Skripsi Adila Oktaviani

Aktivitas Antioksidan dan Kadar Flavonoid Total Pada Daun
Brokoli (Brassica oleracea L.var. italica) dengan Perbedaan

Polaritas Pelarut
SKRIPSI
oleh:
Adila Oktaviani
19105011071
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS WAHID HASYIM
SEMARANG
JANUARI 2024
Polaritas Pelarut
HALAMAN JUDUL
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat

dalam mencapai derajat Sarjana Farmasi
Program Studi Ilmu Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Wahid Hasyim
oleh:
Adila Oktaviani
19105011071
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS WAHID HASYIM
SEMARANG
JANUARI 2024
i
INTISARI
Aktivitas Antioksidan dan Kadar Flavonoid Total Pada Daun Brokoli

(Brassica oleracea L.var. italica) dengan Perbedaan Polaritas Pelarut
Radikal bebas yang berlebihan didalam tubuh dapat menyebabkan stres

oksidatif sehingga dapat memicu penyakit degeneratif. Daun brokoli (Brassica
oleracea L.var. italica) mengandung senyawa flavonoidyang dapat meredam
radikal bebas. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan aktivitas
antioksidan dan kadar flavonoid total ekstrak daun brokoli hasil ekstraksi dengan
variasi pelarut berdasarkan kepolarannya.
Daun brokoli diekstraksi dengan metode maserasi menggunakanpelarutn-
heksan, etil asetat, etanol 96%, etanol 70% dan metanol sehingga dihasilkan 5
ekstrak daun brokoli (EDB). Identifikasi flavonoid EDB menggunakan uji
shinoda. Uji aktivitas antioksidan EDB menggunakan metode ABTS dengan
pembanding Trolox. Penetapan kadar flavonoid total EDBmenggunakanmetode
spektrofotometridenganpembanding kuersetin. Perbedaan aktivitas antioksidan
dan kadar flavonoid totalkelima ekstrak menggunakan Uji One-way Anova.
Hasil penelitian menunjukkanekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%,
etanol 70% dan metanol daun brokoli diperoleh nilai IC 50 berturut-turut sebesar
607,385± 0,285 ppm; 560,719 ± 0,159 ppm; 217,705 ± 0,400 ppm; 150,032±
0,483 ppm dan 243,104 ± 0,216 ppm sedangkan kadar flavonoid total berturut-
turut sebesar 0,227 ± 0,018; 0,389 ± 0,010; 3,957 ± 0,024; 4,829 ± 0,129 dan
3,562 ± 0,063 mgQE/gram ekstrak. Nilai IC50 terkecil dan kadar flavonoid total
tertinggi diperolehmenggunakan pelarut etanol 70%.
Kata kunci: Antioksidan, Daun Brokoli,Brassica oleracea L.var.italica, Metode

ABTS, Flavonoid total.
ii
ABSTRACT
Antioxidant Activity and Total Flavonoid Levels in Broccoli (Brassica oleracea

L.var. italica) Leaves with Different Solvent Polarities
Excessive free radicals in the body can cause oxidative stress which can
trigger degenerative diseases. Broccoli leaves (Brassica oleracea L.var. italica)
contain flavonoid compounds which can reduce free radicals. This study aims to
determine the differences in antioxidant activity and total flavonoid content of
broccoli leaf extract extracted using a variety of solvents based on their polarity.
Broccoli leaves were extracted using the maceration method using n-
hexane, ethyl acetate, 96% ethanol, 70% ethanol and methanol to produce 5
broccoli leaf extracts (BLE). Identification of BLE flavonoids using the Shinoda
test. The BLE antioxidant activity test used the ABTS method with Trolox as a
comparison. Determination of total flavonoid levels in BLE using the
spectrophotometric method with quercetin as a comparison. Differences in
antioxidant activity and total flavonoid levels of the five extracts using the One-
way Anova Test.
The results showed that the n-hexane, ethyl acetate, 96% ethanol, 70%
ethanol and methanol extracts of broccoli leaves obtained IC 50 values of 607.385
± 0.285 ppm; 560.719 ± 0.159 ppm; 217.705 ± 0.400 ppm; 150.032 ± 0.483 ppm
and 243.104 ± 0.216 ppm while the total flavonoid levels were respectively 0.227
± 0.018; 0.389 ± 0.010; 3.957 ± 0.024; 4.829 ± 0.129 and 3.562 ± 0.063
mgQE/gram extract. IC50 value and total flavonoid content were best obtained
using 70% ethanol solvent.
Keywords: Antioxidants, Broccoli Leaves, Brassica oleracea L.var.italica, ABTS

Method, Total Flavonoids.
iii
PENGESAHAN SKRIPSI
Berjudul

Polaritas Pelarut
oleh:
Adila Oktaviani
19105011071
Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi

Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim
Pada Tanggal : 15 Januari 2024
Pembimbing,
(Dr. Anita Dwi Puspitasari, M. Pd.)
Mengetahui:
Fakultas Farmasi
Universitas Wahid Hasyim
Dekan,
(Dr. apt. Maulita Cut Nuria, M. Sc.)
iv
SURAT PERNYATAAN
Yang bertanda tangan di bawah ini:
Nama : Adila Oktaviani
NIM : 19105011071
Judul Skripsi : Aktivitas Antioksidan dan Kadar Flavonoid Total Pada Daun
Polaritas Pelarut
Dengan ini menyatakan bahwa dalam skripsi saya tidak terdapat karya
yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan
Tinggi dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat
yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis
diacu dalam naskah skripsi saya dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Demikian surat pernyataan ini dibuat untuk dapat digunakan sebagaimana
mestinya.
Semarang,15 Januari 2024
Adila Oktaviani
v
PERSEMBAHAN
“ Sesungguhnya dalam penciptaan langit dan bumi, dan silih
bergantinya malam dan siang terdapat tanda–tanda bagi orang yang
berakal.” (Q.S. Ali Imron ; 190)
Kupersembahkan untuk:
Kedua orang tua sebagai wujud hormat dan baktiku
Almamater sebagai wujud terima kasih dan khidmahku
vi
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan atas kehadirat Allah SWT, karena atas
limpahan nikmah, karunia dan rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi
ini. Shalawat serta salam semoga tercurah kepada Nabi Muhammad SAW,
keluarga, sahabat dan pengikut-Nya yang telah membawa umat-Nya dari zaman
kegelapan hingga zaman yang kaya akan ilmu pengetahuan dan kemajuan
teknologi seperti sekarang.
Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat menempuh ujian akhir
guna mendapat gelar sarjana farmasi pada program studi farmasi universitas
wahid hasyim semarang. Adapun judul skripsi ini adalah Aktivitas Antioksidan
dan Kadar Flavonoid Total Pada Daun Brokoli (Brassica oleracea L.var. italica)
dengan Perbedaan Polaritas Pelarut.
Penulis menyadari bahwa dalam pembuatan skripsi ini tidak lepas dari
berbagai pihak yang mendukung dan membantu selesainya penulisan skripsi. Oleh
karena itu, dalam kesempatan ini penulis menyampaikan ucapan terimakasih
kepada :
1. Ibu Dr. apt. Maulita Cut Nuria, M. Sc. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Wahid Hasyim Semarang dan sebagai dosen penguji pertama
yang telah bersedia meluangkan waktunya untuk memberikan masukan dan
saran dalam menyusun skripsi.
2. Ibu Dr. Anita Dwi Puspitasari, M. Pd. selaku dosen pembimbing yang telah
bersedia meluangkan waktunya untuk bimbingan serta dukungan hingga
selesainya skripsi ini.
vii
3. Bapak apt. Drs. Ibrahim Arifin, M. Sc. selaku dosen penguji kedua yang
bersedia meluangkan waktunya untuk memberikan masukan, nasihat, saran
serta motivasi dalam proses penyusunan skripsi.
4. Seluruh dosen Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang yang
telah bersedia mengajarkan pengetahuan sebagai ilmu dasar dan melakukan
penelitian skripsi ini.
5. Seluruh staf Laboratorium Biologi Dan Kimia Farmasi Universitas Wahid
Hasyim Semarang yang telah mengizinkan dan membantu penulis untuk
melakukan penelitian dilaboratorium.
6. Bapak Adi Wasito dan Ibu Samik Rokhiyati selaku orang tua, Aldi Mahendra
dan Anggy Meytrista selaku adek dari penulis yang bersedia meluangkan
waktunya untuk support system dalam penulisan skripsi ini.
7. Mas indalik selaku kekasih saya yang terus memberikan dukungan dengan
tulus untuk berjuang menyelesaikan skripsi ini hingga tuntas.
Penulis menyadari bahwa dalam menyusun skripsi ini masih terdapat
kekurangan serta masih jauh dari kata sempurna karena keterbatasan ilmu dan
kemmpuan penulis. Akhir kata, dengan segala kerendahan hati penulis
mengucapkan terimakasih. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat serta menambah
wawasan & ilmu pengetahuan bagi pembaca skripsi ini, Aamiin.
Semarang,15 Januari 2024
Adila Oktaviani
viii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL.....................................................................................................i
INTISARI .................................................................................................................... ii
ABSTRACT ................................................................................................................. iii
PENGESAHAN SKRIPSI ......................................................................................... iv
PERSEMBAHAN ...................................................................................................... vi
KATA PENGANTAR .............................................................................................. vii
DAFTAR ISI .............................................................................................................. ix
DAFTAR TABEL ...................................................................................................... xi
DAFTAR GAMBAR ................................................................................................ xii
DAFTAR LAMPIRAN............................................................................................ xiii
A. Latar Belakang .................................................................................................... 1
B. Rumusan Masalah ............................................................................................... 3
C. Tujuan Penelitian................................................................................................. 4
D. Manfaat Penelitian............................................................................................... 4
E. Tinjauan Pustaka ................................................................................................. 5
1. Aktivitas Antioksidan ...................................................................................5
2. Tanaman Brokoli (Brassica oleracea L. var. italica) ................................6
3. Ekstrak dan Ekstraksi ...................................................................................7
4. Senyawa Flavonoid .......................................................................................8
5. Metode ABTS (2,2-azinobis-3-Ethylbenzothiazoline-6-Sulfonic Acid) ....9
6. Spektrofotometri UV-Vis ...........................................................................11
F. Landasan Teori.................................................................................................. 12
G. Hipotesis ........................................................................................................... 13
BAB II. METODE PENELITIAN ............................................................................15
A. Bahan dan Alat yang Digunakan........................................................................ 15
1. Bahan ...........................................................................................................15
2. Alat ...............................................................................................................15
B. Jalannya Penelitian ............................................................................................ 16
1. Determinasi Tanaman .................................................................................16
ix
2. Pengumpulan Bahan ...................................................................................16
3. Pembuatan Serbuk Daun Brokoli...............................................................16
4. Pembuatan Ekstrak Daun Brokoli ..............................................................17
5. Identifikasi Flavonoid .................................................................................18
Uji Shinoda .........................................................................................................18
6. Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode ABTS ........................18
7. Penetapan kadar flavonoid total .................................................................25
C. Analisis Data ..................................................................................................... 29
BAB III. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN ........................................31
A. Determinasi Tanaman........................................................................................ 31
B. Simplisia Daun Brokoli ..................................................................................... 31
C. Ekstraksi Daun Brokoli ..................................................................................... 32
D. Identifikasi Flavonoid ........................................................................................ 34
E. Penentuan Aktivitas Antioksidan ....................................................................... 36
F. Penetapan Kadar Flavonoid Total ...................................................................... 41
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN .................................................................50
A. Kesimpulan ....................................................................................................... 50
B. Saran ................................................................................................................. 50
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................51
LAMPIRAN ...............................................................................................................57
x
DAFTAR TABEL
Tabel I. Rendemen ekstrak daun brokoli........................................................................ 33

Tabel II. Operating time ABTS dengan Trolox.............................................................. 37
Tabel III. Nilai IC50 Trolox ............................................................................................ 38
Tabel IV. Nilai IC50 Ekstrak Daun Brokoli..................................................................... 39
Tabel V. Penetapan kadar flavonoid total ekstrak daun brokoli ...................................... 46
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Tanaman Brokoli (Brassica Oleracea L. Var. Italica) ........................ 19

Gambar 2. Struktur Flavonoid. ................................................................................. 22
Gambar 3. Reaksi Radikal ABTS Dengan Kalium Persulfat . ............................... 23
Gambar 4. Diagram Skematik Spektrofotometer UV-Vis ...................................... 25
Gambar 5. Reaksi Flavonoid Dengan Logam Mg Dan Hcl . ................................. 47
Gambar 6. Identifikasi Flavonoid ........................................................................... 35
Gambar 7. Panjang Gelombang Maksimum ABTS ................................................ 49
Gambar 8. Panjang Gelombang Maksimum Kuersetin .......................................... 55
Gambar 9. Grafik Kurva Baku Kuersetin ................................................................ 58
Gambar 10. Reaksi Flavonoid Dengan AlCl3.......................................................... 59
xii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Hasil Determinasi Tanaman ................................................................58

Lampiran 2. Perhitungan Susut Pengeringan Daun Brokoli ..................................61
Lampiran 3. Perhitungan Rendemen Ekstrak Daun Brokoli ..................................61
Lampiran 4. Perhitungan IC50 Trolox ......................................................................62
Lampiran 5. Perhitungan IC50 Ekstrak N-heksanDaun Brokoli .............................63
Lampiran 6. Hasil Analisis Statistik Aktivitas Antioksidan ...................................68
Lampiran 7. Perhitungan Penetapan Kadar Flavonoid Total EDB ........................69
Lampiran 8. Hasil Analisis Statistik Kadar Flavonoid Total .................................72
Lampiran 9. Certificate Of Analysis ABTS ............................................................75
Lampiran 10. Certificate Of Analysis Trolox..........................................................76
Lampiran 11. Certificate Of Analysis Kalium Persulfate .......................................77
Lampiran 12. DataPenimbangan Bahan Dan Pembuatan Uji Antioksidan ...........78
Lampiran 13. Panjang Gelombang Maksimum ABTS ...........................................86
Lampiran 14. Operating time ABTS........................................................................86
Lampiran 15. Trolox 1, 2 dan 3 ................................................................................87
Lampiran 16. Ekstrak N-Heksan Daun Brokoli 1, 2 dan 3.....................................88
Lampiran 17. Ekstrak Etil Asetat Daun Brokoli 1, 2 dan 3 ....................................90
Lampiran 18. Ekstrak Etanol 96% Daun Brokoli 1, 2 dan 3 ..................................91
Lampiran 19. Ekstrak Etanol 70% Daun Brokoli 1, 2 dan 3 ..................................93
Lampiran 20. Ekstrak Metanol Daun Brokoli 1, 2 dan 3........................................94
Lampiran 21. Data Penimbangan Bahan Dan Pembuatan Larutan Penetapan
Kadar Flavonoid. ...............................................................................96
Lampiran 22. Panjang Gelombang Maksimum Kuersetin .....................................99
Lampiran 23. Operating Time Kuersetin .................................................................99
Lampiran 24. Kurva Baku Kuersetin 1, 2 dan 3................................................... 100
Lampiran 25. Penetapan Kadar Flavonoid Total Ekstrak Daun Brokoli ............ 101
Lampiran 26. Dokumentasi Penelitian.................................................................. 103
xiii
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Radikal bebas yang terlalu banyak didalam tubuh dapat menyebabkan
kerusakan oksidatif, sehingga menyebabkan terganggunya membran sel, protein
membran, dan mutasi DNA, yang dapat menyebabkan berbagai penyakit seperti
kanker,liver, serta penyakit kardiovaskular (Liao dan Yin, 2000). Radikal bebas
adalah atom yang memiliki 1 atau lebih elektron tidak berpasangan pada kulit
terluarnya sehingga menjadi sangat reaktif. Radikal bebas masuk ke dalam tubuh
dan menyerang sel-sel sehat, sehingga menyebabkan kerusakan jaringan dan tidak
dapat melakukan fungsinya dengan baik (Parwata, 2016). Senyawa yang dapat
mengurangi efek negatif radikal bebas adalah antioksidan.
Antioksidan merupakan senyawa yang dapat meredam reaksi oksidasi,
dengan cara menyumbangkan satu atom hidrogennya kepada radikal bebas,
sehingga radikal bebas dapat diikat dan kerusakan jaringan dapat di cegah(Sayuti
dan Yenrina, 2015). Berdasarkan sumbernya, antioksidan terbagi menjadi 2
kelompok yaitu sintetik dan alami. Antioksidan sintetik adalah senyawa yang
disintesis secara kimia dan memiliki efek karsinogenik yang dapat
membahayakan kesehatan manusia. Contoh antioksidan sintetik yang umum
digunakan adalah Propil Galat (PG), Butylated Hydroxyanisole (BHA), Butylated
Hydroxytoluene (BHT), dan Tertbutyl Hydroquinone (TBHQ). Antioksidan alami
menjadi alternatif yang perlu dikembangkan, karena antioksidan alami tidak
memberikan efek samping seperti yang ditimbulkan oleh antioksidan sintetik
(Parwata, 2016). Sumber antioksidan alami biasanya berasal dari buah-buahan,
1
sayuran, atau tanaman lain yang mengandung vitamin A, C, E, asam folat,
antosianin, senyawa fenol, dan flavonoid (Treml dan Smejkal, 2016). Senyawa
metabolit yangberpotensi tinggi sebagai antioksidan alami adalah flavonoid
(Sayuti dan Yenrina,2015).
Tanaman brokoli (Brassica oleracea L. var. italica) merupakan salah satu
tanaman yang masuk kedalam familia Brassicecae (Rahmawati dkk., 2017).
Senyawa fitokimia yang terkandung dalam daun brokoli adalah senyawa
flavonoid, monoterpen, sesquiterpen, triterpenoid dan steroid (Jannah, 2014).
Jenis senyawa flavonoid yang terkandung dalam daun brokoli yaitu kuersetin dan
kaempferol (Tuszyńska, 2014). Aktivitas antioksidan ekstrak etanol 96% daun
brokoli menggunakan metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) diperoleh nilai
IC50 sebesar 474,08 µg/mL (kategori lemah) dengan kadar flavonoid sebesar 1,716
µg/mL (Jannah, 2014).
Perbedaan jenis pelarut berpengaruh terhadap aktivitas antioksidan dan
kadar flavonoid total (Simamora dkk., 2021). Pujiastuti dkk. (2022) melaporkan
bahwa terdapat perbedaan aktivitas antioksidan dan kadar flavonoid total ekstrak
buah labu kuning (Cucurbita maxima D.) yang diekstraksi dengan variasi pelarut
n-heksan, etil asetat, etanol 70% dan etanol 96%. Pada penelitian Pujiastuti dkk.,
2022 aktivitas antioksidan paling baik diperoleh menggunakan pelarut etanol
70%, sedangkan kadar flavonoid tertinggi diperoleh menggunakan pelarut etil
asetat. Afrellia (2021) melaporkan bahwa terdapat perbedaan kadar fenolik dan
flavonoid total pada ekstrak umbi wortel (Daucus carota L.) dengan variasi
pelarut n-heksan, etil asetat dan etanol 70%. Pada penelitian tersebut kadar fenolik
2
total tertinggi diperoleh menggunakan pelarut etanol 70%, sedangkan kadar
flavonoid total terbesar diperoleh menggunakan pelarut etil asetat.
Salah satu metode yang dapat digunakan untuk uji aktivitas antioksidan
adalah ABTS. Prinsip kerja ABTS adalah penghilangan warna kation ABTS
untukmengukur kapasitas antioksidan yang bereaksi dengan radikal kation ABTS
(Setiawan dkk., 2018). Keunggulan metode ABTS adalah dapat memberikan
absorbansi spesifik pada panjang gelombang visibel dan waktu reaksi yang
lebihcepat, selain itu ABTS juga dapat dilarutkan dalam pelarut organik maupun
air sehingga lebih mudah mendeteksi senyawa lipofilik maupun hidrofilik
(Theafeliciadan Wulan., 2023).
Berdasarkan uraian di atas, penelitian dilakukan untuk melihat perbedaan
aktivitas antioksidan dan kadar flavonoid total dari ekstrak daun brokoli (Brassica
oleracea L.var. italica) menggunakan variasi pelarut yaitu n-heksan, etil asetat,
etanol 96%, etanol 70% dan metanol.
B. Rumusan Masalah
Rumusan masalah pada penelitian ini yaitu :
1. Apakah ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%, etanol 70% dan metanol
daun brokoli (Brassica oleracea L.var. italica) memiliki aktivitas
antioksidan yang dinyatakan dengan IC50 menggunakan metode ABTS ?
2. Berapakah kadar flavonoid total ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%,
etanol 70% dan metanol daun brokoli (Brassica oleracea L.var. italica)
yang dinyatakan dalam mgQE/gram ekstrak ?
3
3. Apakah ada perbedaanpada aktivitas antioksidandan kadar flavonoid
totaldalam ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%, etanol 70% dan
metanol daun brokoli (Brassica oleracea L.var. italica)?
C. Tujuan Penelitian
Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk :
1. Mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%,
yang dinyatakan dengan IC50 menggunakan metode ABTS.
2. Mengetahui kadar flavonoid total ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%,
yang dinyatakan dalam mgQE/gram ekstrak.
3. Mengetahui ada tidaknyaperbedaan aktivitas antioksidandan kadar
flavonoid totaldalam ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%, etanol 70%
dan metanol daun brokoli (Brassica oleracea L.var. italica).
D. ManfaatPenelitian
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah mengenai
aktivitas antioksidan dan kadar flavonoid total yang terkandung pada ekstrak n-
heksan, etil asetat, etanol 96%, etanol 70% dan metanol daun brokoli (Brassica
oleracea L.var. italica).
4
E. Tinjauan Pustaka
1. Aktivitas Antioksidan
Antioksidan merupakan senyawa yang dapat meredam reaksi oksidasi,
dengan menyumbangkan satu atom hidrogennya kepada radikal bebas, sehingga
radikal bebas dapat diikat dan kerusakan jaringan dapat di cegah (Sayuti dan
Yenrina, 2015). Jenis antioksidan berdasarkan sumbernya terdapat dua kelompok
yaitu antioksidan alami dan antioksidan sintetik. Antioksidan sintetik adalah
senyawa yang disintesis secara kimia dan memiliki efek karsinogenik yang dapat
membahayakan kesehatan manusia. Contoh antioksidan sintetik yang paling
umum adalah Propil Galat (PG), Butylated Hydroxyanisole (BHA), Butylated
Hydroxytoluene (BHT), dan Tertbutyl Hydroquinone (TBHQ), sehingga
antioksidan alami menjadi alternatif yang perlu dikembangkan, karena
antioksidan alami tidak memberikan efek samping seperti yang ditimbulkan oleh
antioksidan sintetik. Antioksidan alami mampu melindungi tubuh dari kerusakan
yang disebabkan oleh spesies oksigen reaktif dan mencegah penyakit
degenerative. Turunan fenol, kumarin, hidroksi sinamat, tokoferol, difenol,
flavonoid, kathekin, dan asam askorbat merupakan golongan antioksidan alami
(Parwata, 2016).
Inhibitor concentration (IC50) merupakan konsentrasi hambat yang
dibutuhkan untuk mengurangi atau menghambat radikal bebas sebesar 50%. Pada
pengujian aktivitas antioksidan semakin kecil nilai IC 50 maka semakin baik
antioksidan dalam meredam radikal bebas. Suatu senyawa dikatakan memiliki
aktivitas antioksidan sangat kuat jika nilai IC 50 kurang dari 50 ppm, kuat jika nilai
5
IC50 antara 50-100 ppm, sedang jika nilai IC50antara 100-150 ppm, lemah jika
nilai IC50 antara 151-200 ppm dan sangat lemah jika nilai IC50 lebih dari 500 ppm
(Molyneux, 2004).
2. Tanaman Brokoli (Brassica oleracea L. var. italica)
Brokoli adalah tanaman berbatang lunak yang masuk dalam keluarga
Brassicaceae (sejenis kubis berbunga hijau). Daun brokoli biasanya berwarna
hijau kebiruan dan tumbuh berselang-seling di batang dengan pangkal daun yang
tebal dan lunak. Daunnya bertangkai dan berbentuk lonjong dengan ujung yang
bergerigi cukup panjang dan membentuk celah-celah pendek, sedikit melengkung.
Daun yang tumbuh di batang sebelum bunga terbentuk kecil dan menggulung
kedalam untuk melindungi bunga yang sedang bertunas (Hafifah, 2017). Daun
brokoli dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Tanaman Brokoli(Brassica oleracea L. var. italica)
6
Tanaman Brokoli (Brassica oleracea L. var. italica) dapat diklasifikasikan
sebagai berikut (Van der Vossen, 1993):
Kingdom : Plantae
Sunkingdom : Trancheobionta
Superdivisi : Spermatophyta
Divisi : Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)
Kelas : Magnoliopsida (Biji berkeping dua/dikotil)
Ordo : Brassicales
Famili : Brassicaceae
Genus : Brassica
Species : Brassica oleracea L. var. italica
Hasil penapisan fitokimia terhadap daun brokoli menunjukkan adanya
kandungan flavonoid, seskuiterpen, monoterpen, triterpenoid dan steroid (Jannah,
2014). Banyak penelitian menunjukkan bahwa senyawa flavonoid berpotensi
sebagai antioksidan. Mekanisme kerja flavonoid sebagai antioksidan yaitu dengan
cara menyumbangkan satu atom hidrogennya kepada radikal bebas, sehingga
radikal bebas dapat diikat dan kerusakan jaringan dapat di cegah (Sayuti dan
Yenrina, 2015).
3. Ekstrak dan Ekstraksi
Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan cara ekstraksi atau
menarik senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan
pelarut yang sesuai. Sedangkan ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan
7
kimia yang dapat larut dengan pelarut sehingga terpisah dari bahan yang tidak
dapat larut dengan pelarut cairan penyari. Terdapat beberapa cara ekstraksi bahan
alam yang sering digunakan yaitu ekstraksi cara panas dan ekstraksi cara dingin.
Refluks, sokhletasi, digesti, infus dan dekok merupakan metode ekstraksi dengan
cara panas sedangkan Maserasi dan perkolasi merupakan metode ekstraksi dengan
cara dingin, teknik yang paling umum digunakan untuk ekstraksi yaitu maserasi
(Depkes RI, 2000). Proses maserasi dilakukan dengan merendam serbuk simplisia
dalam cairan penyari, kemudian cairan penyari menembus dinding sel dan masuk
ke rongga sel yang mengandung zat aktif. Karena perbedaan konsentrasi antara
larutan zat aktif di dalam sel dan di luar sel, larutan yang terpekat didesak keluar
(Sudarwati dan Fernanda, 2019).
Jenis pelarut berperan penting dalam keberhasilan ekstraksi, ada banyak
jenis pelarut organik yang dapat digunakan untuk mengekstrak bahan alam seperti
heksana, butanol, kloroform, etil asetat, aseton, metanol, etanol dan aquades.
Setiap pelarut memiliki sifat yang berbeda seperti polaritas, titik didih, viskositas
dan kelarutan dalam air. Hal ini menjadi pertimbangan penting ketika memilih
jenis pelarut yang sesuai dengan sifat fisik dan kimia bahan yang akan diekstraksi
dan metabolit sekundernya, sehingga perlu polaritas yang sama antara pelarut dan
metabolit yang diekstraksi untuk memaksimalkan proses.
4. Senyawa Flavonoid
Flavonoid merupakan senyawa golongan fenol yang terbesar di alam
karenabanyaknya tingkat hidroksilasi, alkoksilasi dan glikosilasi pada
strukturnya(Julianto, 2019). Flavonoid memiliki 15 atom karbon dasar yang
8
membentuk susunan C6-C3-C6 yaitu 2 cincin aromatik dihubungkan dengan tiga
karbon yangdapat atau tidak dapat membentuk cincin ketiga (Parwata,
2016).Golongan flavonoid yang memiliki potensi sebagai antioksidan meliputi
flavon, flavonol, isoflavon dan flavanon (Trilaksani, 2003). Flavonol tersebar luas
pada tanaman sebagai pigmen antosianin pada kelopak dan daun tanaman tingkat
tinggi, flavonol umumnya terdapat dalam bentuk glikosida seperti kaemferol,
kuersetin dan mirisetin (Alfaridz dan Amalia, 2018). Senyawa golongan flavonoid
yang terkandung dalam daun brokoli adalah flavonol yaitu kuersetin dan
kaempferol (Tuszyńska, 2014). Struktur flavonoid dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Struktur flavonoid (Wang dkk., 2018).
5. Metode ABTS (2,2-azinobis-3-Ethylbenzothiazoline-6-Sulfonic Acid)
Metode ABTS merupakan salah satu uji aktivitas antioksidan secara in vitro.
Metode ABTS (2,2-azinobis-3- Ethylbenzothiazoline-6-Sulfonic Acid) disebut
juga dengan Metode Trolox Equivalent Antioxidant Capacity (TEAC) yaitu
metode yang digunakan untuk mengetahui aktivitas antioksidan yang memiliki
sensitivitas yang cukup tinggi. ABTS merupakan senyawa radikal yang
mengandung atom nitrogen. Prinsip pengujiannya adalah menyetabilkan radikal
bebas melalui donor proton. Pengukuran aktivitas antioksidan dilakukan
berdasarkan hilangnya warna ABTS yang semula berwarna biru-hijau akan
9
berubah menjadi tidak berwarna apabila tereduksi oleh antioksidan. Suatu radikal
ABTS dapat dibuat dengan cara dioksidasi terlebih dahulu menggunakan kalium
persulfat (K2 S2O8) sebelum penambahan antioksidan, sehingga didapatkan
karektristik larutan berwarna hijau-biru (Irianti dkk., 2017). Mekanisme reaksi
antioksidan terhadap radikal ABTS dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar 3. Reaksi Pembentukan radikal dari ABTS dengan kalium persulfat (Oliveira dkk., 2014).
Intensitas warna yang dihasilkan diukur dengan alat spektrofotometer dengan
panjang gelombang 700-750 nm. Hasil dibandingkan dengan larutan pembanding
trolox. Trolox dapat larut dalam air dan merupakan derivat dari Vitamin E yang
disintesis. Trolox juga sering digunakan sebagai standar pembanding dalam
berbagai pengujian antioksidan (Setiawan dkk., 2018). Kelebihan metode ABTS
dibandingkan dengan metode lain yaitu dapat memberikan absorbansi spesifik
pada panjang gelombang visibel dan waktu reaksi yang lebih cepat, selain itu
ABTS juga dapat dilarutkan dalam pelarut organik maupun air sehingga lebih
mudah mendeteksi senyawa lipofilik maupun hidrofilik (Theafeliciadan Wulan.,
2023). Kekurangan dari Metode ABTS ini yaitu sangat sensitif terhadap cahaya
10
dan pembentukan ABTS memerlukan waktu inkubasi selama 12-16 jam dalam
kondisi gelap (Setiawan dkk., 2018).
6. Spektrofotometri UV-Vis
Metode spektrofotometri UV-Vis menggunakan instrumen spektrofotometer
yang digunakan untuk mengukur panjang gelombang sumber radiasi gelombang
elektromagnetik ultraviolet (UV) pada panjang gelombang 190 nm - 380 nm dan
cahaya tampak (visible) pada panjang gelombang 380 nm - 780 nm(Noviyanto,
2020). Hukum Lambert-Beer mengatakan bahwa sebagian cahaya akan diteruskan
dan sebagian lagi akan diabsorbsi oleh medium ketika seberkas cahaya dilewatkan
pada panjang gelombang tertentu.Dalam larutan, hubungan antara cahaya
absorbansi dengan konsentrasi penyerap dan jarak yang ditempuh cahaya adalah
berbanding lurus. Nilai absorbansi meningkat seiring dengan konsentrasi
penyerap dan jarak yang ditempuh cahaya, dan sebaliknya (Suhartati, 2017).
Senyawa flavonoid mengandung gugus kromofor, sehingga kadarnya dapat
diukur dan serapannya dapat dibaca menggunakan metode spektrofotometri UV-
Vis. Pengukuran spektrofotometri yang dilakukan dengan alat spektrofotometer
membutuhkan serapan cahaya yang cukup besar (Kumalasari, 2018). Kelebihan
metode spektrofotometeri UV-Vis yaitu waktu yang digunakan relatif singkat,
biaya yang lebih murah, memiliki ketelitian yang tinggi, dapat dilakukan dengan
cepat dan tepat dan dapat digunakan pada zat organik maupun anorganik
(Julianto, 2019). Diagram skematik spektrofotometer UV-Vis dapat dilihat pada
Gambar 4.
11
Gambar 4.Diagram skematik spektrofotometer UV-Vis (Gandjar dan Rohman, 2018).
F. Landasan Teori
Daun brokoli (Brassica oleracea L.var. italica) positif mengandung senyawa
flavonoid, sesquiterpen, monoterpen, triterpenoid dan steroid (Jannah, 2014).
Berdasarkan penelitian tersebut, ekstrak etanol 96% daun brokoli yang diuji
menggunakan metode DPPH memiliki nilai IC 50 474,08 ppm (Lemah) dengan
kadar flavonoid sebesar 1,716 µg/mL.
Perbedaan jenis pelarut berpengaruh terhadap aktivitas antioksidan dan
kadar flavonoid total (Simamora dkk., 2021). Pujiastuti dkk. (2022) melaporkan
bahwa terdapat perbedaan aktivitas antioksidan dan kadar flavonoid total ekstrak
buah labu kuning (Cucurbita maxima D.) yang diekstraksi dengan variasi pelarut
n-heksan, etil asetat, etanol 70% dan etanol 96%. Pada penelitian tersebut
aktivitas antioksidan paling baik diperoleh menggunakan pelarut etanol 70%,
sedangkan kadar flavonoid tertinggi diperoleh menggunakan pelarut etil asetat.
Hasil ujipost hoc pada penelitian tersebut terdapat perbedaan aktivitas antioksidan
yang signifikan antara ekstrak buah labu kuning pelarut n-heksan dengan etanol
96% p = 0,007 (p < 0,05) serta dengan pelarut etanol 70% p = 0,006 (p < 0,05),
12
danhasil uji post hocpada kadar flavonoid total dihasilkan nilai signifikan 0,000 (p
< 0,05). Hal ini berarti terdapat perbedaan yang signifikan antar kadar flavonoid
total ekstrak buah labu kuning dengan 4 jenis pelarut yang digunakan. Afrellia
(2021) melaporkan bahwa terdapat perbedaan kadar fenolik dan flavonoid total
pada ekstrak umbi wortel (Daucus carota L.) dengan variasi pelarut n-heksan, etil
asetat dan etanol 70%. Pada penelitian tersebut kadar fenolik total tertinggi
diperoleh menggunakan pelarut etanol 70%, sedangkan kadar flavonoid total
terbesar diperoleh menggunakan pelarut etil asetat. Terdapat perbedaan kadar
fenolik dan flavonoid total pada ekstrak umbi wortel (Daucus carota L.) dengan
variasi pelarut n-heksan, etil asetat dan etanol 70%, pada penelitian tersebut kadar
fenolik total tertinggi diperoleh menggunakan pelarut etanol 70%. Hasil uji post
hocpada penelitian tersebut terdapat perbedaanyang signifikan antara kadar
flavonoid total dan kadar fenolik total ekstrak umbi wortel dengan 3 jenis pelarut
yang digunakan dengan nilai sig 0,000 (p < 0,05).
G. Hipotesis
1. Ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%, etanol 70% dan metanol daun brokoli
(Brassica oleracea L.var. italica) memiliki aktivitas antioksidan yang
dinyatakan dengan IC 50 menggunakan metode ABTS.
2. Ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%, etanol 70% dan metanol daun brokoli
(Brassica oleracea L.var. italica) memiliki kadar flavonoid total tertentu yang
dinyatakan dalam mgQE/gram ekstrak.
13
3. Ada perbedaan padaaktivitas antioksidan dan kadar flavonoid totaldalam
ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%, etanol 70% dan metanol daun brokoli
(Brassica oleracea L.var. italica).
14
BAB II. METODE PENELITIAN
A. Bahan dan Alat yang Digunakan
1. Bahan
Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah daun brokoli segar
(Brassicaoleracea L.var. italica) yang diperoleh dari kebun di Desa Selo Ngisor,
Batur, Kecamatan Getasan, Kabupaten Semarang, Jawa Tengah. Pelarut yang
digunakan untuk ekstraksi yaitu N-heksan (teknis), etil asetat (teknis), etanol
96%(teknis), etanol 70% (teknis) dan metanol (teknis). Bahan yang digunakan
untuk penetapan kadar flavonoid total adalah kuersetin (Sigma), pereaksi AlCl 3
10% (Merck), kalium asetat 1M dan etanol p.a (Merck) dan bahan yang
digunakan untuk identifikasi flavonoid dengan uji shinoda adalah serbuk
magnesium (Mg), amil alkohol dan asam klorida (HCl) pekat. Bahan yang
digunakan untuk uji aktivitas antioksidan adalah serbuk ABTS, trolox (Sigma),
kalium persulfat (K2 S2O8) dan etanol p.a (Merck).
2. Alat
Seperangkat alat ekstraksi dan uji kualitatif yang terdiri dari alat gelas (Iwaki
Pyrex), seperangkat alat maserasi, mesin penyerbuk, timbangan elektrik (Henherr
Scale), moisture balance (Ohaus), seperangkat vakum, corong buchner, oven,
penguap vakum putar (Heidolph) dan desikator. Alat penetapan kadar flavonoid
dan uji aktivitas abtioksidan yaitu Seperangkat alat gelas (Iwaki Pyrex),
Spektrofotometer UV-Vis 1800 (Shimadzu), dan mikropipet.
15
B. Jalannya Penelitian
1. Determinasi Tanaman
Determinasi daun brokoli dilakukan di Laboratorium Ekologi dan
Biosistematik Jurusan Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Diponegoro,
Semarang. Determinasi tanaman bertujuan untuk memastikan identitas dari
tanaman dan menghindari kesalahan dalam pengambilan tanaman serta untuk
mengetahui kebenaran dari simplisia yang digunakan untuk penelitian (Jannah,
2014).
2. Pengumpulan Bahan
Daun Brokoli segar (Brassicaoleracea L.var. italica) sebanyak 7,100 kg
yang digunakan untuk penelitian di peroleh dari kebun di Desa Selo Ngisor,
Batur, Kecamatan Getasan, Kabupaten Semarang, Jawa Tengah. Daun brokoli di
ambil yang masih segar, berwarna hijau, dan sehat tidak terkena penyakit.
3. Pembuatan Serbuk Daun Brokoli
Hasil panen daun brokoli segar (Brassicaoleracea L.var. italica) sebanyak
10 kg kemudian disortasi basah dan didapatkan hasil sebanyak 7,100 kg. Daun
brokoli dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang ada pada
daun (Depkes RI, 1985). Daun brokoli yang telah dicuci ditiriskan terlebih dahulu
kemudian dirajang kecil-kecil dan dikeringkan menggunakan oven pada suhu
50⁰C sampai kering. Daun yang sudah kering kemudian diserbuk menggunakan
mesin penyerbuk hingga halus kemudian dicek kadar airnya menggunakan alat
moisture balance dengan syarat kadar air tidak boleh lebih dari 10% (Depkes RI,
2000).
16
4. Pembuatan Ekstrak Daun Brokoli
Pembuatan ekstrak daun brokoli menggunakan 5 pelarut yang berbeda yaitu
pelarut N-heksan, Etil Asetat, Etanol 96%, etanol 70% dan metanol. Ekstraksi
dilakukan dengan metode maserasi. Serbuk daun brokoli yang digunakan untuk
maserasi padamasing-masingpelarut sebanyak 100 gram sedangkan masing-
masing pelarut yang digunakan sebanyak 1000 mL (sesuai dengan perbandingan
1:10 (b/v)). Masing-masing serbuk daun brokoli sebanyak 100 gram dimasukkan
ke dalam toples lalu ditambahkandengan masing-masing pelarut sebanyak 750
mL. Toples dilapisi kertas coklat agar terhindar dari cahaya matahari langsung
dan ditutup menggunakan aluminium foil. Proses maserasi dilakukan selama 3
hari dan dilakukan pengadukan selama 15 menit tiap 8 jam sekali. Setelah 3 hari,
dilakukan penyaringan sehingga didapat maserat 1. Serbuk ampasdari
penyaringan ditambahkan denganmasing-masing pelarut sebanyak 250 mL proses
ini dinamakan dengan remaserasi yang dilakukan selama 2 hari dan dilakukan
penyaringan kembali sehingga didapat maserat 2. Maserat 1 dan maserat 2
kemudian dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 50 oC sehingga
diperoleh ekstrak kental daun brokoli. Setelah itu ekstrak kental daun brokoli yang
didapatkan ditimbang dan dihitung persentase rendemennya dengan rumus :
Berat Ekstrak Kental

Rendemen ekstrak = X 100% (Depkes RI, 2000)
Berat Serbuk Yang Diekstraksi
17
5. Identifikasi Flavonoid
Uji Shinoda
Identifikasi uji shinoda dilakukan dengan cara masing-masing sampel
ekstrak daun brokoli diambil sebanyak 50 mg dilarutkan dengan masing-
masing pelarut sampel sebanyak 5 mL, kemudian disaring menggunakan
kertas saring. Larutan dimasukkan ke dalam 2 tabung reaksi sama banyak
lalu salah satu ditambahkan serbuk magnesium dan amil alkohol 3 mL,
kemudian ditambah HCl pekat 1 mL tetes demi tetes melalui dinding
tabung. Sampel positif mengandung flavonoid jika terjadi perubahan
warna menjadi merah,kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol
(Bettolo dkk., 1981).
6. Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode ABTS
a. Pembuatan Larutan Stok ABTS
Pembuatan larutan stok ABTS konsentrasi 7,4 mM dilakukan dengan cara
menimbang serbuk ABTS sebanyak 203,019 mg dilarutkan dalam 50 mL
labu takar dengan pelarut etanol p.a hingga batas. Serbuk kalium persulfat
(K₂S2O 8) konsentrasi 2,46 mM ditimbang sebanyak 166,240 mg lalu
dilarutkan dalam labu takar 250 mL menggunakan etanol p.a hingga tanda
batas. Kedua larutan tersebut (50 ml larutan ABTS dan 50 ml larutan
kalium persulfat) diambil dan dicampur lalu dimasukkan ke dalam labu
takar 100 mL kemudian diselubungi menggunakan aluminium foil agar
tidak terkena cahaya, selanjutnya diinkubasi selama 12-16 jam di tempat
18
yang gelap sampai larutan homogen dan reaksi yang terjadi sempurna
(Sharma dkk., 2017).
b. Pembuatan Larutan Induk Trolox (1.000 ppm)
Trolox ditimbang sebanyak 10 mg kemudian dilarutkan menggunakan
etanol p.a secukupnya didalam beker glass 10 ml hingga larut, kemudian
larutan tersebut dimasukkan dalam labu takar 10 mL dan ditambahakan
etanol p.a sampai tanda batas (Anwar dkk., 2022).
c. Pembuatan Seri Konsentrasi Larutan Trolox :
Seri konsentrasi dibuat pada konsentrasi 5 ppm, 10 ppm, 15 ppm, 20 ppm
dan 25 ppm.
1) Konsentrasi 5 ppm
Larutan induk trolox 1.000 ppm diambil menggunakan mikropipet
sebanyak 25 μl, dimasukkan dalam labu takar 5 mL dan
ditambahkan etanol p.a hingga tanda batas pada labu takar.
sebanyak 75 μl dimasukkan dalam labu takar 5 mL dan
19
ditambahkan etanol p.a hingga tanda batas pada labu takar
d. Pembuatan Larutan Induk Sampel 1.000 ppm :
Ekstrak daun brokoli masing-masing ditimbang sebanyak 10 mg lalu
dimasukkan ke dalam beaker gelas 50 mL dan dilarutkan dengan etanol
p.a menggunakan bantuan magnetic stirrer dengan kecepatan 300 rpm
sampai terlarut sempurna, kemudian disaring menggunakan kertas saring
dan dimasukan ke dalam labu takar 10 mL dan ditambahkan dengan etanol
p.a hingga tanda batas sehingga diperoleh konsentrasi sebesar 1.000 ppm
(Akwarini, 2018).
e. Pembuatan Seri Konsentrasi Larutan Sampel
 Seri konsentrasi pada sampel ekstrak n-heksan dan etil asetat dibuat pada
konsentrasi 125 ppm, 250 ppm, 375 ppm, 500 ppm dan 625 ppm.
Larutan induk sampel 1.000 ppm diambil menggunakan mikropipet
sebanyak 625 µl dimasukkan dalam labu takar 5 mL dan
20
sebanyak 1.250 µl dimasukkan dalam labu takar 5 mL dan
sebanyak 1.870 μL dimasukkan dalam labu takar 5 mL dan
sebanyak 3.120 µl, dimasukkan dalam labu takar 5 mL dan
ditambahkan etanol pa hingga tanda batas pada labu takar.
 Seri konsentrasi pada sampel ekstrak etanol 96%, etanol 70% dan metanol
dibuat pada konsentrasi 50ppm, 100ppm, 150 ppm, 200 ppm dan 250 ppm.
sebanyak 250 µl dimasukkan dalam labu takar 5 mLdan
21
sebanyak 500 µl dimasukkan dalam labu takar 5 mL dan
sebanyak 750 μL dimasukkan dalam labu takar 5 mL dan
sebanyak 1.250 µl, dimasukkan dalam labu takar 5 mL dan
ditambahkan etanol pa hingga tanda batas pada labu takar
f. Pengukuran Panjang Gelombang Maksimum
Larutan ABTS 1 mL diambil dimasukkan ke dalam labu takar 5 mL, dan
dicukupkan volumenya dengan etanol p.a sampai tanda batas. Larutan
dimasukkan dalam kuvet kemudian larutan di baca absorbansinya
menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada rentang panjang gelombang
700 - 750 nm. Panjang gelombang maksimum dilihat pada nilai absorbansi
22
yang paling tinggi yang mana nilai tersebut memiliki serapan yang
maksimum (Anwar dkk., 2022).
g. Penentuan Operating Time
Larutan ABTS 1 mL dan larutan trolox konsentrasi 15 ppm 1 mL
dimasukkan ke dalam labu takar 5 mL, kemudian dicukupkan volumenya
hingga batas menggunakan etanol p.a. Larutan dimasukkan dalam kuvet
kemudian larutan di baca absorbansinya menggunakan spektrofotometer
UV-Vis pada menit ke 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, dan 60
pada panjang gelombang maksimum. Waktu peredaman radikal ABTS
yang menghasilkan absorbansi paling stabil dan memberikan serapan
paling tinggi merupakan operating time. Serapan yang tinggi
menunjukkan sampel telah bereaksi dengan sempurna (Anwar dkk., 2022).
h. Pengukuran Serapan Larutan ABTS
Larutan ABTS diambil sebanyak 1 mL menggunakan pipet dan
dimasukkan ke dalam labu takar 5 mL kemudian dicukupkan hingga tanda
batas menggunakan etanol p.a. Dilakukan replikasi 3x kemudian larutan
didiamkan selama operating time. Larutan dimasukkan dalam
kuvetkemudian larutan di baca absorbansinya menggunakan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum (Sami
dkk., 2020).
23
i. Pengukuran aktivitas antioksidan
1. Uji antioksidan trolox
Larutan trolox konsentrasi 5 ppm, 10 ppm, 15 ppm, 20 ppm dan 25
ppm, diambil masing-masing 1 mL dan ditambahkan 1 mL larutan
ABTS di dalam labu takar 5 ml kemudian di cukupkan hingga
tanda batas menggunakan etanol p.a. Selanjutnya dihomogenkan
lalu didiamkan di tempat gelap selama operating time. Larutan
dimasukkan dalam kuvetkemudian larutan di baca absorbansinya
menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang
maksimum (Anwar dkk., 2022).
2. Uji antioksidan sampel
 Larutan induk sampel ekstrak n-heksan dan etil asetat daun brokoli
dengan seri konsentrasi 125 ppm, 250 ppm, 375 ppm, 500 ppm dan
625 ppm diambil masing-masing 1 mL dan ditambahkan 1 mL
larutan ABTS di dalam labu takar 5 ml kemudian di cukupkan
hingga tanda batas menggunakan etanol p.a. Selanjutnya
dihomogenkan lalu didiamkan di tempat gelap selama operating
time. Larutan dimasukkan dalam kuvet kemudian larutan di baca
absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada
panjang gelombang maksimum (Sami dkk., 2020).
 Larutan induk sampel ekstrak n-heksan dan etil asetat daun brokoli
dengan seri konsentrasi 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm, 200 ppm dan
250 ppm diambil masing-masing 1 mL dan ditambahkan 1 mL
24
larutan ABTS di dalam labu takar 5 ml kemudian di cukupkan
hingga tanda batas menggunakan etanol p.a. Selanjutnya
dihomogenkan lalu didiamkan di tempat gelap selama operating
time. Larutan dimasukkan dalam kuvet kemudian larutan di baca
absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada
panjang gelombang maksimum (Sami dkk., 2020).
7. Penetapan kadar flavonoid total
a. Pembuatan Larutan AlCl3 10%
AlCl3 (alumunium klorida) ditimbang sebanyak 2.500 mg, dilarutkan
dengan etanol p.a, kemudian dicukupkan volumenya pada labu takar 25
mL (Puspitasari dkk., 2019).
b. Pembuatan Larutan Kalium Asetat (CH3COOK) 1M
Kalium asetat ditimbang sebanyak 2.500 mg dilarutkan dengan etanol p.a
kemudian dicukupkan volumenya pada labu takar 25 mL (Puspitasari dkk.,
2019).
c. Penyiapan Larutan Induk Kuersetin
Kuersetin ditimbang 10 mg dan dilarutkan dengan etanol p.a hingga larut.
Larutan tersebut dimasukkan ke dalam labu takar 25 mL dan ditambahkan
etanol p.a hingga tanda batas sehingga diperoleh konsentrasi larutan
kursetin sebesar 400 ppm (Puspitasari dkk., 2019).
d. Pembuatan Seri Konsentrasi Kuersetin
Seri konsentrasi kuersetin dibuat pada konsentrasi 2, 4, 6, 8, 10, dan 12
ppm dalam labu takar 5 mL dengan etanol p.a (Puspitasari dkk., 2019) :
25
Larutan induk kuersetin 400 ppm diambil menggunakan
mikropipet sebanyak 25 μl, dimasukkan dalam labu takar 5 mL dan
ditambahkan etanol p.a hingga tanda batas, larutan digojog hingga
homogen.
Larutan induk kuersetin 400 ppm diambil mikropipet sebanyak 50
μl, dimasukkan dalam labu takar 5 mL dan ditambahkan etanol p.a
hingga tanda batas, larutan digojog hingga homogen.
mikropipet, sebanyak 75 μl, dimasukkan dalam labu takar 5 mL
dan ditambahkan etanol p.a hingga tanda batas, larutan digojog
hingga homogen.
mikropipet sebanyak 100 μl, dimasukkan dalam labu takar 5 mL
hingga homogen.
Larutan induk kursetin 400 ppm diambil menggunakan mikropipet
26
ditambahkan etanol p.a hingga tanda batas larutan, digojog hingga
homogen
mikropipet sebanyak 150 μl, dimasukkan dalam labu takar 5 mL
hingga homogen.
e. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Pengukuran panjang gelombang maksimum menggunakan kuersetin 6
ppm sebanyak 1000 µl ditambahkan 200 µl AlCl3 10% dan 200 μL kalium
asetat 1 M, kemudian di masukkan ke dalam labu takar 5 ml dan di
cukupkan hingga tanda batas menggunakan etanol p.a. Larutan
dimasukkan dalam kuvet kemudian larutan di baca absorbansinya
menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada rentang panjang gelombang
400 nm - 500 nm. Panjang gelombang maksimum dilihat pada nilai
absorbansi yang paling tinggi yang mana nilai tersebut memiliki serapan
yang maksimum (Puspitasari dkk, 2019).
f. Penentuan Operating Time
Penentuan operating time dilakukan dengan cara larutan kuersetin 6 ppm
diambil sebanyak 1000 µl menggunakan mikropipet ditambahkan 200 µL
AlCl3 10% dan 200 μL kalium asetat 1 M, kemudian di masukkan ke
dalam labu takar 5 ml dan di cukupkan hingga tanda batas menggunakan
etanol p.a. Larutan dimasukkan dalam kuvetkemudian larutan di baca
27
absorbansinya menggunakan spektrofotometer Uv-Vis pada panjang
gelombang maksimum dengan waktu pengukuran pada menit ke 0, 5, 10,
15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, dan 60. Operating time dilihat pada data
yang tidak terjadi penurunan nilai absorbansi saat pengukuran sampel
(Puspitasari dkk., 2019).
g. Pembuatan Kurva Baku Kuersetin
Larutan kuersetin dengan konsentrasi 2, 4, 6, 8, 10, dan 12 ppm masing-
masing diambil sebanyak 1000 µl menggunakan pipet ditambahkan larutan
AlCl3 10% sebanyak 200 µl dan kalium asetat 1 M sebanyak 200 μl di
masukkan ke dalam labu takar 5 ml dan di cukupkan hingga tanda batas
menggunakan etanol p.a. Dilakukan replikasi sebanyak 3 kali dan
didiamkan selama operating time. Larutan dimasukkan dalam
kuvetkemudian larutan di baca absorbansinya menggunakan
spektrofotometer Uv-Vis pada panjang gelombang maksimum (Puspitasari
dkk., 2019).
h. Pembuatan Larutan Sampel
Ekstrak daun brokoli masing-masing ditimbang 1.000 mg dimasukkan ke
dalam gelas beker 50 mL kemudian dilarutkan dengan etanol p.a hingga
larut dengan bantuan magnetic stirrer hingga larut. Kemudian larutan
disaring ke dalam labu takar 100 mL ditambahkan etanol p.a hingga tanda
batas sehingga diperoleh konsentrasi masing-masing sebesar 10.000 ppm
(Puspitasari dan Wulandari, 2017).
28
i. Penetapan Kadar Flavonoid Total
Larutan induk pada masing-masing sampel dipipet sebanyak 1000 µl
kemudian ditambahkan 200 µL AlCl3 10% dan 200 μL kalium asetat,
kemudian di masukkan ke dalam labu takar 5 ml dan dicukupkan hingga
tanda batas menggunakan etanol p.a. Dilakukan Replikasi sebanyak 3 kali
dan di diamkan selama operating time. Larutan dimasukkan dalam kuvet
kemudian larutan dibaca absorbansinya menggunakan spektrofotometer
UV-Vis pada panjang gelombang maksimum (Puspitasari dkk., 2019).
C. Analisis Data
Aktivitas antioksidan sampel ditentukan dengan besarnya hambatan
serapan ABTS (% inhibisi) dihitung dengan rumus:
Absorbansi Kontrol− Absorbansi Sampel

% Inhibisi = × 100 %
Absorbansi Kontrol
Keterangan :
Absorbansi kontrol = Absorbansi ABTS
Absorbansi sampel = Absorbansi ekstrak daun brokoli.
Setelah didapatkan nilai % inhibisi dari tiap konsentrasi (ppm), lalu
dibuat persamaan regresi linier dari tiap konsentrasi vs % inhibisi untuk
menghitung nilai IC 50. Nilai IC50 diperoleh dari persamaan regresi linier :
Y = bX + a
Keterangan :
Y = 50
X = Nilai IC50 (Salampe dkk., 2019 ).
29
Kadar flavonoid total diperoleh dari nilai absorbansi sampel kemudian
diplotkan kedalam persamaan kurva baku kuersetin. Nilai persamaan
kurva baku kuersetin yang di gunakan untuk penetapan kadar flavonoid
total dapat di lihat pada nilai korelasi (r) yang mendekati 1. Penetapan
kadar flavonoid total di hitung menggunakan rumus :

𝑋 ×𝐹𝑝 ×𝑉
Kadar flavonoid total=
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑝𝑒𝑛𝑖𝑚𝑏𝑎𝑛𝑔𝑎𝑛 (𝑔𝑟𝑎𝑚)× 1000 (𝑚𝑔/𝑔𝑟𝑎𝑚)
Keterangan :
X = Konsentrasi Sampel
Fp = Faktor Pengenceran
V = Volume total Sampel (mL) (Puspitasari dan Wulandari, 2017).
Untuk mengetahui adanya perbedaan atau tidak pada aktivitas
antioksidan (IC50 ) dan kadar flavonoid total data dianalisis dengan
program IBM SPSS Statistic 22 menggunakan uji statistik parametrik One-
way anova dengan asumsi data harus terdistribusi normal dan varian data
homogen, jika salah satu asumsi data tidak terpenuhi (data tidak homogen)
maka dilakukan uji statistik non parametrik menggunakan uji Kruskal-
Wallis. Untuk melihat kelompok mana yang memiliki perbedaan yang
signifikan maka pada uji One-way anova dilanjut dengan uji post hoc
Tukey’s Honestly Significant Difference (HSD), sedangkan pada uji
Kruskal-Wallis dilanjut dengan uji Mann-Whitney (Riwidikdo, 2013).
30
BAB III. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi Tanaman
Determinasi tanaman brokoli dilakukan di Laboratorium Ekologi dan
Biosistematik Tumbuhan jurusan Biologi Fakultas Sains dan Matematika
Universitas Diponegoro. Determinasi tanaman bertujuan untuk memastikan
bahwa tanaman yang digunakan dalam penelitian ini merupakan tanaman yang
benar-benar diinginkan dan mencegah terjadinya kesalahan pada pengumpulan
bahan. Determinasi tanaman brokoli diperoleh hasil dengan kunci determinasi
sebagai berikut:1b-2b-3b-4b-12b-13b-14b-17b-18b-19b-20b-21b-22b-23b-24a-
25a-26b-27a-28b-29b-30b-31a-32a-33b-34a-35a-36d-37b-38b-39b-41b-42b-44b-
45b-46e-50b-51b-53b-54b-56b-57b-58b-59b-72b-73b-74a-75b-76a-77a-78b-
103c-104b-106b-107a-108a-109a-110b-115b-119a-120b-122a-(Famili32.
Brassicaceae)1b-6b-7b-10b (Genus. Brassica) (Spesies, Brassica oleracea L. var.
italica). Adapun determinasi tanaman dapat dilihat pada Lampiran 1.
B. Simplisia Daun Brokoli
Daun brokoli segar hasil panen sebanyak 10 kg kemudian disortasi basah
dan didapatkan hasil sebanyak 7,1 kg.Daun brokoli dicuci dengan air mengalir
untuk menghilangkan kotoran pada daun (Depkes RI, 1985). Daun brokoli yang
telahkering dicek kadar airnya hingga <10%. Hal ini bertujuan untuk
meminimalisir terjadinya pertumbuhan bakteri dan jamur sehingga serbuk
simplisia dapat disimpan dalam jangka waktu yang lama (Depkes RI, 1985).
Simplisia daun brokoli yang dihasilkan sebesar 960 gram. Hasil uji kadar air pada
31
serbuk daun brokoli sebesar 7,2% dan hasil susut pengeringan daun brokoli
sebesar 86,48%. Perhitungan susut pengeringan dapat dilihat pada Lampiran 2.
Susut pengeringan memberikan batasan besarnya senyawa yang hilang pada saat
proses pengeringan (Depkes RI, 2000).
C. Ekstraksi Daun Brokoli
Serbuk daun brokoli diekstraksi menggunakan metode maserasi karena
metode ini dapat menarik zat-zat yang berkhasiat baik yang tahan terhadap
pemanasan maupun tidak tahan terhadap pemanasan (Depkes RI, 2000).
Kelebihan metode ini yaitu biayanya murah, mudah dilakukan, mudah
diaplikasikan, tidak memerlukan alat-alat khusus, dan tidak memerlukan
pemanasan serta dapat digunakan pada sampel yang bersifat termolabil (Voight,
1995 dan Sari dkk., 2021). Pada penelitian ini proses ekstraksi menggunakan
beberapa pelarut yang berbeda yaitu n-heksan, etil asetat, etanol 96%, etanol 70%
dan metanol dimana kelima pelarut tersebut memiliki tingkat kepolaran yang
berbeda. Tujuan menggunakan pelarut dengan tingkat kepolaran yang berbeda
yaitu untuk mengetahui rendemen dan mendapatkan senyawa aktif dari daun
brokoli berdasarkan tingkat kepolarannya (Arsa dan Achmad, 2020). Rendemen
ekstrak daun brokoli (Brassica oleracea L. var. italica) hasil ekstraksi
menggunakan pelarut n-heksan, etil asetat, etanol 96%, etanol 70% dan metanol
dapat dilihat pada Tabel I sedangkan perhitungan rendemen ekstrak dapat dilihat
pada Lampiran 3.
32
Tabel I. Rendemen ekstrak daun brokoli
Berat serbuk yang Berat ekstrak hasil

Jenis pelarut Nilai rendemen
diekstraksi (gram) ekstraksi (gram)
N-heksan 100 g 5,55 g 5,55 %
Etil Asetat 100 g 6,65 g 6,65 %
Etanol 96% 100 g 14,68 g 14,68%
Etanol 70% 100 g 22,25 g 22,25 %
Metanol 100 g 15,85 g 15,85 %
Berdasarkan Tabel I, urutan rendemen ekstrak dari yang terkecil ke terbesar
secara berturut-turut yaitu n-heksan < etil asetat < etanol 96% < metanol < etanol
70%. Hal ini karena n-heksan merupakan pelarut non polar, sehingga hanya dapat
mengekstrak senyawa dengan kepolaran yang rendah, sedangkan etanol
merupakan pelarut dengan kepolaran yang tinggi, sehingga dapat mengekstrak
senyawa dengan kepolaran tinggi. Untuk hasil rendemen dari ekstraksi
menggunakan pelarut etil asetat lebih besar dari pelarut n-heksan tapi lebih kecil
dari pelarut etanol karena etil asetat merupakan pelarut semipolar, sehingga dapat
mengekstrak senyawa dengan kepolaran yang sedang (Purwanto dkk., 2014).
Pelarut metanol dan etanol 70% merupakan pelarut yang sama-sama bersifat
polar-protik tetapi hasil rendemen ekstrak yang didapatkan berbeda. Hal ini
disebabkan karena pelarut metanol tidak mengandung air, sedangkan etanol lebih
banyak mengandung air yang menyebabkan etanol 70% lebih polar dibandingkan
metanol sehingga dapat melarutkan lebih banyak senyawa (Agustien dan Susanti,
2021).
Dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa ekstraksi daun brokoli
menggunakan pelarut etanol 70% memiliki rendemen ekstrak yang lebih tinggi
dibandingankan dengan ekstraksi daun brokoli dengan pelarut n-heksan, etil
33
asetat, etanol 96%, dan metanol. Semakin tinggi nilai rendemen menunjukkan
bahwa ekstrak yang dihasilkan semakin banyak, ini berarti bahwa semakin banyak
juga zat-zat berkhasiat yang ditarik dalam daun brokoli (Nahor dkk., 2020).
D. Identifikasi Flavonoid
Identifikasi flavonoid dilakukan untuk mengetahui dan memastikan ada
tidaknya senyawa flavonoid yang terkandung didalam ekstrak daun brokoli. Pada
penelitian ini, identifikasi flavonoid dilakukan menggunakan uji shinoda (logam
Mg dan HCI) .
1. Identifikasi flavonoid
Identifikasi flavonoid pada ekstrak daun brokoli menggunakan uji shinoda
dikatakan positif mengandung flavonoid jika pada larutan terbentuk warna kuning
jingga hingga merah. Tujuan penambahan logam Mg dan HCl adalah untuk
mereduksi inti benzopiron yang terdapat dalam struktur flavonoid sehingga
terbentuk garam flavilium berwarna merah atau jingga (Ergina dkk., 2014).
Reaksi flavonoid dengan logam Mg dan HCl dapat dilihat pada Gambar 5.
Gambar 5. Reaksi flavonoid dengan logam Mg dan HCl (Ergina dkk., 2014).
34
Hasil identifikasi flavonoid pada ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%,
etanol 70% dan metanol daun brokoli dapat dilihat pada Gambar 6. Pada
penelitian ini yang positif mengandung senyawa flavonoid yaitu ekstrak etanol
96%, etanol 70% dan metanol daun brokoli.
a a a a a
b b b b b
N-heksan Etil asetat Etanol 96% Etanol 70% Metanol

(-) (-) (+) (+) (+)
Keterangan :
a = Larutan Blanko
b = Larutan Uji
Gambar 6. Identifikasi Flavonoid Ekstrak Daun Brokoli.
Flavonoid merupakan golongan senyawa fenol yang umumnya bersifat
polar dan terdapat hampir di setiap tumbuhan. Flavonoid umumnya akan terlarut
dengan pelarut yang tingkat kepolarannya sama misalnya etanol atau metanol,
sementara pelarut etil asetat yang bersifat semi polar dan pelarut n-heksan yang
bersifat non polar kurang efektif untuk melarutkan senyawa yang bersifat polar
(Putri dan Lubis, 2020). Jenis senyawa flavonoid yang bersifat polar yaitu
glikosida flavonoid dan aglikon, jenis senyawa flavonoid yang bersifat semi polar
yaitu flavon, flavonon dan flavonol sedangkan jenis senyawa flavonoid yang
bersifat non polar yaitu aglikon polimetoksi atau isoflavon yang gugus gula atau
bentuk glikosidanya sudah terlepas sehingga hanya dapat larut dalam pelarut non
polar (Markham, 1988).
35
Hasil identifikasi flavonoid pada penelitan ini dapat disimpulkan bahwa
hanya sedikit sekali senyawa flavonoid pada daun brokoli yang bersifat semi polar
dan non polar, sehingga tidak dapat terdeteksi secara sempurna.
E. Penentuan Aktivitas Antioksidan
1. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Penentuan panjang gelombang maksimum bertujuan untuk mengetahui
panjang gelombang yang mempunyai serapan maksimum yaitu saat senyawa
berada pada kondisi optimum sehingga diperoleh kepekaan yang maksimum
(Vifta dkk., 2020). Panjang gelombang maksimum dapat diketahui dengan cara
melihat nilai absorbansi yang paling tinggi. Panjang gelombang ABTS dibaca
pada rentang panjang gelombang 700 - 750 nm (Sami dkk., 2020). Pada penelitian
ini diperoleh panjang gelombang maksimum sebesar 745 nm. Poojary dkk. (2016)
melaporkan bahwa panjang gelombang maksimum larutan ABTS dapat dibaca
absorbansinya pada 745 nm. Panjang gelombang maksimum ABTS pada
penelitian ini dapat dilihat pada Gambar 7.
Gambar 7. Panjang gelombang maksimum ABTS
36
2. Operating Time
Penentuan operating time (OT) bertujuan untuk mengetahui waktu terjadinya
reaksi yang stabil antara larutan ABTS dan trolox pada waktu tertentu. Hasil
operating time ABTS dengan trolox dapat dilihat pada Tabel II.
Tabel II. Operating time ABTS dengan Trolox
Waktu (Menit) Absorbansi

0 0,685
5 0,676
10 0,650
15 0,644
20 0,635
25 0,623
30 0,623
35 0,623
40 0,621
45 0,618
50 0,617
55 0,615
60 0,612
Berdasarkan Tabel II, Nilai absorbansi dari beberapa selang waktu yang
diukur menunjukkan angka absorbansi stabil pada menit ke-25, 30 dan 35 yaitu
sebesar 0,623. Hasil penetapan operating time pada penelitian ini sama dengan
penelitian sebelumnya yaitu operating time diperoleh pada menit ke- 25 (Lokana,
2022). Waktu operating time stabil dapat dilihat dari semakin kecil selisih
absorbansi yang diperoleh dari selang waktu dan reaksi dianggap optimal jika
absorbansi dari tiap selang waktu yang diukur telah stabil (Puspitasari dan
Sumantri, 2019). Waktu pengukuran dihitung sejak tercampurnya larutan ABTS
dengan trolox menggunakan panjang gelombang 745 nm.
37
3. Penentuan Aktivitas Antioksidan Metode ABTS
a. Aktivitas antioksidan trolox
Aktivitas antioksidan diukur menggunakan metode ABTS. Prinsip
pengujiannya adalah menyetabilkan radikal bebas melalui donor proton.
Pengukuran aktivitas antioksidan dilakukan berdasarkan hilangnya warna ABTS
yang semula berwarna biru-hijau akan berubah menjadi tidak berwarna apabila
tereduksi oleh antioksidan (Irianti dkk., 2017). Hasil nilai IC50 trolox dapat
dilihat pada Tabel III sedangkan perhitungannya dapat dilihat pada Lampiran 4.
Tabel III. Nilai IC50 Trolox
Seri Nilai Rerata

Abs Abs % Persamaan
Rep konsentrasi IC50 IC50
ABTS Sampel Inhibisi regresi
(μg/mL) (ppm) ± SD
5 0,783 12,22
10 0,668 25,11
y = 2,950x -
15 0,539 39,57 18,287
3,946
1 20 0,892 0,426 52,24
25 0,246 72,42
5 0,771 13,57
10 0,676 24,22
y = 2,809x - 18,579
15 0,534 40,13 18,602
2,253 ± 0,281
2 20 0,892 0,435 51,23
25 0,265 70,29
5 0,786 11,88
10 0,66 26,01
y = 2,746x -
15 0,54 39,46 18,849
1,760
3 20 0,892 0,423 52,58
25 0,292 67,26
Keterangan:
Rep = Replikasi
Abs = Absorbansi
Rerata = Rata-rata
Trolox merupakan zat uji yang berfungsi sebagai pembanding yang
digunakan pada metode ABTS. Trolox digunakan sebagai kontrol positif pada
38
berbagai uji antioksidan karena trolox merupakan hasil sintesis dari derivat
vitamin E yang dapat terlarut dalam pelarut air dan memiliki aktivitas
antioksidan sangat kuat (Setiawan dkk., 2018). Pada penelitian ini diperoleh nilai
IC50 trolox sebesar 18,579 μg/mL sehingga antioksidan yang diperoleh masuk
dalam kategori sangat kuat. Hasil ini tidak jauh berbeda dari penelitian yang
dilakukan oleh setiawan dkk. (2018) yang menyatakan bahwa nilai IC50 trolox
yaitu sebesar 19,38 ppm.
b. Aktivitas antioksidan sampel
Pada penelitian ini ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%, etanol 70%
dan metanol daun brokoli dilakukan uji aktivitas antioksidan menggunakan
metode ABTS. Hasil nilai IC50 dari ekstrak n heksan, etil asetat, etanol 96%,
etanol 70% dan metanol daun brokoli dapat dilihat pada Tabel IV sedangkan
perhitungannya dapat dilihat pada Lampiran 5.
Tabel IV. Nilai IC50 Ekstrak Daun Brokoli
Sampel Nilai IC50(ppm) ± SD

Ekstrak n-heksan 607,385± 0,285
Ekstrak etil asetat 560,719 ± 0,159
Ekstrak etanol 96% 217,705 ± 0,400
Ekstrak etanol 70% 150,032 ± 0,483
Ekstrak metanol 243,104 ± 0,216
Berdasarkan Tabel IV, urutan IC50 dari terbesar ke terkecil secara berturut-
turut yaitu n-heksan < etil asetat < metanol < etanol 96% < etanol 70%. Ekstrak
etanol 70% daun brokoli merupakan ekstrak yang memiliki nilai IC 50 terkecil
dibandingkan dengan ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%, dan metanol
39
sehingga ekstrak etanol 70% memiliki aktivitas antioksidan yang paling kuat
dibandingkan dengan ekstrak yang lain.
Pada penelitian Jannah (2014) daun brokoli positif mengandung senyawa
flavonoid, monoterpen, sesquiterpen, triterpenoid dan steroid. Senyawa flavonoid
merupakan golongan fenol yang merupakan senyawa polarkarena mempunyai
sejumlah gugus hidroksil yang tak tersulih, sehingga akan larutdalam pelarut polar
seperti etanol, metanol, aseton dan air (Sudarmadji dkk., 1997). Sedangkan
senyawa monoterpen, sesquiterpen, steroid dan triterpenoid merupakan senyawa
yang diketahui bersifat mudah larut dalam pelarut non polar seperti n-heksan
(Prasetyo dkk., 2015 dan Padmasari dkk., 2013). Berdasarkan kepolaran dan
kelarutan, senyawa yang bersifat polar akan mudah larut dalam pelarut polar,
sedangkan senyawa nonpolar akan mudah larut dalam pelarut nonpolar (Depkes
RI, 2000).
Pada penelitian ini dapat disimpulkan bahwa aktivitas antioksidan pada
daun brokoli hasilnya lebih baik menggunakan pelarut yang bersifat polar dari
pada pelarut yang bersifat non polar maupun semi polar. Hal ini karena senyawa-
senyawa yang memiliki aktivitas antioksidan dalam daun brokoli sebagian besar
sifatnya polar sehingga lebih banyak ditarik jika menggunakan pelarut yang
bersifat polar. Suatu zat dapat tertarik dan terlarut, apabila pelarut yang digunakan
mempunyai tingkat kepolaran yang sama (Chew dkk., 2011).
Data aktivitas antioksidan dari kelima ekstrak daun brokoli kemudian
dianalisis normalitas dan homogenitas. Uji normalitas menggunakan Shapiro-
Wilk dan uji homogenitas menggunakan Levene Statistic. Hasil uji normalitas dan
40
homogenitas diperoleh data terdistribusi normal dan homogen dengan nilai
signifikansi p>0,05. Analisis selanjutnya dilakukan menggunakan uji One-
WayAnova. Hasil uji menunjukkan nilai IC50 dari kelima ekstrak daun brokoli
terdapat perbedaan yang signifikan dengan nilai signifikansi 0,000 (p<0,05).
Analisis lanjutan menggunakan post hoc Tukey’s Honestly Significant Difference
(HSD). Hasil uji HSD menunjukkan nilai sig 0,000 (p<0,05) yang artinya terdapat
perbedaan yang signifikan pada nilai IC 50 dari lima kelompok ekstrak daun
brokoli, dan dapat disimpulkan bahwa perbedaan pelarut pada ekstrak daun
brokoli menghasilkan antioksidan yang berbeda signifikan. Hasil uji statistik
dapat dilihat pada Lampiran 6 .
F. Penetapan Kadar Flavonoid Total
1. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Penentuan panjang gelombang maksimum bertujuan untuk mengetahui
panjang gelombang yang mempunyai serapan maksimum yaitu saat senyawa
berada pada kondisi optimum sehingga diperoleh kepekaan yang maksimum
(Vifta dkk., 2020). Panjang gelombang maksimum dapat dilakukan dengan
membaca serapan kuersetin menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada rentang
400-500 nm (Puspitasari dkk, 2019). Pada penelitian ini panjang gelombang
maksimum yang diperoleh sebesar 429,50 nm. Panjang gelombang tersebut
kemudian digunakan untuk pengukuran serapan kurva baku dan sampel ekstrak.
Panjang gelombang yang di dapat telah sesuai dengan panjang gelombang
kompleks dari standar dengan aluminium klorida menunjukan bahwa kompleks
yang terbentuk oleh flavonol dengan C-3 dan C-5 kelompok hidroksil, dan
41
kelompok ekstra orto-dihidroksil seperti rutin, kuersetin, dan miricetin absorbansi
maksimum pada 415-440 nm (Chang dkk., 2002). Hasil tersebut tidak jauh
berbeda dengan penelitian yang dilakukan oleh Sethyana (2023) yaitu panjang
gelombang maksimum kuersetin diperoleh sebesar 430 nm yang ditandai dengan
perubahan warna menjadi lebih kuning. Hasil panjang gelombang maksimum
kuersetin dapat dilihat pada Gambar 8.
Gambar 8. Panjang gelombang maksimum kuersetin
2. Operating Time
Penentuan operating time (OT) bertujuan untuk mengetahui waktu terjadinya
reaksi yang stabil antara larutan kuersetin dengan AlCl 3 dan kalium asetat pada
waktu tertentu. Operating time ditentukan dengan mengukur hubungan antara
waktu pengukuran dengan absorbansi. Hasil pengukuran operating time dapat
dilihat pada Tabel V.
42
Tabel V. Pengukuran operating time
Waktu (Menit) Absorbansi

0 0,272
5 0,289
10 0,299
15 0,319
20 0,337
25 0,342
30 0,342
35 0,342
40 0,340
45 0,336
50 0,335
55 0,333
60 0,331
Berdasarkan Tabel VI,dapat dilihat pada menit ke 25, 30 dan 35 menunjukkan
nilai absorbansi yang stabil dan semakin kecilnya selisih perubahan
absorbansinya. Berdasarkan hal tersebut, operating time ditetapkan mulai terjadi
pada menit ke-25. Dan berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Lokana (2022)
pada penetapan kadar flavonoid total ekstrak etanol daun dewandaru operating
time ditetapkan pada menit ke-25.
3. Kurva Baku Kuersetin
Penentuan kurva baku larutan kuersetin dilakukan dengan cara mengukur
larutan kuersetin pada seri konsentrasi 2, 4, 6, 8, 10, dan 12 ppm. Penentuan kurva
baku kuersetin dilakukan pada seri konsentrasi tersebut karena pada konsentrasi
tersebut dihasilkan nilai absorbansi yang memenuhi syarat masuk rentang
absorbansi yang baik antara 0,2 - 0,8 nm. Pada penetapan kurva baku kuersetin
dilakukan replikasi sebanyak 3 kali. Kurva baku digunakan untuk menghitung
kadar flavonoid total pada ekstrak daun brokoli dilihat dari nilai koefisien korelasi
r yang mendekati 1. Pada penelitian ini, kurva baku yang digunakan yaitu
43
replikasi ke dua dengan persamaan regresi linier y = 0,051 x + 0,112 dengan nilai
koefisiensi korelasi r = 0,999. Nilai r mendekati angka 1 yang menunjukan bahwa
kurva tersebut linier sehingga terdapat hubungan yang kuat antara konsentrasi
kuersetin dengan nilai serapan. Hasil penetapan kurva baku kuersetin dapat dilihat
pada TabelVI.
Tabel VI. Penetapan kurva baku kuersetin
Replikasi Seri konsentrasikuersetin Absorbansi Persamaan regresi linier

2 0,233
4 0,323
6 0,423 y = 0,049 x + 0,126
I 8 0,508 r = 0,997
10 0,626
12 0,730
2 0,214
4 0,315
6 0,428 y = 0,051x + 0,112
II 8 0,532 r = 0,999
10 0,630
12 0,729
2 0,241
4 0,318
6 0,474 y = 0,047 x + 0,149
III 8 0,529 r = 0,985
10 0,642
12 0,707
Persamaan regresi liniery = bx + a antara seri konsentrasi kuersetin dan
absorbansinya dapat dilihat pada Gambar 9.
44
0.8 y = 0,051x + 0,112
0.729 R² = 0,999
0.7
0.63
Absorbansi 0.6
0.532
0.5
0.428
0.4
Series1
0.3 0.315
Linear (Series1)
0.2 0.214
0.1
0
0 5 10 15
Konsentrasi Kuersetin
Gambar 9. Grafik kurva baku kuersetin
4. Penetapan Kadar Flavonoid Total Ekstrak Daun Brokoli
Penetapan kadar flavonoid total pada penelitian ini menggunakan pereaksi
aluminium klorida (AlCl3) dan kalium asetat. Penambahan aluminium klorida
bertujuan untuk membentuk kompleks antara senyawa aluminium klorida dengan
gugus keto pada C-4 dan gugus hidroksi pada atom C-3 atau C-5 dari golongan
flavon dan flavonol. Kuersetin digunakan sebagai larutan pembanding karena
kuersetin dapat membentuk kompleks antara AlCl 3 dengan gugus keto pada atom
C-4 dan juga dengan gugus hidroksil pada atom C-3 atau C-5 yang bertetanggaan
dari flavon dan flavonol (Azizah dkk., 2014). Sedangkan penambahan kalium
asetat bertujuan untuk menstabilkan kompleks antara AlCl 3 dengan kuersetin
(Suharyanto dan Prima, 2020). Reaksi Flavonoid dengan aluminium klorida dapat
dilihat pada Gambar 10.
45
Gambar 10. Reaksi Flavonoid dengan AlCl3 (Lindawati dan Ma’ruf, 2020).
Hasil penetapan kadar flavonoid total ekstrak daun brokoli yang diekstraksi
menggunakan pelarut n-heksan, etil asetat, etanol 96%, etanol 70% dan metanol
dapat dilihat pada Tabel VII, sedangkan perhitunganya dapat dilihat pada
Lampiran 7.
Tabel V. Penetapan kadar flavonoid total ekstrak daun brokoli
Sampel Rep Abs Fp Kadar flavonoid tiap Rata-rata kadar

gram sampel flavonoid tiap gram
(mgQE/gram) sampel (mgQE/gram) ±
SD
Ekstrak N-heksan 1 0,218 1x 0,208
2 0,237 1x 0,245 0,227 ±
3 0,228 1x 0,227 0,018
Ekstrak Etil asetat 1 0,305 1x 0,378
2 0,312 1x 0,392 0,389 ±
3 0,315 1x 0,398 0,010
Ekstrak Etanol 1 0,513 5x 3,931
96% 2 0,518 5x 3,980 3,957 ±
3 0,516 5x 3,960 0,024
Ekstrak Etanol 1 0,602 5x 4,804
70% 2 0,619 5x 4,970 4,829 ±
3 0,593 5x 4,715 0,129
Ekstrak Metanol 1 0,475 5x 3,559
2 0,469 5x 3,5 3,562 ±
3 0,482 5x 3,627 0,063
46
Keterangan:
Rep = Replikasi
Abs = Absorbansi
Fp = Faktor pengenceran
Berdasarkan Tabel VIII, urutan kadar flavonoid total dari yang terkecil ke
terbesar secara berturut-turut yaitu n-heksan < etil asetat <metanol < etanol 96%<
etanol 70%. Ekstrak etanol 70% merupakan ekstrak yang memiliki kadar
flavonoid yang paling besar dibandingkan dengan ekstrak n-heksan, etil asetat,
etanol 96%, dan metanol. Dari hasil kadar flavonoid total tersebut yang paling
besar kadarnya yaitu ekstrak daun brokoli yang diekstraksi menggunakan pelarut
etanol 70%, hal ini dapat disebabkan karena di dalam daun brokolibanyak
mengandung senyawa flavonoid yang bersifat polar seperti glikosida flavonoid
dan aglikon (flavonol). Sedangkan hasil kadar flavonoid total yang paling kecil
yaitu yang diekstraksi menggunakan pelarut n-heksan yang bersifat nonpolar.
Terdapat beberapa jenisflavonoid yang dapat larut dalam pelarut non polar seperti
aglikon polimetoksi atau isoflavon yang gugus gula atau bentuk glikosidanya
sudah terlepas sehingga hanya dapat larut dalam pelarut non polar yaitu n-heksan
(Markham, 1988).
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Kusumawardani (2021)
didapatkan hasil kadar senyawa flavonoid pada ekstrak daun katuk yang
diekstraksi menggunakan pelarut etanol 70%, 90%, dan 95% didapatkan hasil
berturut-turut yaitu sebesar 0,452 mgQE/100 gr ekstrak, 0,394 mgQE/100 gr
ekstrak, dan 0,380 mgQE/100 gr ekstrak. Dapat disimpulkan bahwa kandungan
flavonoid total tertinggi pada ekstrak daun katuk diperoleh dari pelarut etanol
70%. Pada daun Brokoli dan daun Katuk sama-sama mengandung senyawa
47
flavonoid yaitu Kuersetin dan Kaempferol, sehingga pelarut etanol 70% lebih
cocok untuk ekstraksi daun brokoli (Tuszyńska, 2014 ; Magdalena dkk., 2015).
Data kadar flavonoid total dari kelima ekstrak daun brokoli kemudian
dianalisis normalitas dan homogenitas. Uji normalitas menggunakan Shapiro-
Wilk dan uji homogenitas menggunakan Levene Statistic. Hasil uji normalitas
diperoleh data terdistribusi normal dengan nilai sig p>0,05sedangkan hasil uji
homogenitas diperoleh data tidak homogen dengan nilai sig p<0,05. Analisis
selanjutnya dilakukan menggunakan ujiKruskal-Wallis. Hasil uji menunjukkan
bahwa kadar flavonoid total dari kelima ekstrak daun brokoli terdapat perbedaan
yang signifikan dengan nilai signifikansi 0,009 (p<0,05). Analisis lanjutan
menggunakan uji Mann-Whitney. Hasil uji Mann-Whitney menunjukkan nilai sig
0,05 (tidak lebih dari 0,05) yang artinya terdapat perbedaan yang signifikan pada
kadar flavonoid total dari lima kelompok ekstrak daun brokoli, dan dapat
disimpulkan bahwa perbedaan pelarut pada ekstrak daun brokoli menghasilkan
kadar flavonoid total yang berbeda signifikan. Hasil uji statistik dapat dilihat pada
Lampiran 8.
Pada penelitian ini, nilai aktivitas antioksidan (IC 50) dan kadar flavonoid
total pada kelima ekstrak daun brokoli menunjukkan bahwasemakin kecil nilai
IC50maka semakin besar kadar flavonoid totalnya.Nilai aktivitas antioksidan
terkecil dengan kadar flavonoid total terbesar diperolehpada ekstrak etanol 70%
daun brokoli. Pelarut etanol 70% adalah pelarut yang paling polar jika
dibandingkan dengan pelarut lainnya yaitu n-heksan, etil asetat, etanol 96% dan
48
metanol. Hal ini mengidikasikan bahwa senyawa-senyawa flavonoid pada daun
brokoli bersifat polar dan paling mudah disari oleh pelarut etanol 70%.
Aktivitas antioksidan dan kadar flavonoid total menggunakan variasi pelarut
pada penelitian ini diperoleh hasil yang kurang optimal karena belum ada yang
memiliki aktivitas antioksidan sangat kuat atau kuat. Keterbatasan pada penelitian
ini adalah tidak melakukan variasi metode ekstraksi. Perbedaan metode ekstraksi
juga dapat mempengaruhi aktivitas antioksidan dan kadar flavonoid total yang
diperoleh. Metode ekstraksi dapat dilakukan dengan dua cara yaitu cara panas dan
cara dingin. Menurut penelitian Jing dkk., (2015) peningkatan suhu dapat
mengakibatkan pergerakan molekular yang mempercepat disolusi sehingga
meningkatkan kadar flavonoid dan hasil antioksidan yang didapatkan menjadi
lebih optimal.
49
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Kesimpulan yang diperoleh dalam penelitian ini adalah :
1. Aktivitas antioksidan ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%, etanol 70%
dan metanol daun brokoli (Brassica oleracea L.var. italica)yang dinyatakan
dalam IC50 berturut-turut sebesar 607,385± 0,285 ppm, 560,719 ± 0,159 ppm,
217,705 ± 0,400 ppm, 150,032± 0,483 ppm dan 243,104 ± 0,216 ppm.
2. Kadar flavonoid total ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%, etanol 70%
dan metanol daun brokoli (Brassica oleracea L.var. italica) berturut-turut
sebesar 0,227 ± 0,018; 0,389 ± 0,010; 3,957 ± 0,024; 4,829 ± 0,129 dan 3,562
± 0,063 mgQE/gram ekstrak.
3. Terdapat perbedaan yang signifikan terhadap aktivitas antioksidandan kadar
flavonoid totaldalam ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol 96%, etanol 70%
dan metanoldaun brokoli (Brassica oleracea L.var. italica).
B. Saran
Perlu dilakukan ekstraksi daun brokoli (Brassica oleracea L.var. italica)
menggunakan pelarut etanol 70% dengan variasi metode ekstraksi , sehingga
diharapkan dapat diperoleh aktivitas antioksidan dan kadar flavonoid yang lebih
optimal.
50
DAFTAR PUSTAKA
Afrellia, R. E., 2021, Analisis Kadar Fenolik Dan Flavonoid Total Pada Umbi
Wortel (Daucus carota L.) Dengan Perbedaan Polaritas Pelarut, Skripsi,
Universitas Wahid Hasyim, Semarang.
Agustien, G. S., dan Susanti., 2021, Pengaruh Jenis Pelarut Terhadap Hasil
Ekstraksi Daun Lidah Mertua (Sansevieria trifasciata), Prosiding Seminar
Nasional Farmasi UAD, 39-45.
Akwarini., 2018, Analisis Penghambatan Ekstrak Etanol Daun Kembang Bulan
(Tithonia diversifolia) Terhadap Reaksi Oksidasi Dari Radikal Bebas
Dengan Metode DPPH ABTS dan FRAP, Skripsi, Universitas
Hasanuddin, Makassar.
Alfaridz, F., dan Amalia, R., 2018, Klasifikasi dan Aktivitas Farmakologi Dari
Senyawa Aktif Flavonoid, Jurnal Farmaka, 16 (3) : 1-9.
Anwar, K., Lokana, F. M., dan Budiarti, A., 2022, Antioxidant Activity Of
Dewandaru Leaf (Eugenia Uniflora L.) Ethanol Extract And
Determination Of Total Flavonoid And Phenolic Content, Jurnal Ilmiah
Sains, 22 (2) : 161- 171.
Arsa, A. K., dan Achmad Z., 2020, Ekstraksi Minyak Atsiri Dari Rimpang Temu
Ireng(Curcuma aeruginosa Roxb) dengan Pelarut Etanol dan N-Heksana,
Jurnal Teknologi Technoscientia, 13 (1) : 83-94.
Arifin, B., dan Ibrahim S., 2018, Struktur, Bioaktivitas Dan Antioksidan
Flavonoid, Jurnal Zarah, 6(1):21-29.
Azizah, D.N., Endang, K., dan Fahrauk, F., 2014, Penetapan Kadar Flavonoid
Metode AlCl3 Pada Ekstrak Metanol Kulit Buah Kakao (Theobroma cacao
L.), Kartika Jurnal Ilmiah Farmasi, 2(2), 45-49.
Berawi, K. N., dan Agverianti, T., 2017, Efek Aktivitas Fisik Pada Proses
Pembentukan Radikal Bebas Sebagai Faktor Risiko Aterosklerosis,
Majority, 6(2):84-90.
Bettolo, G. B. M., Nicoletti, M., dan Patamia, M., 1981, Plant Screening By
Chemical And Chromatographic Procedures Under Field Condition,
Journal Of Chromatography, 213.
Chang, C. C., Yang, M. H., dan Chern, J. C., 2002, Estimation Of Total Flavonoid
Content In Propolis By Wo Complementary Colorimetric Methods,
Journal Of Food And Drug Analysis, 10(2) : 178-182.
Chew, K. K., Ng, S.Y., Thoo, Y.Y., Khoo, M. Z., Wan A. W. M., And Ho, C. W.,
2011, Effect Of Ethanol Concentration, Extraction Time And Extraction
Temperature On The Recovery Of Phenolic Compounds And Antioxidant
Capacity Of Centella asiatica extracts, International Food Research
Journal,18: 571-578.
51
Departemen Kesehatan RI., 1985, Cara Pembuatan Simplisia, Direktorat Jendral
Pengawasan Obat dan Makanan.
Departemen Kesehatan RI., 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan
Obat, Cetakan Pertama, Direktorat Jenderal Pengawasan Obat Tradisional.
Ergina., Nuryanti S., dan Pursitasari, I. D., 2014,Uji Kualitatif Senyawa Metabolit
Sekunder Pada Daun Palado (Agave angustifolia) Yang Diekstraksi
Dengan Pelarut Air Dan Etanol, Jurnal Akademi Kimia, 3 (3) : 165-172.
Gandjar, I. G., dan Rohman, A., 2018, Spektroskopi Molekuler untuk Analisis
Farmasi, Gadjah Mada University Press, Yogyakarta.
Hafifah., 2017, Budidaya Brokoli Dengan Bahan Organik (Chromolaena
Odorata), Sefa Bumi Persada, Aceh Utara.
Irianti, T. T., Sugiyanto., Nuranto, S., dan Kuswandi, M., 2017, Buku
Antioksidant, Depublish, Yogyakarta.
Jannah, M. N., 2014, Perbandingan Aktivitas Antioksidan dan Kadar Flavonoid
Total Pada Bonggol Serta Daun Brokoli (Brassica oleracea L. cv. groups
Broccoli), Skripsi, Universitas Islam Bandung.
Jing, C.L., Dong, X.F., Tong, J.M., 2015, Optimization of Ultrasonic-Assisted
Extraction ofFlavonoid Compounds and Antioxidants from Alfalfa Using
Response Surface Method. Molecules, 20: 15550-15571.
Jubaidah, S., dan Nurhasnawati, H., 2018, Analisis Flavonoid Total Akar Tabar
Kedayan(Aristolochia foveolata Merr), Jurnal Al-kimia, 6 (2) : 131 – 136.
Julianto, T. S., 2019, Fitokimia: Tinjauan Metabolit Sekunder dan Skrining
Fitokimia, Universitas Islam Indonesia, Yogyakarta.
Kumalasari, E., Nazir M. A., dan Putra, A. M. P., 2018, Penetapan Kadar
Flavonoid TotalEkstrak Etanol 70% Daun Bawang Dayak (Eleutherine
palmifolia L.) dengan metodespektrofotometri UV-Vis, Jurnal Insan
Farmasi Indonesia, 1 (2) : 201-209.
Kusumawardani, Z., 2021, Pengaruh Konsentrasi Etanol 70%, 90%, Dan 95%
Terhadap Kandungan Flavonoid Pada Ekstrak Daun Katuk (Sauropus
androgynus (L.) Merr.), Tugas Akhir, Program Studi Diploma III Farmasi
Politeknik Harapan Bersama.
Liao, K. L., dan Yin, M. C., 2000, Individual and Combined Antioxidant Effects
of Seven Phenolic Agents in Human Erythrocyte Membrane Ghosts and
Phosphatidylcholine Liposome Systems: Importance of the Partition
Coefficient, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 48 (6) : 2266-
2270.
Linda, N. Y., dan Ma’ruf, S. H., 2020, Penetapan Kadar Total Flavonoid Ekstrak
Etanol Kacang Merah (Phaseolus vulgaris L.) Dengan Metode Kompleks
52
Kolorimetri Secara Spektrofotometri Visibel, Jurnal Ilmiah
Manuntung,6(1), 83-91.
Lokana, F. M., 2022, Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Dewandaru
(Eugenia uniflora L.) Serta Penetapan Kandungan Flavonoid Dan Fenolik
Totalnya, Skripsi, Universitas Wahid hasyim, Semarang.
Magdalena, S., Yuwono, B., dan Dharmayanti A, W, S., 2015, Pengaruh Daun
Katuk (Sauropus androgynus (L.)Merr.) terhadap Waktu Perdarahan
(Bleeding Time) pada Tikus Wistar Jantan sebagai Alternatif Obat
Antitrombotik, e-Jurnal Pustaka Kesehatan, 3(2) : 212 – 216.
Markham, K. R., 1988, Cara Identifikasi Flavonoid, Penerbit ITB, Bandung.
Molyneux, P., 2004, The Use of The Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl
(DPPH) for Estimating Antioxidant Activity, Songklanakarin Journal of
Sciences and Technology, 26(2) : 211-219.
Nahor, E. M., Rumagit, B. I., dan Tou, H. Y., 2020, Perbandingan Randemen
Ekstrak Etanol Daun Andong (Cordyline futicosa L.)Menggunakan
Ekstraksi Maserasi Dan Sokletasi. Prosiding Interprofessional
Colaboration Dalam Pengembangan Center of Exellence Inovasi Pangan
Lokal pada Era New Normal, Semarang.
Noviyanto, F., 2020, Penetapan Kadar Ketoprofen dengan Metode
Spektrofotometri UV-Vis, Media Sains Indonesia, Bandung.
Oliveira, S. D., Souza, G.A., Eckert, C.R., Silva, T.A., Sobral, E.S., Favero, O.A.,
Ferreira, M.J.P., Romoff, P., and Baader, W.J., 2014, Evaluation Of
Antiradical Assays Used In Determining The Antioxidant Capacity Of
Pure Compounds And Plant Extracts. Quim Nova,37(3): 497-503.
Padmasari P. D., Astuti K,W., Warditiani N,K., 2013, Skrining Fitokimia Ekstrak
Etanol 70% Rimpang Bangle (Zingiber purpureum Roxb.), Jurnal
Farmasi Udayana, 1-7.
Parwata, I. M. O. A., 2016, Bahan Ajar Antioksidan, Universitas Udayana, Bali.
Poojary, R., Kumar, A. N., Kumarachandra, R., dan Sanjeev, G., 2016. Evaluation
of In Vitro Antioxidant Properties of Hydro Alcoholic Extract of Entire
Plant of Cynodon dactylon. Journal of Young Pharmacists. 8 (4) :378-384.
Prasetyo, S., Arfianto, W., dan Hudaya, T.,2015, The Pre-chromatography
Purification of Crude Oleoresin of Phaleria Macrocarpa Fruit Extracts by
Using 70%-v/v Ethanol, Prosiding Seminar Nasional Teknik Kimia
“Kejuangan”, Yogyakarta.
Pujiastuti, A., Erwiyani, A. R., dan Sunnah, I., 2022, Perbandingan
KadarFlavonoid Total dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Labu Kuning
dengan Variasi Pelarut, Journal of Holistics and Health Sciences, 4 (2) :
324-339.
53
Purwanto, A., Fajriyati, A. N., dan Wahyuningtyas, D., 2014 , Pengaruh Jenis
Pelarut Terhadap Rendemen Dan Aktivitas Antioksidan Dalam Ekstrak
Minyak Bekatul Padi (Rice Bran Oil), Jurnal Ekuilibrium, 13 (1) :29-34.
Puspitasari, A.D., Anwar, F. F., dan Faizah, N.G.A., 2019, Aktivitas Antioksidan,
Penetapan Kadar Fenolik Total Dan Flavonoid Total Ekstrak Etanol, Etil
Asetat dan n-Heksan Daun Petai (Parkia speciosa hussk.), Jurnal Ilmiah
Teknosains, 5(1):1-8.
Puspitasari, A., danWulandari, R. L., 2017, Antioxidant activity, determination of
total phenolic and flavonoid content of Muntingia calabura L. Extracts,
JurnalPharmaciana, 7(2):147-158.
Putri, D. M., dan Lubis, S. S., 2020,Skrining Fitokimia Ekstrak Etil Asetat Daun
Kalayu (Erioglossum rubiginosum (Roxb.) Blum), AMINA (Ar-Raniry
Chemistry Journal), 2 (3) : 120-125.
Rahmawati., Sinardi., dan Iryani, A. S., 2017, Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Etanol Bunga Brokoli (Brassica oleracea L. Var Italica) dengan Metode
DPPH (2,2-difenil- 1- pikrihidrazil), Prosiding Seminar Nasional Fakultas
Teknik UNIFA, Makassar.
Riwidikdo, H., 2013, Statistik Kesehatan dengan Aplikasi SPSS dalam Prosedur
Penelitian, Rohima Press, Yogyakarta.
Salampe, M., Rahma, Z., Nur, S., dan Mamada, S. S., 2019, AktivitasAntioksidan
Ekstrak Etanol Daun Beroma (Cajanus cajan (L)Mips),Original Article,
23(1) : 29 - 31.
Sami, F. J., Nur, S., Sapra, A., dan Libertin., 2020, Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Lamun (Enhalus acoroides) Asal Pulau Lae – Lae Makassar Terhadap
Radikal ABTS, Media Kesehatan Politeknik Kesehatan Makassar, 15 (2).
Sari, M., Ulfa, R.N., Marpaung, M.P., dan Purnama, 2021, Penentuan Aktivitas
Antioksidan dan Kandungan Flavonoid Total Ekstrak Daun Papasan
(Coccinia grandis L.) Berdasarkan Perbedaan Pelarut Polar, Jurnal Riset
Kimia, 7 (1) : 30 – 41.
Sayuti, K., dan Yenrina, R., 2015, Antioksidan Alami dan Sintetik, Andalas
University Press, Padang.
Sethyana, F., 2023, Perbandingan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Daun
Pandan Wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb.) Hasil Maserasi dan
Soklet,Skripsi, Universitas Wahid Hasyim, Semarang.
Setiawan, F., Yunita, O dan Kurniawan, A., 2018, Uji Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Etanol Kayu Secang (Caesalpinia sappan) Menggunakan Metode
DPPH,ABTS, dan FRAP, Media pharmaceutica Indonesia, 2(2):82-89.
Sharma, R., Chandan, G., Chahai, A., dan Sani, R. V., 2017, Antioxidant And
Anticancer Activity Of Methanolic Extract From Stephaniaelegans,
54
International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 9 (2) :
245-249.
Simamora, A. C. Y., Yusasrini, N. L. A., dan Putra, I. N. K., 2021, Pengaruh Jenis
Pelarut Terhadap Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Tenggulun
(Protium javanicum Burm. F) Menggunakan Metode Maserasi, Jurnal
Ilmu dan Teknologi Pangan, 10 (4) : 681-689.
Sudarmadji, S., Haryono, B., dan Suhardi., 1997, Prosedur Analisis untuk Bahan
Makanan dan Pertanian, Penerbit Liberti, Yogyakarta.
Sudarwati, T. P. L., dan Fernanda, M. A. H. F., 2019, Aplikasi Pemanfaatan Daun
Pepaya (Carica Papaya) Sebagai Biolarvasida Terhadap Larva Aedes
aegypti, Penerbit Graniti,Gresik.
Suhartati, T., 2017, Dasar-Dasar Spektrofotometri Uv-Vis Dan Spektrometri
Massa Untuk Penentuan Struktur Senyawa Organik, Penerbit Aura,
Bandar Lampung.
Suharyanto., dan Prima, D. A. N., 2020, Penetapan Kadar Flavonoid Total Pada
Juice DaunUbi Jalar Ungu (Ipomoea batatas L.) Yang BerpotensiSebagai
Hepatoprotektor Dengan Metodespektrofotometri Uv-Vis, Cendekia
Journal of Pharmacy, 4 (2) : 110-119.
Theafelicia, Z., dan Wulan, N.S., 2023, Perbandingan Berbagai Metode
PengujianAktivitas Antioksidan (DPPH, ABTS dan FRAP) pada The
Hitam (Camelliasinensis), Jurnal Teknologi Pertanian, 24(1): 35-44.
Treml, J., dan Smejkal, K., 2016, Flavonoids asPotent Scavengers of Hydroxyl
Radicals.Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, 15,
720-738.
Trilaksani W., 2003. Antioksidan: Jenis, Sumber, Mekanisme Kerja dan Peran
Terhadap Kesehatan. Disertasi S3, Institut Pertanian Bogor.
Tuszyńska,M.,2014, Validation Of The Analytical Method For The Determination
Of Flavonoids In Broccoli, Journal of Horticultural Research, 22(1): 131-
140
Van der Vossen, H. A. M,. 1993, Brassica oleracea L. cv. groups Caulliflower &
Broccoli. In Siemonsma, J.S. and Piluek, K. (editors): Plant Resources of
South-East Asia No.8 Vegetables, Pudoc Scientific Published,
Wageningen, the Netherlands, 111-115.
Vifta, R. L., Mafitasari, D., dan Rahman, E., 2020, Skrining Antioksidan Dan
Aktifitas Antidiabetes Ekstrak Terpurifikasi Etil Asetat Kopi Hijau
Arabika (Coffea arabica L.) Secara Spektrofotometri Uv-Vis, Jurnal
Zarah,8 (2) : 62-68.
Voight, R., 1995, Buku pelajaran teknologi farmasi, Penerjemah Soendari
Noerono, Gajah Mada University Press, Yogyakarta, 566- 567.
55
Wang, T. Y., Li, Q., Bi, K. S.,2018, Bioactive flavonoids In Medicinal Plants:
Structure, Activity And Biological Fateasian. Journal Of Pharmaceutical
Sciences, 13 : 12–23.
Yuslianti, E, R., 2018, Pengantar Radikal Bebas Dan Antioksidan, Depublish,
Yogyakarta.
56
LAMPIRAN
57
Lampiran 1. Hasil Determinasi Tanaman
58
Lampiran 1. Lanjutan...
59
Lampiran 1. Lanjutan....
60
Lampiran 2. Perhitungan Susut Pengeringan Daun Brokoli
Bobot awal daun brokoli : 7.100 gram

Bobot akhir daun brokoli : 960 gram
Bobot awal−Bobot akhir
Susut pengeringan : x 100%
Bobot awal
𝟕.𝟏𝟎𝟎 𝐠𝐫𝐚𝐦− 𝟗𝟔𝟎 𝐠𝐫𝐚𝐦
Susut pengeringan : x 100% = 86,48%
𝟕.𝟏𝟎𝟎 𝐠𝐫𝐚𝐦
Lampiran 3. Perhitungan Rendemen Ekstrak Daun Brokoli
Bobot ekstrak kental

Rumus rendemen ekstrak : x 100%
Bobot serbuk simplisia
5,55 gram
Rendemen ekstrak N-Hexan : x 100% = 5,55%
100 gram
6,65 gram
Rendemen ekstrak Etil Asetat : x 100% = 6,65%
100 gram
14,68 gram
Rendemen ekstrak Etanol 96%: x 100% = 14,68%
100 gram
22,25 gram
Rendemen ekstrak Etanol 70%: x 100% = 22,25%
100 gram
15,85 gram
Rendemen ekstrak Metanol: x 100% = 15,85%
100 gram
61
Lampiran 4. Perhitungan IC50 Trolox
Seri Nilai Rerata

Abs Abs % Persamaan
Rep konsentrasi IC50 IC50±
(μg/mL) (ppm) SD
5 0,783 12,22
a = -3,946
10 0,668 25,11
b = 2,950
15 0,539 39,57 18,287
r = 0,992
1 20 0,892 0,426 52,24
25 0,246 72,42
5 0,771 13,57
18,579
10 0,676 24,22 a = -2,253
±
15 0,534 40,13 b = 2,809 18,602
0,2819
2 20 0,892 0,435 51,23 r = 0,990
25 0,265 70,29
5 0,786 11,88
10 0,66 26,01
a = -1,760
15 0,54 39,46 18,849
b = 2,746
3 20 0,892 0,423 52,58
0,292 67,26
r = 0,999
25
Keterangan:
Abs blanko (ABTS)– Abs Sampel
% AA = x 100%
Abs blanko (ABTS)
Regresi linier = seri konsentrasi sampel vs % inhibisi
IC50 = hasil nilai x, ketika y sama dengan 50
Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3

y = bx+a y = bx+a y = bx+a
y = 2,950x - 3,946 y = 2,809x - 2,253 y = 2,746x - 1,760
50 = 2,950x - 3,946 50 = 2,809x - 2,253 50 = 2,746x - 1,760
50+3,946 50+2,253 50+1,760
x = x = x =
2,950 2,809 2,746
x = 18,287 μg/mL x = 18,602 μg/mL x = 18,849 μg/mL
18,287 μg/mL+18,602 μg/mL+18,849 μg/mL

Rata-rata = = 18,579 μg/mL
3
62
Lampiran 5. Perhitungan IC50 Ekstrak N-heksan Daun Brokoli
Seri Nilai Rerata

Abs Abs % Persamaan
125 0,860 3,587

a = - 8,912
250 0,762 14,57
b = 0,097
375 0,892 0,642 28,03 607,340
r = 0,997
1 500 0,523 41,37
625 0,434 51,35
125 0,861 3,475
250 0,763 14,46 a = - 8,946 607,385
375 0,644 27,80 b = 0,097 607,691 ± 0,285
2 500 0,892 0,529 40,70 r = 0,998
625 0,436 51,12
125 0,858 3,811
250 0,751 15,81
a = - 8,284
375 0,647 27,47 607,125
b = 0,096
3 500 0,892 0,530 40,58
0,431
r = 0,999
625 51,68

y = 0,097x - 8,912 y = 0,097x - 8,946 y = 0,096x - 8,284
50 = = 0,097x - 8,912 50 = 0,097x - 8,946 50 = 0,096x - 8,284
50+ 8,912 50+ 8,946 50+ 8,284
x = x = x =
0,097 0,097 0,096
1607,340 μg/mLL+607,691 μg/mL+607,125 μg/m

3
63
Lanjutan Lampiran 5. Perhitungan IC50 Ekstrak Etil asetat Daun Brokoli
Seri Nilai Rerata

Abs Abs % Persamaan
125 0,849 4,821

a = -11,69
250 0,762 14,57
b = 0,110
375 0,892 0,671 24,78 560,818
r = 0,979
1 500 0,481 46,08
625 0,375 57,96
125 0,855 4,148
250 0,755 15,36 a = -12,78 560,719
375 0,689 22,76 b = 0,112 560,536 ± 0,159
2 500 0,892 0,485 45,63 r = 0,970
625 0,362 59,42
125 0,855 4,148
250 0,756 15,25 a = -12,81
375 0,692 22,42 b = 0,112 560,804
3 500 0,892 0,481 46,08 r = 0,967
625 0,365 59,08

y = 0,110x - 11,69 y = 0,097x - 8,946 y = 0,096x - 8,284
50 = 0,110x - 11,69 50 = 0,097x - 8,946 50 = 0,096x - 8,284
50+ 11,69 50+ 8,946 50+ 8,284
x = x = x =
0,110 0,097 0,096
x = 560,818μg/mL x = 560,536μg/mL x = 560,804μg/mL
560,818μg/mL+560,536 μg/mL+560,804 μg/mL

3
64
Lanjutan Lampiran 5. Perhitungan IC50 Ekstrak Etanol 96% Daun Brokoli
Seri Nilai Rerata

Abs Abs % Persamaan
50 0,728 18,39
a = 7,264
100 0,655 26,57
b = 0,196
150 0,892 0,583 34,64 218,041
r = 0,992
1 200 0,473 46,97
250 0,380 57,40
50 0,729 18,27
100 0,645 27,69 a = 7,634 217,705
150 0,585 34,42 b = 0,195 218,262 ± 0,400
2 200 0,892 0,472 47,09 r = 0,991
250 0,379 57,51
50 0,730 18,16
100 0,652 26,91 a = 7,309
150 0,583 34,64 b = 0,196 217,811
3 200 0,892 0,470 47,31 r = 0,993
250 0,382 57,17

y = 0,196x + 7,264 y = 0,195x + 7,634 y = 0,196x + 7,309
50 = 0,196x + 7,264 50 = 0,195x + 7,634 50 = 0,196x + 7,309
50−7,264 50−7,634 50−7,309
x = x = x =
0,196 0,195 0,196
218,041μg/mL+218,262μg/mL+217,811 μg/mL
Rata-rata = = 217,705μg/mL
3
65
Lanjutan Lampiran 5. Perhitungan IC50 Ekstrak Etanol 70% Daun Brokoli
Seri Nilai Rerata

Abs Abs % Persamaan
50 0,653 27,13
a = 15,83
100 0,539 39,57
b = 0,228
150 0,892 0,454 49,22 149,868
r = 0,998
1 200 0,349 60,87
250 0,236 73,54
50 0,674 24,44
100 0,557 37,56 a = 13,41 150,032
150 0,424 52,47 b = 0,243 150,576 ± 0,483
2 200 0,892 0,334 62,56 r = 0,993
250 0,242 72,87
50 0,657 26,35
100 0,546 38,79 a = 15,58
150 0,442 50,45 b = 0,23 149,652
0,892
3 200 0,328 63,23 r = 0,995
250 0,253 71,64

y = 0,228x + 15,83 y = 0,243x + 13,41 y = 0,23x + 15,58
50 = 0,228x + 15,83 50 = 0,243x + 13,41 50 = 0,23x + 15,58
50−15,83 50−13,41 50−15,58
x = x = x =
0,228 0,243 0,23
149,868 μg/mL+150,576 μg/mL+149,6521 μg/mL

3
66
Lanjutan Lampiran 5. Perhitungan IC50 Ekstrak Metanol Daun Brokoli
Seri Nilai Rerata

Abs Abs % Persamaan
50 0,812 8,969
a = - 1,984
100 0,725 18,72
b = 0,214
150 0,892 0,622 30,27 242,916
r = 0,997
1 200 0,516 42,15
250 0,438 50,90
50 0,805 9,753
100 0,731 18,05 a = - 1,345 243,104
150 0,615 31,05 b = 0,211 243,341 ± 0,216
2 200 0,892 0,509 42,94 r = 0,991
250 0,444 50,22
50 0,808 9,417
100 0,726 18,61 a = - 1,771
150 0,624 30,04 b = 0,213 243,056
0,892
3 200 0,512 42,60 r = 0,996
250 0,438 50,90

y = 0,214x – 1,984 y = 0,211x – 1,345 y = 0,213x – 1,771
50 = 0,214x – 1,984 50 = 0,211x – 1,345 50 = 0,213x – 1,771
50+1,984 50+1,345 50+1,771
x = x = x = x =
0,214 0,211 0,213
x =242,916 μg/mL 243,341 μg/mL x = 243,056 μg/mL
242,916 μg/mL+1243,341 μg/mL+243,056 μg/mL

3
67
Lampiran 6. Hasil Analisis Statistik Aktivitas Antioksidan
a. Uji statistik Normalitas
Tests of Normality
Pelarut Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic Df Sig. Statistic df Sig.
N-heksan .230 3 . .981 3 .737
Etil Asetat .370 3 . .787 3 .084
Antioksidan Etanol 96% .176 3 . 1.000 3 .978
Etanol 70% .304 3 . .907 3 .409
Metanol .255 3 . .963 3 .629
a. Lilliefors Significance Correction
b. Uji homogenitas
Test of Homogeneity of Variances

Antioksidan
Levene Statistic df1 df2 Sig.
1.673 4 10 .232
c. Uji one-way anova
ANOVA
Antioksidan
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 537922.864 4 134480.716 1528390.268 .000

Within Groups .880 10 .088
Total 537923.744 14
68
d. Uji Tukey’s Honestly Significant Difference (HSD)
Lampiran 7. Perhitungan Penetapan Kadar Flavonoid Total EDB

a. Kurva baku kuersetin
Sampel Konsentrasi Absorbansi (y) Persamaan regresi
(μg/mL) (x)
2 0,214
4 0,315 y = 0,051 x + 0,112
Kuersetin 6 0,428 r = 0,999
8 0,532
10 0,630
12 0,729
69
b. Perhitungan kadar flavonoid total
 Ekstrak n-heksan daun brokoli
y = bx + a y = bx + a y = bx + a
0,218 = 0,051 x + 0,112 0,237 = 0,051 x + 0,112 0,228 = 0,051 x + 0,112
x = 2,078 μg/mL x = 2,451μg/mL x = 2,274μg/mL
𝐗 ×𝐅𝐩×𝐕 𝐗 ×𝐅𝐩×𝐕 𝐗 ×𝐅𝐩×𝐕
Kadar = (𝐠𝐫𝐚𝐦)× Kadar = (𝐠𝐫𝐚𝐦)× Kadar = (𝐠𝐫𝐚𝐦)×
𝟏𝟎𝟎𝟎 (𝐦𝐠/𝐠𝐫𝐚𝐦) 𝟏𝟎𝟎𝟎 (𝐦𝐠/𝐠𝐫𝐚𝐦) 𝟏𝟎𝟎𝟎 (𝐦𝐠/𝐠𝐫𝐚𝐦)
𝟐,𝟎𝟕𝟖 ×𝟏×𝟏𝟎𝟎 𝟐,𝟒𝟓𝟏 ×𝟏×𝟏𝟎𝟎 𝟐,𝟐𝟕𝟒 ×𝟏×𝟏𝟎𝟎
= = =
𝟏 𝐠 × 𝟏𝟎𝟎𝟎 (𝐦𝐠/𝐠𝐫𝐚𝐦) 𝟏 𝐠 × 𝟏𝟎𝟎𝟎 (𝐦𝐠/𝐠𝐫𝐚𝐦) 𝟏 𝐠 × 𝟏𝟎𝟎𝟎 (𝐦𝐠/𝐠𝐫𝐚𝐦)
= 0,208 mg/gram = 0,245 mg/gram = 0,227 mg/gram
0,208 + 0,245 + 0,227 mg/gram

Rata-rata = = 0,227 mg/gram ekstrak.
3
 Ekstrak etil asetat daun brokoli

y = bx + a y = bx + a y = bx + a
0,305 = 0,051 x + 0,112 0,312 = 0,051 x + 0,112 0,315 = 0,051 x + 0,112

𝟑,𝟕𝟖𝟒×𝟏×𝟏𝟎𝟎 𝟑,𝟗𝟐𝟏×𝟏×𝟏𝟎𝟎 𝟑,𝟗𝟖𝟎×𝟏×𝟏𝟎𝟎
= = =
𝟎,𝟑𝟕𝟖 + 𝟎,𝟑𝟗𝟐 + 𝟎,𝟑𝟗𝟖 𝐦𝐠/𝐠𝐫𝐚𝐦

Rata-rata = = 0,389 mg/gram ekstrak.
𝟑
 Ekstrak etanol 96% daun brokoli

y = bx + a y = bx + a y = bx + a
0,513 = 0,051 x + 0,112 0,518 = 0,051 x + 0,112 0,516 = 0,051 x + 0,112

𝟕,𝟖𝟔𝟑×𝟓×𝟏𝟎𝟎 𝟕,𝟗𝟔𝟏×𝟓×𝟏𝟎𝟎 𝟕,𝟗𝟐𝟏×𝟓×𝟏𝟎𝟎
= = =
3,931 + 3,980 + 3,960 mg/gram

Rata-rata = = 3,957mg/gram ekstrak.
3
70
 Ekstrak etanol 70% daun brokoli
y = bx + a y = bx + a y = bx + a
0,602 = 0,051 x + 0,112 0,619 = 0,051 x + 0,112 0,593 = 0,051 x + 0,112
x = 9,608 μg/mL x = 9,941 μg/mL x = 9,431μg/mL

𝟗,𝟔𝟎𝟖×𝟓×𝟏𝟎𝟎 𝟗,𝟗𝟒𝟏×𝟓×𝟏𝟎𝟎 𝟗,𝟒𝟑𝟏×𝟓×𝟏𝟎𝟎
= = =
4,804 + 4,970 + 4,715 mg/gram

3
 Ekstrak metanol daun brokoli

y = bx + a y = bx + a y = bx + a
0,475 = 0,051 x + 0,112 0,469 = 0,051 x + 0,112 0,482 = 0,051 x + 0,112
x = 7,118μg/mL x = 7μg/mL x = 7,255μg/mL

𝟕,𝟏𝟏𝟖×𝟓×𝟏𝟎𝟎 𝟕×𝟓×𝟏𝟎𝟎 𝟕,𝟐𝟓𝟓×𝟓×𝟏𝟎𝟎
= = =
3,559 + 3,5 + 3,627 mg/gram

3
71
Lampiran 8. Hasil Analisis Statistik Kadar Flavonoid Total
a. Uji normalitas
Tests of Normality
Pelarut Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
N-heksan .177 3 . 1.000 3 .970
Etil Asetat .269 3 . .949 3 .567
Kadar_Flavonoid Etanol 96% .215 3 . .989 3 .798
Etanol 70% .245 3 . .971 3 .670
Metanol .185 3 . .998 3 .922
a. Lilliefors Significance Correction
b. Uji homogenitas
Test of Homogeneity of Variances

KadarFlavonoid
Levene Statistic df1 df2 Sig.
3.708 4 10 .042
c. Uji Kruskal-Wallis
Test Statisticsa,b
Kadar
Flavonoid
Chi-Square 13.500
Df 4
Asymp. Sig. .009
a. Kruskal Wallis Test

b. Grouping Variable: Pelarut
72
d. Uji Mann-Whitney
N-Heksan vs Etil Asetat N-Heksan vs Etanol 96%

Test Statisticsa Test Statisticsa
Kadar Kadar
Flavonoid Flavonoid
Mann-Whitney U .000 Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 6.000 Wilcoxon W 6.000
Z -1.964 Z -1.964
Asymp. Sig. (2-tailed) .050 Asymp. Sig. (2-tailed) .050
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .100b Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .100b
a. Grouping Variable: Pelarut a. Grouping Variable: Pelarut

b. Not corrected for ties. b. Not corrected for ties.
N-Heksan vs Etanol 70% N-Heksan vs Metanol

Kadar Kadar
Flavonoid Flavonoid

Z -1.964 Z -1.964

Etil Asetat vs Etanol 96% Etil Asetat vs Etanol 70%

a
Test Statistics Test Statisticsa
Kadar Kadar
Flavonoid Flavonoid

Z -1.964 Z -1.964

73
Etil Asetat vs Metanol Etanol 96% vs Etanol 70%
Kadar Kadar
Flavonoid Flavonoid

Z -1.964 Z -1.964

Etanol 96% vs Metanol Etanol 70% vs Metanol

a
Test Statistics Test Statisticsa
Kadar Kadar
Flavonoid Flavonoid

Z -1.964 Z -1.964

74
Lampiran 9. Certificate Of Analysis ABTS
75
Lampiran 10. Certificate Of Analysis Trolox
76
Lampiran 11. Certificate Of Analysis Kalium Persulfate
77
Lampiran 12. Data Penimbangan Bahan Dan Pembuatan Uji Antioksidan
1. Data perhitungan Larutan ABTS dan Kalium Persulfat
a. Perhitungan larutan ABTS 7,4 mM
Molaritas ABTS yang dibutuhkan 7,4 mM = 7,4 x 10 -3 M
BM ABTS = 548,7 gram/mol
Volume Larutan = 50 mL
Penimbangan ABTS = BM ABTS x Vol. Larutan x Molaritas ABTS
=548,7 gram/mol x 0,05 L x 7,4 x 10-3 M
= 203,019 x 10-3 M
= 203,019 mg
b. Penimbangan serbuk ABTS
Keterangan Hasil penimbangan
Berat kaca kosong 13159,34 mg
Berat kaca + bahan 13362,58 mg
Berat kaca + sisa 13159,56 mg
Berat bahan 203,02 mg
c. Perhitungan larutan Kalium Persulfat (K 2S2O8 ) 2,46 mM
Molaritas K2 S2O8 yang dibutuhkan 2,46 mM = 2,46 x 10 -3 M
BM K2 S2O8 = 270,309 gram/mol
Volume Larutan = 250 mL
Perhitungan K2S2O8 = BM K2S2O8 x Vol. Larutan x Molaritas K2S2O8
= 270,309 gram/mol x 0,25 L x 2,46 x 10-3 M
= 166,240 x 10-3 M
= 166,240 mg
d. Penimbangan Serbuk Kalium Persulfat (K2S2O8) 2,46 mM
Berat bahan 166,72 mg
2. Penimbangan dan pembuatan larutan ekstrak daun brokoli

1. Penimbangan bahan esktrak daun brokoli
a. Ekstrak N-hexan daun brokoli
Replikasi 1
Berat beker kosong 35961,16 mg
Berat beker + ekstrak 35971,84 mg
Berat beker + sisa 35961,84 mg
Berat ekstrak 10 mg
78
Replikasi 2
Berat ekstrak 10,08 mg
Replikasi 3
b. Ekstrak etil asetat daun brokoli

Replikasi 1
Replikasi 2
Replikasi 3
c. Ekstrak Etanol 96% daun brokoli

Replikasi 1
79
Replikasi 2
Berat ekstrak 10 mg
Replikasi 3
d. Ekstrak Etanol 70% daun brokoli

Replikasi 1
Replikasi 2
Replikasi 3
e. Ekstrak Metanol daun brokoli

Replikasi 1
80
Replikasi 2
Replikasi 3
2. Pembuatan larutan stok ekstrak daun brokoli

a. Larutan stok ekstrak N-heksan daun brokoli
Replikasi 1
10 mg 10.000 μg
Larutan stok ekstrak N-heksan = = = 1.000 ppm
10 mL 10 mL
Replikasi 2
10 mg 10.000 μg
10 mL 10 mL
Replikasi 3
10 mg 10.000 μg
Larutan stok ekstrak N-heksan = = 1.000 ppm
10 mL 10 mL
b. Larutan stok ekstrak Etil asetat daun brokoli
Replikasi 1
10 mg 10.000 μg
Larutan stok ekstrak Etil asetat = = = 1.000 ppm
10 mL 10 mL
Replikasi 2
10 mg 10.000 μg
10 mL 10 mL
Replikasi 3
10 mg 10.000 μg
10 mL 10 mL
c. Larutan stok ekstrak Etanol 96% daun brokoli

Replikasi 1
10 mg 10.000 μg
Larutan stok ekstrak Etanol 96% = = = 1.000 ppm
10 mL 10 mL
Replikasi 2
10 mg 10.000 μg
Larutan stok ekstrak Etanol 96% = = 1.000 ppm
10 mL 10 mL
Replikasi 3
10 mg 10.000 μg
10 mL 10 mL
81
d. Larutan stok ekstrak Etanol 70% daun brokoli
Replikasi 1
10 mg 10.000 μg
10 mL 10 mL
Replikasi 2
10 mg 10.000 μg
10 mL 10 mL
Replikasi 3
10 mg 10.000 μg
10 mL 10 mL
e. Larutan stok ekstrak Metanol daun brokoli

Replikasi 1
10 mg 10.000 μg
Larutan stok ekstrak Metanol = = 1.000 ppm
10 mL 10 mL
Replikasi 2
10 mg 10.000 μg
Larutan stok ekstrak Metanol = = = 1.000 ppm
10 mL 10 mL
Replikasi 3
10 mg 10.000 μg
Larutan stok ekstrak Metanol = = 1.000 ppm
10 mL 10 mL
3. Pembuatan seri konsentrasi larutan ekstrak

1. Seri konsentrasi sampel n- hexan
125 ppm = V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 125 ppm
5 mL x 125 ppm
= V1 = = 0,625mL→ 625 μL
1.000 ppm
250 ppm = V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 250 ppm
5 mL x250 ppm
= V1 = =1,25mL → 1.250 μL
1.000 ppm
375 ppm = V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 375 ppm
5 mL x 375 ppm
= V1 = =1,87mL → 1.870 μL
1.000 ppm
500 ppm = V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 500 ppm
5 mL x500ppm
= V1 = =2,5mL → 2.500 μL
1.000 ppm
625 ppm = V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 625 ppm
5 mL x 625ppm
= V1 = = 3,12mL → 3.120 μL
1.000 ppm
2. Seri konsentrasi sampel etil asetat
125 ppm = V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 125 ppm
82
5 mL x 125 ppm
= V1 = = 0,625mL→ 625 μL
1.000 ppm
250 ppm = V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 250 ppm
5 mL x250 ppm
= V1 = =1,25mL → 1.250 μL
1.000 ppm
375 ppm = V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 375 ppm
5 mL x 375 ppm
= V1 = =1,87mL → 1.870 μL
1.000 ppm
500 ppm = V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 500 ppm
5 mL x500ppm
= V1 = =2,5mL → 2.500 μL
1.000 ppm
625 ppm = V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 625 ppm
5 mL x 625ppm
= V1 = = 3,12mL → 3.120 μ
1.000 ppm
3. Seri konsentrasi sampel etanol 96%
50 ppm = V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 50 ppm
5 mL x 50 ppm
= V1 = =0,25mL → 250 μL
1.000 ppm
100 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 100 ppm
5 mL x 100 ppm
= V1 = =0,5 → 500 μL
1.000 ppm
150 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 150 ppm
5 mL x 150 ppm
= V1 = =0,75mL → 750 μL
1.000 ppm
200 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 200 ppm
5 mL x200 ppm
= V1 = =1mL → 1.000 μL
1.000 ppm
250 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 250 ppm
5 mL x 250 ppm
= V1 = =1,25mL → 1.250 μL
1.000 ppm
4. Seri konsentrasi sampel etanol 70%
50 ppm = V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 50 ppm
5 mL x 50 ppm
= V1 = =0,25mL → 250 μL
1.000 ppm
100 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 100 ppm
5 mL x 100 ppm
= V1 = =0,5 → 500 μL
1.000 ppm
83
150 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 150 ppm
5 mL x 150 ppm
= V1 = =0,75mL → 750 μL
1.000 ppm
200 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 200 ppm
5 mL x200 ppm
= V1 = =1mL → 1.000 μL
1.000 ppm
250 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 250 ppm
5 mL x 250 ppm
= V1 = =1,25mL → 1.250 μL
1.000 ppm
5. Seri konsentrasi sampel metanol
50 ppm = V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 50 ppm
5 mL x 50 ppm
= V1 = =0,25mL → 250 μL
1.000 ppm
100 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 100 ppm
5 mL x 100 ppm
= V1 = =0,5 → 500 μL
1.000 ppm
150 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 150 ppm
5 mL x 150 ppm
= V1 = =0,75mL → 750 μL
1.000 ppm
200 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 200 ppm
5 mL x200 ppm
= V1 = =1mL → 1.000 μL
1.000 ppm
250 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 250 ppm
5 mL x 250 ppm
= V1 = =1,25mL → 1.250 μL
1.000 ppm
4. Penimbangan dan pembuatan larutan induk trolox
a. Penimbangan trolox
Replikasi 1
Berat bahan 10,3 mg
84
Replikasi 2
Berat bahan 10,5 mg
Replikasi 3
Berat kaca + sisa 7893, 60 mg
Berat bahan 10,2 mg
b. Pembuatan larutan induk trolox 1.000 ppm dalam 10 mL

10 mg 10.000 μg
Trolox = = = 1.000 ppm
10 mL 10 mL
c. Seri konsentrasi larutan induk trolox
5 ppm = V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 5 ppm
5 mL x 5 ppm
= V1 = = 0,025 mL → 25 μL
1.000 ppm
10 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 10 ppm
5 mL x 10 ppm
= V1 = = 0,05 mL → 50 μL
1.000 ppm
15 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 15 ppm
5 mL x15 ppm
= V1 = = 0,075 mL → 75 μL
1.000 ppm
20 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 20 ppm
5 mL x 20 ppm
= V1 = = 0,1 mL → 100 μL
1.000 ppm
25 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 1.000 ppm = 5 mL x 25 ppm
5 mL x 25 ppm
= V1 = 0,125 mL → 125 μL
1.000 ppm
85
Lampiran 13. Panjang Gelombang Maksimum ABTS
Lampiran 14. Operating time ABTS
86
Lampiran 15. Trolox 1, 2 dan 3
87
Lampiran 16. Ekstrak N-Heksan Daun Brokoli 1, 2 dan 3
88
89
Lampiran 17. Ekstrak Etil Asetat Daun Brokoli 1, 2 dan 3
90
Lampiran 18. EkstrakEtanol 96% Daun Brokoli 1, 2 dan 3
91
92
Lampiran 19. Ekstrak Etanol 70% Daun Brokoli 1, 2 dan 3
93
Lampiran 20. Ekstrak Metanol Daun Brokoli 1, 2 dan 3
94
95
Lampiran 21. Data Penimbangan Bahan Dan Pembuatan Larutan
Penetapan Kadar Flavonoid.
1. Penimbangan serbuk dan pembuatan larutan alumunium klorida
(AlCl3) dan kalium asetat (CH 3COOK)
a. Penimbangan serbuk alumunium klorida (AlCl3)
Berat bahan 2.500 mg
b. Pembuatan larutan alumunium klorida (AlCl3)

2.500 mg 2.500.000 μg
AlCl3 = = = 100.000 ppm
25 mL 25 mL
c. Penimbangan serbuk kalium asetat (CH 3COOK)
Berat bahan 2.500 mg
d. Pembuatan larutan kalium asetat (CH3COOK)

2.500 mg 2.500.000 μg
CH3COOK = = = 100.000 ppm
25 mL 25 mL
2. Penimbangan dan pembuatan larutan induk kuersetin

a. Penimbangan kuersetin
Replikasi 1
Berat bahan 10,3 mg
Replikasi 2
Berat bahan 10 mg
96
Replikasi 3
Berat bahan 10,8 mg
b. Pembuatan larutan induk kuersetin 400 ppm dalam 25 mL

10 mg 10.000 μg
Kuersetin = = = 400 ppm
25 mL 25 mL
c. Seri konsentrasi kuersetin
2 ppm = V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 400 ppm = 5 mL x 2 ppm
5 mL x 2 ppm
= V1 = = 0,025 mL → 25 μL
400 ppm
4 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 400ppm = 5 mL x 4 ppm
5 mL x 4 ppm
= V1 = = 0,05 mL → 50 μL
400ppm
6 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 400ppm = 5 mL x 6 ppm
5 mL x 6 ppm
= V1 = = 0,075 mL → 75 μL
400ppm
8 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 400ppm = 5 mL x 8 ppm
5 mL x 8 ppm
= V1 = = 0,1 mL → 100 μL
400ppm
10 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 400 ppm = 5 mL x 10 ppm
5 mL x 10 ppm
= V1 = 0,125 mL → 125 μL
400ppm
12 ppm =V1 x M1 = V2 x M2
= V1 x 400ppm = 5 mL x 12 ppm
5 mL x 12 ppm
= V1 = 0,15 mL → 150 μL
400ppm
3. Pembuatan larutan stok sampel 10.000 ppm dalam 100 mL

a. Larutan stok ekstrak N-heksan daun brokoli
1000 mg 1.000.000 μg
100 mL 100 mL
b. Larutan stok ekstrak Etil asetat daun brokoli
1000 mg 1.000.000 μg
100 mL 100 mL
c. Larutan stok ekstrak Etanol 96% daun brokoli
1000 mg 1.000.000 μg
100 mL 100 mL
97
d. Larutan stok ekstrak Etanol 70% daun brokoli
1000 mg 1.000.000 μg
100 mL 100 mL
e. Larutan stok ekstrak Metanol daun brokoli
1000 mg 1.000.000 μg
Larutan stok ekstrak Metanol = = = 10.000 ppm.
100 mL 100 mL
98
Lampiran 22. Panjang Gelombang Maksimum Kuersetin
Lampiran 23. Operating Time Kuersetin
99
Lampiran 24. Kurva Baku Kuersetin 1, 2 dan 3
100
Lampiran 25. Penetapan Kadar Flavonoid Total Ekstrak Daun Brokoli
101
102
Lampiran 26. Dokumentasi Penelitian
Dokumentasi Penelitian
Pengumpulan Proses Sortasi Penimbangan Pencucian Bahan

Bahan Bahan Bahan
Penirisan Bahan PengeringanBahan Cek Kadar Air Penyerbukan
Serbuk Daun Penimbangan Proses Maserasi Penyaringan

Brokoli Maserasi Maserasi
103
Hasil Maserat Rotary Evaporator Ekstrak Kental Penimbangan
Trolox
Larutan Trolox Seri Konsentrasi Penimbangan Penimbangan

Trolox Bahan Kalium Serbuk ABTS
Persulfat
Larutan ABTS Penimbangan Proses Magnetic Proses

Sampel Uji Stirer Penyaringan
Antioksidan Sampel
104
Larutan Stok Seri Konsentrasi Penimbangan Larutan Stok
Sampel Sampel Bahan AlCl3 AlCl3
Antioksidan
Penimbangan Larutan Stok Penimbangan Larutan Stok

Bahan Kalium Kalium Asetat Bahan Kuersetin Kuersetin
Asetat
Seri Konsentrasi Kurva Baku Penimbangan Larutan Stok

Kuersetin Kuersetin Sampel Penetapan Sampel Penetapan
Kadar Flavonoid Kadar Flavonoid
105
Kurva Baku Penetapan Kadar Flavonoid Ekstrak Daun Brokoli
106

Skripsi Adila Oktaviani

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Skripsi Adila Oktaviani

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Aktivitas Antioksidan dan Kadar Flavonoid Total Pada Daun

Brokoli (Brassica oleracea L.var. italica) dengan Perbedaan

Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat

Aktivitas Antioksidan dan Kadar Flavonoid Total Pada Daun Brokoli

Radikal bebas yang berlebihan didalam tubuh dapat menyebabkan stres

Kata kunci: Antioksidan, Daun Brokoli,Brassica oleracea L.var.italica, Metode

Antioxidant Activity and Total Flavonoid Levels in Broccoli (Brassica oleracea

Keywords: Antioxidants, Broccoli Leaves, Brassica oleracea L.var.italica, ABTS

Aktivitas Antioksidan dan Kadar Flavonoid Total Pada Daun

Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi

(Dr. Anita Dwi Puspitasari, M. Pd.)

(Dr. apt. Maulita Cut Nuria, M. Sc.)

Yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : Adila Oktaviani

Brokoli (Brassica oleracea L.var. italica) dengan Perbedaan

yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan

Demikian surat pernyataan ini dibuat untuk dapat digunakan sebagaimana

Semarang,15 Januari 2024

“ Sesungguhnya dalam penciptaan langit dan bumi, dan silih

bergantinya malam dan siang terdapat tanda–tanda bagi orang yang

berakal.” (Q.S. Ali Imron ; 190)

limpahan nikmah, karunia dan rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi

teknologi seperti sekarang.

dengan Perbedaan Polaritas Pelarut.

karena itu, dalam kesempatan ini penulis menyampaikan ucapan terimakasih

Universitas Wahid Hasyim Semarang dan sebagai dosen penguji pertama

yang telah bersedia meluangkan waktunya untuk memberikan masukan dan

saran dalam menyusun skripsi.

bersedia meluangkan waktunya untuk bimbingan serta dukungan hingga

selesainya skripsi ini.

bersedia meluangkan waktunya untuk memberikan masukan, nasihat, saran

serta motivasi dalam proses penyusunan skripsi.

4. Seluruh dosen Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang yang

telah bersedia mengajarkan pengetahuan sebagai ilmu dasar dan melakukan

penelitian skripsi ini.

5. Seluruh staf Laboratorium Biologi Dan Kimia Farmasi Universitas Wahid

Hasyim Semarang yang telah mengizinkan dan membantu penulis untuk

melakukan penelitian dilaboratorium.

waktunya untuk support system dalam penulisan skripsi ini.

tulus untuk berjuang menyelesaikan skripsi ini hingga tuntas.

Penulis menyadari bahwa dalam menyusun skripsi ini masih terdapat

kemmpuan penulis. Akhir kata, dengan segala kerendahan hati penulis

mengucapkan terimakasih. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat serta menambah

wawasan & ilmu pengetahuan bagi pembaca skripsi ini, Aamiin.

Semarang,15 Januari 2024

Tabel I. Rendemen ekstrak daun brokoli........................................................................ 33

Gambar 1. Tanaman Brokoli (Brassica Oleracea L. Var. Italica) ........................ 19

Lampiran 1. Hasil Determinasi Tanaman ................................................................58

Radikal bebas yang terlalu banyak didalam tubuh dapat menyebabkan

kerusakan oksidatif, sehingga menyebabkan terganggunya membran sel, protein

mengurangi efek negatif radikal bebas adalah antioksidan.

Antioksidan merupakan senyawa yang dapat meredam reaksi oksidasi,

dengan cara menyumbangkan satu atom hidrogennya kepada radikal bebas,

dan Yenrina, 2015). Berdasarkan sumbernya, antioksidan terbagi menjadi 2

disintesis secara kimia dan memiliki efek karsinogenik yang dapat

membahayakan kesehatan manusia. Contoh antioksidan sintetik yang umum

digunakan adalah Propil Galat (PG), Butylated Hydroxyanisole (BHA), Butylated

Hydroxytoluene (BHT), dan Tertbutyl Hydroquinone (TBHQ). Antioksidan alami

menjadi alternatif yang perlu dikembangkan, karena antioksidan alami tidak

memberikan efek samping seperti yang ditimbulkan oleh antioksidan sintetik

(Parwata, 2016). Sumber antioksidan alami biasanya berasal dari buah-buahan,

metabolit yangberpotensi tinggi sebagai antioksidan alami adalah flavonoid

(Sayuti dan Yenrina,2015).

Tanaman brokoli (Brassica oleracea L. var. italica) merupakan salah satu