Penggolongan Darah

Tri Ratnaningsih
Departemen Patologi Klinik – FKKMK UGM
Instalasi Lab Terpadu RSUP Dr. Sardjito
Yogyakarta
 Materi dan Tujuan Pembelajaran

Indikasi (importance of blood grouping)

Prinsip penggolongan darah

Dapat Teknik penggolongan darah

menjelaskan

Aspek praktis

Poin-poin penting
 Kepentingan Penggolongan Darah

 Transfusi darah
 Penyakit Hemolitik Bayi Baru Lahir (HDN)
 Perselisihan paternitas
 Kepentingan Medikolegal
 Kerentanan Terhadap Berbagai Penyakit
 Pemeriksaan Kesehatan Rutin
 Prinsip Penggolongan Darah: Landsteiner’s Law

Jika antigen terdapat

pada sel darah merah
pasien, maka dalam
kondisi normal
antibodi yang sesuai
tidak akan ada dalam
plasma pasien

Fenotipe Genotipe
 Teknik penggolongan darah
slide

Visual tabung
hemaglutinasi
optical –
gel
microplate
Fenotipe imprint

flow
Genotipe cytometric
Hemaglutinasi
 Konsep Penggolongan Darah

Cell grouping =
forward type
RBC Antisera yang Cek
spesimen diketahui Ab nya aglutinasi

Menambahkan sel pasien dengan antisera yg telah diketahui (anti-A, Anti-B)

 menentukan antigen yang ada pada RBCs

Serum grouping =
Reverse Type
Plasma RBC yang Cek
spesimen diketahui Ag nya aglutinasi

Menambahkan serum pasien dengan sel yg telah diketahui (sel A, sel B)

 menentukan antibodi yg ada pada serum
Interpretasi Hasil Pemeriksaan Blood Grouping
Metode slide

 Tes harus dilakukan pada suhu

kamar atau lebih rendah
 Slide harus kering dan diberi label
dengan benar
 Antisera harus selalu ditambahkan
sebelum menambahkan sel
 Hasil harus dicatat segera setelah
pengamatan
 Sampel yang memberikan reaksi
yang lemah atau meragukan harus
diuji dengan metode tabung
Metode slide: penilaian hasil reaksi

• Hasil Positif: gumpalan-gumpalan

kecil yang floating di antara cairan
jernih
• Hasil Negatif: suspensi eritrosit
 Metode Slide

• Waktu: 5–10 min, (+) palsu: cepat mengering

murah, praktis, hasil
cepat 
• Sesuai untuk kondisi
emergensi atau untuk
uji pendahuluan
terutama di lapangan
 agregasi sel
(-) palsu: reaksi lemah 
sulit diinterpretasi
Tidak direkomendasikan
sebagai metode rutin
 Metode tabung

 Fresh sample (bila tdk memungkinkan simpan pd suhu 2-8oC dan

diperiksa dalam 48 jam)
 Tidak ada tanda hemolisis
 Membuat suspensi eritrosit 3% (forward typing)
 Serum pasien untuk konfirmasi (reverse grouping)
 Reagen Anti sera dan sel A dan B (tersedia komersial)
 Laboratorium bisa menyiapkan sendiri sel A and sel B dari individu
yang mempunyai gol darah A dan B
Menyiapkan suspensi eritrosit
 Metode tabung

Cell grouping (Forward grouping) Serum grouping (Reverse grouping)

Tes eritrosit pasien dengan serum Anti- Tes serum pasien dg sel A dan B yang
A & Anti-B yang diketahui untuk diketahui utk menentukan jenis
menentukan Ag eritrosit pasien Antibodi pasien
Penilaian Hasil Reaksi
 Metode tabung

Metode rekomendasi

• Memungkinkan inkubasi antigen • Labor intensive

dan antibody lebih lama tanpa • Tidak ada otomasi
kuatir terjadi drying • Sangat tergantung teknisi
• Tabung dapat disentrifus utk
memperkuat reaksi
• Dapat mendeteksi antigen/
antibodi yg lemah
 Reaksi Mixed field

 Transfusi RBC masif gol O–negative

kepada non-O–type
 Resipien mendapatkan Hematopoietic
stem cell dari donor dengan gol ABO
berbeda
 Infeksi bakteri dan keganasan
 Kondisi chimera
Gel test

 Prinsip size exclusion

 Microtubes mengandung glass
microbeads yang diberi antisera/sel
 Reaksi Antigen-antibody terjadi dalam
reaction chamber di microtube
 Sentrifugasi mendorong eritrosit ke arah
gel.
 Gel matriks sebagai saringan:
 sel yg aglutinasi terjebak dalam
matriks
 sel bebas (tdk aglutinasi) dapat lewat
dan menetap di bag. bawah tube
Interpretation of Gel test

0 Pelet di dasar kolom gel

W+ Aglutinasi berukuran sangat kecil yang hampir tidak terlihat
di bagian bawah kolom gel dan yang tidak teraglutinasi di
bagian dasar
1+ Aglutinasi di separuh bawah kolom
2+ Aglutinasi sepanjang kolom
3+ Aglutinasi di separuh atas kolom
4+ Pita padat di bagian atas kolom gel
mf Pita di bagian atas gel atau tersebar di seluruh kolom gel,
dan pelet di bagian dasar
H Hemolisis
Interpretasi hasil Gel test
 Metode gel

 Meningkatkan
sensitivitas dan  Perlu setrifus khusus
spesifisitas  Relatif Mahal
 Praktis, mudah dibaca
 Akurat
 Terstandarisasi
 Volume kecil
 Tidak butuh
pencucian
 Metode microplate
- +

• Plat mengandung 96 sumur kecil

• Bentuk dasar sumur: U, V, dan flat
bottom
• Tahapan:
• Tambahkan reagen dan sampel
pasien
• Inkubasi
• Sentrifugasi
• Resuspensi
• Baca hasil dan interpretasi
 Metode microplate

 Sesuai untuk pengujian

jumlah besar  Perlu sentrifus khusus
 Sensitif untuk mendeteksi  Sesuai untuk pengujian
reaksi yang lebih lemah
 Hasil dapat difoto untuk arsip
dalam jumlah besar
 Penghematan waktu dan
biaya
 Microplate untuk sekali pakai
namun dapat digunakan
Kembali
 Microplate dapat disesuaikan
untuk otomatisasi
Kontrol

Memastikan reagen OKE

D grouping
 Deteksi Weak D

2 - 5% sel
• Inkubasi pd 37oC,15-30
dlm salin menit
• Cuci dg salin (x3) utk
D Sentrifus pd 3500 rpm. menghilangkan
unbound antibody
Baca, catat
• Tambah 2 tts reagen
AHG
• Sentrifus dan baca
aglutinasi

Bila “D” positive  hasil Rh +

Bila “D” negative, lanjutkan
pemeriksaan
anti-D Bila aglutinasi hasil weak D
Bila tdk ada aglutinasi  hasil D neg
 Pemeriksaan Rh
Sel pasien, sel O, dan DCT dikerjakan
bersamaan
OS = sel pasien + reagen anti D
Sel O = sel O Rh pos + reagen anti D
DCT = sel pasien saja

 Gol O Rh positif sbg kontrol positif

 DCT disini sbg kontrol; skrining thd
ab ireguler yg mungkin
menyebabkan hasil positif pada
sel yg akan dites.

Rhesus (+) Hasil +1 pada sel yg dites (OS) disebabkan krn

DCT nya yg positif sehingga gol RhD negatif
Modern strategies
Metode Automatic Electronic System
moderen
Waveguide-mode sensors

Paper-Based Diagnostics

Molecular Imprinting for ABO Blood Typing

Flow cytometric

Blood group genotyping

Ideal: a single testing method, that offers sensitive and speedy results at a relatively low cost.
Poin-poin penting
 ABO grouping meliputi forward dan reverse
grouping
 Apabila ada diskrepansi, diperlukan tes
lanjutan untuk memastikan gol darah yang
sebenarnya
 Melaporkan grade/kekuatan/skor aglutinasi
 Untuk hasil negatif, disarankan menggunakan
lambang bilangan nol ‘0’ daripada tanda
minus (-)
 Reaksi Mixed field menunjukkan adanya dua
populasi eritrosit  penting dalam
identifikasi anomaly blood typing
 Serum/plasma dan suspensi eritrosit
ditambahkan dalam jumlah yang seimbang
untuk standarisasi dan mencegah fenomena
prozone
 Kontrol yang sesuai sebaiknya disertakan
pada setiap batch dari tes
 Hasil tes dilaporkan sesuai protokol
laboratorium segera setelah pembacaan hasil
 Hasil kontrol dibaca pertama kali, dan hanya
bila valid, baru hasil tes dibaca
 Pada penggolongan Rh, hasil yang
menunjukkan negatif dan bereaksi lemah
memerlukan tes lanjutan untuk menentukan
varian D (weak D, partial D).
 Secara garis besar, penyebab hasil positif dan
negative palsu: faktor bahan, alat, dan human
error
Referensi
• ISBT Science Series, Special issue: Introduction to Blood Transfusion:
From Donor to Recipient, Volume 15 Supplement 1 December 2020
• Jeffrey McCullough, Transfusion Medicine, 3rd ed, 2012, Blackwell
Publishing
• Michael F. Murphy, Practical Transfusion Medicine, 2013, Wiley-
Blackwell.
Semoga bermanfaat
Yogyakarta, 15 Oktober 2021