Kelompok : 2 (Dua)
GRUP F
NAMA : YUNITA
NPM : 1543050101
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS 17 AGUSTUS 1945 JAKARTA
I. Judul Percobaan : Pemeriksaan Makanan dan Minuman
Berbagai macam uji mokrobiologis dapat dilakukan terhadap bahan pangan, meliputi uji
kuantitatif mikroba untuk menentukan daya tahan suatu makanan, uji kualitatif bakteri
patogen untuk menenetukan tingkat keamanan dan uji indikator untuk menentukan tingkat
sanitasi makanan tersebut. Pengujian yang dilakukan terhadap tiap bahan pangan tidak sama
tergantung berbagai faktor, seperti jenis dan komposisi bahan pangan, cara pengepakan dan
penyimpanan serta komsumsinya, kelompok konsumen dan berbagai faktor lainnya (Ramona,
2007).
Metode MPN biasanya biasanya dilakukan untuk menghitung jumlah mikroba di dalam
contoh yang berbentuk cair, meskipun dapat pula digunakan untuk contoh berbentuk padat
dengan terlebih dahulu membuat suspensi 1:10 dari contoh tersebut (Suriaman, 2008).
Metode MPN digunakan medium cair di dalam tabung reaksi, dimana perhitungannya
dilakukan berdasarkan jumlah tabung yang positif yaitu yang ditumbuhi oleh jasad renik
setelah inkubasi pada suhu dan waktu tertentu. Pengamatan tabung yang positif dapat dilihat
dengan mengamati timbulnya kekeruhan atau terbentuknya gas di dalam tabung kecil (tabung
Durham) yang diletakkan pada posisi terbalik, yaitu untuk jasad renik pembentuk gas.
Dalam metode MPN, pengenceran harus dilakukan lebih tinggi daripada pengenceran
dalam hitungan cawan, sehingga beberapa tabung yang berisi medium cair yang
diinokulasikan dengan larutan hasil pengenceran tersebut mengandung satu sel, beberapa
tabung yang lainnya mengandung lebih dari satu sel atau tabung lainnya tidak mengandung
sel. Dengan demikian setelah inkubasi, diharapkan terjadi pertumbuhan pada beberapa tabung
yang dinyatakan sebagai tabung positif, sedangkan tabung lainnya negatif.
Standar plate Count (Angka Lempeng Total) adalah menentukan jumlah bakteri dalam
suatu sampel. Dalam test tersebut diketehui perkembangan banyaknya bakteri dengan
mengatur sampel, di mana total bakteri tergantung atas formasi bakteri di dalam media
tempat tumbuhnya dan masing-masing bakteri yang dihasilkan akan membentuk koloni yang
tunggal (Pelsczar, 2006)
Metode MPN merupakan uji deretan tabung yang menyuburkan pertumbuhan koliform
sehingga diperoleh nilai untuk menduga jumlah koliform dalam sampel yang diuji. Uji positif
akan menghasilkan angka indeks. Angka ini disesuaikan dengan tabel MPN untuk
menentukan jumlah koliform dalam sampel. (Dwidjoseputro. 2005)
Hitungan mikroskopis
Hitungan cawan
MPN (Most Probable Number)
Volumetric
Gravimetric
Kekeruhan (turbidimeter)
Endo Agar
Media Endo Agar adalah media media selektif dan media diferensial yang digunakan untuk
mengisolasi bakteri batang gram negatif berdasarkan kemampuan bakteri memfermentasi
laktosa atau tidak. Media ini pada awalnya dibuat untuk mengisolasi bakteri batang penyebab
tifus (typhoid) kemudian berkembang menjadi media diferensial terutama untuk konfirmasi
pemeriksaan bakteri coliform.
MSA
Manitol Salt Agar (MSA) merupakan media pertumbuhan khusus bakteri halophiles
dan dapat membedakan Staphylococcus patogen dan nonpathogenic. Manitol Salt
merupakan media selektif karena memiliki konsentrasi yang sangat tinggi NaCl (7,5%). .
Kebanyakan bakteri tidak dapat bertahan hidup di lingkungan kadar garam sangat tinggi
( hipertonik). Tapi genus Staphylococcus mungkin sudah beradaptasi dengan lingkungan
tinggi kadar garam dan tumbuh baik di media ini.
TCBS
Thiosulphate Citrate Bile Salts Sucrose Agar ( TCBS Agar ) adalah media
mikrobiologi yang digunakan untuk isolasi secara selektif serta proses kultivasi dari Vibrio
Cholera dan Vibrio enteropathogenik lainnya yang menyebabkan keracunan pada makanan.
SDA
Sabouraud Dextrose Agar digunakan untuk budidaya jamur. Sesuai dengan Harmonized USP /EP / JP
Requirements .Ringkasan Produk dan Penjelasan Sabouraud Dextrose Agar (SDA) merupakan modifikasi
dari Dextrose Agar dengan Sabouraud. SDA digunakan untuk budidaya jamur patogen & komensal dan
ragi. Konsentrasi dekstrosa yang tinggi dan pH asam dari rumus memungkinkan selektivitas fungi.
Meningkatkan SDA dengan penambahan cycloheximide, streptomisin, dan penisilin untuk menghasilkan
media yang sangat baik untuk isolasi terutama dermatofit. Sabouraud Dextrose Agar digunakan untuk
menentukan kandungan mikroba dalam kosmetik, juga digunakan dalam evaluasi mikologi makanan, dan
secara klinis membantu dalam diagnosis ragi dan jamur penyebabin feksi.
SSA
a. Alat
V. Prosedur Kerja
TABEL PENGAMATAN
No. Sampel Makanan
10 mL (double 1 mL (single 0,1 mL (single
strength) strength) strength)
1. + + +
2. + + -
PERHITUNGAN
Karena pada kedua tabung pada setiap konsentrasi penambahan sampel menandakan
hasil positif kecuali pada 1 tabung 0,1 mL, maka indeks MPN yang didapat dari kombinasi
2-2-1 sesuai dengan tabel MPN adalah 28 per 100 mL.
VI. Pembahasan
Pada percobaan ini kelompok 2 menggunakan air keran untuk dijadikan sampel dalam
percobaan. Percobaan ini bertujuan untuk mengetahui kualitas makanan serta jumlah
mikroorganisme yang ada pada sampel makanan berdasarkan nilai Most Probable Number
(MPN).Untuk menentukan apakah bahan makanan itu baik atau tidak dari sudut
mikrobiologi.
Percobaan ini terdiri dari 3 uji yaitu Uji Persumtif (Uji Pendugaan), Uji Konfirmatif (Uji
Penentuan/Panguat) dan Uji Completed (Uji Pelengkap).
Uji ini dilakukan dengan meembuat kaldu laktosa pada 9 tabung besar yang dibagi
menjadi 3 tabung double strength yang ditambahkan Pengenceran Sampel masing masing
10 ml, 3 tabung konsentrasi normal yang ditambahkan 1 ml Pengenceran sampel dan3 tabung
lainnya dengan konsentrasi normal yang ditambahkan 0,1 ml Pengenceran sampel.
Pengenceran sampel dibuat dari 1 ml sampel yang ditambahkan 9 ml Aquadest steril. Pada uji
ini juga dilakukan pengenceran sampel 1/10, 1/100, 1/1000 kedalam petri steril dan dituangi
dengan TSA steril dan dibuat control (+) untuk aquadest steril dan control () untuk media,
kemudian diinkubator pada suhu 37C selama 24 jam. setelah diinkubasi dan diamati terdapat
beberapa tabung yang terdapat gelembung gas pada tabung durham. Terbentuknya gas dalam
lactose broth atau dalam BGLBB tidak selalu menunjukan bakteri E.coli karena mikroba
lainya mungkin juga ada yang dapat memfermentasikan laktosa dengan membentuk gas,
misalnya bakteri asam laktat dan beberapa khamir tertentu. Oleh karena itu perlu di lakukan
uji penguat.
Uji ini dilakukan dengan cara memeriksa dari hasil kaldu laktosa yang positif pada uji
persumtif, kemudian dibuat BGLB (pada double strength) sesuai dengan jumlah kaldu laktosa
yang positif dan diinkubator pada suhu 37C selama 24 jam dan dihitung koloni yang tumbuh
pada cawan petri pada semua pengenceran.
Setelah dilakukan tiga tahap tersebut dapat disimpulkan bahwa sampel yang digunakan
mengandung bakteri Staphylococcus aureus dan Salmonella thypii, hal ini dapat dilihat dari
perlakuan yang pertama dilakukan dengan menggunakan TSA yang didalam nya terdapat
tabung durham menghasilkan hasil positif dengan adanya gelembung pada tabung durham
kemudian dilakukan tahap keduadilakukan yaitu dengan menanam hasil positif pada TSA
kedalam BGLB yang menunjukkan hasil positif sebab adanya kekeruhan yang terjadi pada
tabung kemudian dilakukan tahap yang terakhir penanaman pada media, yang menghsilkan
hasil positif pada media MSA dan SSA. Pada media MSA, dapat disimpulkan bahwa sampel
makanan tersebut mengandung Staphylococcus aureus yang merupakan bakteri gram positif
yang menyebabkan infeksi pada manusia sedangkan pada SSA dapat ditarik kesimpulan
bahwa sampel makanan tersebut mengandung Salmonella thypii yang merupakan bakteri
yang dapat menyebabkan penyakit thypus. Ada nya kandungan bakteri tersebut pada sampel
makanan dapat disebabkan oleh pengolahan yang tidak benar, seperti menggunakan bahan-
bahan yang tidak seharusnya dipakai sehingga ke higeinitasan makanan tersebut rendah.
I. Kesimpulan
Percobaan ini terdiri dari 3 uji yaitu Uji Persumtif (Uji Pendugaan), Uji Konfirmatif
(Uji Penentuan/Panguat) dan Uji Completed (Uji Pelengkap).
Endo agar dan SDA merupakan media yang digunakan untuk menunjukkan ada
tidaknya jamur pada sampel
MSA merupakan media yang digunakan untuk menunjukkan ada tidaknya
Staphylococcus aureus pada sampel
SSA merupakan media yang digunakan untuk menunjukkan ada tidaknya Salmonella
thypii pada sampel
TCBS merupakan media yang digunakan untuk menunjukkan ada tidaknya Vibrio
pada sampel
Aquadest steril digunakan sebagai kontrol positif dan TSA digunakan sebagai kontrol
negatif
Sampel positif mengandung Staphylococcus aureus dan Salmonella thypii
II. Daftar Pustaka
(Harijadi Yunita
(Riong S.Panjaitan,M.Si) Basri,IR)