IMMUNOELECTROPHORESIS

Definisi Immunoelectrophoresis, juga disebut gamma globulin elektroforesis, atau elektroforesis immunoglobulin, adalah metode penentuan kadar darah dari tiga imunoglobulin utama: immunoglobulin M (IgM), imunoglobulin G (IgG), dan immunoglobulin A (IgA). Tujuan Immunoelectrophoresis adalah teknik analisis yang kuat dengan kekuatan menyelesaikan tinggi karena menggabungkan pemisahan antigen dengan elektroforesis dengan imunodifusi terhadap antiserum suatu. Resolusi meningkat adalah manfaat dalam pemeriksaan imunologi serum protein. Immunoelectrophoresis bantu dalam diagnosis dan evaluasi respon terapi pada kondisi penyakit yang mempengaruhi sistem kekebalan tubuh. Hal ini biasanya diminta bila berbagai jenis elektroforesis, disebut elektroforesis protein serum, telah menunjukkan kenaikan di tingkat immunoglobulin. Immunoelectrophoresis juga sering digunakan untuk mendiagnosa multiple myeloma, penyakit yang menyerang sumsum tulang. Kewaspadaan Obat-obatan yang dapat menyebabkan kadar imunoglobulin meningkat termasuk gamma globulin terapi, hydralazine, isoniazid, phenytoin (Dilantin), procainamide, kontrasepsi oral, metadon, steroid, dan tetanus toxoid dan antitoksin. Laboratorium harus diberitahu jika pasien telah menerima vaksinasi atau imunisasi dalam enam bulan sebelum ujian. Hal ini terutama karena imunisasi sebelum mengarah ke tingkat immunoglobulin peningkatan menghasilkan hasil positif palsu. Perlu dicatat bahwa, karena immunoelectrophoresis tidak kuantitatif, ia digantikan oleh prosedur yang disebut immunofixation, yang lebih sensitif dan lebih mudah untuk menafsirkan. Deskripsi Terpisah dalam gel agar di bawah pengaruh medan listrik ke albumin,, alpha 1 alpha 2, dan globulin beta dan gamma Serum protein. Immunoelectrophoresis dilakukan

dengan menempatkan serum pada slide yang mengandung gel yang dirancang khusus untuk ujian. Arus listrik ini kemudian melewati gel, dan imunoglobulin, yang mengandung muatan listrik, bermigrasi melalui gel sesuai dengan perbedaan biaya listrik masing-masing. Antiserum ditempatkan bersama slide untuk mengidentifikasi jenis tertentu hadir imunoglobulin. Hasilnya digunakan untuk mengidentifikasi entitas penyakit yang berbeda, dan untuk membantu dalam memantau perjalanan penyakit dan respon terapi pasien dengan kondisi seperti defisiensi imun, penyakit autoimun, infeksi kronis, infeksi virus kronis, infeksi janin intrauterin, multiple myeloma , dan gammopathy monoklonal signifikansi belum ditentukan. Ada lima kelas antibodi: IgM, IgG, IgA, IgE, dan IgD. IgM diproduksi pada paparan awal terhadap antigen. Sebagai contoh, ketika seseorang menerima vaksinasi tetanus pertama, antibodi antitetanus dari kelas IgM diproduksi 10 sampai 14 hari kemudian. IgM berlimpah di dalam darah tetapi tidak biasanya hadir dalam organ atau jaringan. IgM terutama bertanggung jawab untuk pengelompokan darah ABO dan faktor rheumatoid, namun terlibat dalam reaksi imunologi terhadap infeksi lain, seperti hepatitis. Karena IgM tidak melewati plasenta, ketinggian immunoglobulin ini pada bayi baru lahir menunjukkan infeksi intrauterin seperti rubella, cytomegalovirus (CMV) atau penyakit menular seksual (PMS). IgG adalah jenis antibodi yang paling umum, yang terdiri dari sekitar 75% dari imunoglobulin serum. IgG diproduksi pada paparan berikutnya terhadap antigen. Sebagai contoh, setelah menerima suntikan tetanus kedua, atau booster, seseorang memproduksi antibodi IgG dalam lima sampai tujuh hari. IgG hadir baik dalam darah dan jaringan, dan merupakan antibodi hanya untuk melintasi plasenta dari ibu ke janin. IgG ibu melindungi bayi yang baru lahir untuk bulan pertama kehidupan, sampai sistem kekebalan bayi memproduksi antibodi sendiri. IgA merupakan sekitar 15% dari imunoglobulin dalam tubuh. Meskipun ditemukan untuk beberapa derajat dalam darah, itu hadir terutama dalam sekresi dari saluran pernapasan

dan pencernaan, dalam air liur, kolostrum (cairan kekuningan yang diproduksi oleh payudara selama kehamilan akhir dan beberapa hari pertama setelah melahirkan), dan menangis. IgA memainkan peran penting dalam mempertahankan tubuh terhadap invasi kuman melalui membran berlapis organ mukosa. IgE adalah antibodi yang menyebabkan reaksi alergi akut, melainkan diukur untuk mendeteksi kondisi alergi. IgD, yang merupakan bagian terkecil dari imunoglobulin, jarang dievaluasi atau terdeteksi, dan fungsinya belum dipahami dengan baik. Persiapan Tes ini memerlukan sampel darah. Rehabilitasi Karena tes ini memerintahkan ketika baik tingkat yang sangat rendah atau sangat tinggi imunoglobulin yang dicurigai, pasien harus waspada untuk setiap tanda-tanda infeksi setelah ujian, termasuk demam, menggigil, ruam, bisul atau kulit. Setiap nyeri tulang atau nyeri juga harus segera dilaporkan kepada dokter. Risiko Risiko untuk tes ini adalah minimal, tetapi dapat mencakup sedikit pendarahan dari pingsan darah-gambar, situs atau perasaan pusing setelah venipuncture, atau memar. Hasil yang normal Rentang referensi bervariasi dari laboratorium ke laboratorium dan tergantung pada metode yang digunakan. Untuk orang dewasa, nilai normal biasanya ditemukan dalam kisaran berikut (1 mg = sekitar 0,000035 oz dan 1 dL = sekitar 0,33 oz cairan..): * IgM: 60-290 mg / dL * IgG: 700-1,800 mg / dL * IgA: 70-440 mg / dL

Abnormal Hasil Peningkatan kadar IgM dapat menunjukkan Macroglobulinemia Waldenstrom, keganasan yang disebabkan oleh sekresi IgM pada tingkat tinggi oleh sel ganas lymphoplasma. Tingkat IgM meningkat juga dapat mengindikasikan infeksi kronis, seperti hepatitis atau mononukleosis dan penyakit autoimun, seperti rheumatoid arthritis. Penurunan tingkat IgM dapat menjadi indikasi AIDS, imunosupresi disebabkan oleh obat tertentu seperti steroid atau dekstran, atau leukemia. Peningkatan kadar IgG dapat mengindikasikan penyakit hati kronis, penyakit autoimun, reaksi hyperimmunization, atau infeksi kronis tertentu, seperti tuberkulosis atau sarcoidosis. Penurunan kadar IgG dapat mengindikasikan Wiskott-Aldrich syndrome, kekurangan genetik yang disebabkan oleh sintesis tidak memadai IgG dan imunoglobulin lainnya. Penurunan IgG juga dapat dilihat dengan AIDS dan leukemia. Peningkatan kadar IgA dapat mengindikasikan penyakit hati kronis, infeksi kronis, atau penyakit radang usus. Penurunan kadar IgA dapat ditemukan di ataksia, suatu kondisi yang mempengaruhi gerakan keseimbangan dan gaya berjalan, tungkai atau mata, berbicara, dan telangiectasia, peningkatan ukuran dan jumlah pembuluh darah kecil di daerah kulit, menyebabkan kemerahan. Penurunan tingkat IgA juga terlihat pada kondisi protein darah rendah (hypoproteinemia), dan imunosupresi narkoba.

IMMUNOELECTROPHORESIS

Immunoelectrophoresis adalah teknik yang memisahkan protein berdasarkan baik muatan bersih (sehingga gerakan mereka dalam medan listrik) dan respon sistem kekebalan tubuh terhadap protein. Teknik ini banyak digunakan di kedua klinis dan laboratorium penelitian sebagai alat diagnostik untuk menyelidiki komposisi protein serum. Petr Nikolaevich Grabar, sebuah imunologi Perancis, merancang teknik tahun 1950-an. Pada intinya, immunoelectrophoresis memisahkan berbagai protein dalam sampel dalam medan listrik dan kemudian probe protein dipisahkan dengan menggunakan antiserum yang diinginkan. Versi yang paling banyak digunakan teknik mempekerjakan sebuah alat, yang pada dasarnya terdiri dari piring slide berukuran mikroskop. Piring adalah dukungan untuk gel yang dituangkan di atas dan dibiarkan membeku. Pembangunan gel dapat bervariasi, tergantung pada pemisahan yang akan dilakukan. Agar, seperti yang digunakan dalam media pertumbuhan mikrobiologi, dan lain bahan yang disebut agarosa dapat digunakan. Pilihan lain yang populer adalah jaringan terkait bahan kimia yang dikenal sebagai akrilamida. Rantai akrilamida dihubungkan membentuk apa yang ditunjuk sebagai poliakrilamida. Berbagai jenis jaringan gel dapat paling produktif dibayangkan sebagai overlay tiga-dimensi dari rantai terkait silang. Efeknya adalah untuk menghasilkan terowongan mengular melalui matriks berbagai diameter. Ini diameter, yang juga disebut sebagai ukuran pori, dapat diubah sampai batas tertentu dengan memvariasikan konsentrasi dari beberapa bahan dari suspensi gel. Tergantung pada ukuran dan bentuk protein, gerakan melalui matriks ini akan relatif lambat atau cepat. Selain itu, tergantung pada muatan total molekul protein memiliki, protein akan bermigrasi ke arah elektroda bermuatan positif atau elektroda bermuatan negatif ketika arus listrik dilewatkan melalui matriks gel.

Dengan demikian, berbagai spesies protein akan terpisah dari satu sama lain sepanjang gel. Dalam beberapa konfigurasi dari immunoelectrophoretic set-up, sampel yang mengandung protein yang akan dianalisis ditambahkan ke lubang di kedua sisi pelat gel. Sebagai contoh, satu sampel bisa berisi serum dari individu kesehatan dan sampel lain bisa mengandung serum dari seseorang dengan infeksi. Bagian tengah piring berisi palung, di mana spesies dimurnikan tunggal atau campuran antibodi yang dikenal antibodi ditambahkan. Molekul-molekul antibodi berdifusi keluar dari solusi melalui ke gel. Dimana antibodi bertemu dengan antigen yang sesuai, reaksi menyebabkan pembentukan endapan visual. Biasanya, curah hujan yang terjadi di busur sekitar sampel antigen yang mengandung. Dalam contoh, pola presipitasi dapat mengungkapkan perbedaan antigen antara serum normal dan serum dari orang yang terinfeksi.

Jenis immunoelectrophoresis memberikan kualitatif ("ya atau tidak") jawaban sehubungan dengan ada atau tidaknya protein, dan bisa semi-kuantitatif. Bentuk busur presipitasi juga penting. Busur berbentuk tidak teratur dapat menjadi indikasi dari protein abnormal atau adanya lebih dari satu protein antigen yang sama. Immunoelectrophoresis juga dapat digunakan untuk mendeteksi situs antigenik tertentu setelah transfer protein dari gel ke dukungan khusus, seperti nitroselulosa. Penambahan antibodi diikuti oleh bahan kimia yang terikat antibodi bereaksi menghasilkan gelap pada dukungan dimanapun antibodi telah terikat antigen. Salah satu versi teknik ini disebut Western blotting. Keuntungan dari teknik ini adalah bahwa, dengan menjalankan dua gel dan menggunakan hanya satu gel untuk transfer protein untuk nitroselulosa, deteksi kekebalan dari protein dapat dilakukan tanpa mempengaruhi protein yang berada di gel lainnya. Aplikasi lain dari immunoelectrophoresis dikenal sebagai immunoelectrophoresis kapiler. Dalam aplikasi ini, sampel dapat secara bersamaan disusun ke dalam tabung

kapiler banyak. Diameter sangat kecil dari tabung berarti bahwa sampel kecil diperlukan untuk mengisi tabung. Dengan demikian, sampel dapat dibagi lagi menjadi sub volume sangat banyak. Volume masing-masing dapat diuji terhadap persiapan antibodi yang berbeda. Seringkali, reaksi antara antigen dan antibodi dapat diikuti dengan penggunaan senyawa yang berfluoresensi bila terkena sinar laser dari panjang gelombang tertentu. Immunoelectrophoresis kapiler terbukti berguna dalam studi Bovine Spongiform Encephalopathy pada sapi, di mana ukuran sampel bisa sangat kecil. Dalam pengaturan laboratorium klinis, immunoelectophoresis digunakan untuk memeriksa perubahan dalam isi serum, terutama berkaitan dengan perubahan imunoglobulin. Perubahan profil imunoglobulin dapat menjadi hasil dari imunodefisiensi, infeksi bakteri atau virus kronis, dan infeksi janin. Imunoglobulin paling sering diuji untuk adalah IgM, IgG, dan IgA. Beberapa cairan yang dapat diperiksa menggunakan immunoelectrophoresis termasuk urine, cairan serebrospinal dan serum. Ketika peduli dengan imunoglobulin, teknik ini juga bisa disebut gamma globulin atau elektroforesis elektroforesis imunoglobulin.