Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Deteksi
JSV 35 (1), Juni 2017 Virus Newcastle Disease dari Sampel Organ Ayam Menggunakan Reverse Transcriptase Polymerase Chain
Reaction

Deteksi Virus Newcastle Disease dari Sampel Organ Ayam Menggunakan

Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction

Deteksi Virus Newcastle Disease dari Sampel Organ Ayam dengan Reverse
Transcriptase Polymerase Chain Reaction

Lehgarubini Shanmuganathan1, Dito Anggoro2, Michael Haryadi Wibowo2

1Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gadjah Mada Yogyakarta

2Jurusan Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta

Email: lehgarubinishan@gmail.com1 , dan
mhwibowo@ugm.ac.id2

Abstrak
Newcastle Penyakit (ND) adalah penyakit pernapasan sistemik, virus yang bersifat akut dan mudah
menular yang menyerang berbagai jenis unggas, terutama ayam. Diagnosis ND yang umumnya melibatkan
isolasi virus dan identifikasi lanjutan dengan uji serologis memiliki keterbatasan yang membutuhkan waktu
lebih lama. Penelitian ini bertujuan untuk mendeteksi virus Newcastle Disease (NDV) pada ayam suspek ND
menggunakan teknik Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR). Sembilan sampel organ
ayam seperti lien, trakea, dan paru-paru dikumpulkan dari peternakan ayam yang didiagnosis ND. Sampel
organ diproses dan RNA virus yang ditargetkan diekstraksi menggunakan kit ekstraksi RNA. Amplifikasi
genom dilakukan dengan RT-PCR menggunakan primer spesifik untuk menargetkan gen F. Hasil amplifikasi
menghasilkan produk amplikon sebesar 565 pasangan basa (bp). Sampel produk PCR kemudian
divisualisasikan menggunakan elektroforesis gel agar dan dilihat menggunakan sistem dokumentasi gel terpadu.
Hasil amplifikasi menunjukkan sembilan sampel positif untuk pita DNA yang sesuai dengan pita target dari
fragmen gen NDV F. Hasil penelitian ini menegaskan bahwa metode RT-PCR dapat diterapkan untuk deteksi
NDV dari sampel organ ayam.
Kata kunci: Virus Newcastle Disease, sampel organ, amplifikasi.

Abstrak
Penyakit Newcastle (ND) adalah suatu penyakit pernafasan dan sistematik, yang bersifat akut dan
mudah menular, yang disebabkan oleh virus dan menyerang berbagai jenis unggas, ayam. Diagnosis penyakit
ND yang umumnya dilakukan dengan virus tersendiri dan serologis memiliki keterbatasan, antara lain yang
diperlukan waktu lebih lama. Penelitian ini bertujuan mendeteksi virus Newcastle Disease (NDV) pada ayam
yang dicurigai dengan penyakit ND dengan menggunakan teknik Reverse Transcriptase-Polymerase Chain
Reaction (RT-PCR). Sembilan sampel organ ayam yaitu: lien, trakea, dan paru dikoleksi dari peternakan ayam
yang didiagnosis penyakit ND. Sampel organ tersebut diperiksa dan diekstraksi RNA virus target dengan kit
ekstraksi RNA. Amplifikasi genom virus dilakukan dengan RT-PCR menggunakan spesifik spesifik pada gen
target
F. Hasil amplifikasi menghasilkan produk amplikon sebesar 565 pasangan basa (bp). Sampel produk PCR
kemudian divisualisasikan menggunakan elektroforesis gel dan diamati menggunakan sistem dokumentasi gel
terpadu. Hasil amplifikasi menunjukkan sembilan sampel positif teramati pita DNA sesuai fragmen target gen F
virus ND. Hasil penelitian ini mengkonfirmasi bahwa metode RT-PCR dapat digunakan untuk mendeteksi virus
ND dari sampel organ ayam.
Kata Kunci: virus Newcastle Disease, sampel organ, amplifikasi.

1
Lehgarubini Shanmuganathan dkk.

pengantar Kantor Internationale des Epizooties (OIE)

Newcastle disease (ND) merupakan penyakit mengklasifikasikan ND sebagai penyakit daftar A
saluran pernafasan sistemik yang bersifat akut dan (Alexander, 2000). Menurut OIE (1996), daftar
mudah menular yang disebabkan oleh virus dan penyakit A
menyerang berbagai jenis unggas terutama ayam
(Tabbu, 2000). ND pertama kali dikenal di
Indonesia pada tahun 1926 dan diklasifikasikan
sebagai penyakit virus (Alexander et al., 2004).
Virus ini endemik di sebagian besar wilayah negara
karena sering diisolasi dalam wabah (Dharmayanti
et al., 2014; Wibowo et al., 2012). Wibowo dkk.
(2012) melaporkan tiga jenis virulensi virus
Newcastle Disease (NDV) yang ditemukan di
lapangan, yaitu strain rendah, sedang, dan virulen.
Menurut Alexander (2003), strain NDV yang paling
virulen adalah jenis Asiatic yang menyebabkan
tingkat kematian 100% pada unggas rentan,
menyebabkan kerugian yang signifikan pada
industri perunggasan Indonesia.
Menurut FAO (2010), fasilitas peternakan
unggas di seluruh Indonesia berkisar dari produksi
pekarangan (sektor 4) hingga produksi unggas
komersial dengan biosekuriti tinggi atau rendah
(sektor 2 dan 3) hingga produksi industri terpadu
(sektor 1); dengan produksi unggas komersial sektor
2 mendominasi pasar nasional. Terlepas dari tingkat
biosekuriti yang diterapkan, keempat sektor tersebut
berada dalam ancaman penyakit Tetelo – nama lokal
untuk ND (Wibowo & Amanu, 2010). Hal ini
menimbulkan masalah besar bagi bangsa karena
penyakit ini merupakan epizootik sporadis meskipun
program vaksinasi rutin dilaksanakan (Kryger et al.,
2010). Akibat dari penyakit ini adalah tingkat
pertumbuhan dan produksi yang rendah, biaya yang
tinggi untuk pencegahan dan pengobatan, dan
tingkat kematian yang tinggi (Amanu & Rohi,
2005).
 Deteksi Virus Newcastle Disease dari Sampel Organ Ayam Menggunakan Reverse Transcriptase Polymerase Chain
Reaction
didefinisikan sebagai “penyakit menular yang
memiliki potensi penyebaran yang sangat serius
dan cepat, terlepas dari batas negara, yang memiliki
konsekuensi sosial ekonomi atau kesehatan
masyarakat yang serius dan yang sangat penting
dalam perdagangan internasional hewan dan
produk hewan.” Virus ini termasuk dalam genus
Avulavirus dan famili Paramyxoviridae. Ini
memiliki genom RNA untai tunggal yang
terbungkus, tidak tersegmentasi, negatif sense,
yang mengkodekan enam protein (Rabalski et al.,
2014; Shirvan & Mardani, 2014). Avian
paramyxovirus tipe 1 (APMV-1) atau ND adalah
virus yang terjadi dalam bentuk filamen atau bola
(pleomorfik) dan terdiri dari satu molekul arti
negatif, RNA untai tunggal yang tertutup dalam
amplop dengan paku glikoprotein yang menonjol
(MacLachlan & Dubovi , 2010).
Genom RNA berukuran sekitar 15-18 kb
dan dapat terdiri dari setidaknya tiga panjang
genom; 15.186, 15.192 dan 15.198 nukleotida
(Miller et al., 2010). Nukleotida ini membentuk
enam gen yang mengkode enam protein struktural
berikut: protein nukleokapsid (NP/N), fosfoprotein
(P), protein matriks (M), protein fusi (F),
haemagglutinin-neuraminidase (HN) dan protein
besar (L ) dalam urutan 3'leader-NPMF-HN-L-
5'trailer (Kho et al., 2003). Dua protein non-
struktural tambahan (V dan W) mungkin ada pada
beberapa galur; mereka dikodekan oleh pengeditan
RNA dari protein P. Setiap protein berfungsi secara
berbeda untuk membantu infektivitas dan virulensi
NDV. Protein F dan HN berlabuh di selubung
virion dan membentuk paku amplop.
Protein ini bekerja sama dalam perlekatan
dan fusi virion ke sel inang (MacLachlan &
Dubovi, 2010). Baik protein F dan HN
berkontribusi pada karakteristik virulensi dari
NDV, tetapi penentu utama adalah pembelahan menilai tingkat antibodi pada burung. AGPT ternyata
protein F (Cattoli et al., 2011). Protein F disintesis sederhana, murah dan
sebagai prekursor tidak aktif (F0) dan hanya
fusogenik setelah pembelahan menjadi dua subunit
polipeptida F1 dan F2 yang aktif secara biologis,
oleh protease sel inang (de Leeuw et al., 2005).
Situs pembelahan protein F berbeda dalam
pengaturan beberapa asam amino basa tergantung
pada tingkat virulensi.
Tukang giling dkk. (2010) membedakan
strain lentogenik, mesogenik dan velogeniksebagai
tiga manifestasi patotipik utama NDV. NDV
viscerotropik-velogenik menyebabkan infeksi
mematikan akut, NDV neurotropik-velogenik
menyebabkan penyakit pernapasan dan saraf,
sedangkan NDV mesogenik ditandai dengan gejala
pernapasan dan neurologis, tetapi menyebabkan
kematian yang rendah. NDV sangat menular,
dengan laporan yang menyatakan bahwa bahkan
strain virus patogen rendah (lentogen) yang
menyebabkan infeksi ringan pada saluran
pernapasan dapat sangat meningkatkan
patogenisitasnya bahkan selama satu perjalanan
(Rabalski et al., 2014).
Diagnosis definitif ND memerlukan isolasi
virus dan karakterisasi laboratorium selanjutnya.
Isolasi virus dilakukan dengan menyuntikkan dan
menginkubasi suspensi antibiotik sampel yang
diambil dari unggas hidup ke dalam rongga alantois
telur ayam berembrio. Setelah masa inkubasi, cairan
alantois kemudian dipanen dan diuji (Alexander et
al., 2004). Tanda dan lesi klinis mungkin sangat
sugestif; namun metode ini terbukti tidak praktis
sebagai alat rutin (Haque et al., 2010). Sebagai
gantinya, teknik konvensional seperti uji presipitasi
gel agar (AGPT), uji hemaglutinasi (HA) dan
penghambatan hemaglutinasi (HI) digunakan untuk

129
lebih cepat dalam menilai infeksi ND pada unggas, penelitian untuk mengetahui apakah RT-PCR dapat
namun saat ini tes HI merupakan teknik yang diterapkan untuk deteksi ND dari sampel organ
paling banyak digunakan (Alexander et al., 2004). ayam yang diduga NDV.
Penggunaan umum vaksin pada unggas
domestik membatasi nilai pengujian ini; maka
teknik molekuler seperti reverse transcription-
polymerase chain reaction (RT-PCR) diterapkan
untuk mendeteksi NDV dalam spesimen klinis
(OIE, 1996). Metode RT-PCR lebih unggul
daripada metode diagnostik konfirmasi NDV
lainnya (Singh et al., 2005). Metode ini
menggunakan primer spesifik gen untuk
menghasilkan salinan cDNA untai tunggal dari gen
RNA NDV, dengan bantuan enzim reverse
transcriptase (RT). Salinan cDNA digunakan
sebagai template PCR untuk menghasilkan
amplifikasi eksponensial dari asam nukleat virus,
bahkan jika ada dalam jumlah kecil (Rio et al.,
2011).
Studi analisis isolat NDV oleh Angeliya et
al. (2014) berhasil mendeteksi NDV dalam sampel
dengan menggunakan primer yang menargetkan
gen F. Penelitian oleh Haque et al. (2010)
menggunakan primer spesifik yang
mengamplifikasi sekuens gen F sepanjang 356 bp
yang mengkode situs pembelahan protein fusi.
Demikian juga, Singh et al. (2005) menggunakan
primer yang menargetkan sekuens internal aktivasi
pembelahan gen NDV F. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa penargetan RT-PCR dapat
digunakan secara efektif untuk deteksi NDV.
RT-PCR dilakukan di Laboratorium
Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Gadjah Mada. Tujuan dari penelitian
ini adalah untuk mendeteksi NDV pada sampel
organ seperti lien, trakea, dan paru-paru yang
dikumpulkan dari ayam yang divaksinasi yang
diduga NDV menggunakan RT-PCR. Manfaat

130
Tabel 1. Data sampel organ ayam yang diduga terinfeksi NDV yang digunakan dalam penelitian ini.

Tida Contoh kode ID dan umur Sistem pertanian Tanda-tanda Jenis

k. area koleksi ayam klinis samp
el
1. GK-1 48 minggu Peternakan layer, vaksinasi: Penurunan Pulmo
SR Farm/2013 Minggu 16: Vaksin rangkap tiga produksi dan
(Semanu, Gunungkidul, ND-IB-EDS diare kehijauan
Yogyakarta) Vaksinasi ulang setiap 1,5 bulan
2. KP-1 7 minggu Peternakan layer, vaksinasi: Mortalitas Pulmo
Humas Farm/2013 Hari 5: ND-IB hidup dan ND tinggi dan
(Kulonprogo, Yogyakarta) mati Hari 18: ND hidup tortikolis
Hari 35: ND live
3. BYL-1 10 minggu Peternakan petelur, Kematian tinggi, Pulmo
RH Farm/2014 vaksinasi: Hari 1: ND- tortikolis, dan
(Boyolali, Jawa IB live diare kehijauan
Tengah) Hari 5: ND-IB terbunuh
Hari 49: ND live
4. SEM-1 3 minggu Peternakan ayam pedaging, Kematian tinggi Pulmo
GK Farm/2015 vaksinasi:
(Semin, Gunungkidul, Hari 4: ND-IB hidup dan ND
Yogyakarta) terbunuh

5. SEM-2 3 minggu Peternakan ayam pedaging, Kematian tinggi Pulmo

GK Farm/2015 vaksinasi:
(Semin, Gunungkidul, Hari 4: ND-IB hidup dan ND
Yogyakarta) terbunuh

6. SEM-3 3 minggu Peternakan ayam pedaging, Kematian tinggi Hak gadai

GK Farm/2015 vaksinasi:
(Semin, Gunungkidul, Hari 4: ND-IB hidup dan ND
Yogyakarta) terbunuh

7. WNgiri-1 4 minggu Peternakan ayam pedaging, Kematian tinggi Pulmo

SCI Farm/2015 vaksinasi: Hari 4: ND-IB
(Wonogiri, Jawa Tengah) hidup dan mati Hari 21:
Vaksin hidup ND
8. BRAH-2 10 minggu Peternakan petelur, Mortalitas Batang
JH Farm/2014 vaksinasi: Hari 1: ND- tinggi dan tenggorok
(Brahrang, Sumatera IB live tortikolis
Utara) Hari 14: ND-IB terbunuh
Hari 20: ND live
9. BRAH-1 6 minggu Peternakan petelur, Mortalitas Pulmo
JH Farm/2014 vaksinasi: Hari 1: ND- tinggi dan
(Brahrang, Sumatera IB tortikolis
Utara) Hari 14: ND-IB terbunuh
Hari 20: ND-IB live

Bahan dan Metode Sebanyak sembilan sampel organ (trakea, lien

dan pulmo) yang digunakan dalam penelitian ini
disediakan oleh Dr. drh. Michael Haryadi Wibowo,
sampel diambil dari ayam broiler atau ayam petelur
MP. NS
yang divaksinasi yang menunjukkan gejala klinis
dari peternakan di Brahrang, Gunung Kidul, Kulon
Progo, Boyolali, dan Wonogiri. Semua peternakan
menerapkan perantara
 program biosekuriti dan tidak memiliki catatan Pada Tabel 3, hasil RT-PCR dicatat sebagai
wabah ND. Data sampel organ ayam dijelaskan positif dengan tanda '+', dan negatif dengan tanda '-',
pada Tabel 1. dan kontrol positif dan negatif berfungsi sebagai
1ml Virus Transport Medium (VTM) referensi. Vaksin ND hidup La Sota yang digunakan
dipindahkan ke dalam mortar dan sebagian kecil sebagai kontrol positif mengandung genom NDV
sampel organ ditempatkan dalam mortar, kemudian 565 bp yang ditargetkan dan Tangga DNA
dihomogenkan dan diberi label. Sampel GeneRuler 100bp membantu memperkirakan ukuran
diperlakukan dengan kit QIAamp® RNA untuk nukleotida yang dipisahkan dan mendeteksi apakah
ekstraksi dan pemurnian RNA virus, diikuti dengan urutan gen yang diinginkan diperkuat.
elusi. Sampel ekstraksi RNA akhir segera diurutkan Formasi band di sepanjang jalur 2 sampai
dengan RT-PCR, dengan menggunakan larutan 10 pada Gambar 1 menunjukkan kesembilan sampel
mastermix dan mesin PCR Thermal Cycler T100™. positif NDV. Terbentuknya pita tajam menunjukkan
Program PCR seperti yang ditunjukkan pada Tabel 2 program RT-PCR yang optimal dan bahan yang
dimasukkan ke dalam mesin untuk memproses digunakan dalam penelitian ini untuk menghasilkan
sampel. produk amplifikasi yang berkualitas baik. Hasil
Langkah terakhir melibatkan visualisasi sampel menunjukkan bahwa pita sampel terbentuk dalam
produk RT-PCR dalam elektroforesis gel agarosa. kisaran 500 bp hingga 600 bp yang menunjukkan
Tangga DNA GeneRuler 100bp dankontrol positif adanya fragmen gen NDV F 565 bp yang
dengan fragmen ukuran yang sama sebagai sampel ditargetkan di semua sembilan sampel. Pelt-Verkuil
positif potensial digunakan untuk mengukur dan dkk. (2008) menyatakan bahwa membandingkan
mendeteksi pita sampel yang dihasilkan. Hasilnya intensitas pita pita sampel dengan kontrol kuantitas
dilihat dan didokumentasikan dengan Sistem yang diketahui, seperti tangga DNA, membantu
Dokumentasi Gel Terpadu. menghasilkan ukuran jumlah transkrip dalam
sampel. Oleh karena itu, perbedaan intensitas pita
Tabel 2. Program RT-PCR
Suhu Proses Wakt sesuai dengan jumlah virus yang ada dalam sampel.
(ºC) u
Perbedaan ketebalan pita sampel dapat digunakan
reaksi RT 50 30 menit
Pra-denaturasi 95 5 menit untuk memperkirakan jumlah produk relatif

Denaturasi 95 15 detik terhadap tangga DNA.

anil 55 45 detik Sampel 1 dan 2 (jalur 2 dan 3) memiliki lebar
Pemanjangan 72 60 detik pita yang sama dengan kontrol positif tetapi lebih
tipis dibandingkan sampel lainnya. Sedangkan
sampel 3 sampai 6 (jalur 4 sampai 7) dan sampel 8
Hasil dan Diskusi
dan 9 (jalur 9 dan 10 masing-masing) memiliki pita
yang
Penelitian ini menerapkan teknik RT-PCR organ ayam yang diduga NDV. Hasil RT-PCR
untuk
dirangkum dalam Tabel 3 dan Gambar 1.
mendeteksi keberadaan genom NDV pada sampel
lebih tebal ukurannya. Oleh karena itu, hasil
menunjukkan bahwa sampel 3 hingga 9 memiliki
jumlah fragmen gen F yang lebih tinggi
dibandingkan sampel 1 dan 2. Pita sampel7 dengan
formasi pita paling tebal (sepanjang jalur 8)
Tabel 3: Hasil RT-PCR

Tida Kode sampel Sampel Organ Jalur Hasil

k
1. BRAH-2/2014 Batang tenggorok 2 +
2. SEM-1/2015 Pulmo 3 +
3. SEM-2/2015 Pulmo 4 +
4. SEM-3/2015 Hak gadai 5 +
5. KP-1/2013 Pulmo 6 +
6. GK-1/2013 Pulmo 7 +
7. BYL-1/2014 Pulmo 8 +
8. BRAH-1/2014 Pulmo 9 +
9. WNgiri-1/2015 Pulmo 10 +
10. Vaksin ND Hidup (La Sota) Kontrol positif K+ +
11. Air Bebas Nuklir Kontrol negatif K- -
Hasil positif: '+', Hasil negatif: '-'.

memiliki jumlah fragmen gen F tertinggi.

reverse primer (5'AGG-TTG-AGT-TCT-ACA-
Identifikasi molekuler dalam penelitian ini CCA-ACC-TGT 3') memiliki motif khusus untuk
didasarkan pada amplifikasi fragmen gen NDV F situs target. Deteksi NDV dengan RT-PCR terutama
pada posisi 71 hingga 635 dengan ukuran produk menargetkan gen F karena virulensi NDV pada
565 bp dengan penggunaan primer yang dirancang prinsipnya tergantung pada urutan asam amino di
oleh Balai Penyelidikan Penyakit Lampung tempat pembelahan F0 (Alexander, 2000). Sebagai
(Angeliya et al., 2014). Kedua primer tersebut yaitu: perbandingan, Dharmayanti dkk. (2014)
forward primer (5' GCT-GTA-TCT-GTC-TGA- menerapkan set primer lain untuk menargetkan
CAA-GCT-CTC 3') dan bagian gen F yang berbeda dengan produk 535 bp

Gambar 1: Hasil amplifikasi genom NDV panjang 565 bp yang ditargetkan. Jalur 1 berisi
Tangga DNA 100bp. Jalur 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, dan 10 yang berisi sampel
menunjukkan hasil amplifikasi positif. Jalur K+ adalah kontrol positif dan jalur
K- adalah kontrol negatif.
 ukuran. Penelitian oleh Haque et al. (2010) Kesimpulan
menggunakan primer spesifik yang mengamplifikasi
Kesembilan sampel dikonfirmasi positif
sekuens gen F sepanjang 356 bp yang mengkode
sebagai NDV oleh RT-PCR menggunakan primer
situs pembelahan protein fusi. Demikian juga, Singh
spesifik target
et al. (2005) menggunakan primer yang sama untuk
amplikon 356 bp, bersama dengan pasangan primer
lain yang menargetkan sekuens internal 216 bp dari
aktivasi pembelahan gen NDV F. Hasil dari
penelitian ini menunjukkan bahwa amplifikasi RT-
PCR yang menggunakan gen F sebagai sekuens
target efektif untuk deteksi NDV. Urutan NDV
menggunakan RT-PCR telah ditetapkan sebagai
metode yang efektif, terutama setelah isolasi dan tes
serologi sebelumnya seperti yang ditentukan oleh
Komisi Standar OIE (Oberdorfer & Werner, 1998).
Sebuah penelitian oleh Kencana et al. (2012)
menggunakan teknik ini untuk konfirmasi diagnosis
ND pada ayam asli Bali. Kencana (2012) melakukan
perbanyakan sampel dalam telur ayam berembrio
dan uji serologi konfirmasi selanjutnya sebelum
amplifikasi RT-PCR. Cara yang sama juga
dilaporkan oleh Dharmayanti et al. (2014).
Namun pada penelitian ini dilakukan RT-
PCR untuk mendeteksi NDV secara langsung dari
sampel organ ayam. Menurut Kant dkk. (1997)
menemukan kemungkinan deteksi RT-PCR
langsung dari sampel organ yang mengandung NDV
virulen, tetapi gagal mendeteksi NDV pada
beberapa sampel jaringan yang mengandung NDV
non-virulen karena sensitivitas pengujian. Laporan
lain oleh Gohm et al. (2000) menyatakan bahwa
deteksi NDV yang cepat dicapai dengan
menggunakan RT-PCR langsung pada sampel dari
unggas yang terinfeksi tanpa isolasi virus
sebelumnya. Temuan ini sangat sesuai dengan
penelitian ini.
Fragmen gen F dan menghasilkan produk amplikon
565 pasangan basa. Hasil penelitian menunjukkan
bahwa metode ini dapat digunakan untuk deteksi
NDV dari sampel organ ayam tanpa isolasi dan
perbanyakan terlebih dahulu pada telur berembrio.
Oleh karena itu, metode RT-PCR dapat diterapkan
untuk mendeteksi NDV pada sampel organ ayam.

Pengakuan

Sebagian dari data ini didukung oleh USDA-

ARS, AS, No.999x-14-60072-1.

Referensi
Alexander, DJ 2000. Penyakit Newcastle dan
paramyxovirus unggas lainnya. Revue
Scientifique et Technique de L`Office
International Des Epizooties 19(2): 443-462.

Alexander, D. penyakit Newcastle,

paramyxoviruses unggas lainnya, dan infeksi
pneumovirus. Dalam: Penyakit Unggas. Saif,
YM, Barnes, HJ, Glisson, JR, Fadly, AM,
McDougald, LR, Swayne, D., (eds)., Iowa
State University Press, Ames. 63–99.

Alexander, DJ, Bell, JG dan Alders, RG 2004.

Tinjauan Teknologi: Penyakit Newcastle.
Kertas Kesehatan dan Produksi Hewan FAO,
161: 1-15.

Amanu, S. dan Rohi, OK 2005. Studi Serologi

dengan Uji Hambatan Hemaglutinasi
terhadap Angsa yang dapat bertindak sebagai
pembawa penyakit Newcastle di
DIYogyakarta. Jurnal Sain Veteriner, 1:8-12.

Angeliya, L. 2014. Analisis Pohon Filogenik Dan

Urutan Konsensus Virus Newcastle Disease
Isolat Asal Wilayah Kerja Balai Veteriner
Lampung Tahun 2010-2013. Dalam:
Prosiding Seminar Nasional Sains dan
Inovasi Teknologi Pertanian, Balai
Pengkajian Teknologi Pertanian (BPTP),
Lampung. 474-481.

Cattoli, G., Susta, L., Terregino, C., dan Brown, C.

2011. Penyakit Newcastle: tinjauan
pengenalan lapangan dan metode
laboratorium saat ini
 deteksi. Jurnal Investigasi Diagnostik Hewan,
23(4): 637–656.
de Leeuw, OS, Koch, G., Hartog, L., Ravenshorst,
N. dan Peeters, BPH 2005. Virulensi virus
penyakit Newcastle ditentukan oleh situs
pembelahan protein fusi dan oleh kedua
daerah batang dan kepala globular protein
haemagglutinin-neuraminidase. Jurnal
Virologi Umum, 86: 1759–1769.
Dharmayanti, NLPI, Hartawan, R., Hewajuli, DA
dan Indriani, R. 2014. Analisis Filogenetik
Genotipe VII Newcastle Disease Virus di
Indonesia. Jurnal Penelitian Mikrobiologi
Afrika, 8 (13): 1368-1374
Gohm, DS, Thür, B. dan Hofmann, MA 2000.
Deteksi virus Newcastle disease pada organ
dan feses ayam percobaan yang terinfeksi
menggunakan RT-PCR. Jurnal Patologi
Burung, 29(2): 143-152
Haque, MH, Hossain, MT, Islam, MT, Zinnah,
MA, Khan, MSR and Islam, MA 2010. Isolasi
dan Deteksi Virus Newcastle Disease Dari
Wabah Lapangan Pada Ayam Broiler Dan
Ayam Petelur Dengan Transkripsi Terbalik –
Reaksi Rantai Polimerase. Jurnal Kedokteran
Hewan Bangladesh, 8 (2): 87–92.
Kant, A., Koch, G., Van Roozelaar, DJ, Balk, F. dan
Ter Huurne, A. 1997. Diferensiasi strain virus
virulen dan non-virulen dari virus penyakit
Newcastle dalam waktu 24 jam dengan reaksi
berantai polimerase. Jurnal Patologi Burung,
26(4): 837-849
Kencana, GAY, Kardena, IM, dan Mahardika,
IGNK 2012. Konfirmasi Diagnosis Penyakit
Tetelo Pada Ayam Kampung Bali
Menggunakan Metode RT-PCR. Jurnal
Kedokteran Hewan, 6(1): 28-31
Kho, CL, Tan, WS, Tey, BT dan Yusoff, K. 2003.
Protein Nukleokapsid Virus Newcastle
Disease. Jurnal Virologi Umum, 84: 2163–
2168.
Kryger, KN, Thomsen, KA, Whyte, MA dan
Dissing, M. 2010. Produksi Unggas Petani
Kecil. Kertas Produksi Unggas Petani Kecil
FAO. 4: 7-25.
MacLachlan, NJ dan Dubovi, EJ (eds). 2010.
Virologi Hewan Fenner. Edisi ke-4.,
Academic Press Elsevier, London. 300, 304-
305, 311-314.
Miller, PJ, Decanini, EL dan Afonso, CL 2010.
Penyakit Newcastle. Infeksi, Genetika dan
Evolusi, 10(1): 26–35.
Oberdorfer, A. dan Werner, O. 1998. Virus penyakit
Newcastle: Deteksi dan karakterisasi oleh
PCR dari isolat Jerman baru-baru ini berbeda
dalam patogenisitas. Jurnal Patologi Burung,
27(3): 237-243.
Kantor Internasional des Epizooties (OIE). 1996.
Manual Standar Tes Diagnostik dan Vaksin.
Edisi ke-3., Manual OIE, 161-165.
Kantor Internasional des Epizooties (OIE). 2008.
Manual Tes Diagnostik dan Vaksin untuk
Hewan Terestrial. Edisi ke-6., Manual
Terestrial OIE, 1: 576-582.
Pelt-Verkuil, EV, Belkum, AV, dan Hays, JP 2008.
Prinsip dan Aspek Teknis Amplifikasi PCR.
Sains & Media Bisnis Springer. 20.
Rabalski, L., Smietanka, K., Minta, Z., dan
Szewczyk,
B. 2014. Deteksi Varian Genetik Minor Virus
Newcastle Disease dengan Analisis
Polimorfisme Konformasi Beruntai Tunggal
Termodifikasi. BioMed Research
International, 2014 (632347): 1-8.
Rio, DC, Ares, M., Hannon, GJ dan Nilsen, TW
2011. RNA: Manual Laboratorium. Pers
Laboratorium Cold Spring Harbor. New
York. 17.
Saif, YM 2011. Penyakit Unggas. Edisi 12., Iowa,
John-Wiley and Sons Publishing Inc. 87-93.
Shirvan, AS dan Mardani, K. 2014. Deteksi
Molekuler Virus Infectious Bronchitis dan
Newcastle Disease pada Ayam Broiler
dengan Gejala Respirasi Menggunakan
Duplex RT-PCR. Forum Penelitian Veteriner,
5(4): 319 – 323
Singh, K., Jindal, N., Gupta, SL, Gupta, AK dan
Mittal D. 2005. Deteksi Genom Virus
Newcastle Disease dari Lapangan
 Wabah di Unggas dengan Transkripsi
Terbalik
– Reaksi Rantai Polimerase. Jurnal
Internasional Ilmu Unggas, 4(7): 472-475.
Wibowo, MH, Untari, T. dan Wahyuni, AETH
Tabbu, CR 2000. Penyakit Ayam dan
Penanggulangannya: Volume 1. Penerbit PT
Kanisius, Yogyakarta, 49-51.
Wibowo, MH dan Amanu, S. 2010. Perbandingan
beberapa Program Vaksinasi Penyakit
Newcastle pada Ayam Buras. Jurnal Sain
Veteriner, 28(1): 27-35.
2012. Isolasi, Identifikasi, Karakter Fisik,
Dan Biologis Virus Newcastle Disease Yang
Diisolasi Dari Kasus Lapangan. Jurnal Sain
Veteriner, 13(4): 425-433.