PRINSIP DASAR

ANALISIS DNA
Nama : Syafira Ulfi Arifa Mata Kuliah: Biologi Molekuler
Kelas : Pendiidkan Biologi 6.01 Dosen : Shefa Dwijayanti
NPM : 2010305060 Ramadani, M.Pd.
Pertemuan : 10

EKSTRAKSI DNA merupakan teknik pemisahan DNA yang pertama kali

dilakukan untuk mendapatkan DNA murni

TAHAPAN ANALISIS DNA Isolasi DNA :

1. Lysis: Proses pemecahan sel sehingga DNA dapat
terilisi keluar
2. Binding: Proses pengikatan DNA sehingga dapat
terpisah dari protein dan materi pengotor lainnya.
3. Washing : Tahapan pencucian materi genetik DNA
agar terpurifikasi.
4. Elute : Tahapan resuspensi dengan penambahan
larutan buffer sebagai pelarut dari materi DNA.
JENIS METODE EKSTRAKSI:
Konvensional
METODE CSCL/ETBR
menggunakan perbedaan densitas ion cesium, air, dan EtBr
yang mana baik untuk memisahkan materi DNA. Kekurangan
dari metode CsCl/Br, yakni memakan durasi waktu yang lama
serta senyawa EtBr tergolong zat yang berbahaya.
METODE PHENOL-CHLOROFORM
melibatkan pencampuran larutan fenolkloroform serta sampel
disertai penggunaan sentrifugasi dengan instrumen
centrifuge. Metode tersebut relatif lebih mudah dibandingkan
dengan metode CsCl/EtBr dan lebih umum dan aman
digunakan untuk ekstraksi asam nukleat di laboratorium
klinis.
Berbasis KIT
METODE SPIN COLUMN
metode ekstraksi DNA yang menggunakan partikel inti
bersilika sebagai pengganti penggunaan larutan fenol pada
tahapan ekstraksi.
METODE MAGNETI C BEAD
menerapkan prinsip lisis alkali yang dimodifikasi diikuti
dengan pengikatan asam nukleat ke partikel magnetik
1. melisis sel secara fisik, dengan cara penggerusan.
2. pemecahan dinding sel.
3. pemecahan membran sel.
4. pemisahan DNA dari bahan yang lain.
PRINSIP ISOLASI DNA
sentrifugasi presipitasi
PURIFIKASI DNA
DNA, RNA, DNA harus
dengan phenol
polisakarida, dipisahkan dari
protein RNA dan protein
extraction
menyebabkan protein kehilangan kelarutannya dan
mengalami presipitasi yang selanjutnya dapat
dipisahkan dari DNA melalui sentrifugasi.
Penelitian Purifikasi DNA menggunakan ekstrak Jahe
DNA pada mahluk sel eukariota terdapat di dalam nukleus, yang
melibatkan berbagai protein pengikat DNA Penggunaan deterjen
dalam proses purifikasi DNA manusia di sini berfungsi untuk
membuka membran sel dan membran inti sel. Membran sel dan
inti sel sebagian besar terdiri dari lipid, deterjen akan
menghancurkan lipid pada membran sehingga DNA akan keluar
dari nukleus dan masuk ke dalam larutan.
Jenis-jenis Purifikasi DNA
Purifikasi
DNA liquid-liquid berbasis alkohol
Purifikasi DNA berbasis gel silika
Purifikasi DNA berbasis gel agarosa Purifikasi DNA berbasis
pertukaran ion kromatografi Purifikasi DNA berbasis kimia
 Teknik Dasar Analisis Biologi Molekuler

Analisis DNA
Prinsip di balik metode ekstraksi tanaman
adalah memecah dinding sel, membran sel,
dan membran inti untuk melepaskan molekul
DNA utuh dan kemudian menghilangkan
komponen seluler lainnya seperti protein,
fenol, lipid, dan metabolit sekunder.

Ekstraksi DNA hewan umumnya dilakukan

dengan menggunakan darah hewan tetapi
terkadang jaringan otot. Karena hewan tidak
memiliki dinding sel, penggilingan mekanis
tidak diperlukan dalam ekstraksi.

Isolasi DNA bakteri diawali dengan pemecahan

sel, dilakukan secara kimia dengan
penambahan buffer cell lysis solution dan
nuclei lysis untuk mengeluarkan DNA dari
dalam inti sel
QUESTION

ANSWERS
Mengapa Ekstraksi DNA umumnya menggunakan hewan atau darah hewan tetapi
terkadang jaringan otot?
Jawab : Karena hewan tidak memiliki dinding sel, penggilingan mekanis tidak diperlukan dalam
ekstraksi.

Adakah metode lain selain metode fenol-kloroform dalam Ekstraksi DNA hewan ?
Jawab : Salah satu bentuk modifikasi proses ekstraksi DNA ialah penggunaan kit ekstraksi
komersial yang telah berisi campuran bahan yang dibutuhkan untuk proses ekstraksi dengan
waktu pengerjaan yang cukup singkat ( ±2 jam).