♣ SAPOGENIN STEROID

►Sejarah perkembangan obat menunjukkan 3

cara pembuatan ; (i) isolasi, (ii) sintesis, (iii)
semisintesis

►Ilustrasi : isolasi 1000 mg kortison dibutuh-

kan dibutuhkan ± 1000 Kg ginjal sapi, rata-
rata berat ginjal sapi 10 – 20 g / buah

►Cara termurah adalah cara semisintesis, mula

dicoba mengubah asam empedu, ditemui
kesulitan dan membutuhkan bahan awal
lebih banyak
• Tahun 1935 Russel E.Marker meneliti
bahan bahan murah & mudah didapat
• Tahun 1939 menemukan struktur sapo-
genin steroid yang betul
• Russel E.Marker menemukan prosedur
mengubah sapogenin steroid ----- preg-
nadienon, prosedur kerja DEGRADASI
MARKER
• Tahun 1939 – 1942, menemukan sum-
ber sapogenin steroid Dioscorea com-
posita (barbasco) dan D.macrostachya
(cabeza de negro) dikenal “The Mexican
Yams”
BEBERAPA PENEMU STRUKTUR
SAPOGENIN STEROID
H2
C O
C CH2
C4H8O
C
H2 O
CH3

WINDAUS 1935 SIMPSON + JACOBS 1935

O O
O

TSCHECHE + HAGEDORN 1935 MARKER + ROHRMAN 1939

 BEBERAPA USAHA MEMBUAT OBAT
STEROID
• Ahli Searle menemukan prosedur mikro-
biologi ----- mengkonversi kolesterol, si-
tosterol, stigmasterol atau 17 – Alkil ste-
rol ----- 17 – on Steroid
• Progesteron oksidasi mikrobiologi -----
11 a – hidroksiprogesteron ----- kortison
dan hidrokortison
• Oksidasi mikrobiologi kolesterol, sito-
sterol, diosgenin ----- 1,4-androstadien-
3,17 dion ----- pirolisis ----- estrogen
• Reduksi 3,O-metilestradiol, hasil dihidro-
lisis ----- 19-Nortestosteron
• Diosgenin, kolesterol ----- 19-metil andro-
stan ----- oksidasi ----- 19-Norsteroid
• Diosgenin, kolesterol, oksidasi mikrobio-
logi ----- testosteron
• Diosgenin ----- 3b-asetoksi-5-androsten-
17-on ----- spironolakton
SITOSTEROL
STIGMASTEROL 17-ON STEROID STEROID
17-ALKIL STEROL

OKSIDASI
MIKROBIOLOGI

HEKOGENIN 11a-HIDROKSI KORTISON

PROGESTERON PROGESTERON HIDROKORTISON

KOLESTEROL OKSIDASI
SITOSTEROL 1,4-ANDROSTADIEN-3,17-DION
DIOSGENIN MIKROBIOLOGI

ESTROGEN
19-METILANDROSTAN 19-NORSTEROID OKSIDASI
(19-NORTESTOSTERON)
OKSIDASI

3-O-METILESTRADIOL REDUKSI

3b-ASETOKSI-5-
DIOSGENIN ANDROSTAN-17-ON SPIRONOLAKTON
 STEROID ALAM

BENTUK GLIKOSIDA BEBAS

STEROLIN KARDIOAKTIF

-Kocok dengan air ---- busa

SAPONIN -Hemolisis butir darah merah
- Hidrolisis asam

GULA AGLIKON SAPOGENIN

TRITERPENOID STEROID

TRITERPEN STEROL
 PEMBAGIAN SAPOGENIN STEROID
SAPOGENIN STEROID
ALAM (C-27)

CABANG TANPA - N CABANG DENGAN - N

NON-SPIROSTAN SPIROSOLAN NON-SPIROSOLAN

SPIROSTAN SOLASODAN TOMATIDAN

O HN

O O ON
H
 TURUNAN STEROID YANG BANYAK DIGUNAKAN
O
C CH2
A. GOLONGAN GLUKOKORTIKOID
a. Turunan 4-Pregnen-3,20-Dion

Nama Generik 6-C 9-C 11-C 17-C 21-C

α α β α β α
Kortison H H C=O H H OH OH
Hidrokortison H H OH H H OH OH

Fludrokortison H F OH H H OH OH

Medrison CH3 Cl OH H H H H
 O
b. Turunan 1,4-Pregnadien-3,20-Dion C CH2

Nama Generik 6-C 9-C 11-C 17-C 24-C

α α β α β α
Prednison H H =O H OH OH
Prednisolon H H OH H H OH OH
Meprednisolon CH3 H OH H H OH OH
Dexamethason H H OH CH3 H H OH
Betamethason H F OH H CH3 OH OH
Triamcinolon H F OH H H OH OH
Fluocortelon F H OH CH3 H OH OH
Fluorometolon CH3 F OH H H OH H
 O
B. GOLONGAN KONTRASEPTIK C CH3

a. Turunan Progesteron

Nama Generik 10 - C 17 - C Tambahan

β α
Progestin -CH3 H -COCH3
Dydrogesteron -CH3 H H
Magesterol Asetat -CH3 -OCOCH3 6-CH3
Hidroksi Progesteron Kaproat -CH3 H OCO(CH2)4CH4

Ethisteron -CH3 -C≡CH -OH

Noretindrone H -C≡CH -OH 19-Nor CH3
Ethynodiol Diasetat H -C≡CH -OH
Ethinylestrenol H -C≡CH -OH cincin A aromatik

Norgestrol H -C≡CH -OH 13-C2H5

Dimethisterone H -C≡CH -OH 6-CH3
Norethynodrel Δ6 -C≡CH -OH
b. Turunan Estron

Nama Generik 3-C 17 - C

a b

Estron -OH C=O

Estradiol -OH H -OH

Ethinyl astradiol-3-O-Methyl -OH C≡CH -OH

17-Ethinyl Estradiol (Mestranol) -O-CH3 C≡CH -OH

C. GOLONGAN ANDROGENIK OH
Turunan 17b-Hidroksi Androstan

Nama Generik 5-C 9-C 11-C 17-C

Testosteron H H H
Metil Testosteron H H CH3
Fluoxymesteron FH H CH3
Mesterolon 5-H H OH H
Methandostenolone H H CH3
Nondrolon (Durabolin) H 10-Nor CH3
D. GOLONGAN MINERALOKORTIKOSTEROID
Turunan Aldosteron
O
OH
C CH2OH
CH
H
H

H
O

E. GOLONGAN ANTAGONIS MINERALOKORTIKOSTEROID

Turunan Spironolakton O

CH3

O S C CH3
O
 SUMBER SAPOGENIS STEROID ALAM

Sapogenin / Tanaman asal Tempat tumbuh

Diosgenin
Dioscorea sylvatica Transvaal & Nepal
D. composita Amerika Tengah
D. mexicana Mexico
D. deltoidea India
D. prazeri India
D. tokoro Japan
D. hispidus, costus Indonesia
Trillium sp Amerika Utara
Trigonella foenum-graecum India, Mesir & Maroko
 Sapogenin / Tanaman asal Tempat tumbuh
Hekogenin
Agave sisalana Amerika Subtropis
Hechtia texensis Amerika Tengah
Sarsapogenin
Yucca sp Amerika Tenga
Smilax sp
Sarmentogenin
Strophanthus sp Afrika
Solasodin
Trigonella foerum-graecum Indonesia
Solanum macrantum Indonesia
Solanum khasianum Indonesia
 CIRI-CIRI SAPOGENIN STEROID

• KELOMPOK STEROID C-27,TERIKAT SEBAGAI

GLIKOSIDA
• BERBUSA DENGAN AIR, MEMECAH BUTIR
SEL DARAH, RACUN IKAN (MAMALIA TIDAK
MENGABSORPSI SAPOGENIN STEROID)
• CINCIN CABANG SPIROKETAL DAN SPIRO-
AMINOKETAL TERIKAT PADA ATOM C-16 DAN
C-17 DENGAN KEDUDUKAN b
• BIDANG CINCIN F TERLETAK TEGAK LURUS
PADA BIDANG CINCIN E
 KERANGKA INTI SAPOGENIN STEROID
• Kerangka inti perhidrosiklopentanofenantren, dengan
subtituen metil angular pada atom C-10 dan C-13
• Fusi cincin D/C dan C/B selalu berkonfigurasi trans,
cincin A/B bisa berfusi sis atau trans
• Inti perhidrosiklopentanofenantren, dibuktikan dengan
didehidrogenasi katalisator selenium menghasilkan
hidrokarbon Diels
O

H2 / Se
 CINCIN CABANG SAPOGENIN STEROID
• Golongan spirostan bila didehidrogenasi -----
keton delapan atom karbon + hidrokarbon Diels
• Reaksi hidrogenasi, brominasi dan reduksi Cle-
mensen ----- petunjuk cincin cabang adalah
keton yang terikat sebagai spiroketal
• Gugus spiroketal E (tetrahidrofuan) terikat
langsung pada kerangka inti steroid pada atom
C-16 dan C-17 ----- oksidasi ----- asam etio (allo)
bilianat
• Cincin F dibuktikan sebagai tetrahidropiran -----
pemanasan 200o dengan anhidrida asetat -----
furostan – 26 – ol asetat
• Cincin E dan F dihubungkan C-22 sebagai ika-tan spiro
----- mungkin a (seri 22R) atau b (seri 22S) ---- belum
dapat dibukitkan dengan reaksi kimia
O

O COOH

COOH

SAPOGENIN STEROID ASAM ETIO (ALLO) BILIANAT

O
OAc
o
200 C O
O

Ac2O

SAPOGENIN STEROID 3b,26-DIASETOKSI-20,22

FUROSTAN
 OH
HIDROKARBON DIELS
O
C8H16 +O KETON
OH
O H2
dehidrogenasi

CrO3

Br2 O
HOOC
O

O
O
Br2
 STRUKTUR (25x) – 5x – SPIROSTAN
O
21 26 25
22
F
18 20 23
12 E 27
O
24
17
19 11 13 16
C D
1 9 14
15
2
10 8
A B H
5
3 7

4 H 6
 NOMENKALTUR SAPOGENIN STEROID
• BERDASAR INTERNATIONAL UNION of PURE and
APPLIED CHEMISTRY (IUPAC) dan INTERNATIONAL
UNION of BIOCHEMISTRY (IUB)
1. Nama spirostan untuk struktur di atas, yaitu 16,22-
22,26 – diepoksi kolestan
2. Subtituen pada kerangka inti dibawah bidang diberi
prefiks (indeks) a, dan tidak diketahui x (psi)
3. Konfigurasi C-16 dan C-17 jika berbeda untuk spiro-
stan diberi petunjuk 16 b (H) dan 17 b (H)
4. Konfigurasi pada atom C-20 dan C-22, jika berbeda
dengan struktur di atas, digunakan aturan sikuen
(aturan R – S), kalau belum diketahui ditandai x
5. Subtituen pada cincin F (C-23, C-24, C-25 atau C-26)
dijelaskan kedudukannya dengan aturan sikuen,
belum diketahui ditandai x
6. Cincin F biasa digambarkan sebagai konfigurasi
kursi ----- menggambarkan konfigurasi C-22,
spirostan alam ditetapkan 20S dan 22R)

H H CH3
H O O
21 26 25 21 26 25
22 22
18
18 20 23 CH2OH 20
H
23 H
12 H 12
O 24
O 24
17 16 17 16
OH 19 11 13 19 11 13
Br
H 1 H H 1 9
H 14
H
9 14
15 15
2 2
10 8 10 8
H H H H 5
H
5 3
3 7 7
HO HO
6 4 6
4
H H

(25S) - 5 b - SPIROSTAN - 1 b, 3 b, 27 TRIOL (24R) - BROMO - (25R) - 5 b - SPIROSTAN - 3 b - OL

 SAPOGENIN STEROID ALAKLOIDA BELUM DITETAP
KAN, BEBERAPA NAMA YANG BIASA DIGUNAKAN

1. Nama induk 27 – azaspirostan untuk cabang cincin

spiroaminoketal
2. Ketentuan lain mengikuti aturan spirostan
3. Ada yang menggunakan spirosolan pengganti 27 –
azaspirostan

♥ (22R, 25R)-5a-27-azaspirostan = (22R, 25R)-5a-spirosolan

♥ (22S, 25S)-5a-27-azaspirostan = (22S, 25S)-5a-spirosolan

4. Membedakan epimer 22R dan 22S diberi nama induk

berturut-turut solasodan dan tomatidan (tanpa sub-
tituen) dan ditetapkan dengan konfigurasi sbb :
 23

21 24 25
22 H
18 N
20
H CH3
12
O 26
17 16
19 11 13
1 9 14
H
15
2
10 8
5
H H
3 7

4 6
H

(22S, 25S) - 5 a - 27 AZASPIROSTAN

H H
N 26 25
21 22
18 20
H
23 CH3
12
O 24
17 16
19 11 13
H H Br
1 9 14
15
2
10 8
5
H
3 7

4 6
H

(22R, 25R) - 5 a - 27 AZASPIROSTAN

 ATURAN SIKUEN KONFIGURASI KARBON
ASIMETRIS
• Mula-mula tetapkan dengan konvensi Platner,
yang merupakan perubahan aturan Fieser :
• Potong ikatan heteroatom cincin E dan F, tarik
lurus ketas sehingga 26 – CH2N (H2) atau 26 –
CH2O terletak diujung atas
• Proyeksi menurut aturan Fieser,subtituen sebe-
lah kiri beri prefeksi bF dan kanan aF (indeks F
untuk membedakan subtituen pada inti dasar)
• Pakai aturan konfigurasi absolut Fieser (D, L)
– 20 bF (aF) = 20 L (D) = 20 S (20R)
– 22 bF (aF) = 22 L (D) = 22 S (20R)
– 25 bF (aF) = 25 L (D) = 25 S (20R)
 CH2O

25
Ca

C
b O
26 a
a
F C
18 20 22 23 25
E 22
O O C O
24
17 16 b 20
13 H3C C
D
14
15
CH2N
8 17
20 bF ,22 aF ,25 aF - SPIROSTAN 25
C CH3

H
b N C
26 a
a
F
18 20 22 23 25 C
E
O 22 26
24 O C a NH
17 16
13
D b 20
14 H3C C
15
8
20 bF ,22 aF (N) ,25 aF - SPIROSOLAN 17
 TANPA SUBTITUEN PADA KERANGKA INTI
O
26 a
F
18 20 22 23 25
27
E 20 bF ,22 aF ,25 aF - SPIROSTAN
O
24
17 16
13 22 L, 22 D, 25 D - SPIROSTAN
D
14
15 25 R - SPIROSTAN
8
H

H
N
26 a
a
18 22 23
F
25
20 bF ,22 aF ,25 aF - SPIROSOLAN
20
E
O
24
20 L, 22 D, 25 D - SPIROSOLAN
17 16
13
D 20 S, 22 R, 25 R - SPIROSOLAN
14
15
( 22 R, 25 R ) SPIROSOLAN
8
SOLASODAN
23
a
a H
24
F
18 20 22
N
25 20 bF ,22 bF ,25 bF - SPIROSOLAN
E
O 20 L, 22 L, 25 L - SPIROSOLAN
26
17 16
13
D 20 S, 22 S, 25 S - SPIROSOLAN
14
15
( 22 S, 25 S ) SPIROSOLAN
8

TOMATIDAN
 SKRINING DAN ANALISIS SAPOGENIN
STEROID

• SYARAT PROSEDUR SKRINING :

1. Prosedur dan perlatan sederhana
2. Selektif
3. kuantitatif atau semikuantitatif
4. relatif cepat
• DIPERLUKAN DUA TAHAP SKRINING
• 1. UJI PENDAHULUAN
a. Uji busa
b. Uji warna Liebermann – Bouchard
c. Uji warna Carr - Price
• 2. UJI LANJUTAN
• 2. UJI LANJUTAN
a. Analisis Kualitatif dan Kuantitatif Gol. Spirostan
aa. Analisis Kromatografi Lapis Tipis
ab. Analisis Spektrofotometer Inframerah
ac. Analisis Spektrofotometer Ultraviolet
b. Analisis Kualitatif dan Kuantitatif Gol. Spirosolan
1. UJI PENDAHULUAN
a. Uji busa
0,5 g serbuk kering sampel dalam tabung reaksi, tambah 10 ml
air mendidih, dingin ----- kocok ----- busa tahan > 10 menit (ukur
tinggi busa), busa tidak hilang dengan penambahan 1 tetes HCl
2M
b. Uji warna Liebermann – Bouchard
0,5 g serbuk kering sampel dalam tabung reaksi, tambah 5 ml
kloroform ----- panaskan diatas tangas air sambil dikocok -----
dinginkan. Satu ml filtrat + pereaksi Liebermann – Bouchard
(20 tetes anhidrida asetat dengan 1 tetes asam sulfat pekat) -----
amati perubahan warna. (reaksi positif sapogenin steroid -----
merah atau ungu ----- perlahan menjadi biru)
c. Uji warna Carr – Price
Totolkan filtrat diatas (b) di atas lempeng KLT, ----- kering -----
semprot perekasi Carr – Price (larutan jenuh Antimon (III) klori-
da dalam kloroform) ----- lempeng panaskan 105 -110o C ----- (re-
-aksi positif sapogenin steroid ----- ungu merah). Jika terganggu,
elusi dengan eluen dari campuran kloroform, metanol dan air
perbandingan volume (435 : 15 : 1) atau BAW (4 : 1 : 1) -----
semprot dengan pereaksi Carr - Price
 SKRENING DAN ANALISIS SAPOGENIN
STEROID
CONTOH SERBUK - Uji busa
-Uji warna
KERING
-Uji susut pengeringan 105o C
Timbang

50 g serbuk contoh
Soksletasi dengan 200 ml n-heksan

n-heksan pencuci Sisa contoh

destilasi
keringkan tanur 50o C
sisa

kering tanur 105o C, 1 jam Sisa contoh

sisa kering + 300 ml etanol 80%

refluks 1 jam

Timbang, orientasi lemak + kotoran saring

 FILTRAT SISA

Cuci 3 x 50 ml Et-OH 80%

Saring

3xFiltrat Filtrat ke-3 Ampas

UJI KLT

Buang

FILTRAT GABUNGAN

+ EtOH 80% ad 500,0 ml

FILTRAT GABUNGAN

- pipet

Spirostan Spirosolan
 Spirosolan

ALKALOIDA TOTAL SOLASODIN

10,0 ML 2,0 mL
(1,0 g Contoh) (200 µg Contoh)
kisatkan kisatkan

Sisa Sisa kering

+ 7,5 ml HCl 1 M + 3 ml HCl 1 M

refluks 3 jam refluks 3 jam

Hidrolisat Hidrolisat

+ 7,5 ml NaOH 1 M + NaOH 1 M ad basa

Hidrolisat netral Hidrolisat basa

+ 3 ml HOAc + 3 x 5 ml CHCl3
+ H2O ad 25,0 ml

Spektrofometri Lapisan CHCl3 Lapisan air

Hidrolisat netral
 Lapisan CHCl3 Lapisan Air
kisatkan
sisa
buang
+ 2,0 ml CHCl3
Lar. CHCl3 2 ml
pipet

Lapisan CHCl3 1,0 ml

kolom kromatografi

eluat
kisatkan

sisa
+ HOAc 20% ad 10,0 ml
KLT / HPLC
Lar cont 10,0 ml
pipet

Spektrofotometri
 SPEKTROFOTOMETRI
3,0 2,0 1,0 ml
+ HOAc 20% ……………………….. 2 3 4 ml
+ dapar asetat ………………………. 5 5 5 ml
+ jingga metil ……………………….. 1 1 1 ml
- Kocok 10’ …………………………. + + +
+ CHCl3 ………………………………. 5,0 5,0 5,0
- Ambil lapisan …………………….. CHCl3 CHCl3 CHCl3
+ Na2SO4 anh ……………………….. 250 250 250 mg
- Saring ……………………………… + + +
- Ambil filtrat ……………………….. CHCl3 CHCl3 CHCl3
- Masukkan dalam ………………… + + +
- Ukur resapan …………………….. A425 A425 A425
 Spirostan

50,0 ml
(5,0 g contoh

kisatkan sampai kental

Sisa kental

cuci 3 x 5 ml n-heksan
+ HCl 12 M ad pH 4, refluks 5 jam

Hidrolisat

+ NaOH 4 M ad basa

Hidrolisat basa

+ 3 x 5 ml n-heksan, pisahkan

Lap. n-Hekasan Lap. air buang

(basa)
Lap. n-Hekasan
(basa)
- cuci dengan air

Lap. n-Hekasan
(netral)
+ Na2SO4 anhidrat, saring kuantitatif

Filtrat

- kisatkan

Sisa

- keringkan tanur 105o C

Sisa kering

- timbang, + 2,0 ml CHCl3

Lar. CHCl3 2,0 ml

 Lar. CHCl3 2,0 ml

5 – 10 ug 6 – 10 ug 1,0 ml

+ 5,0 ml H2SO4 94% kisatkan

Larutan contoh Sisa

Dlm H2SO4 94%

KBr / Muyol

Sediaan

KLT / NPLC A250 IM

 SINTESIS STEROID
HEKOGENIN DIOSGENIN SOLASODIN STIGMASTEROL KOLESTEROL

STIGMAS-1
INTERMED-1 Oksi-MBio
DIOSODIN-1

INTERMED-2 STIGMAS-2

INTERMEDI-3 PROGESTERON

INTERMED-4 INTERMED-4a DIOSODIN-2 STIGMKOL-1

INTERMED-5
GOL.ANTAGONIS ANDROGEN STIGMKOL-2
MINERALOKORTI
GOL.KORTIKOKO
KOSTEROID
RTIKOSTEROID ESTROGEN

GOL.MINERALOK GOL.KONTRASE 19 NOR

ORTIKOSTEROID TIK ORAL TESTOSTERON
 SENYAWA-SENYAWA SINTESIS STEROID
O HN O

O O O

HO HO HO

HEKOGENIN SOLASODIN DIOSGENIN

O

Br O
Br

AcO HO HO

DIOSGENIN STIGMASTEROL KOLESTEROL

 O H2C OAc
C O C O
O O HO HO

AcO O O

INTERMED-2 INTERMED-3 INTERMED-4

H 2C H2C
O C O C O
HO HO HO

O O

INTERMED-4a INTERMED-5 GOL.GLUKOKORTIKO

STEROID
 C O O CH CHO
HO HO

AcO AcO HO

DIOSODIN-1 DIOSODIN-2 STIGMAS-1

O O
HC C N O
H

HO O O

STIGMAS-2 STIGMKOL-1 STIGMKOL-2

 KONVERSI DIOSGENIN MENJADI PROGESTERON
MENURUT PROSEDUR DEGRADASI MARKER

O AcO OAc
O
C
O C O
Ac2O CrO3

200O

AcO AcO AcO

3-b-ASETOKSI DIOSGENIN 3,16-DIASETOKSI

PSEUDODIOSGENIN

C O C O C O

HOAc H2 /Pd (1) OH-

t=Kamar
(2) At(t-Bt)
P=1 atm
AcO AcO O
3-b-ASETOKSI-5,16- 3-b-ASETOKSI-5-PREGNEN-20-ON PROGESTERON
PREGNADIEN-20-ON
 KONVERSI SOLASODIN MENJADI PROGESTERON
MENURUT PROSEDUR DEGRADASI MARKER

HN AcHN NHAc
O
C
O C O
Ac2O CrO3

200O

AcO AcO AcO

3-b-ASETOKSI SOLASODIN 3,16-DIASETOKSI

PSEUDOSOLASODIN

C O C O C O

HOAc H2 /Pd (1) OH-

t=Kamar
(2) At(t-Bt)
P=1 atm
AcO AcO O
3-b-ASETOKSI-5,16- 3-b-ASETOKSI-5-PREGNEN-20-ON PROGESTERON
PREGNADIEN-20-ON