BILIRUBIN D + T liquicolor

Uji Fotometrik untuk Billirubin Langsung (D) dan Total (T)

Metode : Modifikasi metode Jendrassik & Grof.

Tujuan : Untuk mengetahui kadar bilirubin langsung dan total dalam darah seseorang.

Prinsip :

Bilirubin bereaksi dengan Diazotised Sulphanilic Acid (DSA) untuk membentuk warna azo
merah. Absorbansi zat warna ini pada 546 nm berbanding lurus dengan konsentrasi bilirubin
dalam sampel. Bilirubin glukuronida yang larut dalam air bereaksi langsung dengan DSA,
sedangkan bilirubin yang tidak langsung terkonjugasi albumin hanya akan bereaksi dengan
DSA dengan adanya akselerator: bilirubin total = bilirubin langsung + tidak langsung.

Reaksi :

Asam sulfanilik + natrium nitrit → DSA

Bilirubin + DSA → Azobilirubin Langsung (Direct)

Bilirubin + DSA + akselerator → Azobilirubin Total

Komposisi Reagen :

[TBR] Reagen Bilirubin Total (tutup putih).

Asam Sulfanilic 14 mmol/l

Asam Hidrokloric 300 mmol/l

Kafein (akselerator) 200 mmol/l

Sodium Benzoat 420 mmol/l

[TNR] Reagen T-Nitrite (tutup putih).

Untuk penentuan bilirubin total.

Sodium nitrit 390 mmol/l

[DBR] Pereaksi Bilirubin Langsung (tutup biru).

Asam sulfanilic 14 mmol/l

Asam Hidrokloric 300 mmol/l

[DNR] reagen D-Nitrite (tutup biru).

Untuk penentuan bilirubin langsung

Sodium nitrit 25 mmol/l

Persiapan dan Stabilitas Reagen :

Kedua larutan reagen dan nitrit siap digunakan. Mereka stabil, bahkan setelah dibuka,
sampai tanggal kedaluwarsa yang diberikan ketika disimpan pada 15-25 ° C. Kontaminasi
larutan harus dihindari.

Spesimen :

Serum atau plasma heparin. Hindari dari hemolisis, Sampel harus dilindungi dari cahaya.
Stabilitas: Bilirubin stabil selama 3 hari jika disimpan pada perlindungan cahaya pada suhu 2-
8 ° C.

Cara Kerja :
Untuk Bilirubin Total
1. Pipet ke dalam kuvet :
Blanko Sampel Sampel
TBR 1000 μl 1000 μl
TNR - 1 tetes (40 μl)
2. Homogenkan secara merata, inkubasi selama 5 menit.
Sampel 100 μl 100 μl
3. Homogenkan, inkubasi pada suhu kamar selama 10-30 menit. Ukur absorbansi sampel
terhadap blanko sampel (∆A546).

Untuk Bilirubin langsung

1. Pipet ke dalam kuvet :
Blanko Sampel Sampel
DBR 1000 μl 1000 μl
DNR - 1 tetes (40 μl)
2. Homogenkan secara merata, tambahkan sampel dalam waktu 2 menit.
Sampel 100 μl 100 μl
3. Homogenkan, inkubasi pada suhu kamar selama tepat 5 menit. Ukur absorbansi sampel
terhadap blanko sampel (∆A546).

Perhitungan :
Hitunglah konsentrasi bilirubin total dan langsung dengan menggunakan faktor 13,0.
Konsentrasi bilirubin [mg/dl] =∆A546 x 13,0
[mg/dl] x 17,1 = [µmol / l]

Linearitas :
Uji ini linier hingga 25 mg/dl. Untuk konsentrasi bilirubin yang melebihi 25 mg/dl,
diencerkan sampel 1 + 4 dengan larutan garam fisiologis (0,9%) dan ulangi pengujian.
Kalikan hasilnya dengan 5.

Nilai Normal :

Bilirubin total [mg/dl] [μmol/l]

Saat lahir Sampai 5 (≤ 5 mg/dl) 85.5 (≤ 85.5 μmol/l)
5 hari Sampai 12 (≤ 12 mg/dl) 205.0 (≤ 205.0 μmol/l)
1 bulan Sampai 1.5 (≤ 1.5 mg/dl) 25.6 (≤ 25.6 μmol/l)
Dewasa Sampai 1.1 (≤ 1.1 mg/dl) 18.8 (≤ 18.8 μmol/l)
Bilirubin langsung
Dewasa Sampai 0.25 (≤ 0.25 mg/dl) 4.3 (≤ 4.3 μmol/l)

Catatan :

1. Pastikan pereaksi bilirubin dan pereaksi nitrit tercampur secara merata sebelum
menambahkan sampel.

2. Tingkat bilirubin dapat dikurangi jika sampel terkena cahaya. Hemolisis juga akan
menurunkan nilai bilirubin karena efek penghambatan hemoglobin pada reaksi diazo.