Kekebalan nyamuk terhadap Plasmodium

Abstrak

Memahami mekanisme molekuler dari respon imun bawaan Anopheles gambiae terhadap
parasit Plasmodium adalah sangat penting bagi upaya saat ini untuk mengembangkan strategi baru
untuk pengendalian penyakit malaria. Parasit mengalami substansial kerugian spesifik pada tahap
perkembangannya pada nyamuk, yang dalam beberapa kasus menyebabkan refraktoritas nyamuk
melawan parasit. Genetika yang mendasari refractoriness adalah kompleks dan multifaktorial.
Penyelesaian urutan genom dari An. gambiae 2 tahun lalu, bersama dengan pengembangan
microarray DNA pada spesies ini dan perluasan RNAi teknik untuk nyamuk dewasa, telah
memungkinkan pendekatan genomik komparatif dan fungsional dari sistem kekebalan tubuh
bawaan nyamuk.

Berbagai faktor terbukti berdampak negatif terhadap perkembangan parasit Plasmodium

pada nyamuk, dalam beberapa kasus terkemuka untuk menyelesaikan penyumbatan transmisi.
Selain itu, faktor nyamuk telah diidentifikasi yang memainkan peran positif dan diperlukan
penularan parasit yang berhasil. Temuan ini menunjukkan interaksi yang sangat kompleks antara
parasit dan vektor. Penelitian adalah terus mengidentifikasi faktor-faktor baru yang terlibat dalam
interaksi ini dan untuk menguraikan interaksi dari molekul-molekul ini dan regulasi mereka.

1. Perkenalan

Selama rentang hidupnya, nyamuk betina berulang kali memakan tepung darah sebagai sumber
protein untuk melengkapi sel telur pengembangan. Ini membuatnya menjadi pemancar ideal
beragam patogen yang ditularkan melalui darah, termasuk agen dari penyakit manusia yang
menghancurkan seperti demam berdarah dan kuning demam yang disebabkan oleh arbovirus,
filariasis yang disebabkan oleh nematoda, dan malaria yang disebabkan oleh apotompleksan
protozoa genus Plasmodium. Malaria manusia terus berlanjut masalah kesehatan utama,
bertanggung jawab atas 1,4% penyakit membebani seluruh dunia dan diperkirakan satu juta
kematian per tahun di Afrika (The World Health Report 2002, WHO 2002).

Plasmodium falciparum adalah yang paling banyak agen infeksi tunggal penting yang
menyebabkan kematian padaanak muda; itu bertanggung jawab atas 20% dari semua kematian di
antara anak-anak di bawah 5 tahun di Afrika (Afrika Laporan Malaria 2003, Organisasi Kesehatan
Dunia / UNICEF 2003). Penularan parasit ini adalah sangat efektif sebagai vektor utamanya di Afrika,
Anopheles gambiae, berumur panjang dan sangat antropofilik. Meskipun demikian, beban malaria
meningkat upaya berkelanjutan untuk pengendalian diarahkan pada vektor nyamuk (pengelolaan
lingkungan, insektisida, kelambu) atau obat anti-malaria. Selain sosial-ekonomi dan politik faktor
kebangkitan malaria dapat dikaitkan terutama untuk munculnya obat-obatan dan insektisida
resistensi dalam populasi parasit dan vektor, masing-masing (Greenwood dan Mutabingwa, 2002).
Intervensi baru strategi sangat dibutuhkan. Pendekatan baru yang potensial untuk pengendalian
malaria adalah untuk mengganggu siklus penularannya pada nyamuk oleh mekanisme penargetan
yang penting untuk pengembangan parasit. Pengembangan strategi seperti itu akan membutuhkan
pengetahuan rinci tentang interaksi yang kompleks antara Plasmodium dan vektor nyamuknya,
terutama identifikasi molekul kunci yang diperlukan untuk sukses pengembangan parasit dalam
vektor dan transmisi selanjutnya ke inang manusia. Lebih tiga tahun terakhir selesainya genom P.
falciparum (Gardner et al., 2002) dan An. gambiae (Holt et al., 2002) bersama dengan teknis penting
kemajuan seperti protokol yang efektif untuk RNAi di nyamuk Anopheles dewasa (Blandin et al.,
2002) miliki sangat difasilitasi pendekatan genom fungsional untuk studi interaksi vektor-parasit. Ini
Ulasan akan merangkum kemajuan terbaru dalam pemahaman kami molekul yang dikodekan oleh
An. gambiae genom yang dapat berpartisipasi dalam respons imun dan terutama yang
mempengaruhi hasil Infeksi Plasmodium pada nyamuk dan karenanya merupakan target potensial
untuk pendekatan baru untuk pengendalian penyakit.

2. Nyamuk refrakter terhadap infeksi Plasmodium

Parasit Plasmodium menjalani kehidupan yang kompleks siklus yang meliputi perubahan generasi
heterofasik, dan wajib memenuhi siklus kehidupan seksualnya yang singkat di Indonesia nyamuk.
Gametosit pria dan wanita, diambil dengan makan darah, menjalani gametogenesis di dalam lumen
midgut nyamuk. Dibutuhkan pemupukan tempat dan zigot yang dihasilkan mengalami meiosis dan
berkembang menjadi ookinete motil. Sekitar satu sehari setelah darah menular makan ookinete
melintasi matriks peritrofik yang melapisi midgut lumen dan selanjutnya epitel midgut itu sendiri.
The ookinete kemudian mengumpulkan dan membentuk oocyst, the tahap di mana sporogoni
terjadi. Sekitar dua minggu setelah sporozoit makan darah dilepaskan ke dalam hemocoel, sistem
peredaran darah terbuka nyamuk. Dari sini mereka mencapai kelenjar ludah dan lagi melintasi
epitel, dalam hal ini untuk menembus ke lumen kelenjar ludah, di mana mereka campur dengan air
liur dan disuntikkan ke yang berikutnya host vertebrata. Fakta bahwa parasit harus melintasi dua
nyamuk hambatan epitel dan bersirkulasi di dalam hemolymph menciptakan peluang yang jelas
untuk epitel dan respon imun humoral nyamuk untuk menyerang parasit Konsep kekebalan nyamuk
yang bisa menjadi penentu penting dari infektivitas Plasmodium untuk nyamuk diajukan hampir
delapan puluh tahun yang lalu (Huff, 1927). Memang parasit mengalami kerugian spesifik tahap-
spesifik selama perkembangan di nyamuk; selanjutnya beragam spesies nyamuk berbeda dalam
kemampuannya untuk menularkan parasit Plasmodium yang berbeda, dan spesifik stadium ke
stadium kerugian tampaknya tergantung pada vektor dan spesies parasit, mendukung keberadaan
specieslimited interaksi (Alavi et al., 2003). Sinden et al. (2004) baru-baru ini mengemukakan
hipotesis bahwa nyamuk kekebalan menetapkan tingkat dasar di mana ini interaksi vektor-parasit
terjadi, dan mengusulkan itu parasit harus mengatasi mekanisme pertahanan yang sudah ada di
tempat. Schwartz dan Koella (2002) mengemukakan bahwa di lapangan nyamuk tahan api mungkin
dibatasi oleh tingginya biaya spesifik fenotipe yang mengarah ke pembunuhan parasit. Namun,
perbedaan kerentanan dalam populasi lapangan miliki telah diamati dan frekuensi yang tampaknya
tinggi alel resistensi telah terdeteksi pada populasi alami dari An. gambiae (Niare et al., 2002). Dalam
laboratorium, setidaknya dua garis bawaan genetik miliki telah dipilih, yang tahan terhadap parasit
malaria infeksi, tergantung pada spesies Plasmodium. Itu L3-5 strain An. gambiae melanizes P.
berghei dan strain allopatric dari P. falciparum ookinetes muncul dari epitel midgut (Collins et al.,
1986), dan di strain SUAF2 dari An. gambiae, P. gallinaceum ookinet dilisiskan saat melintasi epitel
midgut (Vernick et al., 1995). Namun, sejauh ini mekanisme yang mendasari mengarah ke melanisasi
dan / atau lisis intraseluler parasit Plasmodium buruk dimengerti. Studi bukti prinsip telah
menunjukkan target tersebut manipulasi vektor proteome dapat menyebabkan refrakter dengan
mengganggu berbagai titik Plasmodium siklus transmisi. Ketentuan diet dari substrat nitrat oksida
sintase (NOS) tambahan berkurang prevalensi infeksi oocyst P. falciparum di Indonesia Sebuah.
gambiae sebesar 28%, menunjukkan bahwa NOS nyamuk aktivitas adalah faktor pembatas untuk
pengembangan parasit (Luckhart et al., 1998). Invasi kelenjar ludah itu berhasil terputus oleh
ekspresi sementara dari antibodi monoklonal rantai tunggal diarahkan melawan protein
circumsporozoite P. gallinaceum di Aedes aegypti (de Lara Capurro et al., 2000). Ekspresi dari protein
heterolog seperti racun lebah fosfolipase atau peptida sintetis, SM1, dalam transgenik An. stephensi
mengurangi jumlah pengembangan P. berghei ookista hingga 20% (Ito et al., 2002; Moreira et al.,
2002). Kedua molekul tersebut dianggap mengganggu pengikatan parasit ke membran plasma sel
epitel midgut sehingga mencegah melewati epitel. Mengembangkan P. berghei jumlah ookista juga
berkurang secara signifikan ketika suatu transgen cecropin endogen w

3. Imunitas nyamuk: pendekatan genomik komparatif

Banyak pengetahuan kita saat ini tentang kebal serangga sistem dibentuk oleh studi genetik yang
kuat di Drosophila melanogaster, dan dengan data diperoleh dari a beberapa spesies Lepidopteran,
seperti Manduca sexta (untuk ulasan lihat Kanost et al., 2004), di mana ukuran besar hewan
membuat studi biokimia layak. Bakteri dan infeksi jamur dilindungi menggunakan wellconserved
sistem kekebalan tubuh bawaan (Hoffmann dan Reichhart, 2002), yang bergantung pada seluler dan
humoral reaksi. Secara konseptual, reaksi imun humoral dapat dibagi menjadi empat langkah: (1)
pengakuan molekul mikroba (‘‘ yang menular tanpa infeksi diri), (2) modulasi, mengarah ke
amplifikasi dan penyebaran inisial sinyal pengenalan, (3) aktivasi rangkaian beragam molekul efektor
di antaranya peptida antimikroba dan kaskade melanisasi, dan (4) pengisian kembali molekul yang
berhubungan dengan kekebalan melalui aktivasi sinyal jalur transduksi seperti jalur Tol dan Imd
(Lihat di bawah). Respons seluler seperti fagositosis, enkapsulasi seluler dan induksi apoptosis bisa
juga diprakarsai oleh interaksi serangga-mikroba. Di Drosophila, beberapa kelas protein telah
diidentifikasi penting untuk proses ini (lihat di bawah). Dengan selesainya An. genom gambiae
urutan, analisis genom komparatif diperbolehkan deskripsi dari keluarga protein yang sesuai dalam
nyamuk (Christophides et al., 2002) dan diidentifikasi 242 gen yang berpotensi mengkode komponen
sistem kekebalan tubuh bawaan nyamuk. Analisis fungsional dari gen-gen ini sedang berlangsung.

4. Pengakuan

Reaksi kekebalan tubuh dimulai dengan pengenalan patogen potensial melalui beberapa kelas
molekul mampu pengakuan non-diri (Janeway dan Medzhitov, 2002). Pengakuan mikroba diduga
terjadi melalui pola molekuler terkait patogen yang dilestarikan (PAMP) dalam molekul yang absen
dari yang lebih tinggi organisme tetapi penting untuk fisiologi mikroba. Contohnya PAMP tersebut
adalah peptidoglikan, b-1,3 glukan, dan lipopolysacharides (LPS), yang merupakan komponen dari
dinding dan membran sel mikroba. Sifat dari molekul yang dikenali di permukaan Parasit
plasmodium masih harus diidentifikasi. PAMP dianggap dikenali oleh pengenalan pola host reseptor
(PRR) yang dapat diikat sel atau beredar di hemolymph. Beberapa kelas PRR potensial miliki telah
ditemukan dalam genom An. gambiae, termasuk protein pengenal peptidoglikan (PGRP),
Gramnegatif (Gram) protein pengikat (GNBPs), Thioester mengandung protein (TEP), reseptor
pemulung (SCR), Lektin tipe-C (CTLs), lektin pengikat galaktosida (GALE), dan immunolectins domain
seperti fibrinogen (FBNs) (Christophides et al., 2002; Zdobnov et al., 2002). Ulasan terbaru
memberikan tinjauan komprehensif PRR pada serangga (Christophides et al., 2004; Osta et al.,
2004b); di sini kita akan fokus pada PGRP, TEP dan CTLs, di mana kemajuan terbaru telah dicapai
memahami peran mereka masing-masing dalam Anopheles kekebalan bawaan. PGRP awalnya
diisolasi dari hemolymph dari Bombyx mori karena kemampuan mereka untuk mengikat
peptidoglikan dengan afinitas tinggi (Yoshida et al., 1996), dan homolog kemudian ditemukan pada a
berbagai spesies. Empat gen PGRP dijelaskan dalam genom manusia, sedangkan 13 dapat ditemukan
di D. melanogaster dan tujuh di An. gambiae (untuk ulasan lihat Dziarski, 2004). Dalam beberapa
spesies serangga, SDGT adalah terlibat dalam sintesis antimikroba peptida melalui aktivasi Toll
(Michel et al., 2001) dan Imd jalur transduksi sinyal (Choe et al., 2002; Gottar et al., 2002; Ramet et
al., 2002), dalam melanisasi melalui aktivasi kaskade PPO (Lee et al., 2004; Yoshida et al., 1996), dan
dalam fagositosis bakteri Gram (Ramet et al., 2002). Selain itu, beberapa PGRP adalah diyakini
bertindak sebagai pemulung, karena mengandung tengahase aktivitas, dan karenanya secara
enzimatik dapat membelah peptidoglikan (Mellroth et al., 2003). PGRP dapat dibagi menjadi dua
subclass: PGRP bentuk panjang bersifat intraseluleratau transmembran, sementara bentuk pendek
berada ekstraseluler. Genom Anopheles mengkodekan tiga PGRP bentuk pendek dan empat bentuk
panjang. Seperti di D. melanogaster, beberapa gen ini bersifat alternatif disambung. Ekspresi dan
penyambungan alternatif dari An. PGRP gambiae dipengaruhi oleh kekebalan tubuh yang berbeda
pemilih (Christophides et al., 2002) dan pemodelan protein berdasarkan homologi untuk Drosophila
PGRP-LB (Kim et al., 2003) menunjukkan perbedaan dalam dugaan daerah mengikat peptidoglikan
antara sambungan alternatif isoform (S. Meister dan G. Christophides et al., tidak dipublikasikan).
Seperti di Drosophila, Anopheles PGRPs tampak berfungsi dalam pensinyalan kekebalan setelah
tantangan bakteri, dan berdasarkan analisis urutan beberapa anggota keluarga ini kemungkinan
telah mempertahankan aktivitasengahnya (S. Meister dan G. Christophides, tidak dipublikasikan).
Satu anggota keluarga, PGRP-LC, sama seperti di Drosophila, mungkin terlibat dalam fagositosis
Esche

LEMBAR 4 termasuk faktor komplemen vertebrata, a2-makroglobulin

dan TEP serangga, yang memainkan peran penting

dalam kekebalan bawaan. Protein ini dicirikan oleh

motif urutan pendek (motif thioester) yang membentuk sebuah

ikatan yang sangat reaktif intra-rantai, tidak stabil

biasanya terkubur di dalam struktur protein untuk mencegah

inaktivasi dini sebelum waktunya. Pembelahan proteinolitik

protein menyebabkan perubahan konformasi dan paparan

ikatan thioester, yang memediasi pengikatan

molekul ke permukaan target terdekat (dalam kasus

faktor komplemen) atau spektrum protease yang luas (dalam

kasus a2-makroglobulin).
Pada serangga, gen TEP telah diuraikan dalam Drosophila

(Lagueux et al., 2000) dan Anopheles (Levashina et

al., 2001; Oduol et al., 2000). Enam gen TEP ditemukan

dalam genom D. melanogaster, di antaranya dTep1, 2 dan

4 diatur naik setelah tantangan bakteri dalam larva dan

tahap dewasa, dan dTep1 diinduksi di bawah kendali

jalur transduksi sinyal JAK / STAT (Lagueux

et al., 2000). Dengan selesainya An. gambiae

proyek sekuensing gen 15 gen TEP diidentifikasi

pada nyamuk ini, dengan sebagian besar gen dihasilkan

dari duplikasi ulang berurutan dalam nyamuk

garis keturunan. Sampai saat ini, beberapa gen TEP Anopheles

telah terbukti diregulasi setelah bakteri dan /

atau infeksi P. berghei (Blandin et al., 2004; Christophides

et al., 2002; Levashina et al., 2001, Oduol et al.,

2000). TEP1 terbukti mengikat ke permukaan Gram +

dan bakteri Gram dan ikatan lebih kuat ketika

ikatan thioester masih utuh. Yang penting, TEP1 beroperasi

Bakteri Gram dan Gram + untuk fagositosis dan

karena itu menyerupai fungsi komplemen vertebrata di

serangga ini (Levashina et al., 2001, Moita, tidak dipublikasikan).

Gen TEP nyamuk lain yang awalnya disebut AgIMcr14

dan kemudian berganti nama menjadi TEP4, sebagian

diklon dari perpustakaan cDNA An. gambiae, yang

diperkaya untuk pesan yang diregulasi setelahnya

tantangan bakteri (Oduol et al., 2000). Baru-baru ini, TEP1

terbukti mengikat ke permukaan ookinet P. berghei

dan mempromosikan pembunuhan parasit dengan lisis di basal

labirin epitel midgut (Blandin et al.,

2004). Ini adalah laporan pertama dari PRR yang diduga itu

memang bisa mengurangi An. kerentanan gambiae terhadap

Infeksi Plasmodium.

CTL adalah protein ekstraseluler atau membran-terikat

yang mengikat gula dengan cara Ca2 + -dependent dan

berfungsi dalam pergantian glikoprotein, adhesi sel-sel dan

respon imun bawaan (Drickamer dan Taylor, 1993).

Pengikatan gula dimediasi oleh ca. 130 residu panjang

domain pengenalan karbohidrat. CTL serangga adalah

diisolasi dari hemolymph of kecoak (Chen et

al., 1993; Jomori et al., 1990) dan lepidopteran

(Koizumi et al., 1997; Yu et al., 1999) dan telah

terbukti berfungsi dalam respon imun bawaan terhadap

bakteri dengan mempromosikan fagositosis, nodul hemosit

pembentukan dan aktivasi prophenoloxidase (untuk

ulasan lihat Yu et al., 2002). Banyak gen CTL miliki

juga telah dijelaskan dalam genom D. melanogaster

dan An. gambiae (34 dan 22, masing-masing) dan ditugaskan

ke tujuh kelompok berdasarkan kesamaan urutan (Christophides

et al., 2002; Dimopoulos et al., 2000; Theopold et

al., 1999). Baru-baru ini, knockdown berbasis dua RNAi

CTLs, CTL4 dan CTLMA2 menghasilkan efek yang mencolok pada

Pengembangan P. berghei (Osta et al., 2004a). Membungkam

CTL4 menyebabkan melanisasi ookinet yang menyerang dan

dengan demikian mengurangi jumlah ookista berkembang sebesar 97%.

Fenotip knockdown CTLMA2 mirip dengan

bahwa CTL4, meskipun kurang mencolok, mengurangi ookista

angka dengan melanisasi 48% dari ookinet. Di

kedua kasus, jumlah keseluruhan parasit yang dimiliki

menembus epitel midgut tidak signifikan

terpengaruh. Kedua CTL ini adalah pelindung pertama

molekul untuk pengembangan Plasmodium harus dijelaskan

dalam vektor nyamuk. Kekhususan mengikat mereka dan

cara molekul-molekul ini mencegah pembunuhan parasit

di An rentan. gambiae saat ini berada di bawah

penyelidikan.

5. Modulasi

Kaskade proteolitik, terdiri dari aktivasi serial

serine protease, dianggap melakukan peran sentral dalam

respon imun bawaan, memperkuat patogen yang signifikan

sinyal invasi dengan demikian mengaktifkan berbagai jalur

serangan terhadap mikroorganisme yang menyerang. Dalam arthopod,

mereka mengandung anggota keluarga serin

protease yang dapat diidentifikasi oleh terminal-N mereka

CLIP domain (CLIPs). Fungsi dari domain ini adalah

tidak diketahui, tetapi dapat memediasi interaksi protein-protein

dan karena itu berperan dalam pembentukan kompleks.

Contoh kaskade semacam itu di arthropoda adalah

sistem koagulasi pada kepiting tapal kuda yang mengarah ke

pembentukan gumpalan koagulin (Iwanaga dan Kawabata,

1998), inisiasi jalur transduksi sinyal Tol

(Ligoxygakis et al., 2002a), dan aktivasi fenoloksidase

(PO) dengan pembelahan zymogen proPO (PPO) mereka

mengarah ke melanisasi (Ashida, 1971; Soderhall

dan Cerenius, 1998; Cerenius dan Soderhall, 2004). Itu

yang terakhir adalah

Drosophila, atau di An. gambiae sembarang CLIP

Protease telah terbukti terlibat langsung dalam

kaskade aktivasi PPO.

Genom D. melanogaster dan An. gambiae

menyandikan 35 dan 41 CLIP, masing-masing, yang bisa

dibagi menjadi empat sub-keluarga (A – D) berdasarkan

karakteristik urutan (Christophides et al., 2002).

Subfamili A mengandung homolog CLIP serine protease

dan anggota subfamili B paling mirip dengan yang diketahui

PAP dari Lepidoptera. Namun, analisis phologologis

tidak mengungkapkan ortolog Anopheles yang jelas

baik Persephone, protease serin dari D. melanogaster

terlibat dalam aktivasi jalur tol

(Ligoxygakis et al., 2002a), atau PAP yang dikenal.

Profil ekspresi beberapa An. KLIP gambiae

telah terbukti terpengaruh oleh infeksi, menunjukkan

peran mereka yang mungkin dalam modulasi kekebalan tubuh

reaksi pada spesies ini. CLIPA1, 6 dan 7 (Christophides

et al., 2002; Oduol et al., 2000) serta CLIPB

1, 4, 9 (Gorman et al., 2000; Paskewitz et al., 1999) adalah

ditemukan diatur ulang setelah tantangan bakteri. P.

infeksi berghei meningkatkan level transkrip CLIPB1

dan 4 (Gorman et al., 2000), serta dari CLIPB14 dan

15, sedangkan CLIPA6 diatur ke bawah (Christophides

et al., 2004). Analisis fungsional awal untuk

CLIPB14 dan 15 menunjukkan bahwa kedua serin ini

protease berperan dalam respons melanisasi dan

adalah faktor yang mempengaruhi kapasitas vektor An.

gambiae untuk P. berghei (J. Volz dan H.M. Mueller,

tidak dipublikasikan).

Karena pembesaran kekebalan yang dramatis

sinyal oleh kaskade proteolitik tidak mengherankan bahwa

serine protease inhibitor yang terkait dengan kekebalan ini

jalur memiliki peran penting. Inhibitor ini mengontrol

memicu kaskade dan mengatur

penyebaran sinyal setelah kaskade diaktifkan. Di

Setidaknya 23 keluarga berbeda dari protease inhibitor serin

dikenal (Patston, 2000), dan beberapa telah ditemukan

pada serangga. Di antaranya adalah Kazal, Kunitz, alphamacroglobulin,

dan keluarga serpin (Kanost, 1999).

Serpin adalah keluarga serine protease yang sangat besar

inhibitor yang ditemukan pada semua eukariota yang lebih tinggi

serta virus dan memiliki berbagai macam biologis

fungsi (Irving et al., 2000). Ular secara struktural

substrat bunuh diri yang dilestarikan dan dapat memiliki intra juga

sebagai lokasi ekstraseluler. Fungsi penghambatan mereka dan

spesifisitas substrat dimediasi oleh situs reaktif

loop (RSL) yang terletak 30-40 residu dari Cterminal

akhir (Potempa et al., 1994).

Ular telah diidentifikasi dalam tiga kelompok

arthropoda: serangga, udang karang dan kepiting tapal kuda

(Kanost, 1999), dan beberapa di antaranya telah

terlibat dalam respon imun. Di kepiting tapal kuda,

tiga ular dilepaskan ke dalam hemolymph

infeksi bakteri dan mengatur protease serin di dalam

kaskade koagulasi (Iwanaga dan Kawabata, 1998;

Iwanaga et al., 1998). Sekitar 30 gen serpin telah ditemukan

diidentifikasi dalam genom D. melanogaster (Irving et al.,

2000), di mana beberapa telah terlibat dalam host

pertahanan. Tidak adanya serpin penghambatan Spn43Ac di

D. mutan melanogaster necrotic (nec) mengarah ke

ekspresi konstitutif dari drosomycin peptida antijamur,

dan serpin ini karena itu secara negatif mengatur

Jalur pensinyalan tol (lihat di bawah, Levashina et al.,

1999). Fenotip nec pleiotropik, termasuk spontan

melanisasi, nekrosis seluler, dan kematian pada awal

dewasa, menunjukkan bahwa Spn43Ac kemungkinan besar bertindak dalam

beberapa kaskade proteolitik (Green et al., 2000). Nec

fenotip diselamatkan dalam persephone (psh) / nec ganda

null strain mutan, menunjukkan bahwa Psh CLIP serine

protease adalah target langsung dari Spn43Ac atau bertindak

lebih jauh ke hilir dalam kaskade proteolitik yang mengarah

untuk aktivasi jalur Tol (Ligoxygakis et al.,

2002a).

Selama beberapa tahun terakhir beberapa ular telah

ditunjukkan untuk mengatur kaskade aktivasi PPO, oleh

secara langsung menghambat WTP. Serpin pertama dengan ini

Fungsi dijelaskan dalam cacing web musim gugur, Hyphantria

cunea (Park et al., 2000). Sejak itu, fungsional

homolog telah dikarakterisasi dalam D. melanogaster

[Spn27A, (De Gregorio et al., 2002a; Ligoxygakis et al.,

2002b)] dan dalam M. sexta [serpin 3, (Zhu et al., 2003)].

Menariknya, di Manduca, dua ular tambahan (1J

dan 6) terbukti menghambat PAP yang diketahui dari ini

spesies dengan berbagai spesifisitas (Jiang et al., 2003;

Wang dan Jiang, 2004). Dalam An. gambiae, tiga gen

(SPRN1, 2 dan 3) membentuk kelompok ortolog dengan

Spn27A. Analisis genetik terbalik mengungkapkan bahwa SRPN2

kemungkinan merupakan homolog Spn27A fungsional dalam

nyamuk, karena pembungkamannya menyebabkan melanisasi spontan.

Penipisan SRPN2 dari hemolimf juga

secara negatif mempengaruhi kompetensi vektor terhadap P. berghei

infeksi, dengan sangat mengurangi jumlah yang berkembang

ookista (K. Michel, tidak dipublikasikan). An. gambiae

Gen SRPN10 mengkodekan empat isoform intraseluler yang berbeda,

KRAL, RCM, FCM, dan CAM (Danielli et al.,

2003).