Kes Departemen Mikrobiologi FK USU Memahami prosedur beberapa uji primer sederhana untuk identifikasi famili Enterobacteriaceae = Bakteri enterik
Sekelompok bakteri batang Gram (-), non spora
Flora normal pada usus manusia dan hewan
Kecuali Salmonella spp. & Shigella spp. bakteri
usus patogen
2 kelompok besar laktosa fermenter & laktosa
nonfermenter 1.a.Lactose Fermenter (cepat) Escherichia coli: koloninya metallic sheen pada media diferensial; motile; datar; nonviscous Enterobacter aerogenes: koloninya timbul, non- metallic sheen; sering motile; lebih viscous Klebsiella pneumoniae: sangat viscous, mucoid; non-motile
1.b. Lactose Fermenter (lambat)
Edwardsiella, Serratia, Citrobacter, Arizona, Providencia, Erwinia 2.Non-Lactose Fermenter Shigella sp.: non-motile, tidak menghasilkan gas dari dextrose Salmonella sp.: motile, menghasilkan asam dan gas dari dextrose Proteus sp.: “swarming” pada agar, urea cepat dihidrolisis (berbau amonia) Pseudomonas sp. : pigmen hijau-biru dan berfluoresensi, larut ke dalam media, berbau manis Bakteri bentuk batang, Gr (-) Tidak berspora Tumbuh aerob atau anaerob fakultatif Ada yg motile atau non motile : 1. Motile E.coli, Proteus, Salmonella 2. Non motile Shigella, Klebsiella 1. Media : McConkey MEDIA SELEKTIF & DIFERENSIAL
Koloni E.coli pada McConkey nonviscous,
merubah warna media menjadi pink ok. Laktosa fermenter
Koloni Klebsiella sp. pada McConkey koloni
mukoid, sangat viscous
EMB Koloni E.coli terlihat metallic sheen
SS media selektif Salmonella Shigella
E.Coli MacConkey
Spesimen diinokulasikan ke dalam media
inkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37°C
2. Makroskopis lihat permukaan koloni,
pinggir koloni, warna koloni
Proteus P.Aeruginosa Klebsiella E.Coli pd EMB
MacConkey MacConkey MacConkey 3. Mikroskopis Bakteri batang Gr (-) E.Coli kokobasil (batang pendek) Klebsiella batang, kapsul tebal koloni mukoid 4. Reaksi Biokimia Untuk identifikasi Enterobacteriaceae IMVIC (Indol, Methyl red, Voges proskauer, Citrate) Motility Urease TSI & Reaksi gula-gula Deteksi enzim triptofanase Reagensia Kovac & reagensia Erlich Inokulasi bakteri inkubasi 35°C dlm 18-24 jam Teteskan reagensia Kovach 15 tetes warna merah terang diantara reagensia & broth E. coli (+) Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Serratia (-) Tes kuantitatif untuk bakteri penghasil asam kuat Inokulasi pd MR/VP broth inkubasi 48-72 jam Teteskan 5 tetes reagensia MR warna merah E.coli (+) Enterobacter aerogenes (-) Identifikasi Klebsiella, Enterobacter Penghasil asetoin (asetil metil karbinol) dari jalur metabolisme glukosa Reagensia KOH 40% + -naphtol (katalisator) kompleks merah Deteksi penggunaan citrat sbg sumber karbon pd fermentasi karbohidrat Media Simmons citrat Bakteri pengguna citrat pH Merubah indikator bromtimol blue dari hijau (pH 6,0) biru (pH 7,6) Identifikasi : Enterobacter aerogenes Kleb.pneumoniae Deteksi amonia hasil hidrolisa urea oleh enzim urease Perubahan pH pada indikator pH (fenol merah) warna merah Identifikasi : Proteus sp Klebsiella pneumoniae Untuk menguji apakah bakteri motil atau non motil Media semisolid, menggunakan ose ujung lurus Motil E.coli Non motil Klebsiella sp. A. TSI steril B. Bakteri mampu memfermentasi karbohidrat kuning pada butt & slant C. Bakteri tidak mampu memfermentasi karbohidra, tapi menghasilkan H2S, gas (+) D. Bakteri mampu memfermentasi A B C D glukosa tp tidak untuk laktosa dan sukrosa 1. Perhatikan koloni bakteri 2. Identifikasi spesies bakteri dengan membaca hasil reaksi biokimia Page 1