PEMERIKSAAN BILIRUBUIN TOTAL DAN DIRECT

TUJUAN
1. Tujuan Umum :
Mahasiswa mampu mengetahui prinsip pemeriksaan bilirubuin total dan direct pada
sampel serum.
2. Tujuan Khusus
a. Mahasiswa mampu melakukan pemeriksaan bilirubuin total dan direct pada sampel
serum.
b. Mahasiswa mampu menginterpretasikan hasil dari pemeriksaan bilirubuin total dan
direct pada sampel serum.

METODE
Malloy-Evelyn modified, end point.

PENDAHULUAN

PRINSIP
Prinsip pemeriksaan yaitu asam sulfanilat bereaksi dengan natrium nitrat untuk membentuk
asam sulfanilat yang diazotisasi. Di hadapan akselerator (setrimida), bilirubin terkonjugasi
dan tak terkonjugasi bereaksi dengan asam sulfanilat diazotisasi untuk membentuk
azobilirubin (total Bilirubin 4 +1). Dengan tidak adanya akselerasi, hanya bilirubin
terkonjugasi yang bereaksi (Bilirubin Direct 4 +1). Peningkatan absorbansi pada 550nm
sebanding dengan konsentrasi bilirubin.
Sulfanilic Acid +NaNO2 Diazotized Sulfanilic Acid
Bilirubin+Diazotized Sulfanilic Acid Azobilirubin

ALAT DAN BAHAN

Alat:
 Mikropipet + tip
 Spektrofotometer
 Tabung serologi
 Rak tabung
  Beaker glass
 Centrifuge

Bahan, Reagen merk Elitech:

Bahan:

 Bilirubin total (R1) dengan komposisi:

Sulfanilic Acid 29 mmol/L

Hydrochloric acid 67 mmol/L
Cetrimide 37 mmol/L

 Bilirubin directl (R1)

Sulfanilic Acid 29 mmol/L

Hydrochloric acid 67 mmol/L

 Bilirubin total dan directl (R2)

Sodium nitrit 5,8 mmol/L

Sampel : Serum, plasma

CARA KERJA
Bilirubin total
1. Campur reagen 1 dan 2 dengan perbandingan 4:1 (contoh :1000 uL R1 dengan 250 uL
R2 ) homogenkan  WR ( working reagen)
2. Setelah disiapkan WR maka dilanjutkan dengan prosedur dalam tabel

Blanko Standar Sampel

Working Reagen (WR) 500 µl 500 µl 500 µl
Aquadest 50 µl - -
Standar - 50 µl -
Sampel - - 50 µl
Campur dan baca optical density (OD) setelah inkubasi 10 menit dengan panjang
gelombang 546 nm.
 Bilirubin direct
1. Campur reagen 1 dan 2 dengan perbandingan 4:1 (contoh :1000 uL R1 dengan 250 uL
R2 ) homogenkan  WR ( working reagen)
2. Setelah disiapkan WR maka dilanjutkan dengan prosedur dalam tabel

Sampel
Working Reagen (WR) 500 µl
Sampel 50 µl
Campur dan baca optical density (OD) setelah inkubasi 10 menit dengan panjang
gelombang 546 nm.

Bila menggunakan perhitungan manual maka akan digunakan kalkulasi sebagai berikut:
𝐴𝑏𝑠 𝑆𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑚𝑔
𝑥 𝑘𝑜𝑛𝑠𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑘𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑡𝑜𝑟( )
𝐴𝑏𝑠 𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟 𝑑𝑙
Konversi :
mg/dl x 17,1 = µmol/L

INTERPRETASI
 Total bilirubin dalam serum/plasma pada orang dewasa dan anak-anak
diatas 10 tahun adalah 0.3 – 1,2 mg/dL ( 5 – 21 µmol/L),
 Bilirubin direct <0,2 mg/dL ( 3,4 µmol/L)