TUGAS VII

FRAKSINASI dengan KROMATOGRAFI KOLOM

(Ekstrak Psidium guajava)

RIZKI YULIANTY
201210410311134
FARMASI D

FARMASI
FAKULTAS ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG
2015

PENDAHULUAN
1

Tujuan
Mahasiswa mampu melakukan fraksinasi suatu ekstrak menggunakan kromatografi kolom.

2
1

Tinjauan Pustaka
Tanaman Psidium guajava
Dalam sistematika (taksonomi)

tumbuhan,

kedudukan

tumbuhan

jambu

biji

diklasifkasikan sebagai berikut :

Kingdom

: Plantae (Tumbuhan)

Subkingdom

: Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)

Super Divisi

: Spermatophyta (Menghasilkan biji)

Divisi

: Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Kelas

: Magnoliopsida (berkeping dua / dikotil)

Sub Kelas

: Rosidae

Ordo

: Myrtales

Famili

: Myrtaceae (suku jambu-jambuan)

Genus

: Psidium

Spesies

: Psidium guajava L.

Daun jambu biji dikenal sebagai bahan obat tradisional untuk batuk dan diare. Jus jambu
biji "bangkok" juga dianggap berkhasiat untuk membantu penyembuhan penderita demam
berdarah dengue.
Terdapat beberapa kultivar, ada yang tak berbiji (jambu sukun). Kultivar yang terkenal
sebagai penghasil buah yang baik adalah jambu susu, buah besar, biji sedikit, daging buah
putih.
Tanaman mudah diperbanyak dengan biji, dengan cara okulasi dan dengan tunas berakar.
Perbanyakan dengan biji dilakukan dengan disemaikan lebih dahulu selama 3 bulan sampai 5
bulan. Jarak tanam dikebun adalah 6m sampai 7m. Panenan daun dapat dilakukan setelah
tanaman berumur 6 bulan sampai 9 bulan. Tanaman dibudidayakan mencapai tinggi 5m sampai
6m. Tanaman dapat berproduksi baik pada berbagai macam tanah, pada ketinggian dibawah
1000m.

Kandungan senyawa Psidium guajava

Buah, daun, dan kulit batang pohon jambu biji mengandung tanin, sedang pada bunganya
tidak banyak mengandung tanin. Daun jambu biji juga mengandung zat lain kecuali tannin,
seperti minyak atsiri, asam ursolat, asam psidiolat, asam kratogolat, asam oleanolat, asam
guajaverin dan vitamin. Kandungan buah jambu biji (dalam 100 gr), yaitu Kalori 49 kal;
Vitamin A 25 SI; Vitamin B1 0,02 mg; Vitamin C 87 mg; Kalsium 14 mg; Hidrat Arang 12,2
gram; Fosfor 28 mg; Besi 1,1 mg; Protein 0,9 mg; Lemak 0,3 gram; dan Air 86 gram.
Daun jambu biji mengandung total minyak 6% dan minyak atsiri 0,365% [Burkill, 1997],
3,15% resin, 8,5% tannin, dan lain-lain. Komposisi utama minyak atsiri yaitu -pinene, pinene limonene, men- thol, terpenyl acetate, isopropyl alco- hol, longicyclene, caryophyllene,
- bisabolene, caryophyllene oxide,- copanene, farnesene, humulene, selinene, cardinene and
curcumene [Zakaria, 1994]. Minyak atsiri dari daun jambu biji juga mengandung nerolidiol,sitosterol, ursolic, crategolic, dan guayavolic acids. Selain itu juga mengandung minyak atsiri
yang kaya akan cineol dan empat triterpenic acids sebaik ketiga jenis flavonoid yaitu;
quercetin, 3-L-4-4- arabinofuranoside (avicularin) dan 3-L-4-pyranoside dengan aktivitas anti
bakteri yang tinggi.
2

Kromatografi
Kromatografi merupakan suatu cara pemisahan fisik dengan unsur-unsur yang akan
dipisahkan terdistribusikan antara dua fasa, satu dari fasa-fasa ini membentuk lapisan stasioner
denagn luas permukaan yang besar dan yang lainnya merupakan cairan yang merembes lewat.
Fasa stasioner mungkin suatu zat padat atau suatu cairan dan fasa yang bergerak mungkin
suatu cairan atau suatu gas.(Underwood, 1981).Cara-cara kromatografi dapat digolongkan
sesuai dengan sifat sifat dari fasa diam, yang dapat berupa zat padat atau zat cair.Jika fasa
diam berupa zat padat disebut kromatografi serapan, jika berupa zat cair disebut kromatografi
partisi. Karena fasa gerak dapat berupa zat cair atau gas maka ada empat macam sistem
kromatografi yaitu:
a)Fasa gerak cairfasa diam padat (kromatografi serapan):

kromatografi lapis tipis

kromatografi penukar ion

b)

Fasa gerak gasfasa diam padat, yakni kromatografi gas padat

c)

Fasa gerak cairfasa diam cair (kromatografi partisi), yakni kromatografi kertas.

d)

Fasa gerak gasfasa diam zat cair, yakni :

kromatografi gascair

kromatografi kolom kapiler

Semua pemisahan dengan kromatografi tergantung pada kenyataan bahwa senyawa

senyawa yang dipisahkan terdistribusi diantara fasa gerak dan fasa diam dalam perbandingan
yang sangat berbeda beda dari satu senyawa terhadap senyawa yang lain.
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan metode pemisahan fitokimia.Lapisan yang
memisahkan terdiri dari fase diam yang ditempatkan pada penyangga yang berupa pelat gelas,
logam, atau lapisan yang cocok. Campuran yang akan dipisah berupa larutan, ditotolkan berupa
bercak atau noda. Pelat atau lapisan ditaruh didalam bejana tertutup rapat yang berisi larutan
pengembang yang cocok (fase gerak), pemisahan terjadi selama perambatan kapiler
(pengembangan).Selanjutnya senyawa yang tidak berwarna harus ditampakkan (dideteksi).KLT
merupakan suatu sistem kromatografi yang pemakaiannya paling luas pada fitokimia karena
dapat diterapkan hampir pada setiap golongan senyawa, kecuali pada kandungan yang sangat
atsiri. Beberapa keuntungan dari metode KLT antara lain: hanya membutuhkan penyerap dalam
jumlah yang sedikit dan noda-noda yang terpisah dilokalisir pada pelat seperti pada lembaran
kertas dan hanya membutuhkan waktu yang lebih cepat serta diperoleh pemisahan yang lebih
baik. Waktu rata-rata untuk KLT dengan jarak pengembangan 10 cm pada silika gel adalah
sekitar 20-30 menit tergantung pada sifat fase gerak. Pemisahan yang sama dengan kertas
memerlukan waktu sekitar lima menit. Jarak pengembangan senyawa pada kromatogram
besarnya dinyatakan dengan angka Rf atau hRf.
Rf = Jarak garis depan dari titik awal
Jarak titik pusat bercak dari titik awal
Angka Rf berjangka antara nol koma nol dan hanya ditentukan dua desimal. hRf adalah
angka Rf dikalikan factor 100 (h), menghasilkan nilai berjangka nol sampai 100, tetapi karena
angka Rf mempunyai fungsi sejumlah faktor, angka ini dianggap sebagai petunjuk saja, harga
hRf lah yang dicantumkan untuk menunjukan letak suatu senyawa pada kromatogram.

Kromatografi Kolom merupakan kromatografi penyerapan zat penyerap, misalnya

aluminium oksida yang telah diaktifkan, silica gel, kiselgur kromatografi murni dalam keadaan
kering atau setalah dicampur dengan sejumlah cairan dimapatkan ke dalam tabung kaca atau
tabung kuarsa dengan ukuran tertentu dan mempunyai lubang pengalir keluar dengan ukuran
tertentu. Sejumlah sediaan yang diperiksa dilarutkan dalam sedikit pelarut ditambahkan pada
puncak kolom dan dbiarkan mengalir dalam zat penyerap. Zat berkhasiat diserap dari larutan
oleh bahan penyerap secara sempurna berupa pita sempit pada puncak kolom. Dengan
mengalirkan pelarut lebih lanjut, dengan atau tanpa tekanan udara, masing-masing zat bergerak
turun dengan kecepatan khas hingga terjadi pemisahan dalam kolom yang disebut
kromatogram. Kecepatan bergerak zat dipengaruhi oleh faktor, misalnya daya serap zat
penyerap, sifat pelarut dan suhu dari system kromatografi. Kromatografi pembagian dilakukan
dengan cara mirip dengan kromatografi penyerapan. Kromatografi kertas sebagai penyerap
digunakan sehelai kertas dengan susunan serabut atau tebal yang cocok. Pemisahan dapat
dilakukan dengan menggunakan pelarut tunggal dengan proses yang analog dengan
kromatografi penyerapan atau menggunakan dua pelarut yang tidak dapat bercampur dengan
proses analog dengan kromatografi pembagian. Perbandingan jarak perambatan suatu zat
dinyatakan sebagai Rf zat tersebut. Perbandingan jarak perambatan suatu zat dengan jarak
perambatan zat pembanding kimia dinyatakan sebagai Rr. Letak bercak yang diperoleh dari zat
yang dikromatografi dapat ditetapkan dengan cara berikut;
a). Pengamatan langsung, jika tampak dengan cahaya biasa atau dengan sinar UV.
b). Pengamatan dengan cahaya biasa atau dengan sinar UV setelah kertas disemprot dengan
pereaksi yang dapat memberikan warna pad bercak.
c). Menggunakan pencacah Geiger-muler atau otora diografik jika ada zat radioaktif.
d).Menempatkan potongan kertas pada medium perbiakan yang telah ditanami ntuk melihat
hasil stimulasi atau pertumbuhan bakteri. Alat yang digunakan berupa bejana kromatografi
raltahan korosi.

Prosedur Kerja
1) Lakukan optimasi eluen dengan cara uji KLT terhadap ekstrak dengan mengganti-ganti
eluen sampai diperoleh pemisahan yang baik. Eluen tersebut akan digunakan untuk
fraksinasi.

2) Siapkan 50 gram silica gel.

3) Siapkan eluen dari butir (1) sebanyak 300 ml.
4) Silica gel dimasukkan ke dalam labu erlemeyer, kemudian ditambahan sedikit eluen,
kocok selama 15 menit.
5) Campuran butir (4) tersebut dituang kedalam kolom sampai setinggi 10 cm dari atas.
6) Tuangkan eluen ke dalam kolom sampai penuh, tutup dengan aluminium foil, biarkan
semalam.
7) Timbang ekstrak sebanyak 1% dari jumlah silica gel yang digunakan, kemudian ekstrak
ditambahkan sedikit pelarut (etanol/metanol) ad larut dicampur dengan silica gel sama
banyak, diaduk-aduk menggunakan gelas pengaduk sampai homogeny dan kering.
8) Eluen dialirkan sampai permukaannya 0,5 cm diatas permukaan silica gel.
9) Ekstrak yang sudah dikeringkan dengan silica gel, dimasukkan ke dalam kolom (diatas
permukaan silica gel), lalu ditambah eluen kira-kira setinggi 3 cm. Eluen
dialirkan/diteteskan sambil dituangi eluen baru sampai kolom terisi penuh dengan eluen,
sementara penetesan tetap dilakukan. Kecepatan penetesan diatur.
10) Penempungan eluen setiap vial sebanyak 5 ml.
11) Dilakukan uji KLT untuk setiap kelipatan 10 vial (vial nomor 1, 10, 20, 30, 40, 50, 60).
Pada uji KLT, fase gerak yang digunakan adalah sama dengan fase gerak pada
kromatografi kolom.
12) Bila uji KLT memberikan noda yang sama, maka fraksi diantaranya dapat digabung.
13) Bila uji KLT memberikan noda yang berbeda, maka uji KLT dilakukan pada vial
diantaranya (bila vial nomor 10 dan 20 berbeda, maka vial nomor 15 dilakukan uji KLT).
14) Penetesan dihentikan bila vial terakhir sudah tidak memberikan noda pada uji KLT.

HASIL
Proses penetesan pada saat fraksinasi

Penotolan uji KLT untuk setiap kelipatan 10 vial ( vial ke 1, 10, 20, 30, 40, 50, 60)

Hasil fraksinasi

Hasil nilai Rf;

Jumlah fraksi : 6, masing masing :
1. 1-4
2. 5-10
3. 11-20
4. 21-38
5.39-54
6.55-60

Fraksi 1-6 dilihat pada uv 254 nm (cm)

1.

7,2 cm
8 cm

= 0,9 &

7,8 cm
8 cm

= 0,98

2.

7,2 cm
8 cm

= 0,9 &

7,8 cm
8 cm

= 0,98

3.

7,2 cm
8 cm

= 0,9 &

7,8 cm
8 cm

= 0,98

4.

7,7 cm
8 cm

= 0,96 &

8 cm
8 cm

5.

3 cm
8 cm

= 0,38 &

7,8 cm
8 cm

= 0,98 &

8 cm
8 cm

6.

2cm
8 cm

= 0,25 &

3,3 cm
8 cm

= 0,41 &

7,8 cm
8 cm

=1

=1

= 0,98 &

8 cm
8 cm

= 0,81 &

7,2 cm
8 cm

=1

Fraksi 1-6 dilihat di uv 365nm (cm)

1.

5 cm
8 cm

2.

5,2 cm
8 cm

= 0,63 &

6 cm
8 cm

= 0,75 &

= 0,65 &

6 cm
8 cm

= 0,75 &

6,5 cm
8 cm
6,5 cm
8 cm

= 0,81 &

= 0,9

7,1 cm
8 cm

= 0,89 &

7,7 cm
8 cm

7 cm
8 cm

0,96
3.

6,3 cm
8 cm

= 0,79 &

7,2 cm
8 cm

4.

1,3 cm
8 cm

= 0,16 &

2,2 cm
8 cm

0,88

= 0,9 &

= 0,28 &

7,8 cm
8 cm
3,3 cm
8 cm

= 0,98

= 0,41 &

4,6 cm
8 cm

= 0,58 &

0,6 cm
8c m

5.

0,41 &

6.

2cm
8 cm

= 0,08 &

3,5 cm
8 cm

1,2 cm
8 cm

= 0,44 &

= 0,25 &

3,2 cm
8 cm

= 0,15 &

3,8 cm
8 cm

2cm
8 cm

= 0,48 &

= 0,4 &

3,7 cm
8 cm

= 0,25 &

7 cm
8 cm

3 cm
8 cm

= 0,88 &

= 0,46 &

7,3 cm
8 cm

= 0,38 &

7,8 cm
8 cm

3,3 cm
8 cm

= 0,98

= 0,91 &

7,7 cm
8 cm

0,96

PEMBAHASAN
Praktikum ini dilakukan bertujuan agar mahasiswa mampu melakukan fraksinasi suatu
ekstrak menggunakan kromatografi kolom. Pertama, menuji ekstrak dengan mengganti-ganti
eluen sampai diperoleh pemisahan yang baik dilakukan dengan cara uji KLT. Kemudian
menyiapkan silica gel 50 gram dan eluen dari butir (1) sebanyak 300 ml, silica gel dimasukkan
ke dalam labu erlemeyer dan ditambahkan sedikit eluen kemudian dikocok selama 15 menit.
Campuran tersebut dituang ke dalam kolom sampai batas yang sudah ditentukan lalu ditutup
dengan aluminium foil.
Kedua, menimbang ekstrak 1% dari jumlah silica gel yang digunakan, kemudian ekstrak
ditambahkan sedikit pelarut etanol sampai larut dicampur dengan silica gel sama banyak, diaduk
sampai homogen dan kering. Kemudian dimasukkan ke dalam kolom (diatas permukaan silica
gel) lalu ditambah eluen kira-kira setinggi 3 cm. eluen diteteskan sambil dituangi eluen baru

sampai kolom terisi penuh sementara penetesan tetap dilakukan. Kecepatan diatur 2 detik 1 tetes.
Lakukan penampungan eluen setiap vial sebanyak 5 ml.
Setelah itu, melakukan uji KLT untuk setiap kelipatan 10 vial antara lain vial ke 1, 10,20,
30, 40, 50, 60 dengan cara kromatografi kolom tetapi ketika eluen dalam vial habis, maka pada
vial 1, 10, 20, 30, 40, 50, 60 ditambahkan pelarut n-Heksana dan etanol secukupnya, sedangkan
pada vial yang lain hanya ditambahkan dengan pelarut n-Heksana.
Bila uji KLT memberikan noda yang sama, maka fraksi diantaranya dapat digabung
menjadi satu fraksi. Jika mendapatkan noda yang berbeda, maka uji KLT dilakukan pada vial
diantaranya, misalkan vial 1 dan 10 berbeda, maka vial ke 5 dilakukan uji KLT. Uji KLT
dihentikan bila vial tersebut sudah tidak memberikan noda.
Pada kelompok kami (kelompok 1 2) mendapatkan hasil fraksinasi sebanyak enam
fraksi antara lain;
1. vial ke 1 sampai ke 4 mempunyai fraksi yang sama dengan fraksi pada vial ke 1
2. vial ke 5 sampai ke 10 mempunyai fraksi yang sama dengan fraksi pada vial ke 10
3. vial ke 11 sampai ke 20 mempunyai fraksi yang sama dengan fraksi pada vial ke 20
4. vial ke 21 sampai ke 38 mempunyai fraksi yang sama dengan fraksi pada vial ke 30
5. vial ke 39 sampai ke 54 mempunyai fraksi yang sama dengan fraksi pada vial ke 40 dan 50
6. vial ke 55 sampai ke 60 mempunyai fraksi yang sama dengan fraksi pada vial ke 60
DAFTAR PUSTAKA
Ansel, 1989.
Gunardi, dkk., 2009
Handayani, 2008.
http://dibaliklayarkaca.blogspot.com/2010/06/kromatografi-lapis-tipis.html (Diakses 26 April
2015).
Mirray, Robert K et al. 2009. Biokimia Harper 27th edisi. Jakarta: Buku Kedokteran.
Satoto, 1988.
Serma dan Bernard, 2003
Sudarmadji, dkk., 1989.