ekspresi gen proinflamasi epitel. J. Imun.167:
1882–1885.
VOL. 71, 2003
30.Govoni, G., dan P. Gros.1998. NRAMP1 Makrofag dan perannya dalam resistensi
terhadap infeksi mikroba. radang. Res.47:277–284.
31.Hayashi, F., KD Smith, A. Ozinsky, TR Hawn, EC Yi, DR Goodlett,
JK Eng, S. Akira, DM Underhill, dan A. Aderem.2001. Respon imun
bawaan terhadap flagelin bakteri dimediasi oleh reseptor seperti Toll 5.
Alam410:1099-1103.
32.Hayday, A., dan JL Viney.2000. Seluk-beluk imunologi permukaan tubuh.
Sains290:97–100.
33.Hensel, M.2000.Salmonellapulau patogenisitas 2. Mol. Mikrobiol.36: 1015–
1023.
34.Hobbie, S., LM Chen, RJ Davis, dan JE Galan.1997. Keterlibatan jalur
protein kinase yang diaktifkan mitogen dalam respons nuklir dan produksi
sitokin yang diinduksi olehSalmonella typhimuriumdalam sel epitel usus
yang dikultur. J. Imun.159:5550–5559.
35.Hohmann, AW, G. Schmidt, dan D. Rowley.1978. Kolonisasi dan virulensi
ususSalmonellapada tikus. Menulari. kekebalan.22:763–770.
36.Hoiseth, SK, dan BA Stocker.1981. Tergantung aromatikSalmonella
typhimuriumtidak virulen dan efektif sebagai vaksin hidup. Alam291:238–
239.
37.Huang, GT, L. Eckmann, TC Savidge, dan MF Kagnoff.1996. Infeksi sel
epitel usus manusia dengan bakteri invasif meningkatkan ekspresi molekul
adhesi antar sel apikal-1 (ICAM-1) dan adhesi neutrofil. J.klin. Selidiki.98:
572–583.
38.Hudault, S., H. Bewa, C. Bridonneau, dan P. Raibaud.1985. Efisiensi
berbagai suspensi bakteri yang berasal dari flora cecal ayam konvensional
dalam mengurangi tingkat populasiSalmonella typhimuriumpada tikus
gnotobiotik dan usus ayam. Bisa. J. Mikrobiol.31:832–838.
39.Hueck, CJ, MJ Hantman, V. Bajaj, C. Johnston, CA Lee, dan SI Miller.1995.
Salmonella typhimuriumpenentu invasi yang disekresikan homolog
denganShigellaprotein Ipa. mol. Mikrobiol.18:479–490.
40.Janeway, CA, Jr.2001. Bagaimana sistem kekebalan bekerja untuk melindungi inang dari
infeksi: pandangan pribadi. Prok. Natal akad. Sci. Amerika Serikat98:7461-7468.
41.Jones, BD, N. Ghori, dan S. Falkow.1994.Salmonella typhimuriummemulai
infeksi murine dengan menembus dan menghancurkan sel M epitel
khusus dari patch Peyer. J. Eks. Med.180:15–23.
42.Jones, PW, G. Dougan, C. Hayward, N. Mackensie, P. Collins, dan SN Chatfield.
1991. Vaksinasi oral anak sapi terhadap salmonellosis eksperimental
menggunakan doublearomutan dariSalmonella typhimurium. Vaksin9:29–34.
43.Kaniga, K., JC Bossio, dan JE Galan.1994. TheSalmonella typhimurium gen
invasiinvFdaninvGmengkodekan homolog dari keluarga protein AraC dan
PulD. mol. Mikrobiol.13:555–568.
44.Kaniga, K., D. Trollinger, dan JE Galan.1995. Identifikasi dua target sistem
sekresi protein tipe III yang dikodekan olehinvdanspalokus Salmonella
typhimuriumyang memiliki homologi denganShigellaprotein IpaD dan
IpaA. J. Bakteri.177:7078–7085.
45.Kaniga, K., S. Tucker, D. Trollinger, dan JE Galan.1995. Homolog dari
ShigellaInvasin IpaB dan IpaC diperlukan untukSalmonella typhimurium
masuk ke dalam sel epitel yang dikultur. J. Bakteri.177:3965–3971.
46.Kraehenbuhl, JP, dan MR Neutra.2000. Sel M epitel: diferensiasi dan
fungsi. annu. Pdt. Sel Dev. Biol.16:301–332.
47.Lee, CA, M. Silva, AM Siber, AJ Kelly, E. Galyov, dan BA McCormick.2000.
Sebuah rahasiaSalmonellaprotein menginduksi respon proinflamasi pada
sel epitel, yang mendorong migrasi neutrofil. Prok. Natal akad. Sci.
Amerika Serikat97:12283-12288.
48.Lehrer, RI, dan T. Ganz.2002. Defensin hewan vertebrata. Curr. pendapat.
kekebalan.14:96-102.
49.Madsen, K., A. Cornish, P. Soper, C. McKaigney, H. Jijon, C. Yachimec, J. Doyle,
L. Jewell, dan C. De Simone.2001. Bakteri probiotik meningkatkan fungsi
penghalang epitel usus murine dan manusia. Gastroenterologi121:580–591.
50.McCormick, BA, SP Colgan, C. Delp-Archer, SI Miller, dan JL Madara.
1993.Salmonella typhimuriumlampiran ke monolayer epitel usus manusia:
sinyal transelular ke neutrofil subepitel. J. Sel Biol.123:895–907.
51.McCormick, BA, PM Hofman, J. Kim, DK Carnes, SI Miller, and
JL Madara.1995. Perlekatan permukaan dariSalmonella typhimuriumke
epitel usus mencetak matriks subepitel dengan gradien kemotaktik untuk
neutrofil. J. Sel Biol.131:1599–1608.
52.McGovern, VJ, dan LJ Slavutin.1979. Patologi kolitis salmonella. Saya.
J.Surge Pathol.3:483–490.
53.Meynell, GG1955. Beberapa faktor yang mempengaruhi daya tahan tikus terhadap infeksi rongga
mulut dengan cara:Salmonella typhimurium. Prok. R. Soc. Med.48:916–918.
54.Meynell, GG, dan TV Subbaiah.1963. Mekanisme antibakteri usus tikus. I. Kinetika
infeksi olehSalmonella typhimuriumpada tikus normal dan yang diobati dengan
streptomisin dipelajari dengan transduktan yang gagal. sdr. J. Eks. Patol.44:197–
208.
55.Miller, CP, dan M. Bohnhoff.1963. Perubahan mikroflora enterik tikus
terkait dengan peningkatan kerentanan terhadapSalmonellainfeksi setelah
pengobatan streptomisin. J. Menginfeksi. Dis.113:59–66.
56.Mowat, AM, dan JL Viney.1997. Dasar anatomi kekebalan usus. kekebalan.
Putaran.156:145–166.
57.Murray, RA, dan CA Lee.2000. Gen invasi tidak diperlukan untuk
Salmonella entericaserovar Typhimurium untuk menembus epitel usus
MODEL KOLITIS SEROVAR TYPHIMURIUM MURINE 2857
lium: bukti bahwaSalmonellapatogenisitas pulau 1 memiliki fungsi alternatif
selama infeksi. Menulari. kekebalan.68:5050–5055.
58.Nagler-Anderson, C.2001. Man penghalang! Pertahanan strategis di
mukosa usus. Nat. Pdt. Imunol.1:59–67.
59.Nardi, RM, ME Silva, EC Vieira, EA Bambira, dan JR Nicoli.1989. Infeksi
intragastrik pada tikus bebas kuman dan tikus konvensional denganSalmonella
typhimurium. braz. J. Med. Biol. Res.22:1389–1392.
60.Neutra, MR, NJ Mantis, dan JP Kraehenbuhl.2001. Kolaborasi sel epitel
dengan jaringan limfoid mukosa yang terorganisir. Nat. kekebalan.
2:1004–1009.
61.Norris, FA, MP Wilson, TS Wallis, EE Galyov, dan PW Majerus. 1998. SopB,
protein yang dibutuhkan untuk virulensiSalmonella dublin, adalah fosfatase
inositol fosfat. Prok. Natal akad. Sci. Amerika Serikat95:14057–14059.
62.Ohl, SAYA, dan SI Miller.2001.Salmonella: model patogenesis bakteri.
annu. Pdt. Med.52:259–274.
63.Pascopella, L., B. Raupach, N. Ghori, D. Monack, S. Falkow, dan PL Kecil.1995.
Fenotipe pembatasan inang dariSalmonella typhidanSalmonella gallinarum.
Menulari. kekebalan.63:4329–4335.
64.Penheiter, KL, N. Mathur, D. Giles, T. Fahlen, dan BD Jones.1997. Non-invasif
Salmonella typhimuriummutan bersifat avirulen karena ketidakmampuan untuk
masuk dan menghancurkan sel M dari tambalan Peyer ileum. mol. Mikrobiol. 24:
697–709.
65.Que, JU, SW Casey, dan DJ Hentges.1986. Faktor-faktor yang bertanggung jawab atas
peningkatan kerentanan tikus terhadap kolonisasi usus setelah pengobatan dengan
streptomisin. Menulari. kekebalan.53:116–123.
66.Que, JU, dan DJ Hentges.1985. Pengaruh pemberian streptomisin terhadap resistensi
kolonisasi terhadapSalmonella typhimuriumpada tikus. Menulari. kekebalan. 48:
169-174.
67.Rescigno, M., M. Urbano, B. Valzasina, M. Francolini, G. Rotta, R. Bonasio,
F. Granucci, JP Kraehenbuhl, dan P. Ricciardi-Castagnoli.2001. Sel dendritik
mengekspresikan protein persimpangan ketat dan menembus lapisan tunggal epitel
usus untuk mengambil sampel bakteri. Nat. kekebalan.2:361–367.
68.Santos, RL, S. Zhang, RM Tsolis, RA Kingsley, LG Adams, dan AJ Baumler.
2001. Model hewan dariSalmonellainfeksi: enteritis versus demam tifoid.
Mikroba Menginfeksi.3:1335–1344.
69.Savage, DC, dan R. Dubos.1968. Perubahan pada sekum tikus dan flora
yang dihasilkan oleh obat antibakteri. J. Eks. Med.128:97-110.
70.Savidge, TC, MW Smith, PS James, dan P. Aldred.1991.Salmonella- menginduksi
pembentukan sel-M dalam jaringan patch Peyer tikus bebas kuman. Saya. J.Patol.
139:177–184.
71.Schmitt, CK, JS Ikeda, SC Darnell, PR Watson, J. Bispham, TS Wallis, DL
Weinstein, ES Metcalf, dan AD O'Brien.2001. Tidak adanya semua komponen
ekspor flagellar dan mesin sintesis secara berbeda mengubah virulensi dari
Salmonella entericaserovar Typhimurium dalam model demam tifoid,
kelangsungan hidup dalam makrofag, invasi kultur jaringan, dan enterokolitis
betis. Menulari. kekebalan.69:5619–5625.
72.Takeuchi, A.1967. Studi mikroskop elektron eksperimentalSalmonella
infeksi. I. Penetrasi ke dalam epitel usus olehSalmonella typhimurium.
Saya. J.Patol.50:109–136.
73.Tsolis, RM, LG Adams, TA Ficht, dan AJ Baumler.1999. Kontribusi dari
Salmonella typhimuriumfaktor virulensi penyakit diare pada pedet.
Menulari. kekebalan.67:4879–4885.
74.Tsolis, RM, LG Adams, MJ Hantman, CA Scherer, T. Kimbrough,
RA Kingsley, TA Ficht, SI Miller, dan AJ Baumler.2000. SspA diperlukan untuk
mematikanSalmonella entericaserovar Typhimurium infeksi pada anak sapi
tetapi tidak penting untuk diare. Menulari. kekebalan.68:3158–3163.
75.Tsolis, RM, RA Kingsley, SM Townsend, TA Ficht, LG Adams, dan
AJ Baumler.1999. Tentang mencit, pedet, dan jantan: perbandingan model
tifus tikus dengan yang lainSalmonellainfeksi. Adv. Eks. Med. Biol.473: 261–
274.
76.Tsolis, RM, SM Townsend, EA Miao, SI Miller, TA Ficht, LG Adams, dan AJ
Baumler.1999. Identifikasi dugaanSalmonella entericaserotipe faktor
kisaran inang Typhimurium dengan homologi untuk IpaH dan YopM
dengan mutagenesis tanda tangan. Menulari. kekebalan.67:6385–6393.
77.Underhill, DM, dan A. Ozinsky.2002. Reseptor seperti pulsa: mediator kunci
deteksi mikroba. Curr. pendapat. kekebalan.14:103-110.
78.Uzzau, S., DJ Brown, T. Wallis, S. Rubino, G. Leori, S. Bernard, J.
Casadesus, DJ Platt, dan JE Olsen.2000. Serotipe yang diadaptasi dari
inang Salmonella enterica. Epidemiol. Menulari.125:229–255.
79.Vazquez-Torres, A., dan FC Fang.2000. Rute seluler invasi oleh
enteropatogen. Curr. pendapat. Mikrobiol.3:54–59.
80.Vazquez-Torres, A., J. Jones-Carson, AJ Baumler, S. Falkow, R. Valdivia,
W. Brown, M. Le, R. Berggren, Taman WT, dan FC Fang.1999.
Penyebaran ekstraintestinal dariSalmonellaoleh fagosit pengekspres CD18.
Alam 401:804–808.
81.Wallis, TS, dan EE Galyov.2000. Basis Molekul dariSalmonella-Induksi
enteritis mol. Mikrobiol.36:997–1005.
82.Watson, PR, EE Galyov, SM Paulin, PW Jones, dan TS Wallis. 1998. Mutasi
invH, tapi tidakstn, mengurangiSalmonella-Induksi enteritis pada sapi.
Menulari. kekebalan.66:1432–1438.
83.Wood, MW, R. Rosqvist, PB Mullan, MH Edwards, dan EE Galyov. 1996. SopE,
protein yang disekresikan dariSalmonella dublin, ditranslokasikan ke dalam
2858 BARTHEL ET AL.
menargetkan sel eukariotik melalui amenyesapmekanisme yang tergantung dan mendorong
masuknya bakteri. mol. Mikrobiol.22:327–338.
84.Wray, C., dan WJ Sojka.1978. EksperimentalSalmonella typhimurium infeksi pada
anak sapi. Res. Dokter hewan. Sci.25:139-143.
85.Yang, RB, MR Mark, A. Gray, A. Huang, MH Xie, M. Zhang, A. Goddard,
WI Wood, AL Gurney, dan PJ Godowski.1998. Seperti pulsa
Editor:DL Burns
SayaNFECT. SayaMMUN.
reseptor-2 memediasi pensinyalan seluler yang diinduksi lipopolisakarida. Alam
395:284–288.
86.Zhang, S., RL Santos, RM Tsolis, S. Stender, WD Hardt, AJ Baumler, dan
LG Adams.2002. TheSalmonella entericaserotipe Typhimurium protein
efektor SipA, SopA, SopB, SopD, dan SopE2 bekerja sama untuk
menginduksi diare pada pedet. Menulari. kekebalan.70:3843–3855.