METODE MPN

(MOST PROBABLE NUMBER)

PENDAHULUAN
 Penyebaran kotoran yang tidak terkontrol dalam
lingkungan perairan dapat menyebar pada
lingkungan tanah dan bahkan terbawa pada bahan
makanan bagi manusia. Lingkungan tercemar oleh
bakteri coliform menentukan apakah kualitas
bahan berupa air, tanah atau bahan makanan layak
untuk dikonsumsi atau tidak
BAKTERI COLIFORM
 Kelompok bakteri indikator untuk menentukan
kualitas/mutu dari lingkungan air, tanah atau makanan
 Bakteri kelompok ini berasal dari sistem pencernaan
binatang termasuk manusia
 Cir-ciri bakteri coliform adalah gram negativ, basil,
mikroba tidak berspora, mampu memfermentasi lactosa
menjadi gas dan asam pada suhu 35-370C
 Diantaranya Escherchia coli, Enterobacter aerogenes dan
Citrobacter fruendii
 Keberadaan bakteri di atas menunjukan adanya bakteri lain
seperti Shigella yang menyebabkan diare dan muntaber
CARA PENULARAN E. Coli
KEDALAM TUBUH MANUSIA
1. Daging mentah
2. Daging setengah matang
3. Susu mentah
4. Cemaran fekal pada air dan pangan
METODE MPN
 Pengenceran sample dapat diperkirakan dari
kemungkinan sample air tersebut terkena kontaminasi
mikroba (air keran sampai 103, air terkontaminasi109)
 Prinsif pengerjaan dengan melakukan Uji Penduga
(Presumtive test) dengan menggunakan set tabung 3-3-
3 atau 5-5-5 Kaldu lactosa, lebih banyak tabung yang
digunakan akan menunjukan ketelitian yang lebih tinggi
 Dilanjutkan dengan uji penguat (Confirmed test) dan
 Dilakukan uji pelengkap (Completed test)
METODE MPN
 MPN adalah suatu metode untuk menaksir populasi mikrobial di
lahan, perairan dan produk agrikultur
 Bila menggunakan sample padat lakukan terlebih dahulu penggilingan
sampai halus dan homogenasi sampel menjadi suspensi cairan
 Sample air yang akan di analisis dapat berupa air yang tercemar,
persiapkan sampel air dan penyimpanan dalam suhu 4 0C tidak lebih
dari 6 jam
 Pembuatan set tabung Lactosa yang berisi kaldu laktosa
(LBDS/LBSS) dan tabung durham (posisi terbalik)
 LBDS = Lactose Broth Double Strength
 LBSS = Lactose Broth Single Strength
TEKNIK PENGENCERAN
 Teknik pengenceran yang baik apabila :
1. Sel mikroba tersebar merata dalam contoh dimaan
gaya tarik atau tolak diantara mikroba tidak terjadi
2. Larutan yang diinokulasi ke media
memperlihatkan pertumbuhan positif apabila
mengandung satu atau lebih mikroba hidup
3. Terhindar dari pencemaran yang berasal dari
bahan dan peralatan
KELEBIHAN DAN KELEMAHAN
METODE MPN
KELEBIHAN KEKURANGAN
 Dapat dibuat sangat peka  Membutuhkan waktu dan
 Dapat diguakan biaya yang cukup besar
dilapangan karena
medianya bisa disiapkan
sebelumnya
 Untuk tujuan tertentu bisa
menggunkan media
selektif
TEST PENDUGAAN
(Presumtive test)
Presumtiev test
Inokulasi sampel pada Lactosa Broth

HASIL POSITIF HASIL NEGATIV

Perubahan warna dari merah Warna tetap merah = tidak ada
menjadi kuning dan timbulnya perubahan coliform, pengujian
gas = diduga adanya coliform dihentikan

PENGUJIAN DI
LANJUTKAN DENGAN TES
PENGUATAN
MPN TABEL 3 SERI
MPN TABEL 5 SERI
CONTOH
RUMUS
Nilai MPN dari Tabel x 1/ Pengenceran tabung tengah
SOAL
Kombinasi tabung yang positif dari 100 ml adalah 5-3-1
JAWABAN
110 x 1/10-3 = 110000
MAKA
110000 MPN/ml
TEST PENGUATAN
(Confirmed Test)
Confirmed test
Transfer biakan dari Lactosa Broth positif ke medium BGLB atau EMB atau Medium EC

Eosin Methylen Blue Agar /menghambat

Brilliant Green Lactosa Bile Broth
(Fecal coli)
Medium ini menghambat pertumbuhan
mikroba yang mampu memfermentasi laktosa
selain koliform
pertumbuhan bakteri gram positif
Coli aerogenes ; akan menghasilkan karakter
koloni yang khusus
Escherchia ; koloni berukuran besar, warna
gelap, gelap ditengah, dengan warna metalik
hijau
Aerobacter ; koloni besar berwarna pink
mukoid, gelap ditengah, jarang
memperlihatkan kilau metalik

Medium EC LANJUTKAN KE
Medium spesifik untuk
menumbuhkan E. Coli
TEST PELENGKAP
Brilliant Green Lactosa Bile Broth
 Terbentuknya asam
dan gas yang
disebabkan fermentasi
laktosa oleh koloni
bakterI coliform
EOSIN METHYLEN BLUE AGAR
Eosin Methylen Blue Agar
memastikan adanya bakteri Aerobacter
Medium EC/ Lactose Tryptose Broth
(memastikan adanya bakteri E.coli)
TEST PELENGKAP
(Completed Test)

Completed test
Pada umumnya tipe koloni yang positif dari EMB atau bila digunakan BGLB selanjutnya perlu
dipindahkan ke EMB terlebih dahulu

Transfer ke Agar Miring

Transfer ke Lactosa Broth
Hasil positif = Koliform akan
menghasilkan Gas
Identifikasi pewarnaan
Hasil positif = koliform adalah gram negatif,
basilus dan tidak berspora

LANJUTKAN KE UJI IMViC

KESIMPULAN
 Adanya reaksi fermentasi Laktosa Broth dan hasil
identifikasi menampilkan gram negativ, basilus
dan bakteri tidak berspora, menunjukan bahwa
pada volume sampel yang diuji terdapat kehadiran
koliform dalam jumlah tertentu
MPN METHOD
COBA DEMONSTRASIKAN DIDEPAN
KELAS PROSEDUR MPN TEST