Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

racun
Tinjauan

Racun Protein Risin dan Racun Shiga sebagai Alat untuk

Menjelajahi Mekanisme Internalisasi Seluler dan Transportasi
Intraseluler

Kirsten Sandvig1,2,* , Simona Kavaliauskiene1 dan Tore Skotland1

1 Departemen Biologi Sel Molekuler, Institut Penelitian Kanker, Rumah Sakit Universitas Oslo, Rumah
Sakit Radium Norwegia, 0379 Oslo, Norwegia; si mona.kavaliauskiene@medisin.uio.no (SK);
toresko@uio.no (TS)
2 Departemen Biosains, Universitas Oslo, 0315 Oslo, Norwegia
* Korespondensi: ksandvig@radium.uio.no

----
---
Kutipan:Sandvig, K.;
Kavaliauskiene, S.; Skotland, T. Racun
Protein Risin dan Racun Shiga sebagai
Alat untuk Menjelajah Seluler
Mekanisme Internalisasi dan
Transportasi Intraseluler.Racun2021
Abstrak:Racun protein yang dikeluarkan oleh bakteri dan ditemukan pada tumbuhan dapat menjadi ancaman bagi kesehatan
manusia. Namun, toksisitasnya yang ekstrim juga dapat dimanfaatkan dengan cara yang berbeda, misalnya untuk menghasilkan
racun hibrid yang ditujukan untuk melawan sel kanker dan untuk mempelajari mekanisme transportasi dalam sel. Investigasi
selama beberapa dekade terakhir telah menunjukkan betapa kuatnya molekul-molekul ini sebagai alat dalam penelitian biologi
sel. Di sini, pertama-tama kami menyajikan tinjauan sebagian sejarah, dengan penekanan pada toksin Shiga dan risin, tentang
bagaimana toksin tersebut telah digunakan untuk mengkarakterisasi proses dan protein yang penting untuk perdagangannya.
Di paruh kedua artikel ini, kami menjelaskan bagaimana seseorang sekarang dapat menggunakan racun untuk menyelidiki
peran kelas lipid untuk transportasi intraseluler. Dalam beberapa tahun terakhir, telah dimungkinkan untuk mengukur ratusan
spesies lipid menggunakan analisis spektrometri massa. Dengan demikian, sekarang juga dimungkinkan untuk mengeksplorasi
pentingnya spesies lipid dalam transportasi intraseluler. Analisis terperinci dari perubahan lipid yang terlihat dalam kondisi
transportasi toksin yang terhambat mengungkapkan hubungan yang sebelumnya tidak diketahui antara sintesis kelas lipid dan
menunjukkan kemampuan sel untuk mengkompensasi dalam kondisi tertentu.
Kata kunci:endositosis; transportasi intraseluler; Aparat Golgi; retikulum endoplasma; membran; lemak;
spektrometri massa
Kontribusi Utama:Kami membahas bagaimana toksin Shiga dan risin telah digunakan untuk mempelajari endositosis dan

, 13, 377. https://doi.org/10.3390/ transpor intraseluler. Kami juga menunjukkan bagaimana analisis spektrometri massa lipid telah berkontribusi pada

oxin13060377 peningkatan pengetahuan tentang proses tersebut dan telah memberikan informasi baru tentang metabolisme lipid.

Diterima: 19 April 2021

Diterima: 22 Mei 2021
Diterbitkan: 25 Mei 2021 1. Perkenalan
Sejumlah toksin protein dari tumbuhan atau yang disekresikan oleh bakteri secara efisien
Catatan Penerbit:MDPI tetap netral
memabukkan sel dengan mengikat permukaan sel dan, setelah masuk ke dalam sitosol, mereka
sehubungan dengan klaim yurisdiksi
menghambat sintesis protein secara enzimatik, sehingga membunuh sel. Beberapa toksin ini terdiri dari
dalam peta yang diterbitkan dan afiliasi
dua bagian, satu yang berikatan dengan sel dan satu lagi yang memiliki aktivitas enzimatik (untuk
kelembagaan.
ulasan, lihat [1]). Contoh dari dua racun tersebut, yaitu toksin tumbuhan risin, yang terdapat pada biji-biji
Ricinus communis, dan toksin bakteri Toksin Shiga, yang disekresikan olehShigella dysenteriae,
ditunjukkan pada Gambar1. Bagian yang aktif secara enzimatik dapat, dalam kedua kasus,
menonaktifkan subunit 60S ribosom dengan menghilangkan satu adenin dari RNA 28S.2,3]. Menariknya,
Hak cipta:© 2021 oleh penulis.
beberapa racun tumbuhan lain memiliki struktur dua rantai serupa yang dihubungkan oleh jembatan
Penerima Lisensi MDPI, Basel, Swiss.
disulfida. Meskipun racun ini berasal dari tanaman yang berbeda, mereka berbagi kemampuan untuk
Artikel ini adalah artikel akses terbuka
menonaktifkan ribosom dengan cara yang sama. Racun tersebut adalah abrin, modeccin, viscumin, dan
yang didistribusikan berdasarkan
volkensin.1].
syarat dan ketentuan lisensi Creative
Commons Attribution (CC BY) (https://
creativecommons.org/licenses/by/
4.0/).

Toksin S2021,13, 377. https://doi.org/10.3390/toxins13060377 https://www.mdpi.com/journal/toxins

Racun2021,13, 377 2 dari 29

Gambar 1.Struktur dari (A) Toksin Shiga (PDB ID:1DM0 [4] Dan (B) risin (PDB ID: 2AAI) [5] ditentukan dengan
kristalografi sinar-X. Bagian A yang aktif secara enzimatis berwarna merah, dan bagian B berwarna hijau.
Fragmen A1 dari toksin Shiga berwarna merah lebih gelap daripada fragmen A2. Jembatan disulfida yang
menghubungkan bagian yang aktif secara enzimatik dengan toksin lainnya ditunjukkan dengan warna kuning
dan ditandai dengan lingkaran biru pada struktur pita. Dicetak ulang dengan izin dari ref. [6] Hak Cipta 2014
Elsevier.

Sekitar 40 tahun yang lalu, para peneliti mulai mendapatkan informasi tentang bagaimana
racun ini dapat dipindahkan ke sitosol. Data yang diperoleh saat itu menunjukkan bahwa beberapa
toksin tampak masuk ke dalam sitosol setelah penyerapan endositik. Untuk toksin difteri, toksin
bakteri lain mampu menghambat sintesis protein (walaupun dengan ADP-ribosilasi faktor
pemanjangan 2) [7], ada beberapa bukti transfer ke dalam sitosol setelah pengambilan sejak
amonium klorida, diketahui meningkatkan pH lisosom, melindungi sel terhadap keracunan [8].
Pada tahun 1980, telah dipublikasikan bahwa toksin difteri dapat masuk langsung melalui
membran sel ketika sel-sel dengan toksin difteri yang terikat permukaan terpapar pada pH
rendah.9,10]. Temuan ini membuka jalan untuk penyelidikan serupa dari beberapa racun lain yang
juga mengalami perubahan konformasi yang diinduksi pH rendah dan translokasi berikutnya
melalui membran.1]. Bagaimana dengan toksin lain yang tidak memerlukan pH endosom rendah
untuk masuk ke dalam sitosol? Apakah endositosis tidak relevan untuk entri sitosol? Struktur
toksin kolera dengan cincin subunit-B dan bagian-A di tengah membuat para ilmuwan
menyarankan bahwa bagian-A entah bagaimana bisa tenggelam melalui membran dan memasuki
sitosol. Namun, seperti yang kita ketahui hari ini, bukan itu masalahnya. Pada tahun 1982, terlihat
bahwa risin diendositosis dalam kondisi protektif, seperti Ca2+kekurangan atau pH 6,0, sel-sel
mabuk ketika perlindungan dilepaskan [11]. Ini menunjukkan bahwa toksin endositosis dapat
memasuki sitosol, dan penelitian selanjutnya mengungkapkan bahwa beberapa racun, termasuk
toksin Shiga dan risin, dipindahkan ke Golgi dan ER sebelum translokasi ke sitosol (Gambar2).
Sebenarnya, toksin Shiga adalah toksin pertama yang ditemukan diangkut dari permukaan sel ke
Golgi dan ER [12]. Kemampuan racun protein ini untuk ditranslokasikan dari permukaan sel dan
secara retrograde ke ER dari mana bagian A dilepaskan telah menjadikannya alat yang sangat baik
untuk mempelajari proses dan langkah-langkah transportasi yang terlibat. Efek terakhir mereka
pada sintesis protein memberi kita sistem uji yang sangat sensitif untuk kedatangan di sitosol. Jadi,
mencari senyawa yang melindungi dari toksin protein tidak hanya bermanfaat sehubungan
dengan penyakit atau keracunan oleh toksin ini, tetapi juga dapat membantu kita memperjelas
jalur transportasi dalam sel. Konstruksi molekul toksin yang dimodifikasi secara genetik dengan
situs sulfasi, yang dimodifikasi di trans-Golgi, dan situs glikosilasi yang dapat dimodifikasi di ER [13
,14] telah sangat membantu dalam mengungkap langkah mana yang terpengaruh. Dengan
demikian, racun telah berkontribusi pada pengetahuan kita tentang transportasi dari permukaan
sel ke endosom, ke aparatus Golgi, dan ke ER dan selubung nukleus. Racun juga dapat
dimanfaatkan untuk menyelidiki bagaimana sel-sel itu
Racun2021,13, 377 3 dari 29

dipengaruhi oleh paparan pengobatan lain. Misalnya, mereka telah digunakan untuk menunjukkan
bahwa serapan partikel nano dapat mengubah jalur seluler lainnya [15].

Gambar 2.Endositosis dan pengangkutan mundur toksin Shiga dan risin. Kedua racun mengikat
reseptor permukaan sel. Toksin Shiga berikatan dengan glikosfingolipid Gb3, dan risin berikatan dengan
galaktosa terminal glikolipid atau glikoprotein. Setelah endositosis, toksin diangkut langsung ke
aparatus Golgi atau melalui endosom daur ulang sebelum diangkut lebih lanjut ke UGD, di mana bagian
A (fragmen A1 untuk toksin Shiga) dilepaskan dan dipindahkan ke sitosol. Begitu berada di sitosol, rantai
A aktif menghambat sintesis protein dengan menghilangkan satu adenin dari RNA 28S subunit 60S
ribosom. Perhatikan bahwa daur ulang dan transportasi ke lisosom tidak ditampilkan. Dicetak ulang
dengan izin dari ref. [16] Hak Cipta 2013 Springer.

Yang penting, racun protein dapat dieksploitasi dalam pengobatan [17–20]. Para peneliti mencoba
menggunakan toksin protein untuk membunuh sel kanker secara selektif dengan membuat konstruksi
yang mengandung setidaknya bagian toksin yang aktif secara enzimatik dan antibodi terhadap epitop
pada sel kanker atau faktor pertumbuhan yang reseptornya diekspresikan pada tingkat tinggi. pada sel
sasaran. Sejauh ini, beberapa produk yang mengandung bagian aktif toksin difteri danPseudomonas
eksotoksin A telah disetujui untuk digunakan manusia [19,21]. Gb3 glikosphingolipid netral, yang
berfungsi sebagai reseptor toksin Shiga, banyak ditemukan pada sel kanker [17,18]. Oleh karena itu,
toksin ini dapat digunakan untuk mendeteksi kanker dan menargetkan obat ke sel kanker. Satu studi
yang memanfaatkan pengangkutan toksin ke UGD untuk melepaskan obat kanker telah diterbitkan
beberapa tahun yang lalu [22], dan akan menarik untuk melihat perkembangan lebih lanjut di bidang
penargetan toksin.
Seperti dijelaskan di bawah, pandangan kami saat ini tentang kompleksitas mekanisme endositik,
seperti yang diilustrasikan pada Gambar3, telah dikembangkan sebagian dengan mempelajari toksin
protein seperti risin dan toksin Shiga. Mengenai mekanisme yang terlihat pada Gambar3, kami merujuk
ke artikel baru berikut untuk perincian lebih lanjut: Endositosis yang bergantung pada clathrin [23,24];
jalur yang bergantung pada Cdc42, yang dapat menjelaskan 70% dari penyerapan cairan [25]; ulasan
terbaru tentang FEME (Fast Endophilin-Mediated Endocytosis) [26]; dan, untuk ulasan yang lebih umum, [
27].
Racun2021,13, 377 4 dari 29

Gambar 3.Tinjauan mekanisme endositik dalam sel yang tidak terpolarisasi (A) dan sel terpolarisasi (B). Kami telah menunjukkan beberapa jalur
seperti endositosis yang bergantung pada clathrin, caveolae (sekarang dianggap sebagai struktur yang cukup stabil), Cdc42/GRAF1, dan lain-lain.
Perlu dicatat bahwa penyerapan independen clathrin diatur dengan cara yang berbeda pada sisi apikal dan basolateral seperti yang dijelaskan
dalam teks. Perlu dicatat bahwa pada sel MDCK semua caveola berada di sisi basolateral. Dicetak ulang dari ulasan akses terbuka [27].

2. Jalur Seluler Dieksploitasi oleh Racun

Bagian ini menjelaskan beberapa aspek historis dari kemajuan ilmiah dalam biologi sel yang
melibatkan racun, dengan penekanan pada racun risin dan Shiga. Uraian tersebut juga
memberikan latar belakang bagaimana toksin dapat digunakan untuk mengklarifikasi pentingnya
lipid membran untuk transpor intraseluler dan fisiologi sel, yang dibahas di Bagian3.

2.1. Mekanisme Endositik dan Daur Ulang

Risin toksin protein mengikat berbagai molekul dengan galaktosa terminal. Seperti yang
dijelaskan dalam ulasan saat ini, toksin tersebut telah memberi kami informasi penting tentang
beberapa mekanisme seluler. Lebih dari 40 tahun yang lalu, kami menemukan bahwa risin dapat
dengan mudah diberi label dengan yodium radioaktif dengan metode enzimatik
(laktoperoksidase), yang mempertahankan afinitas pengikatannya ke permukaan sel, serta
toksisitasnya.28]. Ini kontras dengan pelabelan menggunakan kondisi oksidasi kuat, yang
mengurangi aktivitas risin. Selain itu, risin dapat dengan mudah dihilangkan dari permukaan sel
dengan penambahan laktosa, sehingga memudahkan penggunaannya dalam studi endositosis.
Studi awal mengungkapkan bahwa tidak ada batasan suhu yang ketat untuk penyerapan risin [29]
dan, lebih jauh lagi, endositosis fase cair dan risin bergantung pada kepadatan sel [30–32].
Kepadatan sel kemudian terbukti mempengaruhi komposisi lipid sel.33,34]. Selain itu, penelitian
awal ini mengungkapkan bahwa serapan endositik bukanlah jalan satu arah, karena risin yang
diinternalisasi dapat keluar dari sel lagi dalam bentuk utuh [29,35]. Hal yang sama juga terjadi
pada rantai B risin, yang menunjukkan bahwa daur ulang tidak terkait dengan toksisitas risin.
Sejak studi awal daur ulang risin ini, pengetahuan tentang berbagai mekanisme daur ulang dan
molekul yang terlibat telah meledak, dan ulasan tentang kerumitan proses ini baru-baru ini
diterbitkan oleh Weeratunga et al. [36].
Penyerapan toksin yang tidak tergantung clathrin pertama kali disarankan untuk toksin
kolera, yang dapat diamati di caveolae oleh EM [37], dan selanjutnya di dalam sel dalam vesikel
endositik. Diduga bahwa organel-organel ini, yang memiliki penampilan khas sebagai invaginasi
berbentuk labu dengan diameter 60-80 nm [38], bertanggung jawab untuk penyerapan toksin.
Karena toksin kolera dapat menginduksi Ca transmembran2+aktivasi -fluks dan kinase [39–41] ada
kemungkinan bahwa toksin itu sendiri dapat mempengaruhi caveolae.
Racun2021,13, 377 5 dari 29

Juga, pada saat itu, tidak dikecualikan bahwa toksin tersangkut di lokasi ini dan, setidaknya sampai
batas tertentu, dengan cepat diambil oleh mekanisme lain seperti endositosis yang bergantung
pada clathrin. Studi selanjutnya mengungkapkan bahwa toksin kolera, pada kenyataannya, dapat
diinternalisasi oleh mekanisme yang berbeda, dan mekanisme penyerapan clathrin-dependent
dan clathrin- dan dynamin-independent dapat terlibat [42–44]. Penyerapan dari caveolae biasanya
bukan proses yang sangat efisien [45]. Namun, caveolae dapat terjepit, dan isinya kemudian
dipindahkan ke endosom awal. Awalnya diterbitkan bahwa konten dari caveolae berakhir di
struktur netral yang disebut "caveosom", dan dari sana, konten tersebut diangkut ke retikulum
endoplasma [46]. Namun, gua-gua itu kemudian ditemukan sebagai artefak [47,48], dan penulis
menyarankan agar istilah tersebut tidak lagi digunakan. Meskipun demikian, para peneliti terus
menjelaskan bahwa mereka mungkin menargetkan, misalnya, nanopartikel ke "kaveosom" untuk
menghindari degradasi lisosom [49]. Meskipun virus seperti SV40 dapat menyebabkan pensinyalan
dan masuk melalui caveolae [50], virus ini juga dapat memasuki sel melalui mekanisme endositik
lainnya [51]. Menariknya, telah dibuktikan bahwa caveolin dapat menstabilkan ligan tertentu pada
permukaan sel. Ini adalah kasus, misalnya, faktor mobilitas autokrin (AMF) dan toksin kolera [52].
Perlu dicatat bahwa peran baru untuk caveolae baru-baru ini ditandai: Caveolae dapat
memberikan membran tambahan pada tekanan mekanis dan membentuk kembali dengan cara
yang bergantung pada ATP [38,53].
Selama tahun 1980-an, ricin memainkan peran penting dalam menunjukkan bukti keberadaan endositosis
clathrin-independen. Ketika sel terkena syok hipotonik dan penipisan kalium, beberapa jenis sel kehilangan
lapisan clathrin pada membran sel.54]. Setelah paparan sel terhadap pengobatan semacam itu, risin masih bisa
berakhir di kompartemen intraseluler yang tidak tersedia untuk antibodi, dan selanjutnya memabukkan sel.55].
Demikian pula, ketika sitosol diasamkan — suatu kondisi yang menghalangi pencubitan lubang berlapis clathrin
— risin diendositosis dalam beberapa tipe sel yang berbeda [56]. Namun, perkiraan awal menunjukkan bahwa
lubang berlapis clathrin dapat menjelaskan semua serapan ke dalam sel [57]. Pada saat itu, sejumlah argumen
digunakan untuk menimbulkan keraguan tentang keberadaan serapan yang tidak bergantung pada clathrin.
Misalnya, ketika clathrin dilepaskan dari membran setelah penipisan kalium, apakah masih ada mekanisme
penyerapan yang cukup untuk mempertahankan endositosis dari struktur yang sama? Ketika Anda melepaskan
lapisan clathrin atau mengasamkan sitosol untuk memblokir lubang yang dilapisi clathrin, apakah Anda
kemudian menginduksi mekanisme alternatif? Bahkan percobaan dengan sel yang tidak terganggu, yang
menunjukkan bahwa Concanavalin A dan transferin berakhir di vesikel terpisah segera setelah penyerapan,
tampaknya tidak membantu [58]. Tidak sampai laboratorium Schmid menunjukkan bahwa serapan fase cairan
berlanjut bahkan ketika serapan yang bergantung pada clathrin diblokir oleh ekspresi mutan negatif dominan
dinamin [59,60] bahwa resistensi terhadap keberadaan endositosis yang tidak bergantung pada clathrin
tampaknya menghilang. Dengan demikian, perubahan opini di lapangan bisa memakan waktu beberapa tahun.
Kemampuan sel untuk mengatur jalur endositik sebagai respons terhadap perubahan mekanisme pengambilan
lainnya merupakan tantangan saat mempelajari mekanisme tersebut. Penyerapan cairan berlanjut dengan
kecepatan yang sama setelah blok pada endositosis yang bergantung pada clathrin karena mekanisme
kompensasi [59,60], dan penelitian selanjutnya telah mengungkapkan ko-regulasi endositosis fase cairan yang
bergantung pada caveolar dan Cdc42 oleh fosfokaveolin-1 [61]. Setelah pengurangan fosfokaveolin-1, terjadi
peningkatan serapan tergantung Cdc42 dan sebaliknya. Cavin juga telah dilaporkan menurunkan regulasi jalur
yang bergantung pada Cdc42 [62]. Tentu saja, studi selanjutnya telah menunjukkan kompleksitas mekanisme
serapan [26,27,63].

Perlu dicatat bahwa endositosis clathrin-independen dalam sel terpolarisasi mengalami

regulasi diferensial pada sisi apikal versus basolateral. Ketika risin digunakan untuk
mempelajari serapan dari dua kutub dalam sel MDCK terpolarisasi, endositosis apikal
diregulasi oleh protein kinase A, protein kinase C, siklooksigenase, dan penghambatan
kalmodulin. Dalam kondisi yang sama, tidak ada efek pada serapan basolateral (untuk
ulasan, lihat [27]).
Caveolae diketahui bergantung pada kolesterol, dan penghilangan lipid ini atau penambahan
filipin, yang berikatan dengan kolesterol, dengan cepat menghancurkan struktur ini.64,65].
Namun, percobaan dengan risin dan penambahan metil-β-siklodekstrin, yang mengekstrak
kolesterol dari membran sel, menunjukkan bahwa makropinositosis juga sensitif terhadap
Racun2021,13, 377 6 dari 29

pengurangan lipid ini [66]. Selanjutnya, invaginasi lubang berlapis clathrin dihambat dengan
penambahan metil-β-siklodekstrin [67,68]. Bahkan dalam kondisi seperti itu, risin masih dapat
diendositosis oleh mekanisme lain (untuk ulasan, lihat [27]). Selain itu, literatur menunjukkan
bahwa penghambatan pengambilan ligan tertentu dengan pengurangan kolesterol diambil
sebagai bukti penyerapan ligan tersebut oleh caveolae. Ketika melaporkan bahwa serapan
nanopartikel agak besar (jauh lebih besar dari diameter caveolae) terjadi oleh mekanisme ini
karena pengurangan serapan setelah penambahan metil-β-siklodekstrin, kehati-hatian harus
dilakukan sebelum menarik kesimpulan.
Toksin Shiga, yang berikatan dengan glikosphingolipid Gb3 netral, telah mengajarkan kita
beberapa pelajaran dalam biologi sel. Toksin dapat endositosis oleh mekanisme endositik yang
berbeda, dan jelas dapat mempengaruhi penyerapannya sendiri (untuk ulasan, lihat [69–72]). Itu
adalah toksin pertama yang terbukti mampu berkumpul di lubang berlapis clathrin [73] meskipun
mengikat lipid yang tampaknya tidak berinteraksi dengan protein permukaan. Studi selanjutnya
menerapkan metode yang berbeda untuk mengganggu endositosis yang bergantung pada
clathrin, termasuk ekspresi mutan negatif dominan dinamin dan ekspresi RNA antisense yang
dapat diinduksi ke rantai berat clathrin, telah mendukung temuan ini [74,75]. Selanjutnya, ekspresi
dari kedua mutan negatif dominan epsin dan eps15 mengurangi serapan toksin Shiga [43].
Mekanisme di balik agregasi toksin dalam lubang berlapis clathrin masih belum diketahui.
Meskipun Gb3 tidak melintang membran, toksin mampu menginduksi aktivasi kinase.76–78] dan
fosforilasi clathrin [76]. Toksin Shiga juga mampu meningkatkan jumlah lubang berlapis clathrin,
dan dapat memengaruhi masa pakai struktur ini [79]. Selain itu, perlu dicatat bahwa serapan
toksin Shiga meningkat pada konsentrasi toksin yang tinggi di beberapa jalur sel. Peningkatan ini
bergantung pada subunit A dan tampaknya terjadi melalui lubang berlapis clathrin, karena tidak
terjadi pada sel BHK setelah induksi rantai berat antisense ke clathrin.80]. Meskipun toksin Shiga
dapat diendositosis dari lubang berlapis clathrin, fraksi yang menggunakan mekanisme serapan
ini kemungkinan bergantung pada tipe sel. Setelah pengurangan akumulasi toksin Shiga dalam
lubang berlapis clathrin, toksin dapat lebih mudah diambil oleh mekanisme lain. Selain itu, karena
mengganggu serapan yang bergantung pada clathrin juga dapat mengatur mekanisme lain,
pentingnya serapan yang bergantung pada clathrin cenderung diremehkan. Masih ada beberapa
pertanyaan yang harus dijawab terkait pengambilan toksin Shiga dari lubang berlapis clathrin:
Apakah ini terjadi terutama dari mantel dengan atau tanpa AP2 [81]? Protein lain atau modifikasi
protein mana yang terkait dengan lubang berlapis clathrin yang mungkin diperlukan untuk proses
ini? Apakah interaksi antara selebaran membran luar, yang mengandung Gb3, dan lipid membran
internal seperti fosfatidilserin (PS) atau fosfatidilinositolfosfat (PIP) diperlukan? Apakah spesies
lipid tertentu penting untuk proses ini? Kami baru-baru ini menerbitkan ulasan yang menjelaskan
bagaimana spesies PS tertentu dapat berperan dalam interaksi dengan protein sitosol [82]. Baru-
baru ini, PS ditemukan penting untuk pembentukan vesikel berlapis clathrin [83]. Pembentukan
dan hilangnya PIP yang kompleks selama pembentukan vesikel berlapis clathrin mungkin juga
terlibat [23]. Dengan demikian, penelitian lebih lanjut menggunakan toksin Shiga dalam hubungan
ini kemungkinan akan memberikan lebih banyak informasi tentang biologi sel.

Toksin Shiga bertahun-tahun yang lalu ditemukan mampu menginduksi invaginasi pada
permukaan sel [84], dan itu terbukti diambil dari struktur seperti itu dengan cara yang bergantung pada
dinamin, kolesterol, dan energi. Belakangan, ditunjukkan bahwa proses tersebut bergantung pada
endofilin A2 dan aktin dan agak terkait dengan jalur endositik yang disebut FEME [26], meskipun yang
terakhir tergantung pada aktivasi faktor pertumbuhan. Penyerapan toksin Shiga, di sisi lain, ditemukan
bergantung pada perubahan kelengkungan yang diinduksi toksin, sebuah proses yang dipelajari oleh
Johannes dan rekan kerja dalam beberapa tahun terakhir [69].

2.2. Transportasi Endosom ke Golgi

Racun ternyata sangat berguna untuk mempelajari endosome ke transportasi Golgi. Beberapa
toksin perlu ditranslokasikan ke Golgi dalam perjalanannya ke sitosol, dan alat awal yang berguna yang
menunjukkan pentingnya langkah transpor ini untuk intoksikasi adalah obat Brefeldin A (BFA), yang,
pada banyak tipe sel, mengganggu sebagian besar toksin. Aparat Golgi dan
Racun2021,13, 377 7 dari 29

menginduksi pengangkutan cisternae Golgi kembali ke UGD [85–87]. Namun, tidak semua sel memiliki
aparatus Golgi yang sensitif terhadap BFA.88–90], dan obat BFA secara selektif melindungi terhadap
keracunan dalam sel dengan aparatus Golgi yang sensitif terhadap BFA [90]. Dengan demikian,
seseorang dapat mempelajari efek dari molekul atau obat yang berbeda pada keracunan sel untuk
mempelajari tentang gangguan pada langkah transportasi ini. Yang penting, modifikasi kimia dari risin
yang dimodifikasi secara genetik atau rantai Shiga B dengan sulfat di trans Golgi atau dengan glikosilasi
risin di ER [13,14] telah memfasilitasi studi kami tentang jalur ini. Selain itu, mikroskop elektron dan
fluoresensi telah berkontribusi pada sejumlah besar pengetahuan yang kita miliki saat ini tentang
transpor ini. Kombinasi dari metode ini berguna untuk memvalidasi hasil, karena molekul dapat diamati
dalam struktur tanpa harus bergerak melalui struktur tersebut. Di sisi lain, molekul dapat ditransfer oleh
pembawa efisien berumur pendek, yang sulit diamati. Juga, jika perawatan sel mengubah tingkat sulfasi
atau glikosilasi, maka tidak ada cara mudah untuk "mengkompensasi" perubahan ini, yang mungkin
disebabkan oleh berkurangnya transportasi molekul seluler melalui sel dan oleh karena itu persaingan
yang lebih sedikit untuk sulfasi atau glikosilasi. Atau, bisa jadi karena aktivitas enzim yang terlibat lebih
rendah.
Studi yang dilakukan bertahun-tahun yang lalu dengan risin dan toksin Shiga (atau rantai Shiga B)
telah mengungkapkan bahwa, dalam perjalanan mereka dari endosom ke aparatus Golgi, molekul toksin
tidak harus diangkut melalui endosom akhir [91,92]. Sangat menarik untuk melihat dalam literatur,
bahwa rantai Shiga B sekarang disebutkan sebagai alat yang mapan untuk mempelajari transportasi ke
aparatus Golgi. Perbedaan penting antara risin dan toksin Shiga adalah bahwa protein endosomal
GPP130 diidentifikasi sebagai protein pengikat toksin Shiga yang membantu membawa toksin ini ke
badan Golgi.93,94]. Perlu diperhatikan bahwa GPP130 tidak berinteraksi dengan Shiga-like toxin 2 (Stx2),
yang penting untuk penyakit yang disebabkan oleh pengeluaran racunE.colispesies, dan mekanisme di
balik transportasi toksin ini ke Golgi tidak diketahui. Selama bertahun-tahun, berbagai kinase,
penyortiran nexin, protein Rab, Golgin, dan kompleks SNARE telah terbukti terlibat dalam transportasi
endosom ke Golgi (untuk ulasan, lihat [95,96]). Misalnya, dalam kasus toksin Shiga, Rab6A' ditemukan
diperlukan untuk transpor endosom ke Golgi [97,98]. Untuk ricin, baik Rab6A dan Rab6A' tampaknya
terlibat dalam langkah transpor ini, karena inhibisi transpor terbaik diperoleh dengan merobohkan
kedua isoform [99]. Yang penting, penelitian ini juga menggambarkan kemampuan sel untuk
mengkompensasi. Ketika knockdown Rab6A antara 40% dan 75%, penghambatan transportasi diamati,
tetapi jika knockdown lebih baik dari 75%, maka ada peningkatan Rab6A 'dan tidak ada penghambatan
transportasi. Eksperimen awal dengan penghambat PI-3 kinase menyarankan keterlibatan enzim ini
untuk transportasi risin ke Golgi [100], dan ini kemudian dikonfirmasi dalam penelitian dengan mutan
hVps34 dan siRNA [101]. Pada waktu yang hampir bersamaan, laboratorium yang berbeda menunjukkan
keterlibatan nexin penyortiran untuk pengangkutan risin dan toksin Shiga ke aparatus Golgi [101–103],
dan retromer dan clathrin juga dilaporkan terlibat dalam pengangkutan toksin Shiga [104]. Toksin Shiga
juga menginduksi disosiasi cPLA2α dari kompleks dengan Annexin A1, dan bentuk bebas aktif dari enzim
kemudian dapat memfasilitasi transportasi Golgi.41]. Kompartemen daur ulang digambarkan sebagai
stasiun perantara untuk racun Shiga dalam perjalanannya ke Golgi [105–108], tetapi karena
kompartemen ini tampaknya berbeda secara struktural dalam berbagai tipe sel, kepentingannya untuk
transportasi toksin dapat bervariasi.

2.3. Transportasi Toksin Retrograde dari Golgi ke UGD dan Translokasi ke Sitosol
Mekanisme yang dipelajari dengan baik untuk transpor retrograde dari Golgi ke ER adalah transpor
molekul yang dimediasi oleh COPI yang mengandung urutan KDEL (untuk ulasan, lihat [109,110]).
Namun, baik toksin Shiga maupun risin tidak memiliki urutan seperti itu, tetapi masih dapat berpindah
dari jaringan trans-Golgi ke UGD, seperti yang diilustrasikan untuk toksin Shiga pada Gambar.4. Studi
dengan transpor retrograde toksin Shiga telah menjelaskan kompleksitas transpor retrograde secara
umum, karena toksin Shiga ditemukan diangkut ke UGD melalui jalur independen COPI, bergantung
pada Rab6 [111–113]. Studi selanjutnya tentang toksin Shiga dan risin telah menggunakan siRNA atau
shRNA untuk menambahkan kandidat lain ke daftar molekul yang mungkin terlibat dalam transportasi
retrograde [114,115]. Ini termasuk kompleks COPII, TRAPP, dan GARP. Namun, penting untuk menyadari
bahwa beberapa efek mungkin tidak langsung. Misalnya, salah
Racun2021,13, 377 8 dari 29

penyortiran enzim furin, terlibat dalam pembelahan dan aktivasi toksin Shiga [116], mungkin
mengarah pada perlindungan tetapi belum tentu mempengaruhi transportasi toksin (untuk
diskusi tentang studi ini, lihat [16]). Lebih lanjut, perubahan aparatus Golgi, misalnya, gangguan
organel ini akibat ekspresi suhu yang sensitif∈Subunit -COP, ditemukan menginduksi jalur
transpor alternatif yang tahan BFA untuk risin ke UGD, menggambarkan kemampuan sel untuk
mengkompensasi hambatan dalam transpor [117].
Beberapa molekul berbeda kini telah diidentifikasi terlibat dalam transpor retrograde
dan untuk translokasi bagian toksin yang aktif secara enzimatik (untuk tinjauan, lihat [95,96]).
Sekali lagi, penting untuk menyadari kemampuan sel untuk menginduksi proses kompensasi.
Misalnya, Sec61 tidak ditemukan dalam skrining untuk molekul yang mampu melindungi dari
risin [115] tetapi sebelumnya ditemukan dapat berinteraksi dengan risin [118–120].
Akibatnya, orang mungkin bertanya-tanya apakah mekanisme translokasi alternatif entah
bagaimana beroperasi di bawah kondisi tersebut. Namun, penyaringan menunjukkan
pentingnya derlins, dan ada kemungkinan beberapa molekul dapat mendukung translokasi
ke sitosol. Ini berbeda dengan toksin Shiga, yang juga dilaporkan berada dalam kompleks
dengan Sec61 [121]. Studi skrining juga mendukung gagasan bahwa Sec61 terlibat dalam
transportasi ke sitosol [115].

Gambar 4.Lokalisasi intraseluler toksin Shiga endositosis-HRP dalam sel A431. Toksin Shiga
diamati di Golgi cisternae (GO), retikulum endoplasma (ER) dan amplop nuklir (NE). Bilah skala
adalah 0,5μM. Direproduksi dengan izin dari ref. [12] Hak Cipta 1992 Springer Nature.

Senyawa Retro-2 adalah contoh bagaimana identifikasi senyawa yang melindungi dari racun
risin dan Shiga dapat memberi kita pengetahuan dasar tentang mekanisme umum. Obat ini
memberikan perlindungan yang sangat baik terhadap toksin Shiga, tampaknya karena kurangnya
transportasi GPP130 dari endosom ke aparatus Golgi [122]. Hal ini terkait dengan kemampuannya
untuk menargetkan komponen ER Sec16A dan mencegah pengangkutan sintaksis 5 dari ER ke
Golgi [122]. Namun, obat ini juga melindungi terhadap ricin [123], tetapi penjelasan untuk
perlindungan ini tidak jelas. Studi selanjutnya cenderung memberikan lebih banyak informasi
tentang hubungan sintaksin 5 dengan kompleks SNARE lainnya dan transportasi di area ER-Golgi.
Menariknya, Retro-2 dilaporkan menghambat penargetan ER yang dimediasi ASNA-1 dan
penyisipan membran protein berlabuh ekor [124], sebuah temuan yang mungkin terkait dengan
perlindungan terhadap risin. Pengangkutan risin dari endosom ke aparatus Golgi dilaporkan
dihambat hanya sebesar 20% setelah penghancuran ASNA-1 [125]. Jadi, risin
Racun2021,13, 377 9 dari 29

transportasi tampaknya diblokir pada langkah selanjutnya di jalur retrograde dari toksin Shiga.
Pada tahun 1995, dilaporkan bahwa ekspresi sementara dari mutan GTPase Sar1, ARF1, dan Rab1,
terlindung dari risin, sehingga mengganggu perdagangan ER-Golgi [126]. Apakah pensinyalan
perubahan di ER disebabkan oleh perubahan di situs keluar ER [127] terkait dengan perlindungan
terhadap risin masih harus dijelaskan.
Racun shiga yang dihasilkan oleh bakteri masih menjadi ancaman bagi kesehatan manusia, begitu
pula keracunan risin. Dengan demikian, klarifikasi tentang cara kerja racun, serta pencarian senyawa
yang melindunginya, adalah penting. Dalam ulasan oleh Kavaliauskiene et al. [72], klorokuin dan
hidroksiklorokuin, keduanya obat yang digunakan pada manusia, mampu melindungi dari toksin Shiga
dan Stx2. Dalam ulasan terbaru oleh Selyunin dan Mykhopadhyay [95], beberapa obat lain, yang
semuanya disetujui untuk digunakan manusia, juga dijelaskan. Namun, tidak jelas apakah semua obat ini
bekerja dengan cara yang sama. Chloroquine mungkin menghambat translokasi dari ER, sedangkan
obat-obatan seperti tamoxifen tampaknya menghambat transportasi ke Golgi. Di bagian3.7, kami
menjelaskan bagaimana beberapa senyawa lain, seperti analog glukosa, lisolipid, dan prekursor lipid
eter, melindungi sel terhadap toksin Shiga dan Stx2 dengan mengerahkan perubahan dalam
perdagangan. Akan menarik untuk melihat apakah obat-obatan semacam itu dapat digunakan
sehubungan dengan penyakit menular.

3. Peran Lipid untuk Fungsi Membran dan Transportasi Intraseluler

Di sini, kami memberikan latar belakang singkat tentang lipid dan pentingnya struktur
membran, termasuk pentingnya komposisi lipid membran sel untuk transportasi dan toksisitas
toksin Shiga dan risin. Kami kemudian menjelaskan bagaimana penelitian yang dilakukan dengan
mengganggu metabolisme lipid telah berkontribusi pada pemahaman kami tentang transpor
membran dan mengungkapkan aspek baru metabolisme lipid.

3.1. Kelas dan Spesies Lipid

Lipid membran dikelompokkan ke dalam kelas yang berbeda berdasarkan kelompok kepala yang
berbeda, seperti kelas fosfolipid utama (PL): Phosphatidylcholine (PC), phosphatidylserine (PS),
phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylinositol (PI), dan asam fosfatidat (PA). Setiap kelas PL terdiri
dari banyak spesies lipid karena berbagai komposisi gugus asil lemak, dengan jumlah atom karbon dan
ikatan rangkap yang berbeda (Gambar5). Dengan demikian, sel mengandung beberapa ribu spesies lipid
yang berbeda. Dengan analisis spektrometri massa (MS) modern, dimungkinkan untuk mengukur
beberapa ratus atau mendekati seribu spesies lipid dalam satu sampel [128,129]. Sebagian besar PL
mengandung gugus asil lemak yang terikat ester, tetapi PL yang terhubung dengan eter mungkin
merupakan 5-20% lipid dalam beberapa sel dan sering disebut sebagai "lipid yang terlupakan". Sebagian
besar PL mengandung gugus asil lemak C16 atau C18 dengan nol, satu, atau dua ikatan rangkap,
meskipun rantai karbon yang lebih panjang dengan ikatan rangkap lebih banyak (misalnya, 20:4 dan
22:6) juga umum di beberapa kelas PL. Untuk artikel ulasan terbaru dan terperinci yang menjelaskan
keragaman lipid membran, lihat [130]. Biosintesis PL dan sphingolipid dan di mana bagian-bagian
berbeda dari lipid ini disintesis ditinjau dan diilustrasikan oleh penulis [131].
Racun2021,13, 377 10 dari 29

Gambar 5.Ilustrasi dari beberapa struktur lipid. Di atas, kolesterol (CHOL) ditampilkan, diikuti oleh PC 16:0/16:0,
yang merupakan spesies lipid yang sering digunakan dalam membran model. Namun, meskipun spesies PC
sangat umum dalam sel, PL biasanya mengandung sangat sedikit spesies dengan dua gugus asil lemak jenuh.
PS 18:0/18:1 adalah contoh PL dengan 1 gugus asil lemak jenuh dan 1 tak jenuh, yang merupakan kombinasi
paling umum dari gugus asil lemak di semua kelas PL. Perhatikan bahwa semua ikatan rangkap dalam PL ada di
acis-konfigurasi dan bahwa kelompok asil lemak tak jenuh paling sering ditemukan disn-2posisi. PE-P 18:0/20:4
adalah contoh plasmalogen, yaitu lipid eter dengan gugus alkenil, dan lipid ini sering mengandung gugus asil
lemak tak jenuh ganda disn-2posisi. Sphingolipid SM d18:1/24:1 ditunjukkan dengan bagian sphingosine yang
ditandai dengan warna pink. Perhatikan bahwa gugus asil lemak N-amidasi sangat panjang sehingga secara
teoritis dapat menembus kira-kira setengah jalan ke selebaran yang berlawanan. Struktur ini dibuat
menggunakan alat gambar yang tersedia di Lipid Maps (https://www.lipidmaps.org/(diakses pada 24 Mei 2021)).
Dicetak ulang dari tinjauan akses terbuka [132].

Toksin Shiga berikatan dengan glikosfingolipid Gb3. Gb3 disintesis dari ceramide, dan
struktur Gb3 serta prekursor GlcCer dan LacCer ditunjukkan pada Gambar6. Seperti yang
ditunjukkan pada Gambar5, sphingolipid berbeda dari PL, karena mereka memiliki tulang
punggung dasar sphingoid. Sementara rantai hidrofobik PL dihubungkan ke unit gliserol,
sphingolipid mengandung rantai asil lemak N-amidated, di mana atom N berasal dari serin.
Gugus asil lemak sphingolipid sangat berbeda dari yang ada di PL dan mengandung gugus
asil lemak dengan 16 sampai 26 atom karbon [133,134]. Spesies glikosphingolipid yang
paling umum mengandung N-amidated C16:0, C24:0, dan C24:1 (dan beberapa sel juga
memiliki jumlah C22:0 yang cukup banyak) [33,82]. Meskipun C16:0 juga umum di PL, C24:0
dan C24:1 belum dilaporkan ada di PL sepengetahuan kami. Selain itu, gugus asil lemak tak
jenuh tunggal dengan 16-20 atom karbon tampaknya tidak ada dalam glikosfingolipid.6,135].
Namun, sejumlah kecil Gb3 yang mengandung C18:1 baru-baru ini dilaporkan dalam sel
H1299 [136]. Karena glikosfingolipid biasanya mengandung sangat sedikit spesies dengan
gugus asil lemak C18 dan C20 teramidasi N, glikosfingolipid memiliki distribusi bimodal
mengenai panjang rantai asil lemak.82], yang dibahas lebih lanjut di bawah ini.
Racun2021,13, 377 11 dari 29

Gambar 6.Struktur reseptor Shiga Gb3 (A) dan sintesis Gb3 dari prekursornya GlcCer dan LacCer (B).
Huruf dan angka dari simbol struktur karbohidrat menggambarkan sifat dari ikatan glikosidik. Jadi, β4
mewakili hubungan β1-4 dengan karbohidrat di sebelah kanan, dan Gb3 adalah Galα1-4Galβ1-4GlcCer.
Digambar ulang dari [6] dengan persetujuan dari Elsevier.

Lipid membran bersifat amfifilik dengan kepala hidrofilik dan ekor hidrofobik.
Mereka membentuk membran bilayer di mana gugus lemak asil berada di tengah, dan
gugus kepala menghadap sekeliling di kedua sisi. Yang penting, lipid didistribusikan
secara asimetris dalam lapisan ganda seluler. Untuk diskusi saat ini, distribusi lipid
asimetris dalam membran plasma (PM) adalah penting. Di PM, mungkin semua
glikosfingolipid dan sebagian besar SM dan PC ditemukan di selebaran luar, sedangkan
PS, PE, PI, dan PA hampir secara eksklusif terletak di selebaran dalam [137,138].
Meskipun mungkin ada variasi yang cukup besar antara panjang rantai dan jumlah
ikatan rangkap di berbagai kelas PL, mereka paling sering mengandung gugus asil
lemak jenuh disn-1posisi dan gugus asil lemak tak jenuh pada posisi sn-2.
Kolesterol adalah lipid penting dalam membran biologis, dan mungkin merupakan 30-40% mol
lipid dalam PM. Banyak peneliti telah mempelajari interaksi antara kolesterol dan lipid membran lainnya,
serta bagaimana kolesterol didistribusikan di antara kedua selebaran tersebut. Beberapa penelitian
menunjukkan bahwa hampir semua kolesterol terletak terutama di bagian dalam atau luar selebaran
PM, sedangkan penelitian lain melaporkan bahwa kolesterol kurang lebih terdistribusi secara merata di
antara dua selebaran. Kesimpulan yang menyimpang ini menunjukkan bahwa beberapa metode yang
digunakan untuk mempelajari distribusi kolesterol dalam PM tidak dapat dipercaya. Oleh karena itu,
kami merujuk pada ulasan yang membahas masalah kontroversial ini [139]. Berdasarkan beberapa
laporan bahwa, misalnya, eksosom mengandung lebih dari 40% mol kolesterol [140], sulit untuk
dipahami bahwa kolesterol hanya dapat ditemukan di salah satu dari dua selebaran.

3.2. Kopling Interleaflet

Studi simulasi dinamika molekul telah terbukti sangat berharga untuk mempelajari struktur
membran, termasuk memperkirakan tingkat interaksi antara dua selebaran membran, yang sering
disebut sebagai interleaflet coupling atau interdigitation. Meskipun kopling interleaflet seperti itu
juga diamati pada model bilayer simetris, kopling yang lebih kuat diperoleh saat menggunakan
model asimetris [141]. Interdigitasi terbesar diamati ketika memasukkan sphingolipid rantai
panjang, seperti yang memiliki 24 atom karbon, karena rantai ini dapat melintasi bidang tengah
membran dan melanjutkan jauh ke selebaran yang berlawanan, seperti yang diilustrasikan pada
Gambar7[141–144]. Seperti disebutkan di atas, glikosfingolipid
Racun2021,13, 377 12 dari 29

menunjukkan distribusi bimodal dengan sebagian besar gugus asil lemak N-amidasi yang mengandung 16
atau 24 atom karbon. Kami baru-baru ini berspekulasi [82] bahwa spesies glikosfingolipid telah
mengembangkan cara ini untuk mendapatkan kekuatan yang berbeda dari penggandengan atau pensinyalan
interleaflet melalui PM.

Gambar 7.Ilustrasi interdigitasi antara 2 selebaran membran. (A) Bilayer multikomponen dengan SM d18:1/24:0
ditampilkan sebagai tongkat kuning dengan 8 atom karbon terakhir digambarkan sebagai bola merah. Lipid di
selebaran luar ditampilkan sebagai kaca biru transparan dan lipid di selebaran dalam sebagai kaca abu-abu transparan.
Untuk kejelasan, SM d18:1/24:0 hanya ditandai di bagian tengah. (B) Model lapisan ganda SM d18:1/16:0 dan kolesterol
di bagian luar selebaran dan dengan PS 18:0/18:1 dan kolesterol di bagian dalam selebaran. (C) Mirip dengan (B), tetapi
SM d18:1/16:0 telah ditukar dengan SM d18:1/24:0. Warna biru digunakan untuk selebaran bagian luar dan warna
kuning digunakan untuk selebaran bagian dalam. Perhatikan bahwa gugus asil lemak N-amidasi dalam (C) menembus
lebih dalam ke selebaran yang berlawanan daripada di (B). Untuk detail lebih lanjut, lihat artikel akses terbuka [141] dari
mana angka ini direproduksi.

Selama beberapa tahun terakhir, dimungkinkan untuk membuat vesikel lipid sintetik (liposom)
dengan lapisan ganda lipid asimetris. Kami percaya bahwa penggunaan studi simulasi liposom dan
molekuler dari membran asimetris akan berkontribusi pada pengetahuan baru yang penting tentang
membran seluler selama beberapa tahun ke depan. Ini penting, seperti yang dibahas dalam ulasan baru-
baru ini [82], bahwa studi tersebut dilakukan dengan menggunakan spesies lipid yang umum dalam sel
dan dengan distribusi lipid di antara dua selebaran yang meniru yang diamati pada membran biologis.
Sejauh ini, sebagian besar penelitian telah dilakukan dengan menggunakan lapisan ganda simetris yang
terbuat dari spesies lipid yang tidak umum dalam sel. Meskipun PL yang mengandung gugus asil lemak
seperti C16:0, C18:0, C16:1, atau C18:1 hadir dalam jumlah yang sangat rendah di dalam sel, spesies ini
seringkali merupakan komponen lipid utama dalam liposom yang digunakan untuk mempelajari
interaksi dengan berbagai protein. . Satu juga harus diingat bahwa membuat liposom simetris standar
dengan, misalnya, komposisi lipid "endosome-like" atau "exosome-like", menghasilkan membran.
Racun2021,13, 377 13 dari 29

dengan komposisi di selebaran luar yang sangat berbeda dari vesikel yang dimaksudkan untuk ditiru
oleh liposom ini.

3.3. Metode yang Digunakan untuk Kuantifikasi Gb3

Kuantifikasi atau estimasi jumlah Gb3 seluler telah dilakukan dengan menggunakan banyak
sistem analitik yang berbeda, dan studi semacam itu telah mengungkapkan perbedaan besar
antara jumlah total Gb3 dan jumlah relatif spesies Gb3 di berbagai jalur sel [6]. Metode ini
termasuk penggunaan analisis MS setelah ekstraksi lipid dari lisat sel. Protein berlabel fluoresen
(toksin Shiga, Shiga B, atau antibodi) dapat digunakan untuk kuantifikasi langsung pada sel atau
fase padat, termasuk setelah pemisahan lipid dengan kromatografi lapis tipis (TLC). Karena Gb3
biasanya mengandung sebagian besar gugus asil lemak C16 dan C22-24 N-amidasi, spesies Gb3
dipisahkan menjadi dua pita pada KLT. Ini juga dapat diukur dengan pewarnaan orcinol dari gugus
karbohidrat atau menggunakan MALDI-TOF MS secara langsung pada pelat. Kami mengacu pada
ulasan kami sebelumnya, yang menampilkan diskusi menyeluruh tentang variasi total Gb3 dan
kandungan spesies dari beberapa garis sel dan metode yang digunakan untuk analisis tersebut [6
]. Kami menyimpulkan bahwa analisis MS terhadap ekstrak adalah metode yang paling andal
untuk kuantifikasi Gb3 dalam sel.

3.4. Situs Pengikatan untuk Gb3 di Shiga Toxin

Pengikatan toksin Shiga ke glikosphingolipid Gb3 telah dipelajari dengan berbagai sistem uji,
termasuk sel, liposom, dan fase padat, seperti yang dibahas secara menyeluruh dalam ulasan
sebelumnya [6]. Masing-masing dari lima rantai-B memiliki tiga situs pengikatan untuk Gb3 yang
menghasilkan total 15 situs pengikatan teoretis pada toksin Shiga untuk Gb3. Dua dari tiga tempat
pengikatan pada setiap rantai B berikatan dengan Gb3 ketika struktur karbohidrat diorientasikan
mendekati tegak lurus permukaan membran, sedangkan satu situs mengikat ke bagian karbohidrat
ketika diorientasikan hampir sejajar dengan permukaan membran (Gambar8). Hal ini sangat menarik
karena, dengan tidak adanya kolesterol, glikosfingolipid memiliki struktur karbohidrat yang menjulur
hampir tegak lurus ke permukaan membran, sedangkan keberadaan kolesterol yang dekat dengan
glikosfingolipid membuat bagian karbohidrat melengkung dan menjadi hampir sejajar dengan
permukaan membran.145,146]. Tidak diketahui berapa banyak dari situs ini, atau situs mana, yang harus
diikat oleh toksin Shiga agar dapat diendositosis. Juga tidak diketahui bagaimana berbagai spesies Gb3
berkontribusi pada pengikatan dan penyerapan toksin Shiga; kami telah membahas ini secara rinci
sebelumnya [6]. Seperti disebutkan di atas, spesies Gb3 yang mendominasi dalam sel adalah spesies
dengan N-amidated C16:0, C24:0 dan C24:1. Sementara spesies C16:0 diharapkan dapat menembus kira-
kira ke bidang tengah membran, spesies C24:0 dan C24:1 harus dapat mencapai hampir setengah jalan
ke selebaran yang berlawanan. Meskipun jumlah spesies Gb3 bervariasi di antara garis sel dan mungkin
termasuk sejumlah kecil spesies lain selain tiga yang disebutkan, kami merasa luar biasa bahwa C24:1
adalah satu-satunya spesies yang mengandung ikatan rangkap dan hadir dalam jumlah tinggi. Dalam sel
HEp-2 yang kami gunakan untuk sebagian besar penelitian kami, spesies C24:1 merupakan sekitar 50%
dari total Gb3 [8]. Pentingnya berbagai spesies Gb3 untuk pengikatan dan penyerapan toksin Shiga,
serta mengapa sel memiliki begitu banyak spesies N-amidated C24:1 di mana ikatan rangkap ditemukan
hampir persis di bidang tengah membran (C24:1 adalah asam nervonat dengan ikatan rangkap antara
C15 dan C16), adalah masalah yang memerlukan penyelidikan lebih lanjut.
Racun2021,13, 377 14 dari 29

Angka 8.Situs pengikatan untuk Gb3 ke B-pentamer dari toksin Shiga ditunjukkan oleh kokristalisasi dengan
analog Gb3 (bank protein PDB IBOS) [147]. Masing-masing dari 5 B-subunit toksin Shiga memiliki potensi untuk
mengikat 3 molekul Gb3. Situs 1 dan 3 mengikat karbohidrat hampir tegak lurus dengan permukaan sel,
sedangkan situs 2 mengikat karbohidrat hampir sejajar dengan permukaan membran. Dicetak ulang dengan
izin dari ref. [148] Hak Cipta 2015 Elsevier.

3.5. Rakit Lipid

Rakit lipid biasanya dijelaskan diperkaya dengan sphingomyelin, kolesterol, dan PL dengan gugus
asil lemak jenuh, menghasilkan sebagian besar model rakit lipid yang hanya mengandung PL dengan
dua gugus asil lemak jenuh di selebaran bagian dalam. Kami menantang pandangan seperti itu karena
banyak sel telah dideskripsikan mengandung rakit lipid dalam jumlah besar. Pada saat yang sama, studi
lipidomik kuantitatif yang dilakukan selama beberapa tahun terakhir telah menunjukkan bahwa sel
mengandung sangat sedikit PL dengan dua gugus asil lemak jenuh.82]. Fakta bahwa area dengan fraksi
sphingolipid dan kolesterol yang besar lebih sedikit cairan daripada bagian lain dari membran sel
mungkin sebagian karena sphingolipid sering mengandung sangat sedikit gugus asil lemak N-amidated
dengan ikatan rangkap dan bahwa PL dengan gugus asil lemak tak jenuh ganda terutama ditemukan di
area membran lainnya. Kami juga bertanya-tanya apakah pandangan bahwa rakit lipid mengandung
sebagian besar PL dengan dua gugus asil lemak jenuh berasal dari studi awal dengan analisis lipidomik
kuantitatif terperinci dari membran tahan deterjen (DRM). Dalam penelitian tersebut, DRM dilaporkan
sangat diperkaya dengan PL jenuh, tetapi pembaca mungkin mengabaikan bahwa penulis
mendefinisikan bahwa "fosfolipid dianggap jenuh jika mengandung tidak lebih dari satu ikatan
rangkap" [149].
Gb3 dilaporkan hadir di domain DRM dan non-DRM dari beberapa jalur sel [150]. Ada banyak
diskusi tentang DRM sebagai alat untuk mempelajari rakit lipid [151], tetapi komposisi lipid DRM
mungkin, setidaknya sampai batas tertentu, mencerminkan komposisi rakit tersebut. Berbagai
penelitian, termasuk beberapa menggunakan DRM, telah menunjukkan bahwa spesies Gb3 yang
terdapat dalam fraksi membran dengan orde lipid tinggi terlibat dalam transpor retrograde dan
toksisitas toksin Shiga [152,153]. Nanodomain yang mengandung kolesterol telah dilaporkan
penting untuk pensinyalan intraseluler yang diinduksi toksin Shiga karena penambahan zat
pengikat kolesterol filipin memiliki efek penghambatan [77], dan ekstraksi kolesterol
menggunakan metil-β-siklodekstrin mengurangi pengangkutan toksin Shiga ke badan Golgi [154].

3.6. Pensinyalan ke Sel karena Binding of Shiga Toxin ke Gb3 di luar PM Leaflet
Pengikatan toksin AB5 multivalen ke reseptor glikosfingolipid (toksin Shiga berikatan dengan Gb3
dan toksin kolera berikatan dengan GM1) pada sel menghasilkan pensinyalan intraseluler [77,79,155–158
], seperti yang dibahas dalam Bagian2.1, yang menimbulkan pertanyaan tentang bagaimana pengikatan
racun ke selebaran ekstraseluler PM dapat menghasilkan pensinyalan intraseluler. Di dalam
Racun2021,13, 377 15 dari 29

Selain itu, pengikatan antibodi atau lektin pada glikosfingolipid ini menghasilkan pensinyalan
intraseluler.41,159,160], menunjukkan bahwa efek pensinyalan tersebut disebabkan oleh
pengelompokan glikosfingolipid. Toksin kolera dapat memicu pensinyalan intraseluler melalui beberapa
jalur karena mampu mengikat juga ke glikoprotein permukaan [161–163], sedangkan tidak ada reseptor
lain selain Gb3 yang dikenal untuk toksin Shiga. Kami baru-baru ini membahas kemungkinan bahwa
pensinyalan intraseluler setelah pengikatan toksin Shiga ke Gb3 dapat disebabkan oleh pengelompokan
Gb3 di selebaran luar, yang, pada gilirannya, karena efek interdigitasi, mengarah pada pengelompokan
lipid di selebaran dalam (misalnya, PS atau PIP). Pengelompokan lipid selebaran bagian dalam ini dapat
menghasilkan pensinyalan intraseluler. Karena tingkat PS yang tinggi di selebaran bagian dalam, jumlah
PS 18:0/18:1 yang tinggi dan interdigitasi yang kuat antara spesies PS ini dan rantai sphingolipid yang
sangat panjang (Gambar7), kami berspekulasi bahwa pengelompokan PS seperti itu dapat
mengakibatkan pengikatan dan aktivasi beberapa dari banyak protein pengikat PS yang diketahui
terlibat dalam pensinyalan intraseluler (lihat [82] untuk diskusi menyeluruh).

3.7. Efek pada Endositosis dan/atau Transportasi Retrograde karena Manipulasi Lipidome
Laporan awal tentang efek toksin Shiga di berbagai garis sel dan kandungan spesies
Gb3 di sel ini telah dibahas sebelumnya [6]. Pada bagian ini, kami fokus pada studi di mana
endositosis dan transpor intraseluler toksin Shiga dan risin telah diukur setelah manipulasi
lipidom seluler dan perubahan lipid telah dikuantifikasi menggunakan analisis MS.
Gambaran umum dari studi ini ditemukan pada Tabel1.

3.7.1. Konsekuensi Penurunan Jumlah GSL

Sepengetahuan kami, studi pertama di mana pengukuran endositosis dan transpor
intraseluler digabungkan dengan lipidomik kuantitatif dilakukan dalam sel HEp-2 menggunakan
dua penghambat sintesis sphingolipid. Fumonisin B1 (10μM, penghambat Cer sintase) dan PDMP
(1μM, inhibitor GlcCer synthase) keduanya mengurangi tingkat Gb3 sekitar 50% setelah inkubasi
24 jam dan mengakibatkan penurunan besar pengikatan/penyerapan toksin Shiga. Penurunan
lebih lanjut dalam transpor dari endosom ke aparatus Golgi menghasilkan perlindungan yang
besar terhadap toksin ini.164], seperti yang dirangkum dalam Tabel1. Tidak ada perubahan
toksisitas risin sesuai dengan laporan bahwa transpor retrograde risin berlangsung sama baiknya
atau sedikit meningkat pada sel yang kekurangan glikosfingolipid [165,166].

3.7.2. Studi Terkait Eter Lipid

Meskipun PL dengan rantai alkil atau alkenil terkait eter (PL yang mengandung gugus
alkenil sering disebut plasmalogens) membentuk 5-20% lipid dalam banyak sel, sejauh ini
hanya ada sedikit penelitian tentang pentingnya mereka untuk transportasi intraseluler.
Rantai terkait eter paling sering ditemukan disn-1posisi, sedangkan posisi sn-2 sangat sering
mengandung rantai asil lemak tak jenuh ganda (PUFA) seperti asam arakidonat (C20:4).
Rantai terkait eter ditemukan di beberapa kelas PL, tetapi paling sering di kelas PE dan PC.
Dalam sebagian besar penelitian, PE eter telah dilaporkan sebagai lipid eter yang dominan,
dengan alkenil eter mendominasi alkil eter [167–172]. Untuk ulasan tentang fungsi biologis
lipid eter, lihat [168,169,173–175].
Penambahan prekursor lipid eter heksadesilgliserol (HG) ke sel HEp-2 menghasilkan
peningkatan besar dalam lipid eter dan penurunan GSL, dengan pengurangan sekitar 25% total
Gb3 (tidak ada perubahan dalam distribusi spesies Gb3) [176]. Perawatan ini memberikan
perlindungan sel yang sangat kuat terhadap toksin Shiga dan bahkan perlindungan yang lebih
kuat terhadap Stx2 [177].
Racun2021,13, 377 16 dari 29

Tabel 1.Ringkasan studi yang bertujuan untuk mengungkap korelasi antara endositosis, transpor intraseluler, dan lipid seluler. Panah ke atas menandai peningkatan kadar lipid, pengikatan, atau langkah-
langkah yang mengarah ke toksisitas, dan panah ke bawah menandai kebalikannya. Jumlah panah menunjukkan ukuran efek. Kotak kosong berarti tidak diukur, dan tanda serupa (~) berarti tidak ada atau
perubahan sangat kecil. “Endo→Golgi” berarti transportasi dari endosom ke aparatus Golgi. “Golgi→ER ”berarti transportasi dari aparatus Golgi ke retikulum endoplasma.

Endo→ GlcCer
Perlakuan Mengikat Serapan1 Golgi→ER Toksisitas Cer Gb3 Asil PL Eter PL Informasi lainnya
Golgi LacCer
pe↑↑
Fumonisin2 Stx↓↓ ~ Stx↓↓↓ Stx↓↓↓ ↓↓ ↓↓ ↓↓ pe↑↑
PC↓
Tidak berpengaruh pada risin

PDMP3 Stx↓↓ ~ Stx↓↓↓ Stx↓↓ ~ ↓↓ ↓↓ ~ ~ Tidak berpengaruh pada risin

PI↑↑ pe↑↑
HG4 Stx↓ ~ ~ Stx↓↓ Stx↓↓↓ ~ (↑) ↓↓ ↓↓ Tidak berpengaruh pada risin. Lihat juga4
LPI↑↑↑ PC↑↑
PA↑↑ pe↓
Kepadatan sel5 Stx↓↓ ~ ~ ~ Stx↓↓ ↑ ↑ ↑ Tidak berpengaruh pada toksin difteri
PI + PE↓ PC↓
Lanjutan 3% ↓1% Menghambat pelepasan toksin Shiga
2-DG6 ~ ~ ~ ~ Stx↓(↓) ~ (↑)
2-DG 2-DG A1 di UGD

FDG7 Stx↓ ~ ~ Stx↓ Stx↓↓↓ ~ ↓↓↓ ↓↓↓ PI↑ Menghambat GlcCer synth.

Lyso PL8
Stx↓↓ Stx↓↓↓ Stx↓↓↓ kemasan lipid PM↓
(LPI 18:0)
Tak jenuh ganda Memvariasikan efek pada racun lain
Stx ↓ Stx↓ Stx↓ Stx↓↓↓
FA9 (melihat9)

OHOA10 ~ ~ Risin↑↑ ~ Risin↑↑ ~ ~ ~ (lihat11) ~ (lihat11) kemasan lipid PM↓

DAG kinase dan
~ Risin↑↑ ~ Risin↑ ~ ~ ~ (kebanyakan) ~ Lihat teks untuk DAG, PA dan PG
PLD11
1Pada kolom ini, tanda serupa (~) berarti serapan berubah mirip dengan pengikatan2Fumonisin B1: 10μM, 48 jam, sel HEp-2 [164].3DL-threo-1-fenil-2-decanoylamino-3morpholino-1-propanol: 1μM, 24 jam, sel HEp-2 [164].4sn-1-O-
heksadesilgliserol: 20μM, 24 jam, sel HEp-2. Tidak ada atau hanya sedikit efek pada sitotoksisitas oleh risin, toksin kolera, atau toksin difteri. Tidak berpengaruh pada endositosis transferin. Toksisitas juga ditunjukkan untuk Stx2 dalam sel
HEp-2, HBMEC dan HBMEC-2 [176,177].5Data dalam tabel ditunjukkan untuk sel HEp-2 yang tumbuh selama 1, 2, atau 3 hari untuk mendapatkan pertemuan sel 20–30% pada Hari 1 dan 80–90% pada Hari 3. Data diberikan untuk perubahan
karena peningkatan kepadatan sel. Data toksisitas serupa ditunjukkan dalam sel HeLa. Analisis TLC mengungkapkan lebih sedikit Gb3 pada kepadatan tinggi dalam sel HeLa dan mendekati jumlah yang sama dalam sel HEp-2 [33].62-Deoksi-
D-glukosa: 10 mM, 4 jam dan 24 jam, sel HEp-2. Beberapa perubahan pada lipidom; 1–3% GSL mengandung 2-DG. Toksisitas serupa diamati dengan Stx2 dan toksin difteri, tetapi tidak ada perubahan toksisitas dengan risin. 2-DG juga
melindungi sel HT-20 dan SW480 dari toksisitas Shiga. 2-DG menurunkan endositosis transferin, tetapi kurang dari toksin Shiga [178].72-Fluoro-2-deoksi-D-glukosa: 1 mM, 24 jam, sel HEp-2. FDG menghambat sintase GlcCer; efek pada GSL
yang diamati setelah 24 jam, bukan setelah 4 jam. Proteksi terhadap Stx2 serupa dengan proteksi terhadap toksin Shiga pada sel HEp-2, tetapi hanya proteksi yang sangat lemah terhadap risin dan tidak ada proteksi terhadap toksin difteri.
Perlindungan serupa terhadap toksin Shiga pada sel MCF-7, HT-29, dan HBMEC [179].8Lyso PL: Data ditampilkan untuk banyak PL lyso yang berbeda, 5–20μM, 30 menit, sel Hep-2. Efek terbesar diamati dengan lyso PL yang paling berbentuk
kerucut, yaitu yang memiliki kelompok kepala terbesar (misalnya, LPI 18:0 dengan kelompok kepala yang besar: LPI > LPS > LPC >LPE > LPA). Simbol pada tabel menunjukkan perubahan dengan LPI 18:0. Efeknya dibalik dengan
penambahan metil-β-siklodekstrin. Efek serupa diamati dengan Stx2 [180]. Dalam artikel tindak lanjut, lyso PL ini ditunjukkan untuk mengganggu endositosis yang dimediasi clathrin, dengan efek terbesar yang diamati dengan lipid dengan
kelompok kepala terbesar [181].9FA tak jenuh ganda: 50μM EPA (20:5) atau DHA (22:6), 2 hari, sel HEp-2. Toksisitas yang berkurang serupa diamati dengan toksin kolera, sedangkan toksisitas yang sedikit meningkat diamati dengan risin.
Hanya sedikit penurunan endositosis transferin [182].10Asam 2-hidroksioleat (Minerval®): 12μM, 3 jam, sel HeLa. OHOA dimasukkan ke dalam ~11% PL terasilasi dan 10% lipid eter. Toksisitas serupa diamati pada sel HEp-2 dan U2-OS [171].
11DAG kinase dan PLD (fosfolipase D): Penggunaan inhibitor dan siRNA untuk mengubah kadar DAG dan PA dalam sel HEp-2. Inhibitor menyebabkan peningkatan transportasi ke Golgi dan peningkatan ukuran endosom dan tubulasi. Efek
meningkat dengan menggabungkan inhibitor. Tidak ada perubahan dalam daur ulang atau degradasi risin [183]. Lihat teks utama untuk detail lebih lanjut.
Racun2021,13, 377 17 dari 29

Pengurangan Gb3 yang diperoleh dengan pengobatan ini terlalu kecil untuk menjelaskan
perlindungan yang sangat kuat yang diamati terhadap toksin ini, dan sebagian besar efek ini disebabkan
oleh berkurangnya pengangkutan dari Golgi ke UGD (Tabel1). Dengan demikian, peningkatan lipid eter
dapat memberikan efek perlindungan terhadap toksisitas Shiga, meskipun penelitian lebih lanjut
diperlukan untuk memahami mekanisme di balik efek ini. Selain itu, peningkatan besar LPI diperoleh
sebagai hasil dari pengobatan HG [176] mungkin berkontribusi pada perlindungan ini (lihat diskusi
tentang penambahan lisolipid ke sel di Bagian3.7.5).
Kami merasa luar biasa bahwa penghambatan sintesis GSL oleh Fumonisin B1, tetapi tidak
dengan PDMP, menghasilkan peningkatan kadar lipid eter [164], dan peningkatan lipid eter
dengan menambahkan prekursor lipid eter HG juga menghasilkan penurunan GSL [176].
Penambahan HG ke sel PC-3 (yang tidak mengandung jumlah Gb3 yang dapat diukur) juga
menghasilkan peningkatan lipid eter dan penurunan GSL [170]. Selain itu, pengobatan sel PC-3 ini
menghasilkan peningkatan kolesterol, menunjukkan bahwa kolesterol penting untuk interaksi
dengan lipid eter, yang telah dijelaskan serupa untuk interaksi antara kolesterol dan
sphingomyelin [131]. Yang penting, ketiga penelitian ini semuanya menunjukkan korelasi terbalik
antara kadar lipid eter dan glikosfingolipid. Di Bagian berikutnya3.7.3, perubahan transpor
retrograde dan lipidom sel HEp-2 dengan peningkatan kepadatan sel dibahas. Menariknya,
penelitian ini juga menunjukkan peningkatan kecil pada GSL dan penurunan kecil pada lipid eter
secara bersamaan.33], lebih lanjut mendukung pengaturan bersama lipid eter dan sphingolipid ini.
Alasan untuk pengaturan bersama seperti itu tidak diketahui, tetapi perlu dicatat bahwa
perubahan dalam studi kepadatan sel diamati tanpa perawatan sel apa pun, dan sel hanya tumbuh
untuk satu atau dua hari ekstra. Singkatnya, penelitian yang dibahas dalam paragraf ini
menunjukkan bahwa penyelidikan transportasi toksin Shiga telah mengungkapkan pengaturan
bersama antara tingkat sphingolipid dan lipid eter.
Baru-baru ini, Howard Riezman dan rekannya melaporkan korelasi serupa antara lipid eter
dan sphingolipid dalam empat jalur sel dalam sebuah penelitian ekstensif. Mereka menggunakan
perpustakaan CRISPRi untuk menekan ekspresi 16.000 gen, dikombinasikan dengan analisis sel
yang terkuras sphingolipid (mereka menggunakan myriocin, penghambat enzim pertama dalam
sintesis sphingolipid). Mereka melaporkan sedikit peningkatan yang signifikan pada lipid eter PC,
sehingga memberikan bukti lain untuk pengaturan bersama antara lipid eter dan sphingolipid [184
]. Juga harus dicatat bahwa tidak ada korelasi yang jelas antara amplitudo penurunan sphingolipid
dan peningkatan lipid eter dalam empat jalur sel yang dipelajari. Selain itu,
alkylhydroxyacetonephosphate synthase (AGPS), enzim kunci dalam sintesis lipid eter, ditemukan
penting dalam meningkatkan kelangsungan hidup sel yang kekurangan sphingolipid [184]. Para
penulis ini juga menunjukkan bahwa ELOV5, enzim yang terutama terlibat dalam pemanjangan
PUFA, berkontribusi untuk membuat sel mereka lebih sensitif terhadap penipisan sphingolipid,
sedangkan ELOV6, yang terutama bekerja pada pemanjangan asam lemak C16-C18, membuat sel
lebih tahan terhadap sphingolipid. penipisan. Hasil ini sesuai dengan perubahan yang diamati
dalam studi kerapatan sel yang dibahas pada bagian berikutnya, di mana lebih sedikit eter yang
mengandung PUFA dan lebih banyak eter yang mengandung C18 ditemukan pada peningkatan
kerapatan sel [33]. Singkatnya, beberapa penelitian dari dua kelompok telah menunjukkan
hubungan terbalik lipid eter dan sphingolipid [33,164,170,176,184]. Selanjutnya, perubahan
tersebut tidak hanya mempengaruhi jumlah total lipid eter, tetapi juga komposisi spesies. Namun
demikian, terdapat perbedaan besar antara hasil yang dilaporkan dari kedua kelompok terkait
dengan jumlah berbagai lipid eter, dan penelitian lebih lanjut diperlukan untuk memahami
perbedaan ini.
Mengenai diskusi tentang PL terkait eter, menarik bahwa mereka berperilaku berbeda
dari analog terkait ester terkait tentang bagaimana rantai hidrofobik memasuki membran.
Sekarang sudah 30 tahun sejak analisis spektroskopi resonansi magnetik yang
membandingkan PC dengan dua rantai asil dan eter alkenil PE menunjukkan bahwa rantai
hidrofobik ini memasuki membran secara berbeda. Rantai eter tampaknya masuk tegak lurus
ke dalam membran, sedangkan pada PL dengan dua gugus asil, dua atom karbon pertama di
sn-1posisinya hampir sejajar dengan membran plasma, sedangkan rantai asil lainnya
membengkok ke dalam membran [185]. Kemudian, simulasi dinamika molekul atomistik
Racun2021,13, 377 18 dari 29

studi digunakan untuk mengkonfirmasi perilaku serupa eter alkenil PE dan bahwa
keberadaan lipid eter ini menghasilkan lapisan ganda yang lebih padat dan lebih tebal
daripada PE dengan dua rantai asil lemak [186]. Dengan demikian, lipid eter menunjukkan
beberapa kesamaan dengan sphingolipid tentang bagaimana rantai hidrofobik memasuki
membran sel, berinteraksi dengan kolesterol, dan berkontribusi pada ketebalan lapisan
ganda lipid. Untuk studi lipid eter di masa depan, penting untuk menyadari kemungkinan
perbedaan antara alkil dan alkenil eter [33,167,184]. Juga harus dicatat bahwa lipid eter
diperlukan untuk pembentukan protein berlabuh glikosilfosfatidlinositol (GPI), yang dapat
hadir dalam rakit lipid [187].

3.7.3. Pengaruh Kepadatan Sel

Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa perubahan kepadatan sel dalam kultur dapat memodulasi
efek toksin tanaman dan bakteri, karena toksisitas yang lebih rendah diamati pada peningkatan kepadatan sel.
30,188]. Untuk melihat lebih dekat efek ini, sel HEp-2 ditumbuhkan menjadi tiga kepadatan sel yang berbeda,
dari kepadatan 20–30% pada Hari 1 menjadi kepadatan 80–90% pada Hari 3 [33]. Seperti yang diharapkan,
penurunan toksisitas sel yang diinduksi toksin Shiga diamati dengan peningkatan kepadatan sel. Peningkatan
densitas sel juga menghasilkan peningkatan Gb3 (tidak ada perubahan dalam jumlah relatif spesies Gb3) dan
kolesterol serta penurunan lipid eter, seperti dibahas pada Bagian3.7.2. Hebatnya, sel-sel dengan sedikit
peningkatan kadar Gb3 menunjukkan beberapa penurunan dalam pengikatan/penyerapan toksin Shiga,
sedangkan pengurangan toksisitas yang lebih kuat ditemukan karena berkurangnya transportasi dari endosom
ke Golgi atau lebih jauh ke UGD (Tabel1). Sebuah studi lipidomik kuantitatif terperinci menunjukkan beberapa
perubahan pada beberapa spesies PA dan DAG yang mungkin terkait dengan penurunan toksisitas Shiga [33],
tetapi studi lebih lanjut diperlukan untuk memahami mengapa toksin Shiga jauh lebih tidak beracun bagi sel
dengan kepadatan sel yang lebih tinggi.

Kelompok Lucas Pelkmans kemudian melaporkan sebuah studi ekstensif tentang efek kepadatan sel
fibroblas embrionik tikus baik yang mengekspresikan atau kekurangan focal adhesion kinase (FAK) [34]. Mereka
melaporkan bahwa lebih dari 1000 gen mengadaptasi kelimpahan transkrip mereka ke kepadatan seluler, di
mana 80% di antaranya membutuhkan kehadiran FAK untuk beradaptasi. Khususnya, sebagian besar
perubahan dilaporkan dalam lipidom fibroblas sebagai fungsi dari peningkatan kepadatan sel [34] berbeda dari
yang dilaporkan dalam penelitian dengan sel HEp-2 [33]. Dengan demikian, peningkatan kepadatan sel dari
berbagai garis sel telah dilaporkan menghasilkan perubahan lipidom yang berbeda, dan diperlukan lebih
banyak penelitian untuk memahami bagaimana dan mengapa perubahan tersebut terjadi.

3.7.4. Analog Glukosa Menginduksi Perlindungan terhadap Racun Shiga

Selama lebih dari 50 tahun, 2-deoxy-glucose (2-DG) telah digunakan sebagai penghambat
glikolisis. Selama 15 tahun terakhir, 2-DG telah terbukti mempengaruhi beberapa mekanisme
seluler lainnya, seperti autophagy, apoptosis, dan kontrol siklus sel, dan juga telah terbukti
menekan ekspresi sintase Gb3 (referensi di [178]). Hal ini mendorong kami untuk mempelajari
apakah itu berpengaruh pada toksisitas Shiga dalam sel HEp-2. Meskipun 2-DG hanya memiliki
efek kecil pada endositosis dan transportasi ke UGD dalam sel HEp-2, ia memberikan
perlindungan yang kuat terhadap toksisitas Shiga, dan efek ini terutama disebabkan oleh
penghambatan pelepasan toksin Shiga A1 di ER (Tabel1) [178]. Beberapa persen 2-DG dimasukkan
ke dalam GSL, tetapi pengobatan dengan 2-DG hanya memiliki efek kecil pada kelas lipid lainnya.
2-Fluoro-2-deoxy-glucose (FDG) adalah analog glukosa lain yang sangat mirip dengan 2-DG
(satu H dipertukarkan dengan F), dan [18F]FDG adalah agen pencitraan yang paling umum
digunakan untuk tomografi emisi positron (PET) untuk beberapa kanker [189,190]. Hebatnya, FDG
ditemukan melindungi sel HEp-2 jauh lebih kuat daripada 2-DG, karena FDG 1 mM memberikan
perlindungan yang serupa dengan yang diperoleh oleh 10 mM 2-DG. Selain itu, perlindungan
dengan FDG terbukti terutama karena penghambatan sintase GlcCer [179]. Perlu dicatat bahwa
kedua analog glukosa ini ditunjukkan untuk melindungi juga beberapa garis sel lainnya terhadap
toksin Shiga, dan bahwa perlindungan yang sangat mirip diamati untuk toksin Shiga dan Stx2,
sedangkan mereka tidak memiliki efek perlindungan terhadap risin.178,179].
Racun2021,13, 377 19 dari 29

3.7.5. Zat yang Mempengaruhi Fluiditas Membran

Penambahan beberapa lisolipid ke sel HEp-2 mengakibatkan penurunan pengikatan seluler toksin Shiga, Stx2, dan IgM anti-Gb3 [180]. Efeknya

meningkat dengan bertambahnya ukuran kelompok kepala, yaitu LPI > LPC > LPS > LPE >> LPA, tanpa efek yang teramati untuk LPA (Tabel1). Efeknya

juga tergantung pada gugus asil lemak. Efek yang lebih kuat diperoleh dengan LPC 18:0 dibandingkan dengan LPC 18:1, semakin membuktikan

pentingnya struktur kerucut untuk efek ini. Sebagian besar penelitian dilakukan dengan menggunakan LPI 18:0. Eksperimen menunjukkan bahwa toksin

Shiga prebound dilepaskan setelah penambahan lysolipid, dan bahwa efek LPI diamati baik dalam sel tetap atau setelah penipisan ATP, menunjukkan

bahwa efeknya tidak tergantung pada pensinyalan atau pergantian membran. Penambahan LPI mengakibatkan pembulatan permukaan sel, dengan

lebih sedikit philopodia. Selain itu, penelitian dengan probe fluoresen NR12S, yang diperkirakan akan tetap berada di selebaran luar, mengungkapkan

bahwa LPI menginduksi gangguan lipid pada PM. Tidak ada perubahan gangguan lipid setelah penambahan LPE. LPI dan metil-β-siklodekstrin keduanya

meningkatkan kelainan lipid, tetapi menyebabkan efek berlawanan pada pengikatan toksin, menunjukkan bahwa pengurangan urutan lipid tampaknya

tidak penting untuk pengikatan. Penambahan metil-β-siklodekstrin tidak memengaruhi pengikatan toksin Shiga tetapi membalikkan efek LPI,

menunjukkan bahwa LPI mengubah konformasi dan / atau distribusi reseptor Gb3. Penurunan kemasan lipid yang diamati dapat memfasilitasi interaksi

Gb3 dengan kolesterol, mengikat karbohidrat dan dengan demikian menghambat pengikatan toksin Shiga, suatu efek yang dibalik dengan

penambahan metil-β-siklodekstrin. Penambahan LPI tidak berpengaruh pada pengikatan risin [ Penambahan metil-β-siklodekstrin tidak memengaruhi

pengikatan toksin Shiga tetapi membalikkan efek LPI, menunjukkan bahwa LPI mengubah konformasi dan / atau distribusi reseptor Gb3. Penurunan

kemasan lipid yang diamati dapat memfasilitasi interaksi Gb3 dengan kolesterol, mengikat karbohidrat dan dengan demikian menghambat pengikatan

toksin Shiga, suatu efek yang dibalik dengan penambahan metil-β-siklodekstrin. Penambahan LPI tidak berpengaruh pada pengikatan risin

[ Penambahan metil-β-siklodekstrin tidak memengaruhi pengikatan toksin Shiga tetapi membalikkan efek LPI, menunjukkan bahwa LPI mengubah

konformasi dan / atau distribusi reseptor Gb3. Penurunan kemasan lipid yang diamati dapat memfasilitasi interaksi Gb3 dengan kolesterol, mengikat

karbohidrat dan dengan demikian menghambat pengikatan toksin Shiga, suatu efek yang dibalik dengan penambahan metil-β-siklodekstrin.

Penambahan LPI tidak berpengaruh pada pengikatan risin [180].

Dalam studi lanjutan, lysolipid dengan kelompok kepala besar ditunjukkan mengganggu
endositosis yang dimediasi clathrin. Efeknya tergantung pada sel yang digunakan. Efek terbesar diamati
untuk sel HEp-2, HeLa, dan SUM-159, dan efek yang lebih kecil diamati untuk sel SK-BR3, U-2 OS, dan
PC-3. Lebih sedikit gaya (pengurangan 50%) diperlukan untuk menarik tubulus keluar dari sel HEp-2
setelah penambahan LPI, sedangkan tidak ada pengurangan gaya ini yang diamati setelah penambahan
LPE [181]. Selain itu, penambahan LPI menghasilkan peningkatan masa hidup lubang AP-2, dan efek
pada penyerapan risin jauh lebih kecil daripada transferin, menunjukkan bahwa efek lisolipid lebih besar
untuk endositosis yang bergantung pada clathrin daripada endositosis yang tidak bergantung pada
clathrin. Dalam studi ini, efeknya juga lebih rendah bila menggunakan lysolipid dengan gugus kepala
yang lebih kecil (LPE dan LPA) atau lipid tak jenuh (LPC 18:1). Seperti yang diharapkan, terdapat efek yang
lebih kuat dari Latrunculin B pada endositosis transferrin setelah penambahan LPI, yang sejalan dengan
data yang menunjukkan bahwa kebutuhan aktin untuk endositosis meningkat pada tekanan membran
yang tinggi [191].
Dalam studi dengan lisolipid dan toksin yang dijelaskan di atas, lipid ini tampaknya tidak hanya
memengaruhi pengikatan tetapi juga memiliki efek tambahan pada transpor retrograde dan toksisitas.
Sebuah studi pada ragi menunjukkan bahwa lysolipid memfasilitasi pembentukan vesikel COPII dan
transportasi anterograde dari ER ke Golgi [192]. Efek lisolipid pada transpor anterograde dan retrograde
mungkin terkait. Dalam kedua penelitian tersebut, berspekulasi bahwa struktur kerucut lisolipid penting
untuk efek ini, tetapi penelitian lebih lanjut diperlukan untuk menjelaskan mekanisme yang tepat.

Setelah preinkubasi dengan sel HeLa, obat antitumor asam 2-hidroksioleat (OHOA) terbukti
berpotensi meningkatkan transpor retrograde ricin dari endosom ke Golgi dan lebih jauh ke ER
dan menghasilkan peningkatan sensitivitas yang besar terhadap toksin ini, sedangkan transpor
toksin Shiga ke Golgi sedikit berkurang seperti yang dievaluasi dengan eksperimen sulfasi [171].
Setelah inkubasi sel dengan 12,5μM OHOA selama 3 jam, hasilnya menunjukkan bahwa 6% lipid
seluler mengandung gugus asil lemak ini. Selanjutnya, pengepakan lipid PM tereduksi diamati
mirip dengan yang dijelaskan di atas setelah penambahan lisolipid. Efek diferensial yang diamati
dengan OHOA pada transpor risin dan toksin Shiga sejalan dengan data yang diperoleh dalam
studi sebelumnya tentang pengobatan sel HeLa dengan asam lemak tak jenuh ganda [182].
Hebatnya, tidak ada efek pada transportasi toksin oleh asam oleat. Tidak diketahui bagaimana
gugus OH dari OHOA dapat berkontribusi pada efek besar seperti yang diamati setelah
penambahan OHOA ke sel. OHOA tidak mempromosikan perekrutan SNX1 atau SNX2 ke endosom
(SNXs telah terbukti terlibat dalam transportasi risin
Racun2021,13, 377 20 dari 29

dari endosom ke Golgi [101]), tetapi peningkatan lokalisasi endosom dari komponen retromer VPS35
diamati. Dengan demikian, ada kemungkinan bahwa OHOA mempromosikan transpor risin dengan
meningkatkan afinitas membran untuk protein yang memediasi transpor retrograde.
Penambahan asam lemak tak jenuh ganda (PUFA, yaitu, C20:5 dan C22:6) ke sel HeLa
menghasilkan perlindungan 10 kali lipat terhadap toksin Shiga [182]. Baik internalisasi toksin ini
dan transpor endosom-ke-Golgi dikurangi oleh PUFA, dan pengurangan ini bersama-sama dapat
menjelaskan pengurangan toksisitas (Tabel1). Juga, internalisasi toksin kolera dikurangi dengan
pengobatan PUFA. Sitotoksisitas risin tidak terpengaruh, menunjukkan bahwa PUFA tidak
menyebabkan blok umum dalam transportasi retrograde ke retikulum endoplasma.

3.8. Modifikasi Lipidome: Perubahan seperti yang Diharapkan?

Meskipun mengganggu metabolisme lipid menggunakan inhibitor, siRNA, atau dengan
memasok sel dengan beberapa lipid dapat memberikan informasi penting tentang peran
lipid untuk endositosis dan transportasi intraseluler, kami juga ingin memperingatkan bahwa
efek yang diamati setelah perawatan tersebut mungkin disebabkan oleh faktor lain.
perubahan dalam lipidom dari yang diharapkan. Dengan demikian, analisis yang cermat
harus dilakukan untuk memeriksa apakah perubahan lipidom sesuai dengan yang
diharapkan. Sebuah contoh yang sangat baik dari hal ini adalah studi oleh kelompok Clifford
Lingwood [193]. Mereka menggunakan statin, penghambat yang diketahui dari enzim
penentu laju dalam sintesis kolesterol, dan mengamati bahwa transpor retrograde toksin
Shiga (dan toksin kolera) ke Golgi dan ER diblokir. Dengan melihat secara hati-hati apa yang
terjadi dengan sel-sel ini, mereka mengamati bahwa pengobatan statin menghasilkan
relokasi parsial sintase GlcCer, peningkatan kadar enzim ini, dan peningkatan kadar GlcCer
beberapa kali lipat di sembilan garis sel yang dipelajari. Ada juga beberapa perubahan dalam
tingkat total dari beberapa kelas GSL lainnya tetapi tidak ada perubahan dalam jumlah relatif
dari spesies masing-masing kelas. Tingkat kolesterol seluler total tidak terpengaruh oleh
pengobatan statin,194], sedangkan kumpulan kolesterol di jaringan trans-Golgi hilang.
Mereka menunjukkan bahwa perubahan GSL dan GlcCer sintase tidak bergantung pada
penghambatan sintesis kolesterol, tetapi efek ini secara mengejutkan dihasilkan dari
prenilasi Rab GTPase yang menyimpang. Dengan demikian, mereka mengungkapkan
hubungan tak terduga antara prenilasi Rab (geranylgeranyl adalah perantara dalam
biosintesis kolesterol) dan regulasi GSL dan perdagangan retrograde.
Kami baru-baru ini menerbitkan bahwa inhibitor diasilgliserol kinase (DAG kinase) dan
fosfolipase D (PLD) sangat meningkatkan transpor retrograde risin dengan mempengaruhi
penyortiran endosom menuju aparatus Golgi [183]. Pengobatan dengan inhibitor ini sangat
mempengaruhi morfologi endosom dengan meningkatkan tubulasi dan ukuran endosomal. Studi
lipidomik kuantitatif dari sel yang diobati dengan inhibitor menunjukkan lipidom seperti yang
diharapkan ketika menggunakan inhibitor DAG kinase (peningkatan DAG), sedangkan inhibitor
PLD menghasilkan lipidom yang sangat berbeda dari yang diharapkan. Ada sedikit peningkatan PA
sementara, tetapi kemudian menurun ke level kontrol setelah 3 jam. Di luar dugaan, terjadi
peningkatan DAG dan phosphatidylglycerol (PG), dan spesies yang meningkat jelas menunjukkan
bahwa hal ini disebabkan oleh metabolisme spesies PC. Kami berspekulasi bahwa penggunaan
penghambat PLD menghasilkan mekanisme kompensasi di mana sel bertujuan untuk menjaga
tingkat PA seluler relatif konstan. Jelas, data lipid ini menunjukkan kebutuhan untuk melakukan
analisis lipidomik kuantitatif sebelum kesimpulan diambil dari studi tersebut. Selanjutnya, siRNA
digunakan untuk merobohkan berbagai isoenzim DAG kinase dan PLD. Selain menunjukkan bahwa
beberapa isoenzim ini terlibat dalam mengatur transportasi risin ke Golgi, percobaan
mengungkapkan satu kasus di mana knock-down dari satu isoenzim DAG kinase menghasilkan
peningkatan kadar empat isoenzim lainnya [183], sehingga menunjukkan mekanisme kompensasi
dalam studi tersebut.

3.9. Kebutuhan Studi Masa Depan dan Fokus pada Pentingnya Spesies Lipid
Berdasarkan pembahasan di atas, tidak diragukan lagi bahwa kita harus banyak belajar
tentang pentingnya lipid membran untuk endositosis dan transpor membran intraseluler.
Racun2021,13, 377 21 dari 29

Meskipun pengembangan analisis MS yang ditingkatkan selama beberapa tahun terakhir telah
membuka peluang baru untuk melakukan analisis kuantitatif terhadap ratusan spesies lipid dalam
satu sampel, kami masih dalam proses pembelajaran yang sangat awal tentang pentingnya
spesies lipid dalam biologi sel. Meskipun banyak yang telah dipelajari tentang pengikatan
kolesterol pada protein yang berbeda.195–197], pengikatan lipid lain ke berbagai protein transfer
lipid [131], dan pengikatan protein ke kelas lipid seperti PIP, PS, dan PA [82,198,199], sangat sedikit
yang diketahui tentang interaksi antara spesies lipid spesifik dan protein. Sepengetahuan kami,
demonstrasi pertama tentang pentingnya satu spesies lipid dalam biologi adalah laporan bahwa
PG 16:0/18:1 adalah lipid esensial yang dekat dengan O2- tempat pengikatan sitokrom c oksidase.
Hebatnya, C18:1 bukanlah oleat C18:1 yang sangat umum (cis∆9), tetapi vaksin C18:1 yang tidak
umum (cis-∆11), menunjukkan pentingnya satu ikatan rangkap ditempatkan dua atom karbon lebih
jauh dari gugus kepala PG [200]. Belakangan, ditunjukkan oleh Brita Brügger dan rekannya bahwa
satu spesies SM (SM d18:1/18:0) sangat penting untuk mengikat domain transmembran dari
protein mesin COPI p24. Mereka menyarankan peran spesies SM ini dalam mengatur
keseimbangan antara monomer tidak aktif dan bentuk oligomer aktif dari protein ini dalam
transpor yang bergantung pada COPI dari Golgi ke ER [201]. Sejauh ini, sepengetahuan kami, tidak
ada contoh lain yang secara jelas menunjukkan efek spesies lipid spesifik, tetapi kami baru-baru ini
merangkum beberapa sifat menarik terkait PS 18:0/18:1 dan berspekulasi tentang kontribusi
spesies ini terhadap endositosis dan transpor intraseluler, termasuk kemungkinan perannya
dalam endositosis toksin Shiga [82].

4. Kesimpulan
Pemahaman kita tentang bagaimana racun protein bekerja pada sel telah mengalami
perkembangan yang luar biasa selama empat dekade terakhir. Tinjauan ini membahas beberapa contoh
bagaimana toksin Shiga dan risin telah berkontribusi pada pengetahuan tersebut, serta pemahaman kita
tentang endositosis dan transportasi intraseluler secara umum. Selama 10-15 tahun terakhir, telah
terjadi peningkatan yang luar biasa dalam analisis MS dan kemungkinan manfaat dari analisis tersebut
untuk mempelajari lebih lanjut tentang mekanisme seluler. Penting untuk ditekankan bahwa kita masih
dalam proses awal penggunaan studi lipidomik kuantitatif yang terkait dengan fungsi seluler. Menurut
pendapat kami, akan sangat mengejutkan jika lebih banyak contoh peran biologis spesies lipid tertentu
tidak ditemukan selama tahun-tahun berikutnya. Setiap sel mensintesis beberapa ratus atau ribuan
spesies lipid. Mengapa sel harus menggunakan energi untuk mensintesis begitu banyak lipid jika tidak
banyak yang dibutuhkan untuk tujuan tertentu? Dengan demikian, kami memperkirakan kemajuan besar
dalam pengetahuan baru mengenai pentingnya spesies lipid untuk transportasi membran selama
beberapa tahun ke depan. Untuk tujuan ini, metode yang digunakan untuk persiapan sampel dan
analisis MS menjadi lebih baik divalidasi dan didokumentasikan daripada yang sering terlihat saat ini.
Sangat penting bahwa para ilmuwan dapat percaya bahwa data dapat direproduksi. Penting juga bahwa
data kuantitatif tersebut tersedia untuk semua orang, karena mungkin diperlukan beberapa tahun
sebelum kami dapat sepenuhnya menginterpretasikan data tersebut. Berdasarkan pengalaman kami,
tidak cukup memiliki peralatan MS modern tetapi juga perlu memiliki pengetahuan yang kuat tentang
lipid mana yang dapat ditemukan dalam sampel biologis. Kami juga berharap studi simulasi molekuler
dan penggunaan model sintetik menjadi penting untuk memperoleh pengetahuan baru di bidang ini.
Kami menekankan pentingnya mendasarkan model tersebut pada membran asimetris yang terdiri dari
spesies lipid yang umumnya tersedia dalam sel.

Kontribusi Penulis:KS menulis draf untuk ringkasan, pendahuluan dan Bagian2. TS menulis draf
untuk Bagian3. KS, SK dan TS membahas isi artikel, menyelesaikan penulisan naskah. Semua
penulis telah membaca dan menyetujui versi naskah yang diterbitkan.

Pendanaan:Pekerjaan yang dilakukan oleh para penulis ini didukung oleh The Norwegian Cancer Society.

Pernyataan Dewan Peninjau Kelembagaan:Tak dapat diterapkan.

Pernyataan Persetujuan yang Diinformasikan:Tak dapat diterapkan.

Racun2021,13, 377 22 dari 29

Pernyataan Ketersediaan Data:Tidak ada data baru yang dibuat atau dianalisis dalam penelitian ini. Berbagi data
tidak berlaku untuk artikel ini.

Ucapan terima kasih:Kami mengakui kontribusi dari banyak rekan kerja selama bertahun-tahun.

Konflik kepentingan:Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.

Referensi
1. Sandwig, K.; van Deurs, B. Pengiriman ke dalam sel: Pelajaran dari racun tanaman dan bakteri.Gen Ada.2005,12, 865–872. [
CrossRef] [PubMed]
2. Endo, Y.; Mitsui, K.; Motizuki, M.; Tsurugi, K. Mekanisme aksi risin dan lektin toksik terkait pada ribosom eukariotik. Situs dan
karakteristik modifikasi pada RNA ribosom 28 S yang disebabkan oleh racun.J.Biol. kimia1987,262, 5908–5912. [CrossRef]

3. Endo, Y.; Tsurugi, K.; Yutsudo, T.; Takeda, Y.; Ogasawara, T.; Igarashi, K. Situs aksi toksin Vero (VT2) dari Escherichia coli 0157:H7
dan toksin Shiga pada ribosom eukariotik. Aktivitas RNA glikosidase dari racun.eur. J. Biochem.1988,171, 45–50. [CrossRef] [
PubMed]
4. Fraser, SAYA; Chernaia, MM; Kozlov, YV; James, MN Struktur kristal holotoxin dariShigella dysenteriaepada resolusi 2,5 A.Nat.
Struktur. Biol.1994,1, 59–64. [CrossRef]
5. Rutenber, E.; Katzin, BJ; Ernst, S.; Collins, EJ; Mlsna, D.; Siap, MP; Robertus, JD Penyempurnaan kristalografi risin menjadi 2,5
Angstrom.Protein1991,10, 240–250. [CrossRef]
6. Sandwig, K.; Bergan, J.; Kavaliauskiene, S.; Skotland, T. Persyaratan lipid untuk masuknya racun protein ke dalam sel.Prog. Res Lipid. 2014,
54C, 1–13. [CrossRef]
7. Pappenheimer, AM, Jr. Toksin difteri.Tahun. Pendeta Biokimia.1977,46, 69–94. [CrossRef]
8. Kim, K.; Groman, NB Cara penghambatan toksin difteri oleh amonium klorida.J.Bakteriol.1965,90, 1557–1562. [CrossRef]
9. Sandwig, K.; Olsnes, S. Masuknya toksin difteri ke dalam sel difasilitasi oleh pH yang rendah.J. Sel Biol.1980,87, 828–832. [CrossRef]
10. Draper, RK; Simon, MI Masuknya toksin difteri ke dalam sitoplasma sel mamalia: Bukti keterlibatan lisosom.
J. Sel Biol.1980,87, 849–854. [CrossRef]
11. Sandwig, K.; Olsnes, S. Masuknya protein beracun abrin, modeccin, risin, dan toksin difteri ke dalam sel. II. Pengaruh pH,
inhibitor metabolik, dan ionofor dan bukti penetrasi toksin dari vesikel endositosis.J.Biol. kimia1982,257, 7504–7513. [CrossRef]

12. Sandwig, K.; Garred, Ø.; Prydz, K.; Kozlov, JV; Hansen, SH; van Deurs, B. Pengangkutan mundur toksin Shiga endositosis ke
retikulum endoplasma.Alam1992,358, 510–511. [CrossRef]
13. Rapak, A.; Falnes, PO; Olsnes, S. Pengangkutan mundur risin mutan ke retikulum endoplasma dengan translokasi berikutnya ke sitosol.Proses
Natl. Acad. Sains. Amerika Serikat1997,94, 3783–3788. [CrossRef]
14. Johannes, L.; Tenza, D.; Antony, C.; Goud, B. Pengangkutan retrograde fragmen B yang mengandung KDEL dari toksin Shiga.J.Biol. kimia1997, 272,
19554–19561. [CrossRef]
15. Tekle, C.; Deurs, B.; Sandvig, K.; Iversen, TG Seluler perdagangan biokonjugat dot-ligan kuantum dan induksi mereka terhadap
perubahan dalam perutean normal ligan tak terkonjugasi.Nano. Lett.2008,8, 1858–1865. [CrossRef]
16. Sandwig, K.; Skotland, T.; van Deurs, B.; Klokk, TI Transportasi retrograde toksin protein melalui aparatus Golgi.Histokimia. Bio
Sel.2013,140, 317–326. [CrossRef]
17. Johannes, L.; Toksin Romer, W. Shiga—dari biologi sel hingga aplikasi biomedis.Nat. Pendeta Mikrobiol.2010,8, 105–116. [
CrossRef]
18. Engedal, N.; Skotland, T.; Torgersen, ML; Sandvig, toksin K. Shiga dan penggunaannya dalam terapi dan pencitraan kanker yang ditargetkan.Mikrobiol.
Bioteknologi.2011,4, 32–46. [CrossRef]
19. Antignani, A.; Ho, ECH; Bilotta, MT; Qiu, R.; Sarnvosky, R.; FitzGerald, DJ Menargetkan Reseptor pada Sel Kanker dengan Racun Protein.
Biomolekul2020,10, 1331. [CrossRef]
20. Liu, Y.; Tian, S.; Thaker, H.; Dong, M. Shiga Toksin: Pembaruan pada Faktor Inang dan Aplikasi Biomedis.Racun2021,13, 222. [
CrossRef]
21. Dhillon, S. Moxetumomab Pasudotox: Persetujuan Global Pertama.Narkoba2018,78, 1763–1767. [CrossRef]
22. El Alaoui, A.; Schmidt, F.; Amessou, M.; Sarr, M.; Decaudin, D.; Florent, JC; Johannes, pengiriman retrograde yang dimediasi toksin L.
Shiga dari prodrug penghambat topoisomerase I.Angew. kimia Int. Ed. Inggris2007,46, 6469–6472. [CrossRef] [PubMed]
23. Kaksonen, M.; Roux, A. Mekanisme endositosis yang dimediasi clathrin.Nat. Pendeta Mol. Bio Sel.2018,19, 313–326. [CrossRef]
24. Chen, Z.; Schmid, SL Mengembangkan model untuk merakit dan membentuk lubang berlapis clathrin.J. Sel Biol.2020,219. [CrossRef]
25. Sathe, M.; Muthukrishnan, G.; Rae, J.; Disanza, A.; Thattai, M.; Scita, G.; Parton, RG; Mayor, S. Small GTPase dan protein domain BAR mengatur
polimerisasi aktin bercabang untuk clathrin dan endositosis yang tidak bergantung pada dinamin.Nat. Komunal.2018,9, 1835. [CrossRef]

26. Casamento, A.; Boucrot, E. Mekanisme molekuler dari Endositosis yang Dimediasi Endofilin Cepat.Biokimia. J.2020,477, 2327–2345. [
CrossRef]
27. Sandwig, K.; Kavaliauskiene, S.; Skotland, endositosis independen T. Clathrin: Tingkat kompleksitas yang meningkat.Histokimia. Bio Sel.
2018,150, 107–118. [CrossRef]
Racun2021,13, 377 23 dari 29

28. Sandwig, K.; Olsnes, S.; Pihl, A. Kinetika pengikatan lektin beracun abrin dan risin ke reseptor permukaan sel manusia.J.Biol.
kimia1976,251, 3977–3984. [CrossRef]
29. Sandwig, K.; Olsnes, S. Pengaruh suhu pada penyerapan, ekskresi dan degradasi abrin dan risin oleh sel HeLa.Exp. Sel Res.1979,
121, 15–25. [CrossRef]
30. Sandvig, K. Kepadatan sel mempengaruhi pengikatan lektin abrin beracun ke sel HeLa dalam kultur monolayer.FEB. Lett.1978,89, 233–
236. [CrossRef]
31. Kaplan, J. Kontak sel menginduksi peningkatan laju pinositik dalam kultur sel epitel.Alam1976,263, 596–597. [CrossRef] [PubMed
]
32. Snijder, B.; Sacher, R.; Ramo, P.; Astaga, EM; Liberali, P.; Pelkmans, L. Konteks populasi menentukan variabilitas sel-ke-sel dalam
endositosis dan infeksi virus.Alam2009,461, 520–523. [CrossRef] [PubMed]
33. Kavaliauskiene, S.; Nymark, CM; Bergan, J.; Simm, R.; Sylvänne, T.; Simolin, H.; Ekroos, K.; Skotland, T.; Sandvig, K. Kepadatan sel menginduksi
perubahan komposisi lipid dan perdagangan intraseluler.Sel. Mol. Sains Kehidupan.2014,71, 1097–1116. [CrossRef] [PubMed]
34. Frechin, M.; Stoeger, T.; Daetwyler, S.; Gehin, C.; Battich, N.; Astaga, EM; Stergiou, L.; Riezman, H.; Pelkmans, L. Adaptasi sel-intrinsik dari
komposisi lipid terhadap kepadatan lokal mendorong perilaku sosial.Alam2015,523, 88–91. [CrossRef]
35. Sandwig, K.; Olsnes, S.; Pihl, A. Mengikat, penyerapan dan degradasi protein beracun abrin dan risin oleh varian sel yang tahan toksin.
eur. J. Biochem.1978,82, 13–23. [CrossRef]
36. Weeratunga, S.; Paul, B.; Collins, BM Mengenali sinyal untuk perdagangan endosomal.Kur. Opin. Bio Sel.2020,65, 17–27. [
CrossRef]
37. Montesano, R.; Roth, J.; Robert, A.; Orci, L. Invaginasi membran yang tidak dilapisi terlibat dalam pengikatan internalisasi toksin
kolera dan tetanus.Alam1982,296, 651–653. [CrossRef]
38. Parton, RG; McMahon, KA; Wu, Y. Caveolae: Formasi, dinamika, dan fungsi.Kur. Opin. Bio Sel.2020,65, 8–16. [CrossRef]

39. Dixon, SJ; Stewart, D.; Grinstein, S.; Pensinyalan Spiegel, S. Transmembran oleh subunit B toksin kolera: Peningkatan kalsium bebas
sitoplasma dalam limfosit tikus.J. Sel Biol.1987,105, 1153–1161. [CrossRef]
40. Gouy, H.; Deterre, P.; Debre, P.; Bismuth, G. Sel pensinyalan kalsium melalui gangliosida permukaan sel GM1 dalam garis sel T Jurkat manusia.J.
Imunol.1994,152, 3271–3281.
41. Klokk, TI; Kavaliauskiene, S.; Sandvig, K. Cross-linking dari glycosphingolipids pada membran plasma: Konsekuensi untuk pensinyalan
dan lalu lintas intraseluler.Sel. Mol. Sains Kehidupan.2016,73, 1301–1316. [CrossRef]
42. Torgersen, ML; Skretting, G.; van Deurs, B.; Sandvig, K. Internalisasi toksin kolera dengan mekanisme endositik yang berbeda.J. Sel Sci.
2001,114, 3737–3747. [CrossRef]
43.Nichols, BJ; Kenworthy, AK; Polishchuk, RS; Pondok, R.; Roberts, TH; Hirschberg, K.; Phair, RD; Lippincott-Schwartz, J. Rapid Cycling
of Lipid Raft Markers antara Permukaan Sel dan Kompleks Golgi.J. Sel Biol.2001,153, 529–542. [CrossRef]
44. Shogomori, H.; Futerman, AH Toksin Kolera Ditemukan di Rakit / Domain yang tidak larut Deterjen di Permukaan Sel Neuron
Hippocampal tetapi Diinternalisasi melalui Mekanisme Rakit-independen.J.Biol. kimia2001,276, 9182–9188. [CrossRef]
45. Hommelgaard, AM; Roepstorff, K.; Vilhardt, F.; Torgersen, ML; Sandvig, K.; van Deurs, B. Caveolae: Domain membran stabil
dengan potensi internalisasi.Lalu lintas2005,6, 720–724. [CrossRef]
46. Pelkmans, L.; Kartenbeck, J.; Helenius, A. Endositosis caveolar dari virus simian 40 mengungkapkan jalur transportasi vesikular dua
langkah baru ke UGD.Nat. Bio Sel.2001,3, 473–483. [CrossRef]
47. Hayer, A.; Stoeber, M.; Ritz, D.; Engel, S.; Meyer, HH; Helenius, A. Caveolin-1 di mana-mana dan ditargetkan ke vesikel
intralumenal di endolisosom untuk degradasi.J. Sel Biol.2010,191, 615–629. [CrossRef]
48. Parton, RG; Howes, MT Meninjau kembali perdagangan caveolin: Akhir dari caveosome.J. Sel Biol.2010,191, 439–441. [CrossRef]
49.Wang, X.; Qiu, Y.; Wang, M.; Zhang, C.; Zhang, T.; Zhou, H.; Zhao, W.; Zhao, W.; Xia, G.; Shao, R. Endocytosis dan Penargetan
Organelle dari Obat Nano dalam Terapi Kanker.Int. J. Nanomed.2020,15, 9447–9467. [CrossRef]
50. Pelkmans, L.; Puntener, D.; Helenius, A. Polimerisasi Aktin Lokal dan Perekrutan Dynamin dalam Internalisasi Caveolae yang Diinduksi
SV40.Sains2002,296, 535–539. [CrossRef]
51. Sialan, EM; Pelkmans, L.; Kartenbeck, J.; Mezzacasa, A.; Kurzchalia, T.; Helenius, A. Endositosis Clathrin- dan caveolin-1-
independen: Masuknya virus simian 40 ke dalam sel tanpa caveolae.J. Sel Biol.2005,168, 477–488. [CrossRef]
52. Lajoie, P.; Nabi, IR Lipid rakit, caveolae, dan endositosisnya.Int. Pendeta Sel Mol. Biol.2010,282, 135–163. [CrossRef]
53. Del Pozo, MA; Lolo, FN; Echarri, A. Caveolae: Mechanosensing dan mechanotransduction devices menghubungkan perdagangan membran
dengan mechanoadaptation.Kur. Opin. Bio Sel.2021,68, 113–123. [CrossRef]
54. Larkin, JM; Coklat, MS; Goldstein, JL; Anderson, RGW Penipisan penangkapan kalium intraseluler melapisi pembentukan lubang dan endositosis
yang dimediasi reseptor pada fibroblas.Sel1983,33, 273–285. [CrossRef]
55. Moya, M.; Dautry-Varsat, A.; Bagus, B.; Louvard, D.; Boquet, P. Penghambatan pembentukan lubang dilapisi di Hep2sel memblokir
sitotoksisitas toksin difteri tetapi tidak pada risin.J. Sel Biol.1985,101, 548–559. [CrossRef] [PubMed]
56. Sandwig, K.; Olsnes, S.; Petersen, OW; van Deurs, B. Pengasaman sitosol menghambat endositosis dari lubang yang dilapisi.J. Sel Biol.
1987,105, 679–689. [CrossRef] [PubMed]
57. Doxsey, SJ; Brodsky, FM; Kosong, GS; Helenius, A. Penghambatan endositosis oleh antibodi anti-clathrin.Sel1987,50, 453–463. [CrossRef]
Racun2021,13, 377 24 dari 29

58. Hansen, SH; Sandvig, K.; van Deurs, B. Kompartemen preendosomal terdiri dari populasi vesikel endositik yang dilapisi dan
tidak dilapisi.J. Sel Biol.1991,113, 731–741. [CrossRef] [PubMed]
59. Damke, H.; Baba, T.; van der Bliek, AM; Schmid, SL Clathrin-independent pinocytosis diinduksi dalam sel yang mengekspresikan mutan
dinamin yang sensitif terhadap suhu.J. Sel Biol.1995,131, 69–80. [CrossRef] [PubMed]
60. Damke, H.; Baba, T.; Peringatan, DE; Schmid, SL Induksi dinamin mutan secara khusus memblokir pembentukan vesikel berlapis
endositik.J. Sel Biol.1994,127, 915–934. [CrossRef]
61. Cheng, ZJ; Singh, RD; Holicky, EL; Wheatley, CL; Marks, DL; Pagano, RE Co-regulasi endositosis fase cairan yang bergantung pada
caveolar dan Cdc42 oleh phosphocaveolin-1.J.Biol. kimia2010,285, 15119–15125. [CrossRef]
62. Chaudhary, N.; Gomez, GA; Bagaimana, MT; Lihat, HP; McMahon, KA; Rae, JA; Schieber, NL; Bukit, MM; Gaus, K.; Yap, AS; et al. Crosstalk endositik:
Cavins, caveolins, dan caveolae mengatur endositosis yang tidak bergantung pada clathrin.PLoS Biol.2014,12, e1001832. [CrossRef]

63. Renard, HF; Boucrot, E. Mekanisme endositik yang tidak konvensional.Kur. Opin. Bio Sel.2021,71, 120–129. [CrossRef]
64. Rothberg, KG; Ying, YS; Kamen, BA; Anderson, RG Kolesterol mengontrol pengelompokan reseptor membran berlabuh
glikosfingolipid untuk 5-metiltetrahidrofolat.J. Sel Biol.1990,111, 2931–2938. [CrossRef]
65. Klein, AS; Gimpl, G.; Fahrenholz, F. Perubahan kandungan kolesterol membran plasma miometrium dengan beta-siklodekstrin
memodulasi afinitas pengikatan reseptor oksitosin.Biokimia1995,34, 13784–13793. [CrossRef]
66. Grimmer, S.; van Deurs, B.; Sandvig, K. Ruffling membran dan macropinocytosis membutuhkan kolesterol.J. Sel Sci.2002,115, 2953–2962.
[CrossRef]
67. Rodal, SK; Skretting, G.; Garred, Ø.; Vilhardt, F.; van Deurs, B.; Sandvig, K. Ekstraksi kolesterol dengan metil-b-siklodekstrin mengganggu
pembentukan vesikel endositik berlapis clathrin.Mol. Biol. Sel1999,10, 961–974. [CrossRef]
68. Halus, A.; Gaidarov, I.; Kobylarz, K.; Lampson, MA; Tertarik, JH; McGraw, TE Penipisan kolesterol akut menghambat pertumbuhan pit yang dilapisi clathrin.
Proses Natl. Acad. Sains. Amerika Serikat1999,96, 6775–6780. [CrossRef]
69. Watkins, EB; Majewski, J.; Chi, EY; Gao, H.; Florent, JC; Johannes, L. Shiga Toxin Menginduksi Kompresi Lipid: Sebuah Mekanisme untuk
Menghasilkan Kelengkungan Membran.Lett Nano.2019,19, 7365–7369. [CrossRef]
70. Johannes, L. Shiga Toxin-A Model untuk Endositosis Bergantung Glikolipid dan Berbasis Lektin.Racun2017,9, 340. [CrossRef]
71. Bergan, J.; Menyelam Lingelem, AB; Simm, R.; Skotland, T.; Sandvig, racun K. Shiga.Racun2012,60, 1085–1107. [CrossRef]
72. Kavaliauskiene, S.; Menyelam Lingelem, AB; Skotland, T.; Sandvig, K. Perlindungan terhadap Racun Shiga.Racun2017,9, 44. [CrossRef]
73. Sandwig, K.; Olsnes, S.; Coklat, JE; Petersen, OW; van Deurs, B. Endositosis dari lubang terlapisi toksin Shiga: Protein pengikat
glikolipid dari Shigella dysenteriae 1.J. Sel Biol.1989,108, 1331–1343. [CrossRef]
74. Schapiro, FB; Lingwood, C.; Furuya, W.; Grinstein, S. Penargetan retrograde independen-pH dari glikolipid ke kompleks Golgi. Saya. J.
Physiol.1998,274, C319–C332. [CrossRef]
75.Lauvrak, SU; Torgersen, ML; Sandvig, K. Pengangkutan toksin Shiga endosom-ke-Golgi yang efisien bergantung pada dinamin dan
clathrin.J. Sel Sci.2004,117, 2321–2331. [CrossRef] [PubMed]
76.Lauvrak, SU; Wälchli, S.; Slagvold, HH; Torgersen, ML; Spilsberg, B.; Sandvig, toksin K. Shiga mengatur masuknya dengan cara yang
bergantung pada Syk.Mol. Biol. Sel2006,17, 1096–1109. [CrossRef] [PubMed]
77. Katagiri, YU; Mori, T.; Nakajima, H.; Katagiri, C.; Taguchi, T.; Takeda, T.; Kiyokawa, N.; Fujimoto, J. Aktivasi keluarga Src kinase ya diinduksi
oleh toksin Shiga yang mengikat globotriaosyl ceramide (Gb3/CD77) dalam kepadatan rendah, mikrodomain yang tidak larut
deterjen.J.Biol. kimia1999,274, 35278–35282. [CrossRef]
78. Mori, T.; Kiyokawa, N.; Katagiri, YU; Taguchi, T.; Suzuki, T.; Sekino, T.; Duduk diatas.; Ohmi, K.; Nakajima, H.; Takeda, T.; et al. Globotriaosyl
ceramide (CD77/Gb3) dalam domain membran yang diperkaya glikolipid berpartisipasi dalam apoptosis yang dimediasi reseptor sel-B dengan
mengatur aktivitas lyn kinase dalam sel B manusia.Exp. Hematol.2000,28, 1260–1268. [CrossRef]
79. Utskarpen, A.; Massol, R.; van Deurs, B.; Lauvrak, SU; Kirchhausen, T.; Sandvig, toksin K. Shiga meningkatkan pembentukan lubang
berlapis clathrin melalui Syk kinase.PLo SATU2010,5, e70944. [CrossRef]
80. Torgersen, ML; Lauvrak, SU; Sandvig, K. Shiga toksin Rantai-A merangsang penyerapan toksin yang bergantung pada clathrin.FEBS J.2005, 272,
4103–4113. [CrossRef]
81. Pascolutti, R.; Algisi, V.; Conte, A.; Raimondi, A.; Pasham, M.; Upadhyayula, S.; Gaudin, R.; Maritzen, T.; Barbieri, E.; Caldieri, G.; et al. Lubang Berlapis Clathrin
yang Berbeda Secara Molekuler Mempengaruhi Nasib dan Pensinyalan EGFR Secara Berbeda.Perwakilan Sel.2019,27, 3049–3061.e3046. [CrossRef]

82. Skotland, T.; Sandvig, K. Peran PS 18:0/18:1 dalam fungsi membran.Nat. Komunal.2019,10, 2752. [CrossRef]
83. Varga, K.; Jiang, ZJ; Gong, LW Phosphatidylserine sangat penting untuk pembelahan vesikel selama endositosis yang dimediasi clathrin.J.
Neurochem.2020,152, 48–60. [CrossRef]
84. Römer, W.; Berland, L.; Chambon, V.; Gaus, K.; Windschiegl, B.; Tenza, D.; Aly, MR; Fraisier, V.; Florent, JC; Perrais, D.; et al. Toksin Shiga
menginduksi invaginasi membran tubular untuk penyerapannya ke dalam sel.Alam2007,450, 670–675. [CrossRef]
85. Lippincott-Schwartz, J.; Yuan, LC; Bonifacino, JS; Klausner, RD Redistribusi cepat protein Golgi ke dalam ER dalam sel yang
diobati dengan Brefeldin A: Bukti untuk siklus membran dari Golgi ke ER.Sel1989,56, 801–813. [CrossRef]
86. Fujiwara, T.; Oda, K.; Yokota, S.; Takatsuki, A.; Ikehara, Y. Brefeldin A menyebabkan pembongkaran kompleks Golgi dan akumulasi
protein sekretorik dalam retikulum endoplasma.J.Biol. kimia1988,263, 18545–18552. [CrossRef]
87. Dom, RW; Russ, G.; Yewdell, JW Brefeldin A mendistribusikan kembali protein Golgi penduduk dan keliling ke retikulum endoplasma.
J. Sel Biol.1989,109, 61–72. [CrossRef]
Racun2021,13, 377 25 dari 29

88. Hunziker, W.; Whitney, JA; Mellman, I. Penghambatan selektif transcytosis oleh brefeldin A dalam sel MDCK.Sel1991,67, 617–627. [
CrossRef]
89. Ktistakis, NT; Roth, MG; Bloom, sel GS PtK1 mengandung faktor dominan yang tidak dapat menyebar yang membuat aparatus Golgi resisten
terhadap brefeldin A.J. Sel Biol.1991,113, 1009–1023. [CrossRef]
90. Sandwig, K.; Prydz, K.; Hansen, SH; van Deurs, B. Transportasi Ricin dalam sel yang diberi perlakuan brefeldin A: Korelasi antara struktur
Golgi dan efek toksik.J. Sel Biol.1991,115, 971–981. [CrossRef]
91. Iversen, T.-G.; Skretting, G.; Llorente, A.; Nicoziani, P.; van Deurs, B.; Sandvig, K. Endosom ke Golgi pengangkutan risin tidak
tergantung pada clathrin dan Rab9- dan Rab11-GTPases.Mol. Biol. Sel2001,12, 2099–2107. [CrossRef]
92. Mallard, F.; Antony, C.; Tenza, D.; Salamero, J.; Bagus, B.; Johannes, L. Jalur langsung dari endosom awal/daur ulang ke aparatus
Golgi terungkap melalui studi transportasi fragmen B toksin shiga.J. Sel Biol.1998,143, 973–990. [CrossRef]
93. Mukhopadhyay, S.; Linstedt, AD Mangan memblokir perdagangan intraseluler toksin Shiga dan melindungi dari toksikosis Shiga. Sains
2012,335, 332–335. [CrossRef]
94. Mukhopadhyay, S.; Redler, B.; Linstedt, situs pengikatan toksin Shiga AD untuk reseptor sel inang GPP130 mengungkapkan perbedaan tak terduga dalam
mekanisme perdagangan toksin.Mol. Biol. Sel2013,24, 2311–2318. [CrossRef]
95. Li, D.; Selyunin, A.; Mukhopadhyay, S. Menargetkan Transportasi Awal Endosom-ke-Golgi dari Racun Shiga sebagai Strategi
Terapi.Racun2020,12, 342. [CrossRef]
96. Sowa-Rogozinska, N.; Sominka, H.; Nowakowska-Golacka, J.; Sandvig, K.; Slominska-Wojewodzka, M. Transpor Intraseluler dan
Sitotoksisitas Protein Racun Risin.Racun2019,11, 350. [CrossRef]
97. Mallard, F.; Tang, BL; Galli, T.; Tenza, D.; Saint-Pol, A.; Yue, X.; Antony, C.; Hong, W.; Bagus, B.; Johannes, L. Transportasi endosom-ke-TGN
awal / daur ulang melibatkan dua kompleks SNARE dan isoform Rab6.J. Sel Biol.2002,156, 653–664. [CrossRef]
98. del Nery, E.; Miserey-Lenkei, S.; Falguieres, T.; Nizak, C.; Johannes, L.; Perez, F.; Goud, B.Rab6A dan Rab6A′GTPase memainkan peran yang tidak
tumpang tindih dalam perdagangan membran.Lalu lintas2006,7, 394–407. [CrossRef] [PubMed]
99. Utskarpen, A.; Slagvold, HH; Iversen, T.-G.; Wälchli, S.; Sandvig, K. Pengangkutan risin retrograde diatur oleh Rab6A/A′secara
berurutan.Lalu lintas2006,7, 663–672. [CrossRef] [PubMed]
100.Lauvrak, SU; Llorente, A.; Iversen, T.-G.; Sandvig, K. Regulasi selektif dari transportasi risin yang tidak bergantung pada Rab9 ke
aparatus Golgi oleh kalsium.J. Sel Sci.2002,115, 3449–3456. [CrossRef] [PubMed]
101. Skånland, SS; Wälchli, S.; Wandinger-Ness, A.; Sandvig, K. Transpor risin retrograde yang diatur Phosphoinositide: Crosstalk antara
hVps34 dan penyortiran nexin.Lalu lintas2007,8, 297–309. [CrossRef]
102. Utskarpen, A.; Slagvold, HH; Menyelam, AB; Skanland, SS; Sandvig, K. SNX1 dan SNX2 memediasi transpor retrograde toksin Shiga.
Biokimia. Biofisika. Res. Kom.2007,358, 566–570. [CrossRef]
103. Bujny, MV; Popoff, V.; Johannes, L.; Cullen, PJ Komponen retromer penyortiran nexin-1 diperlukan untuk transpor retrograde
toksin Shiga yang efisien dari endosome awal ke jaringan trans Golgi.J. Sel Sci.2007,120, 2010–2021. [CrossRef]
104. Popoff, V.; Mardones, GA; Tenza, D.; Rojas, R.; Lamaze, C.; Bonifacino, JS; Raposo, G.; Johannes, L. Kompleks retromer dan clathrin
menentukan situs keluar retrograde endosom awal.J. Sel Sci.2007,120, 2022–2031. [CrossRef]
105. Pengganti, ZZ; Gleeson, PA Identifikasi rencana perjalanan yang berbeda dan komponen retromer untuk transportasi endosom-ke-Golgi dari
TGN38 dan toksin Shiga.eur. J. Sel Biol.2010,89, 379–393. [CrossRef]
106. McKenzie, JE; Raisley, B.; Zhou, X.; Naslavsky, N.; Taguchi, T.; Caplan, S.; Sheff, D. Retromer memandu STxB dan CD8-M6PR dari awal hingga daur
ulang endosom, EHD1 memandu STxB dari daur ulang endosom ke Golgi.Lalu lintas2012,13, 1140–1159. [CrossRef]
107. Jing, J.; Junutula, JR; Wu, C.; Beban, J.; Matern, H.; Peden, AA; Prekeris, R. FIP1/RCP mengikat Golgin-97 mengatur transportasi
retrograde dari endosom daur ulang ke jaringan trans-Golgi.Mol. Biol. Sel2010,21, 3041–3053. [CrossRef]
108. Pengganti, ZZ; Derby, MC; Teasdale, RD; Hart, C.; Gunn, P.; Gleeson, PA Golgin GCC88 diperlukan untuk pengangkutan kargo
retrograde yang efisien dari endosom awal ke jaringan trans-Golgi.Mol. Biol. Sel2007,18, 4979–4991. [CrossRef]
109. Arakel, EC; Schwappach, B. Sekilas pembentukan vesikel berlapis COPI.J. Sel Sci.2018,131. [CrossRef]
110. Luo, PM; Boyce, M. Mengarahkan Lalu Lintas: Regulasi Transportasi COPI dengan Modifikasi Pasca-translasi.Depan. Pengembang Sel. Biol. 2019,
7, 190. [CrossRef]
111. Girod, A.; Storrie, B.; Simpson, JC; Johannes, L.; Bagus, B.; Roberts, LM; Tuhan, JM; Nilsson, T.; Pepperkok, R. Bukti untuk rute
transpor independen COP-I dari kompleks Golgi ke retikulum endoplasma.Bio Sel Alam.1999,1, 423–430. [CrossRef] [PubMed]

112. Jackson, SAYA; Simpson, JC; Girod, A.; Pepperkok, R.; Roberts, LM; Tuhan, JM Sistem pengambilan KDEL dieksploitasi oleh Pseudomonas
eksotoksin A, tetapi tidak oleh toksin-1 seperti Shiga, selama transpor retrograde dari kompleks Golgi ke retikulum endoplasma.J. Sel
Sci.1999,112, 467–475. [CrossRef] [PubMed]
113. Putih, J.; Johannes, L.; Mallard, F.; Girod, A.; Panggangan, S.; Reinsch, S.; Keller, P.; Tzschaschel, B.; Echard, A.; Bagus, B.; et al. Rab6
mengoordinasikan jalur transportasi retrograde Golgi ke ER dalam sel hidup.J. Sel Biol.1999,147, 743–760. [CrossRef] [PubMed]
114. Bassik, MC; Kampmann, M.; Lebink, RJ; Wang, S.; Hein, SAYA; Poser, saya.; Weibezahn, J.; Horlbeck, MA; Chen, S.; Mann, M.; et al. Peta
interaksi genetik mamalia yang sistematis mengungkapkan jalur yang mendasari kerentanan risin.Sel2013,152, 909–922. [CrossRef]

115. Moreau, D.; Kumar, P.; Wang, SC; Chaumet, A.; Kunyah, SY; Chevalley, H.; Layar RNAi Bard, F. Genome-wide mengidentifikasi gen yang
diperlukan untuk keracunan Ricin dan PE.Dev. Sel2011,21, 231–244. [CrossRef]
Racun2021,13, 377 26 dari 29

116. Garred, Ø.; van Deurs, B.; Pembelahan yang diinduksi Sandvig, K. Furin dan aktivasi toksin Shiga.J.Biol. kimia1995,270, 10817–10821. [
CrossRef]
117. Llorente, A.; Lauvrak, SU; van Deurs, B.; Sandvig, K. Induksi endosom langsung ke transpor retikulum endoplasma dalam sel ovarium
hamster Cina (CHO) (LdlF) dengan defek yang sensitif terhadap suhu pada protein epsilon-coatomer (epsilon-COP).J.Biol. kimia2003,
278, 35850–35855. [CrossRef]
118. Wesche, J.; Rapak, A.; Olsnes, S. Ketergantungan toksisitas risin pada translokasi rantai A toksin dari retikulum endoplasma ke
sitosol.J.Biol. kimia1999,274, 3443–3449. [CrossRef]
119. Simpson, JC; Roberts, LM; Römisch, K.; Davey, J.; Serigala, DH; Tuhan, rantai JM Ricin A menggunakan jalur degradasi protein
terkait retikulum endoplasma untuk memasuki sitosol ragi.FEB Lett.1999,459, 80–84. [CrossRef]
120. Slominska-Wojewodzka, M.; Gregers, TF; Wälchli, S.; Sandvig, K. EDEM terlibat dalam translokasi risin dari retikulum
endoplasma ke sitosol.Mol. Biol. Sel2006,17, 1664–1675. [CrossRef]
121. Yu, M.; Haslam, DB Toksin Shiga diangkut dari retikulum endoplasma setelah interaksi dengan pendamping luminal HEDJ/
ERdj3.Menulari. Imun.2005,73, 2524–2532. [CrossRef]
122. Forrester, A.; Rathjen, SJ; Daniela Garcia-Castillo, M.; Bachert, C.; Cohert, A.; Tepshi, L.; Pichard, S.; Martinez, J.; Munier, M.; Sierocki, R.; et
al. Pembedahan fungsional penghambat perdagangan toksin Shiga retrograde Retro-2.Nat. kimia Biol.2020,16, 327–336. [CrossRef]

123. Stechmann, B.; Bai, SK; Gobbo, E.; Lopez, R.; Merer, G.; Pinchard, S.; Panigai, L.; Tenza, D.; Raposo, G.; Beaumelle, B.; et al. Penghambatan
transportasi retrograde melindungi tikus dari tantangan risin yang mematikan.Sel2010,141, 231–242. [CrossRef]
124. Morgens, DW; Chan, C.; Kane, AJ; Bendung, NR; Li, A.; Dubreuil, MM; Tsui, CK; Hess, GT; Lavertu, A.; Han, K.; et al. Retro-2 melindungi sel dari
toksisitas risin dengan menghambat penargetan ER yang dimediasi ASNA1 dan penyisipan protein berlabuh ekor.Elif2019,8. [CrossRef]

125. Norlin, S.; Parekh, VS; Naredi, P.; Edlund, H. Asna1/TRC40 Mengontrol Fungsi Sel beta dan Homeostasis Retikulum Endoplasma dengan
Memastikan Transportasi Retrograde.Diabetes2016,65, 110–119. [CrossRef]
126. Simpson, JC; Dascher, C.; Roberts, LM; Tuhan, JM; Balch, sitotoksisitas WE Ricin sensitif terhadap daur ulang antara retikulum
endoplasma dan kompleks Golgi.J.Biol. kimia1995,270, 20078–20083. [CrossRef]
127. Subramanian, A.; Capalbo, A.; Iyengar, NR; Rizzo, R.; di Campli, A.; Di Martino, R.; Lo Monte, M.; Beccari, AR; Yerudkar, A.; Del
Vecchio, C.; et al. Pengaturan otomatis Fluks Sekretori dengan Merasakan dan Menanggapi Beban Protein Kargo Lipat di
Retikulum Endoplasma.Sel2019,176, 1461–1476.e23. [CrossRef]
128. Shevchenko, A.; Simons, K. Lipidomics: Memahami keragaman lipid.Nat. Pendeta Mol. Bio Sel.2010,11, 593–598. [CrossRef]

129. Jung, SDM; Sylvanne, T.; Koistinen, KM; Tarasov, K.; Kauhanen, D.; Ekroos, K. Lipidomik molekuler kuantitatif throughput tinggi.
Biochim. Biofisika. Acta2011,1811, 925–934. [CrossRef]
130. Harayama, T.; Riezman, H. Memahami keragaman komposisi lipid membran.Nat. Pendeta Mol. Bio Sel.2018,19, 281–296. [
CrossRef]
131. Hanada, K. Protein transfer lipid memperbaiki fluks antar-organel dan secara akurat mengirimkan lipid di lokasi kontak membran.J. Lipid Res.
2018,59, 1341–1366. [CrossRef]
132. Skotland, T.; Kavaliauskiene, S.; Sandvig, K. Peran spesies lipid dalam membran dan perubahan terkait kanker.Metastasis Kanker Pdt.
2020,39, 343–360. [CrossRef]
133. Merrill, AH, Jr. Jalur metabolisme sphingolipid dan glikosphingolipid di era sphingolipidomics.kimia Putaran.2011,111, 6387–
6422. [CrossRef]
134. Taman, JW; Taman, WJ; Futerman, AH Ceramide sintase sebagai target potensial untuk intervensi terapeutik pada penyakit manusia.
Biochim. Biofisika. Acta2014,1841, 671–681. [CrossRef]
135. Nilsson, O.; Svennerholm, L. Karakterisasi dan penentuan kuantitatif gangliosida dan glikosfingolipid netral di hati manusia.J.
Lipid Res.1982,23, 327–334. [CrossRef]
136. Brandel, A.; Aigal, S.; Lagies, S.; Schlimpert, M.; Melendez, AV; Xu, M.; Lehmann, A.; Hummel, D.; Fisch, D.; Madl, J.; et al. Domain
membran plasma CD59 / flotillin yang diperkaya Gb3 mengatur invasi sel inang oleh Pseudomonas aeruginosaSel. Mol. Sains
Kehidupan.2021. [CrossRef]
137. Devaux, PF; Morris, R. Transmembran asimetri dan domain lateral dalam membran biologis.Lalu lintas2004,5, 241–246. [
CrossRef]
138. van Meer, G.; Voelker, DR; Feigenson, GW Membran lipid: Di mana mereka berada dan bagaimana mereka berperilaku.Nat. Pendeta Mol. Bio Sel. 2008,9,
112–124. [CrossRef]
139. Steck, TL; Lange, Y. Distribusi transversal kolesterol bilayer membran plasma: Memilih sisi.Lalu lintas2018,19, 750–760. [
CrossRef]
140. Skotland, T.; Sagini, K.; Sandvig, K.; Llorente, A. Fokus yang muncul pada lipid dalam vesikel ekstraseluler.Lanjut Pengiriman Obat. Putaran.2020,
159, 308–321. [CrossRef] [PubMed]
141. Rog, T.; Orlowski, A.; Llorente, A.; Skotland, T.; Sylvanne, T.; Kauhanen, D.; Ekroos, K.; Sandvig, K.; Vattulainen, I. Interdigitasi sphingomyelin
rantai panjang menginduksi penggabungan selebaran membran dengan cara yang bergantung pada kolesterol.Biochim. Biofisika. Acta 2016,
1858, 281–288. [CrossRef] [PubMed]
Racun2021,13, 377 27 dari 29

142. Fujimoto, T.; Parmryd, I. Interleaflet Coupling, Pinning, dan Leaflet Asimetri-Pemain Utama dalam Pembentukan Nanodomain Membran Plasma.
Depan. Pengembang Sel. Biol.2017,4, 155. [CrossRef] [PubMed]
143. Rog, T.; Vattulainen, I. Kolesterol, sphingolipid, dan glikolipid: Apa yang kita ketahui tentang peran mereka dalam membran seperti rakit? kimia
Fisika. Lemak2014,184, 82–104. [CrossRef] [PubMed]
144. Nikel, JD; Smith, JC; Cheng, X. Organisasi lateral, asimetri bilayer, dan kopling antar selebaran dari membran biologis. kimia
Fisika. Lemak2015,192, 87–99. [CrossRef]
145. Lingwood, D.; Binnington, B.; Rog, T.; Vattulainen, I.; Grzybek, M.; Coskun, U.; Lingwood, CA; Simons, K. Kolesterol memodulasi
konformasi glikolipid dan aktivitas reseptor.Nat. kimia Biol.2011,7, 260–262. [CrossRef]
146. Yahi, N.; Aulas, A.; Fantini, J. Bagaimana kolesterol membatasi konformasi glikolipid untuk pengenalan optimal peptida beta amiloid
Alzheimer (Abeta1-40).PLo SATU2010,5, e9079. [CrossRef]
147. Ling, H.; Boodhoo, A.; Kabut asap, B.; Cummings, MD; Amstrong, GD; Brunton, JL; Baca, RJ Struktur toksin mirip shiga I B-
pentamer yang dikomplekskan dengan analog reseptornya Gb3.Biokimia1998,37, 1777–1788. [CrossRef]
148. Sandwig, K.; Lingelem, ABD; Skotland, T.; Toksin Bergan, J. Shiga: Properti dan tindakan pada sel. Di dalamBuku Sumber Komprehensif
Racun Protein Bakteri, edisi ke-4.; Alouf, J., Ladant, D., Popoff, MR, Eds.; Elsevier: Amsterdam, Belanda, 2015; hlm. 267–286.

149. Pike, LJ; Han, X.; Kotor, reseptor faktor pertumbuhan Epidermal RW terlokalisasi pada rakit lipid yang mengandung keseimbangan lipid
selebaran dalam dan luar: Sebuah studi lipidomik senapan.J.Biol. kimia2005,280, 26796–26804. [CrossRef]
150. Legros, N.; Pohlentz, G.; Runde, J.; Dusny, S.; Humpf, HU; Karch, H.; Muthing, J. Kolokalisasi reseptor untuk racun Shiga dengan
rakit lipid dalam sel endotel glomerulus ginjal manusia primer dan pengaruh D-PDMP pada sintesis dan distribusi reseptor
glikosphingolipid.Glikobiologi2017,27, 947–965. [CrossRef]
151. Skotland, T.; Sandvig, K.; Llorente, A. Lipid dalam eksosom: Pengetahuan terkini dan jalan ke depan.Prog. Res Lipid.2017,66, 30–41. [
CrossRef]
152. Lingwood, CA; Manis, A.; Mahfoud, R.; Khan, F.; Binnington, B.; Mylvaganam, M. Aspek baru dari pengaturan fungsi reseptor
glikosfingolipid.kimia Fisika. Lemak2010,163, 27–35. [CrossRef]
153. Falguieres, T.; Romer, W.; Amessou, M.; Afonso, C.; Serigala, C.; Tabet, JC; Lamaze, C.; Johannes, L. Kumpulan reseptor toksin Shiga yang berbeda
secara fungsional, globotriaosyl ceramide, dalam sel HeLa.FEBS J.2006,273, 5205–5218. [CrossRef]
154. Falguieres, T.; Mallard, F.; Baron, C.; Hanau, D.; Lingwood, C.; Bagus, B.; Salamero, J.; Johannes, L. Penargetan subunit toksin shiga
untuk retrograde rute transportasi dalam kaitannya dengan membran tahan deterjen.Mol. Biol. Sel2001,12, 2453–2468. [CrossRef]

155. Takenouchi, H.; Kiyokawa, N.; Taguchi, T.; Matsui, J.; Katagiri, YU; Okita, H.; Okuda, K.; Toksin Fujimoto, J. Shiga yang mengikat ke
globotriaosyl ceramide menginduksi sinyal intraseluler yang memediasi remodeling sitoskeleton dalam sel turunan karsinoma ginjal
manusia.J. Sel Sci.2004,117, 3911–3922. [CrossRef]
156. Walchli, S.; Skanland, SS; Gregers, TF; Lauvrak, SU; Torgersen, ML; Ying, M.; Kuroda, S.; Maturana, A.; Sandvig, K. Protein Kinase p38 yang
diaktifkan Mitogen Menghubungkan Pensinyalan dan Perdagangan yang Bergantung pada Shiga.Mol. Biol. Sel2008,19, 95–104. [CrossRef]

157. Spiegel, S.; Fishman, PH; Weber, RJ Bukti langsung bahwa gangliosida GM1 endogen dapat memediasi proliferasi timosit. Sains
1985,230, 1285–1287. [CrossRef]
158. Schnitzler, AC; Burke, JM; Wetzler, LM Induksi peristiwa pensinyalan sel oleh subunit kolera toksin B dalam sel penyaji antigen.
Menulari. Imun.2007,75, 3150–3159. [CrossRef]
159. Ravicandra, B.; Joshi, PG Regulasi pensinyalan transmembran oleh ganglioside GM1: Interaksi anti-GM1 dengan sel Neuro2a.J.
Neurochem.1999,73, 557–567. [CrossRef]
160. Wang, J.; Lu, ZH; Gabius, HJ; Rohowsky-Kochan, C.; Ledeen, RW; Wu, G. Penghubung silang gangliosida GM1 oleh galektin-1 memediasi
aktivitas sel T regulasi yang melibatkan aktivasi saluran TRPC5: Kemungkinan berperan dalam menekan ensefalomielitis autoimun
eksperimental.J. Imunol.2009,182, 4036–4045. [CrossRef]
161. Tongkat, AM; Fujita, A.; McCombs, JE; Cervin, J.; Dedik, B.; Rodriguez, AC; Nischan, N.; Obligasi, MR; Mettlen, M.; Trudgia,
DC; et al. Fukosilasi dan glikosilasi protein menciptakan reseptor fungsional untuk toksin kolera.Elif2015,4, e09545. [CrossRef]
162. Cervin, J.; Tongkat, AM; Casselbrant, A.; Wu, H.; Krishnamurthy, S.; Cvjetkovic, A.; Estelius, J.; Dedik, B.; Sethi, A.; Wallom, KL; et
al. Intoksikasi independen gangliosida GM1 oleh toksin Kolera.Patog PLoS.2018,14, e1006862. [CrossRef] [PubMed]
163. Monferran, CG; Roth, GA; Cumar, FA Penghambatan toksin kolera yang mengikat reseptor membran oleh glikopeptida turunan musin
lambung babi: Efek diferensial tergantung pada penentu antigenik golongan darah ABO.Menulari. Imun.1990,58, 3966–3972. [
CrossRef] [PubMed]
164. Raa, HA; Grimmer, S.; Schwudke, D.; Bergan, J.; Wälchli, S.; Skotland, T.; Shevchenko, A.; Sandvig, K. Glycosphingolipid persyaratan
untuk transportasi endosome-to-Golgi toksin Shiga.Lalu lintas2009,10, 868–882. [CrossRef] [PubMed]
165. Grimmer, S.; Spilsberg, B.; Hanada, K.; Sandvig, K. Penipisan sphingolipids memfasilitasi endosom untuk pengangkutan risin Golgi. Lalu lintas
2006,7, 1243–1253. [CrossRef] [PubMed]
166. Spilsberg, B.; van Meer, G.; Sandvig, K. Peran lipid dalam jalur retrograde keracunan risin.Lalu lintas2003,4, 544–552. [CrossRef]
Racun2021,13, 377 28 dari 29

167. Pike, LJ; Han, X.; Chung, KN; Kotor, RW Lipid rakit diperkaya dalam asam arakidonat dan plasmenylethanolamine dan
komposisinya tidak bergantung pada ekspresi caveolin-1: Analisis ionisasi elektrospray kuantitatif / analisis spektrometri
massa. Biokimia2002,41, 2075–2088. [CrossRef]
168. Wallner, S.; Schmitz, G. Plasmalogens spesies lipid pengatur dan pemulung yang diabaikan.kimia Fisika. Lemak2011,164, 573–589. [
CrossRef]
169. Braverman, NE; Moser, AB Fungsi lipid plasmalogen dalam kesehatan dan penyakit.Biochim. Biofisika. Acta2012,1822, 1442–1452. [
CrossRef]
170. Phuyal, S.; Skotland, T.; Hessvik, NP; Simolin, H.; Sampai jumpa, A.; Brech, A.; Parton, RG; Ekroos, K.; Sandvig, K.; Llorente, A.
Ether Lipid Precursor Hexadecylglycerol Merangsang Pelepasan dan Mengubah Komposisi Eksosom Berasal dari Sel PC-3.
J.Biol. kimia2015,290, 4225–4237. [CrossRef]
171. Torgersen, ML; Klokk, TI; Kavaliauskiene, S.; Klose, C.; Simons, K.; Skotland, T.; Sandvig, K. Obat anti tumor asam 2-hidroksioleat
(Minerval) merangsang pensinyalan dan transportasi mundur.Oncotarget2016,7, 86871–86888. [CrossRef]
172. Rother, N.; Yanginlar, C.; Lindeboom, RGH; Bekkering, S.; van Leent, MMT; Buijsers, B.; Jonkman, I.; de Graaf, M.; Baltissen,
M.; Lamers, LA; et al. Hydroxychloroquine Menghambat Respons Kekebalan Tubuh Terlatih terhadap Interferon.Sel Rep. Med.2020,1, 100146. [
CrossRef]
173. Jimenez-Rojo, N.; Riezman, H. Di jalan untuk mengungkap fungsi molekul lipid eter.FEB Lett.2019,593, 2378–2389. [CrossRef]

174. Fontaine, D.; Figiel, S.; Felix, R.; Kouba, S.; Fromont, G.; Maheo, K.; Potier-Cartereau, M.; Chantom, A.; Vandier, C. Peran lipid eter
endogen dan PUFA terkait dalam pengaturan saluran ion dan relevansinya dengan penyakit.J. Lipid Res.2020, 61, 840–858. [
CrossRef]
175. Dekan, JM; Lodhi, IJ Peran struktural dan fungsional lipid eter.Sel Protein2018,9, 196–206. [CrossRef]
176. Bergan, J.; Skotland, T.; Sylvänne, T.; Simolin, H.; Ekroos, K.; Sandvig, K. Heksadesilgliserol prekurson lipid eter menyebabkan
perubahan besar pada lipidom sel HEp-2.PLo SATU2013,8, e75904. [CrossRef]
177. Bergan, J.; Skotland, T.; Menyelam Lingelem, AB; Simm, R.; Spilsberg, B.; Lindback, T.; Sylvänne, T.; Simolin, H.; Ekroos, K.; Sandwig,
K. Prekursor lipid eter heksadesilgliserol melindungi terhadap racun Shiga.Sel. Mol. Sains Kehidupan.2014,71, 4285–4300. [CrossRef] [PubMed]

178. Kavaliauskiene, S.; Skotland, T.; Sylvänne, T.; Simolin, H.; Klokk, TI; Torgersen, ML; Lingelem, ABD; Simm, R.; Ekroos, K.; Sandvig, K.
Tindakan baru dari 2-deoxyglucose: Perlindungan terhadap racun Shiga dan perubahan lipid seluler.Biokimia. J.2015,470, 23–37. [
CrossRef]
179. Kavaliauskiene, S.; Torgersen, ML; Lingelem, AB; Klokk, TI; Lintonen, T.; Simolin, H.; Ekroos, K.; Skotland, T.; Sandvig, K. Seluler
efek fluorodeoxyglukosa: Perubahan global dalam lipidom dan perubahan transportasi intraseluler.Oncotarget2016,7, 79885–
79900. [CrossRef]
180. Ailte, I.; Lingelem, AB; Kavaliauskiene, S.; Bergan, J.; Kvalvaag, AS; Myrann, AG; Skotland, T.; Sandvig, K. Penambahan lisofosfolipid
dengan kelompok kepala besar ke sel menghambat pengikatan toksin Shiga.Sains. Reputasi.2016,6, 30336. [CrossRef]
181. Ailte, I.; Lingelem, AB; Kvalvaag, AS; Kavaliauskiene, S.; Brech, A.; Koster, G.; Dommersnes, PG; Bergan, J.; Skotland, T.; Sandvig, K.
Lisofosfolipid eksogen dengan kelompok kepala besar mengganggu endositosis yang dimediasi clathrin.Lalu lintas2017,18, 176–191. [
CrossRef]
182. Spilsberg, B.; Llorente, A.; Sandvig, K. Asam lemak tak jenuh ganda mengatur transportasi toksin Shiga.Biokimia. Biofisika. Res. Komunal. 2007,
364, 283–288. [CrossRef] [PubMed]
183. Lingelem, ABD; Kavaliauskiene, S.; Halsne, R.; Klokk, TI; Surma, MA; Klose, C.; Skotland, T.; Sandvig, K. Diacylglycerol kinase dan
inhibitor fosfolipase D mengubah lipidom seluler dan penyortiran endosom menuju aparatus Golgi.Sel. Mol. Sains Kehidupan.
2021,78, 985–1009. [CrossRef] [PubMed]
184. Jimenez-Rojo, N.; Leonetti, MD; Zoni, V.; Colom, A.; Feng, S.; Iyengar, NR; Matile, S.; Roux, A.; Vanni, S.; Weisman, JS; et al. Fungsi
yang Dilestarikan dari Lipid Eter dan Sphingolipid di Jalur Sekretori Awal.Kur. Biol.2020,30, 3775–3787.e3777. [CrossRef] [
PubMed]
185. Han, XL; Gross, RW Plasmenylcholine dan bilayer membran fosfatidilkolin memiliki motif konformasi yang berbeda. Biokimia
1990,29, 4992–4996. [CrossRef]
186. Rog, T.; Koivuniemi, A. Sifat biofisik plasmalogens etanolamin diungkapkan oleh simulasi dinamika molekul atomistik.Biochim.
Biofisika. Acta2016,1858, 97–103. [CrossRef]
187. Kinoshita, T.; Fujita, M. Biosintesis protein berlabuh GPI: Penekanan khusus pada remodeling lipid GPI.J. Lipid Res.2016,57, 6–
24. [CrossRef]
188. Obrig, TG; Del Vecchio, PJ; Coklat, JE; Moran, TP; Rowland, BM; Hakim, TK; Rothman, SW Aksi sitotoksik langsung dari toksin Shiga pada
sel endotel pembuluh darah manusia.Menulari. Imun.1988,56, 2373–2378. [CrossRef]
189. Kelloff, GJ; Krohn, KA; Larson, SM; Weissleder, R.; Mankoff, DA; Hoffman, JM; Tautan, JM; Guyton, KZ; Eckelman, WC; Scher, HI;
et al. Kemajuan dan janji probe pencitraan molekuler dalam pengembangan obat onkologi.Klinik. Kanker Res.2005, 11, 7967–
7985. [CrossRef]
190. Hofman, MS; Hicks, RJ Bagaimana Kita Membaca FDG PET/CT Onkologi.Pencitraan Kanker2016,16, 35. [CrossRef]
191. Boulant, S.; Kural, C.; Zeeh, JC; Ubelmann, F.; Kirchhausen, T. Dinamika aktin menangkal ketegangan membran selama endositosis yang
diperantarai clathrin.Nat. Bio Sel.2011,13, 1124–1131. [CrossRef]
Racun2021,13, 377 29 dari 29

192. Melero, A.; Chiaruttini, N.; Karashima, T.; Riezman, I.; Funato, K.; Barlowe, C.; Riezman, H.; Roux, A. Lisofosfolipid Memfasilitasi
Pembentukan Vesikel COPII.Kur. Biol.2018,28, 1950–1958.e56. [CrossRef]
193. Binnington, B.; Nguyen, L.; Kamani, M.; Hossain, D.; Marks, DL; Budani, M.; Lingwood, CA Penghambatan prenilasi Rab oleh statin
menginduksi remodeling glikosfingolipid seluler.Glikobiologi2016,26, 166–180. [CrossRef]
194. Cole, SL; Grudzien, A.; Manhart, IO; Kelly, BL; Oakley, H.; Vassar, R. Statin menyebabkan akumulasi protein prekursor amiloid
intraseluler, fragmen yang dibelah beta-sekretase, dan beta-peptida amiloid melalui mekanisme yang bergantung pada isoprenoid.
J.Biol. kimia2005,280, 18755–18770. [CrossRef]
195. Sheng, R.; Chen, Y.; Yung Gee, H.; Stec, E.; Melowik, SDM; Blatner, NR; Tun, MP; Kim, Y.; Kallberg, M.; Fujiwara, TK; et al. Kolesterol
memodulasi pensinyalan sel dan jaringan protein dengan secara khusus berinteraksi dengan protein perancah yang mengandung
domain PDZ.Nat. Komunal.2012,3, 1249. [CrossRef]
196. Ikonen, E. Mekanisme kompartementalisasi kolesterol seluler: Wawasan terkini.Kur. Opin. Bio Sel.2018,53, 77–83. [CrossRef]

197. Bos, K.; Wright, C.; Stanley, KK TGN38 dipertahankan dalam jaringan trans-Golgi oleh motif yang mengandung tirosin dalam
domain sitoplasma.EMBO J.1993,12, 2219–2228. [CrossRef]
198. Stace, CL; Ktistakis, NT Protein pengikat asam fosfatidat dan fosfatidilserin.Biochim. Biofisika. Acta2006,1761, 913–926. [
CrossRef]
199. Jungmichel, S.; Sylvestersen, KB; Choudhary, C.; Nguyen, S.; Mann, M.; Nielsen, ML Spesifisitas dan kesamaan proteom
pengikat fosfoinositida dianalisis dengan spektrometri massa kuantitatif.Perwakilan Sel.2014,6, 578–591. [CrossRef]
200. Shinzawa-Itoh, K.; Aoyama, H.; Muramoto, K.; Terada, H.; Kurauchi, T.; Tadehara, Y.; Yamasaki, A.; Sugimura, T.; Kurono, S.;
Tsujimoto, K.; et al. Struktur dan peran fisiologis 13 lipid integral sitokrom c oksidase jantung sapi.EMBO J.2007, 26, 1713–
1725. [CrossRef]
201. Contreras, FX; Ernst, AM; Haberkant, P.; Bjorkholm, P.; Lindahl, E.; Gonen, B.; Tischer, C.; Elofsson, A.; von, HG; Thiele, C.; et al.
Pengenalan molekuler spesies sphingolipid tunggal oleh domain transmembran protein.Alam2012,481, 525–529. [CrossRef]