SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK BIJI

BUNCIS (Phaseolus Vulgaris L.) DENGAN METODE DPPH

Usulan Penelitian Karya Ilmiah

Diajukan oleh :

Wiwik Kania

A1172166

Kepada

AKADEMI FARMASI NUSAPUTERA

SEMARANG

November 2019

i
 Usulan Penelitian Karya Tulis Ilmiah
SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK BIJI

BUNCIS (Phaseolus Vulgaris L.) DENGAN METODE DPPH

Diajukan :

Wiwik Kania

A1172166

Untuk dilanjutkan menjadi penelitian mahasiswa

Telah disetujui oleh

Pembimbing Direktur
Akademi Farmasi Nusaputera

Atalia Tamo Ina Bulu, M.Farm., Apt. Yithro Serang, M.Farm., Apt.
NIP : 07071979 NIP : 060707083
Tanggal : Tanggal :

ii
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL...................................................................................................i
HALAMAN PENGESAHAN....................................................................................ii
DAFTAR ISI...........................................................................................................iii
DAFTAR TABEL.....................................................................................................v
DAFTAR GAMBAR................................................................................................vi
INTISARI...............................................................................................................vii
BAB I. PENDAHULUAN.........................................................................................1
A. Latar Belakang Penelitian.............................................................................1
B. Rumusan Masalah........................................................................................3
C. Tujuan Penelitian..........................................................................................3
D. Batasan Masalah..........................................................................................4
E. Keaslian Penelitian.......................................................................................4
F. Manfaat Penelitian........................................................................................7
BAB II. TINJAUN PUSTAKA.................................................................................8
A. Telaah Pustaka.............................................................................................8
1. Tanaman Biji Buah Buncis........................................................................8
2. Metode Ekstraksi.....................................................................................12
3. Skrining Fitokimia....................................................................................17
4. Antioksidan..............................................................................................21
5. METODE DPPH......................................................................................22
6. Spektrofotometri UV-Vis..........................................................................23
B. Landasan Teori...........................................................................................24
C. Hipotesis.....................................................................................................27
BAB III. METODE PENELITIAN...........................................................................28
A. Tempat dan Waktu Penelitian....................................................................28
B. Rancangan Penelitian.................................................................................28
C. Populasi, Sampel dan Teknik Sampling.....................................................28
D. Identifikasi Variabel Penelitian....................................................................28
1. Variabel Bebas........................................................................................28
2. Variabel Terikat.......................................................................................28
3. Variabel Terkontrol..................................................................................29

iii
 E. Definisi Oprasional Variabel.......................................................................29
F. Instrumen Penelitian...................................................................................30
1. Alat..........................................................................................................30
2. Bahan......................................................................................................30
G. Jalannya Penelitian.....................................................................................31
1. Identifikasi...............................................................................................31
2. Pengambilan dan Penyiapan Sampel.....................................................31
3. Pembuatan Serbuk Kering Biji Buncis....................................................31
4. Pemeriksaan Serbuk Kering Biji Buncis..................................................31
5. Pembuatan Ekstrak.................................................................................32
6. Uji Kandungan Senyawa Kimia Ekstrak Biji Buncis................................33
7. Uji Aktivitas Antioksidan Biji Buncis........................................................33
8. Skema Kerja............................................................................................34
H. Analisis Data...............................................................................................35
JADWAL PENELITIAN.........................................................................................37
DAFTAR PUSTAKA.............................................................................................38

iv
 DAFTAR TABEL

Tabel 1. Keaslian penelitian..................................................................................4

Tabel 2. Jadwal penelitian ..................................................................................37

v
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Buah buncis.........................................................................................8

Gambar 2. Kerangka Flavonoid............................................................................19

Gambar 3. Determinasi dan skema kerja pembuatan ekstrak.............................34

Gambar 4. Determinasi dan skema kerja pembuatan ekstrak.............................35

vi
 INTISARI

Buah buncis (Phaseolus vulgaris l.) termasuk satu sayuran yang sangat

direkomendasikan karena kaya akan nutrisi penting yang bagus untuk

kesehatan. Buncis mengandung antioksidan tinggi yang ampuh menangkal

radikal bebas perusak sel sehat yang dapat memicu kanker. Antioksidan

merupakan senyawa yang dapat menghambat reaksi radikal bebas dalam tubuh.

Penelitian ini bertujuan untuk melakukan skrining fitokimia untuk

mengetahui kandungan senyawa saponin, senyawa flavonoid, senyawa tanin

dan menentukan aktivitas antioksidan dari biji buah buncis.

Skrining fitokimia dilakukan dengan menggunakan uji tabung. Ekstrak biji

buah buncis diperoleh dengan metode soxhletasi menggunakan pelarut etanol

96% dan uji aktivitas antioksidan menggunakan metode 1-1-difenil-2-pikrihidrazil

(DPPH).

Kata kunci : Phaseolus vulgaris l., skrining fitokimia, antioksidan.

vii
 BAB I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Penelitian

Indonesia sebagai negara tropis memiliki beraneka ragam

tumbuhan yang dapat dimanfaatkan sebanyak-banyaknya untuk

kepentingan manusia. Masyarakat Indonesia sejak zaman dahulu telah

mengenal tanaman yang mengandung kandungan obat atau dapat

menyembuhkan berbagai penyakit, akhir-akhir ini pemanfaatan tumbuhan

sebagai sumber obat-obatan dapat merubah pola hidup yang serba

instan. Salah satu tanaman yang mempunyai khasiat sebagai obat

adalah buah buncis (Phaseolus vulgaris l.) (Mugnisjah, 2004).

Buncis (Phaseolus vulgaris L.) adalah anggota sayuran genus

Phaseolus yang paling dikenal. Walaupun tidak menghasilkan jumlah

protein dan kalori setinggi buncis biji kering, buncis sayuran merupakan

sumber protein, vitamin, dan mineral yang penting. Buncis dikonsumsi

dalam bentuk polong yang dimasak, di Afrika dan Amerika Latin, tajuk

dan daunnya digunakan sebagai lalapan. Bagian yang juga dikonsumsi

dari buncis berupa biji yang keras, besar, tetapi masih muda (biji kupasan

segar), dan dalam jumlah yang lebih terbatas, biji kering beberapa kultivar

dan memiliki kandungan senyawa metabolit sekunder (Rubatzky &

Yamaguchi, 1998).

Senyawa metabolit sekunder merupakan senyawa kimia yang

umumnya mempunyai kemampuan bioaktifitas dan berfungsi untuk

mempertahankan diri dari lingkungan yang kurang menguntungkan

seperti suhu, iklim, maupun gangguan hama dan penyakit tanaman. Letak

1
geografis, suhu, iklim, dan kesuburan tanah suatu daerah sangatlah

menentukan kandungan senyawa kimia dalam suatu tanaman. Sebagai

contoh zat kimia yang terkandung dalam tanaman yang biasa digunakan

sebagai adalah alkaloid, flavonoid, glikosida, terpenoid, saponin, tanin

dan polifenol. Penggunaan obat kimia mengandung antioksidan ternyata

juga memiliki dampak yang kurang baik bagi kesehatan bila dikonsumsi

dalam jangka panjang. Saat ini pemanfaatan bahan alam yang

mengandung antioksidan sangat diutamakan dan semakin berkembang.

Pemanfaatan bahan alam sebagai antioksidan pengganti obat-obatan

banyak menerima respon positif dikalangan masyarakat. Salah satu

harapan sumber alternatif antioksidan yang berasal dari tanaman dan

dapat ditemukan di Indonesia (Salamah dkk., 2011).

Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat reaksi

oksidasi, dengan cara mengikat radikal bebas dan molekul yang sangat

reaktif. Berbagai metode digunakan untuk mengukur aktivitas antioksidan

tanaman, dapat memberikan hasil yang bervariasi tergantung pada

keberadaan radikal bebas tertentu yang digunakan sebagai reaktan.

DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) secara luas digunakan untuk menguji

kemampuan senyawa bertindak sebagai pencari radikal bebas atau donor

hidrogen, dan untuk mengevaluasi aktivitas antioksidan dari makanan.

Metode DPPH ini dipilih karena sederhana, mudah, cepat dan

peka serta hanya memerlukan sedikit sampel. Parameter yang digunakan

untuk uji penangkapan radikal DPPH adalah IC 50 yaitu konsentrasi

ekstrak. Pengukuran kadar dari ekstrak dilakukan dengan menggunakan

2
 metode spektrofotometri ultraviolet (uv) yang merupakan salah satu

metode yang cepat dan sederhana (Chaurasiya & Hebbar, 2013).

Berdasarkan penelitian sebelumnya yang telah dilakukan

(Wahyuni et al., 2009) karakterisasi senyawa bioaktif isoflavon dan uji

aktivitas antioksidan dari ekstrak tempe berbahan baku buncis

(Phaseolus Vulgaris L) dan kecipir (Psopocarpus Tetragonolobus). Dari

hasil aktifitas antioksidan pada buncis signifikan lebih rendah dari

antioksidan BHT, α-tokoferol, vitamin C tetapi masih lebih tinggi dari

antioksidan β-karoten.

Berdasarkan uraian tersebut, maka akan dilakukan penelitian

untuk mengetahui kandungan senyawa kimia yang terdapat pada serbuk

ekstrak biji buncis dengan metode sokletasi menggunakan etanol 95%

dan bagaimana potensi aktivitas antioksidan dengan metode DPPH.

B. Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang yang telah dikemukakan, dapat

dirumuskan permasalahan :

1. Senyawa apa yang terdapat dalam ekstrak etanol biji buah buncis

(Phaseolus Vulgaris L.) ?

2. Apakah ekstrak biji buncis (Phaseolus vulgaris L.) memiliki potensi

aktivitas antioksidan terhadap DPPH ?

C. Tujuan Penelitian

1. Untuk mengetahui senyawa apa yang terkandung dalam ekstrak

etanol dari biji buah buncis (Phaseolus Vulgaris L).

3
 2. Untuk mengetahui aktivitas antioksidan pada biji buah buncis

(Phaseolus Vulgaris L) dengan metode DPPH yang dinyatakan

dengan IC50.

D. Batasan Masalah

Beberapa batasan masalah dalam penelitian ini adalah sebagai

berikut :

1. Bagian tanaman buah buncis (Phaseolus vulgaris l.) yang digunakan

dalam penelitian ini adalah bagian biji yang sudah dikeringkan.

2. Metode soxhletasi yang digunakan untuk mendapatkan ekstrak.

3. Pelarut yang digunakan untuk soxhletasi adalah etanol 96%.

4. Skrining fitokimia dilakukan dengan menggunakan uji tabung.

5. Untuk uji aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode DPPH.

E. Keaslian Penelitian

Tabel 1. Keaslian penelitian

No. Nama Peneliti Judul Penelitian Hasil Penelitian

(Tahun

Penelitian)

1. Rizki Skrining Hasil skrining fitokimia

Fitokimia Dari menunjukkan serbuk ekstrak
Nugrahani
Ekstrak Buah buah buncis mengandung
dkk., 2016
Buncis senyawa kimia golongan
(Phaseolus flavonoid, alkaloid, fenol,
Vulgaris L) saponin,
Dalam Sediaan steroid dan triterpenoid
Serbuk
2. Vincentius Y. Potensi Fraksi yang berpotensi
Antioksidan
Utomo dkk., sebagai antioksidan adalah

4
 2018 Hasil Fraksinasi fraksi polar dengan IC50
Ekstrak Etanol
sebesar 158 ppm. Senyawa
Buah Bucis
metabolit sekunder yang
(Phaseolus
Vulgaris L) dominan terdapat pada fraksi

nonpolar, semipolar dan polar

adalah senyawa fenol.

Kandungan senyawa fenol

terbesar terdapat pada fraksi

polar yaitu 42%.

3. Idza N. Skrining Hasil penelitian menunjukan

Fitokimia Dan kandungan senyawa kimia biji
Sastrawan
Uji Aktivitas adas positive mengandung
dkk.,
Antioksidan senyawa falvonoid, tannin dan
Ekstrak Biji saponin, sedangkan untuk
Adas senyawa alkaloid, triterpenoid
(Foeniculum dan steroid memberikan hasil
Vulgare) yang negatif. Aktivitas
Menggunakan antioksidan dengan 1000;
Metode DPPH 2000; 3000; 4000; 5000 ppm,
memberikan hasil berturut-
turut yaitu 48.99 %, 33.92 %,
5.93 %, 21.23 %, 6.40 %.
Aktivitas antioksidan biji adas
tertinggi terdapat pada
konsentrasi 1000 ppm dengan
hasil 48.99 %.
4. Lydia Puspita Uji Aktivitas Analisis antioksidan dengan
Antioksidan Metode FRAP, Perbandingan
Sari Pardede
Pada ekstrak buncis dan ekstrak
dkk., 2018
Perbandingan daun pandan wangi yaitu 25%
Ekstrak Buncis banding 75% memberikan

5
 (Phaseolus aktivitas antioksidan setara
Vulgaris L.) dengan vitamin C tertinggi
Ekstrak Dan yaitu 116,6 AAE mg/g
Daun Pandan bahan dan unggul dalam
Wangi senyawa fitokimia.
(Pandanus
Amaryllifolius
Roxb.)
Menggunakan
Metode Frap
(Ferric Reducing
Antioxidant
Power)
5. Sri Wahyuni Karakterisasi Hasil uji aktivitas antioksidan
Senyawa pada tempe kecipir 0-hr
dkk., 2009
Bioaktif signifikan lebih besar dari
Isoflavon Dan kedelai kuning fermentasi 3-hr
Uji Aktivitas maupun BHT, berarti kecipir
Antioksidan Dari berpotensi sebagai sumber
Ekstrak Tempe antioksidan yang prospektif
Berbahan Baku untuk digunakan sebagai
Buncis pengganti kedelai kuning dan
(Phaseolus BHT. Aktifitas antioksidan
Vulgaris) Dan pada buncis signifikan lebih
Kecipir rendah dari antioksidan BHT,
(Psopocarpus α-tokoferol, vitamin C tetapi
Tetragonolobus masih lebih tinggi dari
) antioksidan β-karoten.
6. Risnafiani Karakterisasi Hasil menunjukan adanya
Daun Buncis ( senyawa steroid yang terdapat
dkk., 2015
Phaseolus di dalam ekstrak etanol fraksi
Vulgaris) dan n-heksana dan fraks etil asetat
Identifikasi yang ditandai dengan reaksi
Kandungan positif terhadap penampak

6
 Senyawa bercak LB. Analisis lebih lanjut
Steroid dengan terhadap fraksi n-heksana dan
Metode etil asetat dengan KCKT
Kromatografi menggunakan fase diam C18
Lapis Tipis dan dan fase karakterisasi
Kromatografi menunjukan identitas dari
Ciar Kinerja daun buncis, serta kandungan
Tinggi golongan senyawa kimia yang
terdapat pada daun buncis
yaitu steroid, alkaloid, kuinon,
tannin, flavonoid, polifenol,
monoterpen dan seskuiterpen.

F. Manfaat Penelitian

1. Secara akademis digunakan sebagai salah satu syarat untuk

mencapai program studi D3 di Akademi Farmasi Nusaputera.

2. Secara teoritis digunakan sebagai wahana untuk mengembangkan

pengetahuan khususnya dalam bidang biologi farmasi.

3. Secara praktis yaitu dilakukan skrining fitokimia untuk mengetahui

kandungan senyawa dan mengetahui uji aktivitas antioksidan dalam

ekstrak biji buah buncis yang sudah mengalami pemanasan dan

penyimpanan.

BAB II. TINJAUN PUSTAKA

A. Telaah Pustaka

7
1. Tanaman Biji Buah Buncis

a. Sistematika Tanaman

Gambar 1. Buah buncis (Abdurrosyid, 2018)

Kedudukan tanaman buncis dalam tatanama tumbuhan

(taksonomi) di klasifikasikan ke dalam (Benson, 1957):

Kingdom : Plant Kingdom

Divisio : Spermatophyta

Sub division : Angiospermae

Kelas : Dicotyledonae

Sub : Calyciflorae

Ordo : Rosales (Leguminales)

Famili : Leguminosae (Papilionaceae)

Sub family : Papilionoideae

Genus : Phaseolus

Spesies : Phaseolus vulgaris L.

b. Nama daerah

Tanaman buncis berasal dari Andean dan Amerika

Tengah. Wilayah selatan Meksiko dan wilayah panas Guatemala

menjadi pusat asal tanaman buncis. Peru, Ekuador, dan Bolivia

menjadi pusat sekunder. Tanaman buncis saat ini telah

dibudidayakan secara luas dinegara tropis dan subtropis. Buncis

8
 adalah tanaman kacang-kacangan utama di Amerika yang

beriklim tropis dan beberapa negara di Afrika. Buncis juga

merupakan tanaman minor di India dan kebanyakan Asia yang

beriklim tropis (Rubatzky & Yamaguchi, 1998).

c. Morfologi Tanaman

Buncis merupakan salah satu jenis tanaman sayuran

polong yang memiliki banyak kegunaan. Sebagai bahan sayuran,

polong buncis dapat dikonsumsi dalam keadaan muda atau

dikonsumsi bijinya. Dari ragam varietas tersebut, tanaman buncis

secara garis besar dibagi dalam dua tipe, yaitu buncis tipe

membelit atau merambat dan buncis tipe tegak atau tidak

merambat (Cahyono, 2007).

Morfologi tanaman kacang buncis terbagi menjadi enam

antara lain morfologi biji, akar, batang, daun, bunga, dan buah. Biji

dari kacang buncis memiliki bentuk bulat dan lonjong serta bagian

tenganya sedikit melengkung. Selain itu biji kacang buncis

memiliki warna yang bervariasi tergantung dari varietasnya dan biji

akan mengeras jika tanaman semakin tua umurnya (Vingga,

2018).

Batang tanaman buncis tidak berkayu dan umumnya tidak

keras, batang tanaman mempunyai buku-buku. Tinggi batang

tanaman buncis tipe merambat ketinggian batangnya dapat

mencapai sekitar 2,4-3,5 meter, umumnya batang buncis tipe

merambat tumbuh dari arah bawah menuju bagian atas dengan

cara membelit kearah kanan atau searah jarum jam (Amin, 2014).

9
 Daun buncis beranak daun tiga dan menyirip, berbentuk

jorong segitiga. Bagian yang dekat dengan pangkal melebar dan

bagian ujung meruncing, memiliki urat simetris, dan berwarna

hijau. Tangkai daun buncis berukuran panjang sekitar 10 cm. Dua

daun terletak bersebelahan dan satu daun berada di ujung tangkai

(Amin, 2014).

Tanaman buncis memiliki akar tunggang yang dapat

menembus tanah sampai pada kedalaman kurang lebih 1 meter.

Akar-akar yang tumbuh mendatar dari pangkal batang umumnya

menyebar pada kedalaman sekitar 60-90 cm. Bunga buncis

tersusun dalam karangan berbentuk tandan. Kuntum bunga

berwarna putih atau putih kekuningan, bahkan ada juga yang

merah atau violet. Pada buncis tipe merambat, keluarnya

karangan bunga tidak (Rukmana, 1994).

d. Kandungan Kimia

Pada buah, batang, dan daun buncis mengandung

senyawa kimia yaitu alkaloid, saponin, polifenol, dan flavonoid,

asam amino, asparagin, tannin, fasin (toksalbumin). Biji buncis

mengadung senyawa kimia yaitu glukoprotein, tripsin inhibitor,

hemaglutinin, stigmasterol, sitosterol, kaempesterol, allantoin dan

inositol (Hernani, 2006).

Kulit biji mengandung leukopelargonidin, leukosianidin,

kaempferol, kuersetin, mirisetin, pelargonidin, sianidin, delfinidin,

pentunididin dan malvidin. Sedangkan buncis segar mengandung

vitamin A dan vitamin C (Hernani, 2006). Kandungan kimia buncis

10
 memiliki manfaat yaitu untuk meluruhkan air seni, menurunkan

kadar gula dalam darah, bijinya dapat menurunkan tekanan darah

tinggi dan beri-beri, dan daunnya untuk menambah zat besi

(Hernani, 2006).

e. Manfaat Tanaman

Tanaman buncis dapat dimanfaatkan sebagai obat antara

lain dapat menurunkan kadar gula darah (Jannah dkk, 2013)

mencegah kanker usus besar dan kanker, serta dapat

melancarkan pencernaan karena kandungan serat yang dimiliki

(Batalla et.al., 2006).

Buncis merupakan sumber protein, vitamin dan mineral

yang penting dan mengandung zat-zat lain yang berkhasiat untuk

obat dalam berbagai macam penyakit. Gum dan pektin yang

terkandung pada buah buncis dapat menurunkan kadar gula

darah, sedangkan lignin berkhasiat untuk mencegah kanker usus

besar dan kanker payudara. Serat kasar dalam polong buncis

sangat berguna untuk melancarkan pencernaan sehingga dapat

mengeluarkan zat-zat racun dari tubuh (Cahyono, 2007).

Berdasarkan kegunaannya, buncis terbagi menjadi 4 kelompok,

yaitu :

a) Buncis Perancis : bagian yang dikonsumsi ialah polong

berdaging yang berwarna hijau kuning, atau ungu yang

mengandung biji yang belum berkembang. Polong tidak

mempunyai urat samping.

11
 b) Buncis filet haricot : polong mengandung urat samping (string),

tetapi polong muda berdaging yang dikonsumsi.

c) Buncis haricot : biji segar adalah bagian yang dimakan,

sedangkan polong mengandung urat samping dan serat

umumnya tidak dikonsumsi.

d) Buncis bijian kering : biji kupasan kering adalah bagian yang

dikonsumsi, sedangkan polong mempunyai urat samping,

serat, lapisan lir kertas, dan tidak dimakan (Rubatzky, 1998).

2. Metode Ekstraksi

Ekstraksi merupakan kegiatan penarikan kandungan kimia

yang terdapat pada simplisa. Ragam ekstraksi yang tep[at sudah

tentu bergantung pada tekstur dan kandungan air bahan tumbuhan

yang diekstraksi dan pada jenis senyawa yang diisolasi. Umumnya

kita perlu membunuh jaringan tumbuhan untuk mencegah terjadinya

oksidasi enzim atau hidrolisis (Harbone, 1996). Karena didalam

simplisa mengandung senyawa aktif yang berbeda – beda, sehingga

metode didalam penarikan senyawa aktif didalam simplisa harus

memperhatikan faktor seperti udara, suhu, cahaya, logam berat.

Prosesekstraksi dapat melalui tahap menjadi pembuatan serbuk,

pembasahan, penyariran, dan pemekatan (Depkes, 2000).

a. Metode Ekstraksi

1) Maserasi

Maserasi istilah aslinya adalah macerare (bahasa

Latin, artinya merendam). Maserasi adalah proses ekstraksi

12
 simplisia menggunakan pelarut dengan beberapa kali

pengadukan pada suhu ruangan. Prosedurnya dilakukan

dengan merendam simplisia dalam pelarut yang sesuai dalam

wadah tertutup. Pengadukan dilakukan dapat meningkatkan

kecepatan ekstraksi. Kelemahan dari maserasi adalah

prosesnya membutuhkan waktu yang cukup lama. Ekstraksi

secara menyeluruh juga dapat menghabiskan sejumlah besar

volume pelarut yang dapat berpotensi hilangnya metabolit.

Beberapa senyawa juga tidak terekstraksi secara efisien jika

kurang terlarut pada suhu kamar (27oC). Ekstraksi secara

maserasi dilakukan pada suhu kamar (27oC), sehingga tidak

menyebabkan degradasi metabolit yang tidak tahan panas

(Depkes, 2006).

Keuntungan ekstraksi menggunakan metode maserasi

adalah alat yang digunakan sederhana, biaya operasional

relatif murah, lebih hebat penyari atau pelarut, cocok untuk zat

yang tidak tahan terhadap panas sedangkan kelemahan

ekstraksi menggunakan metode ekstraksi adalah proses

penyarian tidak sempurna karena zat aktifnya hanya mampu

terekstraksi sebesar 50% saja, membutuhkan waktu yang

lama (Lukmana, 2017).

2) Sokletasi

Metode ekstraksi soxhlet adalah metode ekstraksi

dengan prinsip pemanasan dan perendaman sampel. Hal itu

menyebabkan terjadinya pemecahan dinding dan membran

13
sel akibat perbedaan tekanan antara di dalam dan di luar sel.

Dengan demikian, metabolit sekunder yang ada di dalam

sitoplasma akan terlarut ke dalam pelarut organik. Larutan itu

kemudian menguap ke atas dan melewati pendingin udara

yang akan mengembunkan uap tersebut menjadi tetesan yang

akan terkumpul kembali. Bila larutan melewati batas lubang

pipa samping soxhlet maka akan terjadi sirkulasi. Sirkulasi

yang berulang itulah yang menghasilkan ekstrak yang baik

(Depkes, 2006).

Prinsip sokletasi yaitu penyaringan yang berulang

ulang sehingga hasil yang didapat sempurna dan pelarut yang

digunakan relatif sedikit. Bila penyaringan ini telah selesai,

maka pelarutnya diuapkan kembali dan sisanya adalah zat

yang tersari. Metode sokletasi menggunakan suatu pelarut

yang mudah menguap dan dapat melarutkan senyawa organik

yang terdapat pada bahan tersebut, tapi tidak melarutkan zat

padat yang tidak diinginkan.

Metoda sokletasi seakan merupakan penggabungan

antara metoda maserasi dan perkolasi. Jika pada metoda

pemisahan minyak astiri (distilasi uap), tidak dapat digunakan

dengan baik karena persentase senyawa yang akan

digunakan atau yang akan diisolasi cukup kecil atau tidak

didapatkan pelarut yang diinginkan untuk maserasi ataupun

perkolasi ini, maka cara yang terbaik yang didapatkan untuk

pemisahan ini adalah sokletasi.

14
 Senyawa antioksidan alami dapat diperoleh dari suatu

bahan alam atau tanaman dilakukan dengan cara ekstraksi

menggunakan pelarut organik. Ekstraksi dilakukan

menggunakan pelarut etanol yang bersifat polar karena dapat

melarutkan komponen antioksidan yang merupakan golongan

metabolit sekunder (Henny, 2017).

Keuntungan dari metode sokletasi sampel terekstraksi

dengan sempurna, proses ekstraksi lebih cepat, pelarut yang

digunakan sedikit. Sedangkan kelemahan dari metode

soxhletasi adalah sampel sampel yang digunakan harus

sampel yang digunakan harus sampel yang tahan panas atau

tidak dapat digunakan pada sampel yang tidak tahan panas.

Karena sampel yang tidak tahan panas akan teroksidasi atau

tereduksi ketika proses sokletasi berlangsung (Endra, 2016).

3) Perkolasi

Perkolasi merupakan proses mengekstraksi senyawa

terlarut dari jaringan selular simplisia dengan pelarut yang

selalu baru sampai sempurna yang umumnya dilakukan pada

suhu ruangan. Perkolasi cukup sesuai, baik untuk ekstraksi

pendahuluan maupun dalam jumlah besar (Depkes, 2006).

4) Infusa

Infusa adalah sediaan cair yang dibuat dengan

menyari simplisia nabati dengan air pada suhu 90ºC selama

15 menit. Pembuatannya dengan mencampur simplisia nabati

15
 dengan derajat halus yang cocok dalam panci dengan air

secukupnya, panaskan diatas penangas air selama 15 menit

terhitung mulai suhu mencapai 90ºC sambil diaduk-aduk.

Serkai sebagai panas melalui kain flannel, tambahkan air

panas secukupnya melalui ampas hingga diperoleh volume

infuse yang dikehendaki (Pusmarani, 2017).

5) Dekokta

Proses penyarian dengan metoda ini hampir sama

dengan infus, perbedaanya terletak pada lamanya waktu

pemanasan yang digunakan. Dekokta membutuhkan waktu

pemanasan yang lebih lama dibanding metoda infus, yaitu 30

menit dihitung setelah suhu mencapai 90oC. Metoda ini jarang

digunakan karena proses penyarian kurang sempurna dan

tidak dapat digunakan untuk mengekstraksi senyawa yang

termolabil (sastrawan, 2013).

6) Destilasi

Distilasi atau penyulingan adalah suatu metode

pemisahan bahan kimia berdasarkan perbedaan kecepatan

atau kemudahan menguap (volatilitas) bahan. Dalam

penyulingan, campuran zat dididihkan sehingga menguap, dan

uap ini kemudian didinginkan kembali ke dalam bentuk cairan.

Zat yang memiliki titik didih lebih rendah akan menguap lebih

dulu (Santoso, 1997).

3. Skrining Fitokimia

16
 Skrining fitokimia merupakan tahap pendahuluan dalam satu

penelitihan fitokimia yang bertujuan umtuk memberikan gambaran

tentang golongan senyawa yang terkadang dalam tanaman yang

sedang diteliti.

Metode skirining fitokimia dilakukan dengan melihat reaksi

pengujian warna degan menggunakan suatu pereaksi warna. Hal

penting yang berperan penting dalam skrining fitokimia adalah

pemilihan pelarut dan metode ekstraksi (Kristianti dkk, 2008).

Pendekatan fitokimia meliputi analisis kualitatif kandungan kimia

dalam tumbuhan atau bagian tumbuhan (akar, batang, daun, bunga,

buah dll). Kandungan metabolit sekunder yang bioaktif yaitu alkaloida,

antrakuinon, flavonoida, glikosida jnatung, saponin (steroid dan

hiterpenoid ), tannin (polifenolat), minyak atsiri (terpenoid) iridoid dan

sebagainya. Tujuan dilakukan skrining fitokimia dalam penelitian ini

untuk mensurvei tumbuhan untuk mendapatkan kandungan bioaktif

atau kandungan yang berguna untuk pengobatan (Robinso,1995).

Adapun metode yang digunakan atau dipilih untuk melakukan

skrining fitokimia harus memenuhi beberapa persyaratan antara lain

sederhana, cepat, dapat dilakukan dengan peralatan minimal, selektif

terhadap golongan senyawa yang dipelajari, bersifat semikuantitatif

yaitu memiliki batas kepekaan untuk senyawa yang dipelajari, dapat

memberikan keterangan tambahan ada/tidaknya senyawa dari

golongan yang dipelajari (Robinson,1995).

a. Alkaloid

17
 Alkaloid merupakan senyawa organik yang mengandung

nitrogen dari tumbuhan murni, berupa senyawa heterolitik yang

kompleks struktur dan hampir semuanya mempunyai kereaktifan

farmakologi yang hebat. Setelah diekstraksi alkaloid bebas dapat

diperoleh dengan pengolahan lanjutan dengan basa dalam air.

Sifat fisika dari senyawa alkaloid yang telah diisolasi

merupakan padatan kristal dengan titik lebur yang tertentu atau

mempunyai kisaran dekomposisi. Sedikit alkaloid yang termasuk

amorf dan beberapa seperti nikotin dan konini berupa cairan.

Kebanyakan alkaloid tersebut tidak berwarna, tetapi beberapa

senyawa yang kompleks, spesies aromatik berwarna (contoh,

berberin berwarna kuning dan betanin merah). Pada umumnya

basa bebas alkaloid hanya larut dalam pelarut organik, meskipun

pseudo dan protoalkaloid larut dalam air. Garam alkaloid dan

alkaloid quartener sangat larut dalam air (Sastrohamidjojo, 1995).

b. Flavonoid

Flavonoid merupakan salah satu kelompok senyawa

metabolit sekunder yang paling banyak ditemukan di dalam

jaringan tanaman (Rajalakshmi, 1985). Flavonoid termasuk dalam

golongan senyawa phenolik dengan struktur kimia C6-C3-C6

(Maslarova et.al., 2001).

Berbagai jenis senyawa, kandungan dan aktivitas

antioksidatif flavonoid sebagai salah satu kelompok antioksidan

alami yang terdapat pada sereal, sayur-sayuran dan buah, telah

banyak dipublikasikan. Flavonoid berperan sebagai antioksidan

18
 dengan cara mendonasikan atom hidrogennya atau melalui

kemampuannya mengkelat logam, berada dalam bentuk glukosida

(mengandung rantai samping glukosa) atau dalam bentuk bebas

yang disebut aglikon (Cuppett et.al.,1954).

Gambar 2. Kerangka Flavonoid (Febe, 2013)

c. Terpenoid

Terpenoid merupakan derivat dehidrogenasi dan

oksigenasi dari senyawa terpen. Terpen merupakan suatu

golongan hidrokarbon yang banyak dihasilkan oleh tumbuhan dan

sebagian kelompok hewan. Secara struktur kimia terenoid

merupakan penggabungan dari unit isoprena, dapat berupa rantai

terbuka atau siklik, dapat mengandung ikatan rangkap, gugus

hidroksil, karbonil atau gugus fungsi lainnya. Rumus molekul

terpen adalah (C5H8)N. Terpenoid disebut juga dengan isoprenoid.

Hal ini disebabkan karena kerangka karbonnya sama seperti

senyawa isopren (Lenny, 2006).

d. Saponin

Saponin adalah suatu glikosida alamiah yang terikat

dengan steroid atau triterpena. Saponin mempunyai aktifitas

farmakologi yang cukup luas diantaranya meliputi

19
 immunomodulator, anti tumor, anti inflamasi, antivirus, anti jamur,

dapat membunuh kerang-kerangan, hipoglikemik, dan efek

hypokholesterol. Saponin juga mempunyai sifat bermacam-

macam, misalnya: terasa manis, ada yang pahit, dapat berbentuk

buih, dapat menstabilkan emulsi, dapat menyebabkan hemolisis

(Patra, 2009).

Dalam pemakaiannya saponin bisa dipakai untuk banyak

keperluan, misalnya dipakai untuk membuat minuman beralkohol,

dalam industry pakaian, kosmetik, membuat obat-obatan, dan

dipakai sebagai obat tradisional. Biarpun saponin bisa diisolasi

dari binatang tingkat rendah, sebenarnya saponin ditemukan

terutama dalam tumbuhtumbuhan. Beberapa fungsi pada Saponin

terutama terhadap kesehatan antara lain dapat mengurangi resiko

meningkatnya, mempersempit Jalur risiko kanker, meningkatkan

sistem kekebalan, memperkecil tingkat kekeroposan yang terjadi

pada tulang, sebagai antioksidan (Negi, 2013).

e. Tanin

Tanin adalah senyawa metabolit sekunder yang terdapat

pada beberapa tanaman. Tanin mampu mengikat protein,

sehingga protein pada tanaman dapat resisten terhadap degradasi

oleh enzim protease di dalam silo ataupun rumen (Kondo et al.,

2004). Tanin selain mengikat protein juga bersifat melindungi

protein dari degradasi enzim mikroba maupun enzim protease

pada tanaman (Oliveira et al., 2009).

20
 Tanin merupakan senyawa kimia yang tergolong dalam

senyawa polifenol (Deaville et al., 2010). Tanin mempunyai

kemampuan mengendapkan protein, karena tanin mengandung

sejumlah kelompok ikatan fungsional yang kuat dengan molekul

protein yang selanjutnya akan menghasilkan ikatan silang yang

besar dan komplek yaitu protein tanin. Tanin mempunyai berat

molekul 0,5-3 KD. Tanin alami larut dalam air dan memberikan

warna pada air, warna larutan tanin bervariasi dari warna terang

sampai warna merah gelap atau coklat, karena setiap tanin

memiliki warna yang khas tergantung sumbernya (Ahadi, 2003).

4. Antioksidan

Antioksidan adalah senyawa kimia yang dapat

menyumbangkan satu atau lebih elektron kepada radikal bebas,

sehingga radikal bebas tersebut dapat diredam (Suhartono, 2002).

Berdasarkan sumber perolehannya ada 2 macam antioksidan, yaitu

antioksidan alami dan antioksidan buatan (sintetik) (Dalimartha dan

Soedibyo, 1999). Tubuh manusia tidak mempunyai cadangan

antioksidan dalam jumlah berlebih, sehingga jika terjadi paparan

radikal berlebih maka tubuh membutuhkan antioksidan eksogen.

Adanya kekhawatiran akan kemungkinan efek samping yang belum

diketahui dari antioksidan sintetik menyebabkan antioksidan alami

menjadi alternatif yang sangat dibutuhkan (Sunarni, 2005).

Antioksidan alami mampu melindungi tubuh terhadap

kerusakan yang disebabkan spesies oksigen reaktif, mampu

menghambat terjadinya penyakit degeneratif serta mampu

21
 menghambat peroksidae lipid pada makanan. Meningkatnya minat

untuk mendapatkan antioksidan alami terjadi beberapa tahun terakhir

ini. Antioksidan alami umumnya mempunyai gugus hidroksi dalam

struktur molekulnya (Sunarni, 2005).

Antioksidan adalah senyawa yang dapat menunda,

memperlambat dan mencegah terjadinya reaksi oksidasi (Winarno,

2002) menyatakan bahwa antioksidan adalah suatu zat yang dapat

menghentikan reaksi pembentukan radikal bebas.

Mekanisme kerja dari antioksidan berupa pemberi atom

hydrogen (anti oksidan primer). Senyawa ini dapat memberikan atom

hydrogen secara cepat ke radikal lipida atau mengubahnya kebentuk

yang lebih stabil, sementara turunan dari radikal antioksidan tersebut

memilki keadaan lebih stabil dibandingkan dengan radikal lipida.

Memperlambat laju antioksidasi dengan berbagai mekanisme diluar

mekanisme pemutusan rantai autooksidasi dengan pengubahan

radikal lipid ke bentuk lebih stabil.

5. METODE DPPH

Metode yang paling sering digunakan untuk menguji aktivitas

antioksidan tanaman obat adalah metode uji dengan menggunakan

radikal bebas DPPH. Tujuan metode ini adalah mengetahui parameter

konsentrasi yang ekuivalen memberikan 50% efek aktivitas

antioksidan (IC50). Hal ini dapat dicapai dengan cara

menginterpretasikan data eksperimental dari metode tersebut.

DPPH merupakan radikal bebas yang dapat bereaksi dengan

senyawa yang dapat mendonorkan atom hidrogen, dapat berguna

22
 untuk pengujian aktivitas antioksidan komponen tertentu dalam suatu

ekstrak (Prakash, 2010).

Karena adanya elektron yang tidak berpasangan, DPPH

memberikan serapan kuat pada 517 nm. Ketika elektronnya menjadi

berpasangan oleh keberadaan penangkap radikal bebas, maka

absorbansinya menurun secara stokiometri sesuai jumlah elektron

yang diambil. Keberadaan senyawa antioksidan dapat mengubah

warna larutan DPPH dari ungu menjadi kuning (Mohammad dkk.,

2009). Perubahan absorbansi akibat reaksi ini telah digunakan secara

luas untuk menguji kemampuan beberapa molekul sebagai

penangkap radikal bebas.

Metode DPPH merupakan metode yang mudah, cepat, dan

sensitif untuk pengujian aktivitas antioksidan senyawa tertentu atau

ekstrak tanaman (Miller et al., 2010).

6. Spektrofotometri UV-Vis

Spektrofotometri Sinar Tampak (UV-Vis) adalah pengukuran

energi cahaya oleh suatu sistem kimia pada panjang gelombang

tertentu (Day, 2002). Sinar ultraviolet (UV) mempunyai panjang

gelombang antara 200-400 nm, dan sinar tampak (visible) mempunyai

panjang gelombang 400-750 nm. Pengukuran spektrofotometri

menggunakan alat spektrofotometer yang melibatkan energi

elektronik yang cukup besar pada molekul yang dianalisis, sehingga

spektrofotometer UV-Vis lebih banyak dipakai untuk analisis kuantitatif

dibandingkan kualitatif. Spektrum UV-Vis sangat berguna untuk

pengukuran secara kuantitatif. Konsentrasi dari analit di dalam larutan

23
 bisa ditentukan dengan mengukur absorban pada panjang gelombang

tertentu dengan menggunakan hukum Lambert-Beer (Rohman, 2007).

Hukum Lambert-Beer menyatakan hubungan linieritas antara

absorban dengan konsentrasi larutan analit dan berbanding terbalik

dengan transmitan. Dalam hukum Lambert-Beer tersebut ada

beberapa pembatasan yaitu sinar yang digunakan dianggap

monokromatis, penyerapan terjadi dalam suatu volume yang

mempunyai penampang yang sama, senyawa yang menyerap dalam

larutan tersebut tidak tergantung terhadap yang lain dalam larutan

tersebut, tidak terjadi fluorensensi atau fosforisensi, dan indeks bias

tidak tergantung pada konsentrasi larutan.

B. Landasan Teori

Indonesia sebagai negara tropis memiliki beraneka ragam

tumbuhan yang dapat dimanfaatkan sebanyak-banyaknya untuk

kepentingan manusia. Masyarakat Indonesia sejak zaman dahulu telah

mengenal tanaman yang mengandung senyawa obat atau dapat

menyembuhkan berbagai penyakit. Pada era munculnya berbagai jenis

penyakit degeneratif baru, akhir-akhir ini pemanfaatan tumbuhan sebagai

sumber obat-obatan dapat merubah pola hidup yang serba instan (Sri

dkk., 2016).

Tumbuhan merupakan sumber senyawa kimia baik senyawa kimia

hasil metabolisme primer atau disebut metabolit primer seperti

karbohidrat, protein, lemak, yang digunakan sendiri oleh tumbuhan

tersebut untuk pertumbuhannya, maupun sebagai sumber senyawa

24
metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid, steroid/terpenoid, saponin

dan tanin. Senyawa metabolit sekunder merupakan senyawa kimia yang

umumnya mempunyai kemampuan bioaktifitas dan berfungsi untuk

mempertahankan diri dari lingkungan yang kurang menguntungkan

seperti suhu, iklim, maupun gangguan hama dan penyakit tanaman. Letak

geografis, suhu, iklim, dan kesuburan tanah suatu wilayah sangat

menetukan kandungan senyawa kimia dalam suatu tanaman. Pada

tanaman yang sama jenisnya kandungan senyawa kimianya berbeda

antara satu daerah dengan daerah lainnya (Sri dkk., 2016). Tanaman

buncis dapat dimanfaatkan sebagai obat antara lain dapat menurunkan

kadar gula darah (Jannah dkk, 2013) mencegah kanker usus besar dan

kanker payudara (Waluyo, 2013) serta dapat melancarkan pencernaan

karena kandungan serat yang dimiliki (Batalla et al., 2006).

Buncis merupakan tanaman semusim berbentuk perdu. Tanaman

ini merupakan salah satu kelompok kacang-kacangan yang digemari

masyarakat. Selain itu, buncis menjadi salah satu sumber protein nabati,

vitamin A, B, dan C yang terdapat pada bijinya (Zulkarnain, 2013). Buncis

juga memiliki beberapa khasiat untuk kesehatan yaitu mengandung

antioksidan dalam jumlah tinggi yang dapat mencegah kerusakan akibat

radikal bebas. Antioksidan alami mampu melindungi tubuh terhadap

kerusakan yang disebabkan spesies oksigen reaktif, mampu

menghambat terjadinya penyakit degeneratif serta mampu menghambat

peroksidae lipid pada makanan.

Metode yang paling sering digunakan untuk menguji aktivitas

antioksidan tanaman obat adalah metode uji dengan menggunakan

25
 radikal bebas DPPH. Tujuan metode ini adalah mengetahui parameter

konsentrasi yang ekuivalen memberikan 50% efek aktivitas antioksidan

(IC50). DPPH merupakan radikal bebas yang dapat bereaksi dengan

senyawa yang dapat mendonorkan atom hidrogen, dapat berguna untuk

pengujian aktivitas antioksidan komponen tertentu dalam suatu ekstrak

(Prakash, 2010). Oleh karena itu untuk pengukuran adsorben pada

panjang gelombang dengan spektrofotometri Sinar Tampak (UV-Vis).

Spektrofotometri Sinar Tampak (UV-Vis) adalah pengukuran

energi cahaya oleh suatu sistem kimia pada panjang gelombang tertentu

(Day, 2002). Konsentrasi dari analit di dalam larutan bisa ditentukan

dengan mengukur absorban pada panjang gelombang tertentu dengan

menggunakan hukum Lambert-Beer (Rohman, 2007).

Berdasarkan penelitian sebelumnya yang telah dilakukan

(Wahyuni dkk., 2009) karakterisasi senyawa bioaktif isoflavon dan uji

aktivitas antioksidan dari ekstrak tempe berbahan baku buncis

(Phaseolus Vulgaris L) dan kecipir (Psopocarpus Tetragonolobus). Dari

hasil aktifitas antioksidan pada buncis signifikan lebih rendah dari

antioksidan BHT, α-tokoferol, vitamin C tetapi masih lebih tinggi dari

antioksidan β-karoten.

C. Hipotesis

1. Terdapat kandungan senyawa kimia pada Ekstrak biji buah buncis

(Phaseolus vulgaris l.).

2. Ekstrak biji buah buncis (Phaseolus vulgaris l.) memiliki aktivitas

antioksidan metode DPPH yang dinyatakan dengan IC50.

26
27
 BAB III. METODE PENELITIAN

A. Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian dilakukan di Laboratorium Fitokimia dan Laboratorium

Kimia Akademi Farmasi Nusaputera Semarang. Waktu penelitian

dilakukan pada bulan Februari – April 2020.

B. Rancangan Penelitian

Penelitian yang dilakukan menggunakan metode eksperimental

laboratorium, mengenai skrining fitokimia dan uji aktivitas antioksidan

pada biji buah buncis (Phaseolus vulgaris L.) dengan metode soxhletasi.

C. Populasi, Sampel dan Teknik Sampling

Populasi dalam penelitian ini adalah tanaman buncis (Phaseolus

vulgaris L.). Sampel yang digunakan adalah biji buncis yang tidak terlalu

tua yang diperoleh di Bandungan, Kabupaten Semarang. Cara

pengambilan sampel yang digunakan dalam pengambilan biji buncis

(Phaseolus vulgaris L.) yaitu secara teknik random sampling.

D. Identifikasi Variabel Penelitian

1. Variabel Bebas

Variabel bebas merupakan variabel yang mempengaruhi atau

menjadi penyebab terjadinya perubahan pada variabel lainnya.

Variabel bebas yang digunakan dalam penelitian ini adalah ekstrak

etanol biji buncis (Phaseolus Vulgaris L.) dari hasil ekstraksi dengan

metode sokletasi.

2. Variabel Terikat

28
 Variabel terikat adalah variabel yang terbentuk karena dipengaruhi

oleh adanya variabel lain atau karena adanya variabel bebas.

Variabel terikat pada penelitian ini adalah konsentrasi uji aktivitas

antioksidan dengan metode DPPH.

3. Variabel Terkontrol

Variabel terkontrol merupakan variabel yang dibatasi atau

dikendalikan pengaruhnya didalam hal tertentu. Variabel terkontrol

dalam penelitian ini adalah suhu, konsentrasi ppm, dan DPPH.

E. Definisi Oprasional Variabel

Simplisia adalah bahan alamiah yang dipergunakan sebagai obat

yang belum mengalami pengolahan apapun juga dan kecuali dikatakan

lain, berupa bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995). Biji buah

buncis (Phaseolus Vulgaris L.) adalah jenis bagian tumbuhan dari

tanaman buncis yang digunakan dalam penelitian ini. Bagian tumbuhan

yang digunakan adalah biji tanaman buncis. Biji buah buncis (Phaseolus

Vulgaris L.) didapatkan dari Bandungan, Kabupaten Semarang. Biji yang

dibuat ekstrak yaitu biji yang tidak terlalu tua.

Ekstrak adalah sedian kental yang di peroleh dengan

mengekstraksi senyawa aktif dari simplisa nabati atau simplisa hewani

menggunakan pelarut yang sesuai. Ekstrak biji buncis (Phaseolus

Vulgaris L.) merupakan hasil yang berbentuk cairan yang didapat dengan

menggunakan etanol 96% sebagai pelarutnya melalui metode sokletasi.

Penggunaan metode sokletasi pada penelitian ini karena metode

sokletasi sampel dapat terekstraksi dengan sempurna, dan proses

ekstraksi lebih cepat.

29
 Uji aktivitas antioksidan adalah teknik untuk mengetahui

keberadaan antioksidan pada ekstrak etanol biji buncis (Pheseolus

Vulgaris L.) dan mengetahui keberadaan kandungan antivitas antioksidan

dalam ekstrak etanol biji buncis (Phaseoulus Vulgaaris L.). Salah satu

metode yang digunakan untuk pengujian aktivitas antioksidan adalah

metode DPPH. Metode DPPH didasarkan pada kemampuan antioksidan

untuk menghambat radikal bebas dengan mendonorkan atom hidrogen.

Uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH menggunakan 1,1-difenil-

2-pikrilhidra-zil (DPPH) sebagai radikal bebas. Prinsipnya adalah reaksi

penangkapan hidrogen oleh DPPH dari senyawa antioksidan, misalnya

troloks, yang mengubahnya menjadi 1,1-difenil-2-pikrilhidrazin.

F. Instrumen Penelitian

1. Alat

Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah alat soxhlet, oven

(WTB binder), evaporator, timbangan digital (Ohaus), pipet mikro,

desikator (Memert), spektrofotometer UV-Vis (Amtast), ayakan, kertas

saring, alat-alat gelas lainnya.

2. Bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah sampel

biji buncis, etanol 96%, HCL pekat, aquades, amilalkohol, HCL 2M,

kloroform, anhidra asetat, H2SO4 pekat, magnesium bubuk, FeCl3 1%,

larutan DPPH.

30
G. Jalannya Penelitian

1. Identifikasi

Identifikasi tanaman biji buncis bertujuan untuk menetapkan

kebenaran yang berkaitan dengan ciri-ciri morfologi. Determinasi

tanaman biji buncis dilakukan di Universitas Diponegoro Jawa

Tengah.

2. Pengambilan dan Penyiapan Sampel

Pengambilan sampel biji buncis dilakukan di Bandungan,

Kabupaten Semarang, dengan teknik pemilihan biji buncis yang

sudah tua, buah buncis dikupas diambil bijinya, lalu dikeringkan

dioven dengan suhu 50 – 60 oC sampai kering. Tujuan pengeringan

adalah untuk mengurangi kadar air sehingga mencegah terjadinya

perubahan mutu atau kualitas, menghindari pertumbuhan jamur dan

bakteri, memudahkan dalam proses penyerbukan (Harbone 1987).

3. Pembuatan Serbuk Kering Biji Buncis

Biji buncis yang kering diblender hingga halus. Biji buncis yang

sudah halus diayak dengan ayakan nomor 40. Tujuan penyerbukan

adalah untuk memperluas permukaan partikel dengan pelarut

sehingga proses ekstraksi dapat berlangsung efektif dan cepat.

4. Pemeriksaan Serbuk Kering Biji Buncis

a. Pemeriksaan Organoleptis

Pemeriksaan ini meliputi bentuk, warna, bau dan rasa dari serbuk

kering Biji Buncis.

31
 b. Pemeriksaan Mikroskopis

Pemeriksaan dilakukan untuk mengetahui bentuk anatomi jaringan

berdasarkan fragmen pengenal yang spesifik. Pada penampang

melintang buah tampak pada bagian kulit buah yang terdiri dari

epikarpium, mesokarpium, endokarpium.

c. Penetapan Randemen

Penetapan persen rendemen dilakukan untuk menentukan dosis

dengan mengukur berat basah Biji Buncis dan berat serbuk kering

Biji Buncis yang didapat, kemudian dihitung dengan rumus:

Berat serbuk kering biji buncis

Persen randemen = × 100 %
Berat basah biji buncis

d. Uji Kelembaban

Prinsip metode uji ini adalah pengukuran kandungan air

yang berada di dalam bahan,dilakukan dengan cara yang tepat

diantara cara titrasi, destilasi, atau gravimetri. Analisis gravimetri

merupakan salah satu metode analisis kuantitatif dengan

penimbangan. Syarat kadar air suatu rimpang adalah dengan

prosentase tidak lebih dari 8% (Azizah, 2015).

Bobot sebelum dioven−Bobot sudah dioven

% kadar air = x 100%
Bobot sbelum dioven

5. Pembuatan Ekstrak

Serbuk biji buncis diekstraksi dengan menggunakan metode

soxhletasi. Mula-mula 300 gram serbuk biji buncis dimasukan ke

dalam alat soxhletasi yang telah dibungkus dengan kertas saring.

32
 Ekstraksi menggunakan pelarut etanol 96% hingga sirkulasi

sempurna. Filtrat dikumpulkan lalu diuapkan dengan evaporator

hingga diperoleh ekstrak kental.

6. Uji Kandungan Senyawa Kimia Ekstrak Biji Buncis

a. Identifikasi Saponin

Ekstrak biji buncis dimasukan ke dalam tabung reaksi,

ditambahkan air suling sehingga seluruh cuplikan terendam,

dididihkan selama 2-3 menit, dan selanjutnya didinginkan,

kemudian dikocok kuat-kuat. Hasil positif ditunjukan dengan

terbentuk buih putih yang stabil (sastrawan, 2013).

b. Identifikasi Flavonoid

Biji buncis yang telah diekstrak ditambahkan 5 ml etanol

dan dipanaskan selama lima menit di dalam tabung reaksi.

Selanjutnya ditambahkan HCl pekat, kemudian ditambahkan 0.2 g

bubuk Mg, hasil positif ditunjukkan dengan timbulnya warna merah

tua (magenta) dalam waktu 3 menit (Sastrawan, 2013).

c. Identifikasi Tanin

Ekstrak biji buncis (Phaseolus Vulgaris L.) ditambah etanol

sampai sampel terendam semuanya. Kemudian sebanyak 1 ml

larutan dipindahkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 2-3

tetes larutan FeCl3 1%. Hasil positif ditunjukan dengan

terbentuknya warna hitam kebiruan atau hijau (Satrawan, 2013).

7. Uji Aktivitas Antioksidan Biji Buncis

Ekstrak biji buncis (Phaseolus Vulgaris L.) dilarutkan dalam

etanol dengan konsentrasi 1000 µ/mL sebagai larutan induk,

33
 kemudian dibuat dalam konsentrasi 600 µL untuk masing-masing

ekstrak yang diperoleh, selanjutnya dimasukan kedalam tabung

reaksi, dlam tiap tabung reaksi ditambahkan DPPH kemudian

diinkubasi selama 30 menit selanjutnya serapan diukur pada panjang

gelombang 517 nm. Aktivitas penangkapan radikal bebas dihitung

sebagai persentasi berkurangnya warna DPPH dengan menggunakan

persamaan :

Absorbansi Sampel
% aktivitas antioksidan = 1 - × 100 %
Absorbansi Kontrol

8. Skema Kerja

1) Determinasi dan Skema Kerja Pembuatan Ekstrak Biji Buncis

Tanaman Biji
buncis

Identifikasi

Pengeringan dan penyerbukan

Uji Kadar Air

Ekstrak Biji Buncis

Uji Kualitatif Uji Kadar Air

Uji Aktivitas Antioksidan

34
 Gambar 3. Determinasi dan skema kerja pembuatan ekstrak

2) Uji Aktivitas Antioksidan Biji Buncis

Ekstrak Biji Buncis

Dibuat Konsentras 100 ppm Pengujian

Ditambah Larutan DPPH

Diukur absorbansi dengan menggunakan spektrofotometri

pada ƛ 517 nm

Diinkubasi 30 menit

Analisi Data

Gambar 4. Skema Uji Antioksidan Biji Buncis

H. Analisis Data

Data hasil uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH adalah

nilai absorbansi yang terbaca pada alat spektrofotometer UV-Vis. Nilai

absorbansi dari sampel dengan nilai absorbansi kontrol (absorbansi

larutan DPPH 1,5 nM). Persentase aktivitas antioksidan dihitung dengan

menggunakan rumus :

% Randemen = [ Aborbansi kontrol− Absorbansi Perlakuan

Absorbansi Kontrol ]×100%

Keterangan :

Absorbansi kontrol = Serapan radikal DPPH 1,5 ml

35
Absorbansi perlakuan = Absorbansi seri konsentrasi ekstrak Biji Buah

Buncis

Potensi antioksidan dari ekstrak biji buah buncis dinyatakan

sebagai nilai IC50 diperoleh dengan menggunakan analisis probit pada

taraf kepercayaan 95%. Nilai logaritma konsentrasi larutan uji (ekstrak biji

buah buncis C) diposisikan sebagai variabel bebas (X) dan nilai

persentasi antioksidan sebagai variable tergantung (Y).

36
 JADWAL PENELITIAN

No. Kegiatan November Desember Februar Maret April Mei

i
1. Pembuatan
proposal
2. Pengajuan
proposal
3. Proses
penelitian
4. Analisi data
5. Pengelolaa
n data
6. Pembuatan
laporan
7. Ujian KTI
Tabel 2. Jadwal penelitian

37
 DAFTAR PUSTAKA

Ahadi, M. R. 2003. Kandungan Tanin Terkondensasi dan Laju Dekomposisi pada

Serasah Daun Rhizospora mucronata Lamk pada Ekosistem Tambak.
Tumpangsari, Purwakarta, Jawa Barat. Skripsi. Bogor: Institut Pertanian
Bogor.

Amrun,H; Umiyah dan Umayah E.U. 2007. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Metanol Beberapa Varian Buah Kenitu (Chrysopylum cainito L) dari
Daerah Jember.. Jurusan Biologi Universitas Jember.

Ariani,S.R.D. dan Hastuti W. 2009. Analisis Isoflavon dan Uji Aktivitas

Antioksidan pada Tempe dengan Variasi Lama Waktu Fermentasi dan
Metode Ekstraksi. FKIP UNS Surakarta.

Sastrawan. 2013. Antioxidant Activity Test and Determination of Phenolic and

Flavonoid Contents from Buah Merah (Pandanus conoideus Lam).
Lampung: Universitas Pancasila.

Benson, L. 1957. Plant Classification. D.C. Boston : Health and Company.

Cahyono, B. 2007. Kacang Buncis:Teknik Budidaya Dan Analis Usaha Tani.

Kanisius Yogyakarta. 129 pp.

Corwin, E.J. 2009. Buku saku Patofisiologi. Edisi ketiga. Penerjemah: Yudha,
E.K., Wahyuningsi, E., Yulianti, D., dan Karyuni, P.E. Jakarta: Penerbit
Buku Kedokteran EGC.

Cuppett, S., M. Schrepf. & C. Hall III. (1954). Natural Antioxidant – Are They
Reality. Dalam Foreidoon Shahidi : Natural Antioxidants, Chemistry,
Health Effect and Applications, Champaign :AOCS Press.

Departemen Kesehatan RI. 2006. Farmakope Indonesia Edisi IV. Jakarta:

Departemen Kesehatan RI. Hal.1033.

Departemen Kesehatan RI. 2006. Teori Motivasi dan pengukurannya. Jakarta :

PT Bumi Aksara .

Hernani dan Mono, R. 2006. Tanaman Berkhasiat Antioksidan. Cet ke-2. Jakarta:
Penebar Swadaya. 9, 16-19.

Kristanti, Alfinda Novi. 2008. Buku Ajar Fitokimia. Surabaya: Universitas

Airlangga Press.

Lenny. 2009. 1000 Tanaman Khasiat dan Manfaatnya. www.indonews.co.id.

Diakses tanggal 2 Desember 2015.

Markham KR. 1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Bandung : Penerbit ITB.

Meyri Sulasmi. 2003. Aktifitas Antioksidatif Ekstrak Tempe Hasil Fermentasi

38
 Rhizopus oryzae Terhadap Oksidasi Minyak Kedelai. Skripsi. FMIPA.
UNS Surakarta.

Robinson, T., 1995, Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi, Edisi VI, Hal 191-
216, Diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, ITB, Bandung.

Rubatzky VE, Yamaguchi M. 1997. Sayuran Dunia 3. Ed ke-2. Herison C,

penerjemah. Bandung: ITB. Terjemahan dari: World Vegetables:
Principles, production, and nutritive values.

Saparinto, C. 2013. Grow Your Own Vegetables-Panduan Praktis Menanam 14

Sayuran Konsumsi Populer di Pekarangan. Penebar Swadaya.
Yogyakarta. 180 hlm.

Sastrohamidjojo,H. 1995. Sintesis Bahan Alam. Cetakan Pertama. Gadjah Mada

University Press. Yogyakarta.

Sri Kumalaningsih, 2006. Sumber, Manfaat, dan Penyajian Antioksidan Alami.

Trubus Agrisarana. Jakarta.

Sunarni, T, 2005, Aktivitas Antioksidan Penangkap Radikal Bebas Beberapa

kecambah Dari Biji Tanaman Familia Papilionaceae, Jurnal Farmasi
Indonesia 2 (2), 2001, 53-61.

Widyastuti, N. 2010. Pengukuran Aktivitas Antioksidan Dengan Metode

CUPRAC, DPPH dan FRAP Serta Kolerasinya Dengan Fenol dan
Flavonoid Pada Enam Tanaman [Skripsi]. FMIPA Institut Pertanian Bogor,
Bogor.

Wijayakusuma, H, 2005, Atasi Kanker Dengan Tanaman Obat, Puspa Swara.

Jakarta.

Winarsi, H. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Cetakan kelima.

Yogyakarta: Penerbit Kanisus (Anggota IKAPI).

39