Keterlibatan fermentasi asam laktat dalam karakteristik fisikokimia dan degradasi protein ikan Plaa-som, ikan Thailand
yang difermentasi yang dihasilkan dari duri perak biasa (Barbonymus gonionotus), diselidiki. pH Plaa-som berangsur-
angsur menurun menjadi 5,16 setelah 120 jam fermentasi. Sebaliknya, keasaman Plaa-som yang dapat dititrasi dengan
cepat meningkat dan mencapai puncak 0,73% (b/b) setelah 48 jam kemudian sedikit menurun. Konsentrasi asam laktat
ditingkatkan menjadi 2,13% (b/b) setelah 120 jam. Sejumlah kecil asam organik lain seperti asetat, sitrat, suksinat, dan
asam format juga terdeteksi. Kandungan peptida menunjukkan kecenderungan meningkat sementara konsentrasi protein
menunjukkan kecenderungan menurun. Degradasi protein juga diamati menggunakan elektroforesis. Aktin dan
tropomiosin terdegradasi masing-masing setelah 96 dan 120 jam. Secara bersamaan, protein kecil 18 dan 21 kDa
terdeteksi antara 24 dan 48 jam dan akhirnya terdegradasi setelah 72 jam, menunjukkan degradasi lengkap. Oleh karena
itu, produk yang terdegradasi, seperti protein kecil dan peptida, dapat mengarah pada pengembangan area promosi kesehatan untuk peptida f
Kata kunci: Sifat fisikokimia, Degradasi protein, Plaa-som, Fermentasi spontan, Fermentasi ikan,
Barbonymus gonionotus
IPC Int. Cl.8 : A61B 5/00, C07K, A23J, C12N 1/00, C12P 21/00, A21, A23, A47J27/00, A47J 37/00, A23L 1/325, A22C
25/00
Silver barb atau java barb memiliki nama ilmiah yang kantong plastik yang dibungkus sampai rasa asam
sama Barbonymus gonionotus Bleeker1 Umumnya, . dikembangkan oleh mikroorganisme Bakteri
asli4asam
. laktat
ikan air tawar ini, yang secara lokal bernama Plaa-ta- (BAL) terutama ditemukan sebagai spesies bakteri
pien, didistribusikan dan dikonsumsi di antara negara- dominan ketika fermentasi telah berlangsung6,7,8. BAL
negara Asia Tenggara terutama negara-negara cekungan ini memanfaatkan karbohidrat yang tersedia dalam resep
Mekong seperti Kerajaan Kamboja, Laos Republik dan menghasilkan asam organik terutama asam laktat
Demokratik Rakyat, Kerajaan Thailand, dan Republik sebagai bagian dari metabolitnya . BAL selama .
Sosialis Vietnam1 . Ini banyak fermentasi spontan telah diteliti7 . Eksploitasi BAL ini
digunakan sebagai fillet ikan dalam sup rebus (Tom- sebagai kultur starter dapat menghasilkan pengembangan
2-4 .
yam) atau ikan fermentasi (Plaa-som, Som-fug dan Som-plaa) produksi inovatif untuk fermentasi yang dipercepat,
Plaa-som dan jenis ikan fermentasi lainnya telah pengembangan rasa yang lebih baik, dan keamanan
mendapatkan popularitas karena nilai gizinya yang dalam makanan fermentasi10,11. Perubahan fisik, dan
tinggi dari protein ikan serta karakteristik aroma dan kimia selama fermentasi ikan telah banyak
rasa yang unik2,5. Produk fermentasi ini dikonsumsi dipelajari5,12,13. Degradasi protein biasanya terdeteksi
terutama di Timur Laut Thailand4 Produksi Plaa-som . selama fermentasi. Pembentukan produk yang
dicapai dengan kombinasi ikan utuh segar, dibersihkan, dihasilkan, seperti protein kecil, peptida dan asam
dibuang isi perutnya dan bersisik dengan garam, nasi amino, juga dapat mempengaruhi perkembangan tekstur
atau ketan, dan bawang putih. Ikan kemudian dibiarkan dan rasa14,15,16. Karena mengandung protein otot ikan
terfermentasi dengan rapat
——————
*Penulis yang sesuai
Machine Translated by Google
CHADONG et al.: DEGRADASI FISIKAKOKIMIA DAN PROTEIN SELAMA FERMENTASI PLAA-SOM 221
protein myofibrillar konsentrasi tinggi dan protein sisik, belah sepanjang kedua sisi batang, dan cuci
stroma konsentrasi rendah, protein ini mudah larut bersih dengan air keran bersih beberapa kali (Gbr. 1B).
dalam garam dan air17. Selama fermentasi, proteolisis Selanjutnya, ikan yang sudah disiapkan direndam dalam
disebabkan oleh enzim endogen pada otot ikan maupun larutan air garam 20% (b/v) selama kurang lebih 2 jam
dari mikroorganisme16,18,19 . (Gbr. 1C). Itu kemudian dibilas sekali, dan air garam
Namun, sedikit yang diketahui mengenai proses yang berlebihan dikeringkan. Selanjutnya, ikan yang
degradasi protein otot selama fermentasi Plaa-som . baru disiapkan ini dicampur dengan bahan lain (Gbr.
Penelitian ini bertujuan untuk mengkaji keterlibatan 1D). Secara umum, Plaa-som dibuat dengan
fermentasi spontan pada beberapa karakteristik mencampurkan ikan yang telah disiapkan dengan 5%
fisikokimia dan degradasi protein ikan selama produksi (b/b) bawang putih yang baru dihaluskan, 10% (b/b)
Plaa-som . beras melati kukus dan sukrosa 0,5%. (b/b)4 Setelah
semua bahan dicampur dengan ikan yang baru
Metodologi disiapkan, ikan dikemas ke dalam kantong plastik dan
Bahan kimia ditekan untuk mengeluarkan sebagian besar udara
Amonium persulfat, 30% (b/v) larutan Acrylamide/ sebelum ditutup dengan karet gelang (Gbr. 1E).
Bis acrylamide, Coomassie Brilliant Blue R-250, ÿ- Kemudian, ikan dimasukkan ke dalam kotak plastik
mercaptoethanol, sodium dodecyl sulfate, N, N, N', N'- yang ditutup dengan tutup ulir dan dibiarkan
tetramethylenethyl-enediamine, reagen fenol Folin terfermentasi pada suhu 30ºC. Fermentasi dilakukan
Ciocalteu, albumin serum sapi dan tirosin dibeli dari selama 120 jam, dan sampel diperoleh pada langkah-
Sigma-Aldrich Co. langkah berikut dengan tiga ulangan, ikan segar dari
LLC (St. Louis, Missouri, AS). Bahan kimia lainnya pasar, ikan segar dicampur dengan semua bahan (ikan yang diferme
adalah kelas analitis.
Penentuan pH dan keasaman yang
Persiapan Plaa-som dapat dititrasi Sampel Plaa-som 5,0 gram dikumpulkan
Thai silver barb (Barbonymus gonionotus) ukuran dari setiap titik pengambilan sampel, dihomogenisasi
300 - 400 gm dibeli dari pasar lokal (Khon Kaen, dengan 45 ml air suling bebas CO2, dan disaring melalui kain kasa.
Thailand). Kesegaran sampel ikan dipertahankan Filtrat langsung ditentukan dengan menggunakan pH meter.
dengan pengangkutan cepat di atas es ke laboratorium Keasaman yang dapat dititrasi (TA) dalam bentuk
dalam waktu 30 menit, dan sampel segera disiapkan ekuivalen asam laktat ditentukan dengan menggunakan
(Gbr. 1A). Ikan itu dimusnahkan, titrasi. Filtrat dititrasi dengan 25 mM NaOH dengan
larutan fenolftalein sebagai indikator20 .
Penentuan konsentrasi asam organik
Konsentrasi asam organik ditentukan dengan
menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC).
Sampel Plaa-som sebanyak 5,0 gram dikumpulkan dari
setiap titik pengambilan sampel, dihomogenisasi
dengan 25 ml air suling steril bebas CO2 dan
disentrifugasi pada 3.000 × g selama 15 menit. Protein
dalam supernatan diendapkan dengan asam perklorat
0,5 M dengan perbandingan 1:1. Campuran dibiarkan
pada suhu kamar selama 5 menit, dan kemudian
disentrifugasi pada 10.000 × g selama 10 menit untuk
menghilangkan semua endapan. Untuk menghilangkan
lemak, petroleum eter ditambahkan ke supernatan
dengan perbandingan 1:1. 2,0 ml fase bawah
dikumpulkan dan disesuaikan menjadi 10 ml dengan
penambahan 0,1% (v/v) asam fosfat. Campuran
Gambar 1—Penyiapan ikan segar Plaa-som (A); (B) ikan olahan; (C) ikan kemudian dikumpulkan dan disaring melalui kertas saring (Whatman
yang telah disiapkan direndam dalam larutan air garam 20% (b/v); (D)
Sebelum analisis HPLC, 20 µl filtrat disuntikkan ke
pencampuran ikan olahan dengan bahan-bahan; (E) ikan yang sudah
disiapkan dengan bahan-bahan dikemas ke dalam kantong plastik dalam sistem HPLC Shimadzu, termasuk
Machine Translated by Google
Pompa LC-10 AD, detektor SPD-10A, kolom HPLC dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak
VertiSep OA 8 µm, kolom 7,8 × 300 mm, dan komputer statistik SPSS, versi 19.0 (SPSS Inc., Chicago, Illinois,
dengan program perangkat lunak analisis data (Solusi USA). Hasilnya dinyatakan sebagai rata-rata ± standar deviasi.
LC 45). Sampel dianalisis dalam mode isokratik pada 0,3
ml/menit menggunakan asam sulfat 1,0 mM sebagai fase hasil dan Diskusi
gerak. Temperatur kolom dijaga tetap pada 40°C. Asam Karakteristik fisikokimia Plaa-som Initial
laktat, asetat, sitrat, suksinat, dan format digunakan pH dan TA ikan yang disiapkan masing-masing adalah
sebagai standar eksternal . 6,73 dan 0,14% (b/b). Selama inkubasi, pH Plaa-som
Penentuan kandungan protein dan peptida berangsur-angsur menurun dari 6,36 menjadi 5,16 setelah
120 jam fermentasi. Profil pH ini konsisten dengan
Sampel Plaa-som sebanyak 5,0 gram karakteristik Plaa-som yang disarankan menurut standar
dikumpulkan dari setiap titik pengambilan sampel
produk komunitas Thailand21. Umumnya, pH dianggap
dan dihomogenisasi selama 5 menit dalam 10 ml
sebagai faktor penunjuk untuk memastikan keamanan
air suling steril menggunakan blender dengan
produk fermentasi3,4. Selain itu, TA Plaa-som meningkat
kecepatan penggilingan konstan 1.000 rpm.
secara ekstensif dan mencapai puncak 0,73% (b/b)
Campuran selanjutnya disaring melalui kain kasa
setelah 48 jam kemudian sedikit menurun (Gbr. 2).
dan kertas saring (Whatman No. 4). Untuk
menghilangkan kotoran partikulat, filtrat kemudian
Tingkat TA yang tinggi terutama terkait dengan
disentrifugasi pada 10.000 × g selama 15 menit
asam organik utama seperti asam laktat, yang
pada suhu 4°C. Jumlah supernatan disesuaikan
diproduksi melalui fermentasi dan terus
menjadi 10 ml dengan penambahan 25 mM buffer terakumulasi menjelang akhir fermentasi. Ada
natrium fosfat (pH 7,0). Supernatan ini disimpan
beberapa faktor yang mempengaruhi keasaman
pada -20 ° C sampai digunakan dalam percobaan.
Plaa-som. Itu mungkin tergantung pada
Kandungan protein supernatan ditentukan
pertumbuhan, aksi fermentasi dari mikroorganisme
menurut metode Lowry, menggunakan albumin
fermentasi, jenis, dan jumlah bahan yang tersedia
serum sapi sebagai standar. Kandungan peptida
dalam resep5,6,9 . Misalnya, TA Plaa-som dari
dihitung menggunakan metode yang dimodifikasi menurut laporan sebelumnya. Supernatan diendapkan dengan as
ikan nila merah Thailand terdeteksi pada kisaran
Sentrifugasi dilakukan pada 10.000 × g selama 10 menit.
1,6 hingga 2,3% (b/b) setelah 120 jam fermentasi,
Kemudian, 0,2 ml supernatan ditambahkan dengan 1,0
yang berada pada tingkat yang lebih tinggi daripada tingkat y
ml Na2CO3 0,4 M, dan 0,2 ml reagen fenol Folin Ciocalteu
Demikian juga, TA Som-fug telah dilaporkan berada di
ke dalam campuran. Jumlah peptida dinyatakan sebagai
kisaran 1,4 sampai 2,5% (b/b) setelah 72 jam fermentasi3,9.
tirosin Selanjutnya, jumlah asam laktat terus ditingkatkan
isi.
menjadi 2,13% (b/b) setelahnya
Elektroforesis gel natrium dodesil sulfat–poliakrilamida (SDS–
PAGE)
Supernatan dicampur dengan buffer sampel (0,125 M
Tris-HCl, pH 6,8, 4% SDS, 3,5% ÿ-mercaptoethanol, 10%
gliserol, dan 0,005% bromophenol blue) dengan
perbandingan 1:1. Gel pemisah 10% dengan gel susun
5% digunakan, dan alikuot 10 µl disuntikkan di setiap
sumur. Elektroforesis dilakukan pada 100-120 V. Setelah
elektroforesis, gel diwarnai dengan larutan Comassie
Brilliant Blue dan kemudian didestain menggunakan
metanol 40% dan asam asetat 10%.
Analisis statistik
Perbedaan rata-rata data dievaluasi dengan uji jarak
Gambar 2—Profil pH dan keasaman yang dapat dititrasi selama
berganda Duncan. Signifikansi perbedaan dinilai secara
fermentasi Plaa -som (ÿ), pH; (O), keasaman yang dapat
statistik menggunakan analisis varians (ANOVA). Analisis dititrasi; bar menunjukkan standar deviasi. Nilai dengan
statistik adalah perbedaan huruf pada gambar berbeda nyata (p < 0,05).
Machine Translated by Google
CHADONG et al.: DEGRADASI FISIKAKOKIMIA DAN PROTEIN SELAMA FERMENTASI PLAA-SOM 223
120 jam fermentasi (Gbr. 3). Demikian pula, asam laktat Proteolisis Plaa-som dalam penelitian ini terjadi pada
ditemukan sebagai asam organik utama selama fermentasi fermentasi pada suhu 30°C karena konsentrasi protein
antara 1,9 dan 3,0% (b/b) di Suan-yu, ikan fermentasi terus berkurang menjadi 8,52 mg/gm setelah 120 jam
tradisional Tiongkok22 . Som-fug dilaporkan mengandung fermentasi. Hasil ini juga didukung oleh peningkatan
asam laktat 2,4 hingga 2,5% (b/b)23 . kandungan peptida menjadi 1,95 µmol/gm selama
Sejumlah kecil asam organik lainnya, seperti asam asetat, fermentasi. Kejadian ini juga terdeteksi pada berbagai
sitrat, suksinat, dan format, juga terdeteksi selama jenis ikan fermentasi3,16,18. Misalnya, peningkatan
fermentasi Plaa-som , seperti yang tercantum pada Gambar. 3. kandungan peptida yang larut dalam TCA berkorelasi
Asam-asam organik ini, khususnya asam laktat, dengan penurunan
bertanggung jawab atas cita rasa produk5 . Jadi, asam kandungan nitrogen non protein pada sosis ikan mas sliver24 .
laktat merupakan produk yang dihasilkan dari aktivitas Beberapa penelitian menunjukkan bahwa tidak hanya
fermentasi BAL melalui pemecahan bahan yang protease endogen otot, seperti calpain dan cathepsin,
mengandung karbohidrat dalam Plaa-som4,6,8 . tetapi juga protease mikroba berkontribusi terhadap
degradasi protein ikan16,18. Protein otot juga dapat
Degradasi protein ikan selama fermentasi dimanfaatkan sebagai sumber nitrogen potensial untuk
Degradasi protein ikan dan pembentukan peptida selama pertumbuhan mikroba dan proses pematangan18 .
fermentasi ditampilkan pada Gambar 4. Oleh karena itu, efisiensi fermentasi sangat bergantung
pada kaskade reaksi proteolitik yang terjadi selama
pertumbuhan mikroba dan fermentasi.
CHADONG et al.: DEGRADASI FISIKOKIMIA DAN PROTEIN SELAMA FERMENTASI PLAA-SOM 225
referensi khusus untuk Thailand: Cakupan untuk peningkatan ikan fermentasi yang dihasilkan dengan dua metode, Perikanan
mereka, Int J Food Microbiol, 75 (3) (2002) 231-239. Sci, 78 (5) (2012) 1125-1136.
3 Riebroy S, Benjakul S, Visessanguan W, Kijrongrojana K & Tanaka 15 Zeng XF, Xia WS, Jiang QX & Yang F, Pengaruh biakan starter asli
M, Beberapa karakteristik som-fug komersial yang diproduksi di pada karakteristik mikrobiologis dan fisika-kimia dari Suan yu,
Thailand, Food Chem, 88 (4) (2004) 527-535. ikan fermentasi rendah garam Cina tradisional. Pengawasan
Pangan, 33 (2) (2013) 344-351.
4 Kopermsub P & Yunchalard S, Indeks kendali keamanan untuk plaa-
som, produk ikan fermentasi Thailand, Afr J Microbiol Res, 2 16 Nie X, Lin S & Zhang Q, Karakterisasi proteolitik dalam sosis ikan
(2008) 18-25. mas yang diinokulasi dengan Lactobacillus plantarum dan
5 Riebroy S, Benjakul S & Visessanguan W, Properti dan penerimaan Pediococcus pentosaceus, Food Chem, 145 (2014) 840-844.
som-fug, daging ikan cincang Thailand, diinokulasi dengan
starter bakteri asam laktat, LWT-Food Sci Technol, 41 (4) (2008) 17 Benjakul S, Seymour TA, Morrissey MT & An H, Perubahan
569-580. fisikokimia pada protein otot kapur sirih pasifik selama
6 Paludan-Müller C, Madsen M, Sophanodora P, Gram L & Møller PL, penyimpanan es, J Food Sci, 62 (4) (1997) 729-733.
(2002) Fermentasi dan mikroflora plaa- som, produk ikan 18 Kasankala LM, Xiong YL & Chen J, Aktivitas enzimatik dan
fermentasi Thailand yang dibuat dengan konsentrasi garam produksi senyawa flavor pada pasta ikan mas perak terfermentasi
berbeda, Int J Food Microbiol, 73 (1) ( 2002) 61-70.
yang diinokulasi dengan biakan starter douchi. J Agr Food
Chem, 60 (1) (2012) 226-233.
7 Kopermsub P & Yunchalard S, Identifikasi bakteri asam laktat yang
19 Zeng XF, Xia WS, Jiang QX & Yang F, Sifat kimia dan mikroba dari
berasosiasi dengan produksi plaa-som, produk fermentasi ikan
produk ikan utuh fermentasi rendah garam tradisional Cina
tradisional Thailand, Int J Food Microbiol, 138 (2010) 200–204.
Suan yu, Kontrol Makanan, 30 (2) (2013) 590-595.