ISOLASI DNA GENOM

DNA terdapat pada seluruh jaringan dan

cairan tubuh yang mengandung sel-sel
berinti
Bahan uji yang paling sering digunakan:
darah
DNA genom: DNA inti + DNA mitokondria
Tujuan: identifikasi / analisis DNA suatu
organisme metode PCR, RFLP, DNA
Fingerprinting, DNA Sequencing, Blotting /
Hybridization, SSCP,
dsbnya.
DR.Dr. Septelia Inawati Wanandi

ISOLASI DNA GENOM DARI

DARAH MAMALIA
Bahan uji: Darah EDTA segar atau < 5 hari
Darah mamalia: sel berinti (sel darah putih) dan sel
tidak berinti (SDM)
Lisis SDM
Pemisahan dan Lisis Sel Darah Putih
Pemisahan dari protein
Presipitasi DNA
Hidrasi DNA
Penghitungan jumlah DNA yang diperoleh dan
indeks kemurnian
DR.Dr. Septelia Inawati Wanandi

PENGHITUNGAN JUMLAH DNA

YANG DIISOLASI
Spektrofotometer 260 nm vs 280 nm
A260 = 1 [DNA] = 50 g/ml
[DNA] (g/ml) =
A260 X 50 g/ml : Faktor Pengenceran

Jumlah DNA yang diisolasi (g) =

[DNA] g/ml X vol. larutan DNA l
Indeks kemurniaan = A260 / A280
DNA murni indeks kemurnian 1,75
DR.Dr. Septelia Inawati Wanandi

HASIL ISOLASI DNA GENOM

Berhasil: DNA murni dan utuh

Jumlah DNA ~ 35 g/ml darah
200 l darah 4 10 g DNA
Sel darah putih: 7 X 106 sel / ml
darah
6 pg DNA / sel darah putih

DR.Dr. Septelia Inawati Wanandi

HIGH PURE PCR TEMPLATE

PREPARATION KIT
Penambahan Proteinase K & Binding
Buffer (Guanidin HCl)
Penambahan Isopropanol
DNA diikatkan selektif pada glassfiber
Wash and Spin dengan Inhibitor
Removal Buffer dan Wash Buffer
Peluruhan DNA: Elution Buffer
DR.Dr. Septelia Inawati Wanandi

POLYMERASE CHAIN REACTION

(PCR)
Reaksi polimerisasi berantai
Ditemukan oleh Kari Mullis (1986)

DR.Dr. Septelia Inawati Wanandi

KEGUNAAN PCR
Teknik biologi molekuler dasar yang
paling luas digunakan
Cepat, efisien dan angka keberhasilan
tinggi
Aplikasi: Kedokteran Forensik, Diagnosis
Genetika, Keganasan, Mikrobiologi,
Parasitologi, Manipulasi dan Rekayasa
Gen.
Penelitian dan Diagnosis Klinik
DR.Dr. Septelia Inawati Wanandi