ISOLASI KAFEIN DARI TEH HITAM (Camellia sinensis) SIAP SEDUH MERK X

DENGAN ANALISA KUALITATIF SECARA KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

(KLT) DAN SPEKTROFOTOMETER UV-VIS

Abi Aufa1, Afina2, Ajeng Purwaningsih3, Alvin Muthoharoh4, Ana Kartika5 Anizatun
Azizah6
Email : avina6079@gmail.com
1-6
Program Studi S1 Farmasi Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Bhakti Mandala Husada Slawi,
Jl. Cut Nyak Dhien No.16 Kalisapu, Slawi, Kabupaten Tegal Telp/Fax (0283) 6197570

ABSTRAK

Telah dilakukan ekstraksi dengan metode refluks pada teh hitam (Camellia sinensia) dan dilanjutkan dengan
isolasi kafein dengan metode mikrosublimasi, hasil kristal isolasi dilakukan identifikasi senyawa kafein dengan
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan Spektrofotometri Uv-Vis. Hasil isolasi berupa kristal berwarna putih diuji
kualitatif dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT) menggunakan fase gerak kloroform:etanol (99:1). Hasil
uji kualitatif kromatografi lapis tipis (KLT) positif mengandung senyawa kafein terlihat dari bercak berpedar biru
yang nampak pada panjang gelombang 254 nm, kristal hasil isolasi diperoleh nilai Rf 0,225 dan HRf 22,5 sejajar
dengan bercak kafein standar dengan nilai Rf 0,237 dan HRf 23,7 sedangkan nilai HRx 94,9. Pada uji kualitatif
menggunakan spektrofotometer Uv-Vis didapat 2 peak yang menandakan masih adanya senyawa lain yang
terkandung dalam kristal hasil isolasi yang dihasilkan. Panjang gelombang maksimal kristal hasil isolasi pada
spektrofotometer Uv-Vis sebesar 273,0 nm dan 206,8 nm sedangkan panjang gelombang maksimal standar kafein
273,5 yang menandakan bahwa kristal hasil isolasi terdapat senyawa kafein.

Kata Kunci : kafein, daun teh hitam, KLT, spektofotomteri Uv-Vis.

1. Pendahuluan Di zaman dahulu, genus Camellia

Kafein merupakan metabolit sekunder dibedakan menjadi beberapa spesies teh yaitu
golongan alkaloid yang terdapat secara alami sinensis, assamica, irrawadiensis. Sejak tahun
pada kopi, teh dan coklat. Selain terdapat secara 1958 semua teh dikenal sebagai suatu spesies
alami, kafein juga sering ditambahkan kedalam tunggal Camellia sinensis dengan beberapa
beberapa minuman berenergi serta beberapa varietas khusus, yaitu sinensis, assamica dan
obat-obatan. Kafein memiliki nama lain kafein, irrawadiensis. Menurut Graham HN (1984);
tein, dan 1,3,7-trimethylxanthine. Kafein sangat Van Steenis CGGJ (1987) dan Tjitrosoepomo G
larut didalam air panas, larut sedikit didalam (1989), tanaman teh Camellia sinensis
aseton dan air dingin serta sangat larut di dalam O.K.Var.assamica (Mast) diklasifikasikan
dietil eter. Ekastraksi dan Isolasi kafein pertama sebagai berikut :
sekali dilakukan tahun 1819 oleh kimiawan Divisi : Spermatophyta
Jerman Feriedrich Ferdinand Runge (Soraya, Sub Divisi : Angiospermae
2008). Kelas : Dicotyledoneae
Penelitian-penelitian relevan mengenai Sub Kelas : Dialypetalae
isolasi dan identifikasi kadar kafein diantaranya Ordo : Guttiferales
penelitian oleh Raharjo (2010) penentuan kadar Familia : Camelliaceae
kafein dalam kopi dengan cara mengisolasi Genus : Camellia
kafein, diperoleh kristal kafein sebanyak 2%. Spesies : Camellia sinensis
Nesyanti (2006) meneliti kadar kafein pada Varietas : Assamica
minuman suplemen sebesar 335,99 ppm dan
kadar kafein pada ekstrak teh sebesar 1,91% Teh Hitam (Black Tea, Theae Nigra
menggunakan metode KCKT. Soraya (2008) Folium, Schwarzer Tee) di dapat dari hasil
Rendemen kafein sebanyak 1,9% diperoleh dari peragian daun muda Camellia sinensis (L). Teh
limbah Teh Hitam CTC Jenis Powder diisolasi berasal dari pegunungan sebelah tenggara asia,
menggunkan ekstraksi bertahap menggunakan sekarang dibudidayakan di hampir semua
air dan pelarut organik. negara di daerah lintang utara antara 30 dan
40. Tergantung dari asalnya teh hasil
fermentasi mengandung kafein 1-5%(min 2%
menurut Ph.Gall.8) disamping teobromina dan
teofilina yang kandunganya sangat kecil. Tanin
dan hasil reaksi berwarna gelap (flobafena)
dapat mencapai 25% (Stahl, 1985).
Isolasi kafein dalam percobaan bertujuan
untuk mendapatkan kafein yang berasal dari teh
hitam. Sedangkan identifikasi kristal kafein
dilakukan untuk memastikan apakah benar
kristal yang diperoleh dari hasil isolasi tersebut
merupakan kristal kafein yang dilakukan
identifikasi kualitatif menggunakan
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan
spektrofotometer UV-Vis. Penelitian ini
penting dilakukan sebagai informasi mengenai
kadar kafein dari teh hitam yang selanjutnya
digunakan untuk melihat apakah konsumsi
kafein pada teh hitam ini aman atau tidak untuk
dikonsumsi sesuai standar SNI yang berlaku
sehingga dampak negatif kafein dapat dikurangi.
2. Metode Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium
Bahan Alam Program Studi S1 Farmasi STIKes
Bhakti Mandala Husada Slawi, Tegal.
Penelitian dimulai dengan isolasi kafein dalam
serbuk daun teh hitam, proses kristalisasi dan
dilanjutkan identifikasi dengan metode
kromatografi lapis tipis dan spektrofotometer
UV-Vis.
Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini
antara lain : gelas beker , gelas ukur, corong
kaca, corong pisah, statif dan klem, seperangkat
alat spektrofotometer uv-vis jenis shimadzu
mini 1240, seperangkat alat refluk, lempeng
KLT GF254, penyaring buchner, lampu spirtus,
kaki tiga, asbes, labu ukur, penampak bercak
UV 254, kertas saring, kain flanel putih,
chamber, kapas dan timbangan gram analitik.
Bahan yang digunakan dalam penelitan ini
yaitu aquadest, simplisia serbuk kasar daun teh
hitam, HCl 0,1 N, kloroform, etanol 96%, Pb
asetat dan standar kafein.
Posedur Kerja
Pembuatan ekstrak daun teh hitam
dilakukan dengan metode refluk. Serbuk kasar
simplisia daun teh hitam sebanyak 50 gr
direfluk menggunakan pelarut aquadest
sebanyak 250 mL pada suhu lebih kurang 50⁰C.
Refluk dilakukan selama 30 menit
kemudian disaring menggunakan penyaring
buchner selanjutnya dilakukan penyaringan
kembali sebanyak 3 kali menggunakan kapas.
Filtrat dimasukan kedalam corong pisah dan
ditambah dengan kloroform 15 mL, digojog
sampai gas terbuang habis dan didiamkan
kemudian diambil fase kloroform (bening).
Ditambah koroform kembali sebanyak 10 mL,
digojog dan diambil fase kloroformnya
kemudian diulang penambahan klororform 10
mL sebanyak 2 kali. Selanjutnya dilakukan
penguapan kloroform dan kristalisasi kafein
dengan cara sublimasi yaitu fase kloroform
yang mengadung kafein dimasukkan ke dalam
beaker glass, tutup dengan kertas saring yang
dilubangi bagian tengahnya dan ditutup dengan
corong kaca yang sudah dilapisi kapas basah.
Panaskan dengan api kecil hingga terbentuk
kristal.
Setelah didapat kristal kemudian
dilakukan identifikasi dengan metode KLT,
fase diam menggunakan lempeng silica gel dan
fase gerak yang digunakan yaitu kloroform –
etanol (99 : 1) sebanyak 30 mL. Selanjutnya
yaitu untuk mengetahui kristal yang dihasilkan
sudah murni apa belum maka dilakua uji
pemurnian dengan metode spektrofotometri
UV-Vis.
3. Hasil dan Pembahasan
Isolasi kafein dilakukan untuk
memisahkan atau mendapatkan senyawa kafein
yang terkandung dalam teh hitam. Langkah
awal dalam mengisolasi kafein adalah dengan
cara merefluks sebanyak 50 gram teh hitam
dengan 250 ml aquades. Tujuanya dari reflusk
agar kafein larut kedalam air panas, karena
kelarutan kafein terhadap air panas tinggi.
Proses merefluks teh hitam selama 30 menit
bertujuan agar menghomogenkan teh yang akan
diisolasi. Setelah proses refluks selesai,
dilakukan penyaringan menggunakan corong
buchner agar proses penyaringan filtrat
berlangsung lebih cepat, kemudian dilakukan
penambahan larutan Pb asetat kedalam filtrat
yang masih panas sebanyak 40 ml
menghasilkan larutan coklat pekat dan bau
menyengat. Menurut Raharjo (2010)
Penambahan larutan timbal asetat dalam
keadaan panas-panas secara tetes- pertetes
bertujuan untuk mengendapkan kotoran-
kotoran dari filtrat teh berupa garam- garam
seperti albumin, asam-asam, tannin dan
sebagainya.
 Ketika larutan telah dingin, dilakukan
penyaringan untuk memperoleh filtrat yang
terbentuk. Endapan yang terbentuk berupa
garam-garam dari kotoran-kotoran filtrat teh.
Penyaringan menghasilkan filtrat berwarna
coklat pekat. Proses selanjutnya adalah
melakukan pemisahan senyawa kafein yang
terkandung didalam larutan teh. Pemisahan ini
dilakukan dengan mengunakan corong pisah
yang ditambah dengan 20 ml kloroform,
menghasilkan dua fase yaitu fase atas berwarna
coklat pekat dan fase bawah berwarna cream,
kemudian diambil fase bawah. Di ulang dua
kali kemudian digojog dan didiamkan. Setelah
didiamkan terbentuk tiga fasa, yaitu fasa atas
larutan berwarna coklat, fase tengah berwarna
cream, dan fasa bawah larutan jernih, kemudian
diambil fasa bawah. Selanjutnya diulang
dengan penambahan kloroform 10 mL.
Kloroform dipilih karena kafein sangat larut
dalam kloroform. Menurut Mc Murry (2004)
kafein lebih larut dalam air jika dibandingkan
dengan etanol. Namun, kelarutan kafein lebih
besar didalam klorofom jika dibandingkan
dengan air. Saat proses pemisahan
menggunakan corong pisah berlangsung, tutup
corong pisah harus sekali-sekali dibuka agar
memperkecil terjadinya tekanan uap akibat
proses penggojogan yang dilakukan.
Gambar 1. Proses Ekstraksi membentuk tiga
fase.
Hasil ekstraksi tiga kali ini berupa larutan
bening yang mengandung kloroform. Menurut
Firdaus (2011) metode ekstraksi corong pisah
didasarkan atas distribusi senyawa antara dua
fasa pada dua lapisan cair yang
berkesinambungan. Kloroform digunakan
untuk mengekstraksi senyawa polar dan berada
pada lapisan bawah saat mengekstraksi
menggunakan air. Untuk mendapatkan kristal
kafein dari larutan hasil ekstraksi, dilakukan
mikrosublimasi dengan ditutupi kertas saring,
yang sebelumnya telah dilubangi di bagian
tengahnya. Kemudian ditutup dengan posisi
corong terbalik, lapisi sisi corong dengan kapas
basah kemudian dinyalakan api hingga
terbentuk kristal jarum. Proses mikrosublimasi
memerlukan suhu diatas 110o C karena harus
melewati titik didih kafein agar kafein yang
terdapat didala m larutan berubah menjadi gas
kemudian mengkristal. Menurut Firdaus (2011)
dalam sublimasi, padatan diubah menjadi uap
tanpa melalui fasa cair, yang kemudian
terkondensisasi ada menjadi kristal. Kristal
kafein yang diperoleh kemudian ditimbang
untuk mengetahui hasil isolasi kafein.
Diperoleh kristal kafein berwarna putih seberat
0,087gram.
Gambar 2. Kristal kafein
Penelitian ini untuk mengetahui apakah
kristal hasil isolasi sama dengan kafein standart
berdasarkan uji kualitatif dengan kromatografi
lapis tipis (KLT) dan Spektrofotometer.
Keuntungan dari sistem KLT antara lain :
dengan jumlah zat yang sangat kecil dapat
dipisahkan dengan jelas, hasil pemisahan lebih
baik dengan batas deteksi lebih rendah, butuh
waktu singkat dengan sedikit alat. Langkah
untuk melakukan KLT cukup dengan
melarutkan masing-masing kristal kafein hasil
isolasi dan kafein standar dengan kloroform dan
menotolkan pada lempeng silica GF 254,
kemudian dielusi dengan fase gerak kloroform-
etanol (99:1).
Hasil kromatogram jika dilihat dibawah
sinar uv 254 nm maka bercak kafein standar
akan berpendar biru dengan nilai Rf 0,237 dan
HRf 23,7 sejajar dengan bercak kafein hasil
isolasi dengan nilai Rf 0,225 dan nilai HRf 22,5
sedangkan nilai nilai HRx sebesar 94,9.
 dengan absorbansi 0,231 dan ʎ maksimum
206,8 dengan absorbansi 1,820. Dua ʎ
maksimum yang dihasilkan ini menandakan
bahwa larutan kafein hasil isolasi belum murni,
masih terdapat zat pengotor, sehingga ada satu
tambahan ʎ maksimum yang diperoleh jika
dibandingkan dengan standar kafein. Panjang ʎ
maksimum maksimal 273,0 nm menandakan
bahwa larutan sampel yang diuji terdapat kafein
yang terdeteksi oleh spektrofotometer Uv-Vis,
karena mendekati ʎ maksimum standart kafein
sebesar 273,5 nm.
Gambar 3. Hasil KLT standart kafein (kanan);
kafein hasil isolasi (kiri) dibawah
sinar UV 254 nm.

Spektofotometri Uv-Vis adalah

pengukuran serapan cahaya di daerah
ultraviolet (20-350 nm ) dan serapan cahaya Uv
atau Vis mengakibatkan transisi elektronik
yaitu promosi elektron- elektron dan orbital
keadaan dasar yang mengenergi lebih tinggi Gambar 4. Hasil Uji spektrofotometer UV
gelombang cahaya Uv-Vis bergantung pada Kafein standar (kiri) Peak; (kanan)
mudahnya promosi elektron. Molekul-molekul nilai absorbansi.
yang memerlukan lebih banyak energi untuk
promosi elekron, akan menyerap pada panjang
gelombang yang lebih pendek. Molekul yang
memerlukan energi yang lebih sedikit akan
menyerap pada panjang gelombang yang lebih
panjang. Prinsip dari sprektrofotometer Uv- Vis
senyawa yang menyerap cahaya dalam daerah
nampak (senyawa berwarna) mempunyai
elektron yang lebih mudah dipromosikan
daripada senyawa yang menyerap pada panjang
Gambar 5. Hasil Uji spektrofotometer UV
gelombang lebih pendek. Jika radiasi
Kafein hasil isolasi (kiri) Peak;
elektromagnetik dilewatkan pada suatu media
(kanan) nilai absorbansi.
yang homogen maka sebagian radiasi itu ada
yang dipantulkan dan ada yang ditansmisikan.
4. Kesimpulan
Sprektrofotometer Uv-Vis adalah alat
Berdasarkan hasil penelitian senyawa
yang digunakan saat praktikum penentuan
kafein dapat diisolasi dari daun teh hitam,
kualitatif kafein hasil isolasi yang dibandingkan
dengan hasil KLT nilai HRx sebesar 94,9. Uji
dengan kafein standart dengan melihat ʎ
kualitatif dengan spektrofotometer UV-Vis
maksimumnya. Sebelum digunakan alat
menunjukan nilai λ maksimum untuk standar
tersebut dikalibrasi terlebih dahulu sehingga
kafein sebesar 273,5 nm dan untuk hasil isolasi
spektrofotometri Uv-Vis nilai absorbansinya
diperoleh λ maksimum sebesar 273 nm dan
0,000 A. Hal pertama yang dilakukan adalah
206,8 nm.
membuat larutan standart kafein 8 ppm dalam
HCl 0,1 N, selanjutnya dilakukan pencarian ʎ
5. Daftar Pustaka
maksimum dengan sprektrofotometer Uv-Vis
Cahyanta, A. N. (2016). Penetapan Kadar
diperoleh ʎ maksimum 273,5 nm dan
Flavonoid Total Ekstrak Daun Pare
absorbansinya 0,029. Kemudian diperlakukan
Metode Kompleks Kolorimetri dengan
sama untuk larutan kafein hasil isolasi. Pada
Pengukuran Absorbansi secara
penentuan ini didapatkan 2 ʎ maksimum yaitu
Spektrofotometri. Jurnal Ilmiah Farmasi.
273,0 nm
5 (1): 58-6
Firdaus. (2011). Teknik Dalam Laboratorium
Kimia Organik. Hibah Penulisan Buku
Ajar. Makasar : Unversitas Hasanuddin.
McMurray, J. (2004). Organik Chemistry.
Brooks/Cole: USA.
Nersyanti, F. (2006). Spektrofotometri
Derivatif Ultraviolet Untuk Penentuan
Kadar Kafein Dalam Minuman Suplemen
dan Ekstrak Teh, Skripsi, Departemen
Kimia, Fakultas MIPA IPB.
Raharjo, R.A. (2010). Penentuan Kadar Kafein
Dalam Kopi. Laporan Praktikum.
Kendari: Unversitas Haluoleo.
Soraya, N. (2008). Isolasi Kafein Dari Limbah
Teh Hitam CTC Jenis Powder Secara
Ekstraksi. Skripsi. Bogor: Institut
Tertanian Bogor.
Stahl, E., (1985). Analisis Obat Secara
Kromatografi dan Mikroskopi, Penerbit
ITB. Press, Bandung.