04/08/2015

PENGUJIAN SALMONELLA SPP.

TEKNIK ISOLASI

PRINSIP

Pengujian ini berdasarkan 4 tahap yaitu

tahap pra pengayaan dalam media cair
non selektif, tahap pengayaan pada
media cair selektif, tahap isolasi dan
identifikasi pada media selektif, dan
tahap konfirmasi

1
 04/08/2015

Pengayaan
pada media
MKTTn dan
RVSB Plating dan
Pra pengayaan identifikasi
pada media pada media
BPW XLD dan
BSA/BGA

Konfirmasi
Prosedur dengan uji
Penyiapan
sampel Pengujian biokimia dan
Sampel uji anti sera H
dan O

BPW
Oven
RVSB
Inkubator MKTTn
Waterbath XLD
Ose steril BSA/BGA
pH meter NA
TSIA
Tabung reaksi dan botol/erlenmeyer
LDM
Pipet Urea agar
Neraca Pereaksi ß-galactosidase
Plastik sampel VP dan Pereaksi
Stomacher Tryptone Medium dan pereaksi Kovac’s indol
Semi solid NA
Laminar Air Flow
Larutan Fisiologis
Biohazard Sera O, Vi, dan H
Autoclave Kultur S.typhimurium ATCC 14028
Kaca preparat

2
 04/08/2015

Alur Pengujian Sampel

Sampel : Buffered Peptone Water
(BPW) dengan perbandingan 1:9

Inkubasi selama 18 jam ± 2 jam pada

37°C ± 1°C
0,1 mL 1 mL
10 ml MKTTn broth lalu inkubasi
10 ml RVS broth lalu inkubasi selama selama 24 jam ± 3 jam pada 37°C ±
24 jam ± 3 jam pada 41,5°C ± 1°C 1°C

Media XLD dan BSA/BGA

Inkubasi selama 24 jam ± 3 jam pada
37°C ± 1°C

koloni khas Salmonella :

XLD: warna koloni hitam
sekeliling media kemerahan.
BGA: warna koloni pink sampai
Media XLD dan BSA/BGA merah sekeliling media
Inkubasi selama 24 jam ± 3 jam pada kemerahan.
37°C ± 1°C BSA: koloni keabu-abuan atau
kehitaman, kadang metalik,
media disekitar koloni warna
coklat sampai hitam

Uji Konfirmasi dengan uji

biokimia

3
 04/08/2015

Uji Konfirmasi
Uji Biokimia Uji Anti sera

TSIA
Urea Agar Anti sera H
LDM, Anti sera O
ß-Galactosidase,
Vp
Indol

Salmonella strain

a S.typhi S.paratyphi A S.paratyphi B S.paratyphi C Other strains

Test

Reaksi % b Reaksi % b Reaksi % c Reaksi % c Reaksi %b

TSI asam dari glukosa + 100 + 100 + + + 100

TSI asam dari glukosa -d 0 + 100 + + + 92
TSI asam dari laktosa - 2 - 100 - - - 1
TSI asam dari sukrosa - 0 - 0 - - - 1
TSI produksi H2S + 97 - 10 + + + 92
Hidrolisis urea - 0 - 0 - - - 1

Lysine decarboxylation + 98 - 0 + + + 95

Reaksi β-galactosidase - 0 - 0 - - - 2e
Reaksi VP - 0 - 0 - - - 0
Produksi indol - 0 - 0 - - - 1

a : berdasarkan uji kimia

b : persentasi ini mengindikasikan tidak semua serotipe dari Salmonella menunjukkan reaksi yang jelas + atau - . Persentase ini
dapat bervariasi antara dan di dalam serotipe keracunan makanan dari lokasi yang berbeda.
c : persentase ini tidak dapat diketahui dari literatur yang ada.
d : Salmonella thyphi adalah anaerogenic.
e : Salmonella anterica subspecies memberikan reaksi laktosa positif atau negatif, tetapi selalu menghasilkan β-galactosidase positif.

4
 04/08/2015

Auto-
Reaksi biokimia Reaksi serologi Interpretasi
agglutination

Typical Tidak Positif antigen O-,Vi-atau H- Salmonella

Typical Tidak Semua reaksi negatif

Typical Ya Tidak diuji Mungkin
Salmonella
Reaksi non typical No/Ya Positif antigen O-, Vi-atau H-

Bukan
Reaksi non typical No/Ya Semua reaksi negatif
Salmonella

5
 04/08/2015

REFERENSI
ISO 6579:2002, “Mikrobiologi Bahan Pangan dan Pakan-Metode Horizontal
Untuk Mendeteksi Salmonella spp.”
SNI ISO 6887-1:2012, Mikrobiologi bahan pangan dan pakan – Penyiapan
contoh uji, suspensi awal dan pengenceran desimal untuk pengujian mikrobiologi
- Bagian 1: Aturan umum untuk penyiapan suspensi awal dan pengenceran
desimal.
SNI ISO 6887-2:2012, Mikrobiologi bahan pangan dan pakan – Penyiapan
contoh uji, suspensi awal dan pengenceran desimal untuk pengujian mikrobiologi
- Bagian 1: Aturan khusus untuk penyiapan dan produk daging.
SNI ISO 6887-3:2012, Mikrobiologi bahan pangan dan pakan – Penyiapan
contoh uji, suspensi awal dan pengenceran desimal untuk pengujian mikrobiologi
Bagian 3: Aturan khusus untuk penyiapan ikan dan produk perikanan.
SNI ISO 6887-4:2012, Mikrobiologi bahan pangan dan pakan – Penyiapan
contoh uji, suspensi awal dan pengenceran desimal untuk pengujian
mikrobiologi - Bagian 4: Aturan khusus untuk produk selain susu dan produk
susu, daging dan produk daging, ikan dan produk perikanan.

6
 04/08/2015

REFERENSI

SNI ISO 6887-5:2012, Mikrobiologi bahan pangan dan pakan – Penyiapan

contoh uji, suspensi awal dan pengenceran desimal untuk pengujian mikrobiologi
- Bagian 5: Aturan khusus untuk penyiapan susu dan produk susu.
SNI ISO 7218:2012, Mikrobiologi bahan pangan dan pakan – Persyaratan
umum dan panduan untuk pengujian mikrobiologi.
ISO 8261, Milk and milk products – General guidance for the preparation of
test samples initial suspension and decimal dilutions for microbiological
examination.
SNI ISO/TS 11133-1:2012 Mikrobiologi bahan pangan dan pakan— Panduan
penyiapan dan pembuatan media biakan — Bagian 1: Panduan umum jaminan
mutu untuk penyiapan media biakan di laboratorium.
SNI ISO/TS 11133-2:2012, Mikrobiologi bahan pangan dan pakan— Pedoman
penyiapan dan pembuatan media biakan — Bagian 2: Panduan praktis pengujian
kinerja media biakan.