ELEKTROFORESIS

Lisa Fatma Hatuina (202078006); Putriana M. Betaubun (202078008) ;

Enjelina Zai (202078010); Dini Erna Karlina (202078009);
Shandy Cakra Prayudha (202078007); Halit La Nuru (202078016)
Definisi Elektroforesis
Elektroforesis adalah teknik pemisahan
suatu partikel/ spesies/ ion atau partikel
koloid berdasarkan kemampuan berpindah
melalui medium konduktif, biasanya
berupa larutan bufer, sebagai respon
adanya suatu medan listrik
Elektroforesis merupakan istilah yang diberikan untuk
migrasi partikel yang bermuatan akibat diberikan arus listrik
searah atau DC (Direct Current). Umumnya teknik dari cikal-
bakal elektroforesis digunakan untuk menentukan muatan
dari suatu koloid
Teknik elektroforesis ditentukan oleh ciri molekular ionik dan
adanya muatan sebagai sifat fisik.
Arah dan laju pergerakan tergantung pada spot dan
intensitas muatan ionik. Bufer elektroda digunakan untuk
konduktor arus dengan menjadi jembatan konduksi diantara
dua elektroda sehingga memungkinkan terjadinya aliran
medan listrik.
Gambaran Umum Elektroforesis

 Teknik ini dapat digunakan dengan memanfaatkan muatan

listrik yang ada pada makromolekul misalnya DNA yang
bermuatan negatif. Jika molekul yang bermuatan negatif
dilewatkan melalui suatu medium, kemudian dialiri arus listrik
dari suatu kutub ke kutub yang berlawanan muatannya maka
molekul tersebut akan bergerak dari kutub negatif ke kutub
positif.

 Kecepatan gerak molekul tersebut tergantung pada nisbah muatan

terhadap massanya serta tergantung pula pada bentuk
molekulnya. Pergerakan ini dapat dijelaskan dengan gaya Lorentz,
yang terkait dengan sifat-sifat dasar elektris bahan yang diamati
dan kondisi elektris lingkungan:

F: gaya Lorentz
Q: muatan yang dibawa oleh
objek
E: medan listrik
 Kegunaan Elektroforesis

- pengamatan taksonomi, sistematik dan genetik serta untuk mengindentifikasi spesies hewan maupun tumbuhan
(bio-sistematik).
- elektroforesis digunakan untuk memisahkan, mengidentifikasi, dan memurnikan fragmen DNA.

Pemisahan tergantung pada ; 2021

1) Struktur kimia
2) pH,
3) Gugus fungsional
4) Bobot molekulnya.

Analisis ini sangat informatif tentang data:

1) Senyawa metabolit maupun senyawa biokimia dengan BM besar
2) Tidak diperlukan jumlah besar, dan pemurnian yang tinggi.
3) Dapat digunakan sampel langsung tanpa pemisahan, misalnya urin dan cairan limpa.
4) Senyawa yang bersifat polar, bermuatan atau bersifat zwitter ion
Faktor-faktor yang mempengaruhi kecepatan gerak ion
dan molekul :
2021
1. Besarnya tegangan medan listrik
2. Jumlah muatan yang dibawa oleh ion
3. Koefisien friksional (gesekan)
4. Viskositas larutan
5. Ukuran (berat dan besar) ion berhubungan dengan
massa.
6. Besarnya voltase dan aliran listrik/besarnya tegangan
medan. listrik yg digunakan utk elektroforesis, makin
tinggi maka makin cepat terjadi mobilitas
Prinsip Kerja Elektroforesis

Adanya pergerakan komponen bermuatan positif (+) pada kutub negatif (-) serta komponen bermuatan
negatif (-) pada kutub positif (+). Pegerakan yang terjadi disebut "elektrokinetik”

elektroforesis adalah elektroforegram yang memberikan informasi mengenai seberapa cepat perpindahan
komponen (tm) atau biasa disebut kecepatan migrasi. Besaran yang digunakan sama dengan pada proses
kromatografi.

Apabila dalam campuran terdapat dua jenis komponen, yakni (1)

komponen negatif (-), dan (2) komponen netral (N), maka
komponen negatif akan bergerak menuju kutub positif (+)
sedangkan komponen netral (N) akan tetap diam.

Skema Elektroforesis
Macam-macam Elektroforesis : Elektroforesis Kertas (planar)

Pemisahan ini terjadi akibat adanya

gradasi konsentrasi sepanjang
Elektroforesis yang terdiri dari
sistem pemisahan. Pergerakan partikel
kertas sebagai fase diam dan
dalam kertas tergantung pada
partikel bermuatan yang terlarut
muatan atau valensi zat terlarut, luas
sebagai fase gerak, terutama
penampang, tegangan yang digunakan,
ialah ion-ion kompleks.
konsentrasi elektrolit, kekuatan ion, pH,
viskositas, dan adsorpsivitas zat terlarut.

Kelemahan:
Adanya gangguan yang disebabkan oleh adanya gugus OH- yang terdapat pada selulosa yang dapat
berinteraksi dengan molekul polar sehingga daya migrasi molekul tersebut terganggu dan menjadi lebih
rendah.

Dapat diatasi dengan cara asetilasi gugus hidroksil dengan menggunakan kertas selulosa asetat yang
tidak polar. Hal ini menyebabkan migrasi molekul polar tidak terganggu, resolusi lebih baik, dan proses
pemisahan berlangsung lebih cepat
Macam-macam Elektroforesis : Elektroforesis Kertas (planar)

Keuntungan:
- proses migrasi lebih cepat
- pemisahan spot menjadi lebih kecil
- mudah memisahkan sampel dengan
spektrofotometri
- mudah dilarutkan dalam pelarut dalam
jumlah sedikit.
Macam-macam Elektroforesis : Elektroforesis gel

Elektroforesis gel:
menggunakan gel sebagai fase diam untuk
memisahkan molekul-molekul. Awalnya
elektoforesis gel dilakukan dengan medium gel
kanji (sebagai fase diam) untuk memisahkan
biomolekul yang lebih besar seperti protein-
protein. Kemudian elektroforesis gel
berkembang dengan menjadikan agarosa dan
poliakril amida sebagai gel media.

Terdapat dua material dasar:

1. fase diam : berfungsi "menyaring" objek yang akan dipisah
2. fase bergerak (eluen) : berfungsi membawa objek yang akan dipisah

Sering kali ditambahkan larutan penyangga pada fase bergerak untuk

menjaga kestabilan objek elektroforesis gel. Elektroda positif dan negatif
diletakkan pada masing-masing ujung aparat elektroforesis gel
Macam-macam Elektroforesis : Elektroforesis gel

Zat yang akan dielektroforesis

dimuat pada kolom (disebut well)
pada sisi elektroda negatif. Apabila
aliran listrik diberikan, terjadi aliran
elektron dan zat objek akan
bergerak dari elektroda negatif ke
arah sisi elektroda positif.

Kecepatan pergerakan ini berbeda-beda, tergantung dari muatan dan berat molekul
DNA. Kisi- kisi gel berfungsi sebagai pemisah. Objek yang berberat molekul lebih
besar akan lebih lambat berpindah
 Macam-macam Elektroforesis : Elektroforesis kapiler

Elektroforesis kapiler
Digunakan untuk menggunakan listrik
memisahkan asam bertegangan tinggi yang
amino, protein, lipid, menyebabkan semua
karbohidrat, dan komponen ion atau
nukleotida dengan molekul netral bergerak
resolusi tinggi yang ke katoda. Deteksi dapat
dilakukan pada pipa dilakukan dengan teknik
kapiler berisi buffer pendeteksian
spektrometri atau
elektrokimia

Teknik pemisahan ini

dipengaruhi oleh selektivitas yang baik
tegangan listrik, namun boros listrik karena
koefisien difusi, menggunakan tegangan
panjang, dan diameter tinggi dan alatnya juga
pipa kapiler, serta mahal.
konsentrasi sampel.
 Medan elektrik

voltase diberikan diantara Voltase

dua elektroda, arus Apabila jarak antara dua elektroda adalah 1 meter dan perbedaan

pindahkan setiap detik kearah

ditentukan oleh tahanan potensial antarakeduanya adalah V volt sehingga gradient potensialnya
dalammedium adalah V/1m. Kenaikangradient potensial akan menyebabkan kecepatan
gerak ion.

an sebanding dengan waktunya.

Aliran listrik
Arus aliran listrik dalam larutan antara dua elektroda disebabkan umumnya oleh ion buffer dan
sedikit oleh ion dalam sampel. Kenaikan voltase akan meningkatkan jumlah muatan yang
dipindahkan setiap detik kearah elektroda.Jarak yang ditempuh ion akan sebanding dengan
waktunya.

Tahanan
Medium elektroforesa menimbulkan pada aliran ion sebanding dengan jenismedium, jenis buffer dan
konsentrasinya. Tahanan akan meningkat dengan bertambahnya jarak antara elektroda, namun
berkurang dengan bertambahnyaluas permukaan elektroda dan konsentrasi ion dalam buffer
 Western Blot (Electroforesis)

Elektroforesis adalah suatu cara analisis kimiawi yang didasarkan pada pergerakan molekul-molekul
protein bermuatan di dalam medan listrik (titik isoelektrik). Pergerakan molekul dalam medan listrik
dipengaruhi oleh bentuk, ukuran, besar muatan dan sifat kimia dari molekul (TITRAWANI 1996).
Pemisahan dilakukan berdasarkan perbedaan ukuran berat molekul dan muatan listrik yang dikandung
oleh makro-molekul tersebut. Bila arus listrik dialirkan pada suatu medium penyangga yang telah berisi
protein plasma maka komponen-komponen protein tersebut akan mulai bermigrasi
Western Blot (Electroforesis)
Western Blot (Electroforesis)
TERIMAKASIH