Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Jurnal Farmasi Tropis dan Kimia

Beranda jurnal:https://jtpc.farmasi.unmul.ac.id

Analisis Ethyl p-Methoxycinnamate dariKaempferia galangaL. Ekstrak oleh

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Wiwin Winingsih*, Sri Gustini Husein, Rozalia Putri Neno Ramdhani

Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia (STFI) Jl. Soekarno-Hatta No.354 (Parakan Resik 1), Bandung
* Penulis yang sesuai:winingsih341@gmail.com

Abstrak
Ethyl para-methoxycinamate (EPMS) adalah senyawa utama dariKaempferia galangaL yang memiliki efek
antiinflamasi. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menentukan EPMS diKaempferiae galangaekstrak
rimpang L dengan High Performance Liquid Chromatography (HPLC) dan dievaluasi kinerja analisisnya.
Penelitian ini meliputi penentuan kesesuaian sistem, akurasi, presisi, linearitas dan jangkauan, limit of
detection (LOD) dan Limit of quantitation (LOQ) serta selektivitas. Hasil uji kesesuaian sistem Sistem HPLC
untuk analisis EPMS adalah sebagai berikut sistem elusi isokratik campuran fase gerak metanol: air (70:30)
yang mengandung TFA 0,1%, detektor uv pada panjang gelombang 308 nm menggunakan kolom C18
(150× 4,6 mm, 5μm) laju alir 1 ml / mnt. Dari hasil analisis diketahui bahwa rata-rata kandungan EPMS
adalah 78,74%. Kemudian metode memiliki rentang konsentrasi linier 5-360 ppm, dengan R² = 0,9999.
LOD dan LOQ masing-masing adalah 7,0722 ppm dan 21,4311 ppm. Keakuratan metode ini yang diwakili
oleh % recovery adalah 98,02% - 101,26%. Presisi metode ini yang dinyatakan dengan Relative Standard
Deviation (RSD) adalah 1,57%. Selektivitas metode ini ditunjukkan dengan nilai resolusi sebesar 2,6.
Berdasarkan hasil uji kesesuaian sistem dan evaluasi kinerja analisis, semua parameter memenuhi
persyaratan.

Kata kunci: Etil para-metoksisinamat, tinggi pertunjukan cairan kromatografi,

Kaempferia galangaL.

Dikirim: 12 April 2021 Diterima: 24 Desember 2021 DOI:https://doi.org/10.25026/jtpc.v5i4.331

1 Perkenalan tumbuhan umum di Indonesia. Secara empiris

kencur mempunyai aktivitas untuk mengobati
Kencur (Kaempferiae galangaL.) atau dikenal dengan
peradangan (anti inflamasi) [1, 2]. Selain itu,
sebutan kencur di Indonesia termasuk dalam famili
aktivitas biologis kencur telah dibuktikan secara
Zingiberaceae yang merupakan salah satu yang terbanyak
ilmiah. Aktivitas biologis dari

J. Trop. Farmasi. kimia 2021. Vol 5. No. 4. p- 353

ISSN: 2087-7099; e-ISSN: 2407-6090
Analisis Ethyl p-Methoxycinnamate dariKaempferia galangaL. Ekstrak dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
kencur dipengaruhi oleh metabolit sekunder
dan senyawa kimia yang terkandung
didalamnya. Senyawa kimia yang memiliki
sifat antiinflamasi dari rimpang kencur (
Kaempferiae galangaL.) adalah etil
parametoksisinamat (EPMS) [1, 2].
EPMS merupakan senyawa penanda dan
komponen utama yang terkandung dalam rimpang
kencur dengan persentase 80% [2]. Senyawa penanda
ini diperlukan sebagai pembanding untuk
mengkonfirmasi keberadaan ekstrak tumbuhan dalam
produk obat dan untuk menentukan kebenaran spesies
tumbuhan dalam proses analisis. Selama ini proses
analitik yang paling banyak digunakan untuk analisis
EPMS adalah Gas Chromatography Mass Spectrometry
(GC-MS) [2]. Ini karena GC-MS khusus untuk senyawa
yang mudah menguap. Namun selain itu, analisis GC-MS
memerlukan biaya yang relatif tinggi, dan cukup rumit
untuk hanya menganalisis kadar sampel saja, sehingga
untuk menekan biaya analisis diperlukan metode yang
lebih murah dengan akurasi yang tinggi.
Pada saat ini metode yang paling umum
digunakan untuk analisis suatu senyawa adalah
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT).
Keunggulan metode ini terletak pada
keakuratan analisis dan kepekaan yang tinggi
serta cocok untuk memisahkan senyawa
nonvolatile yang tidak tahan terhadap
pemanasan. Penelitian analisis EPMS dengan
HPLC telah dilakukan sebelumnya oleh [3] yaitu
penentuan kadar EPMS menggunakan HPLC
pada suhu 30℃.Kondisi analisis di atas
memerlukan peralatan khusus seperti pemanas
kolom. Hal ini menjadi kendala untuk analisa
EPMS menggunakan KCKT, karena tidak semua
KCKT dilengkapi dengan column heater. Oleh
karena itu perlu dikembangkan metode analisis
EPMS pada ekstrak rimpang kencur pada suhu
ruang. Pengembangan metode analisis sesuai
dengan United States Pharmacopeia melalui
pengujian kesesuaian sistem, pengujian kadar
sampel, dan pengujian parameter validasi
menurut USP. Dari penelitian yang telah
dilakukan diharapkan dapat diperoleh kondisi
analisis yang paling optimum untuk analisis
EPMS dengan HPLC pada suhu ruang [3,4].
J. Trop. Farmasi. kimia 2021. Vol 5. No. 4. p-
ISSN: 2087-7099; e-ISSN: 2407-6090
2 Bahan dan metode
2.1 Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini
adalah timbangan analitik, blender, mikropipet,
membran filter, sonikator, UV-Terlihat
spektrofotometer (Schimadzu UV 1800),
instrumen Kromatografi Cair Kineja Tinggi
(Shimadzu LC 20 AT Prominance).
2.2 Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian
ini adalah rimpang kencur (Kaempferiae
galangaL.), etil p-metoksisinamat standar yang
diisolasi di laboratorium kami, air suling, air pro
injeksi, 96% (Merck), metanol pro HPLC (Merck)
®, asetonitril pro HPLC (Merck), Asam asetat Tri
Fluoro (TFA).
2.3 Uji Kesesuaian Sistem
Uji Kesesuaian Sistem dilakukan dengan
menyuntikkan enam injeksi larutan standar
EPMS. Beberapa parameter dihitung seperti
resolusi (Rs), faktor tailling, kapasitas kolom
(K'), jumlah pelat teoritis (N), nilai standar
deviasi relatif (RSD) [5-10].
2.4 Analisis Sampel
100 g dariKaempferiae galangaL. Serbuk
diekstraksi dengan metode maserasi dengan
pelarut metanol sebanyak 3 kali pergantian
pelarut selama 3 hari. Ekstrak cair dikumpulkan
dan diuapkan pada suhu tidak lebih dari 50℃
untuk mendapatkan ekstrak kental [4].
Sebanyak 25 mg ekstrak kemudian dilarutkan
dalam 25 ml metanol. Sampel disonikasi selama 5
menit. Kemudian disaring menggunakan membran
filter dan larutan diinjeksikan ke dalam HPLC [4].
2.5 Analisis Evaluasi Kinerja
2.5.1 Linearitas dan Jangkauan
Linearitas antara luas puncak dan
konsentrasi dianalisis menggunakan kurva
kalibrasi yang diperoleh dari tujuh larutan
standar dengan konsentrasi 5 ppm, 10 ppm,
20 ppm, 40 ppm, 80 ppm, 160 ppm dan 360
ppm. Dilihat dari nilai regresi linier [5-10].
354
Analisis Ethyl p-Methoxycinnamate dariKaempferia galangaL. Ekstrak dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
2.5.2 Batas kuantifikasi dan batas deteksi
Penentuan limit of quantification (LOQ)
dan limit of detection (LOD) didasarkan pada
standar deviasi respon dan kemiringan
(slope) yang diperoleh dari kurva kalibrasi
[5-10].
LOD dan LOQ dapat dihitung dengan
rumus 1 dan 2.
LOD =3,3×SD (persamaan 1)
Lereng
LOQ =10×SD (persamaan 2)
Lereng
2.5.3 Akurasi
Akurasi suatu metode dilakukan dengan cara
recovery menggunakan metode standar pada
beberapa konsentrasi. Kemudian dihitung persen
pemulihannya [5-10].
2.5.4 Presisi
Pengukuran larutan standar dilakukan
sebanyak enam ulangan dengan enam
preparat, kemudian dihitung % RSD.
2.5.5 Selektivitas
Selektivitas metode ini ditentukan oleh
resolusinya. Resolusi menggambarkan
derajat pemisahan puncak analit dengan
puncak senyawa lainnya [5-10].
3 Hasil dan Diskusi
Metanol dipilih sebagai pelarut untuk
ekstraksi karena dapat melarutkan EPMS. Metode
maserasi digunakan untuk mengekstraksi
senyawa karena cocok untuk zat termolabil seperti
EPMS. Rendemen ekstrak EPMS yang dilakukan
dengan metode ini adalah 8,4%.
Optimasi kondisi analisis dilakukan
dengan melakukan uji kesesuaian sistem.
Untuk menilai kesesuaian sistem beberapa
parameter seperti tailing factor, capacity
J. Trop. Farmasi. kimia 2021. Vol 5. No. 4. p-
ISSN: 2087-7099; e-ISSN: 2407-6090
faktor, pelat teoritis, resolusi, RSD faktor retensi,
RSD Area Under Curve (AUC) dalam berbagai fase
gerak ditentukan [5-10]. Dari beberapa fase gerak
yang telah digunakan, fase gerak yang paling
sesuai adalah metanol: air (70:30) dengan kadar
TFA 0,1%. Fase gerak dengan elusi isokratik dalam
kolom C18, diameter 150 × 4,6 mm, 5  , laju alir 1
ml/menit, terdeteksi oleh detektor UV pada 308
nm, memberikan resolusi yang lebih baik
dibandingkan dengan fase gerak lainnya. Hasil uji
kesesuaian sistem ditabulasikan pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil Uji Kesesuaian Sistem
No Parameter Hasil Persyaratan Kesimpulan
1. Faktor tailing 1.068 < 1,5 Memenuhi syarat
2. Faktor kapasitas (K') 5.540 2-10 Memenuhi syarat
3. Pelat teoretis (pelat N) 4445.767 > 2000 Memenuhi syarat
4. Resolusi 2.069 > 1,5 Memenuhi syarat
5. RSD waktu Retensi 0,270 > 1,5
Memenuhi syarat
6. RSD AUC 0,1 > 1,5 Memenuhi syarat
Sebelum injeksi ke sistem HPLC, sampel
disiapkan dengan sonikasi ekstrak kental dalam
metanol. Dari penelitian ini diketahui bahwa EPMS
memiliki waktu retensi 10,046 dan lebih cepat
dibandingkan metode yang dilakukan oleh [2]
yang memiliki waktu retensi 12 menit. Jadi, sistem
HPLC yang baru dapat mengurangi waktu analitik.
Untuk menemukan konten EPMS diKaempferia
galangaL mengekstrak AUC EPMS dalam sampel
diekstrapolasi ke kurva kalibrasi. Dari perhitungan
diketahui bahwa kandungan EPMS dalam ekstrak
sebesar 78,76%. Kromatogram dari Kaempferia
galangaekstrak dan EPMS standar digambarkan
pada Gambar 1.
Linearitas dan jangkauan ditentukan
berdasarkan R2nilai kurva kalibrasi. Dari kurva
kalibrasi ditemukan bahwa rentang konsentrasi
linier antara 5-360 ppm. Linearitas kurva ini
dinyatakan oleh R2adalah 0,9999 dan
memenuhi persyaratan [5-10]. Kurva kalibrasi
EPMS ditunjukkan pada Gambar 2.
355
Analisis Ethyl p-Methoxycinnamate dariKaempferia galangaL. Ekstrak dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

A B

Gambar 1. Kromatogram EPMS pada sampel (a) dan kromatogram EPMS standar (b)

6.00E+07

5.00E+07
y = 156201x - 277430
R² = 0,9999
4.00E+07
AUC

3.00E+07

2.00E+07

1.00E+07

0,00E+00
0 50 100 150 200 250 300 350 400
konsentrasi (ppm)
Gambar 2. Kurva kalibrasi EPMS

LOD dan LOQ sistem ditentukan dari
kurva kalibrasi. Batas deteksi adalah
konsentrasi analit terendah yang dapat
dideteksi. Sedangkan Batas Kuantifikasi
adalah konsentrasi analit terendah dalam
sampel yang dapat ditentukan dengan presisi
dan akurasi yang dapat diterima [5-10]. Nilai
limit deteksi dan limit kuantifikasi dapat
diperoleh dari garis regresi linier dari kurva
kalibrasi dengan persamaan regresi linier y =
156201x - 277430. Berdasarkan hasil
perhitungan didapatkan LOD sebesar 7,0722
ppm dan LOQ sebesar 21,4311 ppm
Evaluasi presisi bertujuan untuk menilai
kedekatan hasil pengukuran keterulangan
pada konsentrasi yang sama dan hari yang
sama. Hasil uji presisi dinyatakan dalam %
Relative Standard Deviation (RSD) atau %
Coefficient of Variation (KV) [5-10]. Penentuan
presisi dilakukan dengan injeksi standar
EPMS sebanyak enam kali pada a
konsentrasi 40 ppm, dari hasil percobaan uji
presisi standar EPMS diperoleh nilai %KV
sebesar 1,57%. Berdasarkan literatur, nilai %
KV adalah 2% atau <2% [5-10]. Dari hasil
analisis yang didapat pada standar EPMS
memiliki nilai % KV yang baik yaitu < 2%.
Akurasi dilakukan untuk mengetahui
kedekatan hasil pengujian dengan taraf yang
sebenarnya. Uji akurasi dilakukan terhadap
standar dengan tiga konsentrasi berbeda yaitu
20 ppm, 40 ppm, dan 80 ppm. masing-masing
konsentrasi disuntikkan masing-masing 3 kali.
Dari hasil analisis diperoleh nilai rata-rata %
recovery sebesar 101,26% pada konsentrasi 20
ppm, 98,11% pada konsentrasi 40 ppm, dan
98,02% pada konsentrasi 80%. Hasil
perhitungan recovery menunjukkan bahwa
hasil tersebut memenuhi persyaratan. Menurut
literatur rata-rata % pemulihan adalah 98-102
[5-10]. Maka dapat disimpulkan bahwa metode
ini memiliki akurasi yang baik

J. Trop. Farmasi. kimia 2021. Vol 5. No. 4. p- 356

ISSN: 2087-7099; e-ISSN: 2407-6090
Analisis Ethyl p-Methoxycinnamate dariKaempferia galangaL. Ekstrak dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
Tabel 2. Hasil Evaluasi Akurasi
Konsentrasi Daerah Konsentrasi eksperimental
20 ppm 2806456 19.74306242
2917046 20.45106048
2934546 20.56309562
40 ppm 5974465 40.02468114
5722811 38.41359024
5860504 39.29510192
80 ppm 11345609 77.72472937
11863250 79.53337984
12145763 77.99988127
Persyaratan
Selektivitas adalah kemampuan suatu
metode analitik untuk memisahkan analit
dari senyawa lain dalam sampel [5-10].
Penentuan selektivitas dilakukan pada
sampel yang mengandung EPMS, kemudian
dianalisis resolusi analit dengan matriks di
kiri dan kanan analit. Dari hasil uji selektivitas
menunjukkan bahwa analit dan matriks
memiliki pemisahan yang baik dengan nilai
resolusi 2,609. Menurut literatur, persyaratan
uji spesifisitas untuk nilai resolusi analit
ditujukan dengan matriks ≥ 2 [5-10].
4 Kesimpulan
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan
bahwa sistem HPLC yang cocok untuk analisis
EPMS ekstrak kencur adalah campuran fase
gerak metanol : air (70:30). mengandung TFA
0,1% dengan detektor UV pada panjang
gelombang 308 nm, sistem elusi isokratik
menggunakan kolom C18 (150×4,6 mm, 5   ) laju
alir 1 mL/menit. Dari hasil analisis diketahui
bahwa rata-rata kadar EPMS dalam 25 mg
ekstrak rimpang kencur mengandung 19,71 mg
EPMS dengan persentase kadar 78,74%.
Hasil uji kesesuaian sistem dan evaluasi
kinerja analisis menunjukkan bahwa semua
parameter memenuhi persyaratan sehingga
metode ini memiliki kinerja yang baik dan dapat
digunakan untuk menganalisis EPMS pada matriks
lainnya.
5 Terima kasih
Seluruh penulis sangat berterima kasih kepada
Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia Bandung yang telah
menyediakan fasilitas laboratorium.
J. Trop. Farmasi. kimia 2021. Vol 5. No. 4. p-
ISSN: 2087-7099; e-ISSN: 2407-6090
% Pemulihan Rata-rata % Pemulihan
98.71531211 101,26%
102.2553024
102.8154781
100.0617029 98,11%
96.0339756
98.23775479
97.15591172 98,02%
99.4167248
97.49985159
98-102
6 Referensi
[1] Ismiarni Komala, Supandi, Nurhasni, Ofa Suzanti
Betha, Eka Putri, Syarifatul Mufidah,
Muhammad Fikry Awaludin, Mida Fahmi,
Muhammad Reza, dan Nurkhayati Putri
Indriyani, 2018, Kajian Hubungan Struktur-
Aktivitas Pada Etil p-Methoxycinnamate sebagai
Agen Anti-Inflamasi,Indonesia. J.Chem.,18
(1), 60 - 65,
[2] Muhammad Ihtisham Umar , Mohd Zaini Asmawi,
Amirin Sadikun, Item J Atangwho, Mun
Fei Yam, Rabia Altaf, Ashfaq Ahmed, 2012,
Isolasi etil-pmetoksisinamat yang dipandu
bioaktivitas, konstituen anti-inflamasi, dari
ekstrak Kaempferia galanga L.,Molekul,17(7),
8720-34.
[3] Nupur Srivastava, Ranjana, Shilpi Singh, Amit Chand
Gupta, Karuna Shanker, Dnyaneshwar U.
Bawankule, dan Suaib Luqman, 2019, Ekstrak jahe
aromatik (Kaempferia galanga L.) dengan potensi
perbaikan dan perlindungan sebagai makanan
fungsional, di luar kemampuannya rasa dan
manfaat gizi,Toksikol. Reputasi. ,6, 521–528.
[4] S. Kavita, S. Rahul, S. Ashish, 2014, metode HPLC
untuk standarisasi minyak Hedychium spicatum
(Ham) menggunakan EPMC sebagai senyawa
penanda, Kimia
[5] Arslan Azizoglu, Gulcin Azizoglu, Erkan Tuncay
Tanriverdi, Sakine Ozer, Ozgen, 2017, Jurnal
Farmasi Marmara,21(4), 921-930.
[6] Meenakshi S. Akhade, Poonam A. Agrawal, dan
KS Laddha, 2013, Pengembangan dan
Validasi Metode RP-HPLC untuk Estimasi
Simultan Pikrosida I, Plumbagin, dan
Zguggulsterone dalam Formulasi Tablet,Ilmu
Farmasi J India.,75(4), 476–482.
[7] Sari, P., Fatimawali., dan Runtuwene, J,R, 2014,
Validasi Metode Analisis Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi Untuk Penetapan Kadar
Amoksisilin Dalam Plasma Secara In Vitro,
Jurnal Ilmiah Farmasi,4(3), 96-103.
[8] Kui Zhang, Wenxia Wu, Shuge Tian, 2020,
Studi banding penentuan etil p-
metoksisinamat pada rimpang Kaempferia
galanga oleh HPTLCS dan HPLC,JPC –
357
Analisis Ethyl p-Methoxycinnamate dariKaempferia galangaL. Ekstrak dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
Jurnal Kromatografi Planar – TLC Modern, 33,
51–57.
[9] Andrea N. de L. Batista, Renata Colombo, Inara
C. de Pascoli, Helder L. Teles, Geraldo H. Silva,
Giovanni CC Bomfim, Rosilene CR Burgos,
Alberto J. Cavalheiro, Vanderlan da Silva
Bolzani, Dulce HS Silva, Maria Célia H.
Reimberg, 2011, Pengembangan dan validasi
a Metode HPLC untuk standarisasi jamu
J. Trop. Farmasi. kimia 2021. Vol 5. No. 4. p-
ISSN: 2087-7099; e-ISSN: 2407-6090
dan ekstrak komersial dariMyrcia uniflora,Pendeta
bra. Farmacogn,21(3).
[10] Pratik J. Purohit, Pankaj P. Kapupara, Ketan V.
Shah, 2014, Pengembangan dan Validasi
Metode Analitik untuk Pendugaan Kurkumin
dan Asam Galia Secara Simultan dalam
Formulasi Poliherbal Berbeda dengan HPLC,
Penelitian J.Pharm. dan Tek.,7(7),749-753.
358