Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862

Daftar isi tersedia diScienceDirect

Jurnal Internasional Farmasi

halaman utama jurnal:www.elsevier.com/locate/ijpharm

Wawasan ke dalam campuran cairan terapeutik dan formulasi terhadap

terapi tuberkulosis

Philip SantosA, David PiresB, Elsa AnesB, Ana Rita C. DuarteA,*

ALAQV, REQUIMTE, Departemen Kimia Sekolah Sains dan Teknologi NOVA, Caparica, Portugal
BUnit Interaksi Host-Patogen, Lembaga Penelitian Obat-obatan, iMed-ULisboa, Fakultas Farmasi, Universidade de Lisboa, Lisboa, Portugal

INFO ARTIKEL ABSTRAK

Kata kunci: Campuran cairan terapeutik, sebagai sistem eutektik dalam, dianggap sebagai strategi berkelanjutan yang dapat
Obat anti tuberkulosis berguna untuk modifikasi dan peningkatan farmakokinetik dan farmakodinamik bahan aktif yang berbeda. Dalam
Campuran eutektik
penelitian ini, kami menilai stabilitas dan aktivitas antibakteri dari formulasi cairan terapeutik yang disiapkan dengan
Campuran cairan terapeutik
obat anti-tuberkulosis. Terapi tuberkulosis menyajikan berbagai jebakan terkait, misalnya, pemberian rejimen obat
Tuberkulosis
multipel yang berkepanjangan, berbagai efek samping yang parah, rendahnya kepatuhan pasien terhadap
pengobatan dan perkembangan resistensi obat. Selama penelitian ini, dimungkinkan untuk menilai stabilitas
fisikokimia formulasi selama 6 bulan, dengan mikroskop optik terpolarisasi,1H NMR dan FTIR-ATR. Selain itu,
campuran tersebut menghadirkan efek antibakteri terhadap obat yang rentanMycobacterium tuberculosisregangan
(H37Rv). Hal ini sangat jelas untuk campuran dengan etambutol yang tergabung, membuat mereka menarik untuk
dilanjutkan dengan studi lebih lanjut dan evaluasi penerapan klinis. Setelah infeksi, juga diamati bahwa dosis
tunggal dan lebih tinggi tampaknya lebih efektif daripada dosis terpisah yang lebih rendah, yang memungkinkan
produksi formulasi yang ramah pasien.

1. Perkenalan Mtbmenyebar dari pasien ke pasien melalui penghirupan aerosol yang

Tuberkulosis (TB) merupakan penyakit lama yang diduga telah menyertai
manusia modern hingga saat ini. Ini adalah infeksi bakteri yang disebabkan oleh
bakteri yang terkait erat secara filogenetik dari Mycobacterium tuberculosis
kompleks spesies meminjam namanya dari agen penyebab manusia yang paling
representatifMycobacterium tuberculosis(Mtb) (Mehta dan Dutt, 2016; Smith,
2003; Salvatore dan Zhang, 2017). Meskipun merupakan penyakit yang dapat
dicegah dan diobati, penyakit ini masih merupakan salah satu infeksi paling
mematikan di seluruh dunia. Insiden TB telah mengalami penurunan yang lambat
selama bertahun-tahun, namun proporsi kasus TB yang resistan terhadap obat
dan kasus yang resistan terhadap obat secara ekstensif telah menarik perhatian
baru terhadap penyakit ini.Jenewa: Organisasi Kesehatan Dunia, 2021).
terinfeksi yang dihembuskan oleh individu yang terinfeksi (Salvatore dan Zhang,
2017; Marimani et al., 2018). Secara singkat, tetesan kecil yang mengandung 1-3
basil memfasilitasi penyebaran dari saluran pernapasan bagian atas ke paru-paru
dalam (alveolae), di manaMtbdifagosit oleh makrofag alveolar.
Garis pengobatan diterapkan untuk obat-rentanMtbadalah sama yang
ditetapkan lebih dari 40 tahun yang lalu dan terdiri dari pengobatan jangka
panjang dengan rejimen empat obat anti-TB (isoniazid (INH), rifampisin (RIF),
pirazinamid (PZA) dan etambutol (EMB)) selama minimal 6 bulan untuk
mengobati penyakit aktif (Jain et al., 2008; Machado et al., 2016; Sarathy et
al., 2012; Bahuguna dan Rawat, 2020). Pengobatan untuk infeksi yang
resistan terhadap obat lebih kompleks, dengan waktu pengobatan yang
lebih lama dan pemberian obat lini kedua yang lebih toksik dan kurang
efektif.Bahuguna dan Rawat, 2020; Hussain et al., 2019). Itu

Singkatan:API, bahan aktif farmasi; CA, asam sitrat; CFU, unit pembentuk koloni; DES, pelarut eutektik dalam; DMSO, dimetil sulfoksida; EMB, etambutol; FBS, serum
janin sapi; FTIR-ATR, spektroskopi inframerah transformasi fourier dengan pantulan total yang dilemahkan; HEPES, asam 2-[4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]etanasulfonat;
INH, isoniazid;L-Arg,L-arginin; LTTM, campuran suhu transisi rendah; MBC, konsentrasi bakterisida minimal; MEM, media esensial minimum Eagle; MIC, konsentrasi
penghambatan minimal; MOI, banyaknya infeksi;Mtb,mycobacterium tuberculosis; MTS, 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-
tetrazolium; NMR, resonansi magnetik nuklir; PBS, salin buffer fosfat; PMA, phorbol-12-miristat-13-asetat; POM, mikroskop optik terpolarisasi; PZA, pirazinamid; RIF,
rifampisin; RPMI, Roswell Park Memorial Institute 1640 media; TBC, TBC; TEER, hambatan listrik transepitel.

* Penulis yang sesuai.

Alamat email:aduarte@fct.unl.pt (ARC Duarte).

https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2023.122862
Diterima 29 November 2022; Diterima dalam bentuk revisi 23 Februari 2023; Diterima 14 Maret 2023
Tersedia online 23 Maret 2023
0378-5173/© 2023 Penulis. Diterbitkan oleh Elsevier BV Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).
F. Santos dkk. Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862

kemampuan obat yang terbatas untuk mencapai target, permeabilitas dinding sel Tabel 1
bakteri yang rendah (Wallis dan Hafner, 2015; Costa et al., 2016), tahap Campuran cairan terapeutik disiapkan.
pertumbuhan yang berbeda dan metabolisme plastik mikobakteri berkontribusi Cairan Terapi Rasio Molar Singkatan
pada terapi jangka panjang yang dijelaskan (Jain et al., 2008; Machado et al., 2016; Campuran

Sarathy et al., 2012), dan akibatnya, rendahnya kepatuhan pasien terhadap terapi Asam sitrat:L-Arginin: 1:1:4 (Roda et al., 2020) | 1:1:5 (Roda CA:L-Arg:H2HAI
yang juga mendukung perkembangan resistensi obat (Marimani et al., 2018; H2HAI et al., 2020) | 1:1:6 (Santos et al., 2019;
Nathan dan Barry, 2015). Roda et al., 2020) | 1:1:7 ( Santos et al.,
Persistensi TB di seluruh dunia dan kelemahan yang dijelaskan sebelumnya 2019; Roda et al., 2020) | 2:1:7 (Santos
et al., 2019) | 2:1:8 ( Santos et al., 2019
memicu kebutuhan untuk menemukan obat baru yang menunjukkan sifat yang
) | 2:1:9 (Santos et al., 2019)
lebih baik, seperti mampu menargetkan tempat infeksi dan juga rejimen obat
berbeda yang ramah pasien. Farah dan rekan kerjanya menyebutkan beberapa Asam sitrat: 2:1:1:7 (Monteiro et al., 2021) CA:EMB:L-Arg:
fitur menarik, yang harus dipertimbangkan dalam desain obat anti-TB baru, Etambutol:L- H2HAI

Arginin:H2HAI
seperti:(1)aman dan ampuh dengan aktivitas bakterisidal di semua tahap infeksi
Asam sitrat: 1:1:5 (Monteiro et al., 2021) | 2:1:10 ( CA:EMB:H2HAI
TB;(2)memberikan perawatan yang lebih singkat dengan kombinasi berbeda yang Etambutol:H2HAI Santos et al., 2019; Monteiro et al.,
dapat menurunkan jumlah obat yang diminum pasien; (3) menemukan obat 2021)
dengan mekanisme aksi yang luas dan toksisitas rendah untuk mengobati strain
yang resistan terhadap obat; (4) tidak ada atau interaksi obat berkurang; (5)
menemukan formulasi ramah pasien yang lebih murah dan tersedia; dan juga (6) Meja 2
formulasi pemberian terkontrol dengan bioavailabilitas lebih tinggi dan Formulasi yang berbeda disiapkan dengan melarutkan jumlah obat anti-TB yang berbeda
kemanjuran berkelanjutan untuk jangka waktu yang lama, memungkinkan untuk dalam campuran CA:EMB:H2Oh (1:1:5).
mengurangi frekuensi dosis (Farah et al., 2016).
Obat anti tuberkulosis Massa Singkatan
Strategi yang berbeda telah dieksplorasi untuk meningkatkan sifat ditambahkan Perbandingan

senyawa terapeutik, dan pendekatan hijau dan berkelanjutan adalah alat

terbaru yang menunjukkan potensi untuk meningkatkan fitur
farmakokinetik dan farmakodinamik senyawa aktif dan untuk formulasi
sistem penghantaran obat yang beragam. Campuran suhu transisi rendah
(LTTM) dianggap sebagai strategi ramah lingkungan dan berkelanjutan yang
dapat disebut sebagai pelarut alternatif, karena menggambarkan campuran
yang menghadirkan kisaran cairan yang besar, stabilitas termal yang tinggi,
tekanan uap yang dapat diabaikan dan, umumnya, ramah lingkungan dan
dengan toksisitas yang dapat diterima. (Yiin et al., 2016; Perna et al., 2020;
Francisco et al., 2013). LTTM terdiri dari campuran dengan transisi suhu
rendah dan dapat mencakup sistem eutektik dalam (DES) (Perna et al., 2020;
Francisco et al., 2013; Durand et al., 2016), yang dideskripsikan sebagai
campuran dari dua atau lebih senyawa yang digabungkan dalam rasio molar
yang ditentukan, menghasilkan titik leleh yang lebih rendah daripada
senyawa awalnya (Francisco et al., 2013; Abbott et al., 2017; Aroso et al.,
2016). Menurut literatur, campuran ini dibuat terutama oleh adanya ikatan
hidrogen, tetapi juga van der Waals dan/atau interaksi elektrostatik dapat
dibentuk antara senyawa (Francisco et al., 2013; Santana et al., 2019). Ribuan
kombinasi berbeda dimungkinkan untuk diformulasikan (Barros et al., 2017),
yang membuatnya sangat menarik untuk aplikasi yang berbeda termasuk
penelitian farmasi dan pengembangan obat. Ketika sistem eutektik ini
memasukkan setidaknya satu bahan farmasi aktif (API) dalam komposisinya
atau digunakan untuk melarutkan setidaknya satu API untuk meningkatkan
sifat-sifatnya, sistem ini disebut sistem eutektik dalam terapeutik (Álvarez
dan Zhang, 2019; Aroso et al., 2015; Roda et al., 2021).
Baru-baru ini, jenis campuran cairan terapeutik ini telah dieksplorasi
dalam biomedis, mendekati berbagai target dan penyakit termasuk infeksi
TB. Zakrewsky dan rekan kerjanya menguji aktivitas antimikrobaMtbgalur
campuran cairan yang kebal obat dengan kolin klorida:asam geranat (1:2) (
Zakrewsky et al., 2016; Zainal-Abidin dkk., 2019). Juga, dari penelitian
sebelumnya yang dilakukan dalam kelompok, dimungkinkan untuk
merumuskan campuran cairan terapeutik dengan kombinasi EMB danL
-arginin, dalam rasio molar yang berbeda, dengan asam sitrat dan air
menunjukkan peningkatan kelarutan senyawa aktif (Santos et al., 2019).
Dalam penelitian ini, dinilai aktivitas antimikroba dan kemampuan untuk
melarutkan obat anti-TB yang berbeda dalam campuran cairan terapeutik
berdasarkan EMB,L-arginin, asam sitrat dan air. Selain itu, formulasi cairan
terapeutik dengan obat anti-TB yang berbeda disiapkan dan stabilitasnya,
aktivitas biologis dan antimikroba terhadapnya Mtbstrain rentan diamati.
CA:EMB:H2HAI RIF + PZA + INH 1:1:1 CA:EMB:H2O + RPI
(1:1:5) (1:1:1)
RIF + PZA + INH 2:3:1 CA:EMB:H2O + RPI
(2:3:1)
RIF + PZA + INH 2:5:1 CA:EMB:H2O + RPI
(2:5:1)
PZA CA:EMB:H2O + PZA
2. Bagian Eksperimental
2.1. Bahan
Semua reagen digunakan tanpa pemurnian lebih lanjut. Asam sitrat
monohidrat (CA; CAS: 5949-29-1,≥kemurnian 99,5%),L-Arginin (L-Arg;
CAS: 74-79-3,≥98% kemurnian), phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA;
CAS: 16561-29-8) dan IGEPAL CA-630 (CAS: 9002-93-1) dibeli dari Sigma
Aldrich, MO, USA. Etambutol (EMB; CAS: 74-55-5, ≥kemurnian 98%)
diperoleh dari Santa Cruz Biotechnology, Dallas, USA. Hidrazida asam
isonikotinik (INH; CAS: 54-85-3, kemurnian 98%), pirazinamid (PZA, CAS:
98-96-4, kemurnian 98%) dan rifampisin (RIF; CAS: 13292-46-1,≥
kemurnian 95%) diperoleh dari Alfa Aesar, Kandel, Jerman.
Untuk kultur sel digunakan medium esensial minimum Eagle (MEM),
media Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640, serum janin sapi
(FBS), larutan antibiotik-antimikotik (penisilin dan streptomisin), HEPES
(4-(2-hidroksietil)- 1-piperazineethanesulfonic acid) dan sodium
pyruvate dari Corning, USA dan Gibco, UK. Dimethyl sulfoxide (DMSO;
CAS: 67-68-5) dibeli dari Fisher BioReagents dan Cell Titer96®Uji
Proliferasi Sel Satu Larutan Aqueous dari Promega, AS. UntukMtbkultur
dan pengujian menggunakan media agar Middlebrook 7H10, media
Middlebrook 7H9 dan OADC dari Becton, Dickinson and Company, USA.
2.2. Pembuatan campuran cairan terapeutik dan formulasi berdasarkan
campuran CA:EMB:H2Oh (1:1:5)
Dalam studi sebelumnya, campuran cairan terapeutik yang berbeda
disiapkan untuk terapi tuberkulosis (Santos et al., 2019; Roda et al.,
2020). Campuran ini termasuk asam sitrat,L-Arginin, etambutol dan air
digabungkan dalam beberapa rasio molar (Tabel 1). Komponen
dicampur dalam rasio molar yang sesuai dan terus diaduk pada 50-60◦C
hingga terbentuk campuran cairan bening.
Untuk menyiapkan formulasi cairan terapeutik, jumlah obat anti-tuberkulosis
yang berbeda (INH, PZA, RIF) ditambahkan ke dalam campuran CA:

2
F. Santos dkk.
EMB:H2O (1:1:5), menurut perbandingan yang disebutkan dalamMeja 2.
2.3. Pelarutan obat anti TB pada PBS menggunakan campuran cairan
terapeutik sebagai pembawa
Pelarutan obat anti-tuberkulosis dalam campuran cairan terapeutik
dilakukan dengan melarutkan kelebihan obat (INH, RIF atau PZA) dalam
kira-kira 1 g campuran cairan terapeutik yang berbeda dan kemudian
ditambahkan 1 mL larutan PBS. Campuran diaduk (60 rpm) selama 24
jam, sebelum dianalisis. Penentuan kelarutan obat anti tuberkulosis
menggunakan campuran cairan terapeutik sebagai pembawa
dievaluasi dengan spektroskopi UV pada microplate reader (VICTOR
NivoTM, PerkinElmer, Waltham, MA, AS). Absorbansi larutan diukur pada
263 nm untuk INH, 270 nm untuk PZA dan 335 nm untuk RIF. Kurva
kalibrasi disiapkan menggunakan masing-masing obat sebagai standar
dalam PBS (R2= 0,9957 (INH), R2= 0,9919 (PZA), R2= 0,9977 (RIF). Semua
sampel diukur dalam rangkap tiga.
2.4. Mikroskop optik terpolarisasi (POM)
Karakterisasi optik formulasi dengan CA:EMB:H2O (1:1:5) dan obat
anti-tuberkulosis dilakukan pada suhu kamar menggunakan mode
transmisi mikroskop optik terpolarisasi BX-53 (Olympus, Tokyo, Jepang).
Tetesan formulasi ditempatkan pada slide kaca mikroskop dan
kemudian diamati, gambar diperoleh dengan kamera digital (Olympus
SC50) dan dianalisis dengan perangkat lunak Olympus Stream Start
2.4.2 (Olympus, Tokyo, Jepang).
2.5. Resonansi magnetik nuklir (NMR)
Spektroskopi NMR dilakukan untuk mendapatkan1H NMR dan1H-1
Spektra H-NOESY NMR pada spektrometer Bruker Avance III 400
(Bruker, Billerica, MA, USA) pada frekuensi operasi 400,13 MHz. Sampel
disiapkan dalam tabung NMR 5 mm dengan, kira-kira, 350 μL setiap
campuran dan 200 μL DMSO‑D6(Euriso-Top, St. Aubin Cedex, Prancis).
Pergeseran kimia dirujuk ke Me4Si (δ dalam ppm) dan analisis data
dilakukan dengan perangkat lunak MestReNova (11.0.4–18998).
2.6. Spektroskopi inframerah transformasi Fourier (FTIR-ATR)
Spektra inframerah diperoleh pada PerkinElmer Spectrum Two
(Waltham, MA, USA) dengan pantulan total yang dilemahkan (ATR)
dalam mode transmisi dan dengan bilangan gelombang antara 400
dan 4000 cm−1. Spektra diperoleh dari 16 scan dengan 4 cm−1resolusi,
pada suhu kamar.
2.7. Budaya sel
Sel A549 adalah sel epitel alveolar manusia dari karsinoma paru
manusia (DSMZ, ACC 107) dan sel THP-1 adalah garis sel leukemia
monositik akut manusia (ATCC TIB202). Sel-sel A549 dikultur dalam
media MEM yang dilengkapi dengan 10% serum janin sapi dan 1%
larutan antibiotik-antimikotik. Sel THP-1 ditumbuhkan dalam media
RPMI 1640, ditambah dengan 10% serum fetal bovine, 10 mM HEPES
dan 1 mM sodium pyruvate. Sel disubkultur dalam atmosfer yang
dilembabkan 37◦C dengan 5% CO22dan diferensiasi monosit THP-1
menjadi makrofag diinduksi menggunakan phorbol-12-myristate-13-
acetate (PMA) 20 nM, semalam, diikuti dengan periode istirahat 24 jam
tanpa PMA.
2.8. Tes viabilitas sel
Viabilitas sel dievaluasi dengan sel konfluen A549 dan sel nondiferensiasi
dan makrofag konfluen yang diunggulkan pada pelat 96 sumur (2x104sel/
sumur A549; 5x104makrofag/sumur) dan setelah 24 jam
3
Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862
dari penyemaian media dihilangkan dan sel diinkubasi dengan konsentrasi
komponen murni yang berbeda (rifampisin diencerkan dalam media kultur
dengan DMSO 5%), campuran cairan terapeutik dan formulasi yang
diencerkan dalam media kultur, selama 20-24 jam. Setelah waktu inkubasi,
sel dicuci dengan PBS dan viabilitas sel dievaluasi menggunakan CellTiter96
®Uji Proliferasi Sel Satu Larutan Aqueous berdasarkan reagen MTS (3-(4,5-
dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H
-tetrazolium)). Jumlah formazan yang dihasilkan diukur pada 490 nm dalam
microplate reader (VICTOR NivoTM, PerkinElmer, USA) dan viabilitas sel
dinyatakan dalam persentase sel hidup dibandingkan dengan kontrol (sel
yang tidak diobati). Pengujian dilakukan dengan setidaknya tiga percobaan
independen, dalam rangkap tiga, dan data dianalisis dengan GraphPad
Prism 8.0.1.
2.9. Studi permeasi dengan dukungan permeabel transwell
Permeabilitas berbagai kombinasi campuran cairan terapeutik dan
API dievaluasi menggunakan garis sel A549. Sel-sel diunggulkan pada
sisipan transwell 12-sumur (sisipan PET kultur sel Falcon, ukuran pori
0,4 μm, area 0,9 cm2) dengan kerapatan sel 1,26x104sel/sumur (Vieira
et al., 2018). Sel-sel ditanam di media tambahan dan kultur yang
ditambahkan ke sisi apikal dan basolateral. Media diganti setiap 2 hari,
selama 8 hari, hingga tercapai lapisan tunggal yang homogen.
Hambatan listrik transepitel (TEER) diukur di semua sumur dan di
sumur media tanpa sel yang dianggap kosong. TEER diperiksa sebelum
pengujian menggunakan EVOM 3 (epithelial voltohmmeter, World
Precision Instruments, USA), dilengkapi dengan sepasang elektroda
yang ditempatkan di sisi apikal dan basolateral. Nilai TEER yang
diperoleh pada penelitian ini adalah 294±14 O/cm2(berarti±SD). Sampel
diinkubasi pada 37◦C dengan 5% CO22selama 6 jam, dan diambil 0,5 mL
sampel dari sisi basolateral pada titik waktu yang berbeda (0,5, 1, 2, 3,
4, 5 dan 6 jam), kemudian diganti dengan jumlah media segar yang
sama. Sampel dianalisis dan diukur dengan kolom HPLC (Dionex
ICS3000; MERCK Purosphere STAR RP18 250x4mm; deteksi UV pada
210, 238, 280, 320 dan 510 nm; eluen: 20 mM NAH2PO4
+ 0,2% trietilamina pada pH 7,0 dan asetonitril). Analisis dilakukan
pada usia 40◦C. Permeabilitas semu (Paplikasi) untuk senyawa murni,
campuran cairan terapeutik dan formulasi dihitung mengikuti
persamaan (Persamaan.(1)):
ΣMA
Paplikasi(cm/detik)= (1)
A×MD×T
Di manaMAadalah massa senyawa yang meresap setiap titik waktu (g),Aadalah
luas perembesan efektif di mana lapisan tunggal diunggulkan (cm2),MDadalah
massa awal senyawa yang ditambahkan ke sisi apikal (g) danTadalah waktu
perembesan (s). Penyerapan seluler oleh sel A549 diperkirakan dengan
persamaan berikut (Persamaan.(2)):
Penyerapan seluler=C0−CBf−CAf (2)
Di manaC0adalah konsentrasi awal yang ditambahkan pada sisi apikal,CBf
adalah konsentrasi akhir pada sisi basolateral danCAfadalah konsentrasi
akhir pada sisi apikal.
2.10. Aktivitas antimikroba dalam Mtb (H37Rv)
Uji mikrobiologi dilakukan di laboratorium Biosafety Level 3 di Fakultas
Farmasi Universitas Lisbon, menghormati standar penyimpanan akademik
nasional dan Eropa level 3, manajemen laboratorium, dan biosekuriti,
berdasarkan Arahan UE yang berlaku.Mycobacterium tuberculosisH37Rv
(ATCC 27294), suatu strain yang peka terhadap obat, digunakan untuk
penentuan konsentrasi hambat minimal (MIC) dan konsentrasi bakterisidal
minimal (MBC) dari campuran cairan terapeutik, dengan metode
pengenceran kaldu dengan konsentrasi bervariasi antara 0,125 dan 16 μg/
mL. Secara singkat,Mtbkultur pada fase pertumbuhan eksponensial
disentrifugasi dan dicuci dengan
F. Santos dkk.
Gambar 1.Kelarutan berbagai obat anti-TB (A)INH;B)PZA danC)RIF) dalam campuran cairan terapeutik dan PBS. Data disajikan sebagai rata-rata±SD (n = 3), *hal≤0,05,
* * P≤0,005.
PBS, kemudian disuspensikan kembali dalam media biakan segar. Cluster
bakteri dibongkar dan dihilangkan dengan perawatan ultrasonik selama 5
menit diikuti dengan sentrifugasi kecepatan rendah (500×g) selama 2 menit.
Suspensi sel tunggal diverifikasi dengan mikroskop fluoresensi. Konsentrasi
campuran cairan terapeutik yang dipilih diinkubasi dengan suspensi bakteri
yang mengandung sekitar 105unit pembentuk koloni per mL. MIC
ditentukan pada hari ke 10 inkubasi dengan pemeriksaan visual dari pelat.
Untuk penentuan MBC, sampel bakteri diperoleh dari pelat uji MIC,
diencerkan 1:10 dalam air dan dilapisi dalam media padat 7H10 + 10%
OADC. MBC sesuai dengan konsentrasi yang tidak menghasilkan koloni yang
terlihat pada media padat.
2.11. Infeksi makrofag dengan Mtb (H37Rv)
Mtbbiakan disiapkan seperti dijelaskan di atas dan disuspensikan kembali
dalam media biakan makrofag. Makrofag dalam 96-well plate seperti dijelaskan di
atas, terinfeksiMtbpada MOI 0,1 selama 3 jam, pada 37◦C
4
Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862
dengan 5% CO22. Setelah internalisasi, sel dicuci tiga kali dengan PBS dan
ditangguhkan kembali dalam media kultur yang sesuai dengan perlakuan
masing-masing. Pada hari ke-3 pasca infeksi, separuh media kultur diisi
ulang dengan atau tanpa penguatan perlakuan.
2.12. Kelangsungan hidup intraseluler bakteri
Bila diperlukan, sel yang terinfeksi dilisiskan dengan pengobatan 10 menit
dengan larutan IGEPAL 0,05% dalam air, deterjen nonionik, nondenaturasi yang
mengganggu sel eukariotik tetapi tidak memengaruhi viabilitas mikobakteri,
dengan tujuan untuk menilai CFU bakteri intraseluler yang layak. . Pengenceran
serial dari suspensi bakteri yang dihasilkan dilapisi dalam agar Middlebrook 7H10
dengan OADC 10% dan diinkubasi selama 2-3 minggu pada suhu 37◦C sebelum
koloni dapat diamati dan dihitung.
F. Santos dkk.
Gambar 2.Gambar formulasi cairan terapeutik berdasarkan CA:EMB:H2O (1:1:5) dan obat anti TB diperoleh Badan POM pada suhu ruang, setelah 6 bulan penyiapan.
2.13. Analisis statistik
Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak
GraphPad Prism 8.0.1. Semua pengukuran dilakukan dalam rangkap tiga
dan data disajikan sebagai rata-rata±SD. Normalitas dievaluasi dengan uji
Shapiro-Wilk. Data yang memenuhi distribusi normal diuji dengan analisis
ANOVA satu arah dan dua arah dengan Bonferronipost-hocmenguji
beberapa perbandingan. Data yang tidak mengikuti distribusi normal diuji
dengan uji non parametrik uji Kruskal-Wallis dan uji Dunn digunakan untuk
perbandingan berganda. Perbedaan dianggap signifikan ketikaPnilai dulu≤
0,05.
3. Hasil dan Pembahasan
Penggunaan campuran cairan terapeutik telah dieksplorasi sebagai
pendekatan yang lebih berkelanjutan untuk memodifikasi dan meningkatkan
karakteristik obat yang ada, yang pada akhirnya dapat meningkatkan kinerja dan
kemanjurannya dalam pengobatan berbagai penyakit. Hal ini dicapai, terutama,
melalui interaksi ikatan hidrogen yang terjadi antara pasangan campuran yang
berbeda. Beberapa contoh penggunaan campuran jenis ini untuk pendekatan
terapeutik, telah dilaporkan dalam literatur seperti penggunaan campuran
berdasarkan kolin klorida dan asam askorbat untuk meningkatkan kelarutan
deksametason; (Silva et al., 2018) menggunakan API untuk merumuskan
campuran cair sebagai ibuprofen (Aroso et al., 2015; Silva et al., 2020; Pereira et
al., 2019; Stott et al., 1998; Silva et al., 2021) atau asam asetilsalisilat (Aroso et al.,
2016) dikombinasikan dengan terpene berbeda yang dapat mempotensiasi
aktivitas dan karakteristik API; menggabungkan asam sitrat dan etambutol atau
arginin yang meningkatkan kelarutan dan permeabilitasnya; (Santos et al., 2019)
atau bahkan menggabungkan API yang berbeda, seperti lidokain dan ibuprofen (
Mann et al., 2020).
Rasio yang berbeda dalam komponen campuran dapat
memengaruhi karakteristik fisikokimianya, misalnya, rasio air yang
berbeda dapat menyebabkan modifikasi viskositas media, serta
polaritas dan kekuatan interaksi yang tercipta antara komponen
campuran (Ma et al., 2018; Vilková et al., 2020). Beberapa penelitian
menguatkan hipotesis bahwa penambahan sejumlah kecil air
berkontribusi untuk memperkuat interaksi (misalnya, ikatan hidrogen,
van der Walls, gaya elektrostatik) antara komponen campuran,
mempertahankan struktur antarmolekulnya yang kompleks. Namun,
penambahan air dalam jumlah besar (hingga 50%) akan menyebabkan
disosiasi molekul masing-masing komponen, mengganggu jaringan
campuran dan secara bertahap menghidrasi molekul dan karenanya
5
Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862
melarutkan komponen, membentuk larutan berair (Monteiro et al., 2021; Ma
et al., 2018; Vilková et al., 2020; Roda et al., 2021; El Achkar et al., 2019; Dai et
al., 2015; Zhekenov et al., 2017; Hammond et al., 2017). Baru-baru ini, Roda
dkk memusatkan perhatiannya untuk memahami peran fungsi air sebagai
komponen campuran cairan dengan CA,L-Arg dan air, mengevaluasi melalui
berbagai teknik karakterisasi fisikokimia dan pemodelan termodinamika
peran air dalam campuran. Mereka mengamati bahwa air akan mengarah
pada pembentukan spesies bermuatan dan, juga, bertindak sebagai
mediator ikatan hidrogenL-Arg dan CA (Roda et al., 2021). Dalam studi lain,
Monteiro dan rekan kerjanya mengamati, dengan dinamika molekuler,
adanya interaksi antara CA dan EMB dan berasumsi bahwa molekul air
diperlukan untuk membentuk jaringan ikatan hidrogen yang memberikan
kestabilan pada campuran. Mereka juga memperhatikan bahwa dengan
mengubah rasio komponen campuran cair, dalam kasus CA:EMB:H2O (1:1:5)
mendorong interaksi tambahan melalui ikatan hidrogen. Dengan
penambatan molekuler, penulis lebih lanjut mengeksplorasi internalisasi
EMB melalui transporter ABC mikobakteri (Rv1819c), menyarankan
internalisasi EMB yang menguntungkan ketika dalam bentuk campuran cair
dengan CA dan/atauL-Arg (Monteiro et al., 2021).
Mempertimbangkan studi yang dilaporkan dengan campuran ini yang
menunjukkan peran berbagai komponen campuran dalam penguatan
interaksinya, khususnya untuk CA:EMB:H2Oh (1:1:5). Dalam karya ini, kami
merumuskan dua hipotesis, satu adalah kemungkinan menyiapkan campuran
cairan terapeutik yang stabil yang menggabungkan obat anti-TB yang digunakan
sebagai pengobatan lini pertama, dan yang lainnya adalah untuk membuktikan
kelayakan formulasi ini melaluiin vitrostudi bioaktivitas, yaitu jika sistem ini
menunjukkan aktivitas antibakteri terhadapMtb.
3.1. Kelarutan obat anti TB lini pertama menggunakan campuran cairan terapeutik yang
berbeda sebagai pembawa
Campuran cairan terapeutik telah dijelaskan dalam literatur sebagai
campuran yang berpotensi meningkatkan kelarutan API, dan bioavailabilitas
keseluruhannya dan, akibatnya, kemanjuran terapeutiknya. Jenis studi yang
berbeda dapat dilakukan untuk mengevaluasi pengaruh campuran ini pada
kelarutan obat, tergantung jika API digabungkan dalam campuran cair.
Aroso et al., 2016; Santos et al., 2019; Stott et al., 1998; Duarte et al., 2017)
atau jika dilarutkan dalam campuran cair, gunakan itu sebagai pembawa (
Roda et al., 2021; Silva et al., 2018; Morrison et al., 2009; Tajmir dan Roosta,
2020; Li dan Lee, 2016). Di sini, kami menggunakan pendekatan terakhir di
mana kami menjenuhkan campuran cairan terapeutik dan PBS
F. Santos dkk.
Gambar 3.1Spektra H NMR dari formulasi cairan terapeutik dengan superposisi spektrum dari 0 dan 6 bulan formulasi.A)CA:EMB:H2O (1:1:5) + RPI (1:1:1),B)CA:EMB:H2O
(1:1:5) + RPI (2:3:1),C)CA:EMB:H2O (1:1:5) + RPI (2:5:1),D)CA:EMB:H2O (1:1:5) + PZA.
(50:50 w/w) dengan senyawa INH, PZA dan RIF (Gambar 1).
Mengenai uji kelarutan dengan obat anti-TB, kita dapat mengamati bahwa
campuran dengan rasio molar CA dan air yang lebih tinggi menunjukkan
kelarutan INH yang lebih rendah. Kemungkinan penurunan pH sistem yang lebih
tinggi mempengaruhi kelarutan INH. Yang menunjukkan pembubaran INH yang
lebih baik adalah CA:L-Arg:H2O (1:1:4 dan 1:1:7), menjadi formulasi 1:1:4 yang
menunjukkan sedikit peningkatan kelarutan dibandingkan dengan INH itu sendiri.
Berlawanan dengan INH, PZA menghadirkan kelarutan yang lebih baik dalam
campuran dengan rasio CA dan air yang lebih tinggi, lebih baik daripada PZA itu
sendiri. Campuran cairan terapeutik dengan EMB tergabung adalah campuran
yang menunjukkan peningkatan kelarutan PZA, yang penting untuk kemungkinan
penyesuaian kembali dosis PZA yang digunakan dalam terapi TB, karena ini adalah
salah satu obat yang memerlukan dosis lebih tinggi agar efektif melawanMtb (
Nahid et al., 2016; Claire du Toit et al., 2006). Dalam kasus RIF, tidak diamati
peningkatan kelarutannya, mungkin karena karakteristik intrinsik RIF karena
merupakan molekul berukuran besar dengan struktur kompleks dan karakter
hidrofobik (Motiei et al., 2021; Ermondi et al., 2021). Namun, meskipun kelarutan
RIF rendah, sistem yang disiapkan dapat melarutkan semua obat anti-TB lini
pertama, yang menunjukkan kemungkinan untuk memformulasikan campuran
cairan terapeutik dengan keempat obat anti-TB, seperti yang dihipotesiskan dalam
penelitian ini. Formulasi yang menggabungkan campuran cairan terapeutik dan
obat anti-TB didasarkan pada sistem CA:EMB:H2O (1:1:5), karena penelitian
sebelumnya (Santos et al., 2019) dan, studi dinamika molekuler yang
memungkinkan untuk mengamati penguatan interaksi molekuler antara
komponen-komponen sistem ini (Monteiro et al., 2021).
6
Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862
3.2. Uji stabilitas fisikokimia formulasi berdasarkan CA:EMB:H2O
(1:1:5) dan obat anti TB
Untuk lebih memahami bagaimana formulasi berdasarkan CA:EMB:H2O
(1:1:5) dan obat anti-TB mempertahankan strukturnya dari waktu ke waktu,
kami menggunakan teknik yang berbeda (POM, NMR dan FTIR-ATR) untuk
mengevaluasi stabilitas fisikokimia segera setelah persiapan dan 6 bulan
kemudian. Campuran dipertahankan pada suhu kamar (20-25◦C), selama
periode ini.
Mikroskopi optik terpolarisasi (POM) digunakan untuk mengamati
campuran yang berbeda dengan cross polarizer untuk memverifikasi
keberadaan kristal dalam campuran, mendeteksi apakah campuran itu
homogen atau menunjukkan fase yang berbeda (Aroso et al., 2017). Seperti
yang dapat kita amati diGambar 2, gambar formulasi cairan di bawah
mikroskop terpolarisasi berwarna hitam seragam, yang berarti cairan
homogen dan tidak ada kristal atau endapan dalam formulasi.
Studi NMR dilakukan untuk mengamati apakah terjadi perubahan signifikan
dalam struktur formulasi cairan terapeutik 6 bulan setelah persiapan. Seperti yang
diwakili diGambar 3, itu1H NMR menunjukkan beberapa perbedaan terkait gugus
–OH, yaitu segera setelah preparasi menunjukkan puncak yang lebih tajam
sedangkan setelah 6 bulan puncak tampak lebih luas. Di dalam
1H NMR, proton –OH, biasanya cukup dapat dipertukarkan dan penampakan
serta intensitasnya dalam spektrum bergantung pada berbagai faktor
seperti suhu analisis, konsentrasi sampel, pelarut yang digunakan untuk
menyiapkan sampel, antara lain (Charisiadis et al., 2014). Luasnya gugus –
OH dapat dijelaskan dengan beberapa pertukaran proton gugus –OH
dengan proton dari pelarut. Juga, sedikit variasi dalam konsentrasi
campuran ketika NMR dilakukan dapat berkontribusi pada perluasan puncak
dari gugus –OH yang muncul di dekat garis dasar di semua spektrum dari 6
bulan. Meskipun perbedaan pada
F. Santos dkk. Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862

Gambar 4.Spektra FTIR-ATR formulasi cair berdasarkan CA:EMB:H2O (1:1:5) dan obat anti TB (A)CA:EMB:H2Oh (1:1:5),B)CA:EMB:H2O (1:1:5) + RPI (1:1:1),C) CA:EMB:H2O
(1:1:5) + RPI (2:3:1),D)CA:EMB:H2O (1:1:5) + RPI (2:5:1),e)CA:EMB:H2O (1:1:5) + PZA.

7
F. Santos dkk. Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862

Tabel 3 terlihat bahwa campuran cairan terapeutik menghadirkan spektrum dengan

IC50nilai untuk komponen murni, campuran cairan terapeutik dan formulasi dalam puncak yang luas karena adanya air dalam campuran, terutama di wilayah
sel epitel alveolar A549. Hasil dinyatakan sebagai rata-rata±SD dari setidaknya tiga antara 3600 dan 2800 cm−1. Namun, juga dapat mengidentifikasi
percobaan independen yang dilakukan dalam rangkap tiga. – OH peregangan EMB, CA (-C-OH) dan air di wilayah yang sama sekitar
Senyawa IC50(mg/mL) 3550–3200 cm−1. Ini menegaskan interaksi antarmolekul antara
dalam sel A549 berbagai komponen campuran cairan dalam kelompok ini, dan yang
Komponen Murni Asam sitrat 1.43±0,13 sebelumnya dilaporkan oleh Santos dan rekan kerja melalui
L-Arginin 12.30±0,56 1H-1H-NOESY NMR (Santos et al., 2019). Kehadiran gugus –OH dari CA (–
Etambutol 21.50±2.94 COOH) terdeteksi, kira-kira, pada 3000 cm-−1dan -C=O bentangan CA (–
Isoniazid 33.53±1.73
COOH) terdeteksi antara 1800 dan 1700 cm−1, puncak antara 1500 dan 1400
Pirazinamid 31.76±5.59
Rifampisin 0,69±0,34 cm-1−1tampaknya sesuai dengan vibrasi ulur kelompok heteroatom.
Mengenai kelarutan obat anti TB dalam jumlah kecil dalam cairan campuran
Campuran Cairan Terapi CA:EMB:H2O (2:1:10) 2.86±0,60
CA:EMB:H2O (1:1:5) dapat kita amati dengan FTIR-ATR bahwa struktur
CA:EMB:H2O (1:1:5) 3.43±0,55 campuran cairan tidak berubah dengan adanya obat anti TB tersebut.
CA:EMB:L-Arg:H2Oh 4.10±0,70 Mengenai stabilitas formulasi ini dari waktu ke waktu, dari penelitian kami
(2:1:1:7) tidak ada perbedaan signifikan yang terdeteksi pada spektrum yang dapat
CA:L-Arg:H2O (1:1:4) 5.80±1.45
mempengaruhi struktur kimia campuran. Dengan demikian, membuktikan
KA:L-Arg:H2O (1:1:5) 5.36±1.33
KA:L-Arg:H2O (1:1:6) 6.62±1.04 bahwa mereka cocok untuk digunakan setidaknya selama 6 bulan tanpa
KA:L-Arg:H2O (1:1:7) 6.12±0,86 menunjukkan sinyal degradasi atau kehilangan fungsinya karena gangguan
KA:L-Arg:H2O (2:1:7) 3.08±0,99 ikatan antarmolekul.
KA:L-Arg:H2O (2:1:8) 3.24±0,21
KA:L-Arg:H2O (2:1:9) 3.37±0,23
Campuran Cairan Terapi CA:EMB:H2O + RPI 2.59±1.28 3.3. Studi viabilitas sel
Formulasi (1:1:1)
CA:EMB:H2O + RPI 2.51±1.69
Penilaian viabilitas sel sangat penting untuk memahami perilaku
(2:3:1)
CA:EMB:H2O + RPI 3.10±1.99 campuran yang diformulasikanin vitro. Konsentrasi hambat setengah
(2:5:1) maksimal (IC50) dinilai dalam garis sel A549, sel epitel alveolar manusia (
CA:EMB:H2O + PZA 3.45±0,21 Tabel 3). Dari hasil yang didapat dan IC yang dihitung50kami mengamati
bahwa di antara komponen murni yang digunakan untuk memformulasi
campuran, CA dan RIF obat anti-TB adalah yang memiliki IC lebih rendah50
luasnya gugus –OH, struktur formulasi cair tampaknya dipertahankan
nilai-nilai. Ini berarti jumlah senyawa yang lebih sedikit diperlukan untuk menghambat
dari waktu ke waktu.
setengah dari viabilitas sel, menunjukkan komponen murni sitotoksisitas yang lebih
Untuk meneliti lebih lanjut perubahan kimia yang dapat terjadi dalam struktur
tinggi daripada ketika digabungkan dalam campuran cair.
formulasi cair dan mengklarifikasi apakah formulasi ini stabil dari waktu ke waktu,
Secara komparatif, nilai yang diperoleh untuk campuran cairan terapeutik yang
spektroskopi inframerah juga dilakukan. Metode ini memungkinkan untuk
diformulasikan sebagian besar berbeda dari nilai yang diperoleh untuk komponen murni.
mendeteksi keberadaan gugus fungsi dan ikatan yang berbeda dan dengan
Dari hasil yang diperoleh dan meskipunL-Arg menyajikan nilai IC yang lebih rendah50
refleksi total yang dilemahkan memungkinkan untuk meningkatkan sensitivitas
daripada EMB, bila dicampur dengan komponen campuran lainnya (CA dan air)
permukaan dan menggunakan sampel cairan, seperti formulasi cairan terapeutik.
campuran yang mengandung EMB memiliki IC yang sedikit lebih rendah50
Deteksi perubahan frekuensi puncak dan intensitasnya dapat menunjukkan
daripada campuran denganL-Arg. Rasio molar komponen yang berbeda, juga
perubahan struktur kimia campuran. Di dalam Gambar 4, kita dapat mengamati
mengubah nilai IC secara substansial50, menjadi campuran dengan rasio CA yang
tumpang tindih spektrum dari periode waktu yang berbeda (0 dan 6 bulan).
lebih tinggi yang menunjukkan nilai IC yang lebih rendah50dan akibatnya,
Spektrum pertama menyajikan campuran cairan terapeutik tanpa menambahkan
sitotoksisitas lebih tinggi, mungkin karena peningkatan keasaman campuran.
obat anti-TB (INH, RIF, PZA) dan membandingkan spektrum ini dengan komponen
Peningkatan rasio air dalam campuran, secara umum, menyebabkan sedikit
murni (Gambar S1) dia
peningkatan viabilitas sel. Untuk campuran cairan terapeutik

Gambar 5.Viabilitas sel dievaluasi dalam makrofag pada 0,625 mg/mL dan 0,080 mg/mL. Data disajikan sebagai rata-rata±SD (n = 3).

8
F. Santos dkk.
Gambar 6.Aktivitas intraseluler formulasi cairan terapeutik pada makrofag yang terinfeksi H37Rv. Aktivitas dievaluasi pada titik waktu yang berbeda, selama 9 hari, menggunakan
konsentrasi yang berbeda: 16 μg/mL dan 8 μg/mL ditambah dosis lain 8 μg/mL pada hari ke 3. Unit pembentuk koloni (CFU) ditentukan dengan menghitung koloni berasal dari bakteri
yang masih hidup pada setiap titik waktu. Data disajikan sebagai rata-rata±SD (n = 3), ****p≤0,0001, jika dibandingkan dengan kontrol.
formulasi diamati penurunan viabilitas sel dibandingkan dengan
campuran cair awal (CA:EMB:H2O (1:1:5)), karena penambahan
sejumlah kecil obat anti-TB yang berbeda (INH, PZA, RIF), namun
penurunan ini tidak signifikan secara statistik.
Setelah mengevaluasi viabilitas sel dalam sel A549, viabilitas sel dalam
makrofag THP-1 juga dievaluasi, dengan mempertimbangkan IC50
nilai ditentukan dalam sel A549. Karena IC yang lebih rendah50nilai ditemukan di
RIF (0,69±0,34) kami menguji viabilitas sel untuk makrofag dengan konsentrasi di
bawah IC50ditentukan untuk RIF untuk menjamin bahwa kami menemukan batas
konsentrasi non-toksik yang dapat digunakan dalam penelitian lebih lanjut
dengan mikobakteri.Gambar 5menunjukkan viabilitas sel dalam makrofag dari
semua senyawa pada 0,625 mg/mL dan 0,080 mg/mL. Dari hasil yang diperoleh
dapat diamati bahwa RIF bersifat sitotoksik pada 0,625 mg/mL, namun pada 0,080
mg/mL tidak diamati. Oleh karena itu, kita dapat mengasumsikan bahwa semua
campuran cair dan senyawa murni (RIF<0,080 mg/mL) bersifat nonsitotoksik untuk
makrofag, karena menunjukkan viabilitas sel hampir 100% (lihatGambar 6).
3.4. Studi permeasi setelah terpapar formulasi cairan terapeutik
Ituin vitrostudi tentang pengangkutan molekul dan/atau formulasi
penting untuk memperkirakan kemampuan molekul untuk menembus
melalui berbagai model penghalang hidup, sebagai satu lapisan tunggal
atau kultur bersama. Untuk meniru penghalang paru, kami menggunakan
sistem transwell yang memungkinkan pembentukan dua lingkungan mikro
yang berbeda (sisi apikal dan basolateral). Di sisi apikal dibiakkan sel epitel
alveolar (A549) sampai mereka berdiferensiasi dan membentuk lapisan
tunggal seluler (model penghalang), yang membentuk epitel terpolarisasi
dan mencegah aliran arus ion di sepanjang
9
Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862
jalur paraseluler. Setelah pemaparan campuran cairan terapeutik ke model
penghalang paru, selama 6 jam, kami memperkirakan permeabilitas yang
tampak (Tabel 4) untuk setiap senyawa dan diamati bahwa obat anti-TB
(EMB, INH, PZA) yang diuji menunjukkan perembesan yang lebih tinggi
daripada formulasi cair. Antara formulasi cairan terapeutik, perbedaan kecil
diamati. Namun, tampaknya ada kecenderungan peningkatan permeabilitas
dengan meningkatnya rasio obat yang ada dalam formulasi. Formulasi
dengan PZA menyajikan permeabilitas terendah, hampir satu-satunya
senyawa yang tertahan di sisi apikal.
Mengenai serapan seluler yang diperkirakan untuk setiap formulasi
dalam monolayer seluler A549, kita dapat menyimpulkan bahwa sejumlah
besar senyawa yang dipelajari diinternalisasi oleh sel alih-alih melewati sisi
apikal ke sisi basolateral, yang membenarkan permeasi formulasi yang lebih
rendah melalui penghalang. model sel A549.
Selain itu, perkiraan serapan seluler dalam sel A549 menunjukkan
bahwa, dalam kasus formulasi cair, konsentrasi formulasi yang lebih
tinggi terakumulasi di dalam sel dalam konsentrasi tidak beracun
daripada meresap dari sisi apikal ke sisi basolateral, kecuali untuk
formulasi dengan PZA yang tetap di sisi apikal. Permeabilitas formulasi
melalui model penghalang paru ini lebih rendah dibandingkan dengan
obat murni, dihipotesiskan bahwa formulasi tetap berada di epitel dan
tidak diserap ke sirkulasi sistemik, tetap berada di tempat infeksi.
3.5. Aktivitas antimikroba di H37Rv
Aktivitas antimikroba dievaluasiin vitrountuk obat-sensitif Mtbstrain
H37Rv dengan konsentrasi yang terbukti tidak toksik terhadap sel (16 –
0,125 µg/mL), dan nilai daya hambat minimal
F. Santos dkk. Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862

Tabel 4 (Aliansi, 2008; Aliansi, 2008; Aliansi, 2008; Aliansi, 2008). RIF dan INH adalah
Perkirakan permeabilitas yang tampak dan serapan seluler dari uji transwell, menggunakan yang memberikan efek yang lebih nyataMtb (H37Rv). Mengenai campuran
monolayer seluler A549 sebagai membran. cairan terapeutik yang mengandung EMB dalam komposisinya adalah yang
Menggabungkan Papp Terakhir Terakhir Diperkirakan menunjukkan aktivitas yang lebih baik terhadap H37Rv, menjadi yang
(10-5 Konsentrasi Konsentrasi seluler memiliki rasio CA dan air yang lebih rendah (CA: EMB:H2O (1:1:5)) yang
cm/detik) di sisi apikal di basolateral penyerapan
menyajikan kinerja yang lebih baik terhadap H37Rv (2 μg/mL). Mengenai
(mg/mL)* sisi (mg/mL) (mg/mL)
formulasi yang disiapkan dengan campuran cairan terapeutik CA:EMB:H2O2
Etambutol 2.484 – – – (1:1:5) dan jumlah obat anti-TB yang berbeda, aktivitas serupa diamati
±
dibandingkan dengan cairan terapeutik saja, dengan pengecualian
1.279
Isoniazid 1.663 – – – formulasi yang hanya ditambahkan PZA yang memerlukan konsentrasi lebih
± tinggi untuk menghambat pertumbuhan bakteri. .
0,316
Pirazinamid 3.007 – – –
±
0,896
3.6. Efek pada Mtb (H37Rv) selama infeksi pada makrofag
Rifampisin 0,339 – – –
± Infeksi makrofag THP-1 dengan H37Rv dan perawatan posterior
0,068 dengan formulasi dilakukan untuk mengevaluasi efek formulasi dalam
CA:EMB:H2HAI 0,714 – – –
kelangsungan hidup intraseluler dariMtb. Konsentrasi terpilih yang
(1:1:5) ±
0,472 diuji tidak memengaruhi viabilitas makrofag, seperti yang diharapkan
CA:EMB:H2HAI 0,656 0,016 0,009 1.237 dari studi viabilitas yang ditunjukkan sebelumnya dan berada dalam
+ RPI ± kisaran MIC yang diuji. Dua pendekatan diikuti. Dosis tunggal 16 μg/mL
(1:1:1) 0,318 diberikan kepada makrofag yang terinfeksi serta dua dosis 8 μg/mL,
CA:EMB:H2HAI 0,659 0,038 0,050 1.223
satu dosis pada hari ke-0 ditambah dosis baru 8 μg/mL pada hari ke-3
+ RPI ±
(2:3:1) 0,484 pasca infeksi. Diamati bahwa dibandingkan dengan kontrol, campuran
CA:EMB:H2HAI 0,715 0,086 0,049 1.272 dan formulasi menunjukkan aktivitas antibakteri terhadap H37Rv yang
+ RPI ± menurunkan CFU selama masa percobaan, menghambat pertumbuhan
(2:5:1) 0,503
bakteri hingga setidaknya 9 hari kultur. Menarik juga untuk diamati
CA:EMB:H2HAI 0,292 1.085 0,003 0,220
+ PZA ± bahwa meskipun pola aktivitas antibakteri yang disajikan serupa,
0,113 pengobatan dengan dosis awal 8 μg/mL dan penguatan setelah 3 hari
dengan tambahan 8 μg/mL terbukti kurang efektif dibandingkan
* Nilai indikatif, diperkirakan dari satu replika.
pemberian dosis tunggal yang lebih tinggi pada awal infeksi (16 μg/
mL). Seperti yang diharapkan, dengan peningkatan rasio obat anti-TB
Tabel 5 yang dilarutkan dalam campuran cairan terapeutik terlihat peningkatan
MIC dan MBC ditentukanin vitrodi dalammycobacterium tuberculosis(H37Rv), setelah 7 aktivitas antibakteri terhadap H37Rv.
hari pengobatan. Efek yang lebih menonjol terhadap pertumbuhan Mtb diamati dengan
Menggabungkan MIC MBC Menggabungkan MIC MBC pemberian dosis tunggal yang lebih tinggi di awal, bila dibandingkan
(μg/ml) (μg/ml) (μG/ (μG/ dengan kontrol, yang dapat menjadi keuntungan untuk menyesuaikan
ml) ml) rejimen terapeutik dan, misalnya, untuk meningkatkan kepatuhan terhadap
Asam sitrat > 16 > 16 CA:L-Arg:H2Oh > 16 t pasien terhadap pengobatan.
(1:1:5)
L-Arginin > 16 > 16 CA:L-Arg:H2Oh > 16 t 4. Kesimpulan
(1:1:6)
Etambutol 1 2 CA:L-Arg:H2Oh > 16 > 16
(1:1:7)
Campuran cairan terapeutik sebagai sistem eutektik dalam telah
Isoniazid <0,125 <0,125 CA:L-Arg:H2Oh > 16 t dipelajari sebagai pendekatan yang lebih berkelanjutan untuk mengatasi
(2:1:7) terapi tuberkulosis, meningkatkan sifat obat anti-tuberkulosis yang ada.
Pirazinamid > 16 > 16 CA:L-Arg:H2Oh > 16 t Seperti yang dibuktikan oleh penelitian ini, campuran cairan terapeutik dan
(2:1:8)
formulasinya menunjukkan stabilitas fisikokimia hingga 6 bulan, aktivitas
Rifampisin <0,125 0,25 CA:L-Arg:H2Oh > 16 > 16
(2:1:9) terapeutik melawanMtb(H37Rv) dan juga meningkatkan kelarutan
CA:EMB:H2HAI 4 8 CA:EMB:H2HAI 2 4 pirazinamid menggunakan campuran cairan terapeutik. Untuk menjawab
(2:1:10) + RPI (1:1:1) kelemahan terapi tuberkulosis, campuran ini menampilkan dirinya sebagai
CA:EMB:H2HAI 2 4 CA:EMB:H2HAI 2 4
pendekatan yang lebih berkelanjutan yang berpotensi berkontribusi pada
(1:1:5) + RPI (2:3:1)
CA:EMB:L-Arg: 4 8 CA:EMB:H2HAI 2 4 pengobatan TB.
H2Oh (2:1:1:7) + RPI (2:5:1)
CA:L-Arg:H2HAI > 16 t CA:EMB:H2HAI 2 8 Pernyataan kontribusi kepengarangan CRedit
(1:1:4) + PZA

* dan tidak ditentukan. Filipina Santos:Konseptualisasi, Investigasi, Metodologi, Kurasi

konsentrasi (MIC) dan konsentrasi bakterisidal minimal (MBC) dihitung
dan disajikan dalamTabel 5.
Dari penentuan nilai MIC dan MBC kami mengamati beberapa
variabilitas dalam komponen murni, seperti yang diharapkan obat anti-TB
lebih efektif dan dengan MIC dan MBC lebih rendah dari CA danL-Arg,
dengan pengecualian PZA yang diketahui hanya aktif pada nilai pH rendah (
Salfinger dan Heifets, 1988). Selanjutnya, nilai yang dilaporkan untuk obat
anti-TB sesuai dengan penelitian sebelumnya yang disajikan dalam literatur
Data, Witting – draft asli.David Pires:Konseptualisasi, Investigasi,
Metodologi, Kurasi Data, Witting – draft asli. Elsa Anes:Konseptualisasi,
Analisis formal, Akuisisi pendanaan, Pengawasan, Validasi, Penulisan –
review & editing.Ana Rita C. Duarte:Konseptualisasi, Analisis formal,
Akuisisi pendanaan, Pengawasan, Validasi, Penulisan – review &
editing.
Deklarasi Kepentingan Bersaing
Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak mengetahui persaingan finansial

10
F. Santos dkk.
kepentingan atau hubungan pribadi yang dapat memengaruhi pekerjaan yang
dilaporkan dalam makalah ini.
Ketersediaan data
Data akan tersedia berdasarkan permintaan.
Terima kasih
Proyek ini telah menerima dana dari European Union's Horizon
2020 (European Research Council) berdasarkan perjanjian hibah No
ERC-2016-CoG 725034 dan didukung oleh Associate Laboratory for
Green Chemistry-LAQV yang dibiayai oleh dana nasional dari FCT/
MCTES (UIDB /50006/2020) dan dari hibah dari National Foundation for
Science, FCT Fundação para a Ciência e Tecnologia – Portugal, PTDC/
SAU-INF/28182/2017 ke EA, UID/DTP/04138/2019 (ke IMed-UL Lisboa ).
Kami juga berterima kasih atas dukungan ADEIM-FFUL (Associação
para o Ensino ea Investigação em Microbiologia).
Lampiran A. Data tambahan
Data tambahan untuk artikel ini dapat ditemukan online dihttps://doi.
org/10.1016/j.ijpharm.2023.122862.
Referensi
Abbott, AP, Ahmed, EI, Prasad, K., Qader, IB, Ryder, KS, 2017. Cair
formulasi obat-obatan dengan pembentukan eutektik. Kesetimbangan Fase Fluida. 448, 2–
8. https://doi.org/10.1016/j.fluid.2017.05.009.
Aliansi, TB, 2008. Isoniazid. Tuberkulosis 88 (2), 112–116.https://doi.org/10.1016/
S1472-9792(08)70011-8.
Aliansi, TB, 2008. Rifampisin. Tuberkulosis 88 (2), 151–154.https://doi.org/10.1016/
S1472-9792(08)70024-6.
Aliansi, TB, 2008. Etambutol. Tuberkulosis 88 (2), 102–105.https://doi.org/
10.1016/S1472-9792(08)70008-8.
Aliansi, TB, 2008. Pirazinamid. Tuberkulosis 88 (2), 141–144.https://doi.org/
10.1201/9781315152110.
Álvarez, MS, Zhang, Y., 2019. Membuat sketsa pelarut neoterik untuk meningkatkan obat
bioavailabilitas. J.Kontrol. Rilis 311–312, 225–232.https://doi.org/10.1016/j.
jconrel.2019.09.008.
Aroso, IM, Craveiro, R., Rocha, Â., et al., 2015. Desain sistem pelepasan terkontrol untuk
THEDES - Pelarut eutektik terapeutik dalam, menggunakan teknologi cairan
superkritis. Int. J. Farmasi. 492 (1–2)https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2015.06.038.
Aroso, IM, Silva, JC, Mano, F., et al., 2016. Peningkatan Disolusi Bahan Aktif
bahan farmasi dengan sistem eutektik terapeutik dalam 98, 57–66.https://doi.org/
10.1016/j.ejpb.2015.11.002.
Aroso, IM, Paiva, A., Reis, RL, Duarte, ARC, 2017. Pelarut eutektik dalam alami
dari kolin klorida dan betaine – Sifat fisikokimia. J.Mol. Liq. 241, 654–661.https://
doi.org/10.1016/j.molliq.2017.06.051.
Bahuguna, A., Rawat, DS, 2020. Gambaran umum obat antituberkulosis baru, obat
kandidat, dan target mereka. Kedokteran Res. Wahyu 40 (1), 263–292.https://doi.org/
10.1002/med.21602.
Barros, AA, Silva, JM, Craveiro, R., Paiva, A., Reis, RL, Duarte, ARC, 2017. Hijau
pelarut untuk meningkatkan proses impregnasi dalam biomedis. Curr Opin
Green Sustain Chem. 5, 82–87.https://doi.org/10.1016/j.cogsc.2017.03.014.
Charisiadis, P., Kontogianni, VG, Tsiafoulis, CG, Tzakos, AG, Siskos, M.,
Gerothanassis, IP, 2014. 1H-NMR sebagai alat struktural dan analitik ikatan
hidrogen intra dan intermolekul produk alami dan senyawa model yang
mengandung fenol. Molekul 19, 13643–13682.https://doi.org/10.3390/
molekul190913643.
Claire du Toit, L., Pillay, V., Danckwerts, MP, 2006. Kemoterapi tuberkulosis:
pendekatan pemberian obat saat ini. Bernafas. Res. 7 (118), 1–18.https://doi.org/
10.1186/1465-9921-7-118.
Costa, A., Pinheiro, M., Magalhães, J., et al., 2016. Formulasi obat nano untuk
mengobati tuberkulosis. Lanjut Pengiriman Obat. Wahyu 102, 102–115.https://doi.org/10.1016/
j.addr.2016.04.012.
Dai, Y., Witkamp, GJ, Verpoorte, R., Choi, YH, 2015. Menjahit sifat alami
pelarut eutektik dalam dengan air untuk memudahkan aplikasinya. Makanan Kimia. 187,
14–19.https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2015.03.123.
Duarte, ARC, Ferreira, ASD, Barreiros, S., Cabrita, E., Reis, RL, Paiva, A., 2017.
Perbandingan antara bahan farmasi aktif murni dan pelarut eutektik terapeutik
dalam: Studi kelarutan dan permeabilitas. eur. J. Farmasi. Biofarm. 114, 296–304.
https://doi.org/10.1016/j.ejpb.2017.02.003.
Durand, E., Lecomte, J., Villeneuve, P., 2016. Dari kimia hijau ke alam:
peran serbaguna campuran suhu transisi rendah. Biochimie 120, 119–123.
https://doi.org/10.1016/j.biochi.2015.09.019.
11
Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862
El Achkar, T., Fourmentin, S., Greige-Gerges, H., 2019. Pelarut eutektik dalam: sebuah
gambaran tentang interaksi mereka dengan air dan senyawa biokimia. J.Mol. Liq.
288, 111028https://doi.org/10.1016/j.molliq.2019.111028.
Ermondi, G., Vallaro, M., Saame, J., et al., 2021. Rifampisin sebagai contoh di luar
senyawa aturan-of-5: ionisasi di luar air dan lipofilisitas di luar oktanol/air. eur. J.
Farmasi. Sains. 161, 105802https://doi.org/10.1016/j.ejps.2021.105802. Farah, SI,
Abdelrahman, AA, Utara, EJ, Chauhan, H., 2016. Peluang dan
tantangan untuk produk alami sebagai agen antituberkulosis baru. Pengujian
Obat Dev. Technol. 14 (1), 29–38.https://doi.org/10.1089/adt.2015.673. Francisco,
M., Bruinhorst, AVD, Kroon, MC, 2013. Suhu Transisi Rendah
Campuran (LTTMs): generasi baru pelarut desainer. Angew. Chemie - Int Ed. 52 (11),
3074–3085.https://doi.org/10.1002/anie.201207548. Jenewa: Organisasi Kesehatan
Dunia. Laporan Tuberkulosis Global 2021.; 2021. Hammond, OS, Bowron, DT, Edler, KJ,
2017. Pengaruh air terhadap eutektik dalam
struktur nano pelarut: transisi yang tidak biasa dari campuran ionik ke larutan
berair. Angew. Kimia – Int. Ed. 56 (33), 9782–9785.https://doi.org/10.1002/
anie.201702486.
Hussain, A., Singh, S., Das, SS, Anjireddy, K., Karpagam, S., Shakeel, F., 2019.
Obat nano sebagai pembawa pengiriman obat obat anti-tuberkulosis: dari patogenesis
hingga pengendalian infeksi. Kur. Pengiriman Obat. 16 (5), 400–429.https://doi.org/10.2174/
1567201816666190201144815.
Jain, SK, Lamichhane, G., Nimmagadda, S., Pomper, MG, Bishai, WR, 2008.
Pengobatan antibiotik tuberkulosis: masalah lama, solusi baru. Mikroba 3 (6), 285–
292.https://doi.org/10.1128/MICROBE.3.285.1.
Li, Z., Lee, PI, 2016. Investigasi peningkatan kelarutan obat menggunakan deep eutektik
pelarut dan turunannya. Int. J. Farmasi. 505 (1–2), 283–288.https://doi.org/ 10.1016/
j.ijpharm.2016.04.018.
Ma, C., Laaksonen, A., Liu, C., Lu, X., Ji, X., 2018. Efek aneh air pada ionik
cairan dan pelarut eutektik dalam. kimia Soc. Wahyu 47, 8685–8720.https://doi.org/
10.1039/c8cs00325d.
Machado, D., Pires, D., Perdigão, J., et al., 2016. Penghambat saluran ion sebagai antimikroba
agen, penghambat penghabisan, dan peningkat aktivitas pembunuhan makrofag terhadap
mycobacterium tuberculosis yang resistan terhadap obat. PLoS Satu 11 (2), 1–28.https://doi.org/
10.1371/journal.pone.0149326.
Mann, SK, Pham, TN, McQueen, LL, Lewandowski, JR, Brown, SP, 2020. Mengungkapkan
struktur dan dinamika ikatan hidrogen antarmolekul dalam farmasi eutektik
dalam dengan spektroskopi NMR pemintalan sudut ajaib. Mol. Farmasi. 17 (2),
622–631.https://doi.org/10.1021/acs.molpharmaceut.9b01075.
Marimani, M., Ahmad, A., Duse, A., 2018. Peran epigenetik, bakteri dan inang
faktor dalam perkembangan infeksi Mycobacterium tuberculosis. Tuberkulosis
113, 200–214.https://doi.org/10.1016/j.tube.2018.10.009.
Mehta, JB, Dutt, AK, 2016. Epidemiologi dan faktor inang. Mikrobiol. Spektr. 4 (6)
https://doi.org/10.1128/microbiolspec. TNM17-0018-2016.
Monteiro, H., Santos, F., Paiva, A., Duarte, ARC, Ferreira, RJ, 2021. Molekuler
studi dinamika campuran cairan terapeutik dan pengikatannya pada mikobakteri.
Depan. Pharmacol. 12, 1–11.https://doi.org/10.3389/fphar.2021.626735. Morrison,
HG, Sun, CC, Neervannan, S., 2009. Karakterisasi perilaku termal
pelarut eutektik dalam dan potensinya sebagai kendaraan pelarutan obat. Int. J. Farmasi.
378 (1–2), 136–139.https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2009.05.039. Motiei, M., Gouveia, LP,
Sopík, T., et al., 2021. Pengiriman rifampisin berbasis nanopartikel
pengembangan sistem. Molekul 26 (2067), 1–19.https://doi.org/10.3390/
molekul26072067.
Nahid, P., Dorman, SE, Alipanah, N., et al., 2016. Official American Thoracic Society/
Centers for Disease Control and Prevention/ Infectious Diseases Society of America Clinical
Practice Pedoman: Pengobatan tuberkulosis yang rentan terhadap obat. Klinik. Menulari.
Dis. Pedoman IDSA. 63, 147–195.https://doi.org/10.1093/cid/ciw376.
Nathan, C., Barry, CE, 2015. Pengembangan obat TB: imunologi di meja. Imunol.
Wahyu 264 (1), 308–318.https://doi.org/10.1111/imr.12275.
Pereira, CV, Silva, JM, Rodrigues, L., et al., 2019. Mengungkap potensi antikanker dari
pelarut eutektik dalam terapeutik berbasis limonene. Sains. Rep. 9 (1), 1–11.https://doi. org/
10.1038/s41598-019-51472-7.
Perna, FM, Vitale, P., Capriati, V., 2020. Pelarut eutektik dalam dan aplikasinya sebagai
pelarut hijau. Curr Opin Green Sustain Chem. 21, 27–33.https://doi.org/10.1016/
j.cogsc.2019.09.004.
Roda, A., Santos, F., Matias, AA, Paiva, A., Duarte, ARC, 2020. Desain dan pemrosesan
formulasi pengiriman obat dari sistem eutektik terapeutik dalam untuk tuberkulosis.
J. Superkrit. Cairan 161, 104826.https://doi.org/10.1016/j.supflu.2020.104826.
Roda, A., Paiva, A., Duarte, ARC, 2021. Formulasi cair terapi berdasarkan rendah
campuran suhu transisi untuk penggabungan obat anti-inflamasi. Farmasi 13
(1620), 1–16.https://doi.org/10.3390/pharmaceutics13101620. Roda, A., Santos, F.,
Chua, YZ, et al., 2021. Mengurai Sifat Asam Sitrat : L-
arginin : campuran air: peran bifungsional air. PCCP 23, 1706–1717. https://
doi.org/10.1039/d0cp04992a.
Salfinger, M., Heifets, LB, 1988. Penentuan MIC pirazinamid untuk
Mycobacterium tuberculosis pada pH yang berbeda dengan metode radiometrik.
Antimikroba. Agen Kemoterapi. 32 (7), 1002–1004.https://doi.org/10.1128/
AAC.32.7.1002.
PP Salvatore, Y. Zhang, Tuberkulosis: dasar molekuler patogenesis, dalam: Modul
Referensi dalam Ilmu Biomedis, Elsevier Inc.; 2017, hlm. 1-15. doi:10.1016/b978-0-
12-801238-3.95697-6.
Santana, APR, Mora-Vargas, JA, Guimarães, TGS, Amaral, CDB, Oliveira, A.,
Gonzalez, MH, 2019. Sintesis berkelanjutan pelarut eutektik dalam alami (NADES)
dengan metode berbeda. J.Mol. Liq. 293, 111452https://doi.org/10.1016/j.
molliq.2019.111452.
F. Santos dkk.
Santos, F., Leitão, MIPS, Duarte, ARC, 2019. Sifat-sifat eutektik dalam terapeutik
pelarut L-arginin dan etambutol untuk pengobatan tuberkulosis. Molekul 24 (1).
https://doi.org/10.3390/molecules24010055.
Santos, F., Leitão, MIPS, Duarte, ARC, 2019. Sifat Eutectic Dalam Terapi
Pelarut Pengobatan Tuberkulosis. Molekul 24 (55), 1–12.https://doi.org/
10.3390/molecules24010055.
Sarathy, J., Dartois, V., Lee, E., 2012. Peran mekanisme transportasi dalam
Resistensi dan toleransi obat Mycobacterium tuberculosis. Farmasi. 5 (11), 1210–
1235.https://doi.org/10.3390/ph5111210.
Silva, E., Oliveira, F., Silva, JM, Matias, A., Reis, RL, Duarte, ARC, 2020. Optimal
desain THEDES berdasarkan alkohol perillyl dan ibuprofen. Ilmu farmasi. 12 (11),
1121.https://doi.org/10.3390/pharmaceutics12111121.
Silva, E., Oliveira, F., Silva, JM, Reis, RL, Duarte, ARC, 2021. Menguraikan
sifat bioaktif dari pelarut eutektik terapeutik dalam berdasarkan terpen alami. Kur.
Res. kimia Biol. 1, 100003https://doi.org/10.1016/j.crchbi.2021.100003. Silva, JMM,
Reis, RL, Paiva, A., Duarte, ARC, 2018. Desain terapi fungsional
pelarut eutektik dalam berdasarkan kolin klorida dan asam askorbat. Keberlanjutan ACS.
kimia Eng. 6 (8), 10355–10363.https://doi.org/10.1021/acssuschemeng.8b01687. Smith, I.,
2003. Patogenesis Mycobacterium tuberculosis dan determinan molekuler dari
keracunan. Klinik. Mikrobiol. Wahyu 16 (3), 463–496.https://doi.org/10.1128/
CMR.16.3.463-496.2003.
Stott, PW, Williams, AC, Barry, BW, 1998. Pengiriman transdermal dari eutektik
sistem: Peningkatan perembesan obat model, ibuprofen. J.Kontrol. Rilis 50 (1–3),
297–308.https://doi.org/10.1016/S0168-3659(97)00153-3.
12
Jurnal Internasional Farmasi 637 (2023) 122862
Tajmir, F., Roosta, A., 2020. Kelarutan cefixime dalam campuran encer eutektik dalam
pelarut dari studi eksperimental dan pemodelan. J.Mol. Liq. 303, 112636https://
doi.org/10.1016/j.molliq.2020.112636.
Vieira, ACC, Chaves, LL, Pinheiro, S., et al., 2018. Padatan berlapis kitosan mukoadhesif
nanopartikel lipid untuk pengelolaan tuberkulosis yang lebih baik. Int. J. Farmasi. 536 (1),
478–485.https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2017.11.071.
Vilková, M., Płotka-Wasylka, J., Andruch, V., 2020. Peran air dalam eutektik dalam
ekstraksi berbasis pelarut. J.Mol. Liq. 304, 112747https://doi.org/10.1016/j.
molliq.2020.112747.
Wallis, RS, Hafner, R., 2015. Memajukan terapi host-directed untuk tuberkulosis. Nat.
Pendeta Immunol. 15 (4), 255–263.https://doi.org/10.1038/nri3813. Yiin,
CL, Quitain, AT, Yusup, S., Sasaki, M., Uemura, Y., Kida, T., 2016.
Karakterisasi campuran suhu transisi rendah alami (LTTM): pelarut hijau untuk
delignifikasi biomassa. Bioresour. Technol. 199, 258–264.https://doi. org/10.1016/
j.biortech.2015.07.103.
Zainal-Abidin, MH, Hayyan, M., Ngoh, GC, Wong, WF, Looi, CY, 2019. Muncul
perbatasan pelarut eutektik dalam dalam penemuan obat dan sistem pengiriman
obat. J.Kontrol. Rilis 316, 168–195.https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2019.09.019.
Zakrewsky, M., Banerjee, A., Apte, S., et al., 2016. Choline and geranate deep eutektic
pelarut sebagai agen antiseptik spektrum luas untuk aplikasi pencegahan dan
terapeutik. Lanjut Kesehatanc. Mater. 5 (11), 1282–1289.https://doi.org/10.1002/
adhm.201600086.
Zhekenov, T., Toksanbayev, N., Kazakbayeva, Z., Shah, D., Mjalli, FS, 2017. Formasi
pelarut eutektik dalam tipe III dan efek air pada interaksi antarmolekulnya.
Kesetimbangan Fase Fluida. 441, 43–48.https://doi.org/10.1016/j.
fluid.2017.01.022.