Pemeriksaan Hormon T3U Metode

ELISA

Kelompok A6
 Pengertian Hormon T3U
Hormon T3U
Kelenjar tiroid menghasilkan tiga jenis hormon yaitu T3,T4 dan
sedikitkalsitonin.Hormon ini diangkut oleh protein pengangkut, protein
pengangkut ituadalah TBG (thyroxine binding globulin), TBPA (thyroxine
binding prealbumin),T3U (T3 resin uptake) dan TBI (thyroxine binding
Index).Peningkatan proteinpengangkut TBG menyebabkan peningkatan
hormon T4 dan penurunan proteinpengangkut T3U.Dalam plasma T3 dan T4
diangkut oleh protein pengikat seperti Tyroxine Binding Globuline (TBG)
dan Tyroxine Binding Albumin (TGA).T3 mempunyai ikatan paling besar
dengan Albumine sedangkan T4 lebih banyak terikat dengan Globuline.
 Serapan Triiodothyronine (T3 Uptake atau T3U) adalah
ukuran tidak langsung dari jumlah protein pengikat tiroksin
(prealbumin, albumin, dan TBG yang mengikat tiroid dalam
plasma). Ini berbanding lurus dengan tingkat kejenuhan
protein pengikat oleh tiroksin. T3U menurun selama
kehamilan, dengan dosis estrogen supra-normal, awal
hepatitis akut, dan dengan kelebihan genetik TBG. Ini
meningkat oleh hormon anabolik dan glukokortikoid,
sindrom nefrotik, dan defisiensi TBG genetik. T3U tidak
berguna sendirian tetapi harus dikombinasikan dengan T4
untuk menghitung FTI (juga disebutT7)
Pemeriksaan hormon T3U menggunakan metode
ELISA

 ELISA

adalah teknik yang menggabungkan spesifisitas antibodi dengan

sensitivitas uji enzim secara sederhana, dengan menggunakan antibodi
atau antigen yang digabungkan ke suatu enzim yang mudah diuji.
ELISA memberikan pengukuran antigen atau antibodi yang baik secara
relatif maupun kuantitatif. ELISA dapat digunakan untuk mendeteksi
adanya antigen yang dikenali oleh antibodi atau dapat digunakan untuk
menguji antibodi yang mengenali antigen.
PRINSIP:
Enzim kompetitif Immunoassay :
Komponen yang diperlukan untuk menilai kapasitas pengikatan serum
manusia adalah konjugat enzim-T3,tiroksin, protein pengikat (P), dan antibodi
tiroksin terimobilisasi (Ab).

Setelah mencampur enzim-konjugat dan tiroksin dengan spesimen, hasil reaksi

mengikat antara protein pengikat pasien dan tiroksin yang ditambahkan tetapi
tidak dengan enzim konjugat.
 Persiapan sampel
 Spesimen adalah darah; serum atau plasma

 Sampel serum puasa pagi hari harus diperoleh. Darah harus dikumpulkan dalam

redtop biasa tabung venipuncture tanpa aditif atau anti-koagulan (untuk serum) atau

tabung yang dievakuasi yang mengandung EDTAatau heparin. Biarkan darah

menggumpal untuk sampel serum. Centrifuge spesimen untuk memisahkan serum

atau

plasma dari sel.

✓ Sampel dapat didinginkan pada 2-8 ° C untuk jangka waktu maksimum lima (5)

hari. Jika spesimen tidak bisadiuji dalam waktu ini, sampel dapat disimpan pada

suhu -20 ° C hingga 30 hari.

✓ Hindari pembekuan dan pencairan berulang.

 Prosedur pengujian
Sebelum melanjutkan dengan pengujian, bawa semua reagen, referensi serum dan
kontrol ke suhu kamar (20 -27 ° C).
1. Format sumur microplate untuk setiap referensi serum, kontrol dan spesimen pasien
untuk diuji duplikat. Pasang kembali strip microwell yang tidak digunakan kembali
ke dalam tas aluminium, segel dan simpan pada 2-8 ° C.
2. Pipet 0,025 ml (25μl) dari referensi serum yang sesuai, kontrol atau spesimen ke
dalam sumur yang ditugaskan.
3. Tambahkan 0,100 ml (100μl) larutan Reagen Kerja A, T3U-enzim ke semua sumur.
4. Aduk pelat mikro dengan lembut selama 20-30 detik untuk mencampur dan
menutupi.
5. Tetaskan 60 menit pada suhu kamar.
6. Buang isi lempengan mikro dengan dekantasi atau aspirasi. Jika decanting,
keringkan piring dengan kertas penyerap.
 Lanjutan
7. Tambahkan 300μl buffer cuci (lihat Bagian Persiapan Reagen), tuang (ketuk dan blot) atau
aspirasi. Ulangi dua waktu tambahan untuk total tiga mencuci. Pencuci piring otomatis atau manual
dapat digunakan.Ikuti instruksi pabrik untuk penggunaan yang tepat. Jika botol pemerasan digunakan,
isi masing-masing dengan baik menekan wadah (menghindari gelembung udara) untuk mengeluarkan
cucian. Tuang cucian dan ulangi dua waktu tambahan.
8. Tambahkan 0,100 ml (100μl) larutan substrat yang bekerja ke semua sumur (lihat Bagian Persiapan
Reagen). Selalu tambahkan reagen dalam urutan yang sama untuk meminimalkan perbedaan waktu
reaksi antara sumur. JANGAN Goyang THE PLATE SETELAH TAMBAHAN SUBSTRAT
9. Tetaskan pada suhu kamar selama lima belas (15) menit.
10. Tambahkan 0,050 ml (50μl) larutan berhenti untuk masing-masing sumur dan aduk perlahan selama
15-20 detik. Selalu tambahkan reagen diurutan yang sama untuk meminimalkan perbedaan waktu
reaksi antara sumur.
11. Baca absorbansi dalam setiap sumur pada 450nm (menggunakan panjang gelombang referensi 620-
630nm untuk meminimalkan sumur ketidaksempurnaan) dalam pembaca lempeng mikro. Hasilnya
harus dibaca dalam waktu tiga puluh (30) menit setelah menambahkan hentikan solusi.
SEKIAN DAN TERIMAKASIH