Tidak ada regenerasi SSP setelah redaman bekas luka 1

European Journal of Neuroscience, Vol. 14, pp. 1667±1677, 2001 Perkenalan

Federasi Masyarakat Neuroscience Eropa Setelah cedera SSP, neuron mamalia dewasa tidak meregenerasi
akson melalui daerah pembentukan bekas luka (Brecknell & Fawcett,
1996). Oleh karena itu, penting untuk menentukan apakah

Pengurangan pembentukan melemahkan pembentukan bekas luka dapat meningkatkan

regenerasi akson SSP. Bentuk bekas lukadiatur sebagian oleh isoform
bekas luka SSP tanpa yang berbeda dari transformasi faktor pertumbuhan beta (TGFb)
(Logan & Berry, 1993; McCartney-Francis & Wahl, 1994; Krieglstein
peningkatan bersamaan et al., 1995; Raivich et al., 1999). Secara khusus, setelah cedera
tusukan kortikal pada tikus dewasa, wh ereas infus intraventrikular
dalam regenerasi akson TGF b 1 mempotensiasi aspek pembentukan bekas luka, infus

setelah pengobatan otak intraventrikular kronis antagonis ke isoform TGFb yang berbeda
mengurangi beberapa komponen seluler dan molekuler

tikus dewasa dengan pembentukan bekas luka, yang menyebabkan berkurangnya

astrocytosis dan deposisi laminin dan ®bronectin yang dilemahkan .
kombinasi antibodi terhadap Ini telah ditunjukkan dengan menggunakan antibodi terhadap TGF b
1 (Logan et al., 1994), atau antibodi terhadap TGF b 2 (Logan et al.,

TGFb1 b 1999b), atau antagonis TGF b nonspeci®c (proteoglikan kondroitin

sulfat), decorin (Logan et al., 1999a). Antibodi panspeci®c terhadap
dan 2 TGFb juga mengurangi produksi kolagen pada saraf perifer yang
terluka (Nath et al., 1998).
Bukti lebih lanjut bahwa isoform TGF b mengatur respons luka
SSP berasal dari pekerjaan in vitro yang menunjukkan bahwa TGFb
L. D. F. Moon dan J. W. Fawcett meningkatkan produksi molekul matriks ekstraseluler oleh astrosit,
Departemen Fisiologis, Universitas Cambridge,Situs Dow ning, nenek moyang oligodendrosit dan ®broblas (Varga et al., 1987;
Cambridge, CB2 3EG, Inggris

Kata kunci: sistem saraf pusat, glia, regenerasi, bekas luka, Korespondensi: Dr Lawrence D.F Moon, Proyek Miami untuk
transformasi faktor pertumbuhan b Menyembuhkan Kelumpuhan,
Lois Pope LIFE Center , PO Box 16960, Mail Locator R-48, Miami , Florida
33101, AS.
Surel: lmoon@miamiproject.med.miami.edu
Abstrak
Diterima 30 Mei 2001, direvisi 2 Oktober 2001, diterima 3 Oktober 2001
Dalam penelitian ini kami menyelidiki apakah akson SSP
Baghdassarian-Chalaye et al., 1993; Flanders et al., 1993; Smith &
beregenerasi setelah redaman pembentukan bekas luka
Hale, 1997; SchnaÈdelbach et al., 1998). Misalnya, in vitro, TGFb
menggunakan kombinasi antibodi terhadap dua isoform
meningkatkan produksi oleh astrosit dari proteoglikan kondroitin
transformasi faktor pertumbuhan beta (TGFb). Tikus dewasa yang
sulfat, neurocan dan versican (Asher et al., 1999; Asher et al. 2000).
dibius diberi lesions mekanik unilateral dari saluran nigrostriatal.
Dengan demikian, TGFb dikenal untuk meningkatkan produksi
Implantasi kanula transkranial memungkinkan luka diobati dengan
setidaknya dua proteoglikan yang berlimpah di situs injeksi CNSury
kombinasi antibodi terhadap TGFb 1 dan TGFb2 sekali sehari selama
dan yang dapat membatasi regenerasi akson SSP spontan.
10 hari postaxotomy. Sebelas hari otak pasca-transeksi dari hewan
Dalam makalah ini kami menguji ®apakah pengiriman kombinasi
di bawah anestesi terminal ditemukan untuk evaluasi histologis.
antibodi terhadap TGF b 1 dan TGFb2 dapat mengurangi gliosis yang
Gliosis, dalam ̄ ammation dan respon akson nigral dopaminergik
ditimbulkan cedera dan kedua, apakah pengurangan gliosis disertai
dinilai dengan immunolabelling. Pengobatan dengan antibodi
denganpeningkatan n pertumbuhan akson SSP. Kami telah
terhadap TGFb 1 dan TGFb2 dilemahkan (tetapi tidak
melakukan percobaan ini dalam model aksotomi SSP yang
menghapuskan) respon glial ®brillary acid protein (GFAP)-imunosit
dikarakterisasi dengan baik yang dirancang untuk penilaian
imunoreaktif dan glia NG2-imunoreaktif tetapi tidak melemahkan
regenerasi akson, yaitu, mengikuti transeksi unilateral saluran
respon mikroglia CR3-imunoreaktif dan makrofag. Namun,
nigrostriatal pada tikus dewasa yang dibius(Brecknell et al., 1995).
pengurangan pembentukan bekas luka ini tidak disertai dengan
Kami telah menunjukkan dalam percobaan sebelumnya bahwa
pertumbuhan akson nigral dopaminergik yang dipotong. Kami
kation modi®pascacedera dari lingkungan bekas luka glial dapat
menyimpulkan bahwa pengobatan otak tikus dewasa yang terluka
mempromosikan regenerasi akson SSP (Moon et al. 2000; Moon et
dengan kombinasi antibodi terhadap TGFb 1 dan TGFb2 menghasilkan
al. 2001). Dalam percobaan ini, kami ®menemukan bahwa
pengurangan pembentukan bekas luka tetapi ini tidak
pemberianntibodies terhadap TGF b 1 dan TGFb2 mengurangi
cukup®untukmeningkatkan regenerasi akson SSP jarak jauh
beberapa aspek jaringan parut glial tetapi tidak mempromosikan
spontan.
regenerasi akson CNS signi®cant.
ã 2001 Federasi Masyarakat Neuroscience Eropa, Jurnal Ilmu Saraf Eropa, 14, 1667±1677
2 L.D.F. Moon dan J.W. Fawcett
Bahan dan metode
Perawatan hewan
Semua hewan diperlakukan sesuai dengan United Kingdom Animals
(Scienti®c Procedures) Act 1986 dan pedoman terkait. Hewan
ditempatkan dalam kelompok pada cahaya 12-jam: siklus gelap 12-
jam, lampu menyala di siang hari, dan diberi makanan dan air ad
libitum sebagai
FIG. 1. Skema parasagittal menunjukkan situs kanulasi transkranial yang
memungkinkan infus larutan ke situs saluran nigrostriatal yang ditransek
secara sepihak (gunting). Skala bar, 2 mm.
serta mainan untuk mengurangi kebosanan. Setelah operasi, hewan
sering appeared tidak terawat karena penghentian sementara
perawatan dan penurunan berat badan rata-rata 20% tetapi kedua
kondisi ini terbalik dalam 7±10 hari. Hewan ditangani, diperiksa dan
ditimbang setiap hari. Diet pasca operasi dilengkapi dengan
makanan anjing dan mash basah, dan untuk mengatasi dehidrasi
hewan diberi 10 mL 4% glukosa dalam 0,18% salin subkutanselama
operasi dan sesudahnya sesuai kebutuhan. Kandang bersih
digunakan setiap 2 hari. Untuk analgesia, hewan diberi parasetamol
larut (1 mg / mL) dalam air minum mereka selama minimal 3 hari
pasca operasi.
Bedah
Dua puluh tujuh tikus Sprague±Dawley dewasa, dengan berat
147±223 g, diberi lesi potongan pisau unilateral pada saluran
nigrostriatal dan kanula yang tinggal di dalam ditanamkan sehingga
memungkinkan infus zat ke dalam situs lesi sekali sehari selama 10
hari pasca operasi (Gbr. 1).
Tikus dibius menggunakan halotan (5%) dalam pembawa (oksigen,
2 L / menit) dan dipindahkan ke bingkai stereotaxic (David Kopf
Instruments, USA) dengan batang gigi seri diatur 2,3 mm di bawah
garis interaural. Anestesi dipertahankan setelah itu dengan halotan
(1,5% ±2,0%) dalam pembawa (oksigen, 0,6 L / menit) dengan
analgesik inhalasi (nitrous oxide, 0,6 L / menit). Kulit kepala yang
dicukur dicuci dengan etanol 70% dan dicat dengan salep antiseptik
(Betadine, Inggris) sebelum membuat sayatan garis tengah, menarik
kulit dan membersihkan periosteum dari cranium. Bor gigi dengan
ã 2001 Federasi Masyarakat Neuroscience Eropa, Jurnal Neuroscien EropaCE, 14, 1667±1677
mata bor ukuran tiga digunakan untuk menghilangkan potongan-
potongan kecil tengkorak jika perlu. Semua koordinat stereotaxic
diukur dalam milimeter dengan koordinat anterior dan lateral dibuat
relatif terhadap bregma dan koordinat vertikal dibuat relative ke
dura. Bundel otak depan medial kanan (termasuk saluran
nigrostriatal) ditransek menggunakan pisau kawat ekstrusi 'Scouten'
(David Kopf Instruments, USA) sebagai berikut. Tip diturunkan ke A,
±3.0; L, +3.0 dan V, ±8.0 (menurut atlas Paxinos & Watson, 1986)
dan bilah kawat diekstrusi sedemikian rupa sehingga membentuk
kurva halus di bidang koronal yang mencapai medial ke garis tengah
dan ventral ke pangkal otak. Rakitan ditarik secara vertikal sebesar 4
mm dan bilah ditarik kembali dandiekstrusi ulang. Akhirnya, rakitan
diturunkan kembali sebesar 4 mm, bilahnya ditarik dan seluruh
rakitan ditarik dari otak. Prosedur ini dua kali mentransek
nigrostriatal kanan
TMAMPU 1. Kelompok perlakuan dan jumlah tikus di masing-masing
Tikus per
kelompok
Perlakukanment (n)
Aksotomi + palsu 3
Aksotomi + garam + antiTGF b 1 + antiTGFb2 7
Axotomy + saline + antibodi kontrol IgG4 8
Aksotomi + garam + GDNF 3
Aksotomi + garam + GDNF + antiTGF b 1 + antiTGFb2 3
Aksotomi + garam + bFGF + IL-1a + antiTGF b 1 + antiTGFb2 3
traktat sekitar 650 m m anterior ke substansia nigra dan 4 mm
posterior ke perbatasan striatal proksimal (Brecknell et al., 1995).
Segera setelah aksotomi, kanula yang tinggal di dalam diamankan
secara transkranial untuk memungkinkan pemberian zat ke dalam
situs lesi. Tabung stainless steel (Coopers Needle Works,
Birmingham, Inggris) digunakan untuk membuat kanula yang tinggal
di dalam (panjang 7 mm, 23 gauge), kanula infus (11 mm, 30 gauge,
ditekuk ke sudut 45 °, 4 mm dari satu ujung) dan oklusi stylets (12
mm, baja tahan karat 30 gauge , ditekuk ke sudut 45 derajat 8 mm
dari satu ujung). Kanula yang tinggal di dalam certi®ed bebas dari
penghalang sebelum digunakan dengan memeriksa patensi dengan
stylets oklusi. Sebuah lubang kecil dibor untuk memungkinkan
penempatan kanula di atas situs lesi (A, ±2.5 dan L, ±2.5). Sekrup
stainless steel (1,6 mm, Semat Technical UK Ltd) dimasukkan ke
masing-masing dari tiga lubang bor yang ditempatkan di sekitar situs
kanula untuk membentuk segitiga sama sisi dengan sisi tiga
milimeter. Panjang 5 mm laras jarum suntik 2 mL (Plastipak, Becton
Dickinson, Inggris) ditempatkan di sekitar sekrup dan melalui ini
kanula yang tinggal di dalamnya diturunkan secara stereotaktik 3,0
mm di bawah dura sehingga 3,0 mm menonjol di atas tengkorak
setebal 1 mm. Pengaturan cepat semen akrilik dental (bubuk akrilik
cepat simpleks dicampur dengan metil metakrilat, Associated Dental
Products Ltd, Swindon, Inggris) dituangkan ke dalam tong jarum
suntik dan dibiarkan kering setidaknya selama 8 menit sehingga
®mengamankan kanula yang tinggal di dalam sekrup l intrakrania.
Sebuah stylet dimasukkan ke dalam kanula yang tinggal di dalam
untuk menutup silinder saat tidak digunakan. Setelah operasi, luka
ditutup dengan jahitan yang dapat diserap (Vicryl 4/0, Ethicon,
Inggris) dan bubuk antiseptik diterapkan.
 Tidak ada regenerasi SSP setelah redaman bekas luka 3

Pada hari-hari pasca-transeksi 0±10 inklusif, hewan menerima

infus palsu atau infus 3 m L dari berbagai kombinasi zat berikut
dalam garam 0,9% (Lihat Tabel 1 untuk kombinasi): antibodi kontrol
(IgG4 manusia, 750 m g / mL, Sigma, Inggris); antibodi rekombinan
terhadap TGF b 1 (anti-TGFb1, 250 m g / mL, Teknologi Antibodi
Cambridge, Melbourn, Cambridge, Inggris); antibodi rekombinan
terhadap TGF b 2 (anti-TGFb 2, 500 m g / mL; Teknologi Antibodi
Cambridge); garis sel glial manusia rekombinan berasal dari faktor
neurotropik (GDNF, 83 mg / mL, Amgen, AS); faktor pertumbuhan
broblas dasar ®tikus rekombinan (bFGF, 20 ng / mL, Boehringer,
Inggris) dan interleukin tikus rekombinan 1 a (IL1a, 4 ng / mL,
Genzyme, USA). Anti-TGF b 1 adalah antibodi fragmen rantai variabel
tunggal yang sepenuhnya manusia sedangkan anti-TGFb2 adalah
antibodi IgG4 utuh yang sepenuhnya manusia. Kemampuan antibodi
anti-TGF b ini untuk mengikat dan menetralkan isoform tertentu
TGFb telah dijelaskan sebelumnya (Logan et al., 1994; Logan et al.,
1999b). Alikuot larutan stok disimpan beku pada suhu ±70 °C dan
dicairkan ke suhu kamar segera sebelum digunakan.
Kanula infus terbuat dari tabung stainless steel (11 mm, 30 gauge)
yang ditekuk ke sudut 45 °, 4 mm dari satu ujung, dengan lengan
pendek terhubung melalui tabung polythene bening 30 cm
(diameter intern al 0,28 mm, diameter eksternal 0,61 mm, Portex,
Inggris) ke jarum suntik L 10 m

FIG. 2. Immunolabelling menggunakan antibodi anti-manusia 11 hari setelah

traneksi, yaitu 1 hari setelah infus kesebelas baik (A) antibodi kontrol IgG4
manusia atau (B) antibodi manusia terhadap TGF b 1 dan TGFb2.
Immunolabelling hadir dalam inti lesi dan dalam tepi setebal 300myang
mengelilingi inti lesi, con®rming pengiriman rilesi pe efektif antibodi anti-
manusia. Nigra di sebelah kiri setiap gambar, striatum di sebelah kanan.
Skala bar, 1 mm.

(Hamilton, AS) dipasang pada mikromanipulator (World Precision

Instruments, AS). Untuk membuat setiap infus, stylet dikeluarkan
dan kanula infus pra®lled dimasukkan sepenuhnya, sampai ke
tikungan, melalui kanula yang tinggal sedemikian rupa sehingga
ujung ventral mencapai lokasi traneksi. Infus dibuat pada 1 mL /
menit, memungkinkan waktu difusi 2 menit sebelum penghapusan
lambat ula cann infusdan reoklusi kanula yang tinggal di dalam
dengan stylet. Penggunaan tabung plastik bening memungkinkan
pengiriman volume zat yang sama untuk dicon®rmed oleh mata.

Histologi
Sebelas hari setelah traneksi, hewan yang diberi anestesi terminal (2
mL / kgintraperi toneal, Euthatal, Roche Meriaux, Prancis) difusikan
secara transkardial menggunakan 100 mL fosfat buffered saline
ã 2001 Federasi Masyarakat Neuroscience Eropa, Jurnal Ilmu Saraf Eropa, 14, 1667±1677
4 L.D.F. Moon dan J.W. Fawcett

(PBS) dan kemudian 300 mL 4% paraformaldehida di PBS. Otak m ditarik tegak lurus terhadap jalannya r t nigrostriatal aslidan 500
dibedah dan dipertahankan semalaman dalam xative yang sama m m anterior ke bidang traneksi. Penghitungan dilakukan dalam dua
®sebelum direndam dalam cryoprotectant (30% sukrosa, 0,1% bagian medial dari masing-masing hewan. Perbedaan kelompok
natrium azida dalam PBS) sampai mereka tenggelam. Sepuluh seri dinilai menggunakan analysis of variance (ANOVA) menggunakan taraf
bagian parasagittal setebal 40 m dipotong pada mikrotom kereta signi®cance standar (P < 0,05).
luncur (Leica, Inggris) sebelum memproses berbagai seri baik untuk
memvisualisasikan akson dari tindakan tr nigrostriatal dopaminergik
atau untuk menetapkan efek perawatan pada berbagai sel non- Hasil
neuronal atau molekul matriks ekstraseluler. Protokol
Termi nologi berikut akan digunakan: 'axotomy + sham' mengacu
imunoperoksidase standar diikuti (Moon et al. 2000) menggunakan
pada kelompok hewan yang diberi lesi pisau potong unilateralpada
serum pemblokiran yang sesuai (kambing atau keledai normal, Dako,
saluran nigrostriatal dengan infus palsu; 'axotomy + IgG4' mengacu
Inggris) dan antibodi primer berikut: IgG anti-manusia kambing (Fc
pada kelompok hewan yang diberi lesi pisau potong unilateral dan
speci®c, peroksidase terkonjugasi, 1: 200, Sigma, Inggris); antibodi
infus garam yang mengandung antibodi IgG4manusia kontrol dan
kelinci terhadap tirosin hidroksilase (TH, 1: 4.000, Jacques Boy
'axotomy + antiTGF b ' mengacu pada kelompok hewan yang diberi
Institut, Prancis); antibodi kelinci terhadap glial ®brillary prote asam
lesi pisau potong unilateral dan infus garam yang mengandung a
dalam (GFAP, 1: 10.000, Dako, Inggris); antibodi monoklonal tikus
terhadap reseptor komplemen 3 (CR3) (klon MRC OX42, 1: 200,
Serotec, Inggris), terhadap NG2 (klon D31-10, 1: 4, hadiah dari J.
Levine), atau antibodi monoklonal tikus CS56 (1: 100, Sigma, Inggris).
Kontrol immunostaining dilakukan dengan menggunakan
konsentrasi yang tepat dari tikus IgM (Sigma, Inggris) atau tikus IgG1
(Sigma, Inggris) di tempat antibodi primer. Antibodi sekunder
biotinilasi yang tepat digunakan (kuda anti-tikus, tikus teradsorpsi,
Vektor, Inggris; kambing dan ti-kelinci IgG, Dako, Inggris; kelinci anti-
kambing IgG, Sigma, Inggris) dalam hubungannya dengan
streptavidin / biotinylated lobak peroksidase kit (Dako, Inggris)
dengan diaminobenzidine sebagai kromagen. Bagian dipasang pada
slide kaca presubbed (1% gelatin di PBS), dehydrated dalam
serangkaian etanol naik, dibersihkan dalam xilena dan penutup
diselipkan menggunakan DPX.

Analisis
Densitometri optik digunakan untuk menilai tingkat gliosis di lokasi
lesi, de®ned oleh imunoreaktivitas untuk GFAP, NG2, CR3 atau CS56.
Daya tinggi (3 100) gambar dari situs lesi ditangkap menggunakan
kamera digital yang dipasang pada mikroskop cahaya (Leitz DMRB,
Leica, Inggris) digabungkan ke PC yang kompatibel dengan IBM yang
menjalankan paket grafis yang sesuai (Photoshop, Adobe). Gambar
disimpan sebagai TIFF ®les tanpa compression dan diekspor ke
gambar NIH (Scion Image, rilis beta 3b, Scion Corp.). Kondisi
pencahayaan dan pencahayaan sama dalam sesi pengambilan dan
variabilitas karena daerah kavitasi yang terkait dengan kerapatan
piksel mendekati nol dikoreksi untuk masecara tematis. Sebuah eld
satu milimeter-persegi ®pandang termasuk inti lesi dianalisis. Karena
hasil ini diambil dari tiga percobaan serupa, data kerapatan optik
dinormalisasi di seluruh sesi dengan menetapkan kembali rata-rata
kelompok kontrol IgG4 from setiap percobaan sebagai 100% dan
menskalakan data lain yang sesuai.
Neuron katekolaminergik, termasuk neuron dopaminergik dari
saluran nigrostriatal, divisualisasikan dengan immunostaining
menggunakan antibodi terhadap TH. Pertumbuhan akson
nigrostriatal dopaminergik denganparenkim otak, anterior ke inti
lesi, diukur®dengan menghitung pada kation magni®tinggi ( 3 400)
jumlah proses imunoreaktif melintasi garis imajiner panjang 3000 m

ã 2001 Federasi Masyarakat Neuroscience Eropa, Jurnal Neuroscien EropaCE, 14, 1667±1677
 Tidak ada regenerasi SSP setelah redaman bekas luka 5

FIG. 3. GFAP-immunolabelling menunjukkan astrositosis perilesi setelah transeksi (A±B) dan infus palsu atau (C±D) infus perilesi baik antibodi IgG4 kontrol atau
antibodi (E±F) terhadap TGF b 1 dan TGFb2, diperiksa 11 hari postaxotomy. Astrositosis berkurangsetelah pengobatan dengan antibodi terhadap TGF b 1 dan
TGFb2. Nigra di sebelah kiri setiap gambar, striatum di sebelah kanan. (A, C dan E) Skala bar, 400 m m (B, D dan F) Tampilan kation magni®yang lebih tinggi
dari area persegi panjang ditunjukkan pada (A, C dan E), masing-masing. Scale bar, 100 mm.
kombinasi antibodi terhadap TGF b1 dan TGFb2. Perlu dicatat bahwa Pemeriksaan histologis kasar menunjukkan daerah kerusakan
untuk alasan teknis, data dari kelompok hewan yang diobati dengan jaringan dicorporating kedua situs aksotomi dan (kecuali pada
neurotrophins (lihat Tabel 1) dikeluarkan dari analisis gliosis dan 'axotomy + palsu' hewan) tempat infus. Daerah-daerah ini akan
hanya dimasukkan di mana respons akson nigral dopaminergik disebut secara kolektif sebagai 'inti lesi'. Pada hewan 'axotomy +
diperiksa. Nama-nama kelompok ini belum disingkat dalam teks. sham' inti lesi ini memperpanjang jarak rata-rata 300 mm anterior
ke bidang traneksi, sedangkan
ã 2001 Federasi Masyarakat Neuroscience Eropa, Jurnal Ilmu Saraf Eropa, 14, 1667±1677
6 L.D.F. Moon dan J.W. Fawcett

FIG. 4. NG2-immunolabelling untuk progenitor oligodendrosit dewasa bintang setelah transeksi dan (A±B) infus palsu atau pengobatan dengan antibodi IgG4
kontrol (C±D) atau antibodi (E±F) terhadap TGF b 1 dan TGFb2, diperiksa 11 hari postaxotomy. Setelah traneksi, relatif terhadap kontrol palsu, infus antibodi
kontrol IgG4 meningkatkan kelimpahan NG2-imunoreaktivitas. Namun, relatif terhadap kontrol IgG4 , setelah transeksi dan pengobatan dengan antibodi
ag ainst TGF b 1 dan TGFb2, NG2-imunoreaktivitas dilemahkan ke tingkat yang sama dengan yang diamati setelah transeksi dengan infus palsu. Nigra di
sebelah kiri setiap gambar, striatum di sebelah kanan. (A,C dan E) Skala bar, 1000 mm (B, D dan F) Kation magni® yang lebih tinggi view dari area persegi
panjang ditunjukkan dalam
(A, C dan E), masing-masing. Skala bar, 250 m Immunostaining dengan antibodi anti-manusia
Sebelas hari pasca-transeksi (yaitu 1 hari setelah infus terakhir),
untuk con®rm pengiriman efektif antibodi kontrol manusia (IgG4)
Pada semua kelompok hewan lain, ini memperpanjang jarak rata- atau antibodi manusia terhadap TGF b 1 dan TGFb2 in vivo, antibodi
rata 1000 m manterior ke bidang traneksi. anti-manusia digunakan untuk immunoperoxidase label satu seri
bagian. Immunostaining menunjukkan adanya antibodi manusia di
ã 2001 Federasi Masyarakat Neuroscience Eropa, Jurnal Neuroscien EropaCE, 14, 1667±1677
 Tidak ada regenerasi SSP setelah redaman bekas luka 7

dalam inti lesi dan dalam pelek setebal 300 m m yang segera
mengelilingi inti lesi pada hewan 'axotomy + IgG4' atau hewan
'axotomy + antiTGFb' (Gambar 2). Distribusi dist spasialkontrol dan
antibodi eksperimental tampak serupa antara kelompok dan
densitometri optik kation magni®rendah terungkap
tidak ada perbedaan antara kelompok dalam kelimpahan
imunoreaktivitas (t8 = 0, 12, P = 0, 91). Dengan demikian, antibodi
kontrol dan eksperimental dikirim secara efektif ke wilayah di mana
gliosis reaktif diamati.

FIG. 5. CR3-immunolabelling untuk mikroglia dan makrofag setelah transeksi dan (A±B) infus palsu atau pengobatan dengan antibodi IgG4 kontrol e ither (C±D)
atau antibodi (E±F) terhadap TGF b 1 dan TGFb2, diperiksa 11 hari postaxotomy. Setelah traneksi, relatif terhadap kontrol palsu, infus antibodi kontrol IgG4
atau antibodi terhadap TGF b 1 dan TGFb2 menghasilkan peningkatan kelimpahan CR3-imunoreaktivitas. Nigra di sebelah kiri setiap gambar, striatum di
sebelah kanan. (A, C dan E) Skala bar, 400 m m (B, D dan F) Tampilan kation magni®yang lebih tinggi dari area persegi panjang ditunjukkan pada (A, C dan E),
masing-masing. Skala bar,
200 m m.

ã 2001 Federasi Masyarakat Neuroscience Eropa, Jurnal Ilmu Saraf Eropa, 14, 1667±1677
8 L.D.F. Moon dan J.W. Fawcett

Respons astrosit
Response astrositikdiperiksa menggunakan antibodi terhadap GFAP.
Pada semua hewan, 11 hari pasca-traneksi, GFAP-imunoreaktivitas
dikaitkan dengan sel-sel bintang di seluruh belahan ipsilateral. Pada
hewan 'axotomy + sham' (Gbr. 3A dan B) atau hewan 'axotomy +
IgG4' s (Gbr. 3C dan D), GFAP-immunoreactivity sangat intens di
sekitar lesi, menutup inti lesi sepenuhnya dengan jaringan padat
badan sel dan proses hipertrofi sebagian besar berorientasi tegak
lurus terhadap batas lesi (Gbr. 3E a nd F). GFAP-imunoreaktivitas
juga hadir di daerah sekitar kavitasi. Namun, GFAP-imunoreaktivitas
tidak ada dari inti lesi. Panjang rostrocaudal rata-rata daerah yang
tidak memiliki jumlah signi®cant sel GFAP-imunoreaktif adalah 100
m m.

Pada hewan 'axotomy + antiTGFb', tingkat GFAP-imunoreaktivitas

berkurang sedemikian rupa sehingga lebih sedikit badan sel astrosit
dan proses yang hadir di sekitar inti lesi, terutama dalam jarak 250
ã 2001 Federasi Masyarakat Neuroscience Eropa, Jurnal Neuroscien EropaCE, 14, 1667±1677
 Tidak ada regenerasi SSP setelah redaman bekas luka 9

m m dari batas lesi (Gbr. 3B). Di banyak tempat, kontrol IgG4 atau (C) antibodi terhadap TGF b 1 dan TGFb2, diperiksa 11 hari
GFAPimmunoreactivity tidak 'menutupi' inti lesi dan tampak longgar postaxotomy. Panah menunjukkan tingkat traneksi, panah menunjukkan lesi
dan terputus-putus. mengelilingi. Skala bar, 100 m m.

Analisis data yang diperoleh dengan densitometri optik kation

magni®rendah (Gambar 7a) mengungkapkan perbedaan signi cant
menjadi gugus tween (F2,15 = 5,12, P = 0,023) dan perbandingan post
hoc menunjukkan perbedaan signi®®cant antara gugus anti-TGFb
dan IgG4 (uji Tukey, P < 0,05). Hal ini menunjukkan bahwa infus
antibodi terhadap TGF b 1 dan TGFb2 (relatif terhadap IgG4
mengontroltibodi) menghasilkan penurunan GFAP-imunoreaktivitas,
dinilai 11 hari setelah traneksi.

Respon prekursor oligodendrosit dewasa

Respon sel progenitor oligodendrosit dewasa yang berbintang
diperiksa menggunakan antibodi terhadap NG2 chondroitin sulphate
proteoglycan (Nishiyama et al., 1999). Pada hewan 'axotomy +
sham', inti lesi pada dasarnya tidak memiliki sel NG2-imunoreaktif
bintang meskipun mengandung NG2-imunoreaktivitas yang terkait
dengan pembuluh darah (Gbr. 4A dan B). Inti lesi dan, ketika hadir,
rongga kecil, dikelilingi oleh sejumlah besar sel NG2-imunoreaktif
bintang yang prosesnya berjalan tegak lurus terhadap batas lesi dan
membentuk jaringan padat proses hipertrofik yang membentuk
struktur seperti glia limitans kontinu e, ini sering kurang padat secara
kaudal. Dengan demikian, meskipun sel-sel dengan NG2-
imunoreaktivitas rendah hadir di seluruh belahan ipsilateral, wilayah
yang mengandung sel-sel bintang yang sangat imunoreaktif untuk
NG2 disatukan®ke dalam jarak 250 m m dari inti lesion.
Pada hewan 'axotomy + IgG4', pola imunoreaktivitas NG2 yang
serupa terdeteksi (Gbr. 4C dan D). Namun, karena situs siam
transeksi dan infus lebih besar daripada mengikuti transeksi saja,
jumlah total NG2-imunoreaktivitaslebih besar pada hewan-hewan
ini. Namun, pada hewan 'axotomy + antiTGFb', tingkat
imunoreaktivitas NG2 berkurang sedemikian rupa sehingga lebih
sedikit badan sel progenitor oligodendrosit dan proses yang ada di
sekitar inti lesi, terutama jaringan dalam jarak 250 m mdari batas
lesi (Gbr. 4E dan F).
Pengamatan®ini dilakukan dengan analisis varians data yang
diperoleh dengan densitometri optik kation magni®rendah (Gambar
7b) yang menunjukkan perbedaan signi®cant antar kelompok (F 2,15 =
9,91, P = 0,002 ); Analisis post hoc menunjukkan perbedaan
signi®cant antara kelompok anti-TGF b dan IgG4 dan antara
kelompok infus IgG4 dan palsu (uji Tukey, P < 0,05). Dengan
demikian, relatif terhadap kontrol 'axotomy + sham', sementara
infus perilesi berulang antibodi IgG4 control meningkatkan gliosis
NG2 di sekitar lokasi aksotomi, ini dilemahkan setelah infus perilesi
berulang antibodi terhadap antiTGF b 1 dan anti-TGFb2.

Respons mikroglial dan makrofag

Antibodi terhadap reseptor komplemen 3 (CR3, klon MRC-OX42)
digunakan untuk mengidentifikasi mikroglia dan makrofag. Berikut

FIG. 6. CS56-immunolabelling untuk glikosaminoglikan kondroitin sulfat

setelah transeksi dan (A) infus palsu atau pengobatan dengan (B ) antibodi

ã 2001 Federasi Masyarakat Neuroscience Eropa, Jurnal Ilmu Saraf Eropa, 14, 1667±1677
10 L.D.F. Moon dan J.W. Fawcett

FIG. 7. Grafik yang menunjukkan kepadatan optik persentase yang dinormalisasi (hewan 'axotomy + IgG4' diambil sebagai 100%), untuk imunoreaktivitas perilesi
untuk (a) GFAP (b) NG2 (c) CR3 dan (d) CS56. Grafik menunjukkan sarana dan kesalahan standar sarana. Relatif terhadap hewan 'axotomy + IgG4', baik hewan
'axotomy + sham' dan 'axotomy + antiTGFb' shberutang signi cantly mengurangi imunoreaktivitas perilesi® untuk GFAP dan NG2. Relatif terhadap hewan
'axotomy + sham', imunoreaktivitas perilesi untuk CR3 dan CS56 lebih besar pada hewan 'axotomy + IgG4' dan 'axotomy + antiTGFb'.
transeksi dengan infus palsu,®mikroglia CR3-imunoreaktif rami halus TMAMPU 2. Pengobatan dan jumlah akson TH-imunoreaktif
terlihat di seluruh belahan ipsilateral. Sel-sel CR3-imunoreaktif Jumlah akson TH-imunoreaktif
yang dihitung 500 m m
ameboid bintang pada dasarnya tidak ada dari inti lesi tetapi sel-sel
anterior ke lokasi transeksi
CR3-imunoreaktif ameboid hadir di wilayah ini (Gbr. 5A dan B).
Pengobatan (rata-rata 6 SEM)
Namun, sel-sel CR3immunoreactive bintang hadir dalam jarak 500
Aksotomi + palsu 14.3 6 6.2
m m dari batas lesi dan, jika ada, rongga kecil. Namun, kepadatan
Aksotomi + garam + antiTGF b 1 + antiTGFb2 19.6 6 2.8
badan sel CR3-imunoreaktif dan proses dalam lesi sangat bervariasi
sedemikian®rupa sehingga, sementara beberapa daerah seluruhnya Aksotomi + garam + IgG4 19.5 6 3.9
dikelilingi oleh CR3-imunoreaktivitas, daerah lain mengandung mengontrol antibodi
Aksotomi + garam + GDNF 16.7 6 10.4
badan dan proses sel CR3-imunoreaktif yang kurang intens.
Aksotomi + garam + GDNF + antiTGF b 1 12.0 6 4.0
Pada hewan 'axotomy + IgG4', pola serupa dari ctivity CR3-
+ antiTGFb2
immunoreaterdeteksi (Gbr. 5C dan D). Namun, karena lokasi Aksotomi + garam + bFGF + IL-1a + 18.0 6 2.1
konsiam transeksi dan infus lebih besar daripada transeksi berikut antiTGF b 1 + antiTGFb 2
saja, jumlah total CR3-imunoreaktivitas lebih besar pada hewan ini CS GAG dinilai dengan immunostaining untuk CS56
dan meluas hingga 1000 m m dari lesi borders. Ini juga terjadi pada
Kondroitin sulfat glikosaminoglikan (CS GAG) terdeteksi dengan
hewan 'axotomy + antiTGFb' (Gbr. 5E dan F) dan tidak ada
immunostaining menggunakan antibodi imunoglobulin-M (IgM),
perbedaan nyata dalam CR3-imunoreaktivitas antara kedua
CS56, yang mengenali epitop yang sebagian besar ada di kedua
kelompok ini.
glikosaminoglikan kondroitin-4 dan kondroitin-6 sulfat dan
Pengamatan®ini dilakukan dengan analisis varians data yang
padatingkat esser l di kedua heparan- (Avnur & Geiger, 1984) dan
diperoleh dengan magni®cation densitometri optik rendah (Gambar
glikosaminoglikan dermatan-sulfat (Lips et al., 1995). Pekerjaan
7c) menunjukkan perbedaan signi®cant antar kelompok (F 2,15 = 4,55,
terbaru menunjukkan bahwa CS56 tidak mengenali unit standar 0-,
P = 0,0,32 ); Analisis post hoc menunjukkan perbedaan signi®cant
4- atau 6sulfat yang terdiri dari tulang punggung chondroitin sulfat
antara 'axotomy + sham' dan kedua kelompok lainnya (uji Tukey, P <
chains melainkan motif atipikal yang didistribusikan secara tidak
0,05). Tidak ada perbedaan antara kelompok 'axotomy + IgG4' dan
acak di dalamnya
'axotomy + antiTGFb'.
ã 2001 Federasi Masyarakat Neuroscience Eropa, Jurnal Neuroscien EropaCE, 14, 1667±1677
 Tidak ada regenerasi SSP setelah redaman bekas luka 11

FIG. 8. Tirosin hidroksilase-immunolabelling untuk neuron katekolaminergik termasuk akson nigral dopaminergik 11 hari setelah transeksi nigrostriatal dan (A)
infus palsu atau pengobatan dengan (B) mengontrol antibodi IgG4 (C) GDNF, atau antibodi terhadap TGF b 1 dan TGF b2 baik (D) sendiri atau (E)
dalam kombinasi dengan GDNF, atau (F) dengan bFGF dan IL-1a . Tidak ada perbedaan antara kelompok yang diamati dalam jumlah proses TH-reaktif yang
tumbuhlebih dari 500 m m anterior ke bidang traneksi. Bola puing-puing TH-imunoreaktif sering diamati. Nigra di sebelah kiri setiap gambar, striatum di
sebelah kanan. Panah menunjukkan tingkat traneksi, panah menunjukkan tingkat infus. Skala bar, 250 m
rantai ini (Sorrell et al., 1993). Kontrol immunostaining Respon akson nigral dopaminergik
menggunakan antibodi IgM tikus digunakan untuk menentukan Respon akson nigrostriatal dopaminergik divisualisasikan 11 hari
tingkat imunoreaktivitas nonspeci c yang terkait dengan protokol pasca transekdengan immunostaining menggunakan antibodi
pewarnaan sebagian karena reaktivitas silang antibodi IgM tikus terhadap TH. Pada hewan 'axotomy + sham', bagian distal dari
dengan antibodi tikus endogenous yang ada di lingkungan lesi®akut. saluran nigrostriatal dopaminergik merosot dengan hilangnya
Diperiksa 11 hari pasca-traneksi, difus, ekstraseluler persarafan striatum ipsilateral dan tanpa akson regenerati jarak
CS56immunoreactivity hadir pada hewan 'axotomy + sham' dalam jauh spontan. Pada saat ini, puing-puing TH-immunoreactive langka.
halo setebal 100 m yang mengelilingi dan di dalam inti lesi (Gbr. 6A). Bres TH-imunoreaktif ®diamati tumbuh secara ektopis di dalam inti
Sebaliknya, pada hewan 'axotomy + IgG4' (Gbr. 6B) dan 'axotomy + lesi, sering berorientasi sejajar dengan bidang traneksi, yaitu tegak
antiTGFb' (Gbr. 6C), difus, ekstraseluler CS56-imunoreaktivitas hadir lurus terhadap saluran nigrostriatal asli (Gbr. 8A). Akson sering
dalam dan hingga 2000 m m dari lesi. CS56-immunoreactivity tidak terpesona. Akson nigral TH-imunoreaktif juga diamati berbatasan
ada dari inti lesi pada semua hewan. dengan rongga kecil (jika ada) dan ventral ke parenkim otak pada
Analisis varians data yang diperoleh dengan densitometri optik meninges yang telah ditembus selama traneksi. Akson biasanya
kation magni®rendah (Gambar 7d) mengungkapkan perbedaan signi memanjang secara rostral tidak lebih dari 200 mm dan tidak
cant antara kelompok (F2,7 = 29,8, P = 0,002) dan perbandingan post beregenerasi di luar inti lesi.
hoc (uji Tukey, P < 0,05) menunjukkan signi®®cant perbedaan Pada semua kelompok hewan lain, pola pertumbuhan aksonal
antara 'axotomy + sham' dan kedua kelompok lain, menunjukkan yang serupa diamati, baik diobati dengan antibodi kontrol IgG4 (Gbr.
bahwa infus zat meningkatkan kelimpahan CS GAGs. Tidak ada 8B) atau GDNF (Gbr. 8C) atau dengan antibodi terhadap TGF b 1 and
perbedaan lain antara kelompok yang menunjukkan bahwa, relatif TGFb2 baik sendiri (Gbr. 8D) atau dalam kombinasi dengan GDNF
terhadap antibodi IgG4 control, kombinasi antibodi terhadap TGF b 1 (Gbr. 8E) atau dengan bFGF dan IL-1a (Gbr. 8F). Dengan demikian,
dan TGFb2 tidak mengurangi kelimpahan CS GAG yang dinilai 11 hari sejumlah besar proses THimmunoreactive tumbuh secara ektopis di
pasca-traneksi. dalam lesi, sering kali terpesona. Banyak dari akson ini tumbuh tegak
lurusterhadap orientasi saluran nigrostriatal asli (yaitu sejajar
ã 2001 Federasi Masyarakat Neuroscience Eropa, Jurnal Ilmu Saraf Eropa, 14, 1667±1677
12 L.D.F. Moon dan J.W. Fawcett
dengan bidang traneksi). Sekali lagi, kecambah akson TH-
imunoreaktif tidak beregenerasi di luar inti lesi meskipun pada
semua kelompok, sejumlah kecil akson memanjang hingga 800 m m
di dalam inti lesi anterior ke bidang traneksi.
Pengobatan dengan GDNF atau dengan bFGF dan IL-1a (baik
sendiri atau dalam kombinasi dengan antibodi terhadap TGF b 1 dan
TGFb2) tidak terlihat meningkatkan pertumbuhan akson nigral
dopaminergik anterior ke tempat traneksi. Memang, ketika dinilai
secara formal, tidak ada perbedaan antara kelompok dalam jumlah
akson nigral dopaminergik untuk tumbuh 500 m m anterior ke
bidang transeksi (Tabel 2; analisis varians, F5,26 = 0,35, P = 0,87). Hal
ini menunjukkan bahwa, dinilai 11 hari pascacedera, relatif terhadap
kontrol IgG4, pemberian antibodi perilesi terhadap TGF b 1 dan
TGFb2, baik sendiri atau dalam kombinasi dengan GDNF atau bFGF
with IL-1a, tidak signi cantly meningkatkan tunas lokal akson nigral
dopaminergik dalam parenkim otak di luar inti lesi®.
Diskusi
Kami telah menunjukkan bahwa, setelah transeksi nigrostriatal
unilateral pada tikus dewasa, pengobatan dengan kombinasi
antibodi terhadap TGF b 1 dan TGFb2 mengurangi (tetapi tidak
menghapuskan) respons astrosit dan sel progenitor oligodendrosit
dewasa NG2-imunoreaktif, meskipun bukan respons mikroglia /
makrofag atau CS GAG. Namun, meskipun penurunan gliosis ini,
pengobatan dengan kombinasi antibodi terhadap TGF b 1 dan TGFb2
tidak meningkatkan regenerasi akson nigral dopaminergik yang
dipotong di luar inti lesi; khususnya, akson nigral dopaminergik yang
dipotong tidak beregenerasi kembali ke targ et primer aslinya,
striatum ipsilateral.
Hasil ini konsisten dengan percobaan sebelumnya yang
menunjukkan bahwa berbagai antagonis TGFb memodulasi aspek
pembentukan bekas luka in vivo (Logan et al., 1994; Nath et al.,
1998; Logan et al., 1999a; Logan et al., 1999b). HAIpekerjaan Anda
juga menyiratkan bahwa isoform TGFb mengatur gliosis yang terkait
dengan astrosit dan nenek moyang oligodendrosit
NG2immunoreactive, meskipun percobaan lebih lanjut diperlukan
untuk menentukan isoform mana, jika salah satu, yang lebih penting
untuk regulation respons pada sel progenitor oligodendrosit NG2.
Kegagalan saat ini untuk mendeteksi efek apa pun pada mikroglia /
makrofag dari kombinasi antibodi terhadap TGF b 1 dan b 2 dapat
membatalkan pembatalan aktivitas oleh dua isoform seperti, ketika
diberikansendiri setelah cedera kortikal pada tikus dewasa,
sedangkan TGFb 2 mengurangi respons mikroglial / makrofag (Logan
et al., 1999b), TGFb1 meningkatkannya (Logan et al., 1994).
Berdebat melawan kemungkinan ini, bagaimanapun, adalah
pengamatan bahwa administrasi antagonis pan-TGF b, decorin,
mengurangi respons mikroglia / makrofag setelah cedera kortikal
(Logan et al., 1999a).
Kami berhipotesis bahwa pengurangan gliosis mungkin hanya
sebagian karena rute pemberianantib odies, yaitu, dengan infus
perilesi berulang, karena respons gliotik terhadap cedera diperkuat
oleh setiap injeksi intraparenchymal. Untuk menguji hipotesis ini,
ã 2001 Federasi Masyarakat Neuroscience Eropa, Jurnal Neuroscien EropaCE, 14, 1667±1677
percobaan tambahan dilakukan (data tidak ditampilkan). Tikus
dewasa diberilesi nigrostriatal mechani cal unilateral dan kanula
transkranial yang ditanamkan secara transkranial, memungkinkan
infus intraventrikular berulang kendaraan yang mengandung IgG4 (n
= 6) atau kombinasi antibodi terhadap TGF b 1 dan TGFb2 (n = 4).
Namun, tidak ada perbedaan yang ditemukan antara kelompok
dalam ukuran pembentukan bekas luka, atau dalam pertumbuhan
akson di luar bidang traneksi; hasil ini kemungkinan akan
mempengaruhi difusi yang buruk dari konsentrasi antibodi yang
memadai dari ventrikel ke lokasi transeksi (yang menembus
penghalang SSP ± CSF). Memang, kontrol dan antibodi manusia
eksperimental tidak terdeteksi di lokasi transeksi dengan pelabelan
imunoperoksidase menggunakan antibodi anti-manusia. Studi ini
menunjukkan bahwa rute intraventrikular mungkin bukan ruteefektif
untuk pengiriman antibodi ini ke situs lesi distal dan meninggalkan
pertanyaan yang belum terselesaikan, apakah metode alternatif
pengiriman antagonis ke TGFb dapat menghasilkan pengurangan
gliosis yang lebih jelas.
Hasil kami mengenai kegagalan akson nigral dopaminergik untuk
tumbuh melalui wilayah pembentukan bekas luka yang berkurang
konsisten dengan data yang tidak dipublikasikan yang dikutip
sebelumnya (Logan et al., 1994). Pekerjaan ini menunjukkan bahwa
atenuasi pembentukan bekas luka yang dimediasi oleh antibodi
against TGFb1 terjadi tanpa peningkatan bersamaan dalam tunas
lokal atau regenerasi akson jarak jauh 10 hari setelah cedera
tusukan kortikal pada tikus dewasa, seperti yang dinilai oleh
immunostaining untuk neuro®lament atau pertumbuhan terkait
protein-43. Perlu dicatat thdalam penelitian kami, pengiriman
antibodi manusia yang efektif dilakukan dengan jaringan
immunolabelling (menggunakan antibodi sekunder anti-manusia) 1
hari setelah infus terakhir kontrol dan antibodi®eksperimental. Oleh
karena itu, kegagalan kami untuk mendeteksi efek pada akson
bukanlah konsekuensi dari pengiriman yang gagal. Pengiriman
antibodi yang berhasil, tentu saja, juga®dipengaruhi oleh efek pada
gliosis yang telah kami jelaskan.
Kegagalan memotong akson nigral dopaminergik untuk tumbuh
melalui daerah bentuk bekas lukaberkurang mungkin karena
pengurangan pembentukan bekas luka menjadi parsial daripada
lengkap; penghapusan lengkap pembentukan bekas luka mungkin,
dengan demikian, diperlukan untuk menginduksi regenerasi akson
SSP jarak jauh yang substansial . Secara khusus, kami mengamati
tidak ada signi cant uction merahdalam kelimpahan perilesi CS
GAGs, (dinilai dengan immunolabelling menggunakan antibodi CS56)
yang diketahui membatasi pertumbuhan in vitro dan in vivo.®
Dengan demikian, anti-TGFbdimediasi down-regulasi astrocytosis
(dinilai menggunakan GFAPimmunolabelling) mungkin tidak
suf®cient untuk down-mengatur tingkat CS GAGs. Penjelasan yang
mungkin termasuk (i) peraturan independen
CS GAG dan GFAP oleh astrosit dan (ii) sintesis lanjutan CS GAG oleh
jenis sel lain (termasuk sel imunoreaktif NG2). Mungkin
jugaperubahan itu terjadi pada CS GAG selain yang dikenali oleh
antibodi CS-56; saat ini tidak jelas CSPG mana yang dikenali antibodi
ini. Hasil ini menekankan bahwa meskipun GFAP adalah penanda
yang baik untuk reaksi astrosit terhadap lesi, penanda lain untuk

gliosis memberikan informasi tambahan yang penting (misalnya
dengan immunolabelling untuk sel imunoreaktif NG2 atau untuk CS
GAGs).
Dalam beberapa kasus, molekul peningkat regenerasi potensial
tambahan diberikan bersama dengan antibodi terhadap TGF b 1 dan
TGFb2: glial cell line derived neurotrophic factor (GDNF) atau
kombinasi faktor pertumbuhan broblas dasar ®(bFGF) dengan
interleukin-1 a (IL-1a). Faktor-faktor ini dan dosisnya dipilih
berdasarkan pekerjaan sebelumnya yang dilakukan di laboratorium
termasuk kami sendiri. Pertama, GDNF meningkatkan pertumbuhan
akson dari neuron nigral dopaminergik in vitro dan in vivo (Sinclair
et al., 1996; Wilby et al., 1999). Kedua, kombinasi bFGF dan IL-1a
membuat kultur astrosit tiga dimensi lebih permisif untuk
pertumbuhan neurit dari neuron ganglion akar dorsal tikus neonatal
(Fok-Seang et al., 1998). Selanjutnya, karena efek ini dapat diblokir
oleh TGF b, satu would memprediksi bahwa kombinasi antibodi
terhadap TGF b 1 dan TGF b 2 dengan bFGF dan IL-1a mungkin lebih
meningkatkan penetrasi neurit daerah pembentukan bekas luka.
Namun, mengecewakan, pemberian intraparenchymal berulang dari
faktor-faktor ini, baik sendiri atau dalam kombinasi dengan antibodi
terhadap TGF b 1 dan TGFb2, tidak signi cantly meningkatkan
pertumbuhan akson nigrostriatal dopaminergik melalui atau di luar
inti lesi®. Kegagalan untuk mendeteksi pertumbuhan apa pun
mungkin berhubungan dengan jumlah hewan yang agak kecil yang
digunakan danpercobaan tambahan akan diperlukan untuk
mengevaluasi signi®cance dari hasil negatif ini dengan lebih ketat.
Namun demikian, dalam penelitian kecil ini, upaya untuk
meningkatkan regenerasi akson melalui bekas luka yang dilemahkan
sebagian setelah pemberian neurotrophins tidak berhasil.
Kesimpulannya, pemberian antibodi in vivo terhadap TGF b 1 dan
TGFb2 signi®cantly mengurangi gliosis yang disebabkan oleh transeksi
nigrostriatal pada tikus dewasa. Namun, pengurangan parsial ini
tidak disertai dengan perubahan dalam pertumbuhan aksonnigral
dopaminergik. Di masa depan, penting untuk mengevaluasi metode
alternatif pengiriman antibodi ini untuk mencapai pengurangan
gliosis yang lebih lengkap.
Ucapan Terima Kasih
Pekerjaan ini didanai oleh Medical Research Council, International Spinal
Research Trust, Wellcome Trust and Action Research. Antibodi terhadap
NG2 disediakan oleh Joel Levine, Departemen Neurobiologi dan Perilaku ,
Universitas Negeri New York di Stony Brook, NY 11794-5230.
Singkatan
bFGF, faktor pertumbuhan broblas dasar ®; CS GAG, kondroitin sulfat
glikosaminoglikan; GDNF, Glial cell-line Derived Neurotrophic Factor; GFAP,
protein asam fibrillary glial; IL-1, Interleukin-1; TGF, Mengubah Faktor
Pertumbuhan b.
Referensi
Asher, RA, Morgenstern, DA, Adcock, KA, Rogers, JH & Fawcett, JW (1999)
Versican diatur dalam cedera SSP dan merupakan produk dari sel garis
keturunan O-2A. Soc. Ilmu saraf. Abstr. , 25.750.
ã 2001 Federasi Masyarakat Neuroscience Eropa, Jurnal Ilmu Saraf Eropa, 14, 1667±1677
Tidak ada regenerasi SSP setelah redaman bekas luka 13
Asher, RA, Morgenstern, DA, Fidler, PS, Adcock, KA, Oohira , A., Braistead, JE,
Levine, JM, Margolis, RK, Rogers, JH & Fawcett, JW (2000) Neurocan
diregulasi di otak yang terluka dan astrosit yang diobati dengan sitokin. J.
Ilmu saraf. , 20, 2427±2438.
Avnur, Z. & Geiger, G. (1984) Lokalisasi imunositokimia kondroitin-sulfat asli
dalam jaringan dan sel kultur menggunakan antibodi monoklonal speci®c .
Sel, 38, 811±822.
Baghdassarian-Chalaye, D., Tour-Delbauffe, D., Gavaret, J.M. & Pierre, M.
(1993) Efek transformasi faktor pertumbuhan b1 pada matriks
ekstraseluler dan sitoskeleton astrosit berbudaya. Glia, 7, 193±202.
Brecknell, J.E., Dunnett, S.B. & Fawcett, J.W. (1995) Studi kuantitatif kematian
sel di substansia nigra setelah lesi mekanis bundel otak depan medial.
Ilmu saraf, 64, 219±227.
Brecknell, J.E. & Fawcett, J.W. (1996) Regenerasi aksonal. Wahyu 71,
227±255.
Flanders, K., Ludecke, G., Renzing, J., Hamm, C., Cissel, D. & Unsicker, K.
(1993) Efek TGFbs dan bFGF pada pertumbuhan sel astroglial dan
ekspresi gen in vitro. Sel mol. Ilmu saraf. , 4.406±417.
Fok-Seang, J., DiProspero, N.A., Meiners, S., Muir, E. & Fawcett, J.W. (1998)
Perubahan sitokin yang diinduksi dalam kemampuan astrosit untuk
mendukung migrasi prekursor oligodendrosit dan pertumbuhan akson.
Eur. J. Ilmu saraf. , 10, 2400±2415.
Krieglstein, K., Rufer, M., Suter-Crazzolara, C. & Unsicker, K. (1995) Fungsi
saraf dari faktor pertumbuhan transformasi beta. Int. J. Dev. Ilmu saraf. ,
13, 301±315.
Bibir, K., Stichel, CC & MuÈller, HW (1995) Penampilan terbatas tenascdi dan
kondroitin sulfat proteoglikan setelah transeksi dan tunas forniks
postcommissural tikus dewasa . J. Neurositol. , 24, 449±464.
Logan, A., Baird, A. & Berry, M. (1999a) Decorin melemahkan pembentukan
bekas luka gliotik di belahan otak tikus. SMA STM di Neurol. , 159,
504±510.
Logan, A. &; Berry, M. (1993) Mengubah faktor pertumbuhan beta 1 dan
faktor pertumbuhan broblas dasar ® pada SSP yang terluka. Tren
Pharmacol. , 14, 397±343.
Logan, A., Frautschy, SA, Gonzalez, AM, Sporn, M.B. & Baird, A. (1994) Efek
transformasi faktor pertumbuhan beta 1 pada produksi bekas luka pada
sistem saraf pusat yang terluka. Eur. J. Ilmu saraf. , 6.355±363.
Logan, A., Green, J., Hunter, A., Jackson, R. & Berry, M. (1999b)
Penghambatan jaringan parut glial di otak tikus yang terluka by antibodi
monoklonal manusia rekombinan untuk mengubah faktor pertumbuhan
beta 2. Eur. J. Ilmu saraf. , 11, 2367± 2374.
McCartney-Francis, NL & Wahl, SM (1994) Mengubah faktor pertumbuhan
beta: masalah hidup dan mati. J. leukosit biol. , 55, 401±409.
Moon, LDF, Asher, RA, Rhodes, KE, & Fawcett, JW (2001) Regenerasi akson
SSP kembali ke target mereka setelah pengobatan otak tikus dewasa
dengan kondroitinase ABC. Alam Neurosci. , 4.465±466.
Moon, LDF, Brecknell, JE, Franklin, RJ, Dunnett, SB & Fawcett, JW (2000)
Regenerasi akson SSP yang kuat melalui jalur yang habis dari glia SSP.
SMA STM di Neurol. , 161, 49±66.
Nath, RK, Kwon, B., Mackinnon, SE, Jensen, JN, Reznik, S. & Boutros, S. (1998)
Antibodi untuk mengubah faktor pertumbuhan beta rmendidik produksi
kolagen pada saraf perifer yang terluka. Plastik Rekonstruksi Surg. , 102,
1100±1108.
Nishiyama, A., Chang, A. & Trapp, B. (1999) Sel glial NG2+: populasi sel glial
baru di otak orang dewasa. J. Neuropat. SMA STM di Neurol. , 58, 1113±
1124.
Paxinos, G. & Watson, C. (1986) Otak Tikus dalam Koordinat Stereotaxic.
Pers Akademik, Sydney.
Raivich, G., Bohatschek, M., Kloss, C.U.A., Werner, A., Jones, L.J. &
Kreutzberg, G.W. (1999) Repertoar aktivasi neuroglial pada br ain yang
terluka: respons bertingkat, mekanisme molekuler dan isyarat terhadap
fungsi fisiologis. Otak Res. Rev., 30, 77±105.
14 L.D.F. Moon dan J.W. Fawcett

SchnaÈdelbach, O., Mandl, C. & Faissner, A. (1998) Ekspresi DSD-1 PG dalam

kultur saraf primer dan turunan glial, upregulation oleh TGF-beta dan
implikasi untuk interaksi sel±substrat dari garis sel glial oli-neu. Glia, 23,
99±119.
Sinclair, S.R., Svendsen, C.N., Torres, EM, Martin, D., Fawcett, JW &
Dunnett, S.B. (1996) GDNF meningkatkan kelangsungan hidup sel
dopaminergik dan ®ber pertumbuhan dalam cangkok nigral embrionik.
Laporan saraf, 7, 2547±2552.
Smith, GM & Hale, JH (1997) Regulasi makrofag / mikroglia tenascin astrosit:
tindakan sinergis mengubah faktor pertumbuhan beta dan faktor
pertumbuhan broblas dasar ®. J. Ilmu saraf. , 17, 9624±9633.
Sorrell, J.M., Carrino, D.A. & Caplan, A.I. (1993) Domain struktural dalam
kondroitin sulfat diidentifikasi oleh antibodi monoklonal anti-
kondroitin sulfat®. Immunosequencing kondroitin sulfates. Matriks, 13,
351± 361.
Varga, J., Rosenbloom, J. & Jiminez, SA (1987) Mengubah faktor
pertumbuhan beta menyebabkan peningkatan terus-menerus dalam
jumlah steady-state untuk mRNA kolagen dan ®bronectin tipe I dan tipe
II pada broblas manusia ®kulit normal. J. Biochem. , 297, 597±604.
Wilby, M.W., Sinclair, S.R., Muir, E.M ., Zeitlow, R., Adcock, K.A., Horellou,
P., Rogers, J.H., Dunnett, S.B. & Fawcett, J.W. (1999) Klon sekresi faktor
neurotropik yang diturunkan dari garis sel schwann SCTM41
meningkatkan survival dan pertumbuhan ber dari neuron nigral embrionik
yang dicangkokkan ke striatum dan ®ke substansia nigra yang lesi. J. Ilmu
saraf. , 19, 2301±2312.

ã 2001 Federasi Masyarakat Neuroscience Eropa, Jurnal Neuroscien EropaCE, 14, 1667±1677