Tahapan-Tahapan Kultur Jaringan

Tahapan-tahapan kultur jaringan meliputi tahapan persiapan dan sterilisasi eksplan, inokulasi, subkultur,
serta aklimatisasi.
1. Tahapan Persiapan dan Sterilisasi
Pada tahap ini dilakukan pembuatan medium tanam dan sterilisasi alat. Medium tanam berupa
medium agar-agar yang diberi tambahan unsur makro dan mikro, asam amino, vitamin, gula, serta hormon
pengatur tumbuh. Medium harus disterilkan menggunakan uap panas bersuhu 140°C dan bertekanan
1 atm dengan waktu yang telah ditentukan agar aseptis. Alat yang digunakan untuk sterilisasi medium
dan peralatan disebut autoklaf. Selanjutnya, dilakukan pengambilan eksplan dari tanaman yang sehat.
2. Tahapan Inokulasi
Pada tahap ini dilakukan penanaman eksplan dalam ruangan tertutup dan telah disterilkan. Ruang
penanaman dapat berupa entkas (ruangan tertutup dan terbuat dari kaca) atau Laminar Air Flow (LAF).
Ruang penanaman harus disterilkan dahulu menggunakan alkohol atau formalin. Demikian pula peralatan
untuk menanam seperti pinset dan dissecting set juga harus disterilkan dengan cara mencelupkannya
pada alkohol 90%, lalu dipanaskan sebelum digunakan. Selanjutnya, eksplan disterilkan menggunakan
larutan hipoklorit dan dipotong-potong kecil kemudian diinokulasi dalam medium tanam. Eksplan dalam
medium kultur ini kemudian dipelihara di dalam ruangan aseptis yang terkontrol lingkungan fisiknya.
3. Tahapan Subkultur
Setelah terbentuk calon tumbuhan (akar/tunas) dilakukan
pemindahan ke medium yang baru. Komposisi hormon dalam medium
tanam yang baru biasanya berbeda dengan komposisi hormon pada
medium yang digunakan sebelumnya. Hasil kultur dapat berupa tunas atau
kalus. Kalus adalah massa sel yang tidak terdiferensiasi. Selanjutnya, kalus
dipindahkan ke dalam medium yang diberi hormon auksin dan hormon
sitokinin yang seimbang. Kalus akan berdiferensiasi membentuk organ
tumbuhan sehingga individu baru terbentuk.
4. Tahapan Aklimatisasi
Plantlet hasil kultur jaringan
Bibit tanaman yang dihasilkan dari teknik kultur jaringan berupa Gambar Sumber: https://bit.ly/38nMsIz, diunduh 8
tumbuhan berukuran kecil yang disebut plantlet. Plantlet harus Maret 2021
diaklimatisasi sebelum dipindahkan ke lahan tanam. Aklimatisasi
dilakukan agar plantlet beradaptasi dengan lingkungan yang baru. Plantlet ditanam dalam polybag dan
diletakkan di tempat yang teduh. Seiring dengan pertumbuhannya, intensitas cahaya yang mengenai
tanaman hasil kultur ditambah.
Semua peralatan dan kegiatan yang dilakukan dalam kultur jaringan harus aseptis agar bagian tanaman
yang ditumbuhkan dengan kultur jaringan dapat tumbuh menjadi individu baru. Jika tidak steril akan
terjadi kontaminasi oleh bakteri, jamur, atau virus yang dapat mengakibatkan eksplan menjadi rusak.
 Keberhasilan kultur jaringan ditentukan oleh beberapa faktor berikut.
1. Eksplan yang digunakan, meliputi jenis tanaman, jenis jaringan, ukuran eksplan, kondisi tanaman
induk, dan genetik eksplan.
2. Perbandingan komposisi senyawa kimia dalam medium tanam.
3. Kondisi lingkungan, misal cahaya, suhu, kelembapan, pH, dan kepadatan medium.
4. Kondisi kultur dan lingkungan yang steril.
Tumbuhan dewasa Potongan
melintang
wortel

Dipindahkan ke
medium tanah Akar dan Area
batang pengambil
berkembang sel (kalus)
dalam 4–8
minggu
Dipindahkan
ke medium
pertumbuhan
(subkultur) Kalus dimasukkan
Kalus 4–6 minggu ke cawan petri

Gambar Tahapan-tahapan teknik kultur jaringan

Sumber: https://bit.ly/3t2mr9L, diunduh 8 Maret 2021