Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Jurnal Etnofarmakologi 243 (2019) 111634

Daftar isi tersedia di SainsLangsung

Jurnal Etnofarmakologi
beranda jurnal: www.elsevier.com/locate/jethpharm

Allicin meningkatkan aktivitas antimikroba makrofag selama

Mycobacterium tuberculosis infeksi
Ved Prakash DwivediA,kan,1, Debapriya BhattacharyaB,C,1, Mona SinghB,1, Ashima BhaskarD,
Santosh KumarA, Samreen FatimaB, Parveen Sobiae, Luc Van KaerF, Gobardhan DasB,kan
A Grup Imunologi, Pusat Internasional untuk Rekayasa Genetika dan Bioteknologi, New Delhi, IndiaB Pusat Khusus untuk Kedokteran
Molekuler, Universitas Jawaharlal Nehru, New Delhi, IndiaC Pusat Bioteknologi, Universitas Siksha 'O' Anusandhan Kalinganagar,
Ghatikia, Bhubaneswar, Orissa, IndiaD Laboratorium Transduksi Sinyal-1, Institut Imunologi Nasional, New Delhi, Indiae Sekolah
Tinggi Ilmu Kesehatan, Laboratorium Kedokteran dan Ilmu Kedokteran, Universitas KwaZulu-Natal, Durban, Afrika SelatanF
Departemen Patologi, Mikrobiologi dan Imunologi, Fakultas Kedokteran Universitas Vanderbilt, Nashville, TN, AS

INFO ARTIKEL ABSTRAK

Kata kunci: Relevansi etnofarmakologi: Munculnya resistensi obat Mycobacterium tuberculosis (M.tb) strain telah sangat menghambat
Mycobacterium tuberculosis upaya global menuju pemberantasan tuberkulosis (TB). Terapi yang diterima secara internasional “Directly Observed
sel T Treatment Short-course (DOTS)” adalah terapi yang panjang, dan mengandung risiko untuk terjadinya resistensi obat.M.tb
Allicin varian. Varian TB yang multipel dan sangat resistan terhadap obat (MDR dan XDR) sekarang tersebar luas di seluruh dunia,
Terapi tambahan
dan jenis yang benar-benar resistan terhadap obat (TDR) telah muncul. Oleh karena itu, antibiotik kelas baru sangat
Ekstrak bawang putih
dibutuhkan untuk memerangi organisme mematikan ini. Secara historis, bawang putih dikenal dapat membunuh strain
mikobakteri, dan senyawa aktifnya, allicin, membunuh berbagai mikroorganisme. Di sini kami telah menunjukkan bahwa
allicin tidak hanya mengurangi beban bakteri di paru-paru tikus yang terinfeksiMycobacterium tuberculosis (M.tb), tetapi juga
menginduksi kekebalan anti-TB yang kuat.
Bahan dan metode: Dalam penelitian ini, aktivitas anti-mikobakteri dan imunomodulator ekstrak bawang putih dan
allicin konstituen murninya ditunjukkan berdasarkan beberapa in vitro dan in vivo percobaan dalam model murine
tuberkulosis. Selanjutnya validasi penelitian dilakukan dengan imunoblot yang menunjukkan modulasi MAPK dan
pensinyalan SAPK/JNK oleh allicin pada makrofag.
Hasil: Di sini, kami melaporkan bahwa ekstrak allicin / bawang putih menunjukkan respons anti-mikobakteri yang kuat in vitro
dan in vivo terhadap obat-sensitif, MDR dan XDR strain TB. Selain membunuh langsung, allicin juga menginduksi sitokin
proinflamasi dalam makrofag. Selain itu, pengobatan ekstrak allicin/bawang putih pada model infeksi murine menghasilkan
induksi respons pelindung Th1 yang kuat, yang mengarah pada pengurangan drastis dalam beban mikobakteri. Hasil ini
menunjukkan bahwa ekstrak allicin/bawang putih memiliki aktivitas antibakteri dan imunomodulator. Selanjutnya, ekstrak
bawang putih membalikkan efek peredam kekebalan dari obat anti-TB garis depan.Kesimpulan: Ekstrak allicin/bawang putih
saja atau sebagai tambahan pada antibiotik klasik sangat menjanjikan untuk pengobatan TB yang sensitif terhadap obat dan
juga resistan terhadap obat. Hasil ini memerlukan studi lebih lanjut dan validasi allicin untuk pengobatan TB.

1. Perkenalan pengobatan anti-TB sering menyebabkan ketidakpatuhan dan karenanya

Meskipun kemajuan ilmiah yang besar sejak penemuannya, tuberkulosis (TB)
tetap menjadi penyebab utama kematian pada manusia (WHO, 2015a, 2015b,
2016; Pewarna, 2014). Salah satu rintangan utama dalam pembersihan
Mycobacterium tuberculosis (M.tb) adalah munculnya beberapa strain resisten
obat (MDR) dan resisten obat secara ekstensif (XDR). Panjang
generasi strain resisten dan infeksi TB laten (Adil dan Tor, 2014; Shenoi dan
Friedland, 2009; Pinto dan Menzies, 2011; Cohen dkk., 2015; Tousif dkk.,
2014; WHO, 2013). Yang penting, setelah menyelesaikan Directly Observed
Treatment Short-course (DOTS), pasien tetap rentan terhadap reaktivasi dan
infeksi ulang penyakit, menunjukkan gangguan kekebalan terkait terapi (
Tousif et al., 2014). Oleh karena itu, sebuah

kan Penulisyang sesuai.

Alamat email: ved@icgeb.res.in (VP Dwivedi), dasgo@mail.jnu.ac.in (G.Das).
1 Para penulis ini berkontribusi sama pada naskah.

https://doi.org/10.1016/j.jep.2018.12.008
Diterima 14 Mei 2018; Diterima dalam bentuk revisi 24 Oktober 2018; Diterima 7 Desember 2018
Tersedia online 08 Desember 2018 0378-8741/ © 2018 Diterbitkan oleh Elsevier BV
VP Dwivedi, dkk.
strategi terapi alternatif yang menghindari keterbatasan ini sangat dibutuhkan
untuk memerangi penyakit mematikan ini.
Molekul antimikroba yang berasal dari tanaman obat dapat memberikan
kandidat obat baru untuk mengobati mikroorganisme yang resistan
terhadap obat. Karena keragaman kimianya yang luas dan penggunaannya
sebagai obat tradisional, produk alami merupakan sumber penting
antimikroba dan imunomodulator baru. Bawang putih merupakan salah
satu bumbu masakan yang umum digunakan sebagai obat herbal untuk
pencegahan dan pengobatan berbagai penyakit, termasuk beberapa
penyakit menular (Rivlin, 2001; Rios dan Recio, 2005; Ross et al., 2001).
Bawang putih adalah agen antibakteri yang kuat dan bertindak sebagai
penghambat bakteri Gram-positif dan Gram-negatif (Ankri dan Mirelman,
1999; Bakri dan Douglas, 2005; Reuter et al., 1996). Konstituen antimikroba
utama bawang putih telah diidentifikasi sebagai senyawa sulfur
teroksigenasi, asam thio-2-propene-1-sulfinat S-alil ester, yang biasanya
disebut sebagai allicin.Curtis dkk., 2004; Miron et al., 2000, 2002). Pada
tahun 1944, Rao dkk. melaporkan bahwa ekstrak bawang putihin vitro
bersifat bakteriostatik pada konsentrasi rendah, tetapi pada konsentrasi
yang lebih tinggi bersifat bakterisida.Rao dkk., 1946). Studi lain juga
melaporkan aktivitas anti-mikobakteri dari ekstrak bawang putih.Petrovska
dan Cekovska, 2010; Dini dkk., 2011; Sharifi-Rad dkk., 2017).
Dalam penelitian ini, kami telah mencoba untuk memperluas pengetahuan
sebelumnya dengan menyelidiki efek dari ekstrak bawang putih dan allicin pada
strain yang berbeda dari bawang putih. M.tb in vitro, ex vivo dan masuk in vivo
model murine tuberkulosis. Pertama, kami menentukan konsentrasi hambat
minimal (MIC) allicin pada strain yang sensitif dan resisten terhadap obat dariM.tb
dan menemukan aktivitas anti-mikobakteri yang kuat terhadap berbagai galur,
termasuk galur MDR dan XDR. Selanjutnya, pengobatan allicin secara drastis
mengurangi beban bakteri dalam makrofag dengan cara yang bergantung pada
dosis, tanpa mempengaruhi viabilitas sel. Hebatnya, kami menemukan bahwa
allicin secara signifikan mencegah internalisasiM.tb oleh makrofag, menunjukkan
blokade molekul adhesi ICAM dan data ini lebih lanjut didukung oleh penelitian
sebelumnya oleh EW Son et al., di mana mereka menunjukkan bahwa allicin
menghambat ekspresi ICAM-1 dalam sel endotel vaskular manusia melalui
downregulasi jalur pensinyalan JNK (Son et al., 2006). Kami selanjutnya menguji
kemanjuran ekstrak allicin dan bawang putih dalam model murine TB, yang
mengungkapkan pengurangan signifikan beban bakteri di paru-paru, bersamaan
dengan respons imun anti-TB yang kuat. Efek allicin ini bergantung pada
pensinyalan SAPK/JNK sebagaimana dibuktikan oleh laporan sebelumnya (Xu dkk.,
2014). Selain itu, ekstrak allicin dan bawang putih secara signifikan mengurangi
toksisitas akibat antibiotik selama pengobatan. Oleh karena itu, ekstrak allicin atau
bawang putih memerlukan eksplorasi lebih lanjut sebagai pengobatan TB, baik
sendiri atau dalam kombinasi dengan obat anti-TB yang tersedia saat ini.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Pernyataan etika
Eksperimen hewan dilakukan sesuai dengan pedoman yang
disetujui oleh Komite Etika Hewan Institusional dari Pusat Internasional
untuk Rekayasa Genetik dan Bioteknologi (ICGEB) (ID Persetujuan:
ICGEB/IAEC/IMM-13/2007) (New Delhi, India) dan Departemen
pedoman Bioteknologi (Pemerintah India). Semua tikus yang
digunakan untuk percobaan dikorbankan secara etis dengan sesak
napas dalam karbon dioksida menurut peraturan kelembagaan dan
Departemen Bioteknologi, Pemerintah India.
2.2. tikus
Tikus C57BL/6 (6-8 minggu; 25-35 g berat badan) disediakan oleh
lembaga kami (ICGEB, New Delhi, India). Semua hewan dipelihara di
fasilitas hewan ICGEB.
2
Jurnal Etnofarmakologi 243 (2019) 111634
2.3. Bakteri
M.tb strain H37Rv (nomor ATCC 25618) awalnya adalah hadiah yang baik
dari repositori Universitas Negeri Colorado. Semua galur MDR dan XDR
adalah hadiah baik dari Dr KVS Rao, ICGEB, New Delhi. Basil ditanam di 7H9
(Middlebrooks, Difco™, USA) medium yang dilengkapi dengan 10% ADC
(albumin, dekstrosa, dan katalase; Difco™) dan dengan 0,05% Tween 80%
dan 0,2% gliserol, dan kultur ditumbuhkan ke fase mid-log. Aliquot kultur
dalam 20% gliserol diawetkan pada -80 ° C dan stok yang diawetkan dengan
cryo ini digunakan untuk infeksi.
2.4. Kimia dan reagen
Allicin (CAS 539–86-6; kemurnian > 98%)) diperoleh secara komersial
dari Santa-Cruz Biotechnology. Semua antibodi FACS yang digunakan
dalam penelitian ini dibeli dari Biolegend, AS. PMA (Phorbol myristic
acid) dan ionomycin yang digunakan untuk pewarnaan sitokin
intraseluler dibeli dari Sigma-Aldrich, India. Kit fiksasi dan
permeabilisasi diperoleh dari BD Biosciences, USA. Pewarna biru
alamar dibeli dari Thermo Fisher Scientific. Reagen (7H11, 7H9, OADC)
yang diperlukan untuk penentuan beban bakteri atau CFU dibeli dari
Difco, USA. Media tioglikolat, untuk isolasi makrofag peritoneum, dibeli
dari Difco, AS. Bahan kimia dan reagen lain yang digunakan dalam
penelitian ini telah disebutkan di masing-masing sub-pos.
2.5. Persiapan ekstrak bawang putih
Kami membeli Allicin (CAS 539–86-6; kemurnian > 98%) dari Santa-Cruz
Biotechnology, Inc. Allicin dilarutkan dalam air yang diautoklaf untuk membuat
larutan 1 mg/ml. Mengenai ekstrak bawang putih, siung bawang putih (Allium
sativum- Bulb: soft neck) dibeli dari wilayah Vasant Kunj di New Delhi dan kami
memperoleh sertifikat karakterisasi dari National Botanical Research Institute
(Nomor Spesimen: NBRI-SOP-202), Lucknow, India (Gambar. S1A & B). 100 g siung
bawang putih diambil, dikupas dan dihaluskan menggunakan 100 ml air steril.
Pasta bawang putih disaring menggunakan kain muslin; ekstrak kasar
dikumpulkan dalam gelas kimia. Ekstrak ini disaring dan selanjutnya disentrifugasi
pada 8000 rpm. Supernatan yang dihasilkan dikumpulkan dan dikeringkan
dengan menggunakan speed vac dan dilarutkan dalam air untuk mencapai
konsentrasi akhir 1 g/ml dan disimpan pada suhu -20 °C untuk digunakan lebih
lanjut.
2.6. Kromatografi lapis tipis (KLT)
Sampel disiapkan dan kemudian diterapkan pada pelat KLT (silika gel
TLC 60F 254, lembaran aluminium) biasanya volume 1-5 l ke asal pelat KLT 2
cm di atas bagian bawahnya dengan bantuan tabung kapiler. Ruang KLT
diisi dengan 8 ml heksana: isopropanol (3:1). Tutup ditutup dan dibiarkan
berjalan hingga tiga perempat dari total panjang TLC. Plat kemudian
diangkat dan dikeringkan selama 5-10 menit. Plat KLT kemudian diwarnai
menggunakan uap yodium (Biradar et al., 2014) (Gambar. S2).
2.7. Kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC)
Allicin dilarutkan dalam air steril untuk membuat larutan stok 1 mg/ml.
Umbi bawang putih dibeli dari pasar lokal New Delhi (Sertifikat terlampir
sebagaiAngka tambahan). 100 gram umbi bawang putih dikupas dan
dihaluskan menggunakan 100 ml air steril hingga diperoleh sari bawang
putih halus yang disaring dengan kain kasa. Ekstrak berair selanjutnya
disentrifugasi pada 8000 rpm. Supernatan yang dihasilkan dikumpulkan (1
gm/ml) dan disimpan pada suhu -20 °C untuk digunakan lebih lanjut. Untuk
HPLC diencerkan lebih lanjut hingga 100 mg/ml. Keberadaan allicin dalam
ekstrak bawang putih dianalisis dengan HPLC (Waters 1525 HPLC) yang
dilengkapi dengan flexinject dual injector, photodiode array detector, dan
kolom balik C18 (WATERS SPHERISORB 5 m ODS2 (250 × 4,6 mm).Kolom,
dipertahankan pada suhu 20 °C, dioperasikan dalam mode isokratik (50:50
Asetonitril: air) pada laju aliran 1 ml/menit.
VP Dwivedi, dkk. Jurnal Etnofarmakologi 243 (2019) 111634

Gambar 1. Allicin menengahi pembunuhan M.tb dalam makrofag tanpa mempengaruhi viabilitas sel. (A&B) Aktivitas anti-mikobakteri allicin sebagaimana dinilai oleh uji Alamar Blue
untuk strain mikobakteri yang berbeda (H37Rv, SDR [BND], MDRs [1934, 2261, 2287, 2549, BND], dan XDR [MCY-85). (C) Kelangsungan hidup bakteri dalam makrofag yang terinfeksi
H37Rv baik yang tidak diobati atau diobati dengan konsentrasi allicin yang berbeda. (D) Uji propidium iodida untuk viabilitas sel setelah pengobatan makrofag dengan konsentrasi allicin
bertingkat. Garis merah mewakili makrofag yang tidak diobati. Angka menggambarkan persentase sel yang diwarnai dengan propidium iodida. Hasil yang ditampilkan mewakili empat
percobaan independen. Bilah kesalahan menunjukkan rata-rata ± SD (n = 3). Signifikansi statistik dihitung dengan membandingkan kontrol vs pengobatan Allicin. nilai p *≤0,05.

pada 210-400nm. Karena mesin memiliki injektor manual dan sesuai dengan
protokol instrumen, hanya volume loop tertentu (100 l) material yang dapat
disuntikkan tidak kurang atau lebih dari itu. Oleh karena itu kami hanya memuat
100 l sampel dalam instrumen. 100ul allicin standar disuntikkan secara manual
dan dibiarkan selama 30 menit diikuti dengan pembersihan kolom dengan sistem
pelarut yang sama selama 60 menit (Gambar S3). Setelah dibersihkan, 100 ul
ekstrak bawang putih berair disuntikkan secara manual dengan runtime yang
sama selama 30 menit (Wallock-Richards et al., 2014) (Gambar. S4).
ekstrak sedangkan (iv) kelompok keempat terinfeksi dan diobati dengan
allicin atau ekstrak bawang putih bersama dengan obat anti tuberkulosis
standar isoniazid. 2 mg/kg Allicin (Santa-Cruz Biotechnology, USA) dan 5 mg/
kg ekstrak bawang putih dalam 100 l PBS diberikan secara intraperitoneal
setiap hari selama seluruh fase pengobatan. INH (5 mg/kg) diberikanad
libitum dalam air minum selama terapi (Singh dkk., 2016; Dwivedi dkk., 2017
).

2.8. Uji biru alamar
Basil ditumbuhkan sampai fase pertengahan log (OD600 0,6-0,8) dan ditambahkan ke
pelat 96-sumur yang mengandung pengenceran seri allicin dua kali lipat pada OD akhir
600 dari 0,01. Setelah inkubasi pada suhu 37 °C selama 5 hari ditambahkan 1X alamar blue
(Thermo Fisher Scientific) pada masing-masing well dan diamati perubahan warna dari
biru menjadi pink setelah inkubasi 16 jam. Sumur yang hanya berisi media dan tidak ada
basil berfungsi sebagai kelompok kontrol pelarut dan sumur yang hanya memiliki basil
tanpa obat diperlakukan sebagai kelompok kontrol negatif.
2.9. Perawatan obat
Kami membagi tikus dalam empat kelompok. (i) Mencit kelompok pertama
diambil sebagai kontrol yang terinfeksi, (ii) kelompok kedua diinfeksi dan diberi
isoniazid, (iii) kelompok ketiga diinfeksi dan diberi allicin atau bawang putih
2.10. Infeksi M.tb pada tikus dan estimasi unit pembentuk koloni (CFU)
Tikus terinfeksi dengan M.tb H37Rv melalui rute aerosol menggunakan
ruang aerosol Madison (University of Wisconsin, Madison, WI) dengan
nebulizer yang telah dikalibrasi sebelumnya untuk menyimpan total ~110
basil ke paru-paru setiap tikus seperti yang dijelaskan sebelumnya (
Bhattacharya dkk., 2014b, 2014a; Singh dkk., 2016; Dwivedi dkk., 2012;
Tousif dkk., 2014; Chatterjee et al., 2011). Secara singkat, stok mikobakteri
yang dipulihkan dari freezer 80 ° C dengan cepat dicairkan dan dikenai
ultrasonikasi ringan untuk mendapatkan suspensi sel tunggal. Konsentrasi
suspensi sel bakteri ditentukan dengan mengambil OD600. OD600 dari 0,6
sesuai dengan 10 × 107 basil. Lima belas ml suspensi sel bakteri (10 × 106 sel
per ml) ditempatkan di nebulizer ruang aerosol Madison yang telah
dikalibrasi sebelumnya untuk mengirimkan melalui rute aerosol jumlah CFU
yang diinginkan ke paru-paru hewan yang ditempatkan di dalam ruangan.
Tiga tikus yang dipilih secara acak dikorbankan pada berbagai titik waktu
dan organ dipanen, dihomogenisasi dalam PBS yang disaring 0,2 m

3
VP Dwivedi, dkk.
Gambar 2. Pengobatan allicin membuat makrofag lebih resisten terhadap Mycobacterium tuberculosis infeksi. (A) Mikroskop confocal dari makrofag yang terinfeksi H37Rv dan diobati
dengan ICAM inhibitor (kontrol positif) atau allicin. (B) Persentase makrofag yang terinfeksi H37Rv dan diobati dengan ICAM inhibitor atau allicin. Titik yang menunjukkan jumlah bidang
yang diambil. Hasil yang ditampilkan adalah perwakilan dari tiga percobaan independen. Bilah kesalahan menunjukkan rata-rata ± SD (n = 3). Signifikansi statistik dihitung dengan
membandingkan kontrol vs pengobatan Allicin. nilai p *≤0,05.
mengandung 0,05% Tween 80 dan disepuh ke piring 7H11 Middlebrooks
(Difco, USA) yang mengandung 10% asam oleat, albumin, dekstrosa dan
katalase (OADC) (Difco, USA). Homogenat paru-paru dan sel limpa yang tidak
diencerkan, diencerkan sepuluh kali lipat dan seratus kali lipat dilapiskan
dalam rangkap dua pada pelat 7H11 di atas dan diinkubasi pada suhu 37 ° C
selama 21-28 hari. Koloni dihitung dan CFU diperkirakan (Bhattacharya dkk.,
2014b, 2014a; Singh dkk., 2016; Dwivedi dkk., 2012; Tousif dkk., 2014;
Chatterjee et al., 2011).
2.11. Isolasi makrofag peritoneum tikus
Tikus C57BL/6 betina berusia enam hingga 8 minggu diberi 2 ml aku p
injeksi media tioglikolat (4%). Makrofag pasca injeksi lima hari diperoleh
dengan lavage peritoneal. Makrofag dicuci sekali dengan PBS dingin dan
disuspensikan dalam RPMI-1640 dingin. Viabilitas sel ditentukan dengan
metode eksklusi Trypan blue. Jumlah makrofag dalam suspensi ini
ditentukan menggunakan ruang hemositometer dan diunggulkan dengan
kepadatan 2 × 10 .5 per cm2 dalam RPMI-1640 dengan 10% serum janin betis
janin yang tidak diaktifkan panas. Makrofag terinfeksi denganM.tb regangan
pada MOI 1:10 seperti yang dijelaskan sebelumnya (Rahman dkk., 2015;
Dwivedi dkk., 2017).
2.12. Penentuan sitotoksisitas
Monolayer makrofag dalam pelat kultur jaringan 12-sumur (2,0 × 105 sel per
cm2) ditumbuhkan dan diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam 5% CO2selama 6 jam,
konsentrasi allicin yang berbeda ditambahkan ke sumur kultur dalam rangkap tiga
pada volume akhir 100 l, dan diinkubasi selama 48 jam. Setelah itu, media diganti
dengan RPMI segar yang mengandung 1 mg/ml propidium iodida. Sel diinkubasi
pada suhu 37 ° C selama 15 menit dan kemudian dicuci dengan PBS dan diperoleh
dan dianalisis dengan flow cytometer FACS Canto II (BD Biosciences, USA).
4
Jurnal Etnofarmakologi 243 (2019) 111634
2.13. analisis FACS
Untuk pewarnaan permukaan, sel dipanen dan dicuci dengan PBS
dan diwarnai dengan antibodi monoklonal terkonjugasi anti-CD4 (klon
GK1.5) -PerCpCy5.5, anti-CD8 (klon SK1) -APC, anti-CD45RB (klon
C363-16A) -PE, anti-CD11c (klon N418)-PE, dan anti-CD11b (kloning
M1/70)-APC (Biolegend, USA). Untuk pewarnaan sitokin intraseluler, sel
diperlakukan dengan 50 ng/ml PMA (Sigma-Aldrich) dan 500 ng/ml
ionomycin (Sigma-Aldrich) dengan adanya 1 g/ml brefeldin-A
(Biolegend, USA) ditambahkan selama yang terakhir 6 jam budaya. Sel
dicuci dua kali dengan PBS dan ditangguhkan kembali dalam buffer
permeabilisasi (Cytofix/Cytoperm kit; BD), dan diwarnai dengan
antibodi monoklonal terkonjugasi fluoresen berikut: anti-IFN-γ (klon
XMG1.2)-APC, anti-IL -4 (clone GK1.5)-PE, anti-IL-17 (clone TC11)-PE,
anti-IL-1 (clone JAMA 147)-PE, anti-IL-12 (clone C15.6)-APC, anti-IL-TNF-a
(kloning MP6-XT22)-PE, anti-IL-6 (kloning MP5–20F3)-PE, dan anti-IL-10
(klon JES5–16E3)-PE (Biolegend, USA). Intensitas fluoresensi diukur
dengan flow cytometry (FACS Canto II; BD) dan data dianalisis dengan
Flow Jo (Tree star, USA).
2.14. blotting barat
Makrofag peritoneal yang berasal dari tikus C57BL/6 diinfeksi
dengan H37Rv dan diobati dengan allicin (30 g/ml) selama 1 jam.
Seluruh sel lisat disiapkan menggunakan buffer lisis (20 mMTris-HCl;
pH 8,0, 500 mM NaCl, 0,25% Triton X 100, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF, 1
mM dithiothreitol, 1X Protease inhibitor cocktail [88266; Thermo fisher
ilmiah] ). Sampel dielektroforesis pada gel SDS-poliakrilamida 10% dan
disedot ke membran nitroselulosa. Bercak diblokir selama 1 jam dalam
5% BSA dalam PBST (PBS dengan 0,1% Tween 20), dan protein p38
MAPK, fosfo p38 MAPK, SAPK/JNK dan fosfo SAPK/JNK dideteksi dengan
antibodi masing-masing pada pengenceran 1:1000 seperti yang
direkomendasikan oleh pabrikan (Cell Signaling Technologies, USA).
Imunoglobulin G-terkonjugasi lobak peroksidase kambing anti-kelinci
VP Dwivedi, dkk. Jurnal Etnofarmakologi 243 (2019) 111634

Gambar 3. in vivo efek ekstrak bawang putih pada tikus yang terinfeksi Mycobacterium tuberculosis. (A) CFU dari homogenat paru mencit yang diinfeksi H37Rv dan diberi ekstrak
bawang putih dan/atau isoniazid. (B) Gambar histologi untuk menunjukkan efek ekstrak bawang putih terhadap infeksi. Panah menunjukkan lesi granulomatik di bagian paru-paruM.tb
tikus yang terinfeksi. (C) CFU dari homogenat paru-paru tikus yang terinfeksi H37Rv dan diobati dengan allicin dan/atau isoniazid. (D) CFU dari homogenat paru-paru tikus yang
terinfeksi strain MDR dan XDR dariM.tb dan diobati dengan ekstrak bawang putih. (E) Persentase kelangsungan hidup tikus yang terinfeksi MDR dan diobati dengan ekstrak bawang
putih. (F) Persentase kelangsungan hidup tikus yang terinfeksi XDR dan diobati dengan ekstrak bawang putih. Hasil yang ditampilkan adalah mean ± SD (n = 6 tikus dalam setiap
kelompok). Signifikansi statistik dihitung dengan membandingkan kontrol vs perlakuan ekstrak bawang putih. nilai p *≤0,05. GE: Ekstrak bawang putih, INH: isoniazid.

(diencerkan 1:2000) digunakan sebagai antibodi sekunder (Cell Signaling
Technologies, USA). Imunoblotting untuk GAPDH dilakukan untuk mengkonfirmasi
pemuatan yang sama.
2.15. Mikroskop konfokal
jaringan tertanam. Untuk setiap tikus di setiap kelompok, minimal 5
bidang disaring untuk mendeteksi granuloma. Total sekitar 6 * 5
(30) bidang dipelajari untuk menghitung skor granuloma. Gambar yang diberikan
mewakili semua gambar. Ukuran bayangan (ukuran bidang pindai) tergantung
pada lensa perbesaran objektif yang digunakan.

Untuk studi mikroskopis confocal, infeksi dilakukan dengan tag GFP
Mycobacterium H37Rv. Makrofag peritoneal diunggulkan pada kaca
penutup dan sebelum sel infeksi diobati dengan allicin atau inhibitor
ICAM selama semalam dan infeksi dilakukan dengan MOI 1:10 seperti
dijelaskan di atas. Coverslips kemudian dicuci dengan PBS dan
makrofag diperlakukan dengan 100 g/ml gentamisin untuk membunuh
bakteri ekstraseluler dan difiksasi dengan 2,5% paraformaldehyde
selama 20 menit diikuti dengan pencucian dengan PBS. Sel-sel
kemudian permeabilisasi dengan perlakuan dengan 0,1% NP-40 dan
kaca penutup dipasang pada slide kaca menggunakan DAPI yang
mengandung bahan pemasangan untuk dan pewarnaan inti. Sel
kemudian diamati menggunakan laser 488 nm (hijau) dan 405 nm
(ungu) pada Olympus Fluoview FV1000 dan foto diambil. Persentase sel
yang terinfeksi pada setiap kelompok eksperimen dihitung dengan
menghitung jumlah sel yang terinfeksi dan tidak terinfeksi.
2.16. Histologi
Paru-paru hewan yang terinfeksi dipanen dan difiksasi dalam formalin
buffer 10%, dan pewarnaan H&E dilakukan pada parafin setebal 5 m.
2.17. Analisis statistik
Semua data berasal dari setidaknya tiga percobaan independen.
Perbedaan nyata ditentukan olehT-analisis uji (Graph pad prisma). Nilai
p <0,05 diterima sebagai indikasi signifikansi statistik.
3. Hasil
3.1. Allicin membunuh M.tb intraseluler dalam makrofag
Untuk menilai aktivitas anti-mikobakteri allicin, kami melakukan uji alamar
blue. Kami merawat strain yang sensitif dan resistan terhadap obat dari
M.tb dengan allicin selama 5 hari dan ditentukan kelangsungan hidup bakteri
melalui alamar blue. Menariknya, kami menemukan bahwa allicin menunjukkan
aktivitas antimikobakteri yang kuat terhadap obat-sensitif serta beberapa varian
MDR dan XDR TB (Gambar 1A&B). Untuk menguji efek pembunuhan yang
dimediasi allicin pada intraselulerM.tb di makrofag, kami melakukan in vitro unit
pembentuk koloni (CFU) tes bakteri diisolasi dari makrofag yang terinfeksi. Kami
menginfeksi makrofag peritoneal denganM.tb strain H37Rv, memperlakukan
mereka dengan peningkatan konsentrasi allicin (yaitu 10,

5
VP Dwivedi, dkk. Jurnal Etnofarmakologi 243 (2019) 111634

Gambar 4. Profil sel imun dan responsnya dari tikus yang terinfeksi Mycobacterium tuberculosis dan diobati dengan ekstrak bawang putih. (A&B) Data FACS untuk menunjukkan
persentase CD4+ dan CD8+ sel T dan CD45Rβ+ sel dari limpa tikus yang terinfeksi H37Rv dan diobati dengan ekstrak bawang putih dan/atau isoniazid. (C&D) Data FACS untuk
menunjukkan persentase sel dendritik (CD11c+) dan makrofag (CD11b+) dari limpa mencit yang terinfeksi H37Rv dan diobati dengan ekstrak bawang putih dan/atau isoniazid. (E) Analisis
FACS untuk menunjukkan persentase sel yang mengekspresikan sitokin intraseluler IL-10, IL-12 dan TNF-α dari limpa tikus yang terinfeksi H37Rv yang diobati dengan GE dan/atau INH.
(F) Analisis FACS untuk menunjukkan persentase sel yang mengekspresikan sitokin intraseluler IFN-γ, IL-4 dan IL-17 dari CD4+ Sel T diisolasi dari limpa tikus yang terinfeksi H37Rv,
diobati dengan ekstrak bawang putih dan/atau isoniazid. Hasil yang ditampilkan adalah perwakilan dari tiga percobaan independen. Bilah kesalahan menunjukkan rata-rata ± SD (n = 3).
Signifikansi statistik dihitung dengan membandingkan perlakuan yang terinfeksi H37Rv vs H37Rv + ekstrak bawang putih. nilai p *≤0,05. GE: Ekstrak bawang putih, INH: isoniazid.

20, 30 & 40 g/ml) dan CFU yang ditentukan pada berbagai titik waktu. Kami menemukan Penghambat ICAM-1 (Gambar 2.A, B & C).
bahwa pengobatan allicin secara signifikan mengurangi beban bakteri (Gambar 1C.
dalam makrofag Untuk menguji toksisitas allicin pada sel inang, kami melakukan uji
viabilitas sel dan tidak menemukan efek pada viabilitas sel (Gambar 1D). Secara kolektif, 3.3. Ekstrak bawang putih mengganggu kelangsungan hidup mikobakteri pada tikus

data ini menunjukkan bahwa bahkan pada konsentrasi yang lebih rendah allicin memiliki
aktivitas anti-mikobakteri yang kuat.
3.2. Allicin menghambat penyerapan M.tb oleh makrofag
Selanjutnya, kami menjelaskan efek pra-perawatan allicin pada M.tb
infeksi pada makrofag. Kami mengisolasi tioglikolat yang menimbulkan makrofag
peritoneum dari tikus C57BL/6 dan merawatnya dengan allicin semalaman. Kami
juga menggunakan inhibitor ICAM-1 sebagai kontrol positif, seperti yang telah
kami tunjukkan sebelumnya bahwa penghambat ICAM-1 memblokirM.tb invasi
makrofag (Bhalla dkk., 2015). Makrofag terinfeksi dengan rekombinan yang
mengekspresikan GFPM.tb saring dan diperiksa di bawah mikroskop confocal
pada 4 jam pasca infeksi. Menariknya, kami mengamati bahwa pengobatan allicin
menghambat sel yang terinfeksi persentase sel yang terinfeksi serta internalisasi
M.tb dalam makrofag dan efek ini bahkan lebih menonjol dalam pengobatan
allicin dibandingkan dengan
Kami menilai in vivo khasiat ekstrak allicin dan bawang putih terhadap
M.tb dalam model infeksi murine. Kami menginfeksi tikus C57BL/6 dengan dosis rendah
(~110 CFU) dariM.tb H37Rv melalui rute aerosol. Pada berbagai titik waktu setelah infeksi,
kami mengambil paru-paru untuk menentukan jumlah bakteri. Kami menemukan bahwa
pengobatan ekstrak bawang putih secara drastis mengurangi beban bakteri dan tidak
layakM.tb basil diamati 60 hari pasca perawatan. Selain itu, kombinasi isoniazid dan
ekstrak bawang putih menunjukkan efek aditif dan dibersihkanM.tb dalam waktu 45 hari
pasca pengobatan, sedangkan pengobatan isoniazid saja efektif dalam lebih dari 60 hari (
Gambar 3A). Data ini diperkuat lebih lanjut oleh analisis histologis paru-paru, yang
mengungkapkan pengurangan jumlah granuloma setelah pengobatan ekstrak bawang
putih dibandingkan semua kelompok eksperimen (Gambar 3B). Selanjutnya, kami juga
melakukan uji CFU dengan allicin dan mengamati pengurangan bakteri yang sebanding
dengan ekstrak bawang putih (Gambar 3C). Selanjutnya, kami menyelidiki efek ekstrak
bawang putih pada infeksi strain MDR dan XDR, menggunakan kondisi yang sama yang
digunakan untuk obat-sensitif.

6
VP Dwivedi, dkk.
Gambar 5. Allicin menghambat p38 MAPK dan mengaktifkan pensinyalan SAPK/JNK di makrofag. (A) Diagram batang representatif untuk menunjukkan data FACS sitokin
intraseluler dari makrofag yang terinfeksi H37Rv dan diobati dengan allicin. (B) Makrofag peritoneal terinfeksi H37Rv dan diobati dengan 20 g/ml allicin selama 1 jam.
Fosforilasi p38 MAPK dan SAPK/JNK dinilai pada seluruh sel lisat makrofag yang tidak terinfeksi atau terinfeksi H37Rv dengan dan tanpa pengobatan allicin dengan
western blot. Hasil yang ditampilkan adalah perwakilan dari tiga percobaan independen. Signifikansi statistik dihitung dengan membandingkan pengobatan yang
terinfeksi vs allicin. nilai p *< 0,05.
ketegangan. Pengobatan dengan ekstrak bawang putih secara dramatis mengurangi
beban bakteri (Gambar 3D), mencegah lesi kulit dan memperpanjang kelangsungan
hidup lebih dari 90 hari sampai akhir percobaan, sedangkan hewan yang diperlakukan
palsu menunjukkan lesi kulit yang parah dan mati dalam waktu 15 hari pasca infeksi
dengan MDR (Gambar 3E) dan XDR (Gambar 3F) M.tb ketegangan. Pengamatan ini
menunjukkan bahwa ekstrak bawang putih adalah agen anti-mikobakteri yang kuat, baik
secara langsung menghambat pertumbuhan bakteri atau juga melalui imunomodulasi.
3.4. Profil respons imun pada tikus yang terinfeksi M.tb yang diobati dengan ekstrak bawang
putih
Untuk menentukan apakah ekstrak bawang putih menunjukkan sifat
imunomodulator, kami menginfeksi hewan, memperlakukan mereka dengan
ekstrak bawang putih, dan menentukan parameter kekebalan pada berbagai titik
waktu. Eksperimen imuno-fenotipik menunjukkan bahwa pengobatan ekstrak
bawang putih memiliki efek sederhana pada prevalensi CD4 .+ dan CD8+ sel T
tetapi relatif lebih tinggi dari pengobatan isoniazid (Gambar 4A&B). Kami juga
mengamati bahwa pengobatan dengan ekstrak bawang putih membalikkan efek
buruk isoniazid pada sel T (Gambar 4A&B). Kami tidak mengamati adanya
perubahan dalam jumlah makrofag (CD11b+ sel) dan sel dendritik (CD11c+
sel) setelah ekstrak bawang putih atau pengobatan isoniazid (Gambar 4CD).
Selanjutnya, kami melakukan profil sitokin intraseluler untuk sitokin bawaan dari
limpa tikus yang terinfeksi dan diobati dengan ekstrak bawang putih, dan
mengamati peningkatan produksi IL-12 secara signifikan dibandingkan dengan
kontrol dan pengobatan isoniazid (Gambar 4E), sedangkan kadar IL-10 dan TNF-α
sebanding pada semua kelompok eksperimen (Gambar 4E). Untuk menyelidiki
polarisasi subset sel T helper (Th), kami melakukan pewarnaan intraseluler dari
sitokin tanda tangan yang diproduksi oleh sel Th1, Th2 dan Th17. Kami
menemukan bahwa pengobatan ekstrak bawang putih meningkatkan frekuensi
sel T yang memproduksi IFN-γ daripada kontrol dan pengobatan isoniazid,
sedangkan tidak ada perbedaan signifikan yang diamati untuk sel T yang
memproduksi IL-4- dan IL-17 di semua kelompok (Gambar 4F). Secara kolektif,
data kami menunjukkan bahwa ekstrak bawang putih mempromosikan generasi
respon imun Th1 protektif terhadapM.tbinfeksi.
3.5. Allicin menghambat aktivasi jalur MAPK dan SAPK/JNK di
makrofag
Dari percobaan di atas, kami menyimpulkan bahwa ekstrak allicin / bawang
putih tidak hanya agen anti-mikobakteri yang kuat tetapi juga menunjukkan sifat
imunomodulator. Oleh karena itu, kami menyelidiki tingkat sitokin pro dan anti-
inflamasi intraseluler pada makrofag yang terinfeksi
7
Jurnal Etnofarmakologi 243 (2019) 111634
dengan M.tb dan diobati dengan allicin. Menariknya, kami menemukan
bahwa pengobatan allicin secara signifikan menginduksi kadar IL-1β, dan
mengurangi kadar TNF-α. Namun, tingkat sitokin lain seperti IL-6, IL-10,
IL-12 dan TGF-β sebanding antara kelompok eksperimen (Gambar 5A).
Untuk mengeksplorasi mekanisme yang mendasarinya, kami menyelidiki
efek allicin pada pensinyalan MAPK dan SAPK/JNK, yang masing-masing
sangat penting untuk induksi sitokin pro dan anti-inflamasi. Makrofag
peritoneal yang berasal dari tikus C57BL/6 terinfeksiM.tb dan diobati dengan
allicin (30 g/ml) selama satu jam, dan status aktivasi jalur MAPK dan SAPK/
JNK diselidiki melalui western blotting (Gambar 5B). Sehubungan dengan
makrofag yang terinfeksi dan tidak diobati, peningkatan fosforilasi SAPK/JNK
diamati pada makrofag yang diobati dengan allicin. Namun, aktivasi p38-
MAPK secara signifikan dihambat. Khususnya, p38 MAPK non-fosforilasi,
SAPK/JNK dan tingkat GAPDH pemeliharaan rumah tidak berubah setelah
pengobatan allicin (Gambar 5B). Sebelumnya, Son et al. telah menunjukkan
bahwa pengobatan allicin selama lebih dari 20 jam menurunkan regulasi
ekspresi ICAM-1 yang diinduksi gamma IR melalui penghambatan aktivasi
AP-1 dan jalur JNK dalam sel endotel vena umbilikalis manusia (HU-VECs) (
Son et al., 2006), namun, dalam penelitian kami, kami memperlakukan
makrofag primer turunan murine dengan allicin selama satu jam dan
memeriksa sinyalnya. Data ini semakin diperkuat olehXu dkk. (2014)di mana
mereka menunjukkan peningkatan yang signifikan dalam fosforilasi JNK
pada pengobatan dengan allicin sedini 15 menit (Xu dkk., 2014).
4. Diskusi
Terapi TB saat ini panjang dan terdiri dari beberapa antibiotik, yang tidak
hanya menimbulkan risiko untuk generasi resistensi obat tetapi juga merusak
respon imun protektif host, sehingga meningkatkan kerentanan terhadap infeksi
ulang dan reaktivasi penyakit.Tousif et al., 2014). TB yang resistan terhadap obat
menyebar pada tingkat yang mengkhawatirkan, dan hampir semua negara di
seluruh dunia berada di bawah ancaman TB MDR dan XDR. Yang paling penting,
strain TDR sudah muncul. Oleh karena itu, kelas terapi baru sangat dibutuhkan
untuk memerangi organisme mematikan ini. Baru-baru ini, yang lain dan kami
melaporkan bahwa kombinasi antibiotik dan imunomodulator memberikan
kemanjuran yang unggul sebagai modalitas terapi untuk TB (Tousif et al., 2014;
Bhattacharya dkk., 2014a;Singh dkk., 2016). Oleh karena itu, senyawa yang
memiliki efek imunomodulator antibiotik dan pelindung pejamu mungkin sangat
menjanjikan untuk terapi TB. Senyawa yang berasal dari tumbuhan merupakan
sumber daya yang sangat besar, namun belum dieksplorasi dengan baik.
Penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa ekstrak bawang putih memiliki
aktivitas anti-mikobakteri (Rivlin, 2001; Rios dan
VP Dwivedi, dkk.
Recio, 2005; Ross et al., 2001; Ankri dan Mirelman, 1999; Bakri dan Douglas, 2005;
Rao dkk., 1946; Hasan dkk., 2007; Su et al., 2008), dan senyawa aktifnya allicin juga
menunjukkan berbagai aktivitas imunomodulator (Ankri dan Mirelman, 1999;
Miron et al., 2000, 2002). Kami memperluas penelitian ini dan menemukan bahwa
allicin serta ekstrak bawang putih dapat membunuh TB yang sensitif terhadap
obat dan juga resistan terhadap obat (MDR dan XDR) TB. Kami selanjutnya
memperhatikan bahwa allicin membunuhM.tb berada di makrofag tanpa
mengubah kelangsungan hidup inang. Oleh karena itu, ekstrak allicin/ bawang
putih merupakan pilihan yang menjanjikan untuk mengobati TB yang resistan
terhadap obat (Gambar 1).
TB adalah penyakit lingkungan yang miskin, dan di daerah pedesaan pasien
sering tidak pergi ke fasilitas perawatan kesehatan. Oleh karena itu, kami menguji
apakah ekstrak kasar bawang putih, senyawa aktifnya adalah allicin, dapat
digunakan untuk mengobati TB MDR dan XDR. Temuan kami menunjukkan bahwa
allicin atau ekstrak bawang putih secara drastis mengurangi beban bakteri pada
model murine yang rentan serta resistan terhadap obat tuberkulosis (Gambar 3).
Selain itu, terapi kombinasi dengan INH dan ekstrak bawang putih/allicin semakin
mengurangi beban basil. Keseimbangan dinamis antara subset sel Th yang
berbeda menentukan hasil infeksi, perkembangan infeksi laten, atau
perkembangan penyakit akut.Rahman dkk., 2015; Benteng, 2007; Hawn dkk., 2013
). Telah didokumentasikan dengan baik bahwa sel T helper (Th1) yang
memproduksi IFN-γ menginduksi respons imun protektif yang kuat terhadap
M.tb, sedangkan sel T helper (Th2) yang memproduksi IL-4 mempromosikan
perkembangan penyakit dengan menghambat sel Th1 pelindung inang (Rahman
dkk., 2015; Benteng, 2007; Hawn dkk., 2013). Oleh karena itu, pengalihan simultan
dari respon imun inang diperlukan untuk secara selektif menginduksi subset sel
Th1 yang memproduksi IFN-γ untuk meningkatkan perlindungan terhadap
M.tb, dan secara bersamaan menghambat sel Th2 (Rahman dkk., 2015; Benteng,
2007). M.tb berhasil menghambat produksi IL-12 pada inang yang rentan dan
dengan demikian menghambat perkembangan respon Th1 (Rahman dkk., 2015;
Hawn dkk., 2013). Selain itu, telah ditunjukkan dengan jelas bahwaM.tb tidak
hanya mencegah respons Th1, tetapi juga memfasilitasi respons Th2 yang
melawan regulasi respons Th1 host-protective (Rahman dkk., 2015).
Mempertimbangkan kemanjuran pengobatan yang unggul dari terapi kombinasi
dengan antibiotik dan imunomodulator, kami berusaha untuk menyelidiki respons
imun yang diubah oleh ekstrak bawang putih.dalam hidup. Hasil kami
menunjukkan bahwa ekstrak bawang putih meningkatkan sitokin pro-inflamasi
protektif dan memiliki efek sederhana pada sitokin anti-inflamasi, yang
merupakan hasil yang diinginkan untuk kemanjuran pengobatan TB yang optimal.
Selanjutnya, ekstrak bawang putih meminimalkan efek peredam kekebalan dari
isoniazid (Gambar 4).
Untuk lebih mendalami mekanisme di balik hasil yang diperoleh, kadar
sitokin pro dan anti-inflamasi intraseluler pada makrofag yang terinfeksi
dianalisis setelah pengobatan allicin. Menariknya, kami menemukan bahwa
allicin menginduksi respons pro-inflamasi, tetapi tidak pada tingkat yang
berlebihan. Khususnya, allicin secara selektif menghambat TNF-α, L-10
sedangkan kadar IL-1β dan IL-12 meningkat secara moderat (Gambar 4).
Meskipun respon inflamasi diperlukan untuk perlindungan host terhadap
M.tb infeksi, peradangan yang berlebihan merugikan dan bisa berakibat fatal (
Tobin dkk., 2012; Juffermans et al., 2000). Konsisten dengan gagasan ini,
penambahan steroid bersama dengan antibiotik konvensional menghasilkan
peningkatan kemanjuran pengobatan pada kasus TB tertentu.Tobin dkk., 2012;
Juffermans et al., 2000).
Konsisten dengan hasil ini, kami menemukan bahwa pengobatan dengan
allicin secara selektif menginduksi respons Th1, yang diketahui mengerahkan
respons imun pelindung inang. Telah diketahui dengan baik bahwa IL-1β
memainkan peran penting dalam perlindungan inang terhadapM.tb infeksi (
Yamada dkk., 2000; Cooper dkk., 2011; Saha dkk., 1994). Berdasarkan gagasan ini,
bersama dengan temuan kami bahwa allicin secara berbeda mengatur TNF-α dan
IL-1β dalam makrofag yang terinfeksi, kami berhipotesis bahwa jumlah bakteri
dalam makrofag menentukan besarnya respons inflamasi dan regulasi sitokin
yang berbeda. Menariknya, kami menemukan bahwa allicin secara dramatis
menghambatM.tb invasi makrofag (Gambar 2.). Temuan ini mendorong kami
untuk mengukur ekspresi ICAM-1, karena kami sebelumnya telah menunjukkan
bahwa penghambatan ICAM-1 secara dramatis berkurang
M.tb invasi makrofag (Bhalla dkk., 2015). Namun demikian,
8
Jurnal Etnofarmakologi 243 (2019) 111634
laporan sebelumnya menetapkan bahwa up-regulasi ICAM-1 dan down-regulasi
molekul co-stimulator secara simultan adalah salah satu mekanisme
penghindaran kekebalan utama yang diadopsi oleh M.tb (Parameswaran dan
Patial, 2010). Oleh karena itu, ekstrak allicin/bawang putih memberikan beberapa
fungsi penting, termasuk penghambatan invasi mikobakteri; pembunuhan
langsungM.tb, dan modulasi respon imun protektif pejamu.
Lebih lanjut, allicin meningkatkan aktivasi jalur SAPK/JNK pada makrofag
yang terinfeksi, yang sangat penting untuk induksi sitokin pro-inflamasi
serta anti-inflamasi dan hasil ini sesuai dengan literatur yang diterbitkan di
mana telah ditunjukkan bahwa allicin menginduksi produksi IL1β melalui
jalur SAPK/JNK (Gambar 5) (Xu dkk., 2014). Selain itu, pengobatan allicin
menghambat fosforilasi p38 MAPK, yang mungkin menjadi penyebab
penurunan regulasi TNF-α yang menciptakan peradangan mendalam (
Gambar 5) (Dwivedi dkk., 2017; Schorey dan Cooper, 2003). Aktivasi jalur
SAPK/JNK dalam makrofag memberikan kekebalan host protektif selama
M.tb infeksi dan menghasilkan berbagai molekul efektor yang menunjukkan
aktivitas anti-mikobakteri (Dwivedi dkk., 2017; Schorey dan Cooper, 2003).
Secara keseluruhan, hasil kami dengan jelas menunjukkan bahwa ekstrak
bawang putih tidak hanya membunuh strain rentan obat dariM.tb tetapi
juga membatasi pertumbuhan berbagai strain yang resistan terhadap obat
in vivo. Hasil ini memerlukan studi lebih lanjut dan validasi ekstrak bawang
putih untuk pengobatan TB.
5. Kesimpulan
Data kami menunjukkan bahwa ekstrak bawang putih berhasil membunuh varian
tuberkulosis yang resistan terhadap obat dan juga memiliki efek imunomodulator. Selain
itu, ia membalikkan efek peredam kekebalan dari obat anti-TB garis depan. Oleh karena
itu, penambahan ekstrak bawang putih bersamaan dengan pengobatan antibiotik
konvensional akan sangat membantu dalam mengobati TB yang rentan maupun yang
resistan terhadap obat.
Ucapan Terima Kasih
Kami mengakui dukungan dari Fasilitas Tantangan Aerosol
Tuberkulosis yang didukung DBT di Pusat Internasional untuk Rekayasa
Genetik dan Bioteknologi (ICGEB, New Delhi, India) dan staf mereka
dalam menyelesaikan pekerjaan ini. VPD dan AB dan merupakan
penerima Beasiswa Fakultas DST-INSPIRE. VPD juga merupakan
penerima Early Career Research Award (ECRA), Science and Engineering
Research Board (SERB), Department of Science and Technology (DST),
Government of India. DB adalah penerima Senior Research
Associateship dari Council of Scientific and Industrial Research (CSIR),
Pemerintah India. Kami mengakui dukungan keuangan dari
Departemen Sains dan Teknologi (DST) dan Departemen Bioteknologi
(DBT), Pemerintah. dari India.
Kontribusi penulis
Ved Prakash Dwivedi, Debapriya Bhattacharya, Mona Singh, Ashima
Bhaskar, Santosh Kumar dan Parveen Sobia melakukan eksperimen.
Ved Prakash Dwivedi, Debapriya Bhattacharya, Ashima Bhaskar, Luc
Van Kaer dan Gobardhan Das menulis naskahnya.
Konflik kepentingan
Para penulis mengkonfirmasi bahwa tidak ada konflik kepentingan.
Lampiran A. Informasi pendukung
Data tambahan yang terkait dengan artikel ini dapat ditemukan dalam
versi online di doi:10.1016/j.jep.2018.12.008.
VP Dwivedi, dkk.
Referensi
Ankri, S., Mirelman, D., 1999. Sifat antimikroba allicin dari bawang putih. Mikroba
Menulari. 1, 125–129.
Bakri, IM, Douglas, CW, 2005. Efek penghambatan ekstrak bawang putih pada bakteri mulut. Lengkungan.
Lisan. Biol. 50 (7), 645–651.
Bhalla, K., Chugh, M., Mehrotra, S., Rathore, S., Tousif, S., Dwivedi, VP, Prakash, P.,
Samuchiwal, SK, Kumar, S., Singh, DK, Ghanwat, S., Kumar, D., Das, G., Mohmmed, A.,
Malhotra, P., Ranganathan, A., 2015. Host ICAM memainkan peran invasi sel oleh
mycobacterium tuberculosis dan plasmodium falciparum. Nat. komuni.
6, 6049.
Bhattacharya, D., Dwivedi, VP, Maiga, M., Maiga, M., Kaer, LV, Bishai, WR, Das, G.,
2014b. Imunoterapi kecil yang diarahkan molekul terhadap infeksi berulang dengan
Mycobacterium tuberculosis. J.Biol. Kimia 289, 16508–16515.
Bhattacharya, D., Dwivedi, VP, Kumar, S., Reddy, MC, Kaer, LV, Moodley, P., Das, G.,
2014a. Penghambatan simultan T helper 2 dan diferensiasi sel pengatur T oleh
molekul kecil meningkatkan kemanjuran vaksin bacillus calmette-guerin. J.Biol. Kimia
289, 33404–33411.
Biradar, SM, Mote, GD, Sutar, GV, 2014. Ekstraksi bawang putih dan antibiotik penambah
aktivitas allicin. Int J. Phytomed. Res. 4, 2.
Chatterjee, S., Dwivedi, VP, Singh, Y., Siddiqui, I., Sharma, P., Van Kaer, L.,
Chattopadhyay, D., Das, G., 2011. Antigen awal yang disekresikan ESAT-6 dari mycobacterium
tuberculosis mempromosikan respons sel T helper 17 protektif dengan cara yang bergantung pada
reseptor-2 seperti tol. Pathog PLoS. 7 (11), e1002378.
Cohen, KA, Abeel, T., Manson McGuire, A., Desjardins, CA, Munsamy, V., Shea, TP,
et al., 2015. Evolusi TB yang resistan terhadap obat secara ekstensif selama empat dekade:
sekuensing genom keseluruhan dan analisis penanggalan Mycobacterium tuberculosis isolat
dari KwaZulu-Natal. PLoS Med. 12 (9), e1001880.
Cooper, AM, Mayer-Barber, KD, Sher, A., 2011. Peran sitokin bawaan dalam miko-
infeksi bakteri. Imunol mukosa. 4 (3), 252–260.
Curtis, HU, Störmann, NJ, Slusarenko, AJ, 2004. Aktivitas spektrum luas dari vo-
fitoanticipinallicin latile dalam ekstrak bawang putih (Allium sativum L.) terhadap bakteri
patogen tanaman, jamur dan Oomycetes. Fisiol. mol. Tanaman Patol. 65, 79–89.
Dini, C., Fabbri, A., Geraci, A., 2011. Potensi Peran Bawang Putih (Allium sativum) terhadap
pandemi tuberkulosis yang resistan terhadap banyak obat: tinjauan. Ann. Ist. Super. Sanitasi 47
(4), 465–473.
Dwivedi, VP, Bhattacharya, D., Chatterjee, S., Prasad, DV, Chattopadhyay, D., Kaer,
LV, Bishai, WR, Das, G., 2012. Mycobacterium tuberculosis mengarahkan diferensiasi sel T
helper 2 dengan menginduksi produksi interleukin-1β dalam sel dendritik. J.Biol. Kimia 287,
33656–33663.
Dwivedi, Wakil Presiden, Bhattacharya, D., Yadav, V., Singh, DK, Kumar, S., Singh, M., Ojha, D.,
Ranganathan, A., Kaer, LV, Chattopadhyay, D., Das, G., 2017. Bergenin fitokimia
meningkatkan respons T helper 1 dan kekebalan anti-Mycobacterial dengan
mengaktifkan jalur MAP kinase di makrofag. Depan. Sel. Menulari. Mikrobiol. 7, 149.
Dye, Christopher, 2014. Setelah 2015: penyakit menular di era baru kesehatan dan kematian
perkembangan. Philos. Trans. R. Soc. London. B Biol. Sci. 369 (1645), 20130426.
Adil, RJ, Tor, Y., 2014. Antibiotik dan resistensi bakteri di abad ke-21. Perspektif.
Med. Kimia 6, 25–64.
Hasan, N., Siddiqui, MU, Toossi, Z., Khan, S., Iqbal, J., Islam, N., 2007. Allicin-induced
penekanan Mycobacterium tuberculosis 85B mRNA dalam monosit manusia.
Biokimia. Biofis. Res. komuni. 355, 471–476.
Hawn, TR, Matheson, AI, Maley, SN, Vandalc, O., 2013. Terapi yang diarahkan tuan rumah untuk
tuberculosis: bisakah kita memanfaatkan inangnya? Mikrobiol. mol. Biol. Wahyu 77 (4), 608–627.
Juffermans, NP, Florquin, S., Camoglio, L., Verbon, A., Kolk, AH, Speelman, P., van
Deventer, SJ, van Der Poll, T., 2000. Sinyal interleukin-1 sangat penting untuk pertahanan
inang selama tuberkulosis paru murine. J. Menginfeksi. Dis. 182, 902–908.
Miron, T., Rabinikov, A., Mirelman, D., Wilchek, M., Weiner, L., 2000. Modus tindakan
dari allicin: permeabilitasnya yang siap melalui membran fosfolipid dapat berkontribusi pada
aktivitas biologisnya. Biokim. Biofis. Akta 1463, 20-30.
Miron, T., Feigenbalt, G., Weiner, L., Mirelman, D., Wilchek, M., Rabinikov, A., 2002. A
uji fotometrik spektro untuk allicin, allin dan alliinase (alliin-lyase) dengan tiol
kromogenik: reaksi 4-merkaptopiridin dengan tiosulfinat. dubur. Biokimia. 307, 76–
83.
Parameswaran, Narayanan, Patial, Sonika, 2010. Crit. Pdt. Gen Ekspr. 20 (2),
87-103.
Petrovska, BB, Cekovska, S., 2010. Ekstrak dari sejarah dan sifat medis dari
Bawang putih. Farmakogni. Wahyu 4 (7), 106–110.https://doi.org/10.4103/0973-7847.
65321.
Jurnal Etnofarmakologi 243 (2019) 111634
Pinto, L., Menzies, D., 2011. Pengobatan tuberkulosis yang resistan terhadap obat. Menulari. Tahan Obat.
4, 129–135.
Rahman, MA, Sobia, P., Dwivedi, VP, Bhawsar, A., Singh, DK, Sharma, P., Moodley,
P., Kaer, LV, Bishai, WR, Das, G., 2015. Mycobacterium tuberculosis TlyA secara
negatif mengatur diferensiasi Th1 dan Th17 dan mendorong patogenesis
tuberkulosis. J.Biol. Kimia 290 (23), 14407–14417.
Rao, RR, Rao, SR, Natarajan, S., Venkataraman, PR, 1946. Penghambatan
Mycobacterium tuberculosis dengan ekstrak bawang putih. Alam 157 (441-441).
Reuter, HD, Lawson, DL, 1996. Efek terapeutik dan aplikasi bawang putih dan bahannya
persiapan. Dalam: Koch, HP, Lawson, LD (Eds.), Bawang Putih: Ilmu Pengetahuan dan
Aplikasi Terapi Allium sativum L. dan Spesies Terkait, 2nd ed. William dan Wilkins,
Baltimore, Md, hlm. 135–212.
Rios, JL, Recio, MC, 2005. Tanaman obat dan aktivitas antimikroba. J.
Etnofarmaka. 100, 80–84.
Rivlin, RS, 2001. Perspektif sejarah penggunaan bawang putih. J. Nutr. 131 (3 detik),
951S–954S.
Rook, GA, 2007. Sitokin Th2 dalam kerentanan terhadap tuberkulosis. Curr. mol. Med. 7,
327–337.
Ross, ZM, O'Gara, AE, Hill, DJ, Sleightholme, HV, Maslin, DJ, 2001. Antimikroba
sifat minyak bawang putih terhadap bakteri enterik manusia: evaluasi metodologi dan perbandingan
dengan sulfida minyak bawang putih dan bubuk bawang putih. aplikasi Mengepung. Mikrobiol.
67, 475–480.
Saha, B., Das, G., Vohra, H., Ganguly, NK, Mishra, GC, 1994. Sel makrofag-T masuk
interaksi dalam infeksi mikobakteri eksperimental. Regulasi selektif molekul co-
stimulator padaMycobacterium makrofag yang terinfeksi dan implikasinya dalam
penekanan respon imun yang diperantarai sel. Eur. J. Imun. 24 (11), 2618–2624.
Schorey, JS, Cooper, AM, 2003. Makrofag memberi sinyal pada infeksi mikobakteri:
MAP kinase memimpin. Mikrobiol Sel. 5, 133-142.
Sharifi-Rad, J., Salehi, B., StojanoviC-radiusC, ZZ, Fokou, PVT, Sharifi-Rad, M., Mahady,
GB, Iriti, M., 2017. Tanaman obat yang digunakan dalam pengobatan tuberkulosis -
Pendekatan etnobotani dan etnofarmakologi. Biotechnol.Adv.https://doi. org/
10.1016/j.biotechadv.2017.07.001.
Shenoi, S., Friedland, G., 2009. TBC yang resistan terhadap obat secara luas: wajah baru untuk
patogen lama. annu. Pdt. Med. 60, 307–320.
Singh, DK, Dwivedi, VP, Ranganathan, A., Bishai, WR, Kaer, LV, Das, G., 2016.
Blokade saluran Kv1.3 K+ meningkatkan kemanjuran vaksin BCG dengan memperluas
limfosit memori pusat. J. Menginfeksi. Dis. 214 (9), 1456–1464.
Son, EW, Mo, SJ, Rhee, DK, Pyo, S., 2006. Penghambatan ekspresi ICAM-1 oleh bawang putih
komponen, allicin, dalam sel endotel vaskular manusia yang diiradiasi gamma
melalui downregulasi jalur pensinyalan JNK. Int Imunofarmakol. 6 (12), 1788–
1795.
Su, Q., Tian, Y., Zhang, J., Zhang, H., 2008. Efek suplementasi allicin pada plasma
penanda kerusakan otot akibat olahraga, IL-6 dan kapasitas antioksidan. Eur. J.
Aplikasi Fisiol. 103, 275–283.
Tobin, DM, Roca, FJ, Oh, SF, McFarland, R., Vickery, TW, Ray, JP, Ko, DC, Zou,
Y., Bang, ND, Chau, TTH, Vary, JC, Hawn, TR, Dunstan, SJ, Farrar, JR, Thwaites, GE,
King, M., Serhan, CN, Ramakrishnan, L., 2012. Genotipe tuan rumah- terapi spesifik
dapat mengoptimalkan respon inflamasi terhadap infeksi mikobakteri. Sel 148 (3),
434–446.
Tousif, S., Singh, DK, Ahmad, S., Moodley, P., Bhattacharyya, M., Kaer, LV, Das, G.,
2014. Isoniazid menginduksi apoptosis Sel CD4+T teraktivasi: implikasi untuk
reaktivasi dan reinfeksi tuberkulosis pascaterapi. J.Biol. Kimia 289, 30190–30195.
Wallock-Richards, D., Doherty, CJ, Doherty, L., Clarke, DJ, Place, M., dkk., 2014.
Bawang putih ditinjau kembali: aktivitas antimikroba ekstrak bawang putih yang mengandung
allicin terhadapBurkholderia cepacia kompleks. PLoS One 9 (12), e112726.
WHO, 2013. Laporan Tuberkulosis Global. Jenewa.
WHO, 2015a. Pengembangan Vaksin Tuberkulosis. Jenewa.
WHO, 2015b. Laporan Tuberkulosis Global. Jenewa. WHO, 2016.
Laporan Tuberkulosis Global 2016. Jenewa.
Xu, Ling, Yu, Jin, Zhai, Dongxia, Zhang, Danying, Shen, Wei, Bai, Lingling, Cai, Zailong,
Yu, Chaoqin, 2014. Peran aktivasi JNK dan translokasi Bax mitokondria dalam apoptosis
yang diinduksi allicin pada sel SKOV3 kanker ovarium manusia. jelas. Komplemen Berbasis.
Alternatif Med. 2014, 378684.
Yamada, H., Mizumo, S., Horai, R., Iwakura, Y., Sugawara, I., 2000. Peran pelindung
interleukin-1 pada infeksi mikobakteri pada tikus double-knockout IL-1 alpha/beta. Lab
Investasikan 80, 759–767.