Rumus Hitungan Buffer KERIS MALARIA

A. Buffer untuk Produksi

1. RESEP MEDIA LB CAIR 1030 ml
a. Rumus asli
1 ml aquadest + 0,02 gram LB
b. Rumus 1050 ml
1050 ml aquadest + 21 gram LB
2. RESEP IPTG
a. Rumus asli stok IPTG 0,5 M
1 ml aquadest + 0,12 gram IPTG
b. IPTG 0,3 mM (hasil optimasi Produksi CIDR)
255 ml. 0,3 mM= x. 0,5 M
X= 153 ul
3. Buffer lisis (lisozim)
a. Resep stok lisozim 50 mg/ml
1 ml aquadest + 0,05 gram lisozim (bikin 2 ml)
Sehingga 2 ml aquadest + 0,1 gr lisozim
b. Lisozim 1 mg/ml dari stok 50 mg/ml
50 mg/ml . v1 = 1 mg /ml. 4 ml
V1= 80 ul (tapi kalau dikali 4 sampel butuh 320 ul)

4. Buffer ekstraksi immidazole 50 ml

4ml x 4 = 16 ml, bulatkan menjadi 50 ml, buat stock
NaCl 300 mM
NaH2PO4 50 mM
Immidazole 10 mM
Campurkan dengan 20 ml aquadest, aduk dengan stirer, ukur dengan PH meter,
tambah stok NaOH sampai PH 8, pindahkan ke gelas ukur, tambahkan aquadest
sampai volume mencapai 50 ml
5. Rumus SDS-PAGE Running buffer (mbak eka)
Tris base 1,5 gram
Glisin 7 gram
SDS 10 % 5 ml
Aquadest 100 ml
6. Rumus SDS-PAGE Larutan Staining
CBB 0,1 gr
Etanol 45 ml
Aquadest 45 ml
Asam asetat 10 ml
Total 100 ml
7. Larutan Dye Staining (tapi mbak eka gapake, pakenya aquadest digojok dikit, dimicrowave,
gojok, sampe bening)
Metanol 40 ml
 Asam asetat glasial 10 ml
Aquadest 50 ml
8. Stok NaOH 1 M 50 ml di falcon
2 gr NaOH (brp tablet?) + 50 ml aquadest

Rumus asal muasal hitungan rumus produksi

B. Buffer untuk Purifikasi Kromatografi Afinitas
BUFFER LYSIS (1 macam konsentrasi imidazole-> 10 mM)
Imidazole NaH2PO4 NaCl
(g) (g) (g) volume pelarut (ml)
0,03404 0,39005 0,8755 50

BUFFER WASHING (2 macam konsentrasi imidazole → 20 mM dan 80 mM)

Imidazole NaH2PO4 NaCl
(g) (g) (g) volume pelarut (ml)
0,013616 0,07801 0,1755 10
0,054464 0,07801 0,1755 10

BUFFER ELUTION (3 macam konsentrasi imidazole → 120 mM, 140 mM, dan
160 mM)
Imidazole NaH2PO4 NaCl
(g) (g) (g) volume pelarut (ml)
0,081696 0,07801 0,1755 10
0,095312 0,07801 0,1755 10
0,108928 0,07801 0,1755 10

Buffer diadjust dengan menggunakan NaOH dengan target PH 8.0

Rumus asal muasal hitungan buffer

NACL LISIS
KONSENTRASI VOLUME MR SATUAN GRAM
1 0,3 50 58,5 1000 0,8775
2 0,6 50 58,5 1000 1,755
3 0,9 50 58,5 1000 2,6325
4 1 50 58,5 1000 2,925

IMIDAZOL LISIS
KONSENTRASI VOLUME MR SATUAN GRAM
1 0,005 50 68,08 1000 0,01702
2 0,01 50 68,08 1000 0,03404
3 0,02 50 68,08 1000 0,06808

NAH2P04 LISIS
KONSENTRASI VOLUME MR SATUAN GRAM
1 0,05 50 156,02 1000 0,39005
2 0,05 50 156,02 1000 0,39005
3 0,05 50 156,02 1000 0,39005
 NACL WASHING
KONSENTRASI VOLUME MR SATUAN GRAM
1 0,3 10 58,5 1000 0,1755
2 0,6 10 58,5 1000 0,351
3 0,9 10 58,5 1000 0,5265
4 1 10 58,5 1000 0,585

IMIDAZOL WASHING
KONSENTRASI VOLUME MR SATUAN GRAM
1 0,01 10 68,08 1000 0,006808
2 0,02 10 68,08 1000 0,013616
3 0,04 10 68,08 1000 0,027232

NAH2PO4 WASHING
KONSENTRASI VOLUME MR SATUAN GRAM
1 0,05 10 156,02 1000 0,07801
2 0,05 10 156,02 1000 0,07801
3 0,05 10 156,02 1000 0,07801

NACL ELUSI
KONSENTRASI VOLUME MR SATUAN GRAM
1 0,3 10 58,5 1000 0,1755
2 0,6 10 58,5 1000 0,351
3 0,9 10 58,5 1000 0,5265
4 1 10 58,5 1000 0,585

IMIDAZOL ELUSI
KONSENTRASI VOLUME MR SATUAN GRAM
1 0,06 10 68,08 1000 0,040848
2 0,08 10 68,08 1000 0,054464
3 0,1 10 68,08 1000 0,06808
4 0,12 10 68,08 1000 0,081696
5 0,14 10 68,08 1000 0,095312
6 0,15 10 68,08 1000 0,10212
7 0,16 10 68,08 1000 0,108928
8 0,18 10 68,08 1000 0,122544
9 0,2 10 68,08 1000 0,13616

NAH2PO4 ELUSI
KONSENTRASI VOLUME MR SATUAN GRAM
1 0,05 10 156,02 1000 0,07801
2 0,05 10 156,02 1000 0,07801
3 0,05 10 156,02 1000 0,07801
C. RUMUS SDS PAGE

SDS PAGE
1. Running Buffer 5x (1 liter)
Tris Base 15 gr
Glisin 70 gr
SDS 10% 50 ml
Aquadest 1000 ml
2. Staining
CBB 0,1 gr
Ethanol 45 ml
Aquadest 45 ml
Asam asetat 10 ml
3. 10% APS
Bungkus ALFO
0,05 gr APS + 500 ul aquadest
4. 30% Acrylamid/ Bis
Bungkus ALFO
Acrylamid 15 gr
Bis Acrylamid 0,4 gr
Aquadest 50 ml
5. Buffer Sampel
Bungkus ALFO
Aquadest 5,4 ml
1,0 M Tris-Cl PH 6,8 0,6 ml
10% SDS 2 ml
Gliserol 1 ml
1% Bb 0,5 ml
6. 1,5 M Tris PH 8,8 (50 ml)
Tris Base 9,0855 gr
Tambahkan aquadest 30% dari volume akhir, adjust PH dengan HCl sampai PH 8,8 lalu
tambahkan aquadest hingga volume akhir mencapai 50 ml

7. 1,0 M Tris PH 6,8 (50 ml)

Tris Base 6,057 gr
Tambahkan aquadest 30% dari volume akhir, adjust PH dengan HCl sampai PH 6,8 lalu
tambahkan aquadest hingga volume akhir mencapai 50 ml
8. Stok HCl pekat (coba-coba)
5 ml HCl + 20 sampai 30 ml aquadest
9. Destaining (250 ml)
Methanol 100 ml
Asam asetat 25 ml
Aquadest 125 ml
10. Lower Gel 15 % (resep mbak Eka)
Aquadest 1225 ul
30% Akrilamid 2500 ul
1,5 M Tris PH 8,8 1300 ul
10% SDS 50 ul
10% APS 50 ul
TEMED 2 ul
11. Upper Gel (resep ala mbak Eka)
Aquadest 2100 ul
30% Akrilamid 500 ul
1,0 M Tris PH 6,8 380 ul
10% SDS 30 ul
10% APS 30 ul
TEMED 3 ul