METODE DIAGNOSA

VIRUS

djoko priyatno
 Hambatan Diagnosa Virus

PEMERIKSAAN VIROLOGIS TIDAK

SERING DILAKUKAN, KARENA:
Virus yang berukuran 0,02-0,3 M
tidak bisa diperiksa dibawah
mikroskop cahaya harus
mikroskop elektron
Virus lebih sulit dibiakan daripada
kuman / bakteri
Virus hanya dapat bereplikasi pada
sel host
 Hambatan Diagnosa Virus

Untuk biakan (invitro) menggunakan

organ-organ hewan atau biakan
jaringan sebagai medium karena
memerlukan sel hidup
Memerlukan laboratorium khusus
(sarana lengkap)
Dalam praktek sehari-hari sulit
mengenal infeksi virus dibandingkan
infeksi bakteri
Metode Diagnosa Virus
1. Direct Examination
2. Indirect Examination
(Virus Isolation)
3. Serology
Direct Examination

1. Antigen Detection immunofluorescence, ELISA etc.

2. Electron Microscopy morphology of virus particles
immune electron microscopy

3. Light Microscopy histological appearance

inclusion bodies
4. Viral Genome Detection hybridization with specific
nucleic acid probes
polymerase chain reaction (PCR)
 Metode pemeriksaan langsung
sering juga disebut metode
diagnostik cepat (Rapid Test)
dapat memberikan hasil yang
baik pada hari yang sama atau
hari berikutnya.
Sangat berguna ketika
manajemen klinis pasien sangat
tergantung pada ketersediaan
cepat dari hasil laboratorium
diagnosis misalnya infeksi RSV
pada neonatus, infeksi CMV atau
immunocompromised berat pada
Deteksi Antigen
Contoh deteksi antigen :
Pemeriksaan imunofluoresensi dari aspirasi
nasofaring untuk virus pernafasan,
misalnya RSV, flu A, flu B, dan adenovirus
Deteksi antigen rotavirus dalam tinja, test
antigenaemia pp65 CMV
Deteksi HSV dan VZV pada scrappings kulit
Deteksi HBsAg dalam serum (dianggap
sebagai test serologis).
KELEBIHAN DAN KELEMAHAN

Keuntungan utama deteksi gen

cepat untuk melakukan dengan
hasil yang tersedia dalam beberapa
jam.
Kelemahan
o membosankan dan memakan

waktu,
o sulit untuk membaca dan

menafsirkan hasil,
o sensitivitas dan spesifisitas rendah
o kualitas spesimen yang diperoleh

menentukan apakah tes dapat

GAMBARAN HASIL TEST
Electron Microscopy (EM)
Partikel virus terdeteksi dan
diidentifikasi berdasarkan morfologinya
dengan perbesaran yang biasa
digunakan sekitar 50.000 - 60.000
EM terutama digunakan untuk
diagnosis virus gastroenteritis dengan
mendeteksi virus dalam tinja misalnya
rotavirus, adenovirus, astrovirus,
calicivirus dan Norwalk-like virus.
 Electron Microscopy (EM)
EM dapat pula mendeteksi virus dalam
vesikel dan lesi kulit lainnya, seperti
virus herpes dan papilloma.
Sensitivitas dan spesifisitas dapat
ditingkatkan dengan immune electron
microscopy (antibodi spesifik virus
digunakan untuk menggumpalkan
partikel virus sehingga lebih mudah
dikenali, atau untuk menangkap partikel
virus).
Electron Microscopy (EM)
Masalah utama penggunaan EM
adalah biaya pembelian dan
pemeliharaan fasilitas tersebut.
Sensitivitas EM rendah, dengan
setidaknya 10 5 sampai 10 6 partikel
virus per ml dalam sampel yang
diperlukan untuk visualisasi, sehingga
pengamat harus sangat terampil.
Electron Microscopy (EM)
Dengan tersedianya deteksi antigen
dan metode molekuler untuk
mendeteksi virus yang terkait dengan
virus gastroenteritis, EM menjadi
kurang banyak digunakan.
Electronmicrographs virus umum ditemukan pada
spesimen tinja dari pasien yang menderita
gastroenteritis.Dari kiri ke kanan: rotavirus,
adenovirus, astroviruses, Norwalk-like
virus.(Courtesy of Linda M. Stannard, Universitas
Cape Town,
http://www.uct.ac.za/depts/mmi/stannard/emimage
s.html)
Light Microscopy
Replikasi virus sering
menghasilkan perubahan
histologis dalam sel yang
terinfeksi.
Perubahan ini dapat menjadi
karakteristik atau non-spesifik.
Badan inklusi virus pada dasarnya
kumpulan partikel virus
terreplikasi baik dalam nukleus
atau sitoplasma.
Light Microscopy
Contoh badan inklusi ditemukan
pada infeksi rabies dan infeksi
CMV .
Meskipun tidak sensitif atau
spesifik, histologi tetap berfungsi
sebagai tambahan yang
bermanfaat dalam diagnosis
infeksi virus tertentu.
Viral Genome Detection
Metode berdasarkan deteksi
genom virus metode molekuler.
Metode molekuler adalah arah
masa depan diagnosis virus.
Namun peran metode molekuler di
laboratorium diagnostik rutin virus
masih kecil dibandingkan dengan
metode konvensional.
 Viral Genome Detection
Teknik ini dapat memungkinkan
untuk kuantifikasi DNA / RNA
dalam spesimen.
Namun, sering ditemukan bahwa
sensitivitas dari teknik ini adalah
tidak lebih baik dari metode
diagnostik virus konvensional
Viral Genome Detection
Teknik molekuler baru seperti
polymerase chain reaction (PCR),
ligase chain reaction (LCR),
nucleic acid based amplification
(NASBA), dan branched DNA
(bDNA) bergantung pada
beberapa bentuk amplifikasi, baik
target asam nukleat atau sinyal
itu sendiri.
Viral Genome Detection
bDNA pada dasarnya adalah
teknik hibridisasi konvensional
dengan sensitivitas
meningkat.Namun, itu tidak
sensitif seperti PCR dan teknik
amplifikasi lainnya.
PCR adalah teknik amplifikasi
yang umum digunakan. PCR
adalah teknik yang sangat sensitif
(mencapai ke 1 molekul DNA
dalam spesimen klinis), namun
Viral Genome Detection
Permasalahan utama kontaminasi
(cukup sedikit kontaminasi untuk
memberikan hasil positif palsu).
PCR sangat sensitif dibandingkan
dengan teknik lain, hasil PCR positif
seringkali sangat sulit untuk
menafsirkan karena tidak selalu
menunjukkan adanya penyakit.
Masalah ini khususnya besar dalam
kasus virus laten seperti CMV, karena
CMV laten genom dapat diperkuat dari
darah orang sehat.
Viral Genome Detection
Meskipun demikian, PCR semakin
sering digunakan untuk diagnosis
virus, terutama karena biaya tes
yang turun dan kemampuan
sistem automated close yang
juga dapat melakukan
kuantifikasi (Kuantitatif PCR)
misalnya real-time PCR dan
Cobas Amplicor Systems.
Viral Genome Detection

Teknik amplifikasi lain seperti LCR

dan NASBA juga rentan terhadap
kontaminasi seperti PCR tetapi
dapat diperbaiki dengan
menggunakan sistem propriatory
close (hal ini sangatlah sulit).
SEMOGA BERMANFAAT
INDIRECT EXAMINATION / VIRUS ISOLATION

Virus adalah parasit intraseluler

obligat yang membutuhkan sel-
sel hidup dalam rangka untuk
replikasi.
Kultur sel, telur dan hewan
laboratorium dapat digunakan
untuk isolasi virus
Indirect Examination

1.Cell Culture cytopathic effect (CPE)

haemabsorption
immunofluorescence
2. Eggs pocks on CAM
haemagglutination
inclusion bodies
3. Animals disease or death
 Telur dan hewan cukup sulit untuk
ditangani , sehingga dalam
diagnostik virus di laboratorium
tergantung pada kultur sel.
Pengembangan metode untuk kultur
sel-sel hewan menjadi hal penting
untuk kemajuan virologi hewan.
Ada 3 jenis kultur sel: primary
cells, semi-continuous cells dan
continuous cells
 Jenis Kultur Sel
Primary cells (Sel primer)
disiapkan secara
langsung dari hewan atau
jaringan manusia yang
sudah mati dan dapat
disubkultur hanya sekali atau
dua kali . Contoh : Ginjal
Monyet

 Jenis Kultur Sel

Semi-continuous cells
(Semi-kontinyu sel)
berasal dari jaringan janin
manusia dan dapat
disubkultur 20 -50 kali.

Contoh : Ginjal embrio manusia

dan fibroblas kulit.
 Jenis Kultur Sel
Continuous cells (Kontinu
sel)
berasal dari tumor
manusia atau hewan, sel-
sel ini dapat disubkulturkan
tanpa batas.

Contoh : HeLa, Vero, Hep2,

LLC-MK2, BGM.
 Primary cells secara luas diakui
sebagai sistem kultur sel terbaik
yang tersedia.Namun, sangat
mahal dan seringkali sulit untuk
mendapatkan pasokan yang dapat
diandalkan.
Continuous cells adalah yang
paling mudah untuk menangani
tetapi berbagai virus yang
digunakan sering terbatas.
Identifikasi tumbuh-kembang virus
Cytopathic Effect (CPE)
Dapat spesifik atau non-spesifik
misalnya HSV dan CMV
menghasilkan CPE yang spesifik,
sedangkan enterovirus tidak.
Haemadsorption
sel mendapatkan kemampuan
untuk menempel pada sel darah
merah mamalia .
Identifikasi tumbuh-kembang virus
Haemadsorption terutama
digunakan untuk mendeteksi
influenza dan
parainfluenzaviruses.
Konfirmasi identitas virus dapat
dilakukan menggunakan
netralisasi, test haemadsorption-
inhibition, imunofluoresensi,
atau test molekul.
Kiri: Haemadsorption sel darah merah ke
permukaan lembaran sel yang terinfeksi oleh virus
gondok.Juga mencatat kehadiran dari syncytia
yang bisa dibedakan dari RSV (Courtesy of Linda
Stannard, Universitas Cape Town).Kanan: CMV
Positif DEAFF tes.(Virologi Laboratorium, Yale-New
Haven Hospital)
PERMASALAHAN KULTUR SEL

Masalah utama dengan kultur sel

adalah waktu yang diperlukan
untuk mendapatkan hasil cukup
lama (sampai 4 minggu).
Sensitivitas rendah
Tergantung pada banyak faktor,
seperti kondisi spesimen, dan
kondisi lembaran sel.
PERMASALAHAN KULTUR SEL

Sangat rentan terhadap

kontaminasi bakteri dan zat
beracun dalam spesimen.
Banyak virus tidak akan tumbuh
pada semua kultur sel misalnya
Hepatitis B dan C, virus diare,
parvovirus dll
 Rapid Culture Techniques
(Teknik Kultur Cepat)

Teknik kultur cepat

teknik mendeteksi
antigen virus secara
cepat (2 - 4 hari) setelah
inokulasi.
Contoh teknik kultur cepat
termasuk kultur shell vial
dan test CMV DEAFF.
 Pada uji CMV DEAFF, lembar sel
ditumbuhkan pada slip cover
individu dalam botol plastik.
Setelah inokulasi, botol kemudian
diputar pada kecepatan rendah
selama satu jam (untuk
mempercepat adsorpsi virus) dan
kemudian diinkubasi selama 2 - 4
hari.
Slip cover kemudian dibawa keluar
dan diperiksa keberadaan awal
antigen CMV oleh
Metode Asam Nukleat
PCR (DNA), RT-PCR (RNA)
Dapat digunakan untuk
mendeteksi virus-virus yang
noncultivatable
Rapid identification (contoh : RT-
PCR4 Corners untuk wabah
hantavirus atau FRET di
lapangan)
Dapat digunakan untuk
menangani pasien seperti pada
virus HIV
SEMOGA BERMANFAAT
 Serology
Mendeteksi meningkatnya titer antibodi
antara tahap akut dan penyembuhan dari
infeksi, atau deteksi IgM pada infeksi
primer.
Classical Techniques Newer Techniques

1. Complement fixation tests (CFT) 1. Radioimmunoassay (RIA)

2. Haemagglutination inhibition tests 2. Enzyme linked immunosorbent assay (EIA)
3. Immunofluorescence techniques (IF) 3. Particle agglutination
4. Neutralization tests 4. Western Blot (WB)
5. Counter-immunoelectrophoresis 5. RIBA, Line immunoassay
 CFT
Prinsip : interaksi Ag-Ab dengan
komplemen
Mengukur penurunan kadar
komplemen serum
Dapat mengukur kadar Ab yg sangat
kecil
 HI
Pembentukan Ab spesifik HA
Ag+Ab+eritrosit HI