BIOSENSOR ELEKTROKIMIA

BERBASIS ENZIM DENGAN

MATERIAL KALSIUM POSFAT
PENDETEKSI TIRAMIN PADA
SAMPEL MAKANAN
Marta Sánchez-Paniagua López, Esther Redondo-Gómez, Beatriz Lóp
ez-Ruiz
Sección Departamental de Química Analítica. Facultad de Farmacia.
Universidad Complutense de Madrid, 28040 Madrid, Spain

Kelompok 4
• Lulu Pransiska
• Nindy Wibawati
• Nita Nurtriani
• Sufrizal Latief
• Ricky Ricardo
 Latar Belakang
Golongan amina biogenik
(BA)

Terdapat pada makanan

Tiramin fermentasi, contoh: keju,
minuman

APA ITU AMINA BIOGENIK?

Amina biogenik (BA) adalah senyawa nitrogen organik yang secara alami terbentuk
dalam makanan oleh dekarboksilasi bakteri asam amino.

APA BAHAYA YANG DITIMBULKAN KETIKA MENGKONSUMSI TIRAMIN?

Konsumsi makanan yang mengandung konsentrasi tinggi senyawa ini memiliki
dampak negatif pada kesehatan manusia meliputi efek beracun, menyebabkan diare,
migrain, takikardia, tekanan darah rendah, dll.
 Tiramin

4- (2-aminoetil) fenol

senyawa monoamine alami yang berasal dari asam amino tirosin oleh
dekarboksilasi yang bertanggung jawab atas terjadinya socalled "reaksi
keju" yang meningkatkan tekanan darah menyebabkan migrain dan
bahkan perdarahan otak, terutama pada individu yang sensitif.

pengembangan metode yang sensitif dan murah untuk penentuan tiramin

pada sampel makanan menjadi sangat penting untuk dikembangkan.
 Komponen Biosensor Tiramin

Enzim Polifenol
Keju Tiramin
oksida + CaP
Sampel Analat
Bioreseptor

Elektrokimia Voltamogram/Grafik Enzim Cross-linking

Transduser Display Immobilisasi
 Bahan
• Polifenol oksidase (PPO, ED 1.14.18.1, tirosinase dari Jamur, 1530 UMG - 1)
• Tiramin, Tirosin, Fenilalanin, Asam glutamat, Katekol,β- trikalsium fosfat ( β- T
C), monokalsium fosfat anhidrat (MCPA), kalsium fosfat anhidrat (monetite), di
kalsium fosfat dihidrat (brushite) dan solusi glutaraldehida 25% dalam air yang
dibeli dari Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA).
• Sodium dihidrogen fosfat, disodium hidrogen fosfat, natrium asetat, CaCl2,
MgCl 2 dan NaNO3 diperoleh dari Panreac (Spanyol).
• Buffer fosfat solusi ibuat dari natrium monohydrogen dan dihidrogen fosfat
(Panreac, Spanyol)
• Air murni dengan sistem Milli-Q (Millipore, Milford, MA, USA) digunakan untuk
persiapan larutan air.
 Alat
• Mikrograf elektron scanning (SEM) dgn mikroskop JEOL
JSM-6400
• μ- Autolab PGSTAT12 potensiostat dengan GPES 4,9
software (EcoChemia, Belanda)
• Mettler Toledo MP230 pH
• Genesys 10 Spectrophotometer (Thermo Ilmiah,
Spanyol).
 Metode
Matriks Adsorpsi Enzim

Perbedaan CaPs dipelajari sebagai bahan inang untuk

adsorpsi enzim;
1. Tanpa dan dengan monetit air hidrasi (CaHPO4)
2. Brushite (CaHPO4.2H2O).

Juga 2 sistem immobilisasi diuji;

1. Tambahan langsung PPO pada kristal brushite (disebut
brushite)
2. Persiapan kristal brushite dari prekursor (β-TCP dan
MCPA) dengan PPO (disebut brushite cement)
 Metode
Persiapan Biosensor
Suspensi CaPs (2 mg/mL) disiapkan
dengan mendispersikan monetit,
brushite atau prekursor semula brushite
dalam air deionisasi dan aduk
semalaman.
Larutan PPO 2 mg/mL disiapkan, dan
campuran CaP dan PPO tersebar pada
elektroda karbon kaca permukaan.
Biolayer dibiarkan kering pada suhu
kamar selama 2 jam.

Untuk menginduksi protein

Akhirnya, diperoleh enzim / CaP
cross-linking, elektroda
biomembran terhidrasi selama 10
diinkubasi dalam suasana
menit dalam 0,1 M PBS pH 6,0.
glutaraldehida jenuh.

Sebagai kontrol, elektroda bebas kalsium fosfat disiapkan dengan pengeringan

12,5 μL larutan PPO (2 mg/mL) pada permukaan elektroda dan memaparkannya
pada uap glutaraldehid selama 15 menit
 Metode
Persiapan Sampel
Keju Gouda dan keju Brie diperoleh di supermarket lokal.

1 g keju ditimbang dan ditambahkan 2 mL larutan buffer fosfat 0,1M pH 6.

Tabung berisi sampel dicampur lalu divortex selama 1 menit dan

kemudian dalam bath ultrasonik selama 10 menit.

Campuran disentrifugasi selama 10 menit pada 3000 rpm dan diperoleh supernatan.
Prosedur ini diulang dan ekstrak dikumpulkan dan disimpan di - 20°C

Penambahan 100 μL dari supernatan ditempatkan ke dalam sel elektrokimia, yang

berisi 10 mL PBS, intensitas saat diukur dan konsentrasi tiramin dihitung.
Tiga ulangan diukur.
HASIL & PEMBAHASAN
1. Perbandingan biosensor berdasarkan CaP yang berbeda

• Monetite, brushite dan brushite

cement digunakan sebagai PPO
immobilizing sistem, dalam
pengembangan biosensor elektrokimia
untuk deteksi tiramin.
• Pada brushite cement pertumbuhan
kristal hadir dengan adanya PPO,
sedangkan pada pertumbuhan kristal
brushite terbentuk sebelum terjadinya
immobilisasi enzim. Jadi, sebagian
besar molekul enzim mungkin
terperangkap di dalam semen
brushite, sementara dalam kasus
brushite, enzim kemungkinan besar
akan teradsorpsi pada matriks
 Lanjutan
Tiramin terdeteksi oleh pengurangan elektrokimia dari o-
dopaquinon secara enzimatik terbentuk pada – 0,1 V,
menggunakan tiga bahan anorganik (PPO/ rasio CaPs 1,0 : 25µg
campuran dan 15 menit GA)
Ket:
a. GCE-monotite
b. GCE-brushite cement
c. GCE-brushite
d. GCE
2. Optimasi persiapan biosensor berbasis PPO/
brushite cement

Menurut hasil yang diperoleh, semen brushite adalah

dipilih sebagai matriks imobilisasi, dan optimasi
berikutnya dari biosensor untuk deteksi tiramin
dilakukan dengan bahan anorganik ini.
2.1 Rasio Enzim/Brushite Cement

• Rasio PPO / brushite yang

dipelajari bervariasi dari 0,25
hingga 2,0, jumlah PPO dalam
campuran konstan pada 25 μg.
• Dapat dilihat pada rasio 1,0 μg
menghasilkan arus yang paling
tinggi, sedangkan rasio PPO /
brushite lebih dari 1,0 μg tidak
menghasilkan peningkatan arus
karena jumlah brushite tidak
cukup untuk melumpuhkan
seluruh jumlah enzim yang
ditambahkan.
2.2 Optimalisasi Kerja Biosensor

• Efek potensial, pH dan suhu

diselidiki menggunakan solusi
tiramin 1 mM
• Diperoleh dan respon tertinggi
ditemukan pada pH 6.0
• Dalam studi suhu kisaran 10-50 °
C diuji, respons meningkat secara
bertahap dengan suhu mencapai
maksimum dengan 35 ° C, (Gbr. 5),
• Jadi, 25 ° C dipilih sebagai suhu
kerja untuk dihindari inaktivasi
tyrosinase.
3. Perilaku biosensor di bawah kondisi
eksperimental yang optimal
Kinerja biosensor diuji di bawah optimal kondisi (50 µg enzim
campuran-matriks, PPO / rasio brushite sama menjadi 1,0, 15 menit
dalam uap GA, pH 6,0 dan 25 ° C).
 4. Presisi dan stabilitas biosensor
• Biosensor telah diperiksa dengan melakukan 10 pengukuran
amperometri berturut-turut dari 1 μM tiramin menggunakan
biosensor yang sama.
• Standar deviasi relatif 6,5%.
• RSD 7,2%
•Untuk menyelidiki stabilitas, biosensor disimpan pada suhu
+4 ° C dlm 0,1 M PBS pH 6,0 dan setiap hari respon
amperometri untuk 1 Μm tyramine diukur.
• Biosensor mempertahankan 95% dari sinyal awal selama 6
hari dan kemudian mengalami penurunan dari 65% sinyal
diamati
5. Aplikasi biosensor dalam sampel
Sampel keju awal ditambahkan 75 mg tiramin / kg keju. Lalu
sampel disimpan pada suhu kamar, dan tiramin diukur
setelah tiga dan tujuh hari.
5. Aplikasi biosensor dalam sampel (Lanjutan)

• Peningkatan amina biogenik dalam makanan dapat terjadi karena

kontaminasi mikroba dalam kondisi yang tidak memadai selama
penyimpanan.
• Jurnal ini mengatakan bahwa biosensor ini dapat digunakan untuk
memantau degradasi keju melalui penentuan tiramin.
 Kesimpulan
• Brushite semen-PPO-GA berbasis biosensor menghasilkan
metode analisis yang sangat sensitif, cepat, murah dan mudah
untuk deteksi tiramin.
• Kesesuaian analitis dari perangkat yang diusulkan telah
ditunjukkan oleh aplikasinya untuk deteksi tiramin di keju gouda
dan keju brie. Hasil recovery yang diperoleh berada di kisaran
95,5-96,9%.
• Tiramin pada keju yang diperoleh dari waktu ke waktu
menunjukkan pentingnya memenotoring degradasi makanan
olahan fermentasi.