Machine Translated by Google

Tinjauan JENIS

DITERBITKAN 02 Agustus 2022

DOI 10.3389/fvets.2022.936251

Tinjau deteksi virus penyakit Newcastle

AKSES TERBUKA

DIEDIT OLEH

Dirk Werling,
Perguruan Tinggi Kedokteran Hewan Kerajaan (RVC), Qian Mao1 , Shengming Ma2 , Philip Luke Schrickel1 ,
Britania Raya
Pengwei Zhao1 , Jingya Wang1 , Yuhua Zhang1 , Shuangyu Li1
DIPERIKSA OLEH

Shahriar Behboudi, dan Chengbao Wang1*

Institut Pirbright, Inggris
Mansour Mayahi, 1Sekolah Tinggi Kedokteran Hewan, Universitas Pertanian dan Kehutanan Northwest, Xianyang, Cina,
Universitas Shahid Chamran 2Laboratorium Penelitian Internasional Gabungan Penelitian dan Penerapan Biologi Hewan Henan,
Ahwaz, Iran Institut Teknologi Anyang, Anyang, Cina

*KORESPONDENSI
Chengbao Wang
wangchengbao@nwafu.edu.cn
BAGIAN KHUSUS
Artikel ini telah dikirimkan ke
Penyakit Menular Hewan,
bagian dari jurnal
Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan
DITERIMA 05 Mei 2022
DITERIMA 11 Juli 2022
DITERBITKAN 02 Agustus 2022
KUTIPAN
Mao Q, Ma S, Schrickel PL, Zhao P,
Wang J, Zhang Y, Li S dan Wang C
(2022) Tinjau deteksi virus penyakit
Newcastle. Depan. Dokter hewan. Sains.
9:936251. doi: 10.3389/fvets.2022.936251
HAK CIPTA
© 2022 Mao, Ma, Schrickel, Zhao,
Wang, Zhang, Li dan Wang. Ini adalah
artikel akses terbuka yang
didistribusikan berdasarkan ketentuan
Lisensi Atribusi Creative Commons
(CC BY). Penggunaan, distribusi atau
reproduksi di forum lain
diperbolehkan, asalkan penulis asli
dan pemilik hak cipta disebutkan
dan publikasi asli dalam jurnal ini
dikutip, sesuai dengan praktik
akademis yang diterima. Tidak ada
penggunaan, distribusi atau
reproduksi yang diizinkan yang tidak mematuhi ketentuan ini.
Penyakit tetelo (ND) adalah penyakit akut dan sangat menular yang disebabkan
oleh virus penyakit tetelo (NDV) yang menginfeksi unggas, yang telah
menyebabkan kerugian besar bagi industri unggas di seluruh dunia. Diagnosis
cepat NDV penting untuk pengobatan dini dan tindakan pengendalian dini. Dalam
tinjauan ini, kami merangkum secara komprehensif penelitian terbaru mengenai
NDV, termasuk gambaran sejarah, struktur molekul, dan mekanisme infeksi.
Kami kemudian fokus pada strategi deteksi NDV, termasuk isolasi virus, uji
serologis (seperti uji hemaglutinasi dan penghambatan hemaglutinasi, uji
imunosorben terkait enzim, uji netralisasi virus reporter, uji imunofluoresensi,
dan teknik emas koloid imun), uji molekuler (seperti reaksi berantai polimerase
transkripsi balik, PCR kuantitatif waktu nyata, dan amplifikasi isotermal yang
dimediasi loop) dan pengujian lainnya. Kinerja uji biologi serologis dan molekuler
yang berbeda yang tersedia saat ini juga dianalisis. Sebagai kesimpulan, kami
mengkaji keterbatasan strategi yang tersedia saat ini untuk mendeteksi NDV guna
meletakkan dasar bagi pengujian deteksi baru.
KATA KUNCI
uji molekuler, uji serologis, virus penyakit Newcastle, gambaran sejarah, strategi
deteksi
Perkenalan
Penyakit Newcastle (ND), yang disebabkan oleh infeksi spesies unggas
dengan strain virus penyakit Newcastle (NDV) yang mematikan, juga dikenal
sebagai avian paramyxovirus 1 (APMV-1), dapat menyebabkan penyakit menular
yang akut, mematikan, dan sangat menular pada unggas. , ditandai dengan
kerusakan pada saluran pencernaan dan sistem saraf pusat (1). Hal ini tidak hanya
membatasi perkembangan industri perunggasan karena tingginya angka kesakitan
dan kematian yang disebabkan oleh ND tetapi juga membatasi perkembangan
industri perunggasan. Menurut laporan, setidaknya terdapat empat wabah besar
ND di seluruh dunia, yang menyebabkan kerugian besar terhadap perdagangan
internasional, dan setiap epidemi memiliki genotipe spesifiknya (2). Meskipun
program vaksinasi ND banyak digunakan dalam industri unggas, strain liar yang
berbeda dari kelompok ternak yang diimunisasi masih diisolasi (3). Pada saat
yang sama, munculnya gejala klinis atipikal dan strain baru telah menimbulkan banyak kesulitan

Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan 01 frontiersin.org

Machine Translated by Google
Mao dkk.
industri peternakan dan unggas serta peningkatan perdagangan
dunia, pencegahan ND sangatlah penting. Deteksi dini melalui metode
yang cepat, sensitif, dan akurat sangat penting untuk mengurangi
penyebaran ND (4). Ulasan ini memperkenalkan penelitian terbaru
tentang ND, termasuk gambaran sejarah, biologi struktural, dan
mekanisme infeksi. Selain itu, terdapat ringkasan strategi deteksi ND
yang komprehensif, termasuk isolasi virus, uji serologis, dan uji
molekuler.
Tinjauan sejarah
Pada tahun 1926, ND pertama kali dilaporkan ke Indonesia (5, 6).
Pada tahun 1927, Doyle mengisolasi virus tersebut di Newcastle,
Inggris, dan menamakannya NDV (7). Kemudian banyak wabah
spesies burung berbeda yang terkait dengan NDV yang mematikan
dilaporkan di Amerika Utara (Amerika Serikat, Kanada, dan Kosta
Rika), Eropa (Prancis, Italia, Inggris, Skotlandia, Spanyol, dan Rusia),
Afrika (Kenya), Asia (Tiongkok, Korea, India, Jepang, Sri Lanka,
Saudi Kazakhstan, Filipina, dan Arab) dan Australia (8, 9). Sejak
tahun 1926, terdapat empat pandemi ND di seluruh dunia, dan setiap
pandemi disebabkan oleh genotipe NDV yang berbeda. Pandemi
global pertama, yang dimulai secara bersamaan di Asia Tenggara
dan Eropa dari tahun 1920 hingga 1960, membutuhkan waktu sekitar
30 tahun untuk berkembang sepenuhnya. Hal ini disebabkan oleh
NDV dari ketiga genotipe gen II, III, dan IV (10). Sasaran utama infeksi
adalah ayam, unggas air, dan burung, yang hampir tidak ada
penyakit, sehingga menunjukkan perbedaan distribusi regional tertentu (11).cetakan N-RNA membentuk ribonukleoprotein aktif (RNP) kompleks
Pandemi kedua pada tahun 1960 hingga 1970 mungkin berasal dari yang diperlukan untuk transkripsi dan replikasi. Tetramer fosfoprotein
Timur Tengah karena meningkatnya komersialisasi produk-produk tersebut.memediasi interaksi antara protein L dan cetakan N-RNA untuk
industri unggas secara global, serta meningkatnya perdagangan
burung beo internasional. Hal ini terutama disebabkan oleh genotipe
NDV V dan VI yang membahayakan burung hias dan burung sangkar
(12, 13). Pandemi ketiga yang diyakini disebabkan oleh isolat
genotipe VI pada akhir tahun 1970 hingga 1980 terjadi pada merpati
balap tetapi kemudian menyebar ke seluruh dunia dan menjadi sulit
dikendalikan karena relatif kurangnya pengendalian absolut dalam
peternakan merpati balap (14) . Terakhir, pandemi keempat yang
sedang berlangsung diyakini dimulai pada akhir tahun 1980an dan
terkait dengan genotipe VII, V, VI, dan VIII. Hal ini telah menyebabkan
kerugian ekonomi pada industri unggas di banyak negara di Asia
Tenggara, Timur Tengah, Eropa, Afrika, dan Amerika (15–17)
(Gambar 1).
Biologi struktural NDV
NDV adalah virus RNA beruntai tunggal yang tidak tersegmentasi,
negatif-sense, dalam keluarga Paramyxoviridae yang terdiri dari
rangkaian terminal pemimpin (55 nukleotida) dan trailer (114
nukleotida) yang dipisahkan, dengan genom panjang penuh 15192,
15198, atau 15186 hal (18, 19). Dalam hal ultrastruktur, partikel NDV
berdiameter 100 hingga 250 nm dengan bentuk bola (paling umum)
Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan
10.3389/fvets.2022.936251
dan bentuk berserabut. Inti partikel virus NDV terdiri dari nukleokapsid
simetris heliks, dikelilingi oleh selubung, dan permukaan vesikel
ditutupi dengan fibril sepanjang 8 nm. NDV mengandung enam
protein struktural dan dua protein non-struktural dengan urutan
nukleoprotein (NP), fosfoprotein (P), protein matriks (M), protein fusi
(F), protein hemagglutinin neuraminidase (HN), dan protein besar (L)
( 20, 21) (Gambar 2).
Protein NP adalah protein struktural utama dari protein
nukleokapsid NDV, dan juga merupakan protein paling melimpah
yang terdapat dalam partikel virus (22). Protein NP membentuk
kompleks nukleokapsid heliks di sekitar RNA genom virus, yang
melindungi RNA genom virus dari degradasi RNase dan penting
untuk pengemasan genom menjadi partikel virus dewasa. Protein
NM2-1 adalah faktor anti-terminasi transkripsional, yang bergabung
dengan protein NP, protein P, protein L, dan RNA genom virus untuk
membentuk kompleks RNP sebagai cetakan untuk replikasi dan
transkripsi RNA (23) .
Protein P dan L membentuk kompleks PL dan memainkan peran
penting dalam replikasi dan transkripsi NDV. Kompleks PL mereplikasi
genom dan mensintesis RNA antigenomik untai plus panjang penuh,
yang berfungsi sebagai cetakan untuk RNA genom untai minus (23).
Protein P membantu menstabilkan protein L di kompleks PL dan
bertindak sebagai RNA polimerase yang bergantung pada RNA
(vRdRp) (24, 25). Protein N membungkus RNA virus membentuk
cetakan N-RNA sebagai inti nukleokapsid (NC), RNA polimerase
tersusun atas protein L dan protein kofaktor P digabungkan dengan
mencegah enkapsidasi acak RNA non-virus oleh protein N (26).
Selain itu, selama tahap perakitan rantai replikasi genom yang baru
lahir, protein P membentuk kompleks dengan protein N yang belum
dirangkai yang mengatur peralihan dari transkripsi ke replikasi. Gen
P mengkodekan dua protein non-struktural lainnya (V dan W). Protein
V, atau dikenal sebagai protein antagonis, memediasi keluarnya IFN
virus untuk menghindari respon imun bawaan inang (27, 28).
Mekanisme protein W harus diselidiki di masa depan.
Protein M adalah protein struktural terkait membran non-
glikosilasi, yang terletak di permukaan bagian dalam amplop NDV. Ia
berasosiasi dengan domain sitoplasma protein F dan merupakan
jembatan antara selubung virus dan nukleokapsid (29). Protein M
terbukti merupakan protein bolak-balik nukleositoplasma dengan
urutan lokalisasi nuklirnya dan oleh karena itu tidak memerlukan
protein NDV lain untuk melakukan fungsi lokalisasi nuklir (30).
Protein M mengalami bolak-balik nuklir-sitoplasma melalui sinyal
lokalisasi nuklirnya selama fase awal infeksi virus, dan protein M ini
ada di mana-mana pada urutan lokalisasi nuklirnya. Lokalisasi inti
protein M mempunyai fungsi menghambat gen inang
02 frontiersin.org
Machine Translated by Google
Mao dkk.
GAMBAR 1
Prevalensi OIE pada NDV dalam 5 tahun terakhir.
transkripsi dan sintesis protein serta memastikan replikasi dan
transkripsi genom virus dalam sitoplasma berlangsung (31).
Namun, fungsi lokalisasi inti protein NDV M belum sepenuhnya
dipahami.
Protein F mempunyai arti penting sebagai protein membran
integral tipe-I dan merupakan penentu utama virulensi NDV.
Dalam sel yang terinfeksi, NDV-F disintesis sebagai prekursor
F0 tanpa aktivitas fusi, dan kemudian diaktifkan melalui
pembelahan oleh protease inang dari Fc menjadi dua subunit
terkait disulfida F1-F2, yang penting agar virus keturunan
menjadi infektif. (32). Penelitian sebelumnya telah menunjukkan
bahwa komposisi asam amino pada tempat pembelahan
protein F merupakan penentu utama tropisme dan virulensi
jaringan NDV. Strain NDV yang virulen mengandung beberapa
tempat pembelahan protein asam amino F, yang dipecah oleh
protease yang banyak terdapat dalam sel dan jaringan inang,
yang pada akhirnya mempunyai konsekuensi seperti nekrosis
jaringan dan penyebaran virus (33, 34) . Sebaliknya, tempat
pembelahan protein F dengan virulensi rendah atau patotipe
avirulen, strain NDV biasanya merupakan residu asam amino
monobasa atau dibasa, yang dibelah oleh enzim mirip trypsin
yang hanya ada di saluran pernapasan dan usus. Protein F dari jaringan atau
Protein HN terletak di permukaan selubung virus dan
memiliki kandungan yang melimpah sehingga mempengaruhi
patogenisitas, replikasi, dan karakteristik biologis virus. HN
adalah molekul multifungsi yang mengenali reseptor yang
mengandung asam sialat seluler dan memiliki neuraminidase (NA)
Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan
10.3389/fvets.2022.936251
aktivitas untuk menghidrolisis molekul asam sialat dari partikel
virus keturunan, mencegah agregasi virus, dan berinteraksi
dengan F untuk meningkatkan fusi dan fungsi lainnya (36, 37).
HN hadir sebagai homotetramer dengan dimer terkait disulfida di dalam virus
sel yang terinfeksi, yang meliputi daerah tangkai dan domain
kepala globular besar (38). Daerah kepala globular dari protein
HN dianggap sebagai tempat pengikatan antibodi, dan residu
asam amino utama yang berikatan dengan reseptor asam
sialat dan aktivitas NA terletak di kepala globular ( 39, 40).
Deng dkk. menyarankan bahwa domain tangkai protein HN
memberikan spesifisitas untuk fusi, memediasi interaksi HN
dengan protein F homolog, dan fusi lebih lanjut dengan
membran spesifik virus, dan mempengaruhi aktivitas fusogeniknya (41) .
Protein L, yang mengandung semua aktivitas katalitik yang
terkait dengan polimerase virus, merupakan protein terbesar
dalam genom NDV dan gen terakhir yang ditranskripsi selama
siklus replikasi virus. Adanya dua bentuk protein L isolat NDV
akibat mutasi kompensasi pada domain mutasi V. Protein L
polimerase virus RNA untai negatif tidak tersegmentasi
merupakan protein multifungsi yang memiliki semua aktivitas
yang diperlukan untuk mengkatalisis replikasi genom dan
pasca sel lain tidak
-modifikasi sensitif terhadap
transkripsional mRNA protease
(42, 43).intraseluler
Dua motif dan tidak dipecah
metiltransferase (motif GGD dan KDKE) ditemukan di wilayah
CR protein L virus NDV. Mereka mengkatalisis metilasi posisi
GN-7 dari struktur tutup mRNA, yang diperlukan untuk translasi
mRNA yang efisien (42, 44). Protein L memodulasi virulensi
03 frontiersin.org
Machine Translated by Google
Mao dkk.
GAMBAR 2
(A) Diagram skema genom NDV; (B) Diagram skema struktur NDV.
NDV, dan perannya dalam virulensi virus dapat dicapai dengan
meningkatkan laju sintesis RNA virus selama replikasi.
Mekanisme infeksi
Seluruh proses infeksi NDV pada sel inang mulai dari
menyelesaikan replikasinya hingga menghasilkan virus keturunan
yang menular bergantung pada protein struktural utama untuk
menyelesaikannya. Infektivitas NDV bergantung pada pembelahan
prekursor protein F F0 menjadi subunit F1–F2. Oleh karena itu,
urutan asam amino tempat pembelahan protein F dianggap sebagai
penentu utama infeksi. Protein HN berhubungan dengan perlekatan
virus dan masuk ke dalam sel inang. Tahap perlekatan sel yang
terinfeksi NDV adalah melalui kombinasi glikoprotein HN pada
permukaan virus dan reseptor yang mengandung asam sialat pada
permukaan sel inang untuk menginfeksi sel epitel pernapasan, yang
merupakan tahap awal infeksi NDV (45) . Kemudian, protein F pada
selubung virus bertanggung jawab atas fusi selubung virus
Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan
10.3389/fvets.2022.936251
dan membran plasma sel untuk memungkinkan masuknya
nukleokapsid ke dalam sitoplasma sel. Selain itu, infeksi juga terjadi
melalui endositosis yang dimediasi reseptor dan terkadang melalui
endositosis yang bergantung pada guaola. Secara bersamaan, RNA
virus dienkapsulasi oleh protein NP untuk membentuk cetakan N-
RNA, yang dimediasi oleh protein P dan dikatalisis oleh protein L
untuk membentuk kompleks RNP aktif untuk memasuki sitoplasma.
Setelah masuk ke sitoplasma sel inang, protein M dipisahkan dari
kompleks polimerase untuk mentranskripsi genom virus. Genom
RNA indera negatif ditranskripsi menjadi mRNA indra positif, yang
kemudian diterjemahkan menjadi protein virus (46). Protein M
diperlukan untuk perakitan partikel virus dan proses pertunasan
keturunan (47, 48). Terakhir, protein HN mendorong pelepasan virus
dari sel dan menghilangkan molekul asam sialat
virion keturunan untuk mencegah agregasi diri selama tunas (34)
(Gambar 3).
Tahap penempelan sel yang terinfeksi NDV adalah melalui
kombinasi glikoprotein HN pada permukaan virus
04 frontiersin.org
Machine Translated by Google

Mao dkk. 10.3389/fvets.2022.936251

GAMBAR 3

Representasi skema replikasi virus penyakit Newcastle.

dan reseptor yang mengandung asam sialat pada permukaan genom ditranskripsi menjadi mRNA positif, yang kemudian
sel inang untuk menginfeksi sel epitel pernapasan. diterjemahkan menjadi protein virus. Terakhir, protein HN
Kemudian, protein F pada selubung virus bertanggung mendorong pelepasan virus dari sel dan menghilangkan sialic
jawab atas fusi selubung virus dan membran plasma seluler molekul asam dari virion keturunan untuk mencegah
agregasi
sehingga memungkinkan masuknya nukleokapsid ke dalam sitoplasma sel. diri
RNA selama
inderatunas.
negatif

Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan 05 frontiersin.org

Machine Translated by Google
Mao dkk.
Isolasi virus
Isolasi virus telah menjadi strategi standar dibandingkan
dengan strategi lainnya, yang penting untuk prediksi dan
pengendalian epidemi, serta untuk pengembangan vaksin dan
obat antiviral. Strategi isolasi virus telah dilakukan secara luas
dan hampir secara universal sejak awal tahun 1960an dan
selalu dianggap sebagai “standar emas” untuk mendeteksi
virus (49). Isolasi NDV dapat dilakukan melalui inokulasi pada
embrio ayam spesifik bebas patogen (SPF), fibroblas embrio
ayam (CEFs), sel ginjal embrio ayam (CEKs), garis sel Hela,
dan garis sel Vero, yang diantaranya adalah CEF. lebih sering
digunakan. Sekresi pernapasan pada tahap awal infeksi
dikumpulkan secara aseptik sebelum kematian, dan jaringan
limpa, otak, dan paru-paru dikumpulkan secara aseptik setelah
pemusnahan hewan untuk menyiapkan bahan inokulasi steril.
Bahan yang sakit dibuat menjadi emulsi dengan garam
fisiologis atau larutan buffer fosfat (PBS) yang ditambahkan
antibiotik dan endapannya disentrifugasi untuk mendapatkan
bahan inokulasi.
Pada saat yang sama, ambil sedikit inokulum dalam tabung
kaldu, agar darah miring, dan sup hati anaerobik untuk
pemeriksaan sterilitas, lalu kultur dan amati pada suhu 37ÿC
selama 2–6 hari. Jika tidak ada pertumbuhan bakteri,
inokulasikan embrio atau sel ayam. Metode 1: rongga alantois
embrio ayam SPF umur 9ÿ11 hari diinokulasi dengan bahan
steril dan diinkubasi selama 5 hari untuk kultur virus. Cairan
alantois embrio ayam dikumpulkan secara aseptik dari embrio
yang mati lebih dari 24 jam pasca inokulasi untuk identifikasi
virus. Metode 2: CEF (atau sel Hela, sel Vero) diinokulasi
dengan bahan steril dan dikultur dalam inkubator 36ÿC . Kalau
efek sitopatik (CPE), terutama berbentuk bulat, menyatu. dan
sel raksasa bergranulasi dengan cepat terlepas dari lapisan
tunggal, diamati dengan mikroskop elektron dalam waktu 24
hingga 48 jam setelah inokulasi, kemudian mengumpulkan
getah sel untuk identifikasi virus. Namun dalam praktiknya,
isolasi virus membutuhkan banyak tenaga dan waktu,
sehingga kurang cocok untuk menguji sampel dalam jumlah besar yang diperoleh
Tes serologis
Tubuh menghasilkan respons imun untuk menghasilkan
antibodi spesifik yang sesuai untuk pertahanan ketika NDV
menginfeksi tubuh. Sel B (sumsum tulang, limpa, dan kelenjar
getah bening) di jaringan limfoid tubuh dirangsang oleh zat
antigenik untuk berkembang biak dan berubah menjadi sel
plasma, yang pada gilirannya menghasilkan imunoglobulin
yang berikatan dengan antigen serumpun (50) . Tes serologis
berdasarkan interaksi antara antigen dan antibodi merupakan
strategi penting untuk mendeteksi NDV dan biasanya
digunakan sebagai tes lini pertama. Oleh karena itu, terdapat
kebutuhan mendesak akan metode pengujian serologis yang sangatdengan
spesifikpembawa fase
Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan
10.3389/fvets.2022.936251
dalam pengaturan klinis di daerah endemik. Saat ini, sejumlah
besar uji serologis telah dikembangkan untuk mendeteksi
NDV, dan beberapa strategi yang umum digunakan telah
disajikan, seperti uji hemaglutinasi dan hemaglutinasi-inhibisi
(HA-HI), uji imunosorben terkait enzim (ELISA), uji antibodi
penawar. (NT), Uji Imunofluoresensi (IFA) dan Teknik Emas
Koloid Imun (GICT).
Tes hemaglutinasi
dan penghambatan hemaglutinasi
Permukaan selubung NDV menunjukkan aktivitas
hemagglutinin dan neuraminidase. Hemagglutinin akan
mengaglutinasi sel darah merah hewan yang berbeda secara
in vitro (terutama sel darah merah ayam), dan neuraminidase
memisahkan sel darah merah yang diaglutinasi untuk
melepaskan NDV. Menurut karakteristik biologis NDV, NDV
yang diisolasi diidentifikasi dengan tes HA-HI, dan titer
hemaglutinasi serta titer antibodi ibu ditentukan (51). Namun
ada patogen lain seperti AIV yang memiliki fungsi hemaglutinasi
sel darah merah ayam, sehingga tes HA saja tidak dapat
menegakkan diagnosis pasti. Peran NDV dalam mengaglutinasi
sel darah merah dihambat dengan mengikat antibodi spesifik.
Oleh karena itu, perlu digunakan antiserum yang dikenal
untuk tes HI guna mengidentifikasi dengan jelas virus yang baru diisolasi.
Metode HA-HI dapat digunakan untuk mengidentifikasi virus yang tidak diketahui
dengan menggunakan antibodi yang spesifisitasnya diketahui, dan juga dapat
digunakan untuk mengidentifikasi antibodi yang sesuai dalam serum dengan
menggunakan virus yang diketahui (Gambar 4).
Penilaian hasil uji HA: NDV terisolasi yang akan diuji
diencerkan secara bertahap dan kemudian ditambahkan ke
suspensi eritrosit ayam, dan kelompok kontrol negatif PBS
ditetapkan pada waktu yang sama. Hasilnya dinilai ketika
sumur tunggal PBS mengendap membentuk sebuah tombol.
Miringkan pelat reaksi dan amati apakah sel darah merah telah
menggumpal sempurna. Pengenceran maksimum cairan
alantoik dalam uji klinis.
yang menghasilkan aglutinasi sempurna suspensi sel
darah merah dicatat sebagai satuan HA (HAU) titer virus. Uji
HI dilakukan dengan serum standar positif untuk sampel uji
hemaglutinasi positif. Penilaian hasil tes HI: Antigen NDV
yang akan diuji ditambahkan ke serum DNV positif yang
diencerkan secara seri dan dicampur, kemudian ditambahkan
suspensi RBC. Hasilnya dinilai ketika sumur tunggal PBS
mengendap membentuk sebuah tombol. Miringkan pelat
reaksi, jika RBC terlihat mengalir ke bawah seperti tetesan air mata, menandak
Enzyme-linked Immunosorbent Assay
ELISA mengacu pada metode deteksi kualitatif dan
kuantitatif yang mengikat antigen atau antibodi terlarut
dan sensitif padat
untuk seperti polistiren
diagnosis NDV dan menggunakan bahan spesi
06 frontiersin.org
Machine Translated by Google

Mao dkk. 10.3389/fvets.2022.936251

GAMBAR 4

Diagram skema NDV HA-HI. (A) mekanisme hemaglutinasi NDV; (B) Mekanisme penghambatan hemaglutinasi NDV.

pengenalan dan efek pengikatan antigen dan antibodi untuk reporter (RANbody) telah dirancang dan diturunkan dari
melakukan reaksi imun. Teknik ELISA memiliki spesifisitas, nanobody untuk mengembangkan immunoassay diagnostik.
sensitivitas, dan kemampuan yang tinggi untuk mendeteksi Ji Pinpin dkk. menetapkan metode deteksi sandwich ELISA
secara langsung sampel biologis yang kompleks, teknik ini menggunakan fenobody sebagai antibodi penangkap dan
dianggap sebagai strategi yang efektif untuk mendeteksi antibodi RANbody sebagai antibodi pendeteksi. Metode ini menggunakan
spesifik dalam serum, dan telah banyak digunakan dalam NDV sebagai antigen untuk menyaring 13 nanobodi yang
mendeteksi NDV (52-56) . Di sini, dengan mengambil contoh berikatan khusus dengan partikel NDV dari unta Baktria yang
diimunisasi.
metode deteksi ELISA tidak langsung, sampel yang akan diuji ditambahkan Lima fase
ke pembawa fenobodi
padatdan RANbodi
yang yang berasal
telah melekatkan dari nanobodi dipilih dan
antigen.
Jika sampel serum yang akan diuji mengandung antibodi konsentrasi pasangan fenobody dan RANbodies yang optimal
terhadap NDV, antibodi tersebut akan diserap dari sampel serum, ditentukan. Sandwich ELISA ini digunakan untuk mendeteksi
yang secara spesifik akan berikatan dengan antigen pada 150 sampel klinis, yang dikumpulkan dari trakea, usapan kloaka,
pembawa padat untuk membentuk kompleks antigen-antibodi cairan alantois, serum ayam, media kultur sel, dan sampel
(57) . Kemudian antibodi sekunder (antibodi yang ditandai jaringan untuk menentukan nilai batasnya. Hasilnya menunjukkan
dengan enzim seperti horseradish peroxidase) dan substrat bahwa OD450mm dianggap 0,0895
ditambahkan untuk menghasilkan warna. Warna produk nilai cut-off ELISA, sampel dengan OD450 lebih tinggi dari 0,0895
berhubungan langsung dengan jumlah antibodi yang sesuai dianggap positif, sedangkan sebaliknya sampel negatif. Nilai
dalam sampel, yang dapat dianalisis secara kualitatif atau OD450nm berada di atas 0,0895 ketika titer HA NDV dalam cairan
kuantitatif sesuai dengan kedalaman reaksi warna (Gambar 5). alantois adalah 22
ELISA tradisional yang menggunakan antibodi poliklonal atau jumlah partikel NDV yang dimurnikan adalah 10 ng. Ini
dan monoklonal sebagai reagen memiliki kelemahan yaitu jumlah menunjukkan persetujuan 98,7% dengan tes HA. Hasil spesifisitas
yang terbatas, kesulitan dalam penyimpanan permanen, dan menunjukkan nilai OD450nm virus unggas lainnya, H9N2, H5N1,
kebutuhan untuk menggunakan antibodi sekunder (58). Badan H7N9, IBV, IBDV, FADV, dan ALV J semuanya kurang dari 0,058.
nano digabungkan dengan banyak tag dalam struktur tersiernya Selain itu, metode ini dapat mendeteksi strain kelas II yang
melalui teknologi rekombinan dan diekspresikan dengan sistem berbeda (LaSota, F48E9, dan sx10), namun tidak dapat
mendeteksi
ekspresi berbeda, sehingga memberikan metode deteksi yang efektif untuk strain kelas I (QH-1), yang memiliki spesifisitas yang
tujuan diagnostik.
Nanobody yang menyatu dengan feritin (fenobody) dan nanobody yang menyatu baik (59 ).

Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan 07 frontiersin.org

Machine Translated by Google
Mao dkk.
GAMBAR 5
Diagram skema NDV ELISA. (A) ELISA langsung; (B) ELISA tidak langsung; (C) Sandwich ELISA; (D) ELISA Kompetitif.
Untuk mendeteksi antibodi NDV dalam serum ayam dengan lebih
akurat dan spesifik, Sun membuat metode deteksi ELISA kompetitif
(cELISA) menggunakan protein fusi nanobody-horseradish peroxidase
(HRP) sebagai probe. Pertama, protein NDV-NP diinduksi untuk
diekspresikan dan dimurnikan, dan kemudian 9 nanoantibodi protein
anti-NDV-NP disaring dari unta Baktria yang kebal. Saring nanobody
terbaik untuk mengembangkan cELISA. Pada analisis sampel serum
klinis dengan cELISA, sensitivitas dan spesifisitas metode ini adalah
100 dan 98,6%. Setelah itu dilakukan uji antibodi anti-NDV sebanyak
368 serum ayam klinis dan 108 kuning telur secara terpisah dengan
uji HI, kit ELISA komersial, dan cELISA. Konsistensi uji HI, kit ELISA
komersial, dan cELISA adalah 97,83 dan 98,1% saat pengujian serum
ayam klinis dan keduanya setuju 100% saat pengujian kuning telur,
yang mana sangat konsisten. Namun, cELISA menunjukkan
sensitivitas yang lebih tinggi ketika mendeteksi antibodi anti-NDV
dalam serum berurutan dari ayam uji coba. Selain itu, korelasi erat
ditemukan antara nilai persen penghambatan kompetitif cELISA dan
titer HI (R2 = 0,914) (60).
Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan
10.3389/fvets.2022.936251
A Ahmed telah menetapkan V-ELISA dan P-ELISA untuk mendeteksi
antibodi terhadap wilayah terminal-C dari protein non struktural V
NDV dan protein struktural P (61). DD Oliveira telah mengembangkan
ELISA tidak langsung untuk mendeteksi IgG puyuh Jepang spesifik
NDV (62). Selain itu, Xue Songguo dan Zhang Anding masing-masing
menetapkan metode ELISA untuk mendeteksi NDV. Metode tes ELISA
mudah dioperasikan dan hasil tes diperoleh dalam waktu singkat.
Namun, kit ELISA komersial dengan efek deteksi stabil lebih mahal,
sehingga menyebabkan biaya deteksi lebih tinggi. Oleh karena itu,
pengembangan kit ELISA baru diperlukan untuk mengurangi biaya.
Tes netralisasi
Uji HI dan ELISA digunakan untuk mengukur perlindungan dan
respon imun terhadap NDV namun tidak menguatkan keberadaan
antibodi penetralisir (nAb). Uji netralisasi (NT) mengacu pada
hilangnya patogenisitas pada hewan yang rentan setelah virus atau
toksin digabungkan dengan
08 frontiersin.org
Machine Translated by Google
Mao dkk.
antibodi yang sesuai. NT terutama memiliki tes kualitatif sederhana,
metode pengenceran virus serum tetap, serum pengenceran virus tetap
metode, dan metode pengurangan plak virus. Metode NT juga dapat
digunakan untuk mengidentifikasi virus yang tidak diketahui dengan
menggunakan serum anti-NDV yang diketahui spesifisitasnya; namun,
paling sering, tes ini diterapkan untuk mendeteksi apakah serum mengandung antibodi spesifik.
Chumbe dkk. (63) mengembangkan uji netralisasi berbasis eGFP
(eGFP-NT), di mana titer nAbs dinyatakan sebagai kebalikan dari
pengenceran tertinggi yang menyatakan eGFP.
Dalam metode ini, gen reporter GFP disisipkan berdasarkan NT
konvensional, dan reporter rLS1-1eGFP NDV dibuat dan diidentifikasi.
Dibandingkan dengan NT konvensional, eGFP-NT mempersingkat
waktu penyelesaian dan memberikan hasil yang meyakinkan dalam
waktu 24 jam tanpa menggunakan prosedur pewarnaan tambahan apa
pun. Metode ini mengevaluasi pengaruh virus rLS1-1eGFP dalam
mengukur titer nAb dengan menguji 57 sampel serum, dan hasilnya
berkorelasi signifikan dengan NT konvensional.
Semua sampel serum diinaktivasi dengan panas (56 ÿC selama 30
menit) dan disimpan pada suhu ÿ20 ÿC. 57 serum ayam diuji anti
Antibodi NDV secara terpisah dengan metode HI, kit ELISA komersial,
NT konvensional, dan eGFP-NT untuk mendeteksi antibodi anti-NDV.
Hasilnya menunjukkan bahwa NT konvensional mempunyai
korelasi yang signifikan dengan HI (R = 0,816) dan ELISA (R = 0,791).
Namun, eGFP-NT menunjukkan korelasi yang lebih tinggi (R = 0,994)
dan merupakan metode yang lebih akurat untuk mengukur nAbs (63)
(Gambar 6A). Bin Wang dkk. menetapkan uji netralisasi baru untuk
mengevaluasi antibodi penetralisir terhadap NDV dengan virus HIV-
Luc pseudotipe NDV. Dalam tes netralisasi laporan Luc baru ini,
pengukuran aktivitas luciferase setelah infeksi pseudovirus dan uji
TCID50 biasanya digunakan untuk mentitrasi virus HIV-Luc pseudotipe
NDV. Pertama, membuat dan mengekspresikan mutan NDV tipe liar
dan HN/F dalam sel 293T untuk menghasilkan partikel virus HIV-Luc
pseudotipe NDV. Ditemukan bahwa efisiensi infeksi virus HIV-Luc
pseudotipe NDV 34 kali lebih rendah dibandingkan dengan virus HIV-
Luc pseudotipe VSV-G. Domain sitoplasma HN mungkin menjadi
alasan utama rendahnya efisiensi infeksi. Untuk menentukan apakah
virus HIV-Luc pseudotipe NDV dapat digunakan untuk mengukur
antibodi penawar terhadap NDV. Dalam percobaan ini, tiga serum imun
NDV diencerkan secara seri 2 kali lipat dan diinkubasi dengan virus
HIV-Luc pseudotipe DNV (100 TCID50) dengan volume yang sama
selama 1 jam pada suhu kamar.
Analisis luciferase menunjukkan bahwa sistem virus HIV-Luc
pseudotipe NDV berhasil digunakan untuk mendeteksi antibodi
penetral NDV. Titer NT dari 16 serum imun NDV terhadap NDV berhasil
dideteksi dengan uji netralisasi dengan uji netralisasi HIV-Luc
pseudotipe NDV dan uji VN konvensional. Selain itu, titer NT yang
ditentukan dengan metode ini adalah 2–5 kali lebih tinggi dibandingkan
yang ditentukan dengan uji VN konvensional (64) (Gambar 6B).
Keunggulan NT adalah sensitivitas dan spesifisitasnya yang tinggi,
adanya antibodi penetralisir dalam tubuh dalam waktu yang lama, dan
antibodi penetralisir sebagian besar virus bersifat langsung.
Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan
10.3389/fvets.2022.936251
berhubungan dengan imunitas. Kekurangan NT adalah menggunakan
sistem live host, dan virus membutuhkan waktu tertentu untuk bekerja
pada sistem host, sehingga hasilnya lambat.
Uji imunofluoresensi
IFA sebagai alat konfirmasi merupakan indikator lain untuk
mendeteksi NDV, karena ketidakpastian hasil ELISA (Termasuk hasil
negatif palsu dan positif palsu). Metode IFA menggunakan antibodi
sekunder berlabel fluorescein seperti isothiocyanate (FITC) sebagai
probe fluoresen dan kemudian mengamati fluoresensi dengan
mikroskop fluoresen untuk menganalisis antigen atau antibodi yang
sesuai. Sejak tahun 1961, IFA telah digunakan untuk diagnosis cepat
influenza manusia. Dibandingkan dengan teknik pelabelan enzim
lainnya, antigen yang melekat pada IFA lebih terjaga, dan lebih baik
menghindari kontaminasi antigen dalam darah dan menghindari
campur tangan antibiotik endogen. Selain itu, memiliki keunggulan
spesifisitas yang kuat, sensitivitas tinggi, dan kecepatan cepat. Namun
permasalahan pewarnaan IFA non-spesifik belum terselesaikan
sepenuhnya, objektivitas hasil kurang memadai, dan prosedur
teknisnya masih relatif rumit.
Skeleles menggunakan IFA untuk pengujian AIV untuk pertama
kalinya ketika flu burung merebak di Asia di Pennsylvania pada tahun
1984. Awalnya digunakan untuk identifikasi virus dan lokalisasi antigen
spesifik dalam sel yang terinfeksi virus, terutama fluoresensi
intranuklear. Penelitian telah menunjukkan bahwa CEFs, CEKs, Hela,
Vero, dan sel epitel amniotik manusia (hAEC) biasanya terinfeksi NDV
untuk deteksi IFA. Langkah pertama IFA adalah sel UMNSAH/DF-1
terinfeksi NDV dan difiksasi dengan aseton dingin. Kemudian, sel
yang terinfeksi diinkubasi dalam mAb yang diencerkan (ditempatkan
dalam kelompok kontrol negatif pada waktu yang sama), dan sel dicuci
3 kali dengan larutan buffer fosfat (PBS) setelah inkubasi selama
setengah jam pada suhu 37ÿC . Selanjutnya, sel diperlakukan pada
suhu 37ÿC menggunakan antibodi sekunder FITC yang diencerkan
selama 30 menit. Akhirnya, setelah dicuci dengan PBS sebanyak lima
kali, sel-sel positif terdeteksi oleh mikroskop fluoresensi (Gambar 7).
Sahib dkk. (65) menggunakan imunofluoresensi untuk menentukan
efek pemberian bersama intratumoral NDV onkolitik dan hialuronidase
bakteri pada model tumor. Hasil imunofluoresensi dari pengobatan
gabungan virus
dan bakteri hyaluronidase menunjukkan penurunan pertumbuhan
tumor primer yang diobati tanpa meningkatkan potensi metastasis dan
kelangsungan hidup yang lebih lama dari hewan yang mengandung
tumor (65). HN muncul ke permukaan pada Lactococcuslactis oleh
Baradaran dkk. (66) dan uji imunofluoresensi menunjukkan pengikatan
protein HN-AcmA rekombinan pada permukaan sel bakteri. Studi lebih
lanjut tentang kemampuan penargetan kankernya melalui hubungannya
dengan kanker payudara MDA-MB231 (66).
09 frontiersin.org
Machine Translated by Google
Mao dkk.
GAMBAR 6
Tes netralisasi. (A) Uji netralisasi berbasis eGFP (eGFP-NT) dikembangkan oleh Chumbe Ana; (B) Bin Wang membuat uji netralisasi
baru untuk mengevaluasi antibodi penetralisir terhadap NDV dengan virus HIV-Luc pseudotipe NDV.
GAMBAR 7
Ilustrasi skema imunofluoresensi tidak langsung NDV.
Teknik emas koloid imun
Teknik emas koloid imun adalah jenis teknologi pelabelan
imuno baru yang dikembangkan pada tahun 1980an mengikuti
tiga teknologi pelabelan utama yaitu teknik imunofluoresensi,
teknik pelacak isotop radiasi, dan pelabelan enzim (67).
Diantaranya, yang paling banyak digunakan adalah
imunokromatografi koloid emas. GICT telah menjadi salah satu
teknik deteksi imunologi yang paling banyak dikutip saat ini,
karena deteksi tunggal, sensitivitas khusus, tidak memerlukan
reagen dan instrumen tambahan, pengamatan visual terhadap
hasil, dan penyimpanan hasil dalam jangka panjang. Ini sangat
cocok untuk unit dasar, operasi lapangan, inspeksi waktu kritis,
dan survei umum area luas. Strip uji imunokromatografi dirangkai
dari atas ke bawah dengan bantalan sampel koloid,
Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan
10
10.3389/fvets.2022.936251
bantalan label emas, membran nitroselulosa, dan bantalan
penyerap (68). Bantalan berlabel emas adalah untuk memasang
antibodi atau antibodi berlabel emas koloid pada membran
selulosa kaca melalui pengering, dan secara khusus mengikat
antigen atau antibodi spesies pendeteksi. Membran nitroselulosa
adalah pembawa reaksi yang dilapisi sebelumnya dengan garis
deteksi dan kontrol dan digunakan untuk digabungkan dengan
penanda emas koloid untuk menghasilkan reaksi imun yang
menghasilkan pengembangan warna pada garis deteksi yang sesuai (Gambar 8)
Li dkk. (69) menggunakan HN mAb berlabel emas koloid
sebagai detektor dan mengembangkan strip imunokromatografi
untuk mendeteksi NDV. Dalam percobaan ini, HN mAb berlabel
emas koloid didistribusikan ke bantalan fiberglass untuk
menghasilkan bantalan konjugasi. Kemudian larutan pAb anti
NDV ayam dan protein stafilokokus A disebarkan pada
frontiersin.org
Machine Translated by Google
Mao dkk.
ANGKA 8
Diagram skema emas imunokoloidal. (A) Komponen emas imunokoloidal; (B) kontrol positif NDV; (C) Kontrol negatif.
membran nitroselulosa sebagai garis uji dan garis kontrol. Itu
hasil uji sensitivitas menunjukkan bahwa strip imunokromatografi
mendeteksi 104,9 EID50 virus/0,1 mL, dan uji HA klasik mendeteksi
105,2 EID50/0,1 mL, yang setara dengan ketidakpekaan. Strip
tersebut secara spesifik mengenali antigen NDV dan tidak memiliki
reaksi imun silang dengan bursal menular
vaksin virus penyakit (IBDV) (strain B87), vaksin virus penyakit
Marek (MDV) (strain Fc-126), vaksin virus Laryngotracheitis (ILTV)
(strain K317), vaksin virus bronkitis menular (IBV) (strain W93),
vaksin Egg- virus drop syndrome (EDSV-76; strain A V-127) dan
virus avian influenza A (AIV). Selain itu, metode ini juga secara
spesifik mengenali strain NDV yang virulen dan dilemahkan (69).
F.Yang dkk. mengembangkan uji imunokromatografi emas inovatif
dengan imunosensor kuantitatif, yang memiliki sistem dua reaksi
dan jalur uji ganda. Dalam percobaan ini, kurva standar dibuat
untuk mengukur DNV berdasarkan kepadatan optik sampel
referensi yang akan diukur, dan konsentrasi antibodi linier dalam
kisaran titer 22-29. Strip tes dan metode HI digunakan untuk
mendeteksi NDV dalam serum 506
sampel yang dikumpulkan dari ayam. Hasil strip uji sebanyak 468
sampel uji konsisten dengan metode HI dan tingkat kebetulan
sebesar 92,49%. Koloid imun
strip tes emas tidak memiliki reaksi imun silang dengan AIV, EDS,
IB, dan IBD yang menunjukkan bahwa strip tes tersebut memiliki
spesifisitas tinggi dan secara spesifik dapat mendeteksi antibodi
NDV. Metode ini mengatasi keterbatasan koloid emas yang ada
Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan
10.3389/fvets.2022.936251
metode imunokromatografi hanya digunakan untuk tujuan
kualitatif atau semi-kuantitatif (70). Teknologi GICT mudah
dioperasikan dan tidak memerlukan instrumen lain. Hasil tersedia
dalam hitungan menit dan dapat diuji kapan saja, di mana saja.
Ini telah menjadi salah satu teknologi deteksi yang paling banyak digunakan.
Tes molekuler
Reaksi silang antara NDV dan beberapa unggas
paramyxovirus menyebabkan ketidakpastian dalam pengujian
serologis ND. Pengujian serologis tradisional memiliki hambatan
yang tidak dapat diatasi dalam pengetikan. Oleh karena itu,
masyarakat berharap dapat menetapkan standar pada tingkat
molekuler untuk menganalisis perbedaan antara berbagai jenis
NDV. Uji molekuler berperan penting dalam mengidentifikasi NDV
dengan cepat dan membedakannya dari patogen lain yang
berkerabat dekat. Dalam ulasan ini, kami memperkenalkan metode
reaksi berantai transkripsi polimerase terbalik (RT-PCR), RT-PCR
kuantitatif waktu nyata (qRT-PCR), dan metode diagnostik amplifikasi isotermal ya
Membalikkan reaksi berantai transkripsi
polimerase
RT-PCR dengan sensitivitas tinggi dan selektivitas tinggi
dianggap sebagai standar emas untuk amplifikasi molekuler dan
11 frontiersin.org
Machine Translated by Google
Mao dkk.
pengujian virus. Teknologi RT-PCR merupakan metode amplifikasi
fragmen RNA secara selektif secara in vitro. Pertama, balikkan
transkripsi asam nukleat virus RNA untuk mensintesis cDNA, lalu
lakukan amplifikasi PCR. RT-PCR mempunyai keunggulan
spesifisitas, kecepatan, sensitivitas, dan kesederhanaan.
Jestin dkk. (71) berhasil mengembangkan metode RT-PCR
untuk mengidentifikasi NDV untuk pertama kalinya. Urutan yang
dipilih untuk amplifikasi terdiri dari 238 bp yang terletak pada gen
yang mengkode protein fusi F. Hasil penelitian menunjukkan bahwa
strain 27/30 A-PMV1 memperoleh sinyal positif sebesar 275 bp.
Tiga strain lainnya menunjukkan fragmen yang lebih kecil dari yang
diharapkan, sekitar 230–250 bp, mungkin karena hilangnya situs NarI.
Pada saat yang sama, paramyxovirus unggas lainnya yang diuji
tidak memberikan sinyal (71). Li dkk. (72) merancang primer yang
mengalami degenerasi untuk amplifikasi RT-PCR pada daerah
fungsional utama gen protein fusi NDV pada usapan sampel udara
berdasarkan primer yang dipublikasikan. Sampel udara dikumpulkan
dengan pelampiasan cairan melalui sampler AGI-30 yang beroperasi
di tengah dan empat sudut setiap rumah. Tiga sampel berturut-
turut diambil pada titik pengambilan sampel yang sama di setiap
rumah. Virus avirulen terdeteksi baik pada sampel udara maupun
sampel usap dari empat rumah dan virus virulen hanya terdeteksi
pada sampel udara dari dua ruangan dengan RT-PCR berdasarkan
primer yang mengalami degenerasi. Teknik ini dapat mengurangi
Wang NDV
waktu yang dibutuhkan untuk mengidentifikasi kelompok ternak yang terinfeksi telahsekaligus
Desingu PA telah mengembangkan teknologi RT-PCR sensitif
berbasis HAd yang memanfaatkan karakteristik hemosorpsi NDV.
Sel darah merah ayam (RBC) ditambahkan ke supernatan sampel
klinis seperti cairan alantoik, tritium jaringan, kloaka, dan usap
trakea yang terinfeksi NDV untuk menyerap virus pada
permukaan sel darah merah. Sel darah merah yang menyerap virus
terdeteksi oleh RT-PCR. Metode ini menunjukkan sensitivitas 100
kali lebih tinggi dibandingkan ekstraksi RNA tradisional dan sistem
deteksi RT-PCR dan dapat dimanfaatkan dalam kasus sampel klinis
dengan beban NDV rendah (73). Yi dkk. (74) merancang sepasang
primer yang sangat homolog dengan tiga patotipe NDV berdasarkan
urutan gen protein nukleokapsid (NP) bersama dan menetapkan uji
RT-PCR yang digabungkan dengan adsorpsi sel darah merah.
Metode ini digunakan untuk mendeteksi sampel tinja, hati, ginjal,
dan paru-paru, dan hasilnya menunjukkan batas deteksi NDV
berada pada kisaran 107 kali lipat sampel encer (100 EID50). Metode
ini memiliki sensitivitas yang lebih tinggi dan cocok untuk
mendeteksi NDV pada berbagai jenis sampel (74).
QRT-PCR waktu nyata
Penemuan teknologi qRT-PCR real-time mewakili lompatan
revolusioner dalam bidang analisis DNA.
Fitur utama dari teknik qRT-PCR real-time adalah kemampuan untuk
memantau kapan proses amplifikasi DNA terjadi, dan terakhir,
menggunakan kurva standar untuk menganalisis secara kuantitatif
templat yang tidak diketahui. Dibandingkan dengan RT-PCR konvensional,positif terdeteksi oleh qRT-PCR real-time pada perangkat portabel
Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan
10.3389/fvets.2022.936251
qRT-PCR real-time memiliki beberapa keunggulan seperti kecepatan,
sensitivitas tinggi, positif palsu rendah, dan kemungkinan analisis
kuantitatif. Dalam qRT-PCR real-time, RNA DNV perlu diekstraksi
dari sampel yang terinfeksi dan kemudian ditambahkan ke
campuran reaksi untuk amplifikasi. Campuran reaksi mencakup
faktor-faktor penting seperti pewarna fluoresen, transkriptase balik,
DNA polimerase, dNTP, dan primer spesifik.
Saat gen target diperkuat, fluoresensi dalam sampel meningkat
seiring dengan bertambahnya jumlah produk. Nilai Ct didefinisikan
sebagai nomor siklus PCR dan berbanding terbalik dengan jumlah
awal cDNA target. QRT PCR waktu nyata dapat dibagi menjadi
TaqMan dan SYBR Green I berdasarkan analisis kimia yang
berbeda. SYBR Green I adalah pewarna yang mengikat semua
molekul DNA beruntai ganda tanpa memandang urutannya.
Fluoresensi meningkat secara signifikan ketika pewarna SYBR
Green I diinterkalasi menjadi dsDNA. Ini memiliki keunggulan biaya
rendah dan reagen eksperimental sederhana. Probe TaqMan
(pengikat alur kecil) menyediakan metode kimia homogen siap
pakai untuk mendeteksi polimorfisme nukleotida tunggal (SNP)
dengan spesifisitas tinggi. QRT-PCR real-time adalah alat yang
ampuh untuk mendeteksi dan mengukur ekspresi gen karena
sensitivitas, spesifisitas, reproduktifitas, dan kemampuan analisis
kuantitatifnya yang tinggi (Gambar 9).
Untuk mendiagnosis ND secara sederhana dan cepat, Wenjing
menetapkan dua metode
membedakan deteksi
antara berdasarkan
virus kebalikannya
virulen dan avirulen (72).
teknologi amplifikasi berbantuan rekombinase transkripsi (RT-
RAA). Salah satu metode pendeteksiannya adalah transkripsi balik
berbasis fluoresensi waktu nyata yang menggunakan probe RT-
RAA dan exo untuk amplifikasi dengan bantuan rekombinase. Suhu
dan waktu reaksi metode ini dioptimalkan, dan spesifisitas serta
sensitivitasnya diuji. Metode ini tidak memiliki reaktivitas silang
terhadap asam nukleat patogen unggas lainnya dan tidak
memerlukan transkripsi balik RNA.
Percobaan diselesaikan dengan metode satu langkah, yang dapat
menyelesaikan reaksi dalam waktu 26 menit, dan 100 kali lebih
sensitif dibandingkan metode PCR konvensional (75). QPCR triplex
real-time yang dikembangkan oleh Zhang et al. (76) cepat, spesifik,
dan sensitif, serta layak dan efektif untuk mendeteksi AIV, NDV,
dan DTMUV secara simultan pada bebek. Hasilnya menunjukkan
bahwa batas deteksi triple real-time PCR adalah 1 × 101 salinan/µL,
yang setidaknya 10 kali lebih sensitif dibandingkan metode PCR
konvensional. Selain itu, triple assay tidak akan bereaksi silang
dengan patogen bebek lainnya dan sangat spesifik. Dengan
menggunakan isolasi virus sebagai standar emas, nilai prediksi
positif diagnostik dan spesifisitas ketiga virus semuanya berada di
atas 85%, sedangkan sensitivitas diagnostik dan nilai prediksi
negatif keduanya 100% (76) . Liu dkk. (77) menerapkan metode qRT-
PCR untuk mendeteksi NDV secara cepat dan langsung di lahan
pertanian. Di kondisi lapangan, asam nukleat NDV diekstraksi
secara manual dengan peralatan minimal dan menggunakan
platform T-COR4 portabel untuk deteksi q-RTPCR. Empat puluh
dua sampel RNA NDV dikumpulkan dari peternakan, 15 sampel
12 frontiersin.org
Machine Translated by Google

Mao dkk. 10.3389/fvets.2022.936251

GAMBAR 9

Diagram skema qRT-PCR waktu nyata. (A) Uji NDV SYBR Hijau I. (B) uji NDV TaqMan.

Platform T-COR, dan mencapai kesepakatan sebesar 83% rangkaian probe primer ketiga ditujukan pada gen M dan
ketika persiapan RNA yang sama diuji dalam thermocycler digunakan untuk mendeteksi genotipe Amerika Utara sebelum
Rotor Gene di bawah pengaturan laboratorium (77). Bijaksana tahun 1960, yang mencakup strain vaksin umum di Amerika
dkk. (78) merancang tiga set primer dan probe untuk gen F Serikat, sehingga memungkinkan deteksi 102 salinan genom.
dan fragmen gen M NDV, dan qRT-PCR dikembangkan untuk Kedua uji gen M mendeteksi sekitar 101 50% dosis infeksi
mendeteksi NDV. Rangkaian pemeriksaan primer pertama telur (EID50), sedangkan uji gen F mendeteksi sekitar 103
dirancang untuk mendeteksi rangkaian dari wilayah gen M EID50. Pada saat yang sama, metode isolasi dan identifikasi
yang dilestarikan yang mengenali beragam isolat NDV, virus digunakan untuk mendeteksi, dan hasilnya menunjukkan
sehingga memungkinkan deteksi 103 salinan genom. Set bahwa diperoleh korelasi positif antara qRT-PCR dan isolasi
kedua ditargetkan untuk mengurutkan gen F yang mengkode virus untuk NDV dari sampel klinis (78). Zeynalova dkk. (79)
lokasi pembelahan dan membedakan isolat NDV yang berpotensi mematikan,
memantausehingga memungkinkan
Avian Influenza (AI) dan deteksi 104 salinan
NDV di Wilayah genom.
Barda Itu
Azerbaijan

Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan 13 frontiersin.org

Machine Translated by Google

Mao dkk. 10.3389/fvets.2022.936251

menggunakan qRT-PCR real-time dan penghambatan hemaglutinasi. dipantau dengan elektroforesis. Berdasarkan wilayah yang
Sebanyak 1.030 usap dan 3.890 sampel darah dikumpulkan untuk dilestarikan dari genom IBV dan NDV, primer IBV terletak di wilayah
tes tersebut. Hasil qRT-PCR menunjukkan seluruh sampel usap 5'-UTR, dan primer NDV terletak di wilayah yang dilestarikan dari
negatif AI dan NDV. Seluruh sampel darah menunjukkan hasil gen LP. Keuntungan analisis LFD mRT-LAMP adalah garis uji
negatif terhadap H5 oleh HI, sementara 6,2% dari seluruh sampel diamati ketika templat target terkandung dalam campuran reaksi.
positif terhadap paparan NDV (79). Namun, pita tujuan khusus RT-PCR konvensional, RT-PCR
bersarang, dan qRT-PCR hanya tersedia jika diuji dengan templat
target NDV.
Amplifikasi isotermal yang dimediasi loop Uji sensitivitas menunjukkan batas deteksi terendah mRT-LAMP-
LFD adalah 100,8 salinan/reaksi RNA IBV dan 100,7 salinan/reaksi
LAMP melakukan amplifikasi asam nukleat dalam waktu RNA NDV. mRT-LAMP-LFD tidak memerlukan instrumentasi
singkat (biasanya dalam 1 jam) dalam kondisi isotermal, yang khusus, ini merupakan alat deteksi kualitatif yang menjanjikan dan
merupakan metode amplifikasi gen yang sederhana, cepat, akurat, cocok untuk beberapa daerah yang miskin sumber daya (82). Baru-
dan berbiaya rendah. Ini lebih sederhana dan nyaman daripada baru ini, Liang dkk. (4) mengembangkan uji amplifikasi isotermal
teknologi PCR dalam hal pengoperasian praktis dan persyaratan yang dimediasi loop TaqMan untuk deteksi cepat paramyxovirus
instrumen. Namun, LAMP tidak dapat digunakan untuk amplifikasi merpati tipe 1. Metode ini menargetkan sembilan wilayah berbeda
multipleks, dan lebih rendah daripada qPCR dalam hal sensitivitas dan kemampuan kuantitatif.
dari gen F dan merancang enam primer baru dan probe TaqMan.
Metode LAMP baru untuk deteksi cepat NDV dengan Ketika sensitivitas uji TaqMan-LAMP dibandingkan dengan RT-
menggunakan satu set primer spesifik yang menargetkan gen PCR konvensional, ditemukan bahwa batas deteksi adalah 10
protein fusi dibuat oleh Hang Minh Pham. Metode ini dengan cepat salinan µL-1 untuk cDNA PPMV 1 dan 0,1ng untuk RNA PPMV-1,
memperkuat gen target dalam waktu 2 jam, dan hanya memerlukan keduanya merupakan lebih sensitif dibandingkan PCR konvensional.
penangas air laboratorium konvensional atau blok panas untuk bereaksi. Selain itu, metode deteksi ini memberikan spesifisitas yang baik
38 strain DNV, virus lain yang berbeda, dan sampel klinis ayam untuk NDV tanpa adanya reaksi silang dengan virus lain. Untuk
yang terinfeksi secara eksperimental digunakan untuk deteksi mengevaluasi penerapan pengujian ini, 108 sampel klinis digunakan
genom guna menganalisis spesifisitas dan sensitivitas metode untuk membandingkan pengujian TaqMan-LAMP dan pengujian
LAMP. Hasil uji sensitivitas menunjukkan batas deteksi nested RT-PCR komersial, dan tingkat kesesuaian antara kedua metode
PCR atau LAMP adalah 0,5 pg atau 9 × 104 salinan reaksi yang tersebut ditemukan sebesar

ditentukan dengan menggunakan pengenceran plasmid secara 96,3% (4).

serial sebanyak 10 kali lipat. Hasil spesifisitas menunjukkan bahwa
seluruh 38 strain NDV memberikan reaksi positif, sedangkan tidak
ada pita DNA dari tiga serotipe APMV lainnya dan tiga virus lain Tes molekuler
yang terkait secara klinis (avian reovirus, virus cacar unggas, dan
virus penyakit Marek) yang diamati dengan kedua metode ( 80). Uji ligasi kedekatan, sebagai alat imunohistokimia homogen,
Berdasarkan metode LAMP yang dilaporkan sebelumnya untuk memungkinkan deteksi modifikasi protein, protein endogen, dan
mendeteksi NDV, Li dkk. (81) telah mengembangkan uji RT-LAMP interaksi protein dengan spesifisitas dan sensitivitas tinggi dengan
Satu Langkah untuk deteksi NDV yang sensitif dan spesifik. Metode menggunakan antibodi untuk mendeteksi dua target protein unik
ini memeriksa produk DNA dari reaksi RT-LAMP dengan (83) . Sepasang probe PLA (antibodi yang dilengkapi dengan untai
menambahkan ion magnesium atau SYBR Green I dan mewujudkan visualisasi
DNA) mengikat molekul protein target yang sama dan kemudian
hasil. Uji RT-LAMP yang ditingkatkan mendeteksi seluruh 21 isolat probe tersebut mendekat (84). Selanjutnya, ligase dan dua
NDV positif dan tidak memiliki reaksi silang dengan virus bronkitis oligonukleotida tambahan diperkenalkan.
(IBV), virus laringotrakeitis (ILV), dan virus avian influenza dengan Oligonukleotida ini berhibridisasi dengan probe PLA jika berada
patogenisitas rendah (LP-AIV). Sensitivitasnya 5 kali lipat lebih dalam jarak yang cukup dekat (ÿ30–40 nm) untuk membentuk
sensitif dibandingkan LAPM sebelumnya dan mencapai sensitivitas molekul pelapor DNA target yang unik (85). Yang terakhir adalah
96,8% dengan 62 sampel. Oleh karena itu, pengujian RT-LAMP penanda pengganti untuk protein spesifik yang akan dideteksi dan
yang lebih baik merupakan metode yang cepat, sederhana, dan mengandung kode batang molekuler tertentu. Probe gembok
hemat biaya serta praktis untuk laboratorium dengan peralatan melingkar diperkuat secara langsung melalui proses reaksi berantai
yang kurang lengkap dan di lapangan (81). Dengan menggabungkan polimerase (PCR) atau amplifikasi lingkaran bergulir (RCA), dengan
RT-LAMP yang dioptimalkan dan LFA, strategi transkripsi-LAMP- memanfaatkan teknik pemantauan amplifikasi PCR real-time
LFD ganda yang baru, mudah digunakan, dan sederhana SybrGreen untuk deteksi target (86) . Uji PLA telah digunakan
dikembangkan oleh kelompok Xuan Wu untuk alat deteksi yang untuk mendeteksi parvovirus babi dan virus penyakit mulut dan
sangat sensitif yang secara bersamaan dapat mendeteksi IBV dan kuku (87). Boutheina Marnissi mendeteksi NDV secara akurat
NDV secara visual. Bandingkan sensitivitas dan spesifisitas metode menggunakan uji ligasi aptamer DNA yang bergantung pada jarak.
ini dengan RT-PCR konvensional, RT-PCR bersarang (nRT-PCR), RT-PCR Untuk
kuantitatif (qRT-PCR),
menganalisis dan RT-LAMP
kinerja kedekatan yang dibantu aptamer

Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan 14 frontiersin.org

Machine Translated by Google
Mao dkk.
koneksi, reproduktifitas dan sensitivitas uji PLA fase homogen
dan padat dibandingkan dengan uji sandwich ELAA dan rRT-PCR.
Hasilnya menunjukkan
bahwa PLA fase padat dengan LOD 0,4 (EID50 mLÿ1 ) tiga kali
lebih sensitif dibandingkan sandwich ELAA (1,2 EID50 mLÿ1 ) dan
satu setengah kali lebih sensitif dibandingkan rRT-PCR (0,6 EID50
mLÿ1 ) dan PLA homogen (0,58 EID50 mLÿ1 ).
Selain itu, PLA fase padat menunjukkan rentang dinamis yang
lebih besar dengan nilai LOD yang lebih baik, batas bawah
kuantifikasi (LLOQ=0.1 EID50 mLÿ1 ), batas atas kuantifikasi
(ULOD ULOD=105 EID50 mLÿ1 ), dan dosis minimal yang terdeteksi
(MDD=0,1 EID50 mLÿ1 ), dibandingkan dengan pengujian lainnya.
Sandwich ELAA, PLA homogen, dan fase padat digunakan untuk
menganalisis 40 usapan hidung/kloaka yang dikumpulkan dari
peternakan, dan sensitivitas serta spesifisitas metode yang
dikembangkan dibandingkan dengan uji rRT-PCR standar emas.
Hasilnya menunjukkan keberhasilan deteksi 26
Sampel positif NDV dari 40 usap yang diuji, dan kesesuaian
dengan rRT PCR adalah 100%. PLA fase homogen dan padat
mengatasi keterbatasan kesulitan atau kurangnya sensitivitas
metode saat ini untuk mendeteksi genom atau protein virus yang
memiliki sensitivitas serupa atau lebih tinggi dibandingkan rRT-
PCR. PLA memiliki sensitivitas tinggi, efisiensi tinggi, dan
reproduktifitas. Alat-alat ini dapat diandalkan untuk mendeteksi
NDV dan mempunyai potensi untuk aplikasi multipleks untuk
mendeteksi berbagai virus unggas (88).
Imunosensor elektrokimia sandwich dirancang oleh Huang
Jiaoling dan membuat immunoassay elektrokimia untuk deteksi
NDV yang sangat sensitif. Metode ini didasarkan pada
nanokomposit nanopartikel emas-kitosan-grafena (AuNP-Chi-Gra)
sebagai platform dan mengadopsi Cu (I)/Cu (II)-kitosan-grafena
(Cu(I)/Cu (II)-Chi -Gra) nanokomposit sebagai label untuk
mendeteksi NDV. Graphene (Gra) memiliki luas permukaan yang
besar dan digunakan untuk konjugasi
dan imobilisasi monoklonal penyakit anti Newcastle
antibodi (MAb/NDV) dan antibodi poliklonal anti-virus
penyakit Newcastle (PAb/NDV), yang secara efektif
meningkatkan sinyal listrik. Cu (I)/Cu (II) digunakan
sebagai probe elektroaktif, diimobilisasi pada bahan
hibrida kitosan-grafit (Chi-Gra). Hal ini dideteksi dengan
voltametri pulsa diferensial (DPV) setelah respon imun
tipe sandwich. Sebanyak 120 sampel klinis diuji
menggunakan imunosensor dan diverifikasi melalui uji
isolasi virus. Hasil imunosensor menunjukkan 7 sampel
positif NDV sesuai dengan hasil isolasi virus dan garis
batas deteksi 100,68 EID50/0,1 mL. Uji imunosensor baru
memperkenalkan Gra berdasarkan PAb/NDV Cu(I)/Cu
(II)-Chi (102,09 EID50/0,1 mL), menunjukkan respons
linier dalam rentang yang lebih luas (100,13 hingga
105,13 EID50/mL), memiliki batas deteksi bawah (100,68 Menggunakan protein yang diekspresikan oleh gen yang dihapus
EID50/0,1 mL). PAb/NDV-Cu(I)/Cu (II)-Chi-Gra diperoleh sebagai antigen diagnostik dapat membedakan antibodi yang
melalui prosedur fabrikasi yang mudah, memiliki selektivitas, kemampuan
dihasilkan olehpengulangan,
Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan
10.3389/fvets.2022.936251
Kesimpulan dan prospek masa depan
Meskipun ND telah dikenal sejak tahun 1926, penyakit ini
masih endemik di banyak negara berkembang dan menyebar ke
berbagai jenis burung. Penyebaran NDV yang cepat dapat
disebabkan oleh saluran pernapasan, saluran pencernaan,
konjungtiva, luka pada kulit, dan mukosa kloaka. Disebabkan oleh
demam tinggi, sesak napas, diare, gangguan saraf, perdarahan
mukosa dan serosa sebagai gambaran utamanya. Oleh karena itu,
terdapat kebutuhan mendesak untuk mengembangkan strategi
deteksi cepat dan obat-obatan yang efektif untuk pencegahan
yang tepat dan pengendalian NDV yang efektif. Selain itu,
mekanisme molekuler interaksi patogen inang NDV masih memerlukan penelitian l
dan untuk mengembangkan strategi deteksi dan obat baru yang
efektif untuk mencegah dan mengendalikan infeksi NDV. Saat ini,
banyak strategi biologi serologis dan molekuler telah
dikembangkan untuk mendeteksi NDV. Namun, uji biologi
serologis dan molekuler memiliki beberapa keterbatasan. Untuk
pengujian serologis, reaktivitas silang antara NDV dan virus
APMV homolog lainnya merupakan masalah yang dapat memberikan hasil positif p
Untuk analisis molekuler, hilangnya situs tak terduga dapat
menyebabkan kegagalan amplifikasi. Oleh karena itu, pengujian
serologis dan pengujian molekuler perlu ditingkatkan lebih lanjut
dalam hal sensitivitas dan spesifisitas untuk meningkatkan stabilitas dan akurasi d
Selain itu, sebagian besar diagnostik molekuler dan serologis
dilakukan di laboratorium, memerlukan peralatan dan reagen
yang mahal, persyaratan perawatan khusus, dan pengujian oleh
personel terlatih. Peralatan dan keahlian tersebut mungkin tidak
tersedia di seluruh wilayah di dunia, terutama di wilayah yang
secara ekonomi terbelakang. Oleh karena itu, metode dan
perangkat diagnostik yang sederhana, terjangkau, andal, cepat,
dan masih perlu dikembangkan untuk mendeteksi infeksi NDV.
Sampai saat ini, beberapa metode penginderaan untuk mendeteksi NDV telah dikem
Sebelum menggunakan metode dan perangkat penginderaan ini
untuk diagnosis klinis NDV, kinerjanya harus dievaluasi dan
divalidasi lebih lanjut.
Dengan meluasnya penggunaan vaksin influenza, surveilans
terhadap NDV menjadi lebih sulit karena ketidakmampuan
membedakan hewan yang terinfeksi dan hewan yang divaksinasi (DIVA).
Dari segi serologi, tingkat antibodi setelah terinfeksi virus NDV
liar dan sembuh secara signifikan lebih tinggi dibandingkan
setelah imunisasi vaksin biasa. Ketika tingkat antibodi meningkat
secara tidak normal dan keseragaman antibodi buruk, maka
penyakit tersebut dianggap sebagai virus NDV liar. Namun cara
terbaik adalah melakukan imunisasi dengan vaksin bertanda
NDV atau vaksin yang telah dihilangkan gennya. Misalnya, vaksin
demam babi yang dilemahkan pada kelinci dimodifikasi sehingga
tidak memiliki gen tertentu (seperti E0) atau segmen tertentu
(seperti E2), namun imunogenisitasnya tidak berubah (90, 91) .
stabilitas
babi yang divaksinasi yangyang
dan babi baik, dan sangat
terinfeksi secarasensitif untu
alami. Oleh k
15 frontiersin.org
Machine Translated by Google
Mao dkk.
dan perangkat masih perlu dikembangkan untuk membedakan
hewan yang diimunisasi vaksin dengan hewan yang terinfeksi virus. Selain itu,
Fundamental Universitas Pusat (2452019053). Badan pendanaan
Patogenesis dan genetika NDV perlu dipahami dengan lebih baik,
sehingga dapat memfasilitasi perancangan metode diagnostik baru
serta obat dan vaksin yang efektif untuk melawan NDV.
Kontribusi penulis
CW: metodologi, sumber daya, dan pengawasan. QM dan SM:
analisis dan investigasi formal. QM, SM, PS, PZ, dan JW: penulisan—
persiapan draf asli. QM, CW, dan YZ: menulis— mengulas dan
mengedit. CW, QM, dan SL: akuisisi pendanaan. Semua penulis
membaca dan menyetujui naskah akhir.
Pendanaan
Penelitian ini didanai oleh Xi'an IRIS Livestock Technology Co.
Ltd. (K4030218170), China Postdoctoral Science Foundation
(2017M610659 dan 2018T111113), State Key Laboratory of Veterinary
Etiological Biology, Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese
Academy of Agricultural
Referensi
1. Butt SL, Moura V, Susta L, Miller PJ, Hutcheson JM, Cardenas-Garcia S, dkk.
Tropisme strain virus penyakit Newcastle untuk neuron ayam, astrosit, oligodendrosit,
dan mikroglia. Bmc Dokter Hewan Res. (2019) 15:317. doi: 10.1186/s12917-019-2053-z
2. Diel DG, Susta L, Cardenas GS, Killian ML, Brown CC, Miller PJ, dkk.
Karakterisasi genom dan klinikopatologis lengkap dari isolat virus penyakit Newcastle
yang mematikan dari Amerika Selatan. J Clin Mikrobiol. (2012) 50:378–87. doi: 10.1128/
JCM.06018-11
3. Dimitrov KM, Taylor TL, Marcano VC, Williams-Coplin D, Olivier TL, Yu Q, Gogal
RJ, Suarez DL, Afonso CL. Vaksin in ovo berbasis virus penyakit newcastle
rekombinan baru melewati kekebalan ibu untuk memberikan perlindungan penuh dari
tantangan awal yang mematikan. Vaksin. (2021) 9:1189. doi: 10.3390/vaksin91 01189
4. Liang R, Liang L, Ren X, Jia Y, Han K, Zhao J, dkk. Pengembangan uji amplifikasi
isotermal yang dimediasi loop TaqMan untuk deteksi cepat paramyxovirus merpati
tipe 1. Arch Virol. (2021) 166:1599–605. doi: 10.1007/s00705-021-04963-w
5. Amoia C, Nnadi PA, Ezema C, Couacy-Hymann E. Epidemiologi penyakit
Newcastle di Afrika dengan penekanan pada Pantai Gading: tinjauan. Dunia Dokter
Hewan. (2021) 14:1727–40. doi: 10.14202/vetworld.2021.1727-1740
6. Du J, Xia J, Li S, Shen Y, Chen W, Luo Y, dkk. Dinamika evolusi dan pola
penularan virus penyakit Newcastle di Tiongkok melalui analisis filogeografi Bayesian.
PLoS SATU. (2020) 15:e239809. doi: 10.1371/journal.pone.0239809
7. Triosanti LS, Wibowo MH, Widayanti R. Karakterisasi molekuler gen fragmen
hemagglutinin-neuraminidase virus penyakit Newcastle yang diisolasi dari peternakan
yang divaksinasi secara berkala. Dunia Dokter Hewan. (2018) 11:657–66. doi: 10.14202/
vetworld.2018.657-666
8. Turner AJ, Kovesdy L. Studi tentang epizootiologi infeksi virus penyakit
Newcastle avirulen pada kawanan ayam broiler di Victoria. Aust Dokter Hewan J. (1974)
50:155–8. doi: 10.1111/j.1751-0813.1974.tb06882.x
9. Rahman AU, Habib M, Shabbir MZ. Adaptasi virus penyakit newcastle (NDV) pada
burung liar dan potensi perannya dalam penularan antarspesies. Buka Virol J. (2018)
12:52–68. doi: 10.2174/18743579018120 10052
Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan
10.3389/fvets.2022.936251
Ilmu Pengetahuan (SKLVEB2016KFKT014), dan Dana Penelitian
tidak berperan dalam desain studi dan pengumpulan, analisis, dan
interpretasi data serta dalam penulisan naskah.
Konflik kepentingan
Penulis menyatakan bahwa penelitian ini dilakukan di
tidak adanya hubungan komersial atau keuangan yang dapat
ditafsirkan sebagai potensi konflik kepentingan.
Catatan penerbit
Semua klaim yang diungkapkan dalam artikel ini adalah
sepenuhnya milik penulis dan tidak mewakili organisasi afiliasinya,
atau milik penerbit, editor, dan pengulas. Produk apa pun yang
mungkin dievaluasi dalam artikel ini, atau klaim yang mungkin dibuat
oleh produsennya, tidak dijamin atau didukung oleh penerbit.
10. Wang J, Liu H, Liu W, Zheng D, Zhao Y, Li Y, dkk. Karakterisasi genom enam
virus paramyxovirus tipe 1 merpati yang diisolasi dari pasar burung hidup di China
selama tahun 2011 hingga 2013. PLoS ONE. (2015) 10:e124261. doi: 10.1371/
journal.pone.0124261
11. Bello MB, Yusoff K, Ideris A, Rambut-Bejo M, Peeters B, Omar AR.
Pendekatan diagnostik dan vaksinasi untuk virus penyakit newcastle pada unggas:
perspektif saat ini dan yang sedang berkembang. Biomed Res Int. (2018) 2018:7278459.
doi: 10.1155/2018/7278459
12. Pearson GL, McCann MK. Peran burung asli liar, semidomestik, dan eksotik
dalam epizootiologi penyakit Newcastle viscerotropik velogenik di California selatan,
1972–1973. J Am Asosiasi Kedokteran Hewan. (1975) 167:610–4.
13. Walker JW, Heron BR, Mixson MA. Program pemberantasan penyakit Newcastle
yang eksotik di Amerika Serikat. Avian Dis. (1973) 17:486–503. doi: 10.2307/1589147
14. Lumeij JT, Stam JW. Penyakit paramyxovirus pada merpati balap.
Aspek Clin Immuniz Rep Dokter Hewan Belanda Q. (1985) 7:60–5. doi:
10.1080/01652176.1985.9693954
15. Tan SW, Ideris A, Omar AR, Yusoff K, Hair-Bejo M. Analisis sekuens dan
filogenetik genotipe virus penyakit Newcastle yang diisolasi di Malaysia antara tahun
2004 dan 2005. Arch Virol. (2010) 155:63–70. doi: 10.1007/s00705-009-0540-4
16. Herczeg J, Wehmann E, Bragg RR, Travassos DP, Hadjiev G, Werner O, dkk.
Dua kelompok genetik baru (VIIb dan VIII) bertanggung jawab atas wabah penyakit
Newcastle baru-baru ini di Afrika Selatan, satu (VIIb) di antaranya mencapai Eropa
Selatan. Virol Lengkungan. (1999) 144:2087–99. doi: 10.1007/s007050050624
17. Kwon HJ, Cho SH, Ahn YJ, Seo SH, Choi KS, Kim SJ. Epidemiologi molekuler
penyakit Newcastle di Republik Korea. Mikrobiol Dokter Hewan. (2003) 95:39–48. doi:
10.1016/S0378-1135(03)00130-5
18. Nagai Y, Hamaguchi M, Toyoda T. Biologi molekuler penyakit Newcastle
virus. Prog Vet Mikrobiol Imunol. (1989) 5:16–64.
19. Bello MB, Yusoff K, Ideris A, Hair-Bejo M, Jibril AH, Peeters B, Omar AR.
Menjelajahi prospek virus penyakit tetelo yang direkayasa dalam vaksinologi modern.
Virus. (2020) 12:451. doi: 10.3390/v12040451
20. Morrison TG. Struktur dan fungsi protein fusi paramyxovirus.
Biochim Biophys Acta. (2003) 1614:73–84. doi: 10.1016/S0005-2736(03)00164-0
16 frontiersin.org
Machine Translated by Google
Mao dkk.
21.Alexander DJ. Penyakit Newcastle dan paramyxovirus unggas lainnya. Pendeta Sains
Teknologi. (2000) 19:443–62. doi: 10.20506/pertama.19.2.1231
22. Mustafa S, Abd-Aziz N, Saw WT, Liew SY, Yusoff K, Shafee N. enterovirus
rekombinan 71 protein virus 1 menyatu dengan protein pembawa NP (NPt) virus
penyakit Newcastle terpotong. Vaksin. (2020) 8:742. doi: 10.3390/vaksin8040742
23. Yu X, Cheng J, He Z, Li C, Lagu Y, Xue J, dkk. Residu glutamat pada posisi 402
di terminal C nukleoprotein virus penyakit Newcastle sangat penting untuk virus. Rep
Sains (2017) 7:17471. doi: 10.1038/s41598-017-17803-2
24. Bartlett EJ, Cruz AM, Boonyaratanakornkit J, Esker J, Castano A, Skiadopoulos
MH, dkk. virus parainfluenza manusia tipe 1 (HPIV1) baru dengan gen P dan C
terpisah berguna untuk menghasilkan mutan gen C untuk evaluasi sebagai kandidat
vaksin virus hidup yang dilemahkan. Vaksin. (2010) 28:767–79. doi: 10.1016/
j.vaccine.2009.10.069
25. Zhao W, Su J, Zhao N, Liu J, Su S. Pengembangan antibodi monoklonal untuk
mendeteksi epitop yang dilestarikan dan bervariasi dari protein besar virus rabies.
Virus. (2021) 13:220. doi: 10.3390/v13020220
26. Jahanshiri F, Eshaghi M, Yusoff K. Identifikasi fosfoprotein: fosfoprotein dan
fosfoprotein: domain interaksi protein nukleokapsid dari virus penyakit Newcastle.
Virol Lengkungan. (2005) 150:611–8. doi: 10.1007/s00705-004-0439-z
27. Galinsky MS. Paramyxoviridae: transkripsi dan replikasi. Res Virus Adv. (1991)
39:129–62. doi: 10.1016/S0065-3527(08)60794-0
28. Park MS, Garcia-Sastre A, Cros JF, Basler CF, Palese P. Protein V virus penyakit
Newcastle merupakan penentu pembatasan jangkauan inang. J Virol. (2003) 77:9522–
32. doi: 10.1128/JVI.77.17.9522-9532.2003
29. Molouki A, Hsu YT, Jahanshiri F, Abdullah S, Rosli R, Yusoff K. Protein matriks
(M) dari virus penyakit Newcastle berikatan dengan bax manusia melalui domain BH3-
nya. Virol J. (2011) 8:385. doi: 10.1186/1743-422X-8-385
30. Virus penyakit Ganar K, Das M, Sinha S, Kumar S. Newcastle: status saat ini
dan pemahaman kita. Res Virus. (2014) 184:71–81. doi: 10.1016/j.virusres.2014.02.016
31. Ghildyal R, Ho A, Jans DA. Peran sentral protein matriks virus pernapasan
syncytial dalam infeksi. Mikrobiol Fems Rev. (2006) 30:692–705. doi: 10.1111/
j.1574-6976.2006.00025.x
32. Kim SH, Xiao S, Shive H, Collins PL, Samal SK. Mutasi pada situs pembelahan
protein fusi serotipe 4 paramyxovirus burung memberikan peningkatan replikasi dan
pembentukan syncytium in vitro tetapi tidak meningkatkan replikasi dan patogenisitas
pada ayam dan bebek. PLoS SATU. (2013) 8:e50598. doi: 10.1371/journal.pone.0050598
33. Dortmans JC, Koch G, Rottier PJ, Peeters BP. Virulensi virus penyakit tetelo:
apa yang diketahui sejauh ini? Dokter Hewan Res. (2011) 42:122. doi: 10.1186/1297-9716-42-122 55. Brito LF, Mallikarjunappa S, Sargolzaei M, Koeck A, Chesnais J, Schenkel FS,
34. Cornax I, Diel DG, Rue CA, Estevez C, Yu Q, Miller PJ, dkk.
Fusi virus penyakit Newcastle dan protein haemagglutinin-neuraminidase
berkontribusi pada kisaran inang makrofagnya. J Gen Virol. (2013) 94:1189–94. doi:
10.1099/vir.0.048579-0
35. Samuel AS, Kumar S, Madhuri S, Collins PL, Samal SK. Urutan lengkap genom
avian paramyxovirus tipe 9 dan perbandingan dengan paramyxovirus lainnya. Res
Virus. (2009) 142:10–8. doi: 10.1016/j.virusres.2008.12.016
36. Connaris H, Takimoto T, Russell R, Crennell S, Moustafa I, Portner A, dkk.
Menyelidiki situs pengikatan asam sialat dari hemagglutinin neuraminidase virus
penyakit Newcastle: identifikasi asam amino kunci yang terlibat dalam pengikatan
sel, katalisis, dan fusi. J Virol. (2002) 76:1816–24. doi: 10.1128/JVI.76.4.1816-1824.2002
37. Connolly SA, Leser GP, Jardetzky TS, Lamb RA. Komplemen bimolekuler dari
fusi paramyxovirus dan protein hemagglutinin-neuraminidase meningkatkan fusi:
implikasi terhadap mekanisme pemicuan fusi. J Virol. (2009) 83:10857–68. doi: 10.1128/
JVI.01191-09
38. Jin J, Zhao J, Ren Y, Zhong Q, Zhang G. Kontribusi keragaman panjang protein
HN terhadap virulensi, replikasi dan aktivitas biologis virus penyakit Newcastle.
Rep Sains (2016) 6:36890. doi: 10.1038/srep36890
39. Crennell S, Takimoto T, Portner A, Taylor G. Struktur kristal paramyxovirus
hemagglutinin-neuraminidase multifungsi. Biol Struktur Nat. (2000) 7:1068–74. doi:
10.1038/81002
40. Iorio RM, GM Lapangan, Sauvron JM, Mirza AM, Deng R, Mahon PJ, dkk.
Hubungan struktural dan fungsional antara pengenalan reseptor dan aktivitas
neuraminidase dari protein hemagglutinin neuraminidase virus penyakit Newcastle:
pengenalan reseptor bergantung pada aktivitas neuraminidase. J Virol. (2001) 75:1918–
27. doi: 10.1128/JVI.75.4.1918-1927.2001
41. Deng R, Wang Z, Mirza AM, Iorio RM. Lokalisasi domain pada protein perlekatan
paramyxovirus diperlukan untuk mendorong fusi seluler melalui lonjakan protein fusi
homolognya. Ilmu pengetahuan virus. (1995) 209:457–69. doi: 10.1006/viro.1995.1278
Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan
10.3389/fvets.2022.936251
42. Li X, Sun L, Zhao J, Tu K, Xue J, Guo X, dkk. Mutasi pada motif metiltransferase
protein L melemahkan virus penyakit newcastle dengan mengatur translasi virus dan
penyebaran sel ke sel. Spektrum Mikrobiol. (2021) 9:e131221. doi: 10.1128/
Spektrum.01312-21
43. Jadhav A, Zhao L, Ledda A, Liu W, Ding C, Nair V, Ferretti L. Pola penyuntingan
RNA pada infeksi virus penyakit newcastle. Virus. (2020) 12:1249. doi: 10.3390/
v12111249
44. Colonno RJ, Batu HO. MRNA virus penyakit Newcastle kekurangan nukleotida
termetilasi 2'-O. Alam. (1976) 261:611–4. doi: 10.1038/261611a0
45. Virus penyakit Burman B, Pesci G, Zamarin D. Newcastle di garis depan
imunoterapi kanker. Kanker. (2020) 12:3552. doi: 10.3390/kanker12123552
46. Jadhav A, Zhao L, Liu W, Ding C, Nair V, Ramos-Onsins SE, Ferretti L.
Keanekaragaman genom dan evolusi quasispecies pada infeksi virus penyakit
Newcastle. Virus. (2020) 12:1305. doi: 10.3390/v12111305
47. Takimoto T, Portner A. Mekanisme molekuler tunas paramyxovirus.
Res Virus. (2004) 106:133–45. doi: 10.1016/j.virusres.2004.08.010
48. Pantua HD, McGinnes LW, Peeples SAYA, Morrison TG. Persyaratan untuk
perakitan dan pelepasan partikel mirip virus penyakit Newcastle. J Virol. (2006)
80:11062–73. doi: 10.1128/JVI.00726-06
49.Hsiung GD. Virologi diagnostik: dari hewan hingga otomatisasi. Yale J Biol Med.
(1984) 57:727–33.
50. Negera E, Walker SL, Bekele Y, Dockrell HM, Lockwood DN.
Peningkatan aktivasi sel B memori pada darah tepi pasien reaksi eritema nodosum
leprosum. PLoS Negl Trop Dis. (2017) 11:e6121. doi: 10.1371/journal.pntd.0006121
51. Yu Y, Qiu X, Xu D, Zhan Y, Meng C, Wei N, dkk. Penyelamatan virus penyakit
Newcastle kelas I yang ganas varian 9a5b-D5C1. Virol J. (2012) 9:120. doi:
10.1186/1743-422X-9-120
52. Juang DS, Lin CH, Huo YR, Tang CY, Cheng CR, Wu HS, dkk. Proton-ELISA:
Immunoassay elektrokimia pada susunan ISFET gerbang ganda. Biosens Bioelektron.
(2018) 117:175–82. doi: 10.1016/j.bios.2018.06.012
53. Tan X, David A, Hari J, Tang H, Dixon ER, Zhu H, dkk. Kuantifikasi hormon
perangsang folikel tikus secara cepat dan analisis siklus estrus menggunakan sistem
ELISA chemiluminescent mikrofluida otomatis. Sensasi ACS (2018) 3:2327–34. doi:
10.1021/acssensors.8b00641
54. Shang L, Xue G, Gong L, Zhang Y, Peng S, Yuan C, dkk. ELISA baru untuk
mendeteksi bentuk aktif inhibitor aktivator plasminogen-1 berdasarkan agen
perangkap yang sangat spesifik. Anal Chim Acta. (2019) 1053:98–104. doi: 10.1016/
j.aca.2018.12.005
dkk. Arsitektur genetik skor ELISA susu sebagai indikator penyakit Johne
(paratuberculosis) pada sapi perah. J Ilmu Susu. (2018) 101:10062–75. doi: 10.3168/
jds.2017-14250
56. Orcajo J, Lavilla M. Martinez-de-Maranon I. ELISA spesifik dan sensitif untuk
pengukuran variasi pengikatan IgE alergen susu beta laktoglobulin dalam makanan
olahan. Anal Chim Acta. (2019) 1052:163–9. doi: 10.1016/j.aca.2018.11.048 57. Zhang
C, Zhang S, Jia Y, Li Y, Wang
P, Liu Q, dkk. Imunosensor elektrokimia tipe sandwich untuk deteksi sensitif CEA
berdasarkan peningkatan efek Ag NPs@CS dengan jarak Hemin/rGO. Biosens
Bioelektron. (2019) 126:785–91. doi: 10.1016/j.bios.2018.11.039 58. Smirnov IV,
Gryazeva IV, Vasileva MY, Krutetskaia IY,
Shashkova OA, Samoylovich MP, dkk. Sistem ELISA sandwich baru yang sangat
sensitif untuk kuantifikasi endoglin terlarut dalam cairan biologis berbeda. Pindai J
Clin Lab Investasi. (2018) 78:515–23. doi: 10.1080/00365513.2018.1516892
59. Ji P, Zhu J, Li X, Fan W, Liu Q, Wang K, dkk. Uji imunosorben terkait enzim
sandwich berbasis Fenobody dan RANbody untuk mendeteksi virus penyakit
Newcastle. J Nanobioteknologi. (2020) 18:44. doi: 10.1186/s12951-020-00598-2
60. Sheng Y, Wang K, Lu Q, Ji P, Liu B, Zhu J, dkk. Protein fusi peroksidase
nanobody-horseradish sebagai probe ultrasensitif untuk mendeteksi antibodi
terhadap virus penyakit Newcastle dalam immunoassay. J Nanobioteknologi. (2019)
17:35. doi: 10.1186/s12951-019-0468-0
61. Ahmed A, Guo X, Hashimoto W, Ohya K, Fukushi H. Pembentukan elisas
berbasis protein V non struktural dan struktural P untuk mendeteksi infeksi virus
penyakit Newcastle. J Dokter Hewan. Adv. (2012) 11:4017–21.
62. Oliveira DD, Folgueras-Flatschart AV, Flatschart RB, Resende JS, Abreu JT,
Martins NRS. ELISA tidak langsung untuk mendeteksi IgG spesifik virus penyakit
tetelo dalam serum puyuh. Kebun Binatang Dokter Hewan Arq Bras Med. (2007) 59:1344–
7. doi: 10.1590/S0102-09352007000500040
[ Artikel gratis PMC ] [ PubMed ] 63. Chumbe A, Left-Lara R, Calderon K, Fernandez-Diaz M, Vakharia VN.
Pengembangan uji netralisasi virus penyakit Newcastle (NDV) baru berdasarkan
17 frontiersin.org
Machine Translated by Google
Mao dkk.
NDV rekombinan yang mengekspresikan peningkatan protein fluoresen hijau. Virol
J. (2017) 14:232. doi: 10.1186/s12985-017-0900-8
64. Wang B, Wang B, Liu P, Li T, Si W, Xiu J, dkk. Paket virus HIV-Luc pseudotipe
NDV dan penerapannya dalam uji netralisasi infeksi NDV.
PLoS SATU. (2014) 9:e99905. doi: 10.1371/journal.pone.0099905
65. Salih HS, Al-Shammari AM, Laftaah BA. Pemberian bersama virus penyakit
newcastle oncolytic dan bakteri hyaluronidase secara intratumoral meningkatkan
potensi virus dalam model tumor. J Teknologi Farmasi Global. (2018) 10:303–10.
66. Baradaran A, Yusoff K, Shafee N, Rahim RA. Virus penyakit Newcastle
hemagglutinin neuraminidase sebagai agen penargetan kanker yang potensial. J
Kanker. (2016) 7:462–6. doi: 10.7150/jca.13566
[ PubMed ] 67. Chan ED, Heifets L, Iseman MD. Diagnosis imunologi tuberkulosis: a
tinjauan. Umbi Paru Dis. (2000) 80:131–40. doi: 10.1054/tuld.2000.0243
68. Yamaoka Y, Matsuyama S, Fukushi S, Matsunaga S, Matsushima Y, Kuroyama
H, dkk. Pengembangan antibodi monoklonal dan uji diagnostik untuk virus corona
sindrom pernafasan timur tengah menggunakan antigen nukleokapsid sintesis
bebas sel. Mikrobiol Depan. (2016) 7:509. doi: 10.3389/fmicb.2016.00509
69. Li Q, Wang L, Sun Y, Liu J, Ma F, Yang J, dkk. Evaluasi strip imunokromatografi
untuk mendeteksi avian avulavirus 1 (virus penyakit Newcastle). J Investasi Diagnosis
Dokter Hewan. (2019) 31:475–80. doi: 10.1177/1040638719837320
70. Yang F, Li Y, Jin X, Xu Q, Cheng F, Wang X. Deteksi kuantitatif cepat berbasis
imunosensor terhadap antibodi virus penyakit Newcastle menggunakan uji
imunokromatografi emas yang inovatif. J Aplikasi Mikrobiol. (2020) 129:1751–7. doi:
10.1111/jam.14688
71. Jestin V, Jestin A. Deteksi RNA virus penyakit Newcastle dalam cairan alantois
yang terinfeksi dengan amplifikasi enzimatik in vitro (PCR). Virol Lengkungan. (1991)
118:151–61. doi: 10.1007/BF01314026
72. Li X, Qiu Y, Yu A, Chai T, Zhang X, Liu J, dkk. Degenerasi primer berbasis RT-
PCR untuk deteksi cepat dan diferensiasi virus penyakit tetelo ayam yang ditularkan
melalui udara di kandang ayam. J Metode Virol. (2009) 158:1–5. doi: 10.1016/
j.jviromet.2009.01.011
73. Desingu PA, Singh SD, Dhama K, Vinodhkumar OR, Malik YS, Teknik
hematsorpsi sensitif berdasarkan RT-PCR untuk konsentrasi dan deteksi virus
penyakit Newcastle dari sampel klinis dan cairan allantoic. penyakit virus. (2016)
27:319–23. doi: 10.1007/s13337-016-0325-9
74. Yi J, Liu C. Mendeteksi virus penyakit Newcastle dalam kombinasi RT PCR
dengan penyerapan sel darah merah. Virol J. (2011) 8:202. doi: 10.1186/1743-
422X-8-202
75. Wang W, Wang C, Bai Y, Zhang P, Yao S, Liu J, dkk. Pembentukan dipstick
aliran lateral dengan amplifikasi berbantuan rekombinase transkripsi balik dan
metode amplifikasi berbantuan rekombinase transkripsi balik berbasis fluoresensi
waktu nyata untuk mendeteksi virus penyakit Newcastle pada ayam. Ilmu Unggas.
(2020) 99:3393–401. doi: 10.1016/j.psj.2020.03.018
76. Zhang X, Yao M, Tang Z, Xu D, Luo Y, Gao Y, dkk. Pengembangan dan
penerapan uji triplex real-time PCR untuk deteksi simultan virus avian influenza,
virus penyakit Newcastle, dan virus bebek Tembusu. Bmc Dokter Hewan Res. (2020)
16:203. doi: 10.1186/s12917-020-02399-z
77. Liu L, Benyeda Z, Zohari S, Yacoub A, Isaksson M, Leijon M, dkk. Penilaian
persiapan sampel di bawah kondisi lapangan dan RT real-time portabel
Perbatasan dalam Ilmu Kedokteran Hewan
10.3389/fvets.2022.936251
Uji PCR untuk deteksi cepat virus penyakit Newcastle di lokasi. Distrik Darurat Lintas
Batas. (2016) 63:E245–50. doi: 10.1111/tbed.12261
78. Wise MG, Suarez DL, Seal BS, Pedersen JC, Senne DA, King DJ, dkk.
Pengembangan PCR transkripsi balik real-time untuk mendeteksi RNA virus penyakit
Newcastle dalam sampel klinis. J Clin Mikrobiol. (2004) 42:329–38. doi: 10.1128/
JCM.42.1.329-338.2004
79. Zeynalova S, Guliyev F, Vatani M, Abbasov B. Pengawasan hayati virus flu
burung dan penyakit Newcastle di wilayah Barda Azerbaijan menggunakan RT-PCR
waktu nyata dan penghambatan hemaglutinasi. Mikrobiol Depan. (2015) 6:1128. doi:
10.3389/fmicb.2015.01128
80. Pham HM, Nakajima C, Ohashi K, Onuma M. Loop-mediated amplifikasi
isotermal untuk deteksi cepat virus penyakit Newcastle. J Clin Mikrobiol. (2005)
43:1646–50. doi: 10.1128/JCM.43.4.1646-1650.2005
81. Li Q, Xue C, Qin J, Zhou Q, Chen F, Bi Y, dkk. Uji amplifikasi isotermal yang
dimediasi loop transkripsi balik yang ditingkatkan untuk deteksi virus penyakit
Newcastle yang sensitif dan spesifik. Virol Lengkungan. (2009) 154:1433–40. doi:
10.1007/s00705-009-0464-z
82. Wu X, Lagu Z, Zhai X, Zuo L, Mei X, Xiang R, dkk. Deteksi virus bronkitis
menular dan virus penyakit Newcastle secara simultan dan visual dengan beberapa
LAMP dan dipstick aliran lateral. Ilmu Unggas. (2019) 98:5401–11. doi: 10.3382/ps/
pez372
83. Tubbs E, Rieusset J. Studi retikulum endoplasma dan interaksi mitokondria
dengan uji ligasi kedekatan in situ dalam sel tetap. J Vis Exp. (2016) 118:e54899. doi:
10.3791/54899
84. Ke R, Nong RY, Fredriksson S, Landegren U, Nilsson M. Meningkatkan
ketepatan uji ligasi kedekatan dengan memperkuat deteksi molekul tunggal. PLoS
SATU. (2013) 8:e69813. doi: 10.1371/journal.pone.0069813
85. Loth MK, Guariglia SR, Re DB, Perez J, de Paiva VN, Dziedzic JL, dkk.
Interaksi baru protein translocator 18 kDa (TSPO) dengan NADPH oksidase dalam
mikroglia. Mol Neurobiol. (2020) 57:4467–87. doi: 10.1007/s12035-020-02042-w 86. Zhu
L, Ling J, Zhu Z, Tian T, Song Y, Yang C. Seleksi dan penerapan asam nukleat
fungsional untuk deteksi dan pencegahan penyakit menular. Kimia Bioanal Anal.
(2021) 413:4563–79. doi: 10.1007/s00216-020-03124-3
87. Gustafsdottir SM, Nordengrahn A, Fredriksson S, Wallgren P, Rivera E,
Schallmeiner E, dkk. Deteksi patogen mikroba individu dengan ligasi kedekatan.
Klinik Kimia. (2006) 52:1152–60. doi: 10.1373/clinchem.2005.065847
88. Marnissi B, Khalfaoui K, Ebai T, de Oliveira FMS, Ghram A, Kamali Moghaddam
M, dkk. Deteksi akurat virus penyakit Newcastle menggunakan uji ligasi aptamer
DNA yang bergantung pada jarak. FEBS Buka Biol. (2021) 11:1122–31. doi:
10.1002/2211-5463.13117
89. Huang J, Xie Z, Huang Y, Xie L, Luo S, Fan Q, Zeng T, Zhang Y, Wang S, Zhang
M, Xie Z, Deng X. Imunosensor elektrokimia dengan Cu(I)/Cu(II) - Amplifikasi sinyal
berbasis nanokomposit kitosan-graphene untuk mendeteksi virus penyakit
newcastle. Perwakilan Sains (2020) 10:1–12. doi: 10.1038/s41598-020-70877-3
90. Dortmans JC, Rottier PJ, Koch G, Peeters BP. Kompleks replikasi virus
dikaitkan dengan virulensi virus penyakit tetelo. J Virol. (2010) 84:10113– 20. doi:
10.1128/JVI.00097-10 91. Li F,
Li B, Niu X, Chen W, Li Y, Wu K, Li X, Ding H, Zhao M, Chen J, Yi L.
Perkembangan vaksin penanda demam babi klasik dalam beberapa tahun terakhir.
Vaksin. (2022) 10:603 doi: 10.3390/vaksin10040603
18 frontiersin.org