Persiapan dan karakterisasi film indikator dari

antosianin karboksimetil-selulosa / pati dan ubi

ungu (Ipomoea batatas (L.) Lam) untuk memantau
kesegaran ikan
pengantar

Dalam beberapa tahun terakhir, kemasan cerdas telah menarik perhatian luas karena kemampuannya
untuk melacak keamanan makanan secara tepat waktu. Pengemasan cerdas ditujukan untuk
menangkap dan memberikan informasi tentang keamanan makanan kemasan, responsnya terhadap
kondisi lingkungan, atau keputusan tentang kualitas kehidupan rak [1, 2]. Fungsi pengemasan yang
cerdas dapat dicapai dengan variasi warna berdasarkan suhu waktu, yang dapat digunakan untuk
menunjukkan kesegaran makanan atau keberadaan gas. Secara umum, pembusukan makanan terkait
erat dengan perubahan pH; dengan demikian, film indikator visual dapat menampilkan informasi
langsung melalui variasi warna yang terlihat. Film indikator visual terdiri dari dua komponen penting,
yaitu dukungan padat dan pewarna, yang sensitif terhadap perubahan pH. Dalam evaluasi kesegaran
makanan, Chun et al. [3] mengembangkan film indikator untuk mendeteksi perubahan waktu nyata
kesegaran ikan oleh bromocresol hijau pelapis-spin ke kertas saring. Warna film indikator secara
progresif berubah dari kuning menjadi hijau sebagai respons terhadap peningkatan senyawa nitrogen
yang mudah menguap, yang mengarah pada peningkatan pH sampel ikan. Selain itu, film indikator
berbasis polianilin diproduksi menggunakan substrat polystyrene digunakan untuk mendeteksi
pembusukan ikan; warna film secara bertahap berubah dari hijau ke biru [4]. Baru-baru ini, karena
keamanan dan ramah lingkungan dari indikator dan substrat, penelitian semakin terkonsentrasi pada
penggunaan pigmen alami untuk menggantikan pewarna kemosintetik. Antosianin alami adalah pigmen
yang aman, tidak beracun, larut dalam air yang sensitif terhadap variasi pH. Beberapa anthocyanin
alami, seperti yang diperoleh dari mulberry, black bean, blueberry, dan Arnebia euchroma root,
digunakan untuk memonitor kesegaran makanan secara real-time [5-8]. Zhang et al. [9] film indikator
dengan menggabungkan antosianin yang diekstraksi dari rosela dengan campuran pati-kitosan. Mereka
menemukan bahwa warna visual film indikator berubah dari merah menjadi kuning ketika senyawa
nitrogen volatil dasar terdapat pada daging babi. Studi ini menunjukkan bahwa film indikator visual
berbasis antosianin adalah pilihan yang sangat baik dari sensor gas untuk memantau kesegaran daging
babi. Demikian pula, film indikator baru dikembangkan dengan menggabungkan anthocyanin diekstraksi
dari Vitis amurensis sekam dengan campuran permen karet tara dan selulosa. Itu digunakan untuk
memantau pembusukan ikan, di mana perubahan warna dibedakan dari merah muda menjadi hijau
diamati [10]. Ubi jalar ungu (Ipomoea batatas (L.) Lam) lebih kaya anthocyanin dibandingkan dengan
jagung ungu, kol merah, rosela dan sebagainya [11]. Antosianin dalam ubi jalar ungu (PSPA) ada
terutama dalam bentuk asilasi dibandingkan dengan yang ditemukan dalam blueberry, murbei dan
kacang hitam, menghasilkan stabilitas yang baik dan aktivitas antioksidan yang unggul [12].

Dalam imobilisasi antosianin alami, banyak bahan tidak beracun dan dapat terurai secara hayati, seperti
pektin, agar dan polimer lainnya telah diselidiki. Di antaranya, karboksimetil-selulosa (CMC) adalah
selulosa eter yang memiliki kompatibilitas yang sangat baik, keterbaruan, biodegradabilitas dan sifat
pembentuk film [13]. Tepung kentang telah banyak digunakan sebagai bahan film karena murah dan
biodegradable, dan memiliki sifat pembentuk film yang sangat baik. Sayangnya, film berbasis pati
tunggal memiliki sifat mekanik yang buruk. Untuk meningkatkan sifat fisik film, CMC telah dimasukkan
dalam film pati [14]. Sejumlah penelitian telah dilakukan untuk menyiapkan CMC dan film komposit
berbasis pati; Namun, penerapan CMC dan film berbasis pati sebagai film indikator belum diteliti. Ikan
sangat mudah rusak yang disebabkan oleh reaksi enzimatik dan kontaminasi mikroba [3]. Perishableness
tidak hanya mengurangi nilai gizi dan menyebabkan kerugian ekonomi yang tidak terduga, tetapi juga
menyebabkan penyakit bawaan makanan dan kerusakan kesehatan manusia. Sementara itu, kesegaran
telah dianggap sebagai salah satu faktor terpenting yang dapat mempengaruhi kualitas ikan dan
penerimaan pelanggan. Oleh karena itu, perlu untuk memantau kesegaran ikan yang menjalani rantai
pasokan makanan. Kesegaran ditentukan terutama oleh kandungan total nitrogen dasar volatil (TVB-N)
[15]. Senyawa TVB-N termasuk amonia dan amina adalah zat karakteristik yang menentukan kualitas
ikan. Laporan telah menunjukkan bahwa senyawa nitrogen yang mudah menguap di ikan pasca panen
meningkat karena dekomposisi enzimatik dari trimethylamine oxide oleh organisme pembusuk spesifik
[16]. Senyawa nitrogen yang mudah menguap adalah gas alkali, yang dapat menyebabkan peningkatan
pH sampel ikan. Saat ini, TVB-N terutama ditentukan oleh metode kimia, seperti metode Kjeldahl dan
spektroskopi FTIR; Namun, metode ini umumnya merusak sampel atau operator dan tidak nyaman bagi
konsumen untuk memantau produk makanan kemasan tepat waktu. Hingga saat ini, deteksi
pembusukan ikan oleh paket polimer yang dapat terurai telah dieksploitasi dan memperoleh hasil nyata,
seperti selulosa bakteri, kitosan / PVA, selulosa asetat dan biopolimer selulosa pati-selulosa [17-20].

Tujuan dari pekerjaan ini adalah untuk mengembangkan film indikator biodegradable novel dengan
memasukkan PSPA ke dalam film CMC / pati. Struktur film komposit dievaluasi dengan spektroskopi
Fourier transform infrared (FT-IR), scanning electron microscopy (SEM), diferensial pemindaian
kalorimetri (DSC), dan spektra difraksi sinar-X (XRD). Sifat mekanik, stabilitas warna dan respon terhadap
amonia dari film komposit juga ditentukan. Akhirnya, potensi penggunaan film dalam memantau
pembusukan ikan diselidiki. Film indikator yang dikembangkan dapat sangat penting bagi industri
perikanan, sehingga dapat memiliki nilai praktis yang besar.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Material

Ubi jalar ungu (Ipomoea batatas (L.) Lam) diperoleh dari Akademi Ilmu Pertanian yang berlokasi di
Guangdong, Cina. Tepung kentang (S) dibeli dari Wan li Co Ltd. (Ningxia, Cina). Ikan hidup (omong
kosong) diperoleh dari toko kelontong lokal (Ya'an, Sichaun, Cina). Carboxymethyl- cellulose (CMC) (MW
= 262.19000, DS = 0.92), gliserol anhidrat (99%), larutan amonia (NH3 · H2O, 25-28%), anhidrat etilena
glikol (99,8%), asam hidroklorat (HCl), dan natrium hidroksida (NaOH) dibeli dari Ke Long Chemical
Reagent Co. (Chengdu, Cina).

2.2. Ekstraksi antosianin dari ubi ungu

Antosianin dari ubi jalar ungu diekstraksi menurut Choi et al. dengan beberapa modifikasi [21]. Setelah
dicuci dan dikupas, ubi jalar ungu dikeringkan dan dijadikan bubuk. Sekitar 50,0 g bubuk ubi jalar ungu
dicampur dengan 500 mL 40% larutan etanol-air (1:10, v / v) dan kemudian diaduk pada suhu 60 ° C
selama 6 jam. Selanjutnya, larutan disaring dua kali melalui kertas saring Whatman (Whatman Inc.,
Clifton, NJ, USA) dan ekstrak (larutan antosianin) diperoleh. Setelah itu, ekstrak dipekatkan
menggunakan rotary evaporator (RE-200B, Shang Hai Yarong Biotechnology, China) pada suhu 50 ° C,
dan dilindungi dari cahaya menggunakan kertas timah. Akhirnya, larutan dibekukan dalam kondisi
vakum dan diperoleh ekstrak ubi jalar ungu antosianin (PSPA). Kandungan antosianin yang diperoleh
dalam ekstraksi ubi jalar ungu diukur menjadi 27,49 mg / g dengan metode diferensial pH. UV-vis
spectra (V-3100N Shanghai China) dari solusi PSAP, dalam nilai pH 2.0-12.0, dicatat dalam kisaran 400-
800 nm setelah nilai pH larutan PSPA disesuaikan dengan menambahkan 0,1M HCl dan NaOH ke nilai pH
yang diinginkan. Kisaran pH yang luas (2-12) dianalisis untuk menjamin spektrum luas perubahan warna,
karena beberapa produk makanan memiliki pH asam (2-6), beberapa memiliki pH netral (7) dan yang
lain memiliki pH dasar (8-12).

2.3. Persiapan film indikator PSPA

Suatu larutan natrium trimetafosfat (STMP) dibuat dengan melarutkan 50 mg STMP dalam 2 mL air
suling dengan pengadukan magnetik. Larutan pati disiapkan dengan melarutkan 6 g pati dalam 100 mL
air suling dan 2 mL STMP sambil terus diaduk menggunakan pengaduk magnetik. Campuran kemudian
dipanaskan pada suhu 90 ° C selama 20 menit sampai polimer pati benar-benar larut. Larutan CMC
dibuat dengan melarutkan 1,2 g CMC dalam 100 mL air suling dengan pengadukan magnetis sampai
larut sepenuhnya. Solusi akhir disiapkan dengan mencampurkan CMC dan larutan kanji dengan
perbandingan 4: 6 (b / b) dengan pengadukan magnet selama 10 menit. Setelah 0,6% (b / b) gliserol
ditambahkan, campuran diaduk selama 5 menit tambahan. Jumlah berbeda dari bubuk PSPA kemudian
ditambahkan ke larutan akhir yang didinginkan: 0, 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, dan 0,9 g / 100 g larutan akhir, dan
sampel dilambangkan sebagai SC, 0,1 SCA, 0,3 SCA, 0,5 SCA, 0,7 SCA, dan 0,9 SCA, masing-masing. Solusi
akhir anthocyanin dihomogenisasi pada 8000 rpm selama 10 menit (FJ200-SH Base Solid Instrument Co.,
Ltd, Cina) dan diturunkan menggunakan sonicator selama 30 menit. min pada suhu kamar. Larutan yang
dihasilkan dituangkan ke dalam piring kaca pra-bersih dan kering dan kemudian dikeringkan pada 50 ° C
selama 8 jam. Setelah itu, film dikupas dari pelat kaca dan kemudian disimpan pada 25 ± 1 ° C dengan
kelembaban relatif (RH) 55 ± 1% selama 48 jam.

2.4. Karakterisasi film indikator

2.4.1. Spektroskopi Fourier transform infrared (FT-IR)

Spektra FT-IR film S, CMC, dan PSPA direkam pada spektrometer inframerah (Nicolet iS1S0, Thermo
Nicolet Inc., USA) dalam mode absorbansi dari 700 hingga 4000 cm-1 pada resolusi 4 cm-1 dan total
jumlah pemindaian 32.

2.4.2. Memindai mikroskop elektron (SEM)

Potongan melintang film indikator divisualisasikan menggunakan mikroskop elektron pemindaian (Ultra,
Carl Zeiss AG, Jerman) dioperasikan pada tegangan percepatan 7 kV. Sebelum pengukuran, film-film itu
dibekukan dalam nitrogen cair dan kemudian dipercikkan dan dilapisi dengan emas di bawah vakum.

2.4.3. Analisis pemindaian diferensial (DSC) diferensial

Sifat termal dari film indikator dianalisis dengan pemindaian kalorimetri diferensial (DSC Q200, TA
Instruments, USA). Sampel yang dikondisikan, masing-masing dengan berat sekitar 5 mg, ditempatkan
dalam panci aluminium yang tertutup rapat dan kemudian dipanaskan dari -50 ° C hingga 250 ° C pada
kecepatan 10 ° C / menit (panci kosong digunakan sebagai referensi ).
2.4.4. Spektra difraksi sinar-X

Analisis difraksi sinar-X dari pati, CMC, dan film dilakukan menggunakan difraktometer X-Ray (D8
ADVANCE Bruker, Jerman) yang dilengkapi dengan sumber radiasi Cu Ka (λ = 1,5406 Å). Film-film
indikator dipindai pada kisaran sudut 5 hingga 50 ° dengan langkah-langkah dari 2 ° (2θ) / mnt.

2.4.5. Ketebalan, sifat mekanik, dan kadar air film indikator

Ketebalan setiap film indikator PSPA ditentukan (masing-masing 20 pengukuran) menggunakan

mikrometer digital genggam (148-121 Instrumen Eksperimental Zhongtian Co, Ltd, Cina). Kekuatan tarik
(TS) dan persen perpanjangan at break (EAB) dari film indikator PSPA diukur menggunakan texturometer
universal (TA.XT Plus, Super Technology Instrument Co., Ltd., China). Sebelum pengukuran, setiap film
indikator PSPA dipotong menjadi strip persegi panjang (80 mm x 15 mm). Pemisahan grip awal dan
kecepatan lintas-kepala masing-masing diatur ke 50 mm dan 0,5 mm / s. Setiap film indikator PSPA
dikenakan delapan pengukuran pada suhu kamar. TS dan EAB dihitung menggunakan persamaan
berikut:

__________________________isi rumus_______________

Di mana: TS adalah kekuatan tarik (MPa); F adalah beban maksimum (N); B adalah lebar setiap film
indikator PSPA / mm; H adalah ketebalan setiap film indikator PSPA / mm; EAB adalah perpanjangan
putus; D adalah panjang pecah film / mm; dan L adalah panjang awal film / mm. Kadar air (MC) dari
setiap film indikator PSPA (setelah dikondisikan selama 48 jam pada 25 ° C dan ∼ (55 ± 1)% RH)
ditentukan dengan pengeringan termal pada 105 ° C dalam oven dengan berat konstan. MC dihitung
menggunakan persamaan berikut:

__________________________isi rumus_______________

Di mana: M1 adalah bobot awal dari setiap film indikator PSPA (g); M2 adalah bobot akhir dari setiap
film indikator PSPA yang dikeringkan pada 105 ° C (g).

2.5. Warna film

Warna film ditentukan dengan menggunakan pengukur warna (SC-10 Colorimeter, Xinmeihe Instrument
Co., Ltd, Cina). Warna film SC dan SCA direkam dengan menggunakan cahaya (L), kemerahan-kehijauan
(a) dan kekuningan-kebiruan (b), dan perbedaan warna total (ΔE) dihitung menurut Kurek et al. [22].
Perbedaan warna total (ΔE) dihitung dengan persamaan berikut:

__________________________isi rumus_______________

Di mana: ΔL * = L * -L0; Δa * = a * - a0; △ b * = b * - b0; L0, a0, dan b0 adalah nilai awal film indikator
PSPA; dan L *, a *, b * adalah nilai film indikator PSPA setelah penyimpanan.

2.6. Stabilitas warna film indikator PSPA

Film indikator PSPA dievaluasi dalam hal stabilitas warna tergantung waktu, kelembaban relatif, suhu,
dan pencahayaan. Beberapa film indikator PSPA disimpan pada -20 ° C, diikuti oleh 25 ° C dengan
kelembaban 55%. Film indikator lain ditempatkan pada suhu 25 ° C dengan kelembaban masing-masing
43% dan 83%. Parameter warna film diukur setiap hari selama 20 hari, dan perbedaan warna total (ΔE)
dihitung (Persamaan (4)).
2.7. Respon terhadap amonia film indikator PSPA

Respon terhadap amonia volatil dari film indikator PSPA dianalisis sesuai dengan metode Kuswandia
dengan beberapa modifikasi [4]. Perubahan warna mereka diukur melalui pengukuran absorbansi dan
perbedaan warna. Film indikator PSPA dipotong menjadi bujur sangkar (30 × 30 mm) dan kemudian
ditempatkan dalam gelas 100 mL pada 1 cm di atas larutan amonia (60 mL, 32 mM) selama 60 menit
pada 25 ° C. Absorbansi direkam menggunakan spektrofotometer setiap 5 menit, dan perbedaan warna
dianalisis setiap 2 menit dengan masing-masing colorimeter.

2.8. Aplikasi film dalam menentukan kesegaran ikan

2.8.1. Uji pembusukan ikan

Setelah menghilangkan jeroan, kepala, kulit, ekor, dan sisik, ikan hidup dipotong-potong, dan 10 g di
antaranya segera ditempatkan dalam cawan Petri. Setelah film ditempatkan di headspace, cawan Petri
disimpan dalam inkubator pada suhu 25 ° C. Perubahan warna film direkam menggunakan kamera
digital.

2.8.2. Penentuan TVB-N

Level TVB-N dalam sampel ikan diukur menggunakan metode distilasi aliran [23]. Sepuluh gram sampel
ikan dicampur dengan 100 mL air suling dan kemudian ditumbuk menggunakan homogenizer.
Homogenat kemudian disaring melalui kertas saring. Setelah itu, 5,0 mL filtrat ditambahkan ke dalam
ruang reaksi yang mengandung 5 mL larutan magnesium oksida 1% (1 g / L). Air suling, yang digunakan
untuk menggantikan filtrat ikan, digunakan sebagai kontrol kosong. Setelah reaksi selesai, larutan asam
borat dititrasi dengan larutan asam klorida 0,01 M sampai warnanya menjadi biru-ungu. Level TVB-N
dihitung dengan persamaan berikut:

__________________________isi rumus_______________

Di mana: X adalah TVB-N dari sampel ikan (mg / 100 g); V1 adalah volume asam klorida yang dikonsumsi
oleh sampel (mL); V2 adalah volume asam klorida yang dikonsumsi dalam blanko (mL); c adalah
konsentrasi asam klorida (M); m adalah kualitas sampel (g).

2.8.3. Analisis mikroba

Total jumlah yang layak (TVC) dari sampel ikan diselidiki menurut Huang et al [5]. dengan beberapa
modifikasi. 25 g sampel ikan dihomogenisasi dalam 225 ml larutan salin dapar fosfat steril. Dari
pengenceran ini, pengenceran desimal lainnya diperoleh, dan 1 ml dari tiga pengenceran yang sesuai
dipindahkan dalam rangkap tiga ke cawan petri yang mengandung media agar-agar penghitung 15 ml.
Total jumlah yang layak (TVC) dievaluasi dengan menghitung jumlah unit pembentuk koloni setelah
inkubasi pada 37 ° C selama 48 jam.

2.8.4. pengukuran pH

Nilai pH diukur oleh Li et al [24]. Sampel 10 g ikan dihomogenisasi secara kuat dalam air suling 90 mL
dan nilai pH diuji dengan pH meter digital.

2.9. Analisis statistik

Semua pengukuran dilakukan dalam rangkap tiga, dan data dianalisis dengan perangkat lunak SPSS 20.0
dan Origin 9.0.0. Hasilnya disajikan sebagai nilai rata-rata ± standar deviasi.

3. Hasil dan Pembahasan

3.1. Warna dan spektrum larutan PSPA dengan pH berbeda

Variasi warna dalam larutan PSPA diuji untuk mengidentifikasi nilainya sebagai pewarna indikator pH
alami. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 1a, dengan peningkatan pH dari 2,0 menjadi 12,0, solusi
PSPA secara bertahap berubah dari merah menjadi hijau, lalu menjadi kuning. Solusi PSPA berubah
merah ketika pH lebih rendah dari 5,0 dan berubah merah muda pada pH 5,0-6,0, ungu pada pH 7,0,
biru pada pH 8,0, hijau pada pH 9,0-10,0, dan kuning pada pH 11,0-12,0. Perubahan spektra serapan
larutan PSPA dengan pH berbeda adalah ditunjukkan pada Gambar. 1b. Ketika pH lebih rendah dari 6,0,
absorbansi menurun dengan meningkatnya pH. Puncak penyerapan maksimum diamati pada sekitar 524
nm pada pH 2.0; setelah itu, dikurangi menjadi 544 nm ketika pH dinaikkan menjadi 6,0. Ketika pH
meningkat dari 8,0 menjadi 12,0, puncak berkurang menjadi sekitar 604 nm, dan absorbansi pada 604
nm juga secara bertahap menurun dengan meningkatnya pH dari 8,0 menjadi 12,0. Puncak penyerapan
maksimum yang digeser jatuh tempo perubahan pH dikenal sebagai pergeseran bathokromik [25].
Variasi warna dan pergeseran puncak serapan maksimum disebabkan oleh perubahan struktur
antosianin [26]. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1c, larutan PSPA berwarna merah pada pH 2.0-
4.0, yang menunjukkan bahwa larutan tersebut terutama ada dalam bentuk ion garam kuning. Pada pH
5.0-6.0, antosianin dikonversi menjadi kuinoid, sebagai ditunjukkan oleh warna solusi yang lebih terang.
Antosianin dikonversi menjadi pseudo-base tidak berwarna pada pH 7,0-8,0, sehingga menyebabkan
warna larutan PSPA berubah menjadi biru. Di pH tinggi, anthocyanin terdegradasi, warna larutan
berubah menjadi hijau atau kuning [27].

_____________________--gambar___________________

3.2. Karakterisasi film indikator

3.2.1. Analisis FT-IR

Spektra FT-IR CMC, PSPA, S, SC dan berbagai film SCA menggambarkan interaksi substansial antara PSPA
dan polimer. Hasilnya ditunjukkan pada Gambar. 2. Puncak pada 3318 cm-1 ditugaskan untuk getaran
peregangan bebas antar-dan intra-molekul O-H [28]. Dalam spektrum PSPA, dua pita karakteristik pada
2931 cm-1 dan 2899 cm-1 dianggap berasal dari getaran peregangan dan getaran lentur masing-masing
C-H2 dan C-H. Pita serapan yang kuat pada 1628 cm-1 dan puncak karakteristik pada 1524 cm-1
dikaitkan dengan getaran lentur cincin aromatik C = C. Puncak karakteristik yang lemah pada 1256 cm-1
ditugaskan untuk peregangan cincin pyran dalam senyawa flavonoid, dan pita penyerapan pada 1048
cm-1 dikaitkan dengan deformasi C-H dari cincin aromatik [29]. Selanjutnya, spektrum untuk pati (S)
menunjukkan puncak penyerapan pada 1637cm-1, yang disebabkan oleh adanya air yang terikat erat.
Pita pada 1161 cm-1 dan 1078 cm-1 dianggap berasal dari peregangan dan pelengkungan ikatan
glikosidik C-O, C-C, O-H dan C-O-C [30]. Dalam spektrum CMC, puncak pada 1019 cm-1 dan 898 cm-1
dikaitkan dengan getaran peregangan simetris C-O-C.

Spektrum FT-IR film SC tidak berubah secara signifikan setelah PSPA ditambahkan, yang disebabkan oleh
rendahnya kandungan ekstrak dalam film [31]. Namun, alasan pergeseran band sekitar 1640cm − 1
dalam film SCA adalah bahwa penambahan PSPA dalam film SC dapat menyebabkan perubahan interaksi
kimia dan fisik antara cincin aromatik anthocyanin dan pati. Dan cincin aromatik membentang, yang
diamati dalam spektrum FT-IR dari film SCA dengan PSPA, menunjukkan bahwa PSPA berhasil
dimasukkan ke dalam matriks CMC / S [21].

_____________________--gambar___________________

3.2.2. Analisis SEM

Gambar SEM yang menunjukkan penampang film indikator ditunjukkan pada Gambar. 3. Penampang
film SC memiliki beberapa kerutan karena sifat tidak tembus cahaya sampai batas tertentu antara pati
dan CMC (ditunjukkan pada gambar oleh lingkaran merah). Sebaliknya, penampang film SCA
menunjukkan bahwa mereka memiliki permukaan yang halus dan homogen, menunjukkan bahwa PSPA
berhasil dimasukkan ke dalam film SC, dan keberadaan PSPA memfasilitasi pencampuran homogen
untuk pati dan CMC dalam film tersebut, dan memiliki kompatibilitas yang luar biasa dengan film SC.
Secara bersamaan, PSPA, CMC dan pati memiliki interaksi yang luas, gugus hidroksil fenolik dalam PSPA
dapat bergabung dengan gugus hidroksil dalam CMC dan pati, sehingga jumlah molekul rantai polimer
menurun dan sifat mekanik ditingkatkan [32]. Selain itu, menambahkan gliserol dapat menghasilkan
kompatibilitas yang lebih baik antara pati dan CMC dengan menyediakan sejumlah ikatan hidrogen antar
molekul (dibentuk oleh gugus hidroksil) di antara mereka [33].

_____________________--gambar___________________

3.2.3. Analisis kalorimetri pemindaian diferensial

Analisis kalorimetri pemindaian diferensial film SCA dilakukan untuk menyelidiki lebih lanjut interaksi
antara semua polimer. Angka. 4 menunjukkan suhu leleh (Tm) yang berbeda. Sampel film SCA dan
semua polimer. Untuk polimer dan film tanpa PSPA, puncak endotermik menunjukkan bahwa film SC,
CMC, dan pati memiliki Tm dari 125,11 ° C, 117,67 ° C, dan 116,49 ° C, masing-masing. Stabilitas termal
film SC ditingkatkan karena adanya hubungan silang antara pati dan CMC. Hasilnya mirip dengan
pengamatan yang dilaporkan oleh Hiaz et al. [34].

Dibandingkan dengan film SC, 0,1, 0,3 film SCA Tm tidak memiliki perbedaan yang signifikan (124,16 ° C,
124,28 ° C), yang disebabkan oleh kandungan PSPA yang rendah. Namun, dengan peningkatan konten
PSPA, nilai Tm 0,5, 0,7 dan 0,9 film SCA lebih tinggi (127,11 ° C -128,81 ° C). Peningkatan suhu leleh
dapat dikaitkan dengan banyak penambahan PSPA, yang dapat menyebabkan penurunan jumlah gugus
hidroksil dalam pati dan CMC dengan membentuk banyak ikatan hidrogen yang kuat antara polimer
[13]. Hasil serupa telah dilaporkan oleh Fintai et al. [35], dan hasilnya juga sesuai dengan yang diamati
dalam analisis FT-IR dan SEM.

_____________________--gambar___________________

3.2.4. Analisis XRD

Difraktogram sinar-X untuk CMC, pati, film SC dan film SCA ditunjukkan pada Gambar. 5. Pati biasanya
menghasilkan tiga jenis pola XRD karena struktur kristalin yang berbeda [36]. Jenis pati pertama (A)
menghasilkan puncak difraksi yang jelas pada sekitar 2θ dari 15 ° dan 23 ° dengan doublet yang belum
terselesaikan pada sekitar 2θ dari 17 ° dan 18 °. Tipe kedua pati (B) memberikan puncak difraksi yang
lebih kuat pada 2θ dari 17.0 °, puncak karakteristik pada 2θ sekitar 5.6 ° dan beberapa puncak kecil pada
2θ sekitar 15.0 °, 20.0 °, 22.0 °, dan 24 ° [37 ] Jenis ketiga pati (C), yang merupakan campuran dari jenis
pati pertama (A) dan kedua (B), memiliki puncak difraksi terkuat pada 2θ dari 17.0 ° dan beberapa
puncak lemah pada 2θ dari 15.0 °, 19.6 ° , 22.1 °, dan 24.0 ° (Gbr. 5), di samping puncak karakteristik
terlemah pada 2θ dari 5.5 °. Hasilnya menunjukkan bahwa bahan tersebut adalah pati tipe kedua (B).
Pola XRD menunjukkan puncak 2θ yang luas sekitar 20.1 °, yang merupakan puncak karakteristik CMC
dan terkait dengan struktur kristalnya.

Puncak karakteristik CMC dan bahan pati tidak diamati dalam pola XRD film SC, menunjukkan bahwa
CMC sangat mudah larut dengan pati, sehingga menyebabkan puncak karakteristik baru, dan daerah
kristal CMC dan bahan pati rusak karena panas dan pengadukan mekanis. Puncak yang luas pada kisaran
2 13 dari 13 ° hingga 21 ° dihasilkan dari sifat amorf CMC atau pati [38]. Puncak karakteristik baru dari
film SCA menjadi lebih kuat, menunjukkan bahwa ikatan hidrogen terbentuk antara gugus hidroksil dari
PSPA, pati, dan CMC [5]. Hasilnya sesuai dengan yang dari analisis DSC dan FTIR. Puncak karakteristik
baru dari film SCA menjadi lebih kuat, menunjukkan kristalinitas film meningkat, yang mungkin
disebabkan oleh pembentukan ikatan hidrogen.

_________________gambar______________

3.2.5. Properti fisik

Sifat fisik film SC dan film SCA, termasuk ketebalan, kadar air, dan sifat mekanik ditunjukkan pada Tabel
1. Ketebalan film meningkat dari 78,82 ± 1,25 hingga 90,55 ± 2,11 μm (p <0,05) dengan peningkatan
jumlah PSPA dari 0% hingga 0,9%. Ini menunjukkan bahwa jumlah PSPA yang lebih besar dapat
menghasilkan matriks yang lebih kompleks antara antosianin dan bahan, sehingga menyebabkan
ketebalan film SCA menjadi relatif lebih tinggi. Dengan peningkatan konten PSPA, TS meningkat dari
13,47 ± 0,28 menjadi 23,69 ± 0,91 MPa (p <0,05) dan EAB menurun dari 26,9 ± 1,47 menjadi 14,1 ± 0,55
MPa (p <0,05). Peningkatan TS film SCA dikaitkan dengan interaksi antar muka yang kuat melalui ikatan
hidrogen antara PSPA (pengisi) dan bahan polimer. Penurunan EAB film disebabkan oleh kekakuan tinggi
anthocyanin tumbuhan alami, yang menahan gerakan rantai polimer, mengurangi fleksibilitasnya [39].
Pengamatan ini konsisten dengan laporan sebelumnya [5]. Isi kelembaban film SC dan film SCA
berkurang secara signifikan dari 22,41% menjadi 13,91% (p <0,05). Jelaslah bahwa antosianin
mengandung banyak gugus hidroksil, sehingga dapat membentuk ikatan hidrogen antar molekul dengan
gugus hidrofilik dalam pati dan CMC.

________________tabel_________________

3.3. Warna film indikator

Warna adalah indeks penting dari penampilan film. Parameter warna (L, a dan b), perbedaan warna total
(△ E), dan foto-foto film dirangkum dalam Tabel 2. Dengan penambahan PSPA, L menurun secara
signifikan dari 75,52 ± 0,13 menjadi 63,85 ± 0,85 (p <0,05). Sebaliknya, peningkatan signifikan dari 6,45 ±
0,06 ke 15,14 ± 0,57 menunjukkan bahwa warna film secara bertahap berubah menjadi merah dan
merah tua (p <0,05). Perbedaan warna total (△ E) juga meningkat secara signifikan (p <0,05), yang
konsisten dengan penampilan film. Dengan meningkatnya jumlah PSPA, transmisi cahaya film menurun,
seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 6. Ketika sejumlah ekstrak antosianin ditambahkan ke polimer,
transparansi film berkurang [40]. Selanjutnya, interaksi elektrostatik antara PSPA, CMC dan pati juga bisa
mengubah struktur kristal film SCA; sebagai hasilnya, itu menyebabkan hamburan cahaya dan refleksi,
sehingga mengurangi transmisi cahaya [41]. Berdasarkan analisis di atas, struktur skematis film
campuran S / CMC dapat dijelaskan, seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 7.

______________--tabel__________-

Nilai-nilai disajikan sebagai rata-rata ± standar deviasi. Perbedaan huruf pada kolom yang sama
menunjukkan perbedaan yang signifikan (p <0,05)

______________tabel dan gambar__________

3.4. Warna film SCA sebagai respons terhadap perubahan pH

Respon warna film SCA dievaluasi dengan merendam film 0,5 SCA dalam larutan dengan pH berbeda
(2,0-12,0). Parameter L, a, dan b, dan foto-foto ditunjukkan pada Tabel 3. Warna-warna dari film 0,5 SCA
adalah merah, pink, ungu, biru, hijau, dan kuning pada kisaran pH 2,0-3,0, 4,0-6,0, 7,0 , 8.0, 9.0-10, dan
11.0-12.0, masing-masing. Selanjutnya, dengan peningkatan pH, nilai penurunan tetapi b meningkat [21,
41]. Ini menunjukkan bahwa warna film 0,5 SCA diubah dari merah menjadi kuning karena larutan
diubah dari asam menjadi basa. Warna antosianin peka terhadap perubahan pH, yang menyebabkan
perubahan struktural: struktur antosianin adalah ion garam kuning dalam larutan asam, diubah menjadi
quinoidal dalam larutan alkali lemah, dan menjadi tidak terstruktur dalam larutan pH tinggi. Ma et al.
[10] melaporkan perubahan warna serupa dari film anthocyanin poli-vinil (vinil alkohol) -chitosan-
mulberry. Karena pembusukan daging terkait erat dengan perubahan pH, film SCA dapat diterapkan
untuk memantau pembusukan.

____________-tabel______________

Values Nilai E dihitung menggunakan film (0,5 SCA) sebagai referensi. Nilai-nilai disajikan sebagai rata-
rata ± standar deviasi. Perbedaan huruf pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan yang signifikan
(p <0,05)

3.5. Respon terhadap amonia film indikator

Untuk mensimulasikan pelepasan gas dasar yang mudah menguap oleh proses pembusukan ikan,
perubahan kolorimetri film dalam menanggapi amonia dipelajari. Setelah film SCA terkena amonia yang
diproduksi oleh larutan amonia (32 mM) pada 25 ° C selama 60 menit, mereka mengalami UV-Vis
pengukuran spektroskopi dan perhitungan perbedaan warna total (△ E). Seperti yang ditunjukkan pada
Gambar. 8a, c, e, g, dan i, perbedaan warna total dari film SCA meningkat secara signifikan seiring waktu.
Itu Film 0.9SCA memiliki perbedaan warna total tertinggi, diikuti oleh film 0.7SCA, 0.5SCA, 0.3SCA, dan
0.1SCA. Ketika waktu untuk film 0.1SCA, 0.3SCA, 0.5SCA, 0.7SCA, dan 0.9SCA secara bertahap meningkat
menjadi 14, 24, 30, 42, dan 54 menit, masing-masing, perbedaan warna total adalah 4,52, 15.08, 20.81,
28,33, dan 34,9, masing-masing, sementara tetap stabil tanpa perubahan yang jelas sesudahnya. Semua
puncak penyerapan awal untuk film SCA diperoleh sekitar 545 nm, seperti yang ditunjukkan pada
Gambar. 8b, d, f, h, dan j. Dengan meningkatnya waktu reaksi, puncak penyerapan maksimum bergeser
dari 545 ke 605 nm, dan warna film SCA diubah dari merah atau merah muda menjadi hijau.

Investigasi pada respon amonia mawar anthocyanin telah menunjukkan bahwa warna film berubah dari
merah menjadi hijau [9, 32]. Hasil ini menunjukkan bahwa mekanisme variasi warna dari film indikator
adalah bahwa NH3 volatisasi pertama dikombinasikan dengan H2O yang terkandung dalam film
indikator untuk membentuk NH3.H2O yang kemudian dihidrolisis menjadi NH4 + dan OH-. OH-
bertanggung jawab atas perubahan warna PSPA, yang selanjutnya menyebabkan perubahan warna film
SCA [32]. Menurut rentang aplikasi film SCA (seperti sensor gas, paket makanan, dan detektor asam-
basa), konten antosianin yang berbeda dapat ditambahkan.

_tabel__________

3.6. Stabilitas warna pada film indikator

Ketika film SCA diterapkan untuk memantau kesegaran daging, penting bahwa mereka memiliki
stabilitas warna yang tinggi. Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa stabilitas antosianin sensitif
terhadap berbagai faktor, seperti kelembaban relatif, suhu, dan pencahayaan antara lain [42, 43].
Gambar 9 menunjukkan perubahan warna film SCA di lingkungan yang berbeda. Film SCA yang disimpan
pada kelembaban relatif 43% memiliki stabilitas yang sangat baik; nilai ΔE mereka lebih rendah dari 3,2
setelah 20 hari penyimpanan. Sebaliknya, film SCA yang disimpan pada 83% kelembaban relatif memiliki
nilai ΔE yang lebih tinggi yaitu 4,3. Selama hari 1 hingga 10, nilai ΔE dari film SCA berubah sangat,
menunjukkan bahwa selama periode ini, ada keseimbangan antara film SCA dan kelembaban di dalam
penyimpanan. Film SCA menunjukkan stabilitas warna yang lebih tinggi ketika disimpan pada -20 ° C
dibandingkan dengan 25 ° C (Gambar 9B1 dan B2), nilai ΔE mereka adalah 3,4 dan 4,9, masing-masing
setelah 20 hari penyimpanan, yang menunjukkan bahwa PSPA mungkin sebagian dioksidasi oleh
oksigen. Mempertimbangkan pencahayaan, peningkatan nilai ΔE dapat diperiksa dalam empat hari
pertama, dan kemudian cenderung stabil, film SCA menunjukkan stabilitas tinggi ketika disimpan tanpa
penerangan. Fenomena ini menggambarkan bahwa PSPA terdegradasi oleh pencahayaan. Nilai ΔE dari
film SCA yang berbeda secara signifikan berbeda (p <0,05), menunjukkan bahwa PSPA dalam film
terdegradasi. Semua nilai ΔE lebih rendah dari 5, sehingga perubahan warna tidak dapat dideteksi
dengan mata telanjang, meskipun PSPA sedikit terdegradasi. Perubahan warna saja terdeteksi secara
visual ketika nilai ΔE lebih besar dari 5 [8]. Temuan ini menunjukkan bahwa film SCA memiliki stabilitas
warna yang relatif tinggi (ΔE <5) pada waktu, kelembaban relatif, suhu, dan pencahayaan yang berbeda.
Kemungkinan kompatibilitas utama antara pati dan CMC melindungi anthocyanin dari teroksidasi
sampai batas tertentu dengan menjebak anthocyanin [27], seperti yang ditunjukkan oleh hasil SEM.
Selain itu, memasukkan PSPA ke dalam film SCA menggunakan ekstrak kasar anthocyanin, yang
mengandung kelompok pigmen bersama (termasuk gula dan asam fenolik), dapat meningkatkan
stabilitas warna anthocyanin [44]. Selain itu, film SCA memiliki kadar air rendah yang dapat menurunkan
hidrasi anthocyanin, sehingga memastikan stabilitas warna mereka (Tabel 1). Zhai et al. [32] telah
menunjukkan bahwa film indikator rosella anthocyanin memiliki stabilitas warna yang baik selama 14
hari pada suhu 4 ° C dan 25 ° C.

___________-tabel______

3.7. Penerapan film indikator dalam memantau kesegaran ikan

Untuk menguji aplikasi praktisnya, film SCA digunakan untuk memantau pembusukan ikan, yang
tercermin sebagai nilai TVB-N. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 10.a, selama 36 jam awal, nilai
TVB-N meningkat dari 6,56 menjadi 15,6 mg / 100 g dan sesudahnya menjadi 21,55 mg / 100 g. Menurut
Standar Cina (GB 2733-2015), batas penolakan nilai TVB-N untuk ikan gurame adalah 20 mg / 100 g. Ini
menunjukkan bahwa sampel ikan menjadi rusak setelah 36 jam penyimpanan. Nilai TVB-N adalah 36,79
mg / 100 g setelah 48 jam penyimpanan, menunjukkan bahwa ikan tersebut benar-benar rusak. Selama
penyimpanan, ikan karbohidrat, protein, dan lemak terurai, dan banyak senyawa nitrogen yang mudah
menguap (amonia dan amina) diproduksi [45]. Selama penyimpanan, penurunan kesegaran ikan
disebabkan oleh pertumbuhan mikroba dan lainnya reaksi biokimia. Evaluasi mikroba dan nilai pH
sampel ikan pada suhu 25 ° C ditunjukkan pada Gambar 10b. Umumnya, 7 lg CFU / g untuk TPC dianggap
sebagai penerimaan yang lebih tinggi untuk produk ikan. TVC ikan awal adalah 1,7 lg CFU / g,
menunjukkan bahwa sampel ikan dalam kualitas yang baik.

TVC mencapai dan kemudian melebihi 7 lg CFU / g setelah 36 jam untuk sampel ikan dengan nilai 7.3lg
CFU / g, dan kemudian mencapai 8,5, pada 48 jam. Nilai pH awal ikan adalah 6,38 yang meningkat secara
bertahap selama penyimpanan pada 25 ° C. Hasil ini mirip dengan temuan yang dilaporkan dalam
penelitian sebelumnya [20].

Perubahan warna film SCA ditunjukkan pada Tabel 4. Film 0,1 SCA awalnya memiliki warna merah muda,
yang kemudian berubah menjadi ungu pada 24 jam dan ungu kebiruan setelah 48 jam pada 25 ° C,
valuesE nilai film dari 5,24 ± 0,34 hingga 14,66 ± 0,56 (seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 10.c).
Merah muda awal warna film SCA 0,3, 0,5, 0,7, dan 0,9 berubah menjadi ungu pada 24 jam dan biru
pada 48 jam, nilai ΔE mereka adalah 16,81 ± 1,11, 24,55 ± 0,21, 26,51 ± 0,21 dan 26,25 ± 1,12, masing-
masing setelah 48 jam. Film SCA menunjukkan nilai ΔE yang tinggi selama penyimpanan ikan yang
menunjukkan Carboxymethyl-cellulose dan pati adalah dukungan imobilisasi yang tepat untuk
pembuatan indikator PSPA [18]. Perubahan warna menunjukkan bahwa film SCA menjadi lebih
mendasar karena peningkatan nilai TVB-N. Namun, nilai TVB-N untuk ikan mas rumput lebih dari 20 mg /
100 g dan warna biru film SCA menunjukkan bahwa ikan mas rumput telah rusak. Hasil ini konsisten
dengan perubahan warna larutan PSPA pada pH yang berbeda, dan perubahan warna film SCA dari
merah muda menjadi ungu dan kemudian menjadi biru. Selama deteksi kesegaran ikan, warna film SCA
terus berubah. Namun, perubahan warna dari film 0,1 SCA tidak jelas dibandingkan dengan mereka film
SCA lainnya. Huang et al. [5] mengamati bahwa perubahan warna film indikator terlihat ketika mereka
mengandung konten anthocyanin yang sesuai: perubahan warna tidak signifikan ketika konten seperti
itu rendah. Namun, jumlah komponen yang berlebihan dapat menyebabkan peningkatan waktu reaksi
yang menyebabkan film lebih lambat menunjukkan perubahan warna. Hasil ini menunjukkan bahwa film
SCA yang mengandung konten antosianin yang sesuai menguntungkan untuk memantau kesegaran ikan
secara real-time melalui perubahan warna.

_______tabel_______

3.8. Korelasi antara indeks kesegaran sampel ikan dan ΔE

Korelasi (R) antara ΔE dari film SCA dan TVC, TVB-N pada ikan selama penyimpanan pada 25 ° C seperti
yang ditunjukkan pada Gambar 11. Hasil ini menunjukkan bahwa film SCA sensitif terhadap parameter
kesegaran ikan gurame. Korelasi yang kuat dan positif diperoleh antara nilai ΔE dari 0,5, 0,7SCA film dan
TVB-N (R = 0,9652 dan 0,9606) dan konten TVC (R = 0,9907 dan 0,9941) dalam sampel ikan mas, masing-
masing. Selain itu, model linier ditentukan dan menunjukkan kecocokan tinggi (R2 = 0,9191, 0,9752,
0,8969, 0,9843). Moradi et al. [20] telah ditemukan bahwa hubungan yang kuat antara nilai perbedaan
warna total indikator pengindraan pH dan perubahan TVC dan TVB-N dari rainbow trout dan sampel
ikan mas pada suhu 4 ° C.

_____________tabel_________________
4. Kesimpulan

Dalam penelitian ini, film indikator SCA dibuat dari ubi jalar ungu anthocyanin, pati dan karboksimetil-
selulosa. Spektra FTIR dari film menunjukkan bahwa PSPA berhasil dimasukkan ke dalam matriks CMC /
S, di mana interaksi baru antara polimer dan PSPA dihasilkan. Difraksi sinar-X dan analisis SEM
menunjukkan bahwa PSPA sangat mudah larut dengan film berbasis CMC / S, dan struktur kompak
terbentuk. Penambahan PSPA meningkatkan nilai TS dan ketebalan, sementara menurunkan nilai EAB,
kadar air dan laju transmisi cahaya film. Uji stabilitas warna pada berbagai kondisi menunjukkan bahwa
warna film SCA stabil selama 20 hari penyimpanan. Selain itu, film-film itu sangat sensitif terhadap
amonia. Hasil uji coba aplikasi menunjukkan bahwa film SCA dapat digunakan untuk memantau
kesegaran ikan secara real-time, dan perubahan warna film terkait dengan titik di mana ikan menjadi
rusak. Film SCA yang dikembangkan tidak beracun dan dapat terurai secara hayati dan memberikan
respons warna yang terlihat; karenanya, mereka berpotensi digunakan sebagai kemasan cerdas yang
tidak merusak, ramah lingkungan yang dapat dengan aman dan nyaman memantau pembusukan ikan
secara real time.