ISOLASI DAN IDENTIFIKASI KAFEIN DARI KOPI ARABIKA MENGGUNAKAN

METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT) DAN SPEKTROFOTOMETRI

UV-VIS
Kartika Widiastuti, Laely Nur Afita, Larasati, Muhammad Hasby Assidiqi, dan Mutia Nurul Niza
E-mail :
S1 Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Bhakti Mandala Husada
Jln. Cut Nyak Dhien, Kalisapu, Slawi, Tegal
Telp. 6197570 – 6197571, Fax (0283)6198450

Abstrak
Kopi merupakan salah satu minuman yang banyak digemari masyarakat Kabupaten Tegal, karena kopi
telah dikonsumsi dari generasi ke generasi. Kafein merupakan senyawa kimia alkaloid terkandung secara alami
pada lebih dari 60 jenis tanaman. Kafein memiliki efek farmakologis yang bermanfaat secara klinis, seperti
menstimulasi susunan syaraf pusat, relaksasi otot polos terutama otot polos bronkus dan stimulasi otot jantung.
Kopi Arabika merupakan jenis kopi tertua yang dikenal dan dibudidayakan di dunia dengan varietas-
varietasnya. Tujuan penelitian ini, yaitu mengisolasi dan mengidentifikasi kafein dalam kopi bubuk arabika
yang beredar di Kabupaten Tegal dengan menggunakan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan
Spektrofotometri UV-Vis. KLT dilakukan dengan menggunakan fase diam berupa silika gel GF254 Merck dan
pada fase gerak menggunakan kloroform:etanol (99:1). Hasil penelitian dari isolasi mempunyai rendemen
0,67% dengan berat 0,34 gram serta hasil identifikasi kafein dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT) dan
Spektrofotometri UV-Vissibel menunjukan hasil yang sama antara sampel kopi dengan standar yaitu dengan
standar (Rf=0,7 dan Hrf=70) dan sampel (Rf=0,69 dan Hrf=69). Selain itu terdapat 2 peak dengan λ serapan
maksimal yang sama antara sampel dan standar yaitu 273,5 nm dan 202,5 nmdengan absorbansi tertinggi yang
hampir samayaitu 0,360 dan 0,384. Kesimpulan dari hasil uji laboratorium pada penelitian menunjukkan bahwa
kopi bubuk arabika mengandung senyawa kafein yang dapat diisolasi dan diidentifikasi dengan cara KLT dan
Spektrofotometri UV-Vis.
Kata Kunci :Arabica, KLT, Rendemen, Spektrofotometri UV-Vis

1. Pendahuluan Kafein merupakan senyawa kimia

Kopi merupakan salah satu minuman
yang banyak digemari masyarakat Kabupaten
Tegal, karena kopi telah dikonsumsi dari
generasi ke generasi. Hingga saat ini, para
lanjut usia bahkan muda-mudi memilih kopi
bubuk dibandingkan kopi jenis lain karena
rasanya yang khas. Oleh sebab itu banyak
terdapat warung kopi di pinggiran jalan yang
menjual kopi bubuk buatan lokal. Penikmat
kopi biasanya minum kopi 3-4 cangkir setiap
hari. Hal ini menyebabkan seseorang
ketergantungan minum kopi. Ketergantungan
tersebut karena disebabkan karena adanya
kandungan kafein dalam kopi.
Kopi Arabika merupakan jenis kopi tertua
yang dikenal dan dibudidayakan di dunia
dengan varietas-varietasnya. Di Indonesia
tanaman kopi Arabika cocok dikembangkan di
daerah-daerah dengan ketinggian antara 800-
1500 m di atas permukaan laut dan dengan
suhu rata-rata 15-24ºC. Mengingat belum
banyak jenis kopi Arabika yang tahan akan
penyakit karat daun, dianjurkan penanaman
kopi Arabika tidak di daerah-daerah di bawah
ketinggian 800 m dpl. (Sihombing, 2011)
alkaloid terkandung secara alami pada lebih
dari 60 jenis tanaman terutama teh (1- 4,8 %),
kopi (1-1,5 %), dan biji kola(2,7-3,6 %).
Kafein diproduksi secara komersial dengan
cara ekstraksi dari tanaman tertentu serta
diproduksi secara sintetis. Kebanyakan
produksi kafein bertujuan untuk memenuhi
kebutuhan industri minuman (Misra et al,
2008).
Kafein memiliki efek farmakologis yang
bermanfaat secara klinis, seperti menstimulasi
susunan syaraf pusat, relaksasi otot polos
terutama otot polos bronkus dan stimulasi otot
jantung (Coffeefag, 2001). Berdasarkan efek
farmakologis tersebut, kafein ditambahkan
dalam jumlah tertentu ke minuman. Efek
berlebihan (over dosis) mengkonsumsi kafein
dapat menyebabkan gugup, gelisah.tremor,
insomnia, hipertensi, mual dan kejang
(Farmakologi UI, 2002). Berdasarkan FDA
(Food Drug Administration) yang diacu dalam
Liska (2004), dosis kafein yang diizinkan 100-
200mg/hari, sedangkan menurut SNI 01-
7152-2006 batas maksimum kafein dalam
makanan dan minuman adalah 150 mg/hari
dan 50 mg/sajian. Kafein sebagai stimulan
tingkat sedang (mild stimulant) memang
seringkali diduga sebagai penyebab
kecanduan. Kafein hanya dapat menimbulkan
kecanduan jika dikonsumsi dalam jumlah yang
banyak dan rutin.
Tujuan penelitian ini, yaitu mengisolasi
dan mengidentifikasi dan kafein dalam kopi
bubuk arabika yang beredar di Kabupaten
Tegal dengan menggunakan metode
kromatografi lapis tipis (KLT) dan
Spektrofotometri UV-Vis.
2. Metode Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium
Mikrobiologi Program Studi S1 farmasi
STIKes Bhakti Mandala Husada Slawi, Tegal
pada tanggal 17-18 Juli 2018. Penelitian
dimulai dengan isolasi kafein dalam serbuk
kopi arabika, proses kristalisasi, dan
selanjutnya identifikasi dengan metode
kromatografi lapis tipis dan spektrofotometer
UV-Vis.
Alat bahan
Alat-alat yang digunakan pada penelitian
ini, yaitu seperangkat alat ekstraksi refluks,
timbangan analitik, corong buncher, tabung
reaksi, corong, batang pengaduk, labu takar,
gelas piala (pyrex), chamber, pipa kapiler,
pipet volume, plat alumunium, erlenmeyer,
pipet tetes, corong pisah, kaca arloji, gelas
ukur, hot plate, deteksi sinar UV dan
spektrofotometri UV-Vis.
Bahan yang digunakan dalam penelitian
ini yaitu standar kafein,kloroform, Larutan
HCl 0,1 N , aquadest, etanol 96%, silika gel
GF254 Merck, sampel kopi bubuk arabika , Pb
asetat, kain flanel dan kapas.
Pembuatan ektrak dan kristalisasi kafein
Sebanyak 50 gram kopi bubuk arabika
diekstrasi menggunakan metode refluks dalam
pelarut aquadest sebanyak 250 mL selama 30
menit dengan suhu tinggi. Setelah itu
ditambahkan Pb asetat 40 mL dan disaring
pada kain flanel. Hasil filtrat disaring kembali
menggunakan kapas 3 kali dan dimasukkan
dalam corong pisah. Lalu ditambah 20 mL
kloroform lalu digojog dan didiamkan.
Kemudian diambil lapisan bawah dan
dilakukan kristalisasi dengan metode
sublimasi.
Isolasi senyawa kafein dengan KLT
Lempeng alumunium silika gel GF254 Merck
disiapkan dengan ukuran panjang 10 cm dan
lebar 2 cm. Kristal yang dihasilkan dilarutkan
dalam kloroform dan ditotolkan padalempeng
tepi bawah bersama standar kafein dan diangin
anginkan. Lempeng dimasukkan dalam
chamber yang berisi eluen yaitu campuran
homogen lapisan bawah pelarut antara
kloroform : etanol (99:1). Lempeng dibiarkan
terelusi hingga eluen merambat sampai pada
tanda garis tepi atas lempeng kemudian
dikeluarkan dan dikeringkan di udara.
Pengamatan noda menggunakan lampu UV
254 dan 366 nm.
Identifikasi senyawa Kafein dengan Spekto
fotometri UV-Vis
Sejumlah kristal kafein ditimbang 2,5
mg dan dilarutkan dalam 25 ml pelarut HCL
0,1 N dengan faktor pengenceran 10 ppm.
Penentuan senyawa kafein yaitu dibaca λ
maksimal dengan spektrofotometer pada range
panjang gelombang 190-380 nm dengan
blanko serapan dan dihitung jumlah kafein dari
angka serapan masing-masing.
3. Hasil dan Pembahasan
Pembuatan ektrak dan kristalisasi kafein
Serbuk kopi yang digunakan adalah jenis
arabika berwarna hitam dan memiliki bau
harum yang khas. Isolasi kafein menggunakan
metode refluks dengan penyari aquadest (air),
bukan pelarut organik. Hal ini dikarenakan
jikamenggunakan pelarut organik, maka residu
pelarut organik dalam biji kopi akan tinggi dan
akan menghasilkan bau pelarut organik dalam
kopi (Kartasasmita, R. E. Dan Susan, A.,
2012). Proses pemanasan berlasung sekitar 30
menit setelah kopi mendidih yaitu pada suhu
1000C. Hal ini karena kelarutan kafein lebih
tinggi pada suhu100°C. Selain itu, pada suhu
di atas 95°C aroma dan rasa kopi akan
terdegradasi (Zeller 1985).
Hasil refluks berupa larutan kopi
homogen yang kemudian disaring
menggunakan corong buchner agar
penyaringan filtrat berlangsung dengan cepat.
Ditambahkan Pb asetat 40 mL sedikit demi
sedikit. Menurut Raharjo (2010) Penambahan
larutan timbal asetat anhidrat dalam keadaan
panas-panas secrara tetes-pertetes bertujuan
untuk mengendapkan kotoran-kotoran dari
filtrat kopi berupa garam-garam. seperti
albumin, asam-asam, tannin dan sebagainya.
Selanjutnya penyaringan berulang dilakukan
dengan menggunakan kapas agar terbentuk
filtrat yang murni.
Proses pemisahan kafein menggunakan
corong pisah dengan ditambahkan kloroform.
Menurut Firdaus (2011) metode ekstraksi
corong pisah didasarkan atas distribusi
senyawa antara dua fasa pada dua lapisan cair
yang berkesinambungan.Kloroform dipilih
karena kafein sangat larut didalam kloroform.
Menurut McMurry (2004) kafein lebih larut
didalam air jika dibandingkan dengan etanol.
Namun, Kelarutan kafein lebih besar di dalam
klorofom jika dibandingkan dengan air.
Pada saat proses pemisahan, tutup corong
pisah harus sekali-sekali dibuka agar
memperkecil terjadinya tekanan uap akibat
proses pengguncangan yang dilakukan.
Kloroform yang bersifat nonpolar mengikat
kafein dan berada pada lapisan bawah karena
memiliki berat jenis yang lebih besar. Lapisan
bawah inilah yang diambil untuk diektraksi
kembali. Agar hasil yang diperoleh maksimal,
proses ekstraksi dilakukan sebanyak dua kali.
Hasil ekstraksi dua kali ini berupa larutan
coklat bening yang mengandung kloroform.
Kemudian dilakukan kristalisasi dengan proses
sublimasi agar kristal kafein murni dapat
terbentuk. Proses sublimasi memerlukan suhu
diatas 110 0C karena harus melewati titik didih
kafein agar kafein yang terdapat didalam
larutan berubah menjadi gas kemudian
mengkristal. Menurut Firdaus (2011) dalam
sublimasi, padatan diubah menjadi uap tanpa
melalui fasa cair, yang kemudian
terkondensisasi ada menjadi kristal.
Diperoleh kristal kafein berwarna putih,
bentuk amorf jarum, dan tidak berbau dengan
berat kristal 0,34 gram dengan rendemen 0,679
%.
Gambar 1. Terbentuk kristal kafein
Isolasi senyawa kafein dengan KLT
Identifikasi kafein menggunakan
kromatografi Lapis Tipis dengan fase diam
silika gel dan fase gerak kloroform:etanol
(99:1). Langkah awal dengan melarutkan
sedikit krital kafein dengan pelarut kloroform.
Fase diam berupa silika gel dalam plat
diaktivasi terlebih dahulu dalam oven suhu
500C selama 15 menit, bertujuan untuk
menghilangkan pengotor dan air yang terdapat
dalam plat KLT. Fase gerak dibuat dalam 15
mL, kemudian dijenuhkan terlebih dahulu.
Penjenuhan bertujuan menghilangkan uap air
atau gas lain yang akan menghalangi laju
eluen dan menyeimbangkan tekanan atmosfer
di dalam dan di luar chamber, menjadikan
eluen memenuhi chamber sehingga distribusi
fasa diam dapat berjalan dengan lancar.
Penotolan dilakukan dengan menggunakan
pipa kapiler antara larutan standar kafein dan
larutan sampel kafein. Pada saat penotolan hal-
hal yang harus diperhatikan yaitu posisi pipa
kapiler harus tegak lurus dan ditotolkan 2-3
totolan yang berfungsi agar bercak yang
terlihat lebih jelas.
Selanjutnya proses elusi, plat silika gel
yang sudah ditotolkan, dimasukkan dalam
chamber, kemudian ditunggu proses elusi
selesai. Plat silika yang sudah terelusi diangin-
anginkan terlebih dahulu, kemudian dideteksi
bercak dalam sinar UV 254 nm dan 366 nm.
Hasilnya bercak terlihat pada UV 254 nm
berwarna ungu dengan fluorosensi hijau.
(a) (b)
Ket. (a) Standar kafein
(b) Sampel hasil isolasi
Gambar 2. Noda yang dihasilkan pada KLT
 Dari bercak tersebut, diperoleh nilai Rf
dan Hrf untuk larutan standar dan larutan
sampel kafein hampir sama dan mendekati
100% yaitu standar (Rf=0,7 dan Hrf=70%) dan
sampel (Rf=0,69 dan Hrf=69%). Hal tersebut
menandakan bahwa hasil isolasi yang didapat
identik dengan kafein dan nilai Rf keduannya
baik karena masuk dalam range 0,2-0,8.

Identifikasi senyawa Kafein dengan

Spektofotometri UV-Vis (a)
Selanjutnya mengukur absorbansi
menggunakan spektrofotometer UV-Vis.
Larutan yang digunakan untuk pelarut dan
larutan blanko adalah larutan HCl 0,1 N.

(b)
Gambar 3. Reaksi antara kafein dengan HCl
Ket: (a) Peak yang dihasilkan dari standar kafein
Dimana HCl digunakan karena dapat (b) Peak yang dihasilkan dari sampel
melarutkan kafein dan bersifat asam sehingga
dapat membuat suasana kafein menjadi asam, Gambar 4. Peak yang dihasilkan larutan standar
karena pada suasana asam panjang gelombang dan larutan sampel
yang dihasilkan maksimum. Panjang
gelombang yang maksimum memiliki
kepekaan maksimal karena terjadi perubahan
absorbansi yang paling besar serta pada
panjang gelombang maksimum bentuk kurva
absorbansi memenuhi hukum Lambert-Beer
Pada panjang gelombang maksimum pun
apabila dilakukan pengukuran ulang maka
kesalahan yang disebabkan oleh pemasangan
ulang panjang gelombang akan kecil sekali,
ketika digunakan panjang gelombang
maksimal (Rohman, Abdul, 2007). 
(a)
Media yang digunakan untuk
pengukuran adalah kuvet. Sebelum proses
pengukuran dilakukan, kuvet yang
dipergunakan dibilas terlebih dahulu dan dilap
dengan menggunakan tisu sampai tidak
terdapat butiran air diluar permukaan kuvet,
agar cahaya yang terserap oleh larutan
maksimal. Larutan baku adalah larutan kafein
100 ppm kemudian diencerkan dalam 10 ppm
dan dianalisis dalam spektrofotometer UV-Vis
dengan range panjang gelombang 190-380 nm.

(b)
Ket: (a) Panjang gelombang maksimal dari larutan
standar kafein
(b) Panjang gelombang maksimal dari larutan
sampel
Gambar 5. Panjang gelombang maksimal yang
dihasilkan dari larutan standar dan larutan sampel.
Analisis spektro menghasilkan peak, nilai
panjang gelombang maksimal dan absorbansi.
Larutan standar dan sampel kafein 10 ppm
masing-masing memunculkan 2 peak dengan
panjang gelombang serapan maksimum yaitu
273,5 nm. Nilai panjang gelombang yang sama
ini membuktikan bahwa hasil isolasi identik
dengan kafein. Hal ini juga diperkuat dalam
penelitian Suko (2007) yang menyatakan
bahwa hasil panjang gelombang serapan
maksimum kafein dengan pelarut asam encer
adalah 273 nm. Nilai absorbansi juga hampir
sama yaitu 0,360 untuk standar dan 0,384
untuk sampel yang membuktikan bahwa hasil
isolasi kristal kafein bersifat murni.
4. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian ini, dapat
disimpulkan bahwaisolasikafein dari kopi
arabika mempunyai berat 0,34 gram dengan
rendemen 0,67%. Hasil identifikasisenyawa
kafein dengan metode Kromatografi Lapis
Tipis (KLT) dan spektrofotometer UV-Vis
menunjukan hasil yang sama antara hasil
isolasidengan standar dengannilai hrf yang
mendekati 100% yaitu 70% dan 69%. Selain
itu terdapat 2 peak dengan λ serapan maksimal
273,5nm. Hasil tersebut menyatakan bahwa
hasil isolasi identik dengan kafein dan nilai
absorbansi yang hampir sama yaitu 0,360 dan
0,384 juga menunjukkan bahwa kristal kafein
yang diperoleh bersifat murni.
5. Daftar Pustaka
Coffefag. (2001). Frequently Asked Questions
about Caffeine. Diakses 27 Juli 2018
Fact and Comparisons. (2001). Facts and
Comparisons 2001. Fact and
Comparisons : USA.
Farmakologi UI.(2002). Farmakologi dan
Terapi Edisi 4. Gaya Baru : Jakarta
Firdaus. (2011). Teknik Dalam Laboratorium
Kimia Organik. Hibah Penulisan Buku
Ajar. Makasar: Unversitas Hasanuddin.
Kartasasmita, R. E. Dan Susan, A.(2012).
“Dekafeinasi Biji Kopi Robusta (Coffea
canephora L.) menggunakan Pelarut
Polar (Etanol dan Metanol)”.Jurnal Acta
Pharmaceutica Indonesia. Vol. XXXVII,
No. 3: 83.
Liska, K.(2004). Drugs and The Body with
Implication for Society. Edisi ke-7. New
1Jersey: Pearson.
McMurray, J. (2004). Organik Chemistry
Brooks/Cole: USA.
Misra, H., Mehta, D., Mehta, B.K., Soni, M.,
and Jain, D.C.(2008).“Study of Extraction
and HPTLC – UV Method for Estimation
of Caffeine in Marketed Tea (Camellia
sinensis) Granules”. International
Journal of Green Pharmacy : 47-51.
Raharjo, R.A. (2010). Penentuan Kadar Kafein
Dalam Kopi. Laporan Praktikum.
Kendari : Unversitas Haluoleo.
Rohman, Abdul.(2007). Kimia Analisis
Farmasi. Yogyakarta : Pustaka Pelajar.
Sihombing, T. P. (2011).Studi Kelayakan
Pengembangan Usaha Pengolahan Kopi
Arabika (studi kasus PT. sumatera
speciality coffees). Bogor : Institut
Pertanian Bogor.
Suko, Veronica. (2007). “Penetapan Kadar
Kafein Dalam Minuman Berenergi Merk
“X” dengan Metode Spektrofotometer
Derivat Aplikasi Peak-to-Peak”. Skripsi.
Yogyakarta: Universitas Sanata Dharma.
Zeller.(1985). Coffee Extract Decaffeination
Method, United States Patent, 4,521,438,
1-5.