Shun Kaneko ORCID iD: 0000-0003-2660-6580 Validasi klinis uji

imunokromatografi SARS-Cov-2 IgM / IgG dengan kohort Jepang Judul jangka

pendek: Validasi klinis SARS-Cov-2 Antibodi IgM / IgG Shun Kaneko1, Yoko

Nukui2, Takeshi Arashiro2, Yosibumi Aiso2, Maya Sugii2, Yoshiro Hadano2,

Kaoru Nagata3, Reiko Taki4, Ken Ueda3, Satoko Hanada4, Shinichiro Suzaki5,
Article

Naoshige Harada5, Yoshimi Yamaguchi6, Hiroyuki Nakanishi1, Masayuki

Kurosaki1, Masayuki Nagasawa7, Namiki Izumi1 1 Departemen

Gastroenterologi dan Hepatologi, Rumah Sakit Palang Merah Musashino, Tokyo,

Jepan

1 Departemen Pengendalian dan Pencegahan Infeksi, Tokyo Medical and Dental

Rumah Sakit Medis Universitas, Tokyo, Jepang Artikel ini telah diterima untuk

publikasi dan menjalani tinjauan sejawat penuh tetapi belum melalui proses

penyalinan, penyusunan huruf, paginasi dan proofreading, yang dapat

menyebabkan perbedaan antara versi ini dan Versi Catatan. Silakan kutip artikel

ini sebagai doi: 10.1002 / jmv.26363. 2 Departemen Kedokteran Umum, Rumah

Sakit Palang Merah Musashino, Tokyo, Jepang 3 Departemen Kedokteran Paru,

Rumah Sakit Palang Merah Musashino, Tokyo, Jepang 4 Departemen Perawatan

Darurat dan Intensif, Rumah Sakit Palang Merah Musashino, Tokyo, Jepang 5

Divisi Laboratorium Klinik, Rumah Sakit Palang Merah Musashino, Tokyo,

Jepang 6 Divisi Pengendalian dan Pencegahan Infeksi, Palang Merah Musashino

Rumah Sakit, Tokyo, Jepang Kontak informasi Alamat permintaan cetak ulang

ke: Namiki Izumi, M.D., Ph.D., Departemen Gastroenterologi dan Hepatologi,

Rumah Sakit Palang Merah Musashino 1-26-1, Kyonan-cho, Musashino-shi

This article is protected by copyright. All rights reserved.

Tokyo 180-8610, JAPAN. Tel: + 81-422-32-3111. Faks: + 81-422-32-9551. E-

mail: izumi012@musashino.jrc.or.jp (N.Izumi) Jumlah kata elektronik: 1515 kata

Jumlah gambar dan tabel: 1 gambar Konflik kepentingan Para penulis

menyatakan bahwa mereka tidak memiliki konflik kepentingan. Pernyataan

dukungan keuangan Studi ini tidak menerima dana bantuan khusus. Ucapan

Terima Kasih Para penulis menghargai kerja sama tim penanggulangan COVID-

19 dan staf pendukung di Rumah Sakit Palang Merah Musashino dan Tokyo

Medical and Dental Rumah Sakit Medis Universitas Nomor uji klinis Komite

Etik Rumah Sakit Palang Merah Musashino, dan Rumah Sakit Medis Universitas

Kedokteran dan Kedokteran Tokyo menyetujui penelitian ini, yang dilakukan

sesuai dengan Deklarasi Helsinki (nomor konfirmasi: 2020-444, M2020-029,

masing-masing).

Konsep dan desain studi: S.K, Y.N, M.N, dan N.I. Akuisisi data: T.A, Y.A, M.S,

Y.H, K.N, R.T, K.U, S.H, S.S, N.H, Y.Y, H.N, M.K dan M.N. Analisis dan

interpretasi data: S.K, Y.N, M.N dan N.I. Penyusunan naskah: S.K, Y.N, dan N.I.

Analisis statistik: S.K, Y.N dan M.N. Supervisi studi: N.I. Persetujuan akhir:

Semua penulis. Persetujuan untuk bertanggung jawab atas semua aspek

pekerjaan: Semua penulis. Abstrak Latar belakang: Penyakit coronavirus 2019

(COVID-19) telah menjadi ancaman kesehatan utama. Untuk mengatasi COVID-

19, metode diagnosis yang tepat sangat dibutuhkan. Tujuan dari penelitian ini

adalah untuk mengevaluasi secara klinis uji imunokromatografi emas koloidal

untuk antibodi IgM / IgG SARS-Cov-2 (Ab). Metode: Pasien yang dikonfirmasi

COVID-19 (n = 51) direkrut secara prospektif dari rumah sakit Palang Merah

Musashino dan Rumah Sakit Medis Universitas Kedokteran dan Gigi Tokyo
Medical, antara Maret dan Mei 2020. Dan spesifisitas analitik dinilai dengan

sampel serum pasien tanpa COVID- 19 (n = 100) dikumpulkan antara Agustus

hingga September 2019 sebelum SARS-CoV-2 pertama kali dilaporkan di Cina .

Hasil: Di antara pasien COVID-19, total 87 sampel serum diuji untuk uji

SARS-Cov-2 IgM / IgG Ab. IgM terdeteksi 71,0%, 86,9%, dan 83,3% pada

hari ke 8-14, 15-28,> 29 setelah onset gejala dan IgG terdeteksi masing-

masing dalam 81,6%, 87,0%, dan 94,4%. Sensitivitas IgM dan IgG Ab

setelah uji day8 secara signifikan lebih tinggi daripada sebelum day7,

masing-masing (p = 0,0016, 0,0003). Tidak ada hasil positif dalam 100

sampel serum dari pasien tanpa COVID-19. Kesimpulan: Uji SARS-Cov-2

IgM / IgG Ab memiliki sensitivitas 79,7% / 86,1% (8 hari setelah onset)

dan spesifisitas 100% pada populasi ini. Kata kunci COVID-19, uji

immunochromatography emas koloidal, antibodi IgM / IgG SARS-Cov-2

pengantar Penyakit coronavirus 2019 (COVID-19) pertama kali dilaporkan

di Wuhan, Cina pada Desember 2019, dan pecahnya COVID-19 telah

menjadi ancaman besar bagi tidak hanya China tetapi juga di seluruh dunia.
Pada 8 Juni 2020, lebih dari 6,93 juta kasus memiliki COVID-19 dan lebih

dari 400.000 kematian telah dilaporkan secara global1. Coronaviruses

(CoV) adalah keluarga besar virus yang menyebabkan penyakit dari flu

biasa hingga penyakit yang lebih parah seperti Sindrom Pernafasan Timur

Tengah (MERS) dan Sindrom Pernafasan Akut Parah (SARS). SARS-CoV-

2, penyebab COVID-19 adalah jenis baru yang belum pernah diidentifikasi

pada manusia.2 COVID-19 yang umum meliputi gejala pernapasan,

demam, sesak napas, dan kesulitan bernafas.3 Dalam kasus yang lebih

parah, infeksi menyebabkan pneumonia, sindrom pernapasan akut parah,

gagal ginjal, dan bahkan kematian. Berdasarkan tinjauan sistematis dan

meta-analisis, pasien yang lebih tua diidentifikasi berada pada perjalanan

penyakit yang fatal, dengan komorbiditas hipertensi dan diabetes yang

paling umum. yang dikaitkan dengan keparahan COVID-194,5. Acute

respiratory distress syndrome (ARDS) dan cedera jantung akut mungkin

menjadi hambatan utama bagi pasien untuk pemulihan pengobatan6. Untuk

menegakkan diagnosis COVID-19, analisis reaksi berantai reverse-

transcription polymerase (RT-PCR) dianggap sebagai standar saat ini.

Namun, itu membutuhkan peralatan khusus, protokol yang memakan waktu,

dan teknisi laboratorium. Poin paling penting adalah RT-PCR

membutuhkan sampel dari saluran pernapasan atas dan bawah, proses

pengumpulan sampel dan ekstraksi RNA meningkatkan risiko pajanan

terhadap tetesan virus. Hasil negatif palsu untuk mendiagnosis COVID-19

kadang-kadang diamati karena pengambilan sampel yang memadai dari

hidung atau tenggorokan sulit bagi beberapa pasien. Perkiraan saat ini dari

periode inkubasi berkisar 1-12,5 hari dengan median perkiraan 5-6 hari3,7.

Berdasarkan informasi dari penyakit coronavirus lainnya, seperti MERS dan

SARS, masa inkubasi SARS-CoV-2 bisa mencapai 14 hari. Antibodi anti-

SARS-CoV-2 plasma (Ab) pertama kali dilaporkan dalam plasma

pemulihan pada lima pasien yang pulih dari infeksi SARS-CoV-28. Baru-

baru ini, beberapa tes komersial yang mendeteksi IgM / IgG Ab terhadap

SARS-CoV2 miliki menjadi tersedia untuk digunakan dalam pengaturan

klinis 9,10. Namun, kegunaan klinisnya belum dievaluasi secara

menyeluruh. Selain itu, penting untuk mengevaluasi jumlah pasien yang

terinfeksi COVID-19 di daerah tertentu dan untuk menetapkan strategi

untuk mencegah penyebaran infeksi virus untuk populasi tertentu. Dalam

penelitian ini, kami menganalisis akurasi diagnostik SARS-Cov-2 Uji IgM /

IgG Ab; Kaset Uji Ab 2019-nCoV (Emas Koloid) (INNOVITA, Beijing,

Cina). Sampel dikumpulkan dari pasien dengan infeksi COVID-19 akut

yang dikonfirmasi oleh RT-PCR dan pasien yang tidak terinfeksi yang

dirawat oleh penyakit lain pada bulan Agustus 2019, sebelum penyebaran

COVID-19.

infeksi. Metode 1. Sampel Sampel positif dari pasien dengan COVID-19 51

pasien dengan infeksi COVID-19 akut yang dirawat di Rumah Sakit Palang

Merah Musashino dan Rumah Sakit Medis Universitas Kedokteran dan

Gigi Universitas Tokyo, antara Maret dan Mei 2020 dilibatkan dalam

penelitian ini. Sebanyak 87 sampel serum diuji untuk uji SARS-Cov-2

IgM / IgG Ab. Semua pasien diperiksa oleh RT-PCR untuk SARS-CoV2

menggunakan apusan faring dan nasofaring yang dikumpulkan di lembaga

kesehatan umum atau rumah sakit sesuai dengan metode yang

direkomendasikan secara nasional di Jepang11. Informasi klinis

dikumpulkan dari catatan medis. Sampel negatif dari pasien dengan non-

COVID-19 Spesifisitas analitik uji SARS-Cov-2 IgM / IgG Ab dinilai

menggunakan sampel serum yang dikumpulkan antara Agustus hingga

September 2019 dari pasien yang dirawat sebelum SARS-CoV2 pertama

kali dilaporkan di Cina. Sampel serum ini (n = 100) dikumpulkan dari

beberapa penyakit seperti infeksi virus hepatitis C dan seterusnya di rumah

sakit Palang Merah Musashino dan Rumah Sakit Medis Universitas

Kedokteran dan Kedokteran Universitas Tokyo, yang berfungsi sebagai

kontrol negatif. Informasi klinis dikumpulkan dari catatan medis, dan

semua sampel serum disimpan pada -80 ℃ sebelum digunakan dalam

pengujian. 2. Uji serum antibodi Serum SARS-Cov-2 IgM / IgG Ab assay

dianalisis menggunakan 2019-nCoV Ab Test Cassette (Emas Koloid)

(INNOVITA, Beijing, China) sesuai dengan protokol pabrikan. Singkatnya,

10μL serum / plasma atau 20uL seluruh darah ditambahkan ke sampel

dengan baik. Selanjutnya, 80uL (2 tetes) buffer sampel ditambahkan ke

sampel yang sama, dan hasilnya ditafsirkan dalam waktu 15 menit setelah

inkubasi. Kehadiran hanya garis kontrol (C) menunjukkan hasil negatif;

Kehadiran garis kontrol (C) dan IgM atau IgG (T) menunjukkan hasil

positif untuk IgM atau IgG Ab, masing-masing. 3. Definisi hari sejak awal

Semua pasien yang termasuk dalam penelitian ini memiliki gejala klinis

seperti demam, batuk, diare, malaise, dan / atau takipnea. Kami menentukan

hari-hari pengumpulan sampel serum Ab setelah timbulnya gejala pertama.

4. Analisis statistik Tes Chi-squared dan Fisher digunakan untuk

membandingkan variabel kategori. Signifikansi ditetapkan pada P <0,05.

Perangkat lunak GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA,

USA) digunakan untuk menganalisis signifikansi statistik. 5. Pernyataan

etis Penelitian ini telah disetujui oleh Komite Etik Rumah Sakit Palang

Merah Musashino, dan Rumah Sakit Medis Universitas Kedokteran dan

Kedokteran Tokyo yang dilakukan sesuai dengan Deklarasi Helsinki

(nomor konfirmasi: 2020-444, M2020-029, masing-masing).

Hasil Dalam 51 kasus COVID-19 yang dikonfirmasi, usia rata-rata adalah

63 (25-95) tahun, 37 pasien adalah laki-laki (72,5%). Tidak ada pasien

tanpa gejala dengan COVID-19. Total 87 sampel serum diuji untuk uji Ab

IgM / IgG COVID-19. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1,

sensitivitas tergantung pada hari-hari sejak awal. IgM Ab terdeteksi 0%,

16.7%, 71.0%, 86.9% dan 83.3% pada 0-4days, 4-7days, 8-14days, 15-

28days dan> 29days setelah onset gejala, sedangkan IgG Ab terdeteksi 0%,

16.7 %, 81,6%, 87,0% dan 94,4%, masing-masing. Sensitivitas uji SARS-

Cov-2 IgM / IgG Ab setelah> 8 hari dari onset secara signifikan lebih tinggi

daripada sebelum hari ke 7, masing-masing (p = 0,0016, 0,0003, uji Chi-

square). Untuk menyelidiki spesifisitas, kami menguji sampel serum kontrol

negatif yang dikumpulkan dari Agustus hingga September pada 2019 dari

pasien yang dirawat sebelum SARS-CoV2 pertama kali dilaporkan di Cina.

Sebagai hasilnya, tidak ada hasil positif dalam 100 sampel pasien.
Pengujian ini mencapai spesifisitas 100%. Uji SARS-Cov-2 IgM / IgG Ab

memiliki sensitivitas 79,7% (63/79) / 86,1% (68/79) (setelah> 8 hari sejak

onset) dan spesifisitas 100%

Diskusi Studi ini memberikan bukti bahwa uji Ab SARS-Cov-2 IgM / IgG

berguna untuk pasien berdasarkan kohort Jepang dalam pengaturan klinis

dunia nyata. Meskipun RT-PCR untuk spesimen pernapasan atas telah

menjadi tes standar untuk COVID-19, kadang-kadang memiliki

keterbatasan karena bahan teknis, risiko paparan pengambilan sampel dan

mengambil waktu untuk hasilnya. Selang waktu sejak onset mempengaruhi

sensitivitas tes dan dapat menyebabkan hasil negatif palsu. Beberapa

laporan menunjukkan bahwa sensitivitas RT-PCR untuk spesimen

pernapasan atas berkurang setelah sekitar 10 hari sejak onset12,13. Di sisi

lain, dianggap bahwa penyakit ini menjadi parah dalam waktu sekitar 1

minggu setelah onset7. Dalam kasus yang lebih parah, tampaknya proses

masuk ke unit perawatan intensif akan diikuti setelah 10 hari.7, 14 Temuan

ini menunjukkan bahwa diagnosis dengan RT-PCR saja dapat diabaikan

Kasus covid19.Recently, SARS-Cov-2 IgM/IgG Ab dievaluasi dengan

enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) berdasarkan protein

nukleokapsid rekombinan dari SARS-CoV-2 terdeteksi dalam serum sedini

4 hari setelah onset gejala. Sensitivitas dan spesifisitas IgM Ab dilaporkan

sebagai 77,3%, dan 100%, sementara itu 83,3% dan 95,0% untuk IgG Ab,

masing-masing9. Baru-baru ini, Imai et al. melaporkan bahwa IgM Ab

terdeteksi pada 27,8%, 48,0%, dan 95,8% dari spesimen yang dikumpulkan

dalam 1 minggu, 1-2 minggu, dan> 2 minggu setelah onset gejala,

sedangkan IgG Ab terdeteksi pada 3,3%, 8,0%, dan 62,5%, masing-

masing10. Dari hasil ini, mereka menyimpulkan bahwa uji IgM / IgG Ab

dapat dideteksi pada tahap pertengahan dan kemudian penyakit,

menunjukkan peran penting dalam diagnosis COVID-19 sebagai

pendekatan pelengkap untuk uji asam nukleat virus.

Dalam penelitian ini, uji SARS-Cov-2 IgM / IgG Ab memiliki 79,7% (63/79) /

86,1% (68/79) sensitivitas (setelah> 8 hari sejak onset) dan spesifisitas 100%

(Gambar.1). Ini

hasil mendukung laporan ini9,10.

Penelitian ini memiliki beberapa keterbatasan. Pertama, meskipun penelitian

menunjukkan kegunaan uji SARS-Cov-2 IgM / IgG Ab sebagai pengaturan

klinis, hasil ini berada di populasi Jepang. Mereka mungkin tidak dapat

beradaptasi dengan perbedaan ras. Laporan dan validasi studi di seluruh dunia

diharapkan. Kedua, periode pengamatan dan jumlah pasien mungkin tidak cukup

untuk perbandingan yang solid. Bahkan lebih baik jika ada hasil RT-PCR pada
waktu yang sama atau perbandingan sampel yang berasal dari pasien yang sama

pada waktu yang bergantung pada waktu. Meskipun ada laporan bahwa mereka

tidak memiliki cross-antibodi dengan coronavirus lain, kami belum benar-benar

mengkonfirmasi cross-antibodi dalam penelitian ini. Akhirnya, uji SARS-Cov-2

IgM / IgG tidak tes buta lengkap. Ini dapat menyebabkan kecenderungan

subyektif, meskipun tes dilakukan sekaligus untuk banyak sampel termasuk

sampel yang disimpan mungkin tidak mempengaruhi.

Kesimpulannya, uji Ab SARS-Cov-2 IgM / IgG memiliki spesifisitas 100% dan

berguna untuk deteksi COVID-19 terutama setelah 8 hari sejak onset. Pengujian

ini akan diterima secara luas sebagai metode yang mudah dilakukan, cepat, dan

tinggi. Kombinasi SARS-Cov-2 IgM / IgG antibay assay dan RT-PCR dapat

berkontribusi diagnosis COVID-19 yang tepat. Pernyataan Ketersediaan Data

Data tersedia berdasarkan permintaan karena batasan privasi / etika. Referensi 1.

Organisasi Kesehatan Dunia. Penyakit coronavirus (COVID-19). Situasi

Melaporkan-140.https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/situation-

reports /20200608-covid-19-sitrep-140.pdf?sfvrsn=2f310900_2 (diakses, 9 Juni,

2020) 2. Zhu N, Zhang D, Wang W, dkk. Novel Coronavirus dari Pasien dengan

Pneumonia di Cina, 2019. N Engl J Med. 2020; 382 (8): 727-733. 3. Guan WJ,

Ni ZY, Hu Y, dkk. Karakteristik Klinis Coronavirus Penyakit 2019 di Cina. N

Engl J Med. 2020; 382 (18): 1708-1720. 4. Zhou F, Yu T, Du R, et al. Kursus

klinis dan faktor risiko kematian pasien rawat inap dewasa dengan COVID-19 di

Wuhan, Cina: studi kohort retrospektif. Lanset. 2020; 395 (10229): 1054-1062. 5.
Zheng Z, Peng F, Xu B, dkk. Faktor risiko kasus COVID-19 yang kritis & fana:

Tinjauan literatur sistematis dan meta-analisis. J Menginfeksi. 2020 6. Hu Y, Sun

J, Dai Z, et al. Prevalensi dan keparahan penyakit virus korona 2019 (COVID-

19): Tinjauan sistematis dan meta-analisis. J Clin Virol. 2020; 127: 104371. 7. Li

Q, Guan X, Wu P, dkk. Dinamika Transmisi Awal di Wuhan, Cina, dari Novel

Coronavirus-Infected Pneumonia. N Engl J Med. 2020; 382 (13): 1199-1207. 8.

Zhang L, Pang R, Xue X, dkk. Tingkat antibodi virus Anti-SARS-CoV-2 dalam

plasma enam donor yang telah pulih dari COVID-19. Penuaan (Albany NY).

2020; 12 (8): 6536-6542. 9. Xiang F, Wang X, He X, et al. Deteksi Antibodi dan

Dinamis Karakteristik pada Pasien dengan COVID-19. Clin Infect Dis. 2020 10.

Imai K, Tabata S, Ikeda M, dkk. Evaluasi klinis dari pemeriksaan antibodi

imunokromatografi IgM / IgG dan CT scan dada untuk diagnosis COVID-19. J

Clin Virol. 2020; 128: 104393. 11. Shirato K, Nao N, Katano H, et al.

Pengembangan Metode Diagnostik Genetik untuk Novel Coronavirus 2019

(nCoV-2019) di Jepang. Jpn J Infect Dis. 2020 12. Pan Y, Zhang D, Yang P,

Poon LLM, Wang Q. Viral load SARS-CoV-2 dalam sampel klinis. Lancet Infect

Dis. 2020; 20 (4): 411-412. 13. Zou L, Ruan F, Huang M, dkk. Viral load SARS-

CoV-2 di Atas Spesimen Pernafasan Pasien Yang Terinfeksi. Dalam: N Engl J

Med. Vol 382.2020: 1177-1179.Huang C, Wang Y, Li X, et al. Clinical features

of patients infected with

2019 novel coronavirus in Wuhan, China. Lancet.

2020;395(10223):497-506.