NEUROLOGI EKSPERIMENTAL 137, 49–65 (1996)
Pasal No. 0006
Dukungan Astroglia Reaktif Dendritik Primer tetapi Tidak Pertumbuhan
Aksonal dari Neuron Kortikal Tikus secara inVitro
PETER D. LE R OUX* DAN THOMAS A. REH†
*Departemen Bedah Saraf, Universitas New York, New York, New York 10016; dan †Departemen Struktur Biologi, Universitas Washington,
Seattle, Washington 98195
Astrosit reaktif dianggap sebagai hambatan untuk
pertumbuhan kembali akson setelah cedera pada sistem
saraf pusat mamalia. Pertumbuhan akson dan dendrit,
bagaimanapun, tampaknya berbeda dikendalikan oleh
astrosit normal secara in vitro. Untuk menentukan apakah
reactive astrocytes berbeda dalam kemampuan mereka
untuk mendukung akson atau dendrit, neuron kortikal tikus
embrionik (E18) dikultur dengan sel astroglial tikus P4 dan
P12 yang berasal dari korteks normal atau lesi. Setelah 5
hari in vitro, akson dan dendrit keluar dari neuron terisolasi
diukur dengan teknik imunohistokimia pelabelan ganda.
Astrosit reaktif mampu mempertahankan pertumbuhan
dendrit primer, terutama jumlah dendrit primer.
Pemanjangan akson, bagaimanapun, berkurang secara
signifikan pada astrosit neonatal dan astrosit reaktif yang
lebih matang. Hasil ini menunjukkan bahwa astrosit reaktif
dapat menunjukkan mekanisme terpisah untuk mengontrol
pertumbuhan dendrit dan akson. r 1996 Pers Akademik,
Inc.
PERKENALAN
Karakteristik astrosit yang mencolok adalah respons
kuat mereka terhadap berbagai penghinaan sistem saraf
pusat (SSP) seperti trauma atau iskemia. Respon terhadap
cedera, yang dikenal sebagai astrogliosis reaktif,
dibedakan oleh hiperplasia,hipertrofi, ekstensi proses, dan
peningkatan ekspresi glial fibrillary acid protein (GFAP)
dalam astrosit (3, 6, 14, 45, 77). Karakteristik astrosit
reaktif yang ditemukan in vivo juga ditunjukkan oleh
astrosit yang terluka dalam kultur (50, 51, 58, 64, 68, 83).
Perubahan dramatis ini dianggap memiliki berbagai
konsekuensi fungsional yang mungkin bermanfaat dan
merugikan SSP yang terluka.
Beberapa baris bukti menunjukkan bahwa astrosit
reaktif tidak mendukung pertumbuhan neurit dan bahkan
mungkin menjadi hambatan bagi pertumbuhan kembali
aksonal (42, 60). Pertama, analisis ultrastruktural akson
yang tumbuh kembali menunjukkan penangkapan
pertumbuhan di sekitar astrosit reaktif (35, 50). Kedua,
astrosit reaktif in vivo dapat mengekspresikan molekul
permukaan yang membatasi ekstensi neurit in vitro (35,
50). Ketiga, eksplan korteks tikus yang terluka (64) dan
garis sel astrosit yang mengekspresikan karakteristik
permukaan sel astroglial reaktif in vivo (28) kurang
efektif daripada astrosit neonatal dalam mempromosikan
neurit outgrowth in vitro.
Pertumbuhan dendrit dan renovasi, berbeda dengan
pertumbuhan akson, telah diamati berlanjut pada sistem
saraf orang dewasa (12), dan setelah cedera proliferasi
dendritik dan hipertrofi diperkirakan berperan dalam
pemulihan fungsi saraf (12, 33). Selama perkembangan,
pertumbuhan akson dan dendrit tampaknya diatur secara
berbeda oleh astrosit normal (8, 17, 36, 62, 63); kami
bertanya-tanya, oleh karena itu, apakah perbedaan dalam
pertumbuhan akson dan dendrit yang terjadi pada SSP
yang terluka mungkin, sebagian, REPmembenci
perbedaan dalam kemampuan astrosit reaktif untuk
mendukung pertumbuhan jenis proses yang berbeda ini.
Untuk menguji hipotesis ini, kami mengukur
pertumbuhan neurit dari neuron kortikal tikus embrionik
yang dikultur pada monola monola astroglial normal atau
reaktifmenggunakan teknik kuantitatif, morfologi, dan
imunohistokimia. Data menunjukkan bahwa untuk neuron
kortikal tikus embrionik in vitro astrosit reaktif
menunjukkan kemampuan yang berkurang untuk
mendukung pertumbuhan akson, tetapi mampu
mendukung pertumbuhan punjungdendritik pr imary.
BAHAN DAN METODE
Kultur Sel
Astroglia. Astrosit kortikal serebral diperoleh dari Hari
ke-4 pascakelahiran atau 12 anak tikus. Jaringan
meningeal dan materi putih sebanyak mungkin
dikeluarkan dalam larutan garam seimbang Hanks steril
(HBSS). Potongan-potongan halus dari korteks serebral
frontal yang dicaci disosiasi pada perangkat gemetar
dalam HBSS bebas kalsium dan magnesium yang
mengandung 0,25% tripsin pada 37 ° C selama 20 menit.
Pada akhir inkubasi, tripsin tidak aktif dengan 0,5 ml
serum sapi janin. Sel-sel dikumpulkan dengan sentrifugasi
(1500 rpm, 5 menit) dan ditangguhkan kembali dalam 2 ml media segar [DMEM dan Hams F-12 (GIBCO, Grand
Island, NY), 10% betis
49 0014-4886/96 $ 12,00
Hak cipta r 1996 oleh Academic Press, Inc. Semua hak reproduksi dalam bentuk apa pun dilindungi undang-undang.
50 LE ROUX DAN REH
serum (GIBCO), dan penisilin/streptomisin]. Sel yang
terkumpul dipisahkan dengan triturasi, dilapisi (sekitar 1 3 10
5
sel / ml) dalam labu kultur jaringan plastik 25 ml, dan
diinkubasi dalam 10% serum yang mengandung medium
sampai mereka mencapai pertemuan (10 hari). Kultur
astroglial yang dimurnikan diperoleh seperti yang dijelaskan
sebelumnya (36): (1) Sel-sel yang melekat secara longgar
dihilangkan dengan mengocok labu semalaman (250 rpm
selama 18 jam pada 37 ° C). (2) Sel-sel yang menempel yang
tersisa dicuci dalam HBSS, kemudian terkena 0,25% tripsin
dalam Ca 2 1 / Mg 2 1-bebas HBSS selama 30 s dan
diinkubasi dalam Ca 2 1 / Mg 2 1-bebas HBSS pada 37 ° C
selama 5 menit. Sel-sel terpisah lebih lanjut dibuang. (3) Sel-
sel penganut yang tersisa dikeluarkan dari labu setelah
inkubasi dalam Ca 2 1 / Mg2 1-bebas
HBSS mengandung 0,1% tripsin pada suhu 37 ° C selama 5
menit (4) Setelah inkubasi ini, tripsin diinaktivasi dengan
serum sapi janin dan sel-sel yang tersisa dibilas dalam media
yang mengandung serum dan terkonsentrasi dengan
sentrifugasi (1500 rpm, 5 menit). Sel-sel kemudian
ditangguhkan kembali dalam serum 10% yang mengandung
media, dilapisi (sekitar 1 3 10 5 sel / ml) ke poli-D-lisin (50-
100 μg / ml) -dilapisi penutup kaca atau filter 0,4-μm
(Millicell), ditempatkan di sumur individu dari pelat 24-sumur,
dan diizinkan untuk membentuk monolayer konfluen (2 hari).
Meningeal (fibroblast) monolayers berasal dari meninges P4
atau P12 pup tikus meninges dan disiapkan seperti dijelaskan
di atas. Neuron kortikal tikus diperkenalkan setelah monolayer
konfluen terbentuk. Untuk semua percobaan kokultur, sel-sel
dipertahankan dalammedia yang didefinisikan secara hemik
seperti yang dijelaskan di bawah ini untuk kultur neuronal
yang terdisosiasi.
Astroglia reaktif. Astrosit reaktif diperoleh dari anak tikus
P4 atau P12 yang telah menerima lesi kortikal tembus, di
bawah anestesi, masing-masing pada P1 atau P9. Setelah
mengeluarkan meninges, serangkaian luka tusukan hingga
kedalaman 3-5 mm dibuat dengan jarum 27-gauge yang
dipanaskan api di korteks frontal kiri. Luka panjangnya sekitar
5 mm dengan lebar 3 mm. Pendarahan dihentikan dengan
gelfoam (Upjohn) dan sayatan ditutup . Setelah penghangatan
kembali, hewan dikembalikan ke ibu menyusui. Hewan
nonlesi digunakan sebagai kontrol karena beberapa penelitian
telah menunjukkan perubahan glial reaktif, dengan berbagai
tingkat keparahan, di daerah distal otak terhadap lesi, termasuk
dibelahan kon tralateral (2, 24, 53, 74). Monolayer yang
dimurnikan disiapkan menggunakan teknik yang sama seperti
yang dijelaskan untuk kultur astrosit di atas.
Neuron. Populasi neuron kortikal serebral terdisosiasi yang
sangat diperkaya disiapkan dari tikus E18 Balb / c. Korteks
serebral frontal diisolasi dan meninges dihapus dalam HBSS
steril. Jaringan dicincang halus, ditempatkan dalam 5 ml Ca 2
1 / Mg 2 1-free HBSS yang mengandung 0,5 ml larutan tripsin
2,5
%, dan diinkubasi selama 10 menit pada perangkat gemetar
pada 37 ° C.At akhir inkubasi, tripsin tidak aktif dengan
menambahkan 0,5 ml serum sapi janin. Sel-sel kemudian
dikumpulkan dengan sentrifugasi (1000 rpm, 5 menit) dan
ditangguhkan kembali dalam media segar (2 ml) yang terdiri
dari DMEM: F12 (tanpa glutamat atau aspartat; GIBCO)
dilengkapi dengan insulin (25 μg / ml), transferin (100 μg /
ml), putresin (60 μ M), selenium (30 n M), progesteron (20
nM), dan penisilin / s treptomycin. Pelet ditriturasi ke suspensi
sel tunggal melalui pipet Pasteur yang dipoles api dan dilapisi
pada kepadatan rendah (1, 3, 10, 4 sel / ml) pada berbagai
monolayer astroglial (lihat di atas) dalam pelat kultur 24-
sumur. Untuk semua percobaan,neuron kor tikal dipertahankan
selama 5 hari dalam media bebas serum (di atas). Sel tumbuh
pada suhu 37 ° C di atmosfer 5% CO 2. Kelangsungan hidup
neuron diuji dengan mengukur efisiensi pelapisan neuron yang
dimurnikan pada 5 hari in vitro (div) menggunakan teknik
morfologis dan oksitokimia imun. Jumlah neuron yang masih
hidup dihitung secara mikroskopis dan dinyatakan sebagai
persentase dari jumlah sel yang dilapisi.
Imunohistokimia
Jenis sel yang berbeda dalam monolayer glial diidentifikasi
menggunakan antibod berikut: anti-GFAP (Boeringer
Mannheim, Indianapolis, IN; 1:100),antivimentin (Boeringer
Mannheim; 1:100), OX-42 (Harlan Bioproducts for Science,
Indianapolis IN; 1:100), A2B5 (supernatan hibridoma; Koleksi
Jenis Jaringan Amerika, Rockville, MD; 1:10), Thy 1.1 (asites
klon OX7; Cedar Lane, Hornby, Ontario), dan antiserum
galactocerebroside (Gal-C; Chemicon, Temecula, CA; 1:50).
Akson dan dendrit diidentifikasi seperti yang dijelaskan
sebelumnya (36). Badan sel saraf tikus dan neurit diberi label
denganantibodi monoklonal spesifik neuron mous e, M6 (garis
sel hibridoma yang disumbangkan dengan murah hati oleh Dr.
C. Lagenaur, University of Pittsburgh, Pittsburgh; 1:10).
Akson diidentifikasi dengan antiserum poliklonal kelinci
terhadap protein neurofilamen 200-kDa (NF-H; Sigma; 1:200).
Antibodi monoklonal terhadap protein terkait mikrotubulus 2
(MAP 2; Boeringer Mannheim; 1:100) digunakan sebagai
penanda spesifik dendrit.
Sebelum immunostaining, coverslips diperbaiki dalam
paraformaldehida 4% yang mengandung sukrosa 4% (pH 7,4)
selama 60 menit a t 20 ° C, dicuci tiga kali dalam buffer fosfat
0,1 M (PBS), dan kemudian diinkubasi dalam 0,1 M PBS
yang mengandung albumin serum sapi 1% (Sigma) atau 0,05%
Triton X-100 (0,1 M PBS, 1% albumin serum sapi) selama
30 menit pada20 ° C. Sel diinkubasi dengan bau antib primer
yang diencerkan dalam PBS atau 0,3% Triton X selama 1 jam
pada suhu 20 ° C. Setelah dicuci tiga kali dalam PBS yang
mengandung 4% serum kambing (Sigma), antibodi primer
divisualisasikan dengan menerapkan antibodi terkonjugasi
fluorescein atau rhodamin (1:200 pada PBS, 1 jam, 20 ° C)
menggunakan teknik imunofluoresensi langsung atau tidak
langsung. Kelalaian antibodi primer menghilangkan
 GLIA REAKTIF MENDUKUNG PERTUMBUHAN DENDRIT
imunoreaktivitas yang diamati pada berbagai kultur. Kultur
immunostained dicuci di PBS dan dipasang ke slide kaca
dalam larutan pemasangan berair (Fluromount).
Analisis Pertumbuhan Proses Neuron Kortikal
Pertumbuhan neurit, diidentifikasi oleh imunoreaktivitas
M6-, NF-H-, atau MAP 2 dianalisis setelah 5 hari in vitro
(Gambar 1 dan 2). Hanya neuron terisolasi yang badan sel atau
proses tidak bersentuhan dengan neuron lain yang dianalisis.
Sebanyak 100 neuron yang dipilih secara acak dari tiga
percobaan dari setiap kondisi diperiksa. Gambar fluorescent
dari neuron direkam dengan gambar intensifier digabungkan
ke kamera video CCD (Analisis Gerak, Eugene, OR) dan
dianalisis dengan program pemrosesan gambar Macintosh II
(Image Analyst; Automax, Billerica, MA). Neuron diperiksa
pada perbesaran gambar akhir 4003 dan panjang neurit diukur
dengan menelusuri panjang total neurit yang memanjang dari
sel tubuh. Panjang yang direkam dikalibrasi pada perbesaran
yang sama menggunakan mikrometer geser mikroskop.
Analisis signifikansi statistik dari setiapperbedaan yang
diamati antara monolayer dilakukan dengan menggunakan
ANOVA, uji t tidak berpasangan Student, atau prosedur
Mann-Whitney U jika berlaku.
HASIL
Karakterisasi Monolayer Seluler
Monolayer seluler ditandai dengan antibodi spesifik sel (Fig.
3). Mayoritas sel dalam monolayer kortikal yang belum
matang (P4) dan lebih matang (P12) menunjukkan
karakteristik morfologis dan imunologis astrosit tipe 1 secara
in vitro (Tabel 1). Secara kualitatif, astrosit P12 menunjukkan
GFAP immunolabeling yang lebih kuat. Mayoritas sel yang
diperoleh dari korteks lesi adalah astrosit reaktif (Tabel 1,
Gambar 4). Astrosit reaktif lebih besar, memperpanjang lebih
banyak proses, dan secara kualitatif lebih kuat diberi label
GFAP daripada glia normal. Tidak ada organisasi untuk proses
yang diuraikan oleh astrosit reaktif. Hipertrofi dan lobulasi inti
diamati pada beberapa sel. Astrosit yang diperoleh dari korteks
P4 lesi menunjukkan respons reaktif ringan, sedangkan glia
reaktif yang diperoleh dari setan korteks P12menilai respons
yang lebih kuat.
Astrosit kortikal reaktif menunjukkan berkurangnya
kemampuan untuk mendukung pertumbuhan akson tetapi
tidak pertumbuhan dendrit primer
Perbedaan morfologi yang signifikan diamati ketika output
neurit dari neuron kortikal yang tumbuh pada astrosit reaktif
dibandingkan dengan pertumbuhan neurit pada astrosit normal
yang berasal dari hewan P4 (Gambar 4, 5, dan 6). Setelah 5
51
neuron div biasanya diperpanjang proses yang panjang dan
beberapa proses yang lebih pendek. Pada monolayer astrositik
reaktif, neurit tidak follow kursus tertentu dan diperluas
seragam atas array serampangan proses astrositik. Karena
neuron dilapisi pada kepadatan rendah, seluruh panjang akson
individu dan dendrit primer dapat diikuti dan diukur. Panjang
kapak neuron kortikalberkurang ketika neuron dilapisi pada
astrosit reaktif P4 (P, 0,001; Buah ara. 4, 5, dan 6); 93,8%
akson mencapai panjang lebih besar dari 150 μm ketika
tumbuh pada astrosit kortikal P4 normal, sedangkan 28,5%
akson mencapai panjang lebih besar dari 1 50 μm ketikaneuron
tumbuh pada monolayer astroglial reaktif P4. Berbeda dengan
pertumbuhan akson, jumlah dendrit primer, panjang dendrit
primer, dan total output dendritik primer dari neuron yang
tumbuh pada astrosit yang berasal dari lesi P4 atau korteks
normal serupa (Gambar 4, 5, dan 6).
Astrogliosis reaktif lebih kuat pada hewan yang lebih
dewasa (3, 6, 14, 48, 49, 64). Untuk menentukan apakah
respons astrositik reaktif yang lebih kuat dikaitkan dengan
atenuasi elaborasi neurit yang lebih besar, pertumbuhan akson
dan dendrit dari neuron kortikal dikuantifikasi pada astrosit
yang berasal dari korteks tikus P12 lesi atau normal (Gambar
6). Pada astrosit reaktif P12 terjadi penurunan pertumbuhan
akson yang signifikan, semua akson panjangnya kurang dari
150 μm. Pengurangan panjang akson pada astrosit reaktif P4
atau resaktif P12 dibandingkan dengan astrosit normal pada
usia yang sama, bagaimanapun, tidak berbeda (P. 0,05).
Panjang dendrit primer individu yang diuraikan oleh neuron
pada astrosit reaktif P4 atau P12 tidak berbeda secara
signifikan (P . 0,05); namun, pengurangan panjang rata-rata
dibandingkan dengan astrosit normal pada usia yang sama
lebih besar pada astrosit reaktif P12 (P, 0,001). Jumlah dendrit
primer dan output dendrit total yang diamati pada astroglia
reaktif P12 mirip dengan yang diamati dari neuron yang
tumbuh pada astrosit P4 dan P12 normal.
Astrosit reaktif dapat melepaskan faktor-faktor difusi yang
mendukung pertumbuhan neurit
Penyelidikan sebelumnya telah menunjukkan bahwa sel
glial normal mengeluarkan faktor pemicu neurit yang dapat
difusikan (30, 36, 59, 62, 63). Untuk menentukan apakah
astroglia dewasa dan reaktif juga melepaskan faktor pendorong
neurit, kami membandingkan jumlah panjangneurit dari
neuron kortikal yang tumbuh pada monolayer astroglial
dengan yang tumbuh dalam sistem kokultur nonkontak (36) di
mana astroglia terus mengkondisikan medium. Neuron kortikal
tikus embrionik dilapisi pada kepadatan rendah ( 1 3 10 4 sel /
ml) langsung ke slip penutup polilisin dalam media yang
didefinisikan secara kimia. Sel astroglial berasal dari normal
atau lesi
52 LE ROUX DAN REH

ARA. 1. Neuron dan proses diidentifikasi dengan menggunakan antibodi spesifik untuk protein sitoskeletal. Fotomikrograf fluoresen yang sesuai dari neuron
kortikal tikus E18 tumbuh pada astroglia kortikal P4 selama 5 hari secara in vitro dan diberi label dengan (a dan c) MAP 2, (b) NF-H, dan (d) M6 seperti yang
dijelaskan di bawah Bahan dan Metode. Pewarnaan MAP 2 hadir di badan sel (panah besar), dendrit (panah kecil), dan akson proksimal (panah kecil). Akson yang
tersisa tidak mengandung MAP2 yang terdeteksi (panah besar). Ada pewarnaan intensif NF-H (b) di akson (panah besar), tetapi sedikit label terdeteksi di
badan sel (panah besar) dan dendrit (panah kecil). Pelabelan M6 (d) hanya ditemukan di neuron tikus dan didistribusikan pada permukaan sel soma (panah
besar) dan semua proses. (Skala bar, 10 μm).
 GLIA REAKTIF MENDUKUNG PERTUMBUHAN DENDRIT 53

ARA. 2. Karakteristik imunohistokimia akson. Fotomikrograf fluoresen yang sesuai dari akson yang diperpanjang oleh neuron kortikal tikus E18 tumbuh
selama 5 hari secara in vitro dan diberi label dengan (a) M6, (b dan d) MA P2, dan (c) NF-H. Ekspresi M6, dengan tambalan pelabelan kontinu yang
bergantian dengan pewarnaan punctat, terdeteksi di seluruh akson, termasuk kerucut pertumbuhan (a). Pelabelan NF-H hadir sebagai pewarnaan kontinu di
sepanjang seluruh akson (c). PETA 2 immu noreaktivitas tidak ada dalam akson atau kerucut pertumbuhan aksonal (b dan d). Kadang-kadang imunoreaktivitas
MAP 2 dapat dideteksi di akson proksimal. (Skala bar, 10 μm).
54 LE ROUX DAN REH

ARA. 3. Monolayer seluler dibuat dari korteks tikus normal atau lesi, atau meninges, seperti yang dijelaskan di bawah Bahan dan Metode. Untuk
mengkarakterisasi komposisi seluler monolayer, kultur diwarnai dengan pewarnaan nuklir, 4 8,6-diamido-2-fenil indol (DAPI; Sigma) dan antibodi spesifik tipe
sel. Otomikrograf ph fluoresen representatifdari berbagai monolayer astroglial atau fibroblast yang dimurnikan diberi label dengan (a) vimentin, (b) anti-GFAP ,
 GLIA REAKTIF MENDUKUNG PERTUMBUHAN DENDRIT 55

(c) A 2B5, (d) Gal-C, (e) Thy 1.1, dan (f) DAPI. Karakterisasi imunohistokimia menunjukkan bahwa sebagian besar sel yang berasal dari normal atau korteks
lesi (86,5-89,5%) dapat diklasifikasikan sebagai astrosit atau astrosit reaktif, masing-masing. (Skala bar, 10 μm).
TABEL 1 tikus P4 dan astrosit kortikal P4 normal dicampur dalam rasio
Karakteristik imunohistokimia monolayer glial yang ditentukan dalam kultur monolayer. Akson neuron
RX kortikal dan pertumbuhan dendrit pada monolayer ini
Hal 4 Hal 12 RX Hal dikuantifikasi pada 5 hari in vitro.
Jenis sel Penanda antigenik CTX CTX P4 12 Morfologi neuron pada kultur campuran mirip dengan
Astrosit tipe I GFAP1/A 2 B52 89.5 88.6 – –
morfologi yang diamati pada kultur astrosit P4 murni, sampai
Astrosit reaktif – – 87.7 86.5 fibroblas merupakan lebih besar dari 40% monolayer. Setelah
GFAP1/A 2 B52
ini terjadi, penurunan panjang neurit total dan jumlah dendrit
Astrosit tipe II GFAP1/A2B51 13.7 1.2 – –
primer diamati (Gbr. 8). Pada monolayer astrosit P4 yang lebih
Nenek moyang O2A GFAP2/A2B51 – – – –
besar dari 90% neuron menguraikan tiga atau lebih dendrit dan
Oligodendrosit GFAP2/GAL-C1 2.3 2 – 1
akson yang diperpanjang lebih besar dari 150 μm panjangnya.
Fibroblast Milikmu 1.11 2.2 7.1 5.7 12.5
Saraf – – – –
Sebaliknya, pada monolayer yang terdiri dari 60% fibroblas,
PETA2 1/NF1
28,6% neuron memperpanjang tiga atau mbijih dendrit dan
Glia yang belum matang VM1 83.5 42 10 5
14,7% akson lebih besar dari 150 μm panjangnya. Neuron
Mikroglia OX42 – – – –
kortikal yang tumbuh pada monolayer meningeal murni
Kontaminan tikus M2 1/M61 – – – –
biasanya menunjukkan morfologi unipolar atau bipolar. Proses
Nota. Sel astroglial berasal dari korteks serebral tikus P4 dan P12. Astroglia
reaktif diperoleh dari anak tikus P4 atau P12 yang telah menerima lesi kortikal
individu sangat singkat dan cenderung fasikulasi; Semua
tembus pada P1 atau P9, masing-masing. Sel astroglial yang dimurnikan akson panjangnya kurang dari 100 μm dan hanya 24% dendrit
diperoleh seperti yang dijelaskan under Bahan dan Metode. Monolayers primer yang panjangnya lebih besar dari 15 μm.
ditandai dengan antibodi spesifik sel. Data dinyatakan sebagai persentase dari Proporsi relatif fibroblas terhadap astrosit yang diamati pada
total sel yang diidentifikasi oleh pewarnaan nuklir, 4 8,6-diamido-2-fenil indol monolayer astroglial reaktif atau dewasa kurang dari jumlah
(Sigma) yang imunoreaktif untuk antibodi spesifik (– menunjukkan tidak fibroblas yang diamati untuk menurunkanpertumbuhan neu
terdeteksi). Lima bidang acak dari lima coverslips dari setiap monolayer ritus pada astrosit P4. Oleh karena itu, panjang akson
diperiksa dari tiga kultur independen (CTX, korteks; RX, korteks terluka).
berkurang diamati ketika neuron kortikal tumbuh pada astrosit
reaktif P4 dan P12 dan pengurangan panjang dendrit primer
diamati pada astrosit reaktif P12 mungkin mewakili
SSP ditanam pada filter Millipore di atas dan terpisah dari ketidakmampuan astrosit reaktif untuk mendukung
penutup polylysine. pertumbuhan proses, daripada atenuasi pertumbuhan neurit
Setelah5 hari in vitro, neuron tumbuh langsung pada oleh fibroblas.
astroglial reaktif P12, atau dengan adanya medium yang
dikondisikan oleh astroglia reaktif P12, menunjukkan Kelangsungan hidup neuron
penampilan morfologi yang serupa. Pertumbuhan dendritik
Titik kritis dalam interpretasi hasil kami adalah
primer sedikit lebih sedikit dalam media yang dikondisikan
kemungkinan kelangsungan hidup selektif neuron, daripada
terus menerus daripada dalam kokultur langsung; namun,
pertumbuhan eurit n yang didukung astroglial; oleh karena itu,
pengurangan kecil dalam pertumbuhan dendrit, antara 20 dan
kami menentukan kelangsungan hidup neuron pada 5 hari in
30%, serupa dengan yang diamati ketika kokultur astroglial P4
vitro. Kelangsungan hidup neuron bervariasi di antara
normal atau kokultur nonkontak dibandingkan (Gambar 7).
monolayers yang dibuat dari berbagai sumber SSP; dari 35%
Pengamatan ini menunjukkan bahwa sel-sel astroglial reaktif
pada astroglia P4 reaktif hingga 52% pada astroglia kortikal
dapat melepaskan faktor ke dalam media kultur, yang
P12 normal. Meskipun neuron survival pada 5 hari in vitro
mendukung pertumbuhan neurit dan dendrit dari neuron
lebih besar pada astroglia normal daripada astroglia reaktif
kortikal.
(Tabel 2), variasi ini tidak berkorelasi dengan kemampuan
Pengaruh fibroblast pada pertumbuhan akson dan dendrit berbagai astroglia untuk mendukung pertumbuhan proses.
yang didukung astrosit
DISKUSI
Sejumlah besar fibroblas, yang dikenal sebagai substrat
yang buruk untuk pertumbuhan neurit (19, 57), diamati pada Data yang dilaporkan di sini (dirangkum dalam Gambar 9)
monolayer astrosit yang menunjukkan dukungan pertumbuhan adalahconsi stent dengan, dan memperluas, pengamatan
neurit yang buruk. Untuk menentukan apakah keberadaan sebelumnya bahwa astroglia reaktif memiliki kemampuan
fibroblas dapat menjelaskan perbedaan yang diamati dalam yang berkurang untuk mendukung pertumbuhan neurit secara
kemampuan ast roglia dewasa atau reaktifuntuk mendukung in vitro. Hasil kami menunjukkan bahwa astrosit reaktif
pertumbuhan proses, fibroblas yang berasal dari meninges mampu mendukung pertumbuhan dendrit, sedangkan
56 LE ROUX DAN REH

kemampuan mereka untuk mendukung pertumbuhan akson fitur yang dijelaskan di atas dan appeared berbeda dari sel-sel
berkurang. Mekanisme yang memungkinkan regulasi terpisah yang berasal dari SSP normal.
dari pertumbuhan akson dan dendrit mungkin memiliki Astroglia reaktif in vitro dan in vivo mungkin serupa.
implikasi penting dalam regenerasi SSP, pembentukan Pertama, astrosit dalam kultur melepaskan berbagai macam
kembali kontak sinaptik, dan pemulihan fungsional setelah neuropeptida, neurotransmiter, sitokin, dan faktor
cedera pada otak mamalia dewasa. pertumbuhan; Meskipun pengamatan in vitro ini dapat

ARA. 4. Astrosit reaktif mampu mendukung pertumbuhan dendrit dari neuron kortikal secara in vitro. Fotomikrograf fluoresen representatif dari: (1)
monolayer sel berasal dari (a) korteks P4 dan (c) korteks P4 3 hari setelah cedera penetrasi berlabel (a a nd c) anti-GFAP dan (2) neuron
kortikal tikus E18 diberi label dengan (b, d) anti-M6 setelah 5 hari in vitro. Mayoritas sel dari hewan nonlesi menunjukkan morfologi poligonal datar dan dapat
diklasifikasikan sebagai astrosit. Sebaliknya, sel-sel yang berasal dari korteks lesi menunjukkan banyak proses dan diklasifikasikan sebagai astrosit reaktif. Pada
monolayer astroglial yang dihasilkan dari nonlesi dan korteks P4 lesi, sebagian besar neuron bersifat multipolar dan memperpanjang akson dan beberapa dendrit
(b, d). Sedangkan output dendrit serupa pada astrosit normal dan reaktif, panjang akson (panah) berkurang pada astrosit reaktif (d). Neuron yang tumbuh pada
astrosit normal atau reaktif yang berasal dari hewan P12 menunjukkan morfologi yang mirip dengan yang diamati pada astroglia P4. (Skala bar, 10 μm).
Astrosit reaktif in vitro dan in vivo mewakili artefak, astrosit in vivo yang terluka atau reaktif
juga melepaskan banyak faktor yang sama ini (51). Kedua,
SSP mamalia menanggapi berbagai penghinaan dengan
garis sel astrosit berasal dari tikus transgenik dan tumbuh
respons seluler yang cepat dan kuat yang dikenal sebagai
dalam membran sel ekspres kultur dan molekul mol matriks
astrogliosis reaktif. Astrogliosis reaktif diamati pada kondisi
ekstraseluler yang terkait dengan bekas luka glial in vivo (28).
akut sepertitrauma atau stroke, di sekitar neoplasma, dan
Ketiga, astrosit yang terluka dalam kultur oleh berbagai teknik
dalam kondisi neurodegeneratif seperti penyakit Alzheimer
menunjukkan karakteristik astroglia reaktif in vivo (58, 68,
(18, 29). Astrosit reaktif adalah komponen utama dari respons
83). Namun, ada dua peringatan penting dalam menafsirkan
ini dan ditandai dengan peningkatan imunoreaktivitas GFAP,
hasil kami. Dalam kultur murni, astroglia tidak berinteraksi
hipertrofi dan hyp erplasia astrosit, dan peningkatan panjang
dengan sel lain seperti neuron atau mikroglia yang dapat
dan jumlah proses (6, 18, 45, 48, 49, 77). Dalam percobaan
mempengaruhi fisiologi astrosit, diferensiasi, dan morfologi
kami, sel-sel yang berasal dari korteks tikus yang terluka
(25, 26, 29, 81). Selain itu, media bebas serum digunakan
dianggap astrosit reaktif karena mereka menunjukkan banyak
dalam sistem kokultur neuron-astroglial kami; astroglia reaktif
in vivo, bagaimanapun, terpapar banyak produk yang
 GLIA REAKTIF MENDUKUNG PERTUMBUHAN DENDRIT 57

ditularkan melalui darah, yang mungkin ada dalam serum dan lebih tua (65, 78). Akhirnya, pada SSP yang belum matang ada
yang dapat mempengaruhi little fibroblast atau respons makrofag terhadap cedera.
diferensiasi (29, 31, Sebaliknya, ada respons mesodermal yang signifikan pada
81). SSP matang; jaringan parut, ditandai dengan pengendapan
Astrosit reaktif di otak kolagen dan adanya sel-sel mesodermal seperti fibroblas,
mamalia yang belum matang diamati setelah imal lebihtua dari P8 pada cedera (6, 48, 49,
dan matang 70). Perbedaan-perbedaan ini juga diamati dalam kultur
eksplan yang berasal dari SSP yang belum matang atau
Respons seluler setelah
matang yang terluka (50, 64, 65).
cedera pada SSP mamalia
Perbedaan molekuler menyertai perbedaan seluler dan
yang belum dewasa atau
morfologi yang diamati padagliosis aktif dari hewan usia yang
dewasa berbeda. Cedera yang
berbeda. Analisis ultrastruktural dan imunohistokimia
diderita selama periode
menunjukkan bahwa lamina basal yang diamati pada SSP
embrionik atau neonatal
dewasa yang terluka lebih banyak daripada pada SSP dewasa
menghasilkan lebih sedikit
yang terluka (64). Sedangkan molekul perangsang
astrogliosis dibandingkan
pertumbuhan sepertis laminin, kolagen tipe IV, dan fibronektin
dengan cedera serupa pada
diidentifikasi pada SSP matang yang terluka dan terluka,
orang dewasa (3, 5, 6, 14, 48,
molekul penghambat kondroitin sulfat proteoglikan (CS-PG)
49, 52, 61, 64, 65, 70, 78)
dan tenassin diamati, menggunakan teknik imunohistokimia,
meskipun reaksi yang
dalam eksplan deri ved dari dewasa yang terluka tetapi bukan
signifikan dapat diamati pada
SSP dewasa yang terluka (50). Astrosit reaktif, bagaimanapun,
SSP neonatal yang terluka
juga mampu menghasilkan berbagai sitokin dan faktor
jika stimulus yang memadai
neurotropik seperti TGF-B1, NGF, IGF, dan FGF setelah
diberikan atau sitokin
cedera pada SSP (18, 41, 51). Peran molekul-molekul ini
endogen diberikan (3).
dalam dukungan pertumbuhan, diferensiasi, dan modulasi
Astrosit reaktif pada SSP
molekul adhesi sel atau matriks ekstraseluler dijelaskan
dewasa yang terluka lebih
dengan baik (16, 46, 66, 76, 80); apakah astrosit reaktif
luas dan menguraikan lebih
neonatal atau dewasa menghasilkan sitokin yang berbeda atau
lama danproses yang lebih
aktor neurotropik atau isoform yang berbeda dari faktor-faktor
tebal daripada astrosit reaktif
initidak diketahui secara rinci.
pada SSP neonatal yang
terluka (5, 52, 65). Setelah
cedera, puing-puing dengan
cepat dihilangkan pada hewan ARA. 5. Astroglia reaktif mendukung pertumbuhan akson terbatas.
yang lebih muda, sedangkan Fotomikrograf fluoresen representatif dari akson (panah) yang diperpanjang
nekrosis yang lebih besar oleh neuron kortikal tikus E18 tumbuh selama 5 div pada (A) reacti ve
diamati pada hewan yang astroglia yang berasal dari korteks tikus P12 yang lesi atau pada (B)
astroglia normal yang berasal dari korteks P4 dan diberi label dengan M6.
58 LE ROUX DAN REH

lesionedcortexasdescribedunderMaterialsandMethods.Neuriteelaborationwasexamined
panjang,dan(D)totaldendriteoutputdarimousecorticalneuronscoculturedwithratastrogliad
vsP4reaktif). Totaloutputofprimarydendriteswassimilaronastrogliaderivedfromlesi
Reactiveastrocytesderivedfromlesionedcortexsupportdendritegrowth,butdemonstrateareduce

masing-masing glialmonolayermenggunakananalisis kuantitatif dan pelabelan ganda

Histogramsillustrasi(A)aksonpanjang,(B)primarydendritenumber,(C)primarydendrite

12 vsP4reaktif)diamatidarineuronneuronswassimilaronnormalorreactivecortica

vsP4normalandP
vsP12normal
12
Vsp
SEM.
0.05
0.01
0.5
6
vsP4reactiveandP12normal). Thenumberofprimarydendrites(a
vsP4normal;b
,
P
5
vsP4normal;b
vsP12normal) dan, toalesserextent, pemanjanganindividualdendrit (a
, 0.1 0.05
P
5 .
P 0.001
AxonlengthwasdecreasedonbothP4andP12reactivecorticalglialmonolayers(a
5
0.1
.
P
5 0.1
,
P
5
0.5

pertumbuhandarimousecorticalneurons
Invitro.

vsP4normal;b
.
P
5
0.1

. .reaktif dan
PP
GBR.6. 5reaktif;b
, .
PP
dan
5
se
(
GLIA REAKTIF MENDUKUNG PERTUMBUHAN DENDRIT 59

sedikit kurangprolificincontinuously terkondisinormalorreaktifastroglialmed

kortikalneuronweregrowninanoncontactcoculturesistemdimanamediumitu terus menerus d
fromnonlesionedP4orlesionedP12cortex.After5div(A)axonlength,(B)primarydendritenu
SEM.
serupaineithercontaktornoncontactcoculturesystemsofeachmonolayertested,butv
NoncontactanddirectcocultureofnormalP4astrocytes,reactiveP12astrocytes,a
terus menerus dikondisikanolehP12reaktifastrogliaketikadibanding
primerdendritoutputwerequantifiedfrom100randomlyselectedneuronsforeachastroglia
Corticalneurondendritegrowthis,inpart,regulatedbyadiffusiblefactorreleasedbyastrogliaorrea

vsP12RXcontactandP4CTXnoncontact),andanincreaseinthelengthofprima
vsP12RXcontactandP4CTXnoncontact)masih diamati inthepresenceof
vsP12RXcontactandP4CTXnoncontact),anincreaseinthenumberofprimary
vsP4CTXnonkontak). Primerdendriteelaborasiwas

0.001
0.1 0.050.1

darikorteks terluka; PRIA,fibroblastberasal darimeninges).

vsMENnoncontact;

,
P
0.01
vsMENnoncontact;

vsMENnoncontact;
.
P vsMENnoncontact;
. 0.001
P.
vsP12kontak;
P
, 0.001
P 0.01
0.5

,
dendritoutput(A
P
. 5
, ,
P
monolayer(a
PP
5 5Dendrit(A
5Dendrit(A
GBR.7.
60 LE ROUX DAN REH

monolayerexceeded40%ofthecel
dari60% fibroblas. Ini bagian
panjang,(B)primarydendritenumber,(C)prim
reactiveastrocytestosupportprocessgrowthrathe
P4ratmeningealfibroblastsandcorticalastro
SEM. Adecreaseinaxonlength,prim
growingoneachmonolayerusinganalisis
Itureduksiinneuritepertumbuhandiapadareactiveor

Budidaya astrositologi mu

GBR.8.

TABEL 2 Korteks cedera P12 39,0 6 2,7

Nota. Neuron dilapisi pada 1 3 10 4 sel / ml dengan adanya berbagai astroglia
Kelangsungan hidup neuron
SSP dan kelangsungan hidup neuronal pada setiap monolayer astroglial dinilai
Kelangsungan dengan mengukur efisiensi pelapisan neuron yang dimurnikan pada 5 hari in
Monolayer astroglial hidup (%)
vitro menggunakan teknik morfologis dan imunositokimia. Lima bidang
Korteks normal P4 44.9 6 2.5 ikoskopik m acak pada lima coverslips diperiksa dalam tiga kultur terpisah
Korteks normal P12 52.7 6 4.3 dari masing-masing subtipe astroglial. Nilai untuk kelangsungan hidup
Korteks cedera P4 35,0 6 2,5
 GLIA REAKTIF MENDUKUNG PERTUMBUHAN DENDRIT 61

neuronal dinyatakan sebagai persentase dari jumlah asli neuron yang layak dan pertumbuhan, bagaimanapun, hampir seluruhnya
melekat pada 3 jam dalam kultur dan mewakili means 6 SEM. diperhitungkan oleh pengurangan dukungan untuk neurit
terpanjang, menunjukkan bahwa pertumbuhan dendrit
tampaknya sama-sama didukung pada glia reaktif dari
Bisakah usia astrosit mempengaruhi hasil kami? Sebagai
berbagai usia. Kami sebelumnya telah mengamati bahwa
contoh, antibodi terhadap NCAM dan L-1 mengurangi
astrosit mempertahankan, daripada memulai pertumbuhan
pertumbuhan neurit pada astrosit in vitro yang belum matang
dendrit primer (37). Oleh karena itu, dapat dibayangkan bahwa
tetapi tidak matang (71). Berdasarkan imunoreaktivitas
fungsi prinsip astrosit reaktif setelah cedera adalah untuk
vimentin, astrosit yang berasal dari otak tikus P4 dapat
mempertahankan arb dendritik primeratau diuraikan oleh
mewakili sel yang belum matang, sedangkan astrosit yang
neuron yang masih hidup sebagai target sinaptik untuk akson
berasal dari otak tikus P12 dapat mewakili sel yang lebih
yang tumbuh ke dalam.
matang (7, 13). Temuan ini konsisten dengan studi
Bagaimana astrosit reaktif mendukung pertumbuhan
elektroforesis imunohistokimia dan protein GFAP dan garis
dendrit? Produksi faktor pertumbuhan peptida larut astrosit
keturunan glial pada SSP tikus yang sedang berkembang dan
seperti faktor pertumbuhan seperti insulin 1 (24), faktor
dalam studi vivo yang menunjukkan bahwa perubahan
pertumbuhan saraf (4), faktor pertumbuhan epidermis (55),
fungsional yang terkait dengan pematangan astrosit diamati
dan faktor pertumbuhan fibroblast (20, 27, 41) meningkat
setelah P8 di otak tikus (69, 70). Dalam percobaan kami, sel-
setelah lesi kortikal (44, 56). Signifikansi biologis dari faktor
sel ditumbuhkan selama 10 hari lagi dalam kultur; Perubahan
pertumbuhan yang dilepaskan astrosit dalam kaskade peristiwa
kematangan dapat terjadi selama waktu ini (71). Eksperimen
seluler yang terjadi setelah cedera tidak pasti; Bagaimanapun,
lain, bagaimanapun, menunjukkan bahwa ada cacat dalam
faktor pertumbuhan peptida larut dapat memediasi
pematangan astrosit in vitro (10, 39). Atau, perubahan
perlindungan neuron (9, 22, 43, 47, 79, 82) dan pertumbuhan
fungsional mungkin terkait dengan diferensiasi astrosit, yang
neurit (16, 30, 80) atau melemahkan efek merusak dari asam
diamati setelah 21 div, daripada pematangan (81). Kami
amino rangsang pada pertumbuhan dendrit (46). Tindakan
mengamati penurunan yang signifikan dalam pertumbuhan
terakhir ini mungkin sangat significant karena asam amino
akson pada astrosit P12 normal bila dibandingkan dengan
rangsang dianggap integral dengan patofisiologi cedera
astrosit P4 normal (38). Pengurangan relatif panjang akson
neuronal dan kematian dalam berbagai gangguan neurologis
pada astrosit reaktif P4 atau resaktif P12 dibandingkan dengan
(11, 40). Ada banyak bukti bahwa sel-sel astroglial normal
astrosit normal pada usia yang sama, bagaimanapun,
mengeluarkan faktor g neurite-promotin yang dapat
tidakberbeda. Oleh karena itu, hasil kami menunjukkan bahwa
difusikan(30, 36, 62, 63) yang, sebagian, memediasi
salah satu konsekuensi fungsional dari astrosit reaktif,
pertumbuhan dendrit secara independen dari pertumbuhan
berkurangnya dukungan pertumbuhan akson, adalah fitur
akson. Faktor pertumbuhan astroglial yang diproduksi secara
astrosit reaktif secara umum dan belum tentu tingkat
lokal mungkin lebih mampu mendukung pertumbuhan dendrit,
keparahan reaksi atau usia di mananimal terluka.
sedangkan pertumbuhan aksonal yang buruk dapat disebabkan
Astrosit reaktif mendukung jumlah dendrit primer tetapi tidak oleh kurangnya faktor neurotropik yang diturunkan dari target
pertumbuhan akson dari badan sel saraf yang jauh.

Hubungan bekas luka neuroglial, khususnya astrosit reaktif, Apa yang menyebabkan pertumbuhan terbatas akson yang
dan kegagalan regenerasi SSP sering dikaitkan (6, 21, 42, 60). diamati pada astrosit reaktif?
Namun, beberapapengamatan eksperimental menunjukkan
bahwa astrosit reaktif dapat, dalam beberapa keadaan, Astrosit reaktif telah didalilkan untuk menciptakan
mendukung pertumbuhan proses (1, 15, 23, 29, 34). Peran penghalang mekanis untuk memproses pertumbuhan (60).
astrosit reaktif dalam regenerasi konsisten dengan studi kultur Analisis lingkungan bekas luka glial cellular in vivo,
jaringan yang secara konsisten menunjukkanbahwa astrosit bagaimanapun, menunjukkan banyak faktor tambahan yang
adalah substrat yang sangat baik untuk pertumbuhan proses dapat berkontribusi terhadap penurunan pertumbuhan akson.
dan tampaknya mengatur pertumbuhan akson dan dendrit Misalnya, glial
secara terpisah (8, 17, 36, 62, 63). Hasil kami menunjukkan
kemungkinan menarik bahwa astrosit reaktif mampu
mempertahankan pertumbuhan dendrit, terutama jumlah
dendrit primer. Sebaliknya, pemanjangan akson berkurang
pada astrosit reaktif. Pengamatan ini konsisten dengan
penyelidikan in vitro sebelumnya yang menunjukkan bahwa
pertumbuhan neurit total berkurang pada glia reaktif, terutama
jika astroglia matang dalam kultur (50, 64, 71). Perbedaan
62 LE ROUX DAN REH

ARA. 9. Pertumbuhan dendrit serupa ketika neuron kortikal embrionik dikultur pada astrosit kortikal neonatal, dewasa, atau reaktif. Sebaliknya, pertumbuhan
akson berkurang secara signifikan ketika neuron kortikal dikultur pada astrosit dewasa atau reaktif. Histogram menggambarkan (A) panjang akson dan
(B) jumlah dendrit primer dan panjang dendrit primer dari neuron kortikal tikus yang dikultur bersama dengan astroglia tikus yang berasal dari korteks nonlesi
atau lesi P4 dan P12. Nilai mewakili persentase pertumbuhan rata-ratayang diamati pada astrosit kortikal P4 normal. Elaborasi neurit, diperiksa pada 100 neuron
yang dipilih secara acak yang tumbuh pada setiap monolayer glial setelah 5 div menggunakan analisis kuantitatif dan teknik imunohistokimia pelabelan ganda
(RX, astrosit reaktif obtained dari korteks lesi; korteks 5 P, 0,001 vs P4; dan
b5P , 0,01 vs P12 korteks).

bekas luka, selain astrosit, terdiri dari campuran kompleks

mikroglia, oligodendrosit, neutrofil, makrofag, dan fibroblas
(6, 25, 45, 48, 49, 54); Masing-masing jenis sel ini dapat
 GLIA REAKTIF MENDUKUNG PERTUMBUHAN DENDRIT
berkontribusi pada penurunan pertumbuhan akson (19, 26, 32,
50, 64, 67, 75). Terlalu sedikit dari jenis sel ini hadir dalam
sistem kultur kita untuk ini menjadi faktor penting. Fibroblas,
yang mendukung pertumbuhan neurit terbatas (19, 57), tidak
mungkin melemahkan pertumbuhan akson pada astroglia
reaktif karena proporsi oblast fibr dalam kultur campuran yang
terkait dengan penurunan pertumbuhan akson lebih besar
daripada proporsi fibroblas yang diidentifikasi dalam kultur
astroglial yang dimurnikan. Hasil ini konsisten dengan temuan
oleh Rudge dan Silver (64) yang mengurangi pertumbuhan
neurit total rata-rata keluar dari neuron hippocampal berlabel
DiI hanya diamati ketika kultur astrosit / fibroblast campuran
terdiri dari lebih dari 60% fibroblas. Namun, kita tidak dapat
mengecualikan bahwa jumlah sel yang relatif kecil, seperti
mikroglia atau oligodendrosit,mampu melepaskan zat
penghambat dalam jumlah yang cukup untuk melemahkan
dukungan astrosit reaktif dari pertumbuhan proses. Selain itu,
kita tidak dapat sepenuhnya mengecualikan kelangsungan
hidup neuron yang berkurang pada astroglia reaktif sebagai
faktor dalam mengurangi pertumbuhan akson. Sebelumnya
kami telah mengamati bahwa kelangsungan hidup tidak
berkorelasi dengan dukungan astroglial dari pertumbuhan
proses (36) dan karena hanya neuron yang tidak bersentuhan
dengan neuron lain yang dianalisis, kami percaya bahwa efek
astroglial pada pertumbuhan proses mungkin langsung,
daripada secara tidak langsung dimediasi melalui
kelangsungan hidup. Akhirnya, ada kemungkinan bahwa
astroglia normal mendukung neuron proyeksi, sedangkan
astroglia reaktif mendukung neuron nonproyeksi. Tanpa
penanda neuronal spesifik kita tidak dapat mengecualikan
kemungkinanbahwa monolayer seluler yang berbeda memilih
subpopulasi neuronal yang berbeda. Namun, kami berpikir
bahwa ini tidak mungkin karena output dendrit dan
kelangsungan hidup neuron sangat mirip pada berbagai
monolayer.
Penjelasan yang paling mungkin untuk mengurangi
pertumbuhan xon yang diamati pada astrosit reaktifadalah
sekunder akibat perubahan seluler intrinsik seperti ekspresi
isoform nonpermisif dari molekul yang mendorong
pertumbuhan dan ekspresi molekul penghambat pertumbuhan
oleh astrosit reaktif. Peningkatan ressi expmolekul
penghambat putatif, yang sendiri atau dalam kombinasi dapat
menghambat pemanjangan neurit, telah diamati di otak yang
terluka. Sebagai contoh, peningkatan imunoreaktivitas untuk
tenascin dan CS-PG telah diamati di lokasi cedera glial atau
pada eksplan luka kortikal yang berasal dari hewan yang lebih
tua (35, 50). Dalam SSP yang berkembang normal, tenascin
dan CS-PG memainkan peran penting dalam membatasi proses
ke posisi yang sesuai (72, 73). Namun, dalam pengaturan
cedera, ion overexpressmolekul penghambat dapat mencegah
pertumbuhan kembali akson (50). Ini mungkin memiliki
konsekuensi fungsional yang penting karena koneksi aksonal
yang tidak tepat seringkali dapat merusak fungsi SSP.
63
Dukungan astroglial lanjutan dari pertumbuhan dendrit primer,
however, dapat meningkatkan koneksi sinaptik dan
menyediakan kerangka kerja di mana aktivitas saraf dapat
memperbaiki struktur saraf. Oleh karena itu, koordinasi
pertumbuhan akson dan dendrit yang dimediasi astroglial pada
SSP yang terluka dapat mewakili faktor penting dalam
pembentukankoneksi saraf yang tepat, adaptasi terhadap
lingkungan, dan pemulihan fungsi.
UCAPAN TERIMA KASIH
P.L.R. adalah New York Academy of Medicine Elsberg Fellow di Bedah
Saraf. Bagian dari pekerjaan ini dilakukan di laboratorium Dr. Alain
Prochiantz, Ecole Normale Supe'rieure, Paris, Prancis. Kami sangat berhutang
budi atas dukungan dan diskusi yang bijaksana. Kami berterima kasih kepada
Roger Williams dan Mark Morris untuk bantuan teknis, Paul Schwarz dan
Janet Claredy untuk bantuan fotografi yang sangat baik, danIvar Klajvin dan
H. Richard Winn untuk dukungan dan saran selama penelitian ini.
REFERENSI
1. ANDERS, J. J., dan J. A. J OHNSON. 1990. Transeksi saraf penciuman
tikus meningkatkan imunoreaktivitas protein asam fibrillary glial dari
olfactory bulb ke korteks piriform. Glia 3: 17–25.
2. ANEZAKI, T., K. Y AMAGISAWA, H. T AKAHASHI, T. NAKAJIMA, K.
MIYASHITA, A. ISHIKAWA, F. IKUTA, DAN T. MIYATAKE. 1992. Respon
astrositik jarak jauh dari korteks prefrontal disebabkan oleh lesi pada
basalis nukleus Meynert tetapi tidak di daerah tegmental ventral. Otak
Res. 574: 63–69.
3. BALASINGAM, V., T. TEJADA-B ERGES, R. BOUCKOVA, DAN V. W.YONG.
1994. Astrogliosis reaktif padaotak tikus neonatal dan modulasinya oleh
sitokin. J. Neurosci. 14: 846–856.
4. BAKHIT, C., M. ARMANINI, G. L. BENNETT, W. L. T. WONG, S. E.
HANSEN, DAN R. TAYLOR. 1991. Peningkatan faktor pertumbuhan saraf
turunan glia setelah penghancuran neuron hippocampal. Otak Res. 560:
76–83.
5. BARRETT, C. P., E. J. DONATI, DAN L. GUTH. 1984. Perbedaan antara
tikus dewasa dan neonatal dalam respon astroglial mereka terhadap
tulang belakang dijuri. SMA STM di Neurol. 84: 374–385.
6. BERRY,
M., W. L. M AXWELL, A. LOGAN, A. M ATHEWSON, P. M
C CONNELL, D. E. SHHURST, DAN G. H. THOMAS. 1983. Endapan
jaringan parut pada sistem saraf pusat. Acta Neurochir. 32 (suppl): 31–
53.
7. BOVOLENTA, P., R. K. H. LIEM, DAN C. A. MASON. 1984. Perkembangan
astroglia serebelar: Transisi dalam bentuk dan kandungan sitoskeletal.
Dev. 102: 248–259.
8. CHAMAK, B., A. FELLANS, J. GLOWINSKI, DAN A. PROCHAINTZ. 1987.
Ekspresi MAP2 dan pertumbuhan neuritik dan percabangan
berhubungan dengan cormelalui interaksi neuroastroglial spesifik
wilayah. J. Neurosci. 7: 3163–3170.
9. CHENG, B., DAN M. P. MATTSON. 1991. NGF dan bFGF melindungi
neuron kortikal tikus hippocampal dan manusia terhadap kerusakan
64 LE ROUX DAN REH

hipoglikemik dengan menstabilkan homeostasis kalsium. Saraf 7: 1031– cedera traumatis pada otak mamalia dewasa. J. Neurosci. 9: 4416–
1041. 4429.
10. CHIU, E. C., W. T. NORTON, DAN K. L. FIELDS. 1981. Sitoskeleton 26. GIULIAN, D., K. VACA, DAN M. CORPUZ. 1993. Faktor pelepasan glia
astrosit primer dalam kultur mengandung aktin, glial, fibrillary, protein otak dengan tindakan berlawanan pada kelangsungan hidup neuronal. J.
asam dan vimentin. J. Neurochem. 37: 147–155. Neurosci. 13: 29–37.
11. CHOI, DW 1988. Neurotoksisitas glutamat dand penyakit pada sistem
27. G O'MEZ-P INILLI, F., J. W.-K. LEE, DAN C. W. COTMAN. 1992. FGF
saraf. Saraf 1: 623–634. Dasar pada otak tikus dewasa: Distribusi seluler dan respons terhadap
12. COLEMAN, P. D., DAN D. G. FLOOD. 1986. Proliferasi dendritik pada lesi entorhinal dan transeksi fimbria-forniks. J. Neurosci. 12: 345–355.
otak yang menua sebagai mekanisme perbaikan kompensasi. Prog. Otak
28. GROVES,A. K.,A. ENTSWISTLE, P. S. JAT, DAN M. NOBLE. 1993.
Res. 70: 227–237. Karakterisasi Garis Sel Astrosit yang Menampilkan Sifat Jaringan Parut
13. DAHL, W. 1981. Transisi protein vimentin-GFA dalam r pada Glial. Dev. 159: 87–104.
sitoskeleton neuroglia terjadi pada saat mielinisasi. J. Neurosci. Res. 6: 29. HATTEN, M. E., R. K. H. L IEM, M. L. S HELANDKI, DAN C.A. M
741–748. ASON. 1991. Astroglia dalam cedera SSP. Glia 4: 233–243.

14. DAHL, D., DAN A. BIGNAMI. 1976. Sifat imunogenik protein asam 30. HATTEN, M. E., M. LYNCH, R. E. RYDER, S ANCHEZ , J.
fibrillary glial. Otak Res. 116: 150–157. JOSEPHSILVERSTEIN, D. MOSCATTELLI, DAN DBR IFKIN. 1988. Ekstensi
15. DAVID, S., C. BOUCHARD, O. TSATAS, DAN N. GJIKATOCHRISTOS. 1990. neurit in vitro oleh neuron granula tergantung pada faktor pertumbuhan
fibroblast yang diturunkan dari astroglial. Dev. 125: 280– 289.
Makrofag dapat memodifikasi sifat nonpermisif dari sistem saraf pusat
mamalia dewasa. Saraf 5: 463–469. 31. INGRAHAM, C. A., DAN K. D. M C CARTHY. 1989. Plastisitas kultur sel
16. D E KONNICK, P., S. C ARBONETTO, DAN E. COOPER. 1993. NGF glial bantalan proses dari jaringan kortikal serebral tikus neonatal. J.
menginduksi neuron sensorik tikus neonatal untuk memperpanjang Neurosci. 9: 63–69.
dendrit dalam kultur setelah pengangkatan sel satelit. J. Neurosci. 13: 32. JOHNSON-G REEN, PC, K. E. DOW, DAN R. J. RIOPELLE. 1992. Modulasi
577–585. pertumbuhan neurité terkait dengan proteoglikan astrosit: Pengaruh
17. DENIS-D ONINI, S., J. GLOWINSKI, DAN A. PROCHIANTZ. 1984. aktivator peradangan. Glia 5: 33–42.
Heterogenitas glial dapat menentukan bentuk tiga dimensi neuron 33. JONES, T. A., dan T. SCALLERT. 1994. Use-dependent pertumbuhan
dopaminergik mesencephalic tikus. Alam 307: 641–643. neuron piramidal setelah neocortical damage. J. Neurosci. 14: 2140–
18. EDDLESTON, M., DAN L. MUCKE. 1993. Profil molekuler astrosit reaktif 2152.
— implikasi untuk peran mereka dalam penyakit neurologis. Ilmu saraf 34. KAWAJA, M. D., DAN F. H. GAGE. 1991. Astrosit reaktif adalah substrat
54: 15–36.
untuk pertumbuhan akson SSP dewasa dengan adanya peningkatan
19. FALLON, JR 1985. Pertumbuhan preferensial neurit sistem saraf pusat kadar faktor pertumbuhan saraf. Neuron 7: 1019–1030.
pada astrosit dan sel Schwann sebagai compared dengan sel non-glial in
35. LAYWELL, E. D., U. DORRIES, U. BARTSCH, A. F AISSNER ,
vitro. J. Sel Biol. 100: 198–207.
MSCHACHNER, dan D. A. STEINDLER. 1992. Peningkatan ekspresi tenascin
20. FINKLESTEIN, SP, PJ SEBUAHPOSTOLIDA, C. G. CADAY, J. P ROSSER, molekul matriks ekstraseluler yang diatur perkembangannya setelah
M. F. PHILIPS, DAN M. KLAGSBRUN. 1988. Peningkatan imunoreaktivitas cedera otak orang dewasa. Proc. Natl. Acad. Sci. Amerika Serikat 89:
faktor pertumbuhan fibroblast dasar (bFGF) di lokasi luka hujan fokal b. 2634–2638.
Otak Res. 460: 253–259. 36. LE R OUX, P., DAN T. REH. 1994. Perbedaan regional dalam faktor
21. FISHMAN, P. S., G. NILAVER, dan J. P. KELLY. 1983. Astrogliosis turunan glial yang mempromosikan pertumbuhan dendritik dari neuron
membatasi integrasi cangkok saraf perifer ke sumsum tulang belakang. kortikal tikus secara in vitro. J. Neurosci. 14: 4639–4655.
Otak Res. 277: 175–180. 37. LE R OUX, P., DAN T. REH. 1995. Astroglia menunjukkan perbedaan
22. FRIM, DM, MPSHORT, W. SROSENBERG, JSIMPSON, X. O. BREAKEFIELD, regional dalam kemampuan mereka untuk mempertahankan
DAN O. ISACSON. 1993. Efek perlindungan lokal fibroblas yang pertumbuhan dendritik primer dari neuron kortikal tikus secara in vitro.
mensekresi faktor pertumbuhan saraf terhadap lesi eksitotoksik pada J. Neurobiol. 27: 97–112.
striatum tikus. J. Neurosurg. 78: 267–273. 38. LE R OUX, P., DAN T. REH. 1995. Pematangan glia mendukung
23. GAGE, F. H., P. OLEJNICZAK, DAN D. M. ARMSTRONG. 1988. Astrosit dendritik primer tetapi tidak pertumbuhan aksonal dari neuron kortikal
penting untuk tumbuh di sirkuit septohippocampal. SMA STM di tikus secara in vitro. NeuroSci. Lett. 198: 5–8.
Neurol. 102: 2–13. 39. LEVISON, S. W., DAN K. D. M C C ARTHY. 1991. Astroglia dalam
24. G ARCIA-E STRADA, J., L. M. G ARCIA-S EGURA, DAN I. T ORRES budaya. Halaman 309–336 dalam G. Banker dan K. Goslin, eds.,
Culturing Nerve Cells. MIT Press, Cambridge, MA.
A LEMAN. 1992. Ekspresi faktor pertumbuhan mirip insulin I oleh
astrosit sebagai respons terhadap cedera. Otak Res. 592: 343–347. 40. LIPTON, S.A., DAN P.A. ROSENBERG. 1994. Asam amino rangsang
sebagai jalur umum terakhir untuk gangguan neurologis. N. Engl. J.
25. GIULIAN, D., J. CHEN, JE INGEMAN, J. K. GEORGE, DAN M. NOPONEN.
1989. Peran fagosit mononuklear dalam penyembuhan luka setelah Med. 330: 613–622.
 GLIA REAKTIF MENDUKUNG PERTUMBUHAN DENDRIT 65

41. LOGAN,A., S.A. G RAUTSCHY,A.-M. GONZALEZ, DAN A. BDITAYANGKAN. epidermal pada astrosit otak tikus: Respons terhadap cedera. Neurosci.
1992. Kursus waktu untuk peningkatan fokus sintesis faktor Lett. 91: 276–282.
pertumbuhan fibroblast dasar dan salah satu reseptor afinitas tinggi (flg) 56. NIETO-S AMPEDRO , M., M. MANTHROPE, G. BARBIN, S. VARON, dan C.
setelah cedera otak kortikal lokal. J. Neurosci. 12: 3828–3837. W. COTMAN. 1983. Aktivitas neuronotrofik yang disebabkan cedera
42. LIUZZI, F. J., DAN R. J. LASEK. 1987. Astrosit memblokirregenerasi pada otak tikus dewasa: Korelasi dengan kelangsungan hidup implan
aksonal k pada mamalia dengan mengaktifkan jalur berhenti fisiologis. tertunda di rongga luka. J. Neurosci. 3: 2219–2229.
Sains 237: 642–645.
57. NOBLE, M., J . F OK-S EANG, DAN J. COHEN. 1984. Glia adalah substrat
43. MAIESE, K., I. BONIECE, D. DEMEO, dan J. A. WAGNER. 1993. Faktor unik untuk pertumbuhan in vitro neuron sistem saraf pusat. J.
pertumbuhan peptida melindungi terhadap iskemia dalam kultur dengan
Neurosci. 4: 1892–1903.
mencegah toksisitas oksida nitrat. J. Ilmu saraf. 13: 3034–3040.
58. PETITO, C. K., B. H. J. J UURLINK, DAN L. HERTZ. 1991. Model in
44. MANTHROPE, M., M. N IETO-S AMPEDRO, S. D. S KAPER, E. R. L vitro yang membedakan antara efek langsung dan tidak langsung
EWIS, G. B ARBIN, F. M. L ONGO, C. W. C OTMAN, DAN S. V ARON.
iskemia pada astrosit. SMA STM di Neurol. 113: 364–372.
1983. Aktivitas neuronotrofik pada luka otak tikus yang sedang
berkembang: Korelasi dengan kelangsungan hidup implan pada luka 59. QIAN, J., M. S. BULL, dan P. LEVITT. 1992. Astroglia yang diturunkan dari
cavity. Otak Res. 267: 47–56. target mengatur pertumbuhan aksonal secara spesifik wilayah. Dev.
149: 278–294.
45. MATHEWSON, A. J., DAN M. BERRY. 1985. Pengamatan Respon Astrosit
60. REIER, P. J., L. J. STENSAAS, DAN L. GUTH. 1983. Bekas luka astrositik
Terhadap Luka Tusuk Serebral Pada Tikus Dewasa. Otak Res. 327: 61–
sebagai penghalang regenerasi pada sistem saraf pusat. Halaman 163–
69.
195 dalam C. C. Kao, R. P. Bunge, dan P. J. Reier, eds., Rekonstruksi
46. MATTSON, M. P., M. MURRAIN, P. B. G UTHRIE, DAN S. B. KATER. Sumsum Tulang Belakang. Raven Press, New York.
1989. Pertumbuhan fibroblast factor dan glutamat: Peran yang
61. ROESSMANN, U., DAN P. GAMBETTI. 1986. Reaksi patologis astrosit pada
berlawanan dalam generasi dan degenerasi neuroarsitektur hippocampal.
cedera otak perinatal: Studi imunohistokimia. Acta neuropathol. (Berl
J. Neurosci. 9: 3728–3740.
dalam) 70: 302–307.
47. MATTSON, M. P., DAN B. RYCHLIK. 1990. Glia melindungi neuron
hippocampal terhadap degenerasi yang diinduksi asam amino rangsang: 62. ROUSSELET, A., A. SebuahUTILLO-T OUATI, D. SEBUAHRAUS, DAN A.
Keterlibatan faktor pertumbuhan fibroblast. Int. J. Dev. Neurosci. 8: PROCHIANTZ. 1990. Regulasi in vitro morfogenesis neuronal dan
399–415. polaritas oleh faktor turunan astrosit. Dev. 137: 33–45.
48. MAXWELL, W. L., R. F OLLOWS, D. E.ASHURST, DAN M. BERRY. 1990. 63. ROUSSELET, A., L. F ETLER, B. CHAMAK, DAN A. PROCHIANTZ. 19 88.
Responbelahan otak besar tikus terhadap cedera. II. Tikus neonatal. Neuron mesencephalic tikus dalam kultur menunjukkan sifat morfologi
Philos. Trans. R. Soc. London B 328:501–513. yang berbeda di hadapan media yang dikondisikan pada astroglia
49. MAXWELL, W. L., R. F OLLOWS, D. E.ASHURST, DAN M. BERRY. 1990. mesencephalic atau striatal. Dev. 129: 495–504.
Respon belahan otak tikus terhadap cedera. I. Tikus dewasa. Philos. T 64. RUDGE, J. S., DAN J. SILVER. 1990. Penghambatan pertumbuhan neurit
rans. R. Soc. London B 328: 479–500. pada bekas luka astroglial in vitro. J. Neurosci. 10: 3594–3603.
50. M C KEON, R. J., R.C. S CHREIBER, J. S. R UDGE, DAN J. SILVER.
65. RUDGE, J. S., G. M. S MITH, DAN J. SILVER. 1989. Model in vitro
1991. Pengurangan pertumbuhan neurit dalam model jaringan parut glial
penyembuhan luka di SSP: Analisis reaksi sel dan interaksi pada usia
setelah cedera SSP berkorelasi dengan ekspresi molekul penghambat
yang berbeda. Exp. Neurol. 103: 1–16.
pada reaktif sebagaitrosit. J. Neurosci. 11: 3398–3411.
66. SAAD, B., D. B. CONSTAM, R. ORTMANN, M. M OOS, A. FONTANA,
51. MCM ILLIAN, M. K., L. THAI, J. S. HONG, J. P. O'CALLAGHAN, DAN DAN M. SCHACHNER. 1984. TGF-b 2 dan NGF yang diturunkan dari
K. R. PENNYPACKER. 1994. Cedera otak pada piring: Model untuk gliosis astrosit secara berbeda mengatur ekspresi molekul pengenalan saraf oleh
reaktif. Tren Neurosci. 17: 138–142. astrosit berbudaya. J. Sel Biol. 115: 473–484.
52. MOORE, I. E., J. M. BOUNTEMPO, DAN R. O. WELLER. 1987. Respon 67. SCHWAB, M. E., DAN P. CARONI. 1988. Oligodendrosit dan mielin SSP
otak tikus janin dan neonatal terhadap cedera. Neuropathol. Appl. adalah substrat nonpermisif untuk pertumbuhan neurit dan fibroblast
Neurobiol. 13: 219–228. yang menyebar secara in vitro. J. Neurosci. 8: 2381–2393.
53. MOUMDJIAN, R. A., J. P. SebuahNTEL, DAN V. W. YONG. 1991. Asal usul 68. SHEPARD, S. R., J. B. G. G HAJAR, R . G IANNUZZI, S. K
gliosis reaktif kontralateral pada korteks serebral tikus yang terluka
UPFERMAN, DAN R. J. HARIRI. 199 1. Ruang barotrauma perkusi cairan:
melalui pembedahan. Otak Res. 547: 223–228.
Model in vitro baru untuk cedera otak traumatis. J. Surg. Res. 51:
54. MORENO-F LORES, M. T., P. B OVOLENTA, DAN M. NIETO-S AMPEDRO. 417–424.
1993. Leukosit polimorfonuklear pada parenkim otak setelah cedera dan
69. SILVER, J., DAN M. Y. OGAWA. 1983. Pembentukan corpus callosum
interaksinya dengan astrosit murni dalam kultur. Glia 7: 146–157.
yang diinduksi postnatal pada tikus acallosal pada jembatan selulosa
55. NIETO-S AMPEDRO, M., F. G O'MEZ-P INILLA, D. J. KNAUER, DAN J. T. berlapis glia. Sains 220: 1067–1069.
BRODERICK. 1988. Imunoreaktivitas reseptor faktor pertumbuhan
66 LE ROUX DAN REH

70. SMITH, G. M., R. H. MILLER, DAN J. SILVER. 1986. Perubahan peran

astrosit otak depan selama perkembangan, kegagalan regeneratif dan
regenerasi yang diinduksi pada transplantasi. J. Komp. 251: 23–43.
71. SMITH, G. M., Y. R UTISHOUSER, J. SILVER, DAN R. H. MILLER. 1990.
Pematangan astrosit in vitro mengubah tingkat dan dasar molekuler
pertumbuhan neurite. Dev. 138: 377–390.
72. S SEKARANG, DM, V. LEMMAN, D. A. C AVRINO, A. I. CAPLAN, dan
JSILVER. Proteoglikan sulfat dalam astroglial hambatan menghambat
pertumbuhan neurit in vitro. SMA STM di Neurol. 109: 111–130.
73. STEINDLER, D.A., N. G. F. C OOPER, A. FAISSNER, DAN M.
SCHACHNER. 1989. Batas yang ditentukan oleh molekul adhesi selama
perkembangan korteks serebral: J1 / tenascin glycoprotein di bidang tong
kortikal somatosensori tikus. Dev. 131: 243– 260.
74. STEWARD, O., E. R. T ORRE, L. L. P HILLIPS, DAN P. A. TRIMMER.
1990. Proses reinnervasi pada dentate gyrus tikus dewasa: Waktu
peningkatan mRNA untuk glial fprotein asam ibrillary. J. Neurosci.
10: 2373–2384.
75. THANOS, S., J. MEY, dan M. WILD. 1993. Pengobatan retina dewasa
dengan faktor penekan mikroglia menghambat degradasi neuronal yang
diinduksi aksotomi dan meningkatkan regenerasi aksonal in vivo dan
in vitro. J. Neurosci. 13: 455–466.
76. THIERY, J. P., DAN B. BOYER. 1992. Persimpangan antara sitokin dan
adhesi sel. Skr Opini Sel Biol. 4: 782–792.
77. TOPP, K. S., B. T. FADDIS, DAN V. K. VIJAYAN. 1989. Proliferasi
astrosit yang diinduksi trauma pada otak tikus muda dan tua. Glia 2:
201–211.
78. TRIMMER, P. A., DAN R. E. WUNDERLICH. 1990. Perubahan Pembentukan
Bekas Luka Astroglial Pada Saraf Optik Tikus Sebagai Fungsi
Perkembangan. J. Komp. 296: 359–378.
79. VILBULSRETH, S., F. H EFTI, M . D. G INSBERG, W. D. D
IETRICH, DAN R. BUSTO. 1987. Astrosit melindungi neuron berbudaya
dari degenerasi yang disebabkan oleh anoxia. Otak Res. 422: 303–311.
80. WALICKE, P., W. M. COWAN, N. UENO, A. BAIRD, DAN R. GUILLEMIN.
1986. Faktor pertumbuhan fibroblast mempromosikan kelangsungan
hidup neuron hippocampal terdisosiasi dan meningkatkan ekstensi
neurite. Proc. Natl. Acad. Sci. Amerika Serikat 83: 3012–3016.
81. WANG, L. C., D. H. BAIRD, M. E. H ATTEN, DAN C. A. MASON.
1994. Diferensiasi astroglial diperlukan untuk mendukung pertumbuhan
neurite. J. Neurosci. 14: 3195–3207.
82. YAMADA, K., A. K INOSHITA, E. K OHMURA, T. SAKAGUCHI, J. T
AGUCHI , K. KATAOKA, DAN T. HAYAKAWA. 1991. Faktor pertumbuhan
fibroblast dasar mencegah degener talamussetelah infark kortikal. J.
Cereb. Metab aliran darah. 11: 472–478.
83. YU, A. C. H., Y. L. L EE, DAN L. F. ENG. 1993. Astrogliosis dalam
budaya. I. Model dan efek oligonukleotida antisense pada sintesis
protein asam glial fibrillary. J. Neurosci. 34: 295–303.