Kina Assay dengan Home - Built - LED UV Fluorometer : Analisis Kuantitatif ,

Foto - Bleaching , Fluoresensi Quenching , dan Analisis Urine

ABSTRAK . Analisis kuantitatif kina , foto - bleaching , fluoresensi pendinginan , dan analisis
urin telah dilakukan oleh berarti dari - LED UV fluorometer , yang dapat dengan mudah
dibangun dan digunakan di laboratorium sekolah tinggi . Rentang deteksi kina diperkirakan 0,0580 ppm , cukup untuk banyak percobaan luminescence kelas Kandungan kina di komersial air
tonik ditentukan dari kurva kalibrasi , dan UV foto - bleaching obat anti - malaria ini ditunjukkan
dengan ketergantungan panjang gelombang yang jelas . Pendinginan halida kina fluoresensi juga
diamati dan peningkatan efisiensi pendinginan di urutan Cl-, Br-, Dan I- jelas . Urine analisis
untuk relawan mahasiswa telah dilakukan dan hasilnya jelas mengungkapkan ekskresi dari kina
tertelan . Mahasiswa peserta yang riang sepanjang perjalanan studi ini dan merasakan praktik
akal .
Kata kunci : Kina , fluoresens , LED UV , fluoresens pendinginan , analisis Urine
PENGANTAR
Fluoresensi mudah untuk mengamati, instruktif, dan berlaku untuk banyak sistem kimia, dari
asam-basa titrasi
untuk koordinasi molecules.1,2 biologi molekul luminescence juga
memberikan sensitivitas tinggi beradaptasi dengan analisis kuantitatif sampel nyata dan
memberikan siswa peluang untuk menggalang keterampilan berharga dalam eksperimen uji coba
analitis dan biokimia subjects.3-5 Namun, instrumentasi canggih atau laser untuk praktik yang
tidak selalu tersedia. Di sini kita mengusulkan siswa sederhana eksperimen berdasarkan pada
fluorometer rumah yang dibangun menggunakan -LED UV dan spektrometer serat optik. Bekerja
dengan sirkuit elektronik dan instrumentasi tidak hanya menambah menyenangkan, tetapi juga
pendidikan bagi peserta untuk memahami prinsip-prinsip operasional dari instrumen analitis.
Kina, terkenal obat anti-malaria dan otot elaksan dengan rasa pahit, 6 menyerap dekat sinar
ultraviolet (UV, max = 250 dan 350 nm) dan rilis fluoresensi kuat berpusat di 450 nm.7-9
Karena yang relatif konstan dan terkenal hasil kuantum fluoresensi, kimia ini memiliki dianggap
sebagai standar untuk pendaran molekul. Tidak seperti banyak molekul luminescent lainnya,
emisi adalah tidak padam oleh oksigen. Hal ini, bagaimanapun, cukup rentan untuk quenching.8
halid
Senyawa terkonjugasi ini, Kombinasi kuinolon aromatik dan quinuclidine bisiklik
sistem, yang pertama kali disintesis oleh RB Woodward dan W. E Doering di 1.944,10 Rasa pahit
kina anti malaria tonik dipimpin kolonial Inggris di India untuk mencampur dengan gin ,
sehingga menciptakan populer cocktail " gin dan tonik " . seperti vitamin B , kina diekskresikan
langsung dan agak cepat dalam urin , sehingga mudah deteksi intake.7,11 nya Dalam studi ini ,
kami melaporkan uji fluorimetric kina menggunakan fluorometer rumah yang dibangun dengan
UV - LED , 12 yang mudah untuk merakit , mengoperasikan , dan memelihara . percobaan
dilaporkan di sini semua dilakukan oleh 1 dan 2 tahun siswa SMA . Kandungan kina di
komersial air tonik diukur , foto - bleaching dipantau , fluoresensi pendinginan oleh anion halida
diamati , dan Jumlah dalam urin diukur
EKSPERIMEN

UV - LED Fluorometer Sebuah fluorometer untuk percobaan siswa telah dibangun menggunakan
UV - LED sebagai sumber cahaya dan spektrometer serat optik dengan 3648 - pixel CCD linear
array ( USB 4000 , Samudra Optik ) ( Gambar . 1 ) . Sebuah LED UV ( max = 361 nm ,
bercahaya Intensitas = 750 W , LED Pasokan bagian # L5-0 - UTH15-1 ) , yang terpaku di
lubang tengah piring bundar plastik , adalah tetap di cermin mount . Sumber cahaya ini adalah
tepat dengan karakteristik penyerapan kina ( max = 250 dan 350 nm ) , tetapi mudah ditukar
dengan meliputi LED lainnya daerah panjang gelombang lainnya . UV LED dijalankan oleh
rangkaian sederhana ( Gambar . 2 ) , dan profil emisi dicatat dengan USB 4000 ditunjukkan pada
Gambar . 3. Lampu UV adalah difokuskan oleh lensa ( focal length = 25 mm ) di tengah sampel
dalam kuarsa ( atau PMMA ) kuvet dengan panjang jalur yang dari 1 cm , dan emisi fluoresensi
yang dari sampel adalah dikumpulkan pada 90o dan disampaikan dengan serat optik ke
miniatur serat optik spektrometer CCD seperti ditunjukkan pada Gambar .1. Intensitas
fluoresensi dari kina diamati di 450 nm ( Gambar . 4 ) , max kina fluoresensi , yang dilaporkan
tidak berubah dengan panjang gelombang eksitasi
Solusi Stock Kina 100,0 ppm larutan stok kina disiapkan dengan menimbang 120,7 mg
kina sulfat dehidrasi atau 100,0 mg kina , mentransfer ke labu ukur 1 L , menambahkan 50 mL
dari 1 M H2SO4 , dan menipiskan volume dengan water.7 suling Solusi kina lainnya disediakan
oleh berbagai pengenceran larutan stok dengan 0,05 M H2SO4 . solusi kina harus dibuat setiap
hari dan terlindung dari cahaya untuk menghindari foto - bleaching . Dalam kondisi
eksperimental kami , kina yang konsentrasi menurun ~ 20 % sehari tanpa yang tepat
Perlindungan UV
HASIL DAN DISKUSI
Kalibrasi Curve untuk Kina dan Deteksi yang Rentang Kina Serangkaian standar kina disiapkan
oleh berurutan pengenceran solusi kina dengan 0,05 M H2SO4, dimulai dengan larutan stok 100
ppm. Proses pengenceran dilanjutkan sampai fluoresensi intensitas-to-noise Rasio mencapai 2: 1,
dan solusi kosong digunakan untuk mengatur nol intensitas. Kurva kalibrasi ditunjukkan pada
Gambar. 5. kina jangkauan deteksi dengan-LED UV fluorometer rumah-dibangun diperkirakan
0,05-80 ppm. Signal-to-noise rasio turun di bawah 2: 1 dengan kina konsentrasi yang lebih
rendah dari 0,05 ppm, dan peningkatan intensitas sinyal sebagai fungsi konsentrasi tidak
konsisten di atas 80 ppm.
Kina di Tonic Water
10,0 ml air tonik yang tersedia secara komersial (Jinro Mixer) ditransfer ke 100 mL labu
volumetrik dan diencerkan dengan volume dengan 0,05 M H2SO4. Mungkin gangguan dalam uji
fluorometric untuk kina adalah klorida ion, yang memuaskan kina fluoresensi. Namun, penelitian
sebelumnya telah menunjukkan bahwa efek ini diabaikan
asalkan konsentrasi ion klorida di bawah 0,4 mM, 13 yang merupakan kasus untuk water.7 tonik
Konsentrasi kina ditentukan dari intensitas fluoresensi dan kurva kalibrasi. Dalam
rangka untuk mengkonfirmasi hasilnya, percobaan ini diulang dengan 2 X pengenceran sampel
air tonik. Kitan memperkirakan konsentrasi kina dalam air tonik untuk menjadi 18,1 ppm.
Sayangnya hasil kami tidak divalidasi. konten kina tidak ditentukan pada produk yang digunakan
dalam studi, dan produser, satu-satunya pemasok air tonik di Korea, tidak memberikan informasi
atas permintaan kami.

Foto-Pemutihan dari Kina

10 ppm solusi kina dalam kuvet kuarsa disinari ( pada jarak ~ 5 cm ) dengan lampu UV ( cahaya
hitam , = 254 atau 365 nm switchable , UVP Model UVGL - 58 ) sedangkan Intensitas kina
fluoresensi diukur setiap 10 menit
selama satu jam. Konsentrasi kina pada setiap titik adalah ditentukan dari kurva kalibrasi .
Prosedur ini memiliki telah dilakukan untuk kedua 254 dan 365 nm , dan exponentialtype yang
meluruh diilustrasikan pada Gambar . 6. Jelas foto pemutihan yang pada panjang gelombang
yang lebih pendek jauh lebih tinggi ; ~ 65 % kina memisahkan dalam satu jam dengan = 254
nm di bawah kami kondisi eksperimental , dan tingkat pemutihan adalah ~ 7 kali lebih tinggi dari
pada 365 nm , contoh yang baik dari lebih cepat foto - reaksi dengan energi foton yang lebih
tinggi . paruh kina dengan = 254 nm adalah ~ 35 menit dalam percobaan ini
Pendinginan dari Kina Fluoresensi oleh Anion Halide
Pendinginan kina fluoresensi telah menarik topik kinetics.8 kimia Percobaan meningkatkan
pemahaman siswa dan pengalaman dalam teknik dari Uranium dan bagaimana ion halida ( X- )
Dalam suatu larutan mempengaruhi tingkat persamaan . Sebuah molekul neon ( D ) menyerap
foton ( 1 ) dan kemudian melepaskan gelombang yang lebih panjang foton ( 2 ) . Penambahan Xmenyebabkan penurunan intensitas pendaran ( pendinginan ) oleh depleting bersemangat spesies
(3)
D h D
D* D k1
D dan D* adalah spesies neon di dalam tanah dan keadaan tereksitasi , k1 orde pertama tingkat
peluruhan konstan keadaan tereksitasi , k2 tingkat konstan bimolekular untuk depleting keadaan
tereksitasi oleh pemadam ( Q ) , dan kelebihan Energi yang dilepaskan ke lingkungan dalam
bentuk panas . Ketiga persamaan menghasilkan hubungan Stern - Volmer ( 4 )
(rumus)
mana I0 dan saya adalah intensitas pendaran sebelum dan setelah menambahkan pemadam yang
(X), [Q] molaritas pemadam, dan KSV Stern-Volmer pendinginan constant.9 Oleh karena itu, jika
I0 / I - 1 diplot terhadap [Q], data seharusnya linear dengan kemiringan sama dengan KSV, yang
merupakan rasio antara orde pertama pembusukan konstan (k1) dan pendinginan orde kedua
konstan (k2) dari negara gembira dengan pemadam tersebut. Sebuah 0,01 M larutan stok dari ion
halida disiapkan oleh berat kalium halida (0,7455, 1,190, dan 1,660 g KCl, KBr, dan KI),
mentransfer ke 1 L labu ukur, dan menipiskan volume dengan air suling. 0, 1, 3, 5, 10,
dan 20 mL larutan stok KCl yang dipipet ke 100 mL termos volumetrik, dan 1 mL 100 ppm
solusi kina
ditambahkan ke masing-masing labu dan diencerkan dengan volume. Kina intensitas fluoresensi
dari solusi KCl diukur dan intensitas (I) dan I0 / I - 1 diplot terhadap Konsentrasi KCl. Prosedur
ini diulang dengan KBr dan KI.
Gambar . 7 menunjukkan variasi intensitas dengan anion halida konsentrasi. Efek pendinginan
dari anion halida menjadi jelas pada konsentrasi tinggi anion halida ; konsentrasi yang lebih
tinggi anion halida jelas mengarah ke intensitas yang lebih rendah dari kina fluoresensi . Dalam
uji coba yang terpisah , dekat lengkap pendinginan dari fluoresensi kina juga ditunjukkan dalam

berbagai konsentrasi yang lebih tinggi dari X- ( 1-20 10-3 M ) .Hasil ini juga mengkonfirmasi
peningkatan efisiensi pendinginan anion halida di urutan Cl-, Br-, Dan I-. anion berat
menghasilkan KSV lebih tinggi ; konstanta Stern Volmer untuk kina fluoresensi pendinginan
dengan Cl-, Br-dan I- diukur menjadi 130 , 200 , dan 310 M 1. Masing-masing, yang
sebanding dengan results.8 sebelumnya
Assay Fluorimetric dari Kina di Urine
Sejak kina diekskresikan langsung dan cukup cepat di urin ( paruh dalam tubuh manusia = ~ 18
hours14 ) , menelan satu gin dan tonik atau beberapa ratus ml tonik air memberikan tingkat
mudah diukur dari kina di urin dalam beberapa jam . Skrining urin untuk kina adalah metode
umum untuk pengawasan heroin melanggar karena kina adalah pengencer umum samples.7
heroin ilegal Kami memperkirakan dari konsentrasi kina yang diukur yang botol 300 ml air tonik
( Jinro Mixer ) mengandung 5.43 mg kina . Setiap relawan mahasiswa dikonsumsi dua botol
Jinro tonik air ( 600 ml , 10,9 mg kina ) dan mengumpulkan sampel urin setiap tiga jam di
Berikut 20-26 jam . Sampel urin disiapkan pada dasarnya mengikuti dilaporkan sebelumnya
method.7 Dua mililiter urin dipindahkan ke 15 mL centrifuge tabung dan pH disesuaikan untuk
9-10 dengan 3,7 N NH4OH ( biasanya 2 tetes ) . empat mililiter kloroform - isopropanol ( 3 : 1
v / v ) ditambahkan ke setiap tabung dan sampel terguncang dengan tangan selama 1 menit .
Lapisan diperbolehkan untuk memisahkan ; Centrifuge jika perlu. Dua mililiter fase organik
lebih rendah ditransfer ke bersih , kering tabung centrifuge . Dua mililiter 0,05 M H2SO4
adalahmenambahkan, dan tabung dikocok selama 1 menit. Lapisan yang diizinkan untuk
memisahkan dan fasa air atas ditransfer ke cuvette fluoresensi untuk mengukur fluoresensi
intensitas. Konsentrasi kina tetes untuk setengah nilai asli dalam persiapan sampel ini. Operasi
yang sama dilakukan untuk memeriksa metode pada kosong yang terdiri dari 2,00 mL air suling
dan 2 ppm solusi kina standar dalam air suling. Di kedua kasus ini sebenarnya lebih baik untuk
menggunakan quininefree urin bukan air suling untuk kosong dan standar, karena ada sebuah
interferent neon dikenal di urine yang juga diekstraksi dengan prosedur ini. Dari intensitas emisi
dari sampel diekstrak dan kalibrasi kurva, tingkat kina dari sampel urine asli bertekad. Panjang
gelombang fluoresensi maksimum pengotor ini 425 nm, dan tumpang tindih fluoresensi kina
pada 450 nm; rata-rata, gangguan ini menghasilkan intensitas setara neon sekitar 0,4 ppm
kina di sample.7,15 urine asli Kehadiran kina dalam urin adalah mudah terlihat dengan biru
karakteristik ( max = 450 nm ) neon emisi ( Gbr. 8 ) . Selama prosedur , siswa dapat segera
membedakan kina mengandung sampel dari satu kina bebas dengan warna sampel di bawah sinar
hitam . Jumlah akumulasi kina diekskresikan dari tiga relawan kami ditampilkan sebagai fungsi
waktu pada Gambar . 9. Hasil ini menunjukkan bahwa ~ 20 % dari kina tertelan adalah buang air
besar selama 20 jam setelah asupan , yang lebih rendah dari yang diharapkan . The paruh kina
dalam tubuh manusia diketahui ~ 18 jam , 14 dan Penelitian sebelumnya menunjukkan
pemulihan kina dari 100 % 24 jam setelah intake.7
Sementara alasan untuk pemulihan lebih rendah dari kina dalam uji kami tidak jelas
pada saat ini , kemungkinan alasannya adalah kandungan garam yang tinggi dalam diet Korea .
klorida anion adalah kina fluoresensi quencher.8 terkenal Jumlah non - diabaikan Cl- mungkin
ditransfer ke sampel urin fluorimetric , yang mengarah ke kina keliru rendah konsentrasi . Studi
masa depan lebih lanjut diperlukan untuk menguji efek ini .
KESIMPULAN

Emisi neon kina diamati dengan fluorometer rumah dibangun dengan-LED UV dan CCD
spektrometer. Spektrometer tidak hanya dapat dengan mudah dirakit di laboratorium kimia
sekolah tinggi, tetapi juga sederhana, pendidikan, dan mudah digunakan. Deteksi kina Kisaran
diperkirakan 0,05-80 ppm. Isi kina dalam air tonik diukur dari intensitas fluoresensi nya dan
kurva kalibrasi yang dihasilkan dengan solusi standar dari dikenal konsentrasi. Foto-bleaching
kina adalah dimonitor sebagai fungsi waktu, menentukan pembusukan tingkat. Pendinginan kina
fluoresensi oleh anion halida adalah juga diselidiki, membenarkan peningkatan pendinginan
efisiensi dalam urutan Cl-, Br-, Dan I-, Karena kuat pengikatan anion halida lebih berat dengan
neon yang majemuk. Assay kina Fluorimetric juga telah dilakukan untuk sampel urin dari
relawan mahasiswa. Sampel urine kina mengandung yang mudah dibedakan oleh fluoresensi
yang khas dari kina bebas sampel. Pemulihan kina diukur dengan waktu dan
ditemukan lebih rendah daripada yang dilaporkan sebelumnya. Semua uji coba yang dilakukan
oleh siswa SMA , dan mereka senang dan termotivasi selama penelitian ini . Ucapan Terima
Kasih . Kami ingin mengucapkan terima kasih kepada siswa dari Jemulpo SMA yang telah
berpartisipasi dalam program pembangunan , Moon- Hyeon Cho , In- Sik Kim ,Gwang - Hyuk
Kim , Sun - Woong Kim , Sung - Muk Kang . Karya ini sebagian didukung oleh Jemulpo SMA
dan Universitas Incheon Penelitian Hibah pada tahun 2012 .
Gambar . 1. Skema diagram fluorometer rumah yang dibangun digunakan dalam ini studi .
Fluorometer terdiri dari UV - LED terpaku pada lingkaran piring plastik dan driver-nya
ditunjukkan pada Gambar. 2 , lensa ( focal length = 25 mm ) , dan serat optik CCD spektrometer
miniatur (USB 4000 , Samudra Optik ) yang terhubung ke pemegang sampel melalui serat optik .
Sebuah foto dari spektrometer rumah - dibangun juga ditampilkan
Gambar . Diagram 2. Circuit untuk menjalankan - LED UV . Sebuah sirkuit driver sederhana
digunakan untuk menjalankan UV - LED yang digunakan dalam penelitian ini
Gambar . 3. Emisi spektrum UV - LED direkam dengan sebuah homebuilt fluorometer
digunakan dalam penelitian ini . max diukur menjadi 364 nm , sedikit berbeda dari spesifikasi
produk dari UV - LED
Gambar . 4. Penyerapan ( garis merah padat ) dan emisi ( rusak hitam line) spektrum kina . Kina
melepaskan karakteristik 450 nm fluoresensi biru .
Gambar . 5. Kalibrasi kurva kina . Karena degradasi kina , larutan stok kina disiapkan setiap
hari , dan begitu kalibrasi kurva . Kisaran operasi spektrometer rumah dibangun untuk kina
diperkirakan 0,05-80 ppm .
Gambar . 6. Foto - bleaching kina . Kina adalah jelas sangat sensitif terhadap UV . Perhatikan
bahwa panjang gelombang pendek UV ( 254 nm , lingkaran berongga ) jauh lebih merusak
daripada panjang gelombang UV lagi ( 365 nm , lingkaran padat ) .
Gambar . 7. Quenching fluoresensi kina dengan X-. sementara oksigen bukan pemadam untuk
kina fluoresensi tidak seperti banyak lainnya fluorescing bahan , anion halida efektif
menghabiskannyaemisi . Peningkatan efisiensi pendinginan di urutan Cl-.Br-, Dan I-

Gambar . 8. Fluoresensi dari kina - mengandung sampel urin . Satu Mudah dapat membedakan
fluoresensi karakteristik dengan kina - mengandung sampel urin dari kina yang - sampel gratis
Gambar . 9. Jumlah kina diekskresikan dalam urin . Sampel urin dikumpulkan dari tiga relawan
mahasiswa setiap tiga jam setelah minum dua botol air tonik , dan akumulasi jumlah buang air
besar kina dari setiap siswa diukur Hasil ini menunjukkan pemulihan kina sekitar 20 % dalam
waktu 20 jam , yang sebenarnya lebih rendah dari yang diharapkan ( lihat teks )