Teknologi

Knock-Down
Kelompok 4 – Rekayasa Genetika
Nama Anggota:
01 02 03
Nur Aisyah Lulu Dwiyanti Widya Safitri
(H041191031) (H041191036) (H041191039)

04 04 04
Azmul Fauzy Nur Musdalifah Zulfiqar Lukman
(H041191064) (H041191066) (H041191086)
 —Gen Knockdown
“Pembungkaman gen (GS) didefinisikan sebagai proses molekuler
yang terlibat dalam regulasi turun gen tertentu, dan mungkin
berkembang sebagai sistem pertahanan genetik terhadap virus dan
asam nukleat yang menyerang. ”
Gen Knockdown

Dalam banyak kasus, asRNAs dirancang untuk

berhibridisasi ke situs pengikatan ribosom (RBS) dan
daerah kodon awal dari mRNA target. Ini karena inisiasi
translasi adalah langkah pembatas dalam proses translasi,
sehingga, mencegah ribosom dari mengikat ke situs RBS
mRNA target adalah yang paling penting untuk
kemanjurannya.

Gambar: Antisense RNA

Prinsip Gen Knockdown
Transcriptional
Gene Silencing
Pada mamalia dan tumbuhan, hipermetilasi
sitosin pada DNA dan metilasi histon terjadi
pada histon H3 pada lisin K9 (H3K9) oleh
RNA kecil non-coding yang mengarah pada
pembentukan kompleks heterokromatin
(bentuk inaktif transkripsi).
Posttranscription
al Gene Silencing
Proses pembungkaman gen pasca
transkripsi (PTGS) miRNA dan siRNA
sedikit berbeda berdasarkan biogenesis
dan perakitan kompleks RISC,
perbedaan ini dapat diidentifikasi pada
beberapa eukariota.
Mekanisme Gen Knockdown
Mekanisme pembungkaman gen siRNA dan miRNA. dsRNA (baik
ditranskripsi atau diperkenalkan secara artifisial) diproses oleh Dicer
menjadi siRNA yang dimuat ke dalam RISC. AGO2, yang merupakan
komponen RISC, memotong untai penumpang siRNA. Untai pemandu
kemudian memandu RISC aktif ke mRNA target. Ikatan komplementer
penuh antara untai pemandu siRNA dan mRNA target mengarah ke
pembelahan mRNA. miRNA: Transkripsi gen miRNA dilakukan oleh RNA
polimerase II dalam nukleus untuk menghasilkan pri-miRNA, yang
kemudian dibelah oleh Drosha untuk membentuk pra-miRNA. Pra-miRNA
diangkut oleh Exportin 5 ke sitoplasma di mana ia diproses oleh Dicer
menjadi miRNA. miRNA dimuat ke RISC di mana untai penumpang
dibuang, dan miRISC dipandu oleh untai pemandu yang tersisa ke mRNA
target melalui pengikatan komplementer sebagian. Target mRNA dihambat
melalui represi translasi, degradasi atau pembelahan.
Lanjutan…
interferensi RNA (RNAi)
menunjukkan mekanisme
pembungkaman gen spesifik urutan
yang diprakarsai oleh pengenalan RNA
untai ganda (dsRNA), homolog secara
berurutan dengan gen silencing, yang
memicu degradasi mRNA.
Aplikasi Gen Knockdown Pada
Hewan
● Penelitian pada bidang terapi yang berbeda menerapkan aplikasi siRNA untuk digunakan sebagai alat penelitian untuk
validasi fungsi gen. Uji biokimia, farmakologis, dan histologis yang berbeda telah digunakan untuk menentukan efek
penghambatan siRNA pada gen tertentu dan untuk menganalisis perubahan fenotip pada sel. Misalnya alternatif untuk hewan
transgenic, untuk mempelajari fungsi gen tertentu digunakan interferensi RNA dalam melakukan pembungkaman gen pasca-
transkripsi berdasarkan degradasi mRNA.
● Dalam model tikus sepsis, telah ditunjukkan bahwa pretreatment dengan siRNA spesifik TNF yang disuntikkan
secara intraperitoneal mampu meningkatkan tingkat kelangsungan hidup enam kali lipat setelah tantangan lipo polisakarida
yang Mematikan. Demikian pula, salah satu percobaan pertama untuk menunjukkan potensi terapeutik RNAi menggunakan
siRNA fas-spesifik untuk melindungi tikus terhadap hepatitis fulminan dan penelitian lain melaporkan bahwa pengobatan
siRNA spesifik caspase 8 juga mencegah gagal hati akut. Studi-studi ini menggambarkan konsep bahwa siRNA dapat
digunakan secara efektif untuk mengontrol respons akut apakah itu berarti membatasi peradangan yang berbahaya dan tidak
terkontrol atau mencegah apoptosis hepatosit dan menjaga fungsi hati. SiRNA yang distabilkan secara kimiawi dan
terkonjugasi kolesterol telah terbukti membungkam gen endogen melalui pengiriman sistemik siRNA yang dimodifikasi ke
dalam model tikus.
Referensi
Thanks
Fischer, S.E.J., 2015. RNA interference and microRNA-mediated silencing. Curr. Protoc. Mol. Biol., Vol. 112.
 
Lima, W.F., C.L. de Hoyos, X.H. Liang and S.T. Crooke, 2016. RNA cleavage products generated by antisense oligonucleotides
and siRNAs are processed by the RNA surveillance machinery. Nucleic Acids Res., 44: 3351-3363.
 
Zhuang, J.J., S.A. Banse and C.P. Hunter, 2013. The nuclear argonaute NRDE-3 contributes to transitive RNAi in
Caenorhabditis elegans. Genetics, 194: 117-131.

CREDITS: This presentation template was created by

Slidesgo, including icons by Flaticon,and infographics &
images by Freepik

Please keep this slide for attribution