TUGAS

PEMISAHAN DAN PEMURNIAN

Dosen Pengampu:
Dr. apt. Iswandi S.Si., M.Farm

Oleh :
Yuliana Imelda Putrivenn
202020312R

PROGRAM STUDI PASCA SARJANA FARMASI SAINS

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SETIA BUDI
SURAKARTA
2021
 Review Jurnal

- Membandingkan 2 Metode Pemisahan (LLE & SFE) -

Judul Sequential Green Extraction of Caffeine and Catechins from Green Tea.
Jurnal International Journal of Secondary Metabolite
Vol. & Hlm. Vol. 6, No. 3, 283–291
Tahun 2019
Penulis Gönül Serdar, Ezgi Demir, Münevver Sökmen
Reviewer Yuliana Imelda Putrivenn
Tanggal 20 Februari 2022

Persiapan Bahan
Sampel teh hijau dikumpulkan pada tiga periode pengumpulan (pengumpulan pertama, kedua dan
ketiga) dari waktu, tahun dan lokasi yang sama. Sampel teh setelah pengumpulan diekstraksi
langsung (segar), diekstraksi setelah pengeringan beku (freeze) atau diekstraksi setelah sampel
dikeringkan (kering).
Microwave Assisted Extraction
Awalnya, bahan-bahan teh diekstraksi menggunakan sistem ekstraksi berbantuan gelombang mikro
tertutup. Waktu ekstraksi dan daya gelombang mikro dari parameter MAE dapat mempengaruhi
kinerja ekstraksi. 10 g sampel teh dan 200 ml larutan etanol-air (1:1 v/v) ditempatkan dalam bejana
ekstraksi. Ekstraksi dilakukan pada suhu 80oC terkendali, daya gelombang mikro 600 W selama 4
menit waktu penyinaran. Infus teh berair itu dibagi menjadi dua porsi. Bagian pertama digunakan
untuk pemisahan cair-cair dan bagian kedua dikeringkan beku. Setelah proses pengeringan, vas padat
yang tersisa digunakan untuk percobaan SFE. Prosedur yang sama diulang sebanyak tiga kali dan
data dihitung dari hasil ulangan.
Metode Ekstraksi
Liquid-liquid Extraction Supercritical Fluid Extraction
Prosedur Prosedur
Setelah selesai MAE diperoleh infus teh berair Ekstrak kering beku yang diperoleh dari MAE
disaring dan filtrat awalnya dipartisi dengan digunakan dalam metode SFE. Infus teh berair
kloroform untuk menghilangkan kafein. 50 mL benar-benar dikeringkan dengan pengeringan
kloroform digunakan untuk mengekstrak kafein beku. Ekstraksi kafein dilakukan dengan SFE
(diulang tiga kali). Kemudian pemisahan kafein pada suhu 60°C, 10-30 MPa selama 3 jam.
fase air diekstraksi kembali dengan etil asetat Kemudian pemisahan kafein sisa padat terutama
mengikuti prosedur yang sama. Filtrat mengandung katekin. Hasil ekstrak kafein
dipekatkan dengan rotary evaporator di bawah dihitung dan kemurnian/komposisi ekstrak
tekanan tereduksi pada 55°C setelah fase etil dinyatakan dengan analisis HPLC.
asetat dan kloroform disaring. Hasil ekstrak
dihitung menurut rumus ini; Hasil
Metode SFE diuji hanya untuk sampel teh kering.
Ekstraksi kafein dan katekin dari sampel teh
Hasil kafein dan katekin dihitung setelah proses secara superkritis adalah metode yang efektif
dan kemurnian/kombinasi ekstrak ditentukan untuk mengekstraksi kafein pertama kali dengan
dengan HPLC. menjalankan instrumen selama 3 jam
 Hasil menggunakan cairan superkritis SFE (25 MPa dan
60oC). Selain itu, 3 jam lagi diperlukan untuk
mengekstrak katekin di bawah situasi yang sama,
menggunakan etanol sebagai pengubah pada laju
aliran 0,5 mL/menit. Jadi, setidaknya 6 jam
periode ekstraksi diperlukan untuk keberhasilan
ekstraksi komponen teh. Namun, MAE dicapai
hanya dalam 4 menit dan pemisahan kafein dari
katekin terpenuhi dalam waktu 3 jam. Hasil
ekstrak kafein yang diperoleh dengan SFE pada
Gambar 1. Kandungan kafein dari daun teh hijau kering, segar tekanan yang berbeda diberikan pada Gambar 3.
dan beku pada periode pengumpulan pertama, kedua dan ketiga.

Hasil rata-rata kafein bervariasi antara 0,51%

dan 3,68%. Hasil ekstrak kafein tertinggi
diperoleh dari sampel kering koleksi pertama.
Hal ini diharapkan karena sampel kering
mengandung jumlah biomolekul yang lebih
tinggi. Hampir 60-70 persen kandungan air daun
teh hilang selama proses pengeringan. Koleksi
pertama memberikan jumlah kafein yang lebih
tinggi. Hasil ekstrak katekin diberikan pada Gambar 3. Hasil Kafein dari daun teh hijau kering, segar dan beku
setelah MAE (I. Periode Koleksi, 60oC dan 3 jam).
Gambar 2. Demikian pula sampel kering periode
pengumpulan pertama memberikan hasil ekstrak
tertinggi. Secara bertahap menurun pada periode Jelas bahwa tekanan tinggi diperlukan untuk
pengumpulan kedua dan ketiga. memisahkan kafein dari campuran dan 25 MPa
memberikan hasil kafein tertinggi (3,68%) yang
sama dengan jumlah kafein yang dipisahkan
dengan ekstraksi cair-cair. Ini adalah bukti yang
cukup kuat bahwa SFE mampu memisahkan
semua kandungan kafein dari campurannya. MAE
dapat digunakan untuk ekstraksi total komponen
teh kemudian mengikuti langkah ini SFE dapat
digunakan sebagai metode ekstraksi hijau yang
Gambar 2. Kandungan katekin total daun teh hijau kering, segar
efektif untuk pemisahan kafein dari katekin yang
dan beku pada periode pengumpulan pertama, kedua dan ketiga. efektif.
Kuantifikasi Kafein dan Katekin
Prosedur
Analisis HPLC dilakukan untuk menentukan jumlah masing-masing katekin dalam campuran dan
kemurnian fase yang dibedakan. Instrumen yang digunakan dalam pekerjaan ini adalah sistem HPLC
dengan panjang gelombang 278 nm. Pelarut A (air) dan B (campuran DMF metanol-asam asetat,
20:1:0.5) dijalankan dengan 86% A selama 13 menit. Setelah itu, volumenya diturunkan menjadi
64% dalam 15 menit berikutnya dan kembali ke konsentrasi awal selama 6 menit. Konsentrasi
masing-masing katekin diukur dengan daerah puncaknya terhadap standar yang dibuat dari senyawa
asli.
 Hasil
Konsentrasi kafein dan katekin dari ekstrak diidentifikasi dengan HPLC fase terbalik. Standar katekin
adalah katekin (C), epikatekin (EC), epigallocatechin (EGC) dan epigallocatechin gallate (EGCG).
Kromatogram campuran standar diberikan pada Gambar 4.

Gambar 4. Kromatogram standar kafein dan katekin. Waktu retensi adalah sebagai berikut; kafein 11.18; EGC 13.34; C 16.44; EC
20.60; EGCG 22,03 menit. Volume injeksi adalah 20 L.

Gambar 5. Kromatogram HPLC ekstrak kafein dan katekin yang diperoleh dengan ekstraksi cair-cair (a dan c) dan SFE (b dan d, 25
MPa, 60oC, 3 jam) dari sampel teh hijau kering yang awalnya diekstraksi dengan MAE.
 Identifikasi kafein dan katekin diwujudkan dengan mencocokkan waktu retensi mereka dengan
standar yang bersangkutan dan jumlah komponen individu dihitung dari kromatogram ini. Metode
SFE yang dikembangkan dibandingkan dengan metode ekstraksi cair cair. Kemurnian ekstrak kafein
yang diperoleh dari kedua metode diberikan pada Gambar 5 (a dan b). Jelas bahwa kafein berhasil
dikeluarkan dari campuran dan ekstrak kafein murni sebanyak yang diperoleh dengan ekstraksi cair-
cair. Komposisi ekstrak katekin yang diperoleh dari ekstrak teh infus dengan etil asetat diberikan
pada Gambar 5c. Demikian pula, komposisi ekstrak katekin (residu setelah pemisahan kafein dengan
SFE) juga ditentukan dan diberikan pada Gambar 5d. Kemurnian dan kombinasi kedua ekstrak
benar-benar sama. Analisis kuantitatif setiap konstituen cateshin ditentukan dari kromatogram HPLC.
Jumlah konstituen katekin diberikan pada Gambar 6.

Gambar 6. Jumlah masing-masing cateshin dari kering, segar dan beku menggunakan SFE setelah MAE.

Banyak metode telah dilakukan untuk ekstraksi dan pemisahan katekin seperti ekstraksi berbantuan
gelombang mikro, maserasi, ekstraksi karbon dioksida superkritis. MAE adalah metode ekstraksi
yang ekonomis dan cepat, yang efektif memisahkan kafein dan katekin dari teh hijau. Ekstraksi
kafein dan katekin cukup berhasil dengan ekstraksi bantuan gelombang mikro setelah pemisahan
efektif dengan SFE. Untuk mengatasi penggunaan pelarut organik yang berbahaya, SFE dapat
menjadi metode yang potensial untuk mengisolasi katekin dari daun teh. Pencarian lebih lanjut
berguna untuk mengembangkan metode baru atau metode saat ini untuk melampaui batasan proses.
Katekin teh terutama EGC dan EGCG dapat dipisahkan dari teh hijau kering, segar atau beku
menggunakan pelarut hijau dan teknologi hijau dalam periode proses yang luar biasa.