AUTOCLAF

PENGERTIAN

Autoclave yaitu alat untuk mensterilkan berbagai macam alat

dan bahan yang digunakan dalam mikrobiologi menggunakan uap
air panas bertekanan. Tekanan yang digunakan pada umumnya 15
Psi atau sekitar 2 atm dan dengan suhu 121 oC (250oF). Jadi tekanan
yang bekerja ke seluruh permukaan benda adalah 15 pon tiap inchi 2
(15 Psi = 15 pounds per square inch). Medium yang akan
disterilkan ditempatkan di dalam autoclave selama 15-20 menit, hal
ini bergantung pada banyak sedikitnya barang yang perlu
disterilkan. Medium yang akan disterilkan ditempatkan dalam
beberapa botol yang agak kecil daripada dikumpul dalam satu botol
yang besar. Setelah pintu autoclave ditutup rapat, barulah kran pada
pipa uap dibuka dan temperatur akan terus-menerus naik sampai
121oC (Dwidjoseputro, 1990).
Gambar Autoklaf
 BAGIAN-BAGIAN AUTOKLAF

1. Tombol pengatur waktu mundur (timer)

2. Katup pengeluaran uap
3. Pengukur tekanan
4. Klep pengaman
5. Tombol on-off
6. Termometer
7. Lempeng sumber panas
8. Aquades (H 2 O)
9. Sekrup pengaman
10. Batas penambah air
 CARA KERJA

a. Sebelum melakukan sterilisasi cek dahulu banyaknya

air dalam autoklaf. Jika air kurang dari batas yang
ditentukan, maka dapat ditambah air sampai batas
tersebut. Gunakan air hasil destilasi, untuk menghindari
terbentuknya kerak dan karat.
b. Masukkan peralatan dan bahan. Jika mensterilisasi
botol beretutup ulir, maka tutup harus dikendorkan.
c. Tutup autoklaf dengan rapat lalu kencangkan baut
pengaman agar tidak ada uap yang keluar dari bibir
autoklaf. Klep pengaman jangan dikencangkan
terlebih dahulu.
d. Nyalakan autoklaf, diatur timer dengan waktu
minimal 15 menit pada suhu 121oC.
e. Tunggu samapai air mendidih sehingga uapnya
memenuhi kompartemen autoklaf dan terdesak keluar
dari klep pengaman. Kemudian klep pengaman ditutup
(dikencangkan) dan tunggu sampai selesai. Penghitungan
waktu 15’ dimulai sejak tekanan mencapai 2 atm.
f. Jika alarm tanda selesai berbunyi, maka tunggu
tekanan dalam kompartemen turun hingga sama
dengan tekanan udara di lingkungan (jarum pada
preisure gauge menunjuk ke angka nol). Kemudian
klep-klep pengaman dibuka dan keluarkan isi autoklaf
dengan hati-hati.
 CARA KALIBRASI
AUTOKLAF
Untuk mendeteksi jika autoklaf bekerja dengan baik atau
sempurna dapat digunakan dengan pengujian mikroba yang bersifat
termofilik dan memiliki endospora yaitu Bacillus Stearothermophilus.
Dalam bentuk kertas spora strip dimasukan kedalam autoklaf dan
disterilkan, setelah proses sterilisasi kemudian ditumbuhkan pada media.
Jika media tetap bening maka autoklaf bekerja secara baik.
 CARA PEMELIHARAAN
AUTOKLAF

Apabila autoklaf telah selesai

digunakan, maka air aquadest yang ada di
dalam autoklaf sebaiknya dibersihkan atau
dikuras bagian dalamnya menggunakan lap
kering. Selanjutnya simpan autoklaf pada
tempat yang kering dan bersih.
 JENIS-JENIS

• Gravity Displacement Autoclave

Udara dalam ruang autoklaf dipindahkan hanya
berdasarkan gravitasi. Prinsipnya adalah memanfaatkan
keringanan uap dibandingkan dengan udara, sehingga
udara terletak di bawah uap. Cara kerjanya dimulai
dengan memasukan uap melalui bagian atas autoklaf
sehingga udara tertekan ke bawah. Secara perlahan, uap
mulai semakin banyak sehingga menekan udara semakin
turun dan keluar melalui saluran di bagian bawah
autoklaf, selanjutnya suhu meningkat dan terjadi
sterilisasi. Autoklaf ini dapat bekerja dengan cakupan
suhu antara 121-134 °C dengan waktu 10-30 menit.
• Prevacuum atau High Vacuum Autoclave
Autoklaf ini dilengkapi pompa yang
mengevakuasi hampir semua udara dari dalam
autoklaf. Cara kerjanya dimulai dengan
pengeluaran udara. Proses ini berlangsung selama
8-10 menit. Ketika keadaan vakum tercipta, uap
dimasukkan ke dalam autoklaf. Akibat
kevakuman udara, uap segera berhubungan
dengan seluruh permukaan benda, kemudian
terjadi peningkatan suhu sehingga proses
sterilisasi berlangsung. Autoklaf ini bekerja
dengan suhu 132-135 °C dengan waktu 3-4 menit.
Steam-Flush Pressure-Pulse Autoclave
Autoklaf ini menggunakan aliran uap dan dorongan tekanan di atas tekanan atmosfer
dengan rangkaian berulang. Waktu siklus pada autoklaf ini tergantung pada benda
yang disterilisasi.