BIOTEKNOLOGI

Rencana Perkuliahan
Aliran Informasi Genetik
Teknologi DNA Rekombinan
PCR & Diagnosis Molekuler (Aplikasi PCR)
Teknik Biologi Molekuler (UTS)
Produksi Biopharmaceutical & Vaccine 1X
Teknologi Fermentasi Senyawa Obat 1 X
Produksi Metabolit Sekunder senyawa Obat 2 X
Presentasi Kelompok Topik (Aplikasi PCR, Produksi
Protein terapetik, Fermentasi senyawa obat/pangan,
produksi met. Sekunder via kultur jaringan dan tanaman
transgeni, prod met sekunder via combinatorial
biosinthesis 3X.
 Teknologi DNA Rekombinan
Restriksi Endonuklease
Ligasi & Ligasi DNA
Vektor
Kloning & Rekombinan DNA
Isolasi DNA & RNA
 Goal..

Pemanfaatan Manipulasi Gen dalam Pengobatan

DNA Rekombinan
 Nucleases

Phospodiester
Nukleotida

IK. Hidrogen
Exonuclease VS Endonuclease
Nuclease dapat memotong/degradasi
molekul DNA dengan membelah IK.
Phosfodiester yang menghubungkan
nukleotida
Exonuclease menghilangkan nukleotida
pada posisi ujung molekul DNA
Endonuclease memotong ikatan dalam
phosfodiester molekul DNA
Restriction Endonuclease (RE)
Enzim Restriksi
 Ligasi
Ligase : Enzim yang mensintesis
pembentukan ikatan phosfodiester yang
menghubungkan nukleotida satu dengan
yang lainnya
Ligasi
Restriksi
& Ligasi
 DNA VEKTOR
Vektor kloning berfungsi untuk
memperbanyak fragmen DNA yang
disisipkan, sehingga fragmen DNA hanya
di replikasi, tidak di transkripsi.
Vektor ekspresi digunakan untuk produksi
protein.
 Vektor (Biotranspor)
Plasmid
Virus lambda bacteriophaga
Cosmid
 Plasmid
DNA untai ganda
Berbentuk lingkaran
Bersalinan tinggi (high copy number)
Berukuran kecil (mudah dimanipulasi)
Dapat bereplikasi sendiri
Dapat disisipi DNA asing
Memiliki 2 gen marker : untuk mendeteksi
adanya vektor dan DNA sisipan
 Tahapan kloning
Isolasi/preparasi DNA sisipan dan DNA
Vektor
Pemotongan molekul DNA
Penggabungan fragmen DNA sisipan ke
DNA vektor
Transformasi
Identifikasi
Isolasi DNA rekombinan
 Transfromasi
Sel kompeten : sel mampu menerima
DNA asing.
Sel diberi lar. CaCl2 agar sel menjadi
permeabel dan bermuatan + (DNA-).
Cara Heat Shock dan Kejutan listrik.
 Kemungkinan dalam
transformasi?
Sel kompeten tidak kemasukan DNA
apapun
Sel kompeten kemasukan DNA vektor
tetapi tidak membawa gen X
Sel kompeten kemasukan DNA vektor dan
membawa gen X (DNA rekombinan)
 Seleksi putih biru
Jika ada tiga cawan yang diisi media
padat, masing-masing diberi label media
A, B dan C
A hanya media padat
B media yang ditambah antibiotik (mis
Pinicilin)
C media padat ditambah antibiotik, X-gal
dan IPTG
Apa yang terjadi dalam media A, B dan C
 Seleksi putih biru
Media A, semua sel kompeten hidup
Media B, lebih sedikit sel kompeten hidup
dari media A karena sel kompeten yang
membawa DNA resisten antibiotik.
Media C, sama dengan media B tetapi
pada media tersebut ada dua warna Biru
dan Putih
Seleksi putih biru
 Next...
Konfirmasi DNA rekombinan
PCR