TEKNIK PENGAMBILAN SAMPEL DARAH PADA TERNAK

2.1 Tehnik Pengambilan Darah pada Ternak

2.1.1

Tehnik Pengambilan Darah Domba/kambing.

Prinsip
Sampel Darah dapat diambil pada bagian vena jugularis dari bagian
leher. Ternak diusahakan dalam keadaan tenang, baik pada

posisi duduk

maupun berdiri. Bagian kepala Domba/Kambing di arahkan ke satu sisi untuk

mempermudah pengambilan darah pada bagian leher (vena), ibu jari menekan
pembuluh darah vena dibagian pangkal leher sehingga pembuluh vena akan
menggembung dan terlihat jelas. Setelah itu Multi drawing needle (jarum) dan
tabung venoject ukuran no 14 16 ( setelah dipasangkan dengan standar tube
holder) ditusukkan secara hati hati kedalam vena. Setelah yakin berada dalam
posisi yang benar (ditandai dengan tetesan darah yang keluar pada ujung jarum)
kemudian masukkan vakum tube ke dalam standar tube holder, tahan sampai
darah mengalir sesuai dengan volume tabung.
Catatan : oleskan alkohol/betadine pada tempat yang akan diambil sampel
darahnya, sebelum dan sesudah pengambilan sampel.
2.1.2

Tehnik Pengambilan Darah Sapi/kerbau

Prinsip
Sampel darah untuk sapi/kerbau dapat diambil dari vena jugularis di
leher dan vena ventralis di pangkal ekor. Untuk mempermudah pengambilan
sampel darah, biasanya Sapi/Kerbau ditempatkan dalam kandang penjepit atau
semacamnya. Agar Sapi/Kerbau dalam keadaan diam (sulit bergerak) Jarum
yang digunakan biasanya no 14, 16 dan 18. Standar operasional prosedur
selanjutnya sama dengan pada ternak domba/kambing.

2.1.3

Tehnik Pengambilan Darah Pada Kelinci

Prinsip
Sampel darah pada kelinci dapat diambil dari bagian vena maupun
arteri pada telinga.

Jarum yang digunakan ukuran 23 atau 25.

Kelinci

sebaiknya ditempatkan dalam Kotak Kekang untuk mempermudah handling.

Alternatif lain tehnik pengambilan darah pada kelinci adalah dengan menyayat

bagian telinga sepanjang 2-3 mm pada vena latelaris maupun arteri latelaris.
Dalam tehnik ini, darah relatif mudah diperoleh dalam jumlah banyak, namun
pendarahan yang terjadi kadang sukar untuk dihentikan terutama bila yang
disayat adalah bagian arteri latelaris.

Xilen dapat digunakan untuk

mempermudah pengambilan darah dengan menggosokkan nya disekitar telinga,

sehingga pembuluh darah melebar, namun apabila sel darah putih akan dihitung,
tehnik ini dilarang untuk digunakan karena akan merusak didalam analisis
sampel darah.
2.1.4

Teknik Pengambilan Darah Ayam

Prinsip
Sampel darah pada ayam dapat diperoleh pada vena pectoralis eksterna
yang ada dibawah sayap. Pertama, posisikan ternak dalam keadaan berbaring
dan nyaman. Pegang kepala ke salah satu sisi, buka sayap melebar sehingga
vena pectoralis eksterna tampak jelas. gunakan jarum no 21.

2.2 Alat dan Bahan

Alat dan bahan yang diperlukan dalam praktikum pengambilan darah ini adalah :
Satu set blood Kit Sampling yang terdiri dari :
1.

Tabung hisap (vacum Tube)/venoject

Tabung hisap/venoject yang digunakan disesuaikan dengan kebutuhan,
biasanya dibedakan berdasarkan warna tutup tabung. tabung :
Merah : tanpa heparin (tanpa zat anti pembekuan darah)
Hijau

: mengandung antikoagulan (lithium heparin)

Ungu

: mengandung antikoagulan EDTA

(Ethylenediamainetetraacetic acid)

Selain disesuaikan dengan kandungan antikoagulannya, perlu

diperhatikan

volume tabung tersebut, biasanya ditentukan dengan jumlah sampel yang

dibutuhkan. Tersedia dalam ukuran 3,5, 7, 9 ml. Perlu diperhatikan aturan
pemakaian (masa kadaluarsa) serta jumlah sampel yang diambil.

2. Jarum (Multi Drawing Needle)

Tersedia dalam berbagai macam ukuran, disesuaikan dengan jenis ternak yang
akan diambil sampel nya

Domba/Kambing

: No. 14-16

Sapi/kerbau

: No. 14-18

Kelinci

: No. 21-25

Ayam

: No. 21

3. Splluit
4. Cooler Box
5. Kapas,alcohol,betadine
Cara kerja :
1. Siapkan ternak yang akan diambil darahnya dalam posisi berbaring/berdiri
2. Pada Ternak besar yang diambil darahnya, pegang pada bagian kepala ke satu sisi
untuk mempermudah menemukan pembeluh darah vena. dapat juga dilakukan
pengambilan darah pada pembuluh darah dibagian ekor.
3.

Operator menggunakan ibu jari untuk menekan vena di pangkal leher sehingga vena
akan menggembung/ mengempis akan tampak jelas ( bagian yang akan diambil
darahnya )

4. Bersihkan daerah sekitar yang akan diambil darahnya, olesi dengan kapas beralkohol.
Tusukkan jarum di bagian vena jugularis kemudian tampung darah sesuai dengan
kebutuhan dan sesuai aturan pada alat yang digunakan.
5. Setelah diambil darah, pada bagian yang luka di olesi alcohol dan diberi betadine
untuk menghindari infeksi.
6. Pengambilan darah dapat juga digunakan dengan splluit.
7. Pada ternak kelinci pengambilan darah dilakukan pada bagian telinga dan pada ayam
pengmbilan darah dilakukan pada bagian sayap

III. DARAH
3.1. Rupa Darah Makroskopik dan Mikroskopik Sebelum dan Sesudah Hemolisis
Darah dalam keadaan utuh, tidak tembus cahaya, hal ini disebabkan oleh sifat
optik eritrosit yang terdapat dalam darah. Darah tidak tembus cahaya karena adanya
sifat catlak (pernis). Darah akan menjadi tembus cahaya, bilamana se-sel darah tersebut
berada

dalam

larutan

yang

berkonsentrasi

rendah

(tekanan

osmotiknya

rendah/hipotonis), sehingga sel mengembang atau sel darah pecah (terjadi peristiwa
pelepasan hemoglobin = proses hemolisa).
Larutan NaCl pekat (3%) akan menyebabkan sel-sel darah merah mengkerut,
daya penutup darah akan bertambah sehingga darah masih tetap tidak tembus cahaya.
Cara kerja :
Langkah pertama
1. Sediakan 3 buah tabung reaksi A, B, dan C
2. Tuangkan 5 tetes darah yang telah dibebaskan dari fibrin
3. - Tabung A ditambahkan 2 cc aquades
- Tabung B ditambahkan 2 cc larutan NaCl pekat (3%)
- Tabung C biarkan seperti semula
4. Tuangkan beberapa tetes dari setiap tabung A, B, C pada gelas objek
5. Perhatikan pada cahaya tembus dengan dasar putih yang ada hurufnya apakah huruf
terbaca atau tidak (tinjauan makroskopis)
6. Kemudian buat gambar tinjauan mikroskopiknya dari setiap objek A, B, dan C
Langkah kedua
1. Pada tabung A tambahkan 2 cc larutan NaCl (3%)
2. Pada tabung B tambahkan 2 cc aquades
3. a. Perhatikan kedua larutan tersebut, samakah sifat tembus cahayanya?
(ingat dalam volume yang sama antara aquades dan NaCl)
b. Periksa keadaan tersebut di atas dengan jalan membuat preparat mikroskopik dari
kedua tabung tersebut. Berubahkah darah itu secara mikroskopik dan
makroskopik? Terangkan sejauh pengetahuan saudara!
c. Gambaran tinjauan mikroskopiknya
A(A + 5cc NaCl 3%)
B(B + 5cc air)

Langkah ketiga
1.

Ambil tabung reaksi yang baru, tuangkan kedalamnya 2cc darah

2.

Tambahkan 5 cc larutan Ureum (1,8 % dalam air yang tekanan osmotiknya sama
dengan tekanan osmotik larutan NaCl 0,9 %).

3.
3.2

Gambarkan hasil pengamatan makroskopik dan mikroskopiknya!

Menentukan Tahanan Osmotik Sel-Sel Darah Merah

Butir-butir darah merah berbentuk bikonkaf yang berisi cairan intraseluler.
Bila cairan darah ini dimasukkan ke dalam suatu larutan hipertonis atau hipotonis
terhadap cairan darah, maka akan terjadi terjadi proses osmose dan difusi.
Adanya proses osmose memungkinkan adanya cairan yang mengalir dari
larutan di luar sel ke dalam sel-sel darah , darah tidak mengalami perubahan bila
tekanan osmose cairan tersebut sama dengan tekanan osmose cairan intraseluler.
(isotonis) Bila cairan di luar sel-sel tersebut hipertonis, maka sel-sel tersebut akan
kehilangan cairan intraselulernya sehingga sel darah akan mengkerut; sedangkan bila
cairan di luar sel tersebut hipotonis, maka cairan dari luar sel-sel tersebut akan masuk
kedalam sel sehingga sel akan membengkak dan lama-lama akan pecah dan
hemoglobin akan keluar (proses hemolisis).
Alat dan Bahan yang diperlukan

1 seri tabung reaksi 9 buah dalam rak

Pipet 1 ml atau 2 ml

Darah sapi atau domba

Larutan NaCl 3%

Aquadest

Cara kerja :
1. Sediakan 5 buah tabung reaksi yang bersih dan kering
2. Buat larutan NaCl 0% (aquadest), 0,5%, 0,9% , 1%, dan 3%.
3. Isilah tiap-tiap tabung dengan larutan NaCl sebanyak 2 cc
4. Teteskan 5 tetes darah yang tersedia ke dalam tiap tabung. Campurkanlah secara
hati-hati. Biarkan selama 30 menit.
5. Lihat dalam tabung yang mana mulai terlihat lapisan bening di lapisan atas.
6. Teteskan pada gelas objek (lakukan dari setiap tabung) lihat di bawah mikroskop.
Gambar dan beri penjelasan bila ada perubahan yang saudara lihat!

3.3

Beberapa Sifat Fisik Darah

3.3.1 Berat jenis darah
Cara penentuan berat jenis darah ada beberapa meode, diantaranya:
a. Menggunakan Pyknometer
Dalam percobaan ini digunakan darah yang bebas fibrin
Cara kerja :
1. Pyknometer ditimbang
2. Pyknometer diisi aquades, lalu ditimbang
3. Pyknometer diisi darah, lalu ditimbang
Dari hasil penimbangan dapat ditentukan berapa berat jenis darah tersebut.
b. Cara Philips, dkk
Darah yang diperlukan cukup beberapa tetes saja yaitu dengan langkah
kerja sebagai berikut :
1. Buatlah larutan standar CuSO4 yang mempunyai berat jenis 1,050; 1,055;
1,060; 1,065
2. Sediakan tabung reaksi sebanyak 4 buah, tuangkan larutan standar
tersebut kedalam tabung reaksi yang telah ada dan beri tanda.
3. Teteskan darah yang akan dicari berat jenisnya ke dalam tabung yang
telah disediakan.
4. Amati dengan seksama pada tabung yang mana darah itu melayang, hal
ini darah itu tersebut mempunyai berat jenis yang sama dengan larutan
tersebut.
c. Cara Hammerechlag
Pada prinsipnya cara ini sama dengan cara Phillips hanya larutan yang
dipergunakan merupakan campuran benzol (berat jenis 0,884) dan chloroform
(berat jenis 1,4870). Benzol dan kloroform dicampurkan dalam perbandingan
tertentu sehingga tetes darah melayang didalamnya.
3.3.2. Kekentalan Darah
Menurut hukum Pciscuille untuk suatu cairan yang mengalir pada
suatu kapiler dengan tekanan yang tetap jumlah yang mengalir berbanding lurus
dengan waktu tekanan dan pangkat empat jari-jari, tetapi berbanding terbalik
dengan panjang kapiler dan viskositasnya. Viskositas yaitu perbandingan

viskositas darah tersebut terhadap aquadest, dengan catatan bahwa viskositas

dianggap satu. Unuk percobaan ini dilakukan dengan Viskosimeter Oswatd.
Cara kerja :
Isilah tabung A dengan aquadest sampai kira-kira 1 cm dari ujung atas.
Selama itu ujung tabung B ditutup dengan ibu jari. Setela siap, tutupan jari
dibuka kemudian pada waktu permukaan cekung aquadest melintas tanda I
sampai II dicatat waktunya (dipergunakan dengan stopwatch).
Percobaan diulang 3 kali
a.

.............. (detik)

b.

.............. (detik)

c.

.............. (detik)

rata-rata ................ (detik)

Setelah itu, viscosimeter dikeringkan dan lakukan percobaan tersebut di

atas dengan mempergunakan darah.
Hasil percobaan
1. ............... (detik)
2. ............... (detik)

rata-rata ................ (detik)

3. ............... (detik)
Bila viscosimeter air = 1, maka viskosimeter darah = .............. harap
diperhatikan selama melakukan tidak boleh ada gelembung udara dalam
viskosimeter.
3.4. Penentuan Kadar Hemoglobin (Hb)
Hemoglobin merupakan pigmen dari eritrosit yang sangat kompleks.
Sebenarnya hemoglobin merupakan persenyawaan antara protein, globin, dan zat warna
(heme). Keistimewaan dari hemoglobin adalah dapat mengikat O2 dan CO2.
Darah dengan larutan Hcl 0.1 N akan membentuk hematin yang berwarna
coklat. Warna disamakan dengan warna standar sahli dengan menambahkan
aquadestilata sebagai pengencer.
Penetapan kadar hemoglobin digunakan untuk mendiagnosa anemia dan Mean
Corpuscular Hemoglobin. Penetapan kadar Hb dapat dilakukan antara lain dengan
metode :
1. Hematin asam dengan Hemometer Sahli
2. Talquist
3. Cyanomethemoglobin

3.4.1. Metode Hematin Asam dengan Hemometer Sahli

Alat dan bahan yang digunakan :
a. 1 set hemometer Sahli
b. Aquadest
c. HCl N/10
d. Darah domba, sapi atau ayam
e. Kapas, alkohol, Vaccinostyle steril
Cara kerja
1. Bersihkan dan keringkan tabung hemometer
2. Isi tabung hemometer dengan HCl N/10 sampai garis batas
3. Isap darah sampel dengan pipet hemometer sampai tanda garis 20mm
4. Tuangkan darah ke dalam tabung hemometer
5. Campurkan (aduk) dengan alat pengaduk yang tersedia (darah akan terlihat
coklat tua). Hal ini menunjukkan adanya hemolisis.
6. Tambahkan aquadest tetes demi tetes sambil diaduk terus sampai warna
sample sama dengan warna standar.
7. Baca tinggi menicus (permukaan) cairan dalam tabung (satuan Hb = Gr %)
3.4.2. Metode Tallquist
Prinsip kerjanya, menentukan kadar Hb dengan membandingkan
intensitas warna merah. Intensitas warna tersebut dapat disamakan dengan
konsentrasi Hb yang terdapat dalam darah. Terdiri dari sebuah buku yang berisi
warna-warna darah yang telah diketahui konsentrasinya Hb-nya.
Cara kerja
1.

Ambil contoh darah dengan pipet tetes

2.

Teteskan darah pada kertas isap yang telah tersedia, kemudian keringkan.

3.

Bandingkan bercak/tetesan darah dengan warna standar yang ada pada

buku standart tallquist Adam.

4.

Tentukan dan baca kadar Hb-nya.

3.5. Penentuan Nilai Hematokrit

Penentuan nilai (%volume eritrosit) didalam darah dengan metoda
mikromematokrit.
Darah yang dicampur dengan antikoagulan dipusing dengan alat centrifuge
sehingga membentuk lapisan-lapisan. Lapisan yang terdiri atas butir-butir darah merah

atau eritrosit diukur dan dinyatakan sebagai % volume dari keseluruhan darah.
Hematokrit adalah suatu cara yang teliti untuk diagnosa anemia.
Cara kerja
1. Masukkan darah ke dalam kapiler hematokrit yang sudah mengandung anti
koagulan (mikro kapiler warna merah). Tutuplah salah satu kapiler dengan
kristoseal
2. Kemudian kapiler yang sudah berisi darah tersebut dipusing menggunakan
centrifuge 3000 rpm selama 15 menit.
3. Setelah disentrifuge darah akan terpisah antara sel-sel darah dan plasmanya,
bacalah volume sel-sel darah yang sudah terpisah dalam kapiler dengan alat
pembaca mikrokapiler (micro capillary reader) Hitunglah nilai hematokrit
Nilai hematokrit =

Volume sel-sel darah

x 100%
Volume darah

3.6. Penentuan Waktu Perdarahan

Waktu perdarahan adalah waktu yang diperlukan dari saat keluar sampai
waktu pada saat darah tidak keluar lagi.
Cara kerja :
1. Tusuklah ujung jari, catatlah dengan tepat waktu saat darah pertama keluar.
2. Isaplah tetesan darah dengan kertas isap sampai darah tidak keluar lagi.
3. Catat waktunhya!
3.7. Penentuan Waktu Beku Darah
Waktu pembekuan adalah waktu yang diperlukan dari saat darah keluar
sampai terbentuk benang fibrin pada proses pembekuan darah. Darah yang keluar dari
pembuluh darah akan berubah sifatnya yaitu dari sifat cair menjadi padat (fibrinogen
menjadi fibrin)
Cara kerja :
1. Tusuklah ujung jari, tetes darah yang keluar dihisap ke dalam mikro kapiler yang
tidak berheparin (pipet warna biru). Catatlah dengan tepat saat tetes darah masuk ke
dalam kapiler!
2. Genggamlah pipet mikrokapiler tadi dalam tangan saudara selama 5 menit. Setelah itu
patahkan sedikit demi sedikit kapiler tersebut setiap 1 menit sampai terbentuk
benang fibrin pada patahannya.

3. Catat waktu pada saat terjadi benang fibirin. Waktu antara penggisapan darah ke
dalam kapiler dan saat mulai terbentuk benang fibrin adalah waktu pembekuan.
3.8. Menghitung Jumlah Eritrosit (Sel Darah Merah)
Menghitung jumlah sel-sel darah menggunakan 1 set alat yang disebut
Haemocytometer
Prinsip perhitungan ini adalah : pewarnaan darah dengan suatu pengencer
kuhsus yaitu larutan Hayem yang bersifat isotonis dan berfungsi sebagai pewarna
eritrosit. Darah yang telah diencerkan di alam pipet haemocytometer tersebut kemudian
dimasukkan ke dalam kamar hitung dan dihitung di dalam mikroskop.
Larutan hayem terdiri dari :

Merkuri chlorida

0,5 gr

Natrium sulfat

5 gr

Natrium chlorida

1 gr

Aquadest

200 ml

Alat dan bahan :

1. 1 set haemocytometer lengkap yang terdiri dari :

1 buah pipet yang berisi batu merah

1 buah pipet yang berisi batu putih

1 buah kamar hitung dengan penutup (cover glass)

2. Mikroskop
3. Darah domba, sapi, ayam atau manusia
4. Kertas hisap dan kapas
5. Desinfektan (alcohol 70%)
Cara kerja :
1. Ambil darah dengan cara menusuk bagian yang dipilih (darah juga dapat diambil dari
ujung manusia), dapat juga dari sayap ayam, telinga kelinci, telinga domba dll).
Jangan lupa memakai desinfekan untuk membersihkan bagian yang akan diambil
darahnya.
2. Isaplah darah yang keluar dari luka, dengan pipet haemocytometer yang berbatu
merah sampai tanda 1. Usahakan bekerja cepat jangan sampai darah membeku di
dalam pipet.

3. Encerkan darah dalam pipet dengan menghisap larutan hayem sampai tanda 101,
dengan demikian darah tersebut telah diencerkan sebanyak 100 kali.
4. Kocoklah pipet tersebut secara horizontal (lihat yang dicontohkan asisten). Hal ini
untuk mencegah tercampurnya larutan hayem dalam kapiler.
5. Biarkan larutan darah dalam larutan hayem ini selama 15 menit
6. Buanglah beberapa tetes larutan dari dalam pipet
7. Masukkan sampel darah ke dalam kamar hitung kemudian tutup dengan gelas penutup
8. Lihat di bawah mikroskop, hitunglah butir-butir eritrosit yang berada di dalam kotakkotak kecil. Untuk menghitung jumlah eritrosit hitunglah sebanyak 40 kotak.
Cara menghitung eritrosit dalam kamar hitung :
Hitunglah seluruh eritrosit yang ada di dalam kotak, untuk eritrosit yang
menempel pada garais batas, pilihlah dua garis batas. Seperti contoh di bawah ini
Gambar
B
A

Keterangan :
Jumlah eritrosit di kotak 1 adalah 4 butir (A dan B dihitung)
Jumlah eritrosit di kotak 2 adalah 2 butir (D dihitung)
Jumlah eritrosit di kotak 3 adalah 2 butir (C dihitung)
Jumlah eritrosit di kotak 4 adalah 1 butir
Perhitungan :
Kotak kecil mempunyai ukuran lebar 1/20 mm, panjang 1/20 mm dan tinggi 1/10 mm,
maka volume kotak kecil 1/4000 mm
Volume 40 kotak kecil = 40 x 1/4000 mm = 1/100 mm.

Bila didapatkan x butir dalam 40 kotak dengan pengenceran darah 100 kali, maka dapat
dihitung jumlah eritrosit dalam 1 mm darah.
Jumlah sel darah merah dalam 1 mm = 100 x 100 x X butir = 10.000 X butir
3.9. Menghitung JUMLAH LEUKOSIT (SEL DARAH PUTIH)
Pada prinsipnya sama dengan cara menghitung eritrosit, hanya pipet yang digunakan
adalah pipet berbatu putih dan larutan yang digunakan adalah larutan TURK.
Larutan TURK terdiri dari :

Glasial acetic acid

2 ml

Gentian violet 1% aq

1 ml

Aquadest

100 ml

Cara kerja
1. Darah dihisap sampai tanda 1, kemudian diencerkan dengan larutan TURK sampai
tanda 11. Ini berarti pengenceran 10 kali. Lakukan pengocokan (sama seperti pada
eritrosit)
2. Setelah dihomogenkan dengan memutar seperti angka delapan dan dibiarkan 15
menit, kemudian teteskan ke dalam kamar hitung
3. Hitung menggunakan mikroskop, butir-butir darah putih yang terdapat di dalam
kotak-kotak besar, sebanyak 25 kotak.
Catatan : lihat catatan cara menghitung eritrosit.
Perhitungan :
Volume kotak besar

= 1/5 x 1/5 x 1/10 mm = 1/250 mm

Volume 25 kotak

= 25 x 1/250 mm = 1/10 mm

Jumlah leukosit dalam 25 kotak misalnya = Y butir

Maka dalam 1 mm darah mengandung :
10 x 10 xY =100 Y butir leukosit
3.10. SIRKULASI DARAH DALAM PEMBULUHNYA
Tusuklah katak bagian otaknya. Letakkan katak tersebut pada papan gabus dengan
lubang di salah satu sudutnya. Letakkan selaput renang dari salah satu kaki belakangnya di
atas lubang tersebut, renggangkanlah kedua buah jarinya ke gabus supaya selaput renangnya
tetap tegak. Taruhlah selaput renang di bawah mikroskop untuk pemeriksaan.
1. Perhatikanlah peredaran darah yang normal dalam kapiler arteri atau vena.

Bagaimanakah membedakan sebuah arteri dan vena ?

2. Dimanakah aliran darah mempunyai aliran yang cepat? Di pembuluh darah arteri atau
vena ? Terangkan kepentingan ini untuk badan.
3.11. PROSES PERADANGAN
Sambil memperhatikan peredarannya, salah satu anggota kelompok saudara meneteskan
sedikit asam asetat pada bagian selaput renang yang dapat dilihat melalui mikroskop. Ini
harus dikerjakan sedemikian rupa agar pinset tidak menyentuh selaput renang. Perhatikan
proses peradangan.