Subscribe to DeepL Pro to translate larger documents.

Visit www.DeepL.com/pro for more information.

Animal (2020), 14:S1, hlm s103-s112 © Konsorsium Satwa 2020 hewan

doi:10.1017/S175173111900315X

Ulasan: Dampak lingkungan pada perkembangan embrio awal pada

spesies sapi
U. Besenfelder1,2,a†, G. Brem1 dan V. Havlicek1,2
1Departemen Ilmu Biomedis, Universitas Kedokteran Hewan, Veterinaerplatz 1, A-1210 Wina, Austria;2 Departemen Agrobioteknologi, IFA-Tulln,
Universitas Sumber Daya Alam dan Ilmu Pengetahuan Hayati, Konrad Lorenz Strasse 20, 3430 Tulln, Austria

(Diterima 1 April 2019; Diterima 18 Juni 2019)

Teknik reproduksi berbantuan (assisted reproduction techniques/ART) menyediakan akses ke embrio tahap awal yang analisis dan
penilaiannya memberikan informasi yang berharga. Penanganan embrio, termasuk produksi embrio sapi secara in vitro,
merupakan bidang yang berkembang pesat yang tetap mengekspos embrio pada kondisi yang tidak alami untuk jangka waktu
tertentu. Tuba Fallopi menyediakan faktor kuantitatif dan kualitatif yang tak terhitung banyaknya, yang semuanya menjamin
keberhasilan perkembangan embrio. Telah diketahui bahwa tuba falopi dapat dilewati, dengan menggunakan transfer embrio,
yang menghasilkan implantasi yang sukses pada hewan penerima target dan kelahiran anak sapi. Namun, muncul pertanyaan
apakah pengelakan tersebut memiliki dampak negatif pada embrio selama periode perkembangan yang sensitif ini. Crosstalk
pertama antara embrio dan lingkungannya mengkonfirmasi aktivitas pengenalan timbal balik dan mengindikasikan efek bilateral.
Saat ini, produksi embrio sapi secara in vitro merupakan teknologi yang mapan. Namun, masih terbukti bahwa embrio yang
dihasilkan secara in vitro tidak sebanding secara kualitatif dengan embrio yang diperoleh secara ex vivo. Untuk mengatasi perbedaan ini,
studi komparatif antara embrio in vitro dan ex vivo menguntungkan, karena embrio yang ditumbuhkan dalam lingkungan
fisiologisnya dapat memberikan
cetak biru atau standar emas untuk membandingkan embrio yang diproduksi secara in vitro. Upaya untuk memanfaatkan
saluran telur sapi terkadang sangat invasif dan tidak menghasilkan penerimaan yang luas dan penggunaan rutin. Sementara itu,
pengembangan jangka panjang dan penyempurnaan endoskopi transvaginal untuk mengakses saluran telur sapi telah
diterapkan secara rutin untuk penelitian dan juga praktik. Studi komparatif yang menggabungkan pengembangan in vitro dengan
pengembangan di saluran telur sapi mengungkapkan bahwa kondisi lingkungan yang terpapar pada embrio sebelum aktivasi
genom embrio dapat memiliki efek yang merugikan dan bertahan lama pada perkembangan selanjutnya. Efek-efek ini
dimanifestasikan sebagai penyimpangan dalam profil ekspresi gen dan tanda tangan metilasi serta frekuensi penyimpangan
kromosom utuh atau segmental. Selain itu, terbukti bahwa superstimulasi hormonal (ovulasi ganda dan transfer embrio), berbagai
konsentrasi progesteron serta gangguan metabolisme yang disebabkan oleh produksi ASI yang tinggi, secara nyata memengaruhi
perkembangan embrio pada periode pascapersalinan. Teknik reproduksi berbantuan yang memungkinkan produksi dan
penanganan embrio yang dihasilkan dalam jumlah yang lebih banyak menjanjikan dampak yang sangat tinggi pada aplikasi
ilmiah dan praktis. Setiap pengaruh pada awal kehidupan embrio, baik pada hewan maupun in vitro, disertai dengan perubahan
sensitif pada aktivitas embrio dan harus dinilai secara in vivo berdasarkan kondisi fisiologis sebelum digunakan untuk ART.

Kata kunci: perkembangan embrio, lingkungan, saluran telur, produksi in vitro, endoskopi

anak sapi yang sehat. Oleh karena itu, teknik-teknik telah

Implikasi
dikembangkan untuk mengakses saluran telur sapi untuk
melakukan
Pengumpulan embrio menggunakan beberapa ovulasi
aAlamat sekarang: Pusat Reproduksi Wieselburg, Universitas Kedokteran Hewan,
dan transfer embrio serta produksi embrio sapi secara A-1210 Wina, Austria.
in vitro telah menjadi bagian penting dalam pembiakan †
E-mail: urban.besenfelder@vetmeduni.ac.at
dan ilmu pengetahuan. Saluran telur menyediakan
berbagai prasyarat yang semuanya menjamin konsepsi
yang sehat, yang mampu berimplantasi dan menghasilkan
s103
studi in vivo v. in vitro yang sebanding dan untuk
memberikan lebih banyak informasi tentang
komponen dan perubahan dinamis dalam saluran telur
untuk meningkatkan pemahaman komprehensif kami
tentang perkembangan embrio awal dan masalah
kesuburan seperti kematian embrio dini.

Pendahuluan
Pemahaman yang komprehensif mengenai faktor-faktor
yang mendasari kesuburan sangat penting untuk
membuat kemajuan dalam ilmu pengetahuan dasar
serta pengembangan dan penerapannya.

s104
 Perkembangan embrio awal

menyajikan secara singkat kondisi perkembangan fisiologis

strategi pemuliaan yang baru. Istilah kesuburan
dalam tuba falopi untuk embrio sapi dan epitel serta
mencakup sejumlah besar faktor genetik dan pengaruh
interaksi embrio dan membandingkan perkembangan
lingkungan, yang berinteraksi dengan cara yang
embrio secara in vitro, di laboratorium atau in vivo, pada
kompleks. Meskipun saat ini telah tersedia banyak
hewan dan dalam kondisi laktasi dan substitusi hormon.
informasi rinci yang mengungkapkan wawasan mendalam
tentang proses individu, pemahaman umum tentang
hubungan tampaknya masih jauh. Dalam konteks ini,
beberapa hari pertama perkembangan merupakan
jendela kunci selama periode sensitif, ketika embrio
dihasilkan dan dipandu melintasi saluran telur yang
menentukan fase kehidupan selanjutnya.
Namun, perkembangan embrio awal ini bertentangan
dengan beberapa tujuan pembiakan sapi. Produksi susu
merupakan salah satu tujuan ekonomi utama dalam
pembiakan sapi modern. Selama beberapa dekade
terakhir, produksi susu sapi telah meningkat secara
signifikan dan manajemen kawanan sapi, termasuk
nutrisi hewan, merupakan tantangan besar yang pasti
mengarah pada gangguan metabolisme (Zebeli et al.,
2015). Sebaliknya, kinerja reproduksi hewan telah
memburuk. Salah satu kontributor terbesar terhadap efisiensi
reproduksi adalah kematian embrio dini. Peningkatan
kematian embrio pada hari-hari dan minggu-minggu pertama
tampaknya secara langsung terkait dengan peningkatan
kinerja pemerahan hewan perah (Diskin dan Morris, 2008;
Sartori et al., 2010).
Meskipun kemajuan yang signifikan telah dicapai oleh
industri sapi dan kesuburan telah terpengaruh secara
negatif, termasuk perkembangan embrio awal, pembuatan
dan pengumpulan embrio dari hewan yang bernilai
secara genetik sangat penting untuk tujuan pemuliaan,
seperti yang tercermin dalam statistik tahunan International
Embryo Technology Society (IETS) (Viana, 2018). Panen
tambahan embrio menggunakan pro- gram ovulasi ganda
dan transfer embrio (MOET) pada sapi menawarkan
platform yang luas untuk memperkenalkan langkah-
langkah pemuliaan yang berharga dan dengan demikian
secara signifikan mengendalikan efek pada kualitas dan
kemajuan pemuliaan. Dengan demikian, teknik
reproduksi berbantuan (assisted reproduction
techniques/ARTs) tidak hanya membuka aplikasi klasik
tetapi juga pendekatan inovatif seperti evaluasi nilai pemuliaan
genom dan penyuntingan genom (Cornelissen dkk., 2017; Fujii
dkk., 2017; Granleese dkk., 2018; Jaton dkk., 2018; Menchaca
dkk., 2018; Georges dkk., 2019). Karena pemulihan embrio
dengan cara superovulasi dikaitkan dengan keterbatasan,
secara signifikan lebih banyak embrio dapat disediakan dengan
pengembangan dan pembentukan produksi in vitro (Galli et
al., 2003). Statistik produksi embrio dari IETS 2017
menunjukkan untuk pertama kalinya bahwa lebih banyak
embrio dihasilkan dan ditransfer dari produksi in vitro di
seluruh dunia daripada dari program MOET (Viana, 2018).
Namun, harus ditekankan bahwa gamet dan
embrio terpapar pada kondisi spasial dan temporal yang
tidak alami dengan menggunakan teknik reproduksi
berbantuan, yang keberadaannya telah diketahui tetapi
tidak diketahui secara keseluruhan (Van Eetvelde et al.,
2017). Oleh karena itu, tinjauan ini bermaksud untuk
s105
Besenfelder, Brem dan Havlicek yang diarahkan oleh epigenetik
Sifat fisiologis saluran telur selama perkembangan
embrio
Saluran telur sapi adalah organ tubular memanjang
yang kecil dan tidak mencolok yang menghubungkan
ovarium dengan ujung tanduk uterus. Gamet memasuki
tuba falopi dari sisi yang berlawanan dan bertemu di
ampula, tempat pembuahan terjadi. Embrio sapi tinggal
di saluran telur selama 3,5 hingga 4 hari dan bermigrasi ke
ujung distal tanah genting sebelum masuk ke dalam rahim.
Struktur berlapis-lapis (serosa, muskula, dan mukosa) tuba
falopi bergantung pada bagian-bagiannya masing-masing:
infundibulum, ampula, dan tanah genting. Secara internal,
tuba Fallopi ditandai oleh tonjolan, alur, barisan bulu,
dan lipatan mukosa dalam berbagai tingkatan.
Sementara ampula memiliki banyak lipatan primer dan
sekunder yang dilengkapi dengan hubungan silang, tanah
genting hanya memiliki sedikit ketinggian yang
diberkahi dengan lapisan otot yang berbeda (Yaniz et
al., 2000; Mouguelar et al., 2015). Mukosa dilapisi
dengan sel-sel yang bersilia atau memiliki aktivitas
sekresi (Yaniz et al., 2000; Kölle et al., 2009).
Lapisan otot dengan lapisan memanjang dan melingkar di
Tuba Fallopii dan sel-sel bersilia dari epitel saluran telur
(Ruckebusch dan Bayard, 1975) memandikan embrio di
dalam cairan dan mengangkutnya ke arah ujung tanduk
uterus. Sel-sel sekretori terlibat dalam produksi aktif
cairan tuba yang dilengkapi dengan transudasi, cairan
peritoneum dan folikel (Hunter et al., 2007). Lumen
ampula secara signifikan lebih besar dan diisi dengan
cabang-cabang lipatan mukosa yang beraneka ragam,
sedangkan tanah genting dengan lumen yang sangat
kecil sebagian besar hanya terdiri dari lipatan primer.
Rasio sel bersilia dan sel sekretori bergantung pada
lokasi tuba serta tahap siklus ovarium. Dengan demikian,
pada hari ketiga siklus, ampula mengandung hampir 70%
sel sekretori, yang terus berkurang di sepanjang tuba
Fallopi dan hanya ada di ujung tanah genting sekitar
20% (Kölle et al., 2009). Saluran telur memasok substrat
biokimia (karbohidrat seperti substrat energi, ion, protein,
enzim, asam amino, asam lemak; Hugentobler et al.,
2010; Avilés et al., 2015) ke embrio, memberikan
persyaratan fisik (pH, viskositas, osmolaritas; Menezo dan
Guerin, 1997; Hunter et al, 2011) dan komponen dengan
fungsi modulasi atau interaksi (seperti faktor pertumbuhan,
sitokin, dan asam nukleat, ditinjau oleh Wolf et al., 2003), di
antaranya mikrovesikula yang sangat penting (Raposo dan
Stoorvogel, 2013; Lopera-Vasquez et al., 2017a; Almin˜
ana et al., 2018).
Berbeda dengan banyak kondisi kultur in vitro, yang
Biasanya berlangsung dalam kondisi statis selama 6
hingga 8 hari, semua proses dalam tuba falopi mengalami
perubahan dinamis yang sangat terkait dengan aktivitas
siklus ovarium seperti kecepatan transpor (Ruckebusch
dan Bayard, 1975; Bennett et al, 1988; Kölle et al.,
2009), volume cairan (Hugentobler et al., 2008),
konsentrasi komponen (Buhi et al., 2002; Hugentobler
et al., 2007; Avilés et al., 2010), dan profil ekspresi epitel
Fallopi ipsi- atau kontralateral (Bauersachs et al., 2004).
Saat embrio melewati saluran telur, mereka mengalami
peristiwa-peristiwa penting yang spesifik. Selama waktu ini,
s106
 Perkembangan embrio awal

penting dalam pembentukan dan pemeliharaan kebuntingan.

pemrograman ulang embrio terjadi (de- dan metilasi
Meskipun embrio yang diproduksi secara in vitro
ulang DNA embrio); dan pada tahap delapan sel, aktivasi
mengeluarkan
utama genom embrio dimulai. Embrio bermigrasi melalui
tuba falopi yang terdapat di dalam zona pellucida (ZP),
yaitu tidak terjadi perbanyakan sitoplasma, sitoplasma
dan juga organel-organel seperti mitokondria yang
didistribusikan secara merata ke blastosis. Sintesis de novo
mitokondria tidak terjadi sampai tahap blastosis (May-Panloup
et al., 2005; Graf et al., 2014).
Sistem in vitro untuk produksi embrio sapi bertujuan
untuk meniru fitur-fitur spesifik tuba Fallopi agar
berhasil mengelola tahap perkembangan di luar tubuh. Hal
ini menyebabkan berbagai jenis sistem kultur menggunakan
media standar, media yang dikondisikan (Maeda et al.,
1996) atau penambahan cairan dari darah atau tuba falopi
(Aguilar dan Reyley, 2005), sistem kultur co-cell dua atau
tiga dimensi (Goovaerts et al., 2009, Chen et al., 2017,
Ferraz et al., 2018), sistem mikrofluida (Beebe et al.,
2002) atau bahkan saluran telur tikus selama kultur in
vitro (Rizos et al., 2010b). Sementara itu, semua sistem
in vitro telah dikembangkan dan ditetapkan dalam jangka
waktu yang lama dan digunakan dengan sukses besar
melalui perbaikan yang berkelanjutan. Namun demikian,
masih terdapat perbedaan yang signifikan antara embrio
yang berasal dari in vitro dan in vivo (Gad et al., 2012;
Bonilla et al., 2014; Tšuiko et al., 2017). Selain itu, penelitian
menunjukkan bahwa penggunaan cairan saluran telur sapi
pada konsentrasi yang lebih tinggi (5%, 10% dan 25%) dalam
sistem kultur in vitro memberikan efek negatif pada
perkembangan embrio yang telah dinilai hampir beracun
(Lopera-Vasquez et al., 2017b). Sistem kultur in vivo
heterolog telah berhasil digunakan, tetapi tidak
memungkinkan untuk mempelajari interaksi langsung antara
embrio dengan lingkungannya (Lazzari et al., 2010).
Namun, perlu diingat bahwa efek jangka pendek seperti
keberhasilan kultur akan diikuti oleh efek jangka
panjang, yang konsekuensinya belum dapat
diperkirakan secara penuh (Duranthon dan Chavatte-
Palmer, 2018).
Tidak diragukan lagi, embrio dapat diproduksi tanpa
Selain itu, resipien yang menerima transfer embrio tidak
harus melakukan kontak sebelum transfer ke rahim. Namun,
untuk lebih memperhatikan periode ini dalam tuba falopi
dan pentingnya bagi perkembangan embrio, pertimbangan
berikut ini akan membahas interaksi langsung embrio
dengan lingkungan fisiologisnya, termasuk
penyimpangan.

Pertukaran sinyal antara embrio dan saluran telur pada

sapi Untuk waktu yang lama, tuba falopi telah diabaikan
peran dan fungsinya dalam embriogenesis, mungkin
karena keberhasilan teknologi reproduksi seperti MOET
dan produksi embrio sapi secara in vitro. Teknik-teknik ini
telah menunjukkan dengan jelas bahwa kehamilan dapat
terjadi tanpa keterlibatan tuba falopi (Leese et al., 2001,
Fazeli dan Holt, 2016). Namun, transfer embrio ini disertai
dengan kekurangan dalam kesuburan. Pada hewan
ruminansia, misalnya, interferon- τ memainkan peran
s105
 kelompok-kelompok tersebut, di mana 123 di antaranya
jumlah interferon,
Besenfelder, hasilHavlicek
Brem dan transfernya menghasilkan tingkat
diregulasi naik dan 155 diregulasi turun pada hewan hamil.
kehamilan yang lebih rendah (Stojkovic et al., 1995).
Sebagian besar gen
Namun, karena telah terbukti bahwa gangguan
perkembangan seperti sindrom keturunan besar dapat
terjadi melalui penggunaan ART (Young et al., 1998;
Lazzari et al., 2002), perkembangan embrio awal pada
saluran telur sapi telah mendapatkan lebih banyak
perhatian. Pada hewan non-ruminansia, saat ini
terdapat bukti kuat bahwa embrio dalam tuba falopi
menginduksi respons yang memediasi pengenalannya
setelah implantasi di dalam rahim (Weber et al., 1991;
Lee et al., 2002; Georgiou et al., 2005; Smits et al., 2016).
Contoh yang baik dari perjalanan wajib melalui tuba falopi
adalah embrio kelinci dan kelinci. Secara mikroskopis,
embrio-embrio ini dikelilingi oleh lapisan musin yang
menutupi ZP selama fase migrasi melalui saluran telur.
Ketiadaan atau kerusakan pada lapisan musin
mengakibatkan kurangnya atau rendahnya tingkat
kebuntingan (Murakami dan Imai, 1996; Drews et al.,
2013).
Berdasarkan profil ekspresi gen dari Fallopi
Bauersachs dkk. (2003 dan 2004) berhasil
menunjukkan bahwa ketika mekanisme saluran telur
diinduksi, mereka mempersiapkan dan menentukan periode
pasca-ovulasi dan mengatur perkembangan embrio awal
melalui modifikasi lokal profil transkripsi tergantung pada
siklus ovarium. Perbedaan antara sisi ipsi dan kontralateral
diamati.
García dkk. (2017) menggunakan model in vitro
untuk menghubungkan proses pada sel epitel saluran
telur sapi dengan tahap perkembangan embrio. Untuk itu,
sel epitel tuba dikultur secara in vitro dan ditutup dengan
anyaman jaring poli ester yang memiliki ukuran kisi-kisi 41
× 41 bukaan. Embrio dipindahkan ke jaring dan
ditempatkan secara individual dalam kisi-kisi, yang
membuat embrio tetap melekat secara lokal pada sel
ko-kultur. Hal ini dapat ditunjukkan melalui jalur protein
morfogenetik tulang bahwa perubahan profil ekspresi
diinduksi melalui interaksi embrio-oviduk baik di dalam
embrio maupun di dalam sel epitel (García et al., 2017).
Maillo dkk. (2016) mempelajari transkriptom saluran
telur sapi. Setengah dari hewan yang disinkronisasi
diinseminasi pada saat berahi dan setengahnya lagi tidak
diinseminasi. Pada hari ke-3 setelah birahi, hewan-hewan
tersebut disembelih dan tuba falopi diangkat. Tanah
genting dibilas untuk memastikan keberadaan embrio atau
sel telur. Studi ekspresi dengan jelas menunjukkan perbedaan
antara ampula dan tanah genting dan antara sisi ipsilateral
dan kontralateral. Namun, tidak ada perbedaan yang
ditemukan antara tuba falopi yang mengandung embrio
tunggal atau oosit yang tidak dibuahi. Para penulis tidak
mengesampingkan potensi adanya perubahan epitel yang
diinduksi oleh embrio lokal, yang tidak dapat dideteksi
dalam percobaan ini (Maillo et al., 2016).
Dalam penelitian lebih lanjut, 50 embrio ditransfer
secara endoskopi ke saluran telur pada Hari ke-1,5 setelah
berahi. Hewan-hewan ini serta hewan kontrol yang
menerima transfer palsu disembelih pada Hari ke-3 dan
tuba falopi mereka diangkat dan isthmus digunakan
untuk analisis microarray. Secara keseluruhan, 278 gen
yang diekspresikan secara berbeda ditemukan di antara
s106
 Perkembangan embrio awal

dengan sekitar 50 μl medium. Transfer tuba dari embrio

bisa jadi terkait dengan fungsi imunologis. Alasan perbedaan
yang telah matang dan dibuahi secara in vitro sebanyak 2
antara kedua percobaan tersebut adalah karena
hingga 4 sel dilakukan pada empat resipien yang
perbedaan signifikan yang disebabkan oleh embrio
disinkronisasi. Satu ekor sapi bunting dan melahirkan anak
tunggal tidak terdeteksi oleh metode yang digunakan
sapi yang sehat. Hasil ini cukup menggembirakan (Fayrer-
(Maillo et al., 2015). Secara keseluruhan, penelitian-
Hosken et al., 1989); namun, aplikasi laparoskopi yang
penelitian ini mengindikasikan bahwa ada aktivitas modulasi
dijelaskan pada daerah paralumbal kanan melibatkan proses
timbal balik antara gamet dan embrio dan epitel Fallopi.
yang sangat
Seperti yang ditunjukkan oleh pendekatan eksperimental
dari studi in vivo ini, menggunakan teknik inovatif untuk
mengakses tuba Fallopi dapat memberikan lebih banyak
informasi tentang keanehan dalam perkembangan
embrionik awal dibandingkan dengan model in vitro. Dari
sudut pandang historis, dapat dilihat bahwa upaya-
upaya telah dilakukan sebelumnya untuk menyediakan
akses ke saluran telur sapi untuk mendorong
perkembangan embrio dengan cara yang serbaguna.
Oleh karena itu, perkembangan ini diperkenalkan secara
singkat di bawah ini.

Langkah-langkah untuk mengakses tuba falopi sapi

Berbagai upaya telah dilakukan untuk mendapatkan akses
ke saluran telur sapi untuk mendapatkan tahap embrio
ex vivo awal, untuk mentransfer tahap awal embrio
produksi in vitro (IVP) untuk kultur in vivo, dan untuk
memulihkan cairan tuba untuk mempelajari lingkungan
embrio. Pada awalnya, pendekatan bedah yang berbeda
terhadap tuba Fallopius sapi telah dijelaskan. Secara
umum, ada dua rute menuju kavum peritoneum yang telah
dipraktikkan: Pendekatan ventromedian melalui linea alba
dipilih pada hewan yang dibius atau secara lateral, mungkin
melalui kedua sisi, pada hewan yang menerima anestesi
lumbal (Trounson dkk., 1976; Ellington dkk., 1990;
Hugentobler dkk., 2007 dan 2008). Jillela dkk. (1977)
memindahkan embrio melalui kanula polietilena ke
dalam sapi dara yang telah disinkronisasi. Tabung polietilen
ini dipasang di sisi kanan atau kiri dan dibuat sambungan
ke salah satu saluran telur. Dua embrio yang ditransfer
menyebabkan implantasi embrio. Namun, prosedur
pembedahan yang berbeda membutuhkan banyak tenaga
kerja dan sering kali dikaitkan dengan komplikasi pasca
operasi, yang membuat penggunaan hewan secara
berulang kali hampir tidak mungkin dilakukan.
Untuk meminimalkan stres dan komplikasi yang terkait
Dengan pembedahan, pendekatan invasif minimal
dengan menggunakan laparoskopi dikembangkan.
Laparoskopi pertama kali digunakan untuk mengamati
aktivitas ovarium dan menusuk folikel pada permukaan
ovarium (Sirard dan Lambert, 1985). Salah satu pendekatan
laparoskopi pertama pada tuba falopi dilaporkan oleh
Fayrer-Hosken dkk. (1989). Sebuah trokar dari seperangkat
bronkoskopi dan trokar forsep atraumatik dimasukkan ke
dalam rongga perut melalui fosa lumbal kanan. Sebelum
setiap pemindahan, reaksi ovarium hewan resipien
dicatat. Infundibulum tuba falopii ipsilateral ke ovarium yang
berovulasi difiksasi dengan forsep untuk memungkinkan
penyisipan kateter melalui ostium abdomen 2,5 sampai 5 cm
ke dalam ampula di bawah kendali visual. Embrio secara
perlahan dipindahkan dari kateter ke dalam ampula
s107
prosedur yangBrem
rumit, Perkembangan embrio in vitro, perbedaan antara in vitro
Besenfelder, danyang secara instrumental sangat rumit
Havlicek
dan tidak menjadi rutinitas. dan in vivo
Reichenbach dkk. (1993 dan 1994) menjelaskan Blastosis yang berasal dari in vitro secara signifikan berbeda
pendekatan endoskopi transva- ginal untuk pemeriksaan dari blastosis yang dikumpulkan secara in vivo sehubungan
berulang pada organ reproduksi dan untuk pemulihan oosit dengan ekspresi gen
dari folikel sapi dan sapi dara. Endoskopi bersama dengan
unit tusukan dimasukkan di bagian tengah dorsal melalui
forniks vaginae ke dalam rongga perut. Manipulasi dubur
memungkinkan ovarium digerakkan dan difiksasi pada
posisi yang optimal di depan endoskopi. Ovarium diputar
sedikit sehingga pengambilan sel telur (OPU) dari semua
folikel di permukaan ovarium dapat dilakukan di bawah
kendali visual. Penggunaan metode ini secara
berulang-ulang pada hewan yang sama untuk
pengambilan oosit menegaskan bahwa aplikasi rutin
dapat dilakukan dan tidak memiliki efek negatif terhadap
kesehatan, kesuburan, atau kinerja hewan.
Teknik ini menjadi dasar lebih lanjut untuk akses tuba
falopi (Besenfelder dan Brem, 1998). Untuk menyediakan
ruang yang cukup untuk pemeriksaan rongga panggul dan
untuk memungkinkan manipulasi dan navigasi
peralatan endoskopi, hewan tidak diberi makan selama 8
hingga 12 jam sebelum memulai prosedur. Hewan-hewan
tersebut diposisikan dalam keadaan tertindih, yang
mengakibatkan pergerakannya dibatasi untuk
sementara waktu guna memastikan penanganan
endoskopi dan organ-organ tubuh yang lembut.
Anestesi epidural memfasilitasi manipulasi rektal.
Tabung universal yang kaku ditempatkan di bagian dorsal
forniks vaginae dan dimasukkan melalui dinding vagina.
Setelah masuknya udara pasif yang menyebabkan
pneumo-peritoneum buatan, sebuah inlay bi-tubular
dimasukkan dengan membawa sistem endoskopi dan
tabung, yang terdiri dari sistem pembilasan embrio atau
sistem transfer embrio.
Berbeda dengan prosedur lumbal, prosedur transvaginal
dan
Posisi medial endoskopi memungkinkan manipulasi non-
instrumental, yaitu manipulasi invasif minimal secara
manual, inspeksi dan kontrol visual, serta akses ke
saluran telur, ovarium, dan tanduk uterus secara in situ.
Setelah menyelesaikan prosedur endoskopi dan sebelum
tabung universal dilepas, udara harus dikeluarkan dari
rongga perut dengan menggunakan pompa vakum.
Tidak ada perawatan medis lebih lanjut yang disarankan
(Besenfelder dan Brem, 1998). Teknik ini
memungkinkan embrio dipindahkan ke tuba falopi serta
dapat dipulihkan setelah superovulasi atau kultur in vivo
kapan saja (Besenfelder et al., 2010).
Sementara itu, teknik ini telah dinilai beberapa kali
sebagai '... teknik transfer embrio endoskopi yang
canggih. . . ' dan telah terus ditingkatkan dan diadaptasi
dalam jangka waktu yang lama, sehingga memberikan
keterampilan dan pengalaman yang dapat diterapkan
dengan baik dalam ekspresi gen dan studi pengembangan
(Lonergan dan Fair, 2008; Carter dkk., 2010, Rizos dkk.,
2010a). Ketepatan eksperimental yang lebih besar
sekarang dapat disesuaikan dengan tahap
pembelahan spesifik embrio dan asal embrio (lihat
Gambar 1).

s108
 Perkembangan embrio awal

Gambar 1 (berwarna online) Akses ke saluran telur sapi untuk transfer atau pembilasan. Transfer embrio melalui kapiler kaca setelah ovulasi tunggal (a) atau
pembilasan setelah superovulasi (b) dapat dilakukan dengan cara yang sama. Mengangkat ovarium sedikit memungkinkan presentasi saluran telur yang
berdekatan ((c) presentasi infun-dulum dan ampula). Setelah jalan masuk ke dalam saluran telur dapat diperoleh ((d) lihat kapiler yang sejajar dengan
bagian pertama ampula), kapiler dapat dimasukkan di sepanjang rute ini ((e) dan (f)).

profil (Gutiérrez-Adán et al., 2004), kelainan kromosom (Viuff
et al., 2001), kriosurvival (Enright et al., 2000), dan fitur
ultrastruktural (Crosier et al., 2000; Rizos et al., 2002).
Perbedaan-perbedaan ini dibahas sebagai ekspresi dari
faktor trofik yang berbeda yang tersedia untuk embrio
dalam sistem kultur masing-masing.
Sebenarnya, bukan sel embrio yang berhubungan
langsung dengan sel epitel tuba falopi, melainkan ZP yang
mengelilingi embrio. ZP terdiri dari jaring-jaring kompak yang
menampilkan lapisan dalam dan luar berserabut dengan
struktur yang berbeda (Denker 2000; Sinowatz et al., 2001).
ZP ini mewakili matriks ekstraseluler yang terletak di
antara embrio dan epitel saluran telur dan harus permeabel
terhadap zat pembawa sinyal dan pembawa pesan. Oleh
karena itu, akumulasi zat-zat di dalam dan di sekitar ZP dapat
berfungsi sebagai indikator untuk interaksi embrio-epitel.
Mertens dkk. (2006) mempelajari ZP dari embrio yang
diproduksi secara in vitro pada tahap zigot, 2-, 4-, 8-, 16-
sel, morula, dan blastosis serta membandingkannya dengan
zigot yang dikumpulkan secara endoskopi,
Morula dan blastokista 4 sel dan uterus yang memerah.
ZP dipotong dengan laser dan dindingnya dinilai dengan
pemindaian mikroskop elektron. Sementara ketebalan
lapisan luar, bagian retikuler ZP, meningkat dari 7,5%
menjadi 10% untuk embrio in vitro, embrio ex vivo
menunjukkan lapisan luar yang lebih tebal, melebar dari
18% untuk zigot menjadi 30% untuk blastosis (Mertens
et al., 2006). Jumlah pori-pori dan ukurannya menurun
seiring dengan lamanya waktu tinggal di tuba falopi.
Selain itu, dapat dilihat bahwa pada sebagian besar
embrio in vitro, lapisan retikuler luar menunjukkan tanda-
tanda degenerasi (Mertens et al., 2007).
Secara keseluruhan, proses-proses ini mengungkapkan
bahwa ZP mewakili dinding permeabel dan sistem filter di
mana residu meyakinkan adanya pertukaran nutrisi, sinyal,
dan komponen lain yang intensif antara embrio dan epitel
Fallopi. Sifat-sifat oviduk ini tidak hanya dapat ditemukan
dalam ZP tetapi juga tercermin dalam daya tahan hidup
kriosurvival embrio. Lonergan dkk. (2003) menghasilkan
embrio in vitro sapi yang dikultur secara in vitro atau
s109
dipindahkan ke
Besenfelder, Brem dan Havlicek

s110
 Perkembangan embrio awal

(Salilew-Wondim et al., 2018).

saluran telur pada waktu yang berbeda dan
Selain ekspresi dan pola metilasi embrio, beberapa
dikumpulkan kembali. Semakin lama embrio dikultur di
penelitian telah menunjukkan bahwa embrio in vivo
dalam saluran telur, semakin tahan embrio tersebut
secara signifikan berbeda dengan embrio yang diproduksi
terhadap kriopreservasi. Terlihat bahwa resistensi embrio in
secara in vitro dalam hal kelainan kromosom. Viuff dkk.
vitro terhadap kriopreservasi menurun dengan sangat cepat.
(1999) menunjukkan bahwa embrio yang diproduksi secara
Embrio yang dikultur in vitro selama periode pertama dan
in vitro adalah
kemudian ditransfer in vivo menunjukkan tingkat
kelangsungan hidup pasca pembekuan yang lebih tinggi
dibandingkan dengan embrio yang pertama kali disimpan
di oviduk sapi dan kemudian dikultur in vitro hingga
tahap blastosis (Lonergan et al., 2003). Hasil ini telah
dikonfirmasi pada sapi oleh Havlicek dkk. (2010). Embrio
yang dihasilkan secara in vitro disimpan dalam kultur
selama 7 hari dan dibandingkan dengan embrio yang
telah ditransfer secara endoskopi sebagai campuran ko-
inkubasi ovum-sperma ke dalam saluran telur segera
setelah ovulasi atau sebagai embrio pada tahap 4 hingga 8
sel pada saluran telur sapi yang sinkron. Jelas terlihat
bahwa semakin lama embrio berada di dalam saluran
telur sapi, semakin tahan embrio tersebut terhadap
kriopreservasi (Havlicek et al., 2010).
Setelah menunjukkan inferioritas umum in vitro
secara umum
embrio, tujuan penelitian oleh Gad dkk. (2012) adalah
untuk mengungkapkan fase transisi kritis tertentu dalam
produksi in vitro. Dalam sebuah penelitian berskala besar,
embrio yang diproduksi secara in vitro ditransplantasikan ke
tuba falopi pada berbagai waktu, yang kemudian keluar dari
rahim pada Hari ke-7. Pada gilirannya, setelah
superovulasi, embrio dikeluarkan dari tuba Fallopi pada
berbagai waktu dan dikultur secara in vitro hingga tahap
blastosis Hari ke-7. Secara umum, dapat ditunjukkan
bahwa perubahan sistem kultur sebelum atau sesudah
aktivasi genom embrio tidak berpengaruh pada jumlah
blastosis. Namun, sumber dari mana embrio berasal
memiliki pengaruh yang nyata terhadap tingkat
blastosis (Rizos et al., 2002; Gad et al., 2012). Selain itu,
kultur in vitro memiliki efek yang merugikan pada
transkriptom blastosis. Telah ditunjukkan bahwa
mekanisme molekuler dan jalur metabolisme ditentukan
oleh lingkungan kultur yang berlaku pada saat aktivasi
genom. Pendekatan eksperimental semacam itu dipandang
sebagai sumber potensial untuk pengembangan strategi
baru dalam kultur in vitro (Gad et al., 2012).
Penyelidikan lebih lanjut dilakukan untuk mempelajari
genom-
pola metilasi yang luas dari embrio yang lingkungannya
dipengaruhi oleh kondisi in vitro. Untuk alasan ini, embrio
tuba ex vivo pada tahap 2, 8, dan 16 sel dikumpulkan dari
tuba falopi dan dikultur secara in vitro hingga tahap blastosis.
Pada tahap ini, pola metilasi blastosis dari masing-masing
kelompok dibandingkan dengan pola metilasi blastosis
yang diperoleh secara ex vivo. Sebanyak 1623 daerah
hipermetilasi terdeteksi pada blastosis, yang ditransfertasi
sebagai tahap 2, 8, atau 16 sel secara in vitro. Semakin
dini embrio dipindahkan ke sistem kultur in vitro,
semakin besar penyimpangannya. Titik waktu aktivasi
genom ditetapkan sebagai titik yang sangat penting
s111
 dan 2001; Tšuiko et al., 2017), embrio ex vivo juga
sangat mixoploid
Besenfelder, yang diukur dengan analisis
Brem dan Havlicek
menunjukkan perubahan kecil yang muncul bahkan
kromosom 6 dan 7 pada blastomer. Blastosis yang
dalam kondisi in vivo. Untuk menyelidiki sensitivitas pada
diperoleh dan diuji secara ex vivo secara signifikan lebih
tahap perkembangan awal embrio pada efek lingkungan in
sedikit mixoploidnya (Viuff et al., 1999 dan 2001).
vivo,
Dalam sebuah penelitian yang lebih canggih secara
teknis, Tšuiko dkk. (2017) menggunakan metode analisis
resolusi tinggi yang memungkinkan demonstrasi
ketidakstabilan kromosom (CIN) dan penyimpangan
subkromosom yang halus. Untuk tujuan ini, metode
analisis sel tunggal seluruh genom digunakan untuk
haplotiping perkawinan dan profil nomor salinan pada
tingkat blastomer yang diisolasi secara individual. Untuk
desain eksperimental, embrio in vitro diperoleh pada hari
ke-2 pasca inseminasi setelah OPU dengan atau tanpa
stimulasi FSH atau tahap embrionik sinkron dari saluran
telur dikumpulkan setelah superovulasi. Semua embrio
diproduksi dan berasal dari hewan induk yang sama.
Stabilitas genomik blastomer individu dari kedua
kelompok kultur in vitro sangat terganggu. Insiden
seluruh kromosom atau penyimpangan segmental secara
signifikan lebih tinggi pada embrio yang dihasilkan secara
in vitro daripada embrio yang berasal dari ex vivo. Hanya
18,8% dari embrio yang dikultur in vivo yang mengandung
setidaknya satu blastomer dengan anomali kromoso-mal,
sedangkan embrio OPU dengan stimulasi hormonal dan
aspirasi folikel tanpa stimulasi hormonal menunjukkan
69,2% dan 84,6% anomali, masing-masing (Tšuiko et al.,
2017).
Secara keseluruhan, penelitian ini menunjukkan bahwa
kondisi kultur in vitro
memerlukan penyempurnaan lebih lanjut untuk
meminimalkan perbedaan perkembangan pada embrio
dan mengurangi anomali.

Perkembangan embrio in vivo: hormon dan laktasi

Hormon, yang digunakan untuk sinkronisasi atau
superovulasi, terutama selama laktasi, saat ini memainkan
peran utama dalam praktikum. Dalam konteks ini, penting
untuk dicatat bahwa kondisi kultur in vitro itu sendiri
mewakili kondisi lingkungan yang luar biasa tidak alami; oleh
karena itu, mereka juga dapat menunjukkan pada titik
waktu mana konseptus sangat sensitif pada
perkembangan embrio awal (Gad et al., 2012). Kepekaan
terhadap perubahan lingkungan ini tampaknya tidak hanya
terbatas pada kondisi in vitro, tetapi lebih menunjukkan
bahwa kemunculan serupa pada tahap perkembangan ini
juga dapat dilihat pada hewan dalam keadaan tertentu
atau memberikan indikasi kematian embrio dini.
Secara keseluruhan, diperkirakan hampir setengah
juta embrio sapi (2017: 495.054 embrio) saat ini dipanen
melalui program MOET di seluruh dunia (Viana, 2018).
Embrio-embrio ini berkembang sementara hingga tahap
morula/blastosis pada hewan yang distimulasi secara
berlebihan sebelum dikumpulkan. Perlakuan pemulihan ini
berbeda secara signifikan dengan perlakuan yang
digunakan untuk mempersiapkan hewan resipien.
Akibatnya, embrio-embrio ini berkembang di bawah kondisi
stimulasi hormon yang kurang optimal dalam periode
perkembangan, yang diketahui sangat penting untuk
embrio yang berasal dari IVP. Seperti yang telah
ditunjukkan untuk kelainan kromosom (Viuff et al., 1999
s112
 Perkembangan embrio awal

7. Semua embrio dikeluarkan dari tuba falopi dan tanduk

hewan dipreparasi atau distimulasi secara hormonal atau
uterus pada Hari ke-7, dan profil ekspresi RNA messen ger
periode laktasi digunakan untuk menyelidiki perkembangan
diuji menggunakan Affymetrix GeneChip Bovine Genome
embrio secara lebih rinci.
Array. Pemberian PRID menghasilkan peningkatan yang
Dalam penelitian pertama, lebih dari 1400 embrio
signifikan dalam plasma
diperoleh dari tuba falopi pada berbagai tahap, setelah itu
sapi dara distimulasi dengan FSH atau equine chorionic
gonadotropin (eCG). Secara umum, embrio menunjukkan
kinetika perkembangan yang sangat mirip terlepas dari
perlakuannya. Namun, terlihat bahwa embrio yang berasal
dari stimulasi eCG menunjukkan variasi yang lebih besar
sehubungan dengan tahap pembelahannya. Variasi ini juga
terlihat pada morfologi luteal. Ovarium yang distimulasi oleh
gonadotropin korionik kuda memiliki korpora lutea dengan
ukuran yang sangat berbeda. Banyak dan bahkan folikel
hemoragik sebagian besar terlihat. Selain itu, jumlah embrio
yang tidak dapat hidup pada tahap akhir perkembangan di
tuba falopi meningkat secara signifikan pada sapi dara yang
distimulasi eCG berbeda dengan pengobatan FSH
(Besenfelder et al., 2008).
Dalam penelitian selanjutnya, kinetika pengembangan dan
Profil ekspresi embrio dari sapi dara yang distimulasi
diperiksa. Penelitian ini difokuskan secara eksklusif pada efek
dari pengobatan hormon terhadap perkembangan embrio
di tuba Fallopi. Untuk tujuan ini, embrio ditugaskan ke dua
kelompok yang berbeda: satu kelompok (perkembangan
bifasik) embrio dikumpulkan secara endoskopi pada Hari ke-
2 setelah stimulasi dengan FSH dan inseminasi dan
ditransfer ke hewan resipien yang disinkronisasi, mono-
ovulasi. Pada kelompok kedua (fase tunggal), embrio juga
dihasilkan melalui stimulasi FSH dan inseminasi buatan. Pada
kedua kelompok, embrio dibuang pada hari ke-7. Analisis
data microarray menunjukkan bahwa total 454 gen
diekspresikan secara berbeda dalam kelompok. Pada
kelompok superovulasi, 429 gen diekspresikan secara
melimpah, sedangkan perkembangan embrio bifasik
(superovulasi diikuti dengan ovulasi tunggal) hanya
menghasilkan 25 gen yang diregulasi. Gen-gen ini telah
ditugaskan untuk proses yang terlibat dalam fosforilasi
oksidatif serta berbagai jalur metabolisme, tindakan yang
terkait dengan translasi, terjemahan, dan stres. Anehnya,
perkembangan bifasik pada hewan yang tidak terstimulasi
menghasilkan perkembangan embrio yang lebih cepat
dibandingkan dengan embrio yang hanya ditemukan pada
hewan yang disuperovulasi. Terdapat rasio morula/blastosis
sebesar 0,48 berbanding 1,81 (Gad et al., 2011).
Selain superovulasi, hormon progesteron
memainkan peran utama. Progesteron diproduksi oleh
jaringan luteal dan terutama memengaruhi pertumbuhan
embrio, produksi interferon-τ, dan akibatnya, implantasi
embrio. Telah diketahui bahwa sapi perah laktasi
mengalami konsentrasi progesteron yang rendah dalam
darah. Dalam percobaan oleh Carter dkk. (2010), sapi dara
yang disinkronisasi pada hari ke-2 digunakan untuk transfusi
embrio sapi yang berasal dari in vitro. Sekitar 100 embrio
yang telah dibelah dipindahkan secara endoskopi ke
dalam saluran telur ipsilateral dari setiap sapi dara. Setengah
dari hewan resipien menerima perangkat intravaginal
pelepas progesteron (PRID) dari Hari ke-3 hingga Hari ke-
s113
konsentrasi
Besenfelder, progesteron dari Hari ke-3,5 hingga Hari ke-
Brem dan Havlicek
7. Sebanyak 194 gen yang diekspresikan secara Kesimpulan
berbeda diidentifikasi menggunakan analisis ekspresi Penggunaan ART telah membuka banyak peluang dan
genom yang luas. Gen-gen ini dikaitkan dengan tantangan bagi bidang-bidang yang bernilai secara ilmiah
komunikasi silang antara embrio dan lingkungan ibu dan pemuliaan
melalui analisis jaringan interaksi. Meskipun gen-gen ini
tidak dapat secara langsung dikaitkan dengan pertumbuhan
embrio yang lebih baik, profil transkriptom ini dibahas
sebagai informasi berharga dalam konteks waktu setelah
penetasan embrio dan / atau fase pemanjangan
berikutnya (Carter et al., 2010).
Dalam studi berikut, Rizos dkk. (2010a)
menyinkronkan sapi dara dan sapi laktasi 60 hari
pascapersalinan untuk kultur in vivo embrio sapi. Setiap
hewan menerima sekitar 100 embrio dengan tahap 2 hingga
4 sel ke dalam tuba falopi yang berada di sebelah lateral
korpus luteum pada hari ke-2 siklus berahi. Setelah 5 hari,
embrio-embrio ini dikumpulkan kembali. Analisis progester
satu mengkonfirmasi bahwa sapi laktasi memiliki
progesteron plasma yang jauh lebih sedikit dibandingkan
dengan sapi dara. Dari kultur in vivo pada sapi dara, lebih
lanjut ditunjukkan bahwa lebih banyak embrio yang dapat
dipulihkan secara signifikan dibandingkan dengan sapi (sapi
dara: 79% vs sapi: 57%). Serupa dengan hasil ini, hampir
34% embrio yang dikultur pada sapi dara berkembang
menjadi blastosis, sedangkan pada sapi hanya 18% yang
mencapai tahap blastosis. Hasil ini menunjukkan bahwa
sapi perah laktasi tidak menyediakan kondisi lingkungan
yang memadai untuk pertumbuhan embrio awal
dibandingkan dengan sapi dara (Rizos et al., 2010a). Karena
sapi dara yang menerima suplementasi progesteron dan
perbandingan sapi perah laktasi dengan sapi dara tidak
secara akurat mencerminkan masalah kesuburan dalam
industri susu, pendekatan ketiga telah dilakukan dengan
menggunakan kelompok sapi setelah melahirkan. Seperti
yang telah dilakukan sebelumnya, sapi-sapi ini juga
menerima embrio sapi yang berasal dari in vitro untuk kultur
in vivo sementara. Setengah dari sapi-sapi tersebut
dikeringkan setelah melahirkan, sementara kelompok
kedua dibiarkan memproduksi susu secara normal. Kedua
kelompok digunakan untuk transfer embrio dan pemulihan
sekitar 60 hari setelah melahirkan untuk percobaan ini.
Selain itu, sapi-sapi ini berada pada Hari ke-2 siklus berahi
ketika sekitar 65 embrio ditransfer secara endoskopi ke
dalam tuba falopi dan pulih setelah lima hari. Selain itu,
status metabolisme sapi-sapi tersebut ditentukan dengan
pengambilan sampel darah secara teratur. Berat badan
dan skor kondisi tubuh berkurang secara signifikan pada
sapi-sapi yang sedang menyusui. Dengan demikian, asam
lemak non-esterifikasi dan β-hidroksibutirat lebih tinggi,
sementara glukosa darah, insulin, dan IGF-I lebih rendah pada
sapi laktasi. Tingkat pemulihan embrio tidak berbeda di antara
kedua kelompok, sedangkan tingkat perkembangan embrio
(49% vs 33%) lebih tinggi pada sapi yang tidak menyusui.
Percobaan ini juga menegaskan bahwa lingkungan yang
disebabkan oleh laktasi memberikan dampak negatif
terhadap fertilitas (Maillo et al., 2012). Seperti yang
ditunjukkan oleh contoh-contoh ini, kehidupan embrio awal
merupakan indikator yang sangat sensitif untuk lingkungan.
kondisi mental yang menyimpang dari habitat aslinya.

s114
 Perkembangan embrio awal

Besenfelder U, Havlicek V, Moesslacher G, Gilles M, Tesfaye D, Griese J, Hoelker M,

tujuan. Bersamaan dengan itu, kondisi-kondisi ini pasti Hyttel PM, Laurincik J, Brem G dan Schellander K 2008. Pemulihan endoskopi dari
terkait dengan penciptaan lingkungan non-fisiologis.
Peningkatan jumlah embrio yang stabil dari produksi in
vitro termasuk variasi protokol untuk aplikasi dan
peningkatan sistem kultur selanjutnya mengharuskan
kita untuk juga meningkatkan upaya kita dalam studi in
vivo untuk memperluas pengetahuan kita tentang
kesuburan dalam kompleksitasnya dan, pada gilirannya,
untuk mempromosikan penggunaan ART yang efisien
dengan memperhatikan kompetensi embrio, jumlah dan
vitalitas anak sapi yang dilahirkan serta aspek-aspek
ekonomi.

Ucapan Terima Kasih

Studi yang dihidupkan kembali ini sebagian didukung
oleh Komisi Eropa (EU-FP7, perjanjian hibah FECUND no.
312097).

Pernyataan minat
Tidak ada konflik kepentingan.

Pernyataan etika
Tidak berlaku.

Sumber daya perangkat lunak dan repositori data

Tidak ada data yang disimpan di tempat penyimpanan resmi

Referensi
Aguilar J dan Reyley M 2005. Cairan tuba uterus: sekresi, komposisi, dan efek
biologis. Reproduksi Hewan 2, 91-105.
Almin˜ ana C, Tsikis G, Labas V, Uzbekov R, da Silveira JC, Bauersachs S
dan Mermillod P 2018. Menguraikan kandungan vesikula ekstraseluler
oviduk di seluruh siklus estrus: implikasi untuk interaksi gamet-oviduk dan
lingkungan calon embrio. BMC Genomics 19, 622. doi: 10.1186/s12864-
018-4982-5.
Avilés M, Coy P dan Rizos D 2015. Saluran telur: organ kunci untuk keberhasilan
peristiwa reproduksi awal. Animal Frontiers 5, 25-31. doi: 10.2527/af.2015-
0005.
Avilés M, Gutiérrez-Adán A dan Coy P 2010. Sekresi oviduk: Akankah mereka
menjadi faktor kunci untuk ART di masa depan? Molecular Human
Reproduction 16, 896-906. doi: 10.1093/molehr/gaq056.
Bauersachs S, Blum H, Mallok S, Wenigerkind H, Rief S, Prelle K dan Wolf E 2003.
Regulasi fungsi sel epitel saluran telur sapi ipsilateral dan kontralateral pada
periode pascovulasi: pendekatan transkriptomik. Biologi Reproduksi 68, 1170-
1177.
Bauersachs S, Rehfeld S, Ulbrich SE, Mallok S, Prelle K, Wenigerkind H,
Einspanier R, Blum H dan Wolf E 2004. Memantau perubahan ekspresi gen
pada sel epitel saluran telur sapi selama siklus berahi. Journal Molecular
Endocrinology 32, 449-466.
Beebe D, Wheeler M, Zeringue H, Walters E dan Raty S 2002. Teknologi
mikrofluida untuk reproduksi berbantuan. Theriogenologi 1, 125-135.
Bennett WA, Watts TL, Blair WD, Waldhalm SJ dan Fuquay JW 1988. Pola
motilitas oviduk pada sapi selama siklus berahi. Jurnal Reproduksi dan
Kesuburan 83, 537-543.
Besenfelder U dan Brem G 1998. Transfer tuba embrio sapi: metode
endoskopi sederhana yang mengurangi paparan jangka panjang dari embrio
yang diproduksi secara in vitro. Theriogenologi 50, 739-745.
Besenfelder U, Havlicek V, Kuzmany A dan Brem G 2010. Pendekatan endoskopi
untuk mengelola perkembangan embrio in vitro dan in vivo: penggunaan saluran
telur sapi. Theriogenology 73, 768-776. doi:
10.1016/j.theriogenology.2009.07.003.
s115
 Sirard MA, Schellander K dan Tesfaye D 2012. Mekanisme molekuler dan
Besenfelder,
embrio Brem dan
sapi preimplantasi Havlicek
awal: pengaruh stimulasi hormonal, kinetika embrio
dan koleksi berulang. Jurnal Reproduksi pada Hewan Domestik 43, 566-572.
doi: 10.1111/j.1439-0531.2007.00953.x.
Bonilla L, Block J, Denicol AC dan Hansen PJ 2014. Konsekuensi transfer embrio
yang diproduksi secara in vitro untuk bendungan dan anak sapi yang
dihasilkan. Journal of Dairy Science 97, 229-239. doi: 10.3168/jds.2013-
6943.
Buhi WC 2002. Karakterisasi dan peran biologis glikoprotein spesifik saluran telur
yang bergantung pada estrogen. Reproduksi 123, 355-362.
Carter F, Rings F, Mamo S, Holker M, Kuzmany A, Besenfelder U, Havlicek
V, Mehta JP, Tesfaye D, Schellander K dan Lonergan P 2010. Pengaruh
peningkatan konsentrasi progesteron yang bersirkulasi pada perkembangan
blastosis sapi dan transkriptom global setelah transfer endoskopi embrio yang
diproduksi secara in vitro ke saluran telur sapi. Biologi Reproduksi 3, 707-
719. doi: 10.1095 / biolreprod.109.082354.
Chen S, Palma-Vera SE, Langhammer M, Galuska SP, Braun SM, Krause
E, Lucas-Hahn A dan Schoen J 2017. Pendekatan antarfase udara-cair
untuk memodelkan zona kontak embriomaternal awal. Laporan Ilmiah 7,
42298. doi: 10.1038/srep42298.
Cornelissen MAMC, Mullaart E, Van der Linde C dan Mulder HA 2017.
Memperkirakan komponen varians dan nilai pemuliaan untuk jumlah oosit
dan jumlah embrio pada sapi perah menggunakan evaluasi genom satu
langkah. Journal of Dairy Science 100, 4698-4705. doi: 10.3168/jds.2016-
12075.
Crosier AE, Farin PW, Dykstra MJ, Alexander JE dan Farin CE 2000.
Morfometri ultrastruktural morula kompak sapi yang diproduksi secara in
vivo atau in vitro. Biologi Reproduksi 62, 1459-1465.
Denker HW 2000. Dinamika struktural dan fungsi mantel embrionik awal.
Sel Jaringan Organ 166, 180-207.
Diskin MG dan Morris DG 2008. Kehilangan embrio dan fetus awal pada sapi
dan ruminansia lainnya. Reproduksi pada Hewan Domestik 43 (Suppl. 2), 260-
267. doi: 10.1111/j.1439-0531.2008.01171.x.
Drews B, Ringleb J, Waurich R, Hildebrandt TB, Schröder K dan Roellig K
2013. Tahap blastosis bebas dan implantasi pada kelinci coklat Eropa: korelasi
antara data ultrasonografi dan histologis. Reproduksi Kesuburan dan
Perkembangan 25, 866-878. doi: 10.1071/RD12062.
Duranthon V dan Chavatte-Palmer P 2018. Efek jangka panjang dari ART:
Apa yang disampaikan oleh hewan kepada kita? Molecular
Reproduction Development 85, 348-368. doi: 10.1002/mrd.22970.
Ellington JE, Farrell PB, Simkin ME, Foote RH, Goldman EE dan McGrath
AB 1990. Perkembangan dan kelangsungan hidup setelah pemindahan
embrio sapi yang dikultur dari 1-2 sel menjadi morula atau blastosis
dalam saluran telur kelinci atau dalam media sederhana dengan sel
epitel saluran telur sapi. Jurnal Reproduksi dan Kesuburan 89, 293-299.
Enright BP, Lonergan P, Dinnyes A, Fair T, Ward FA, Yang X dan Boland MP
2000. Kultur zigot sapi yang diproduksi secara in vitro vs in vivo: implikasi
untuk perkembangan dan kualitas embrio awal. Theriogenology 54, 659-
673.
Fayrer-Hosken RA, Younls AI, Brackett BG, McBride CE, Harper KM, Keefer
KL dan Cabaniss DC 1989. Transfer oviduk laparoskopi dari oosit sapi
yang telah matang dan dibuahi secara in vitro. Theriogenology 32, 413-
420.
Fazeli A dan Holt WV 2016. Pembicaraan silang selama periode
perikonsepsi. Theriogenology 86, 438-442. doi: 10.1016 /
j.theriogenology.2016.04.059.
Ferraz MAMM, Rho HS, Hemerich D, Henning HHW, van Tol HTA, Hölker
M, Besenfelder U, Mokry M, Vos PLAM, Stout TAE, Le Gac S dan Gadella
BM 2018. Saluran telur pada sebuah chip menyediakan lingkungan in
vitro yang disempurnakan untuk pemrograman ulang genom zigot.
Nature Communications 9, 4934. doi: 10.1038/s41467-018-07119-8.
Fujii T, Hirayama H, Naito A, Kashima M, Sakai H, Fukuda S, Yoshino H, Moriyasu
S, Kageyama S, Sugimoto Y, Matsuyama S, Hayakawa H dan Kimura K
2017. Produksi anak sapi dengan transfer konsepsi pemanjangan sapi
kriopreservasi dan kemungkinan aplikasi untuk seleksi genom preimplantasi.
Jurnal Reproduksi dan Perkembangan 63, 497-504. doi: 10.1262/jrd.2017-
025.
Gad A, Besenfelder U, Rings F, Ghanem N, Salilew-Wondim D, Hossain
MM, Tesfaye D, Lonergan P, Becker A, Cinar U, Schellander K, Havlicek V
dan Hölker M 2011. Pengaruh lingkungan saluran reproduksi setelah
perawatan hiperstimulasi ovarium terkontrol pada perkembangan embrio dan
profil t r a n s k r i p t o m global blastosis: implikasi untuk pemuliaan
hewan dan reproduksi berbantuan manusia. Reproduksi Manusia 26,
1693-1707. doi: 10.1093/ humrep/der110.
Gad A, Hoelker M, Besenfelder U, Havlicek V, Cinar U, Rings F, Held E, Dufort I,

s116
 Perkembangan embrio awal

jalur yang terlibat dalam aktivasi genom embrio sapi dan pengaturannya dengan Lazzari G, Wrenzycki C, Herrmann D, Duchi R, Kruip T, Niemann H dan Galli C
kondisi kultur in vivo dan in vitro alternatif. Biologi Reproduksi 87, 2002. Penyimpangan seluler dan molekuler pada embrio yang diproduksi secara
100. doi: 10.1095/biolreprod.112.099697. in vitro pada sapi terkait dengan sindrom keturunan besar. Biologi Reproduksi 67,
767-775.
Galli C, Duchi R, Crotti G, Turini P, Ponderato N, Colleoni S, Lagutina I dan Lazzari
G 2003. Teknologi embrio sapi. Theriogenology 59, 599-616.
García EV, Hamdi M, Barrera AD, Sánchez-Calabuig MJ, Gutiérrez-Adán A dan
Rizos D 2017. Interaksi embrio-saluran telur sapi secara in vitro mengungkapkan
pembicaraan silang awal yang dimediasi oleh pensinyalan BMP. Reproduksi
153, 631-643. doi: 10.1530/ REP-16-0654.
Georges M, Charlier C dan Hayes B 2019. Memanfaatkan informasi genom
untuk perbaikan ternak. Nature Reviews Genetics 20, 135-156. doi: 10.1038/
s41576-018-0082-2.
Georgiou AS, Sostaric E, Wong CH, Snijders AP, Wright PC, Moore HD dan Fazeli
A 2005. Gamet mengubah proteom sekretori oviduk. Molekuler dan Seluler
Proteomik 4, 1785-1796.
Goovaerts IG, Leroy JL, Van Soom A, De Clercq JB, Andries S dan Bols PE 2009.
Pengaruh kokultur sel kumulus dan tekanan oksigen pada perkembangan in
vitro- kompetensi zigot sapi yang dikultur secara tunggal. Theriogenology 71,
729-738. doi: 10.1016/j.theriogenology.2008.09.038.
Graf A, Krebs S, Zakhartchenko V, Schwalb B, Blum H dan Wolf E 2014.
Pemetaan yang baik dari aktivasi genom pada embrio sapi dengan
sekuensing RNA. Prosiding National Academy of Sciences USA 111, 4139-
4144. doi: 10.1073/pnas.1321569111.
Granleese T, Clark SA, Kinghorn BP dan van der Werf JHJ 2018.
Mengoptimalkan alokasi betina pada teknologi reproduksi dengan
mempertimbangkan prestasi, perkawinan sedarah, dan biaya dalam program
pemuliaan inti dengan seleksi genom. Jurnal Pemuliaan dan Genetika
Hewan 136, 79-90. doi: 10.1111/jbg.12374.
Gutiérrez-Adán A, Rizos D, Fair T, Moreira PN, Pintado B, de la Fuente J, Boland
MP and Lonergan P 2004. Pengaruh kecepatan perkembangan pada pola
ekspresi mRNA pada embrio sapi awal yang dikultur secara in vivo atau in
vitro. Reproduksi dan Perkembangan Molekuler 68, 441-448.
Havlicek V, Kuzmany A, Cseh S, Brem G dan Besenfelder U 2010. Pengaruh
kultur in vivo jangka panjang pada saluran telur dan uterus sapi terhadap
perkembangan dan kriotoleransi embrio sapi yang diproduksi secara in vitro.
Jurnal Reproduksi pada Hewan Domestik 45, 832-837. doi: 10.1111/j.1439-
0531.2009.01364.x.
Hugentobler SA, Diskin MG, Leese HJ, Humpherson PG, Watson T, Sreenan JM
dan Morris DG 2007. Asam amino dalam saluran telur dan cairan uterus serta
plasma darah selama siklus estrus pada sapi. Reproduksi dan Perkembangan
Molekuler 74, 445-454.
Hugentobler SA, Humpherson PG, Leese HJ, Sreenan JM dan Morris DG 2008.
Substrat energi dalam saluran telur sapi dan cairan uterus dan plasma darah
selama siklus b e r a h i . Reproduksi dan Perkembangan Molekuler 75,
496-503.
Hugentobler SA, Sreenan JM, Humpherson PG, Leese HJ, Diskin MG and Morris DG
2010. Pengaruh perubahan konsentrasi progesteron sistemik pada ion, asam
amino dan substrat energi pada saluran telur sapi dan cairan uterus dan darah.
Reproduksi Kesuburan dan Perkembangan 22, 684-694. doi:
10.1071/RD09129.
Hunter RH, Coy P, Gadea J dan Rath D 2011. Pertimbangan viskositas dalam
pendahuluan pembuahan mamalia. Jurnal Reproduksi Berbantu dan Genetika
28, 191-197.
Hunter RHF, Cicinelli E dan Einer-Jensen N 2007. Cairan peritoneum sebagai
vektor yang tidak diketahui di antara jaringan reproduksi perempuan.
Acta Obstetricia et Gynecologica 86, 260-265.
Jaton C, Schenkel FS, Sargolzaei M, Cánova A, Malchiodi F, Price CA, Baes C dan
Miglior F 2018. Studi asosiasi seluruh genom dan analisis fungsional in silico dari
jumlah embrio yang diproduksi oleh donor Holstein. Journal of Dairy Science
101, 7248-7257. doi: 10.3168/jds.2017-13848.
Jillella D, Eaton RJ dan Baker AA 1977. Keberhasilan pemindahan embrio sapi
melalui tuba falopi yang dikalibrasi. Veterinary Record 100, 385-386.
Kölle S, Dubielzig S, Reese S, Wehrend A, König P dan Kummer W 2009.
Transportasi siliaris, interaksi gamet, dan efek embrio awal dalam saluran telur:
analisis ex vivo menggunakan sistem videomikroskopis digital baru pada sapi.
Biologi Reproduksi 81, 267-274.
Lazzari G, Colleoni S, Lagutina I, Crotti G, Turini P, Tessaro I, Brunetti D, Duchi R
dan Galli C 2010. Efek jangka pendek dan jangka panjang dari kultur
embrio dalam saluran telur domba pengganti dibandingkan dengan kultur in
vitro untuk spesies domestik yang berbeda. Theriogenology 73, 748-757.
doi: 10.1016/j.theriogenology.2009.08.001.

s117
Lee KF, Yao YQ, Kwok
Besenfelder, BremKL,dan
Xu JSHavlicek
dan Yeung WS 2002. Embrio yang berkembang
lebih awal mempengaruhi pola ekspresi gen dalam saluran telur tikus.
Komunikasi Penelitian Biokimia dan Biofisika 292, 564-570.
Leese HJ, Tay JI, Reischl J dan Downing SJ 2001. Pembentukan cairan tuba
falopi: peran epitel yang terabaikan. Reproduksi 121, 339-346.
Lonergan P dan Fair T 2008. Embrio sapi yang diproduksi secara in vitro:
menangani kutil. Theriogenologi 69, 17-22.
Lonergan P, Rizos D, Kanka J, Nemcova L, Mbaye AM, Kingston M, Wade
M, Duffy P dan Boland MP 2003. Sensitivitas temporal embrio sapi terhadap
lingkungan kultur setelah pembuahan dan implikasinya terhadap
kualitas blastosis. Reproduksi 126, 337-346.
Lopera-Vasquez R, Hamdi M, Maillo V, Gutierrez-Adan A, Bermejo-Alvarez P,
Ramírez MÁ, Yán˜ ez-Mo´ M and Rizos D 2017a. Pengaruh vesikula
e k s t r a s e l u l e r oviduk sapi terhadap perkembangan dan kualitas
embrio secara in vitro. Reproduksi 153, 461-470. doi: 10.1530/REP-16-
0384.
Lopera-Vasquez R, Hamdi M, Maillo V, Lloreda V, Coy P, Gutierrez-Adan
A, Bermejo-Alvarez P and Rizos D 2017b. Pengaruh cairan oviduk sapi terhadap
perkembangan dan kualitas embrio sapi yang diproduksi secara in vitro.
Reproduksi Kesuburan dan Perkembangan 29, 621-629. doi:
10.1071/RD15238.
Maeda J, Kotsuji F, Negami A, Kamitani N dan Tominaga T 1996.
Pengembangan embrio sapi secara in vitro dalam media yang dikondisikan dari
sel granulosa sapi dan sel Vero yang dikultur dalam protein eksogen dan media
cairan tuba manusia yang didefinisikan secara kimiawi dan bebas asam
amino. Biologi Reproduksi 54, 930-936.
Maillo V, de Frutos C, O'Gaora P, Forde N, Burns GW, Spencer TE,
Gutierrez- Adan A, Lonergan P dan Rizos D 2016. Perbedaan spasial dalam
ekspresi gen d a l a m s a l u r a n t e l u r sapi. Reproduksi 152, 37-
46. doi: 10.1530/REP-16-0074.
Maillo V, Gaora PÓ, Forde N, Besenfelder U, Havlicek V, Burns GW, Spencer TE,
Gutierrez-Adan A, Lonergan P dan Rizos D 2015. Interaksi oviduk-embrio pada
sapi: lalu lintas dua arah atau jalan satu arah? Biologi Reproduksi 92, 144. doi:
10.1095/biolreprod.115.127969.
Maillo V, Rizos D, Besenfelder U, Havlicek V, Kelly AK, Garrett M dan Lonergan P
2012. Pengaruh laktasi terhadap karakteristik metabolisme dan
perkembangan embrio pada sapi perah Holstein pascapersalinan. Journal of
Dairy Science 95, 3865-3876. doi: 10.3168/jds.2011-5270.
May-Panloup P, Vignon X, Chrétien MF, Heyman Y, Tamassia M, Malthièry Y
dan Reynier P 2005. Peningkatan kandungan DNA mitokondria dan transkrip
pada embriogenesis sapi awal yang terkait dengan peningkatan regulasi
faktor transkripsi mtTFA dan NRF1. Biologi Reproduksi dan Endokrinologi 3,
65 doi: 10.1186/ 1477-7827-3-65.
Menchaca A, dos Santos-Neto PC, Cuadro F, Souza-Neves M dan Crispo M 2018.
Dari teknologi reproduksi hingga penyuntingan genom pada ruminansia
kecil: perjalanan embrio. Reproduksi Hewan 15 (Suppl. 1), 984-995.
Menezo Y dan Guerin P 1997. Saluran telur mamalia: biokimia dan fisiologi.
Jurnal Eropa Obstetri dan Ginekologi dan Biologi Reproduksi 73, 99-104.
Mertens E, Besenfelder U, Gilles M, Hölker M, Rings F, Havlicek V, Schellander
K and Herrler A 2007. Pengaruh kultur in vitro embrio sapi pada struktur
zona pellucida. Reproduksi Kesuburan dan Perkembangan 19, 211-212.
Mertens E, Gilles M, Rings F, Hoelker M, Schellander K dan Herrler A
2006. Pengaruh kultur in vitro embrio sapi pada struktur zona pel- lucida.
Jurnal Reproduksi pada Hewan Domestik 41 (suppl. 1), 23.
Mouguelar H, Díaz T, Borghi D, Quinteros R, Bonino F, Apichela SA dan Aguilar JJ
2015. Studi morfometrik mukosa oviduk kuda betina pada berbagai tahap
reproduksi. The Anatomical Record 298, 1950-1959. doi: 10.1002/ar.23193.
Murakami H dan Imai H 1996. Implantasi yang berhasil dari embrio kelinci yang
dikultur in vitro setelah transfer uterus: peran mucin. Reproduksi dan
Perkembangan Molekuler 43, 167-170.
Raposo G dan Stoorvogel W 2013. Vesikel ekstraseluler: eksosom, mikrovesikel,
dan teman-temannya Journal Cell Biology 18, 373-383. doi:
10.1083/jcb.201211138.
Reichenbach HD, Wiebke NH, Besenfelder U, Mödl J dan Brem G 1993.
Aspirasi terpandu laparoskopi transvaginal dari oosit folikel sapi: Hasil
awal. Theriogenology 39, 295.
Reichenbach HD, Wiebke NH, Mödl J, Zhu J dan Brem G 1994.
Laparoskopi melalui forniks vagina sapi untuk aspirasi berulang oosit
folikel. Catatan Veteriner 135, 353-536.
Rizos D, Carter F, Besenfelder U, Havlicek V dan Lonergan P 2010a. Kontribusi
saluran reproduksi betina terhadap rendahnya kesuburan pada sapi perah
laktasi pascapersalinan. Jurnal Ilmu Pengetahuan Susu 93, 1022-1029.

s118

Rizos D, Fair T, Papadopoulos S, Boland MP dan Lonergan P 2002.
Perbedaan perkembangan, kualitatif, dan ultrastruktural antara embrio sapi
ovarium dan sapi yang diproduksi secara in vivo atau in vitro. Reproduksi
dan Perkembangan Molekuler 62, 320-327.
Rizos D, Ramirez MA, Pintado B, Lonergan P and Gutierrez-Adan A
2010b. Kultur embrio sapi dalam saluran telur inang perantara dengan
penekanan pada saluran telur tikus yang diisolasi. Theriogenology 3, 777-
785.
Ruckebusch Y dan Bayard F 1975. Motilitas saluran telur dan uterus sapi selama
siklus berahi. Jurnal Reproduksi dan Kesuburan 43, 23-32.
Salilew-Wondim D, Saeed-Zidane M, Hoelker M, Gebremedhn S, Poirier M,
Pandey HO, Tholen E, Neuhoff C, Held E, Besenfelder U, Havlicek V, Rings F,
Fournier E, Gagné D, Sirard MA, Robert C, Gad A, Schellander K dan Tesfaye D
2018. Pola metilasi DNA seluruh genom dari blastosis sapi yang berasal dari embrio
in vivo yang mengalami kultur in vitro sebelum, selama atau setelah aktivasi
genom embrio . BMC Genomics 19, 424. doi: 10.1186/s12864-018-4826-3.
Sartori R, Bastos MR dan Wiltbank MC 2010. Faktor-faktor yang mempengaruhi
pembuahan dan kualitas embrio awal pada sapi perah yang diovulasi tunggal
dan superovulasi. Reproduksi Fertilitas dan Perkembangan 22, 151-158.
doi: 10.1071/RD09221.
Sinowatz F, Töpfer-Petersen E, Kölle S dan Palma G 2001. M o r f o l o g i
fungsional dari zona pellucida. Anatomia, Histologia, Embriologia 30, 257-
263.
Sirard MA dan Lambert RD 1985. Fertilisasi in vitro oosit folikel sapi yang
diperoleh dengan laparoskopi. Biologi Reproduksi 33, 487-494.
Smits K, De Coninck DIM, Van Nieuwerburgh F, Govaere J, Van Poucke
M, Peelman L, Deforce D dan Van Soom A 2016. Embrio kuda
mempengaruhi ekspresi gen yang berhubungan dengan kekebalan dalam
saluran telur. Biologi Reproduksi 94,
36. doi: 10.1095/biolreprod.115.136432
Stojkovic M, Wolf E, Büttner M, Berg U, Charpigny G, Schmitt A dan Brem
G 1995. Sekresi interferon tau yang aktif secara biologis oleh jaringan
trofoblas sapi yang diturunkan secara in vitro. Biologi Reproduksi 53, 1500-
1507.
Trounson AO, Willadsen SM, Rowson LE dan Newcomb R 1976. Penyimpanan
telur sapi pada suhu kamar dan suhu rendah. Jurnal Reproduksi dan
Kesuburan 46, 173-178.
Tšuiko O, Catteeuw M, Zamani Esteki M, Destouni A, Bogado Pascottini
O, Besenfelder U, Havlicek V, Smits K, Kurg A, Salumets A, D'Hooghe T,
Voet T, Van Soom A and Vermeesch RJ 2017. Stabilitas genom sapi yang dikandung
secara in vivo
Perkembangan embrio awal
embrio tahap pembelahan lebih tinggi dibandingkan dengan embrio yang
diproduksi secara in vitro. Reproduksi Manusia 23, 1-10. doi:
10.1093/humrep/dex286.
Van Eetvelde M, Heras S, Leroy JLMR, Van Soom A dan Opsomer G 2017.
Pentingnya periode perikonsepsi: Efek langsung dalam pembiakan sapi dan dalam
reproduksi berbantuan seperti inseminasi buatan dan transfer embrio. Dalam
Perikonsepsi dalam fisiologi dan kedokteran. Kemajuan dalam
Kedokteran Eksperimental dan Biologi (eds. A Fazeli dan W Holt), pp. 41-68.
Springer, Cham, Swiss.
Viana J 2018. 2017 Statistik produksi dan transfer embrio pada hewan ternak
domestik. Buletin Teknologi Embrio dari Masyarakat Teknologi Embrio
Internasional 36, 8-25.
Viuff D, Hendriksen PJ, Vos PL, Dieleman SJ, Bibby BM, Greve T, Hyttel P
dan Thomsen PD 2001. Abnormalitas kromosom dan kinetika perkembangan
pada embrio sapi yang dikembangkan secara in vivo pada hari ke-2 sampai
ke-5 setelah ovulasi. Biologi Reproduksi 65, 204-208.
Viuff D, Rickords L, Offenberg H, Hyttel P, Avery B, Greve T, Olsaker I,
Williams JL, Callesen H dan Thomsen PD 1999. Sebagian besar blastosis
sapi yang diproduksi secara in vitro adalah mixoploid. Biologi Reproduksi
60, 1273-1278.
Weber JA, Freeman DA, Vanderwall DK dan Woods GL 1991. Prostaglandin E2
mempercepat transportasi oviduk embrio kuda. Biologi Reproduksi 45,
544-546.
Wolf E, Arnold GJ, Bauersachs S, Beier HM, Blum H, Einspanier R, Fröhlich
T, Herrler A, Hiendleder S, Kölle S, Prelle K, Reichenbach HD, Stojkovic M,
Wenigerkind H dan Sinowatz F 2003. Komunikasi embrio-ibu pada sapi-
strategi untuk menguraikan pembicaraan silang yang kompleks. Jurnal
Reproduksi pada Hewan Domestik 38, 276-289.
Yániz JL, Lopez-Gatius F, Santolaria P dan Mullins KJ 2000. Studi tentang
anatomi fungsional mukosa oviduk sapi. Catatan Anatomi 260, 268-278.
Young LE, Sinclair KD dan Wilmut I 1998. Sindrom keturunan besar pada sapi dan
domba. Ulasan Reproduksi 3, 155-163.
Zebeli Q, Ghareeb K, Humer E, Metzler-Zebeli BU dan Besenfelder U
2015. Nutrisi, kesehatan rumen dan peradangan pada masa transisi serta
perannya terhadap kesehatan dan kesuburan sapi perah secara keseluruhan.
Research in Veterinary Science 103, 126-36. doi:
10.1016/j.rvsc.2015.09.020.
s119