VERIFIKASI METODE PENETAPAN TOTAL FOSFAT

DALAM AIR PERMUKAAN METODE ASAM ASKORBAT

SECARA SPEKTROFOTOMETRI SINAR TAMPAK
DI BOGOR LABS, PT

AFIFAH DINDA MUTIA

KEMENTERIAN PERINDUSTRIAN REPUBLIK INDONESIA

PUSAT PENDIDIKAN DAN PELATIHAN INDUSTRI
POLITEKNIK AKA BOGOR
BOGOR
2016
AFIFAH DINDA MUTIA. Verifikasi Metode Penetapan Total Fosfat dalam Air
Permukaan Metode Asam Askorbat Secara Spektrofotometri Sinar Tampak di
Bogor Labs, pt. Dibimbing oleh ZULKARNAIN SUKRIA dan SRI
ERNAWATI.

RINGKASAN

Air permukaan adalah semua air yang terdapat di atas dan di bawah
permukaan tanah kecuali air laut dan air fosil. Adanya kandungan fosfat hasil dari
pembentukan fosfat di alam adalah hal yang dapat mengurangi kualitas air yang
dinilai masih layak untuk dimanfaatkan bagi peruntukan tertentu. Bogor Labs, pt
merupakan perusahaan yang bergerak di bidang jasa laboratorium analisis
lingkungan, melakukan penetapan terhadap kadar total fosfat secara
spektrofotometri sinar tampak yang mengacu pada American Public Health
Association (APHA), Method 4500-P. Metode ini telah digunakan untuk analisis
rutin, namun karena penggunaan instrumen baru, perlu dilakukan verifikasi
terhadap metode tersebut.
Percobaan ini bertujuan memastikan unjuk kerja metode analisis total
fosfat pada air permukaan dengan metode asam askorbat yang diadopsi dari
American Public Health Association (APHA), Method 4500-P secara
spektrofotometri sinar tampak. Jika data yang dihasilkan memenuhi persyaratan,
maka motode ini tetap dapat digunakan sebagai analisis rutin di laboratorium uji
Bogor Labs, pt.
Percobaan dilakukan melalui tiga tahap yaitu tahap preparasi, pengujian,
dan pengolahan data. Tahap persiapan meliputi pembuatan larutan deret standar,
preparasi uji limit deteksi dan kuantitasi, presisi, dan akurasi. Tahap pengujian
meliputi uji linieritas, uji presisi (ripitabilitas dan reprodusibilitas), uji akurasi (%
perolehan kembali), uji limit kuantitasi, dan uji limit deteksi metode
menggunakan spektrofotometer sinar tampak pada panjang gelombang 880 nm.
Tahap pengolahan data dilakukan secara statistika.
Berdasarkan percobaan didapatkan rentang kerja linier dari konsentrasi
0,008 mg/L sampai 1,400 mg/L, limit deteksi metode sebesar 0,007 mg/L, limit
kuantitasi 0,018 mg/L, presisi ripitabilitas sebagai %simpangan baku relatif (SBR)
sebesar 2,84% dengan standar keberterimaan kurang dari sama dengan 5,00%,
presisi reprodusibilitas sebagai uji beda nyata pada rata-rata adalah tidak berbeda
nyata, akurasi Spike-Placebo Recovery sebagai %perolehan kembali sebesar
(85,71 113,85)% dan akurasi CRM Simple Nutrients sebagai %perolehan
kembali sebesar (88,00 101,27)% dengan standar keberterimaan (85,00
115,00)%. Maka, dapat disimpulkan bahwa metode penetapan total fosfat metode
asam askorbat secara spektrofotometri sinar tampak mempunyai unjuk kerja yang
baik dan dapat dipertanggung jawabkan karena telah memenuhi syarat
keberterimaan yang telah ditetapkan, sehingga metode ini dapat tetap digunakan
sebagai analisis rutin di Bogor Labs, pt.
 VERIFIKASI METODE PENETAPAN TOTAL FOSFAT

DALAM AIR PERMUKAAN METODE ASAM ASKORBAT

SECARA SPEKTROFOTOMETRI SINAR TAMPAK

DI BOGOR LABS, PT

Laporan Magang dan Praktik Kerja Lapang

Diajukan Guna Melengkapi Syarat Pendidikan Diploma Tiga

Oleh:
AFIFAH DINDA MUTIA
NIM : 136590

Pembimbing I Pembimbing II

Zulkarnain Sukria, S. Si. Sri Ernawati, A. Md. AK.

Mengetahui,

Direktur Politeknik AKA Bogor

Ir. Maman Sukiman, M. Si.

POLITEKNIK AKA BOGOR

BOGOR
2016
 PRAKATA

Puji syukur senantiasa terucap ke hadirat Allah SWT berkat rahmat-Nya

penulis dapat menyelesaikan laporan Praktik Kerja Lapang yang berjudul
Verifikasi Metode Penetapan Total fosfat pada Air Permukaan Metode Asam
Askorbat Secara Spektrofotometri Sinar Tampak di Bogor Labs, pt.
Pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan terimakasih kepada :
1. Bapak Zulkarnain Sukria S. Si., sebagai Pembimbing I yang telah
memberikan bimbingan dan arahan selama praktik kerja lapang dan penulisan
laporan ini.
2. Ibu Sri Ernawati, A. Md. AK, selaku Pembimbing II yang telah memberikan
bimbingan dan arahan selama penulis melakukan praktik kerja lapang.
3. Bapak Ir. Maman Sukiman, M. Si., Direktur Politeknik AKA Bogor, beserta
seluruh dosen, staf, dan karyawan Politeknik AKA Bogor atas ilmu yang
diberikan.
4. Bapak Drs. Agus Taufiq M. Si., sebagai Dosen Wali atas dukungan serta
bimbingannya selama menjalani perkuliahan di Politeknik AKA Bogor.
5. Ibu Endang Sri Soelistyowati dan Mbak Afra Muti Haryanti yang telah
mendukung, memberikan semangat, kasih sayang dan doa serta senyuman.
Semoga penulis bisa berbakti dan selalu mengabdikan hidup untuk keluarga.
6. Seluruh karyawan dan staf Bogor Labs, pt atas semangat dan
dukungannya.
7. Ihsan, Gita, dan Indah atas semangat, dukungan, dan motivasinya.
Penulis menyadari bahwa karya tulis ini belum sempurna. Semoga laporan
ini dapat memberikan manfaat bagi semua pihak yang membacanya.

Bogor, 2016

Afifah Dinda Mutia

v
 DAFTAR ISI

PRAKATA ......................................................................................................................... v

DAFTAR ISI......................................................................................................................vi

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................................... viii

DAFTAR TABEL .............................................................................................................ix

DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................................... x

PENDAHULUAN ............................................................................................................. 1

TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................................... 2

Air ....................................................................................................................................... 2

Mutu dan Kelas Air......................................................................................................... 2

Air Permukaan .................................................................................................................. 3

Penggolongan Air Permukaan ........................................................................................ 3

Pencemaran Air............................................................................................................... 6

Fosfat .................................................................................................................................. 7

Penetapan Fosfat Metode Asam Askorbat ...................................................................... 7

Spektrofotometer Sinar Tampak..................................................................................... 8

Hukum Lambert-Beer ..................................................................................................... 9

Penyimpangan Hukum Lambert-Beer ............................................................................ 9

Prinsip Kerja Sperktrofotometer Sinar Tampak.............................................................. 9

Instrumentasi Spektrofotometer .................................................................................... 10

Verifikasi Metode ............................................................................................................ 12

Linieritas dan Daerah Kerja .......................................................................................... 13

Limit Deteksi Instrumen ............................................................................................... 13

Limit Deteksi Metode ................................................................................................... 14

Limit Kuantitasi ............................................................................................................ 14

vi
 Presisi (Ripitabilitas dan Reprodusibilitas) ................................................................... 14

Akurasi (% perolehan kembali) .................................................................................... 15

PERCOBAAN ................................................................................................................. 17

Tempat dan Waktu ......................................................................................................... 17

Bahan dan Alat................................................................................................................ 17

Bahan ............................................................................................................................ 17

Alat................................................................................................................................ 17

Metode Percobaan .......................................................................................................... 18

Tahap Persiapan ............................................................................................................ 18

Tahap Pengujian............................................................................................................ 20

Tahap Pengolahan Data ................................................................................................ 20

HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................................................... 25

SIMPULAN ..................................................................................................................... 35

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................................xi

vii
 DAFTAR TABEL

Nomor Halaman

1. Uji Limit Deteksi Instrumen ............................................................... 27

2. Uji Limit Deteksi Metode ................................................................... 28
3. Nilai Limit Kuantitasi ......................................................................... 29
4. Uji Akurasi Evaluasi Nilai Limit Kuantitasi ....................................... 29
5. Uji Presisi Evaluasi Nilai Limit Kuantitasi ......................................... 30
6. Hasil Uji Ripitabilitas .......................................................................... 31
7. Hasil Uji-t ............................................................................................ 32
8. Hasil Uji Akurasi Spike-Placebo Recovery ......................................... 33
9. Hasil Uji Akurasi CRM Simple Nutrients ........................................... 34

viii
 DAFTAR GAMBAR

Nomor Halaman

1. Instrumentasi Spektrofotometer .......................................................... 10

2. Kurva Kalibrasi Hubungan Konsentrasi dan Absorbansi ................... 25
3. Kurva Linieritas dan Rentang Kerja ................................................... 26

ix
 DAFTAR LAMPIRAN

Nomor Halaman

1. Pembuatan Pereaksi ............................................................................ 36

2. Perhitungan Konsentrasi Teoritis ........................................................ 37
3. Hasil Perhitungan Kurva Kalibrasi ..................................................... 43
4. Hasil Perhitungan Uji Linieritas .......................................................... 44
5. Data dan Perhitungan Uji Limit Deteksi Instrumen ............................ 45
6. Data dan Perhitungan Uji Limit Deteksi Metode dan Kuantitasi ....... 46
7. Data dan Perhitungan Uji Presisi (Ripitabilitas) ................................. 48
8. Perhitungan Uji-t ................................................................................. 50
9. Data dan Perhitungan Uji Akurasi (%perolehan kembali) .................. 52

x
 PENDAHULUAN

Air permukaan adalah semua air yang terdapat di atas dan di bawah
permukaan tanah kecuali air laut dan air fosil. Sesuai fungsinya air digunakan
untuk berbagai keperluan seperti untuk minum, keperluan rumah tangga,
keperluan industri, pertanian, pembangkit tenaga listrik untuk transportasi baik di
sungai maupun di laut. Adanya kandungan fosfat hasil dari pembentukan fosfat di
alam adalah hal yang dapat mengurangi kualitas air yang dinilai masih layak
untuk dimanfaatkan bagi peruntukan tertentu.
Bogor Labs, pt adalah sebuah laboratorium uji yang bergerak dalam jasa
pengujian fisika kimia, baik organik maupun anorganik, khususnya di bidang
lingkungan. Salah satu pengujian yang dilakukan adalah penetapan total fosfat
dalam air permukaan. Uji total fosfat dalam air permukaan di laboratorium uji
Bogor Labs, pt ini dilakukan dengan metode asam aksorbat secara
spektrofotometri sinar tampak yang merujuk pada American Public Health
Association (APHA), Method 4500-P. Dalam menjaga kualitas data dari hasil
pengujian karena penggunaan instrumen baru, maka laboratorium uji Bogor Labs,
pt perlu melakukan verifikasi terhadap metode analisis total fosfat. Parameter
verifikasi yang dilakukan meliputi uji linieritas, limit deteksi instrumen, limit
deteksi metode, limit kuantitasi, presisi (ripitabilitas dan reprodusibilitas), dan
akurasi (%perolehan kembali).
Percobaan ini bertujuan memastikan unjuk kerja metode analisis total
fosfat pada air permukaan dengan metode asam askorbat secara spektrofotometri
sinar tampak. Jika data yang dihasilkan memenuhi persyaratan, maka metode ini
dapat digunakan sebagai analisis rutin di laboratorium uji Bogor Labs,pt.

1
 TINJAUAN PUSTAKA

Air

Air adalah semua air yang terdapat di atas dan di bawah permukaan tanah
kecuali air laut dan air fosil (PP NOMOR 82 TAHUN 2001). Air sangat penting
bagi kehidupan manusia dan fungsinya tidak dapat diganti dengan senyawa lain.
Sesuai fungsinya air digunakan untuk berbagai keperluan seperti unutk minum,
keperluan rumah tangga, keperluan industri, pertanian, pembangkit tenaga listrik
untuk transportasi baik di sungai maupun di laut (WARDHANA, 2001).
Sebuah molekul air terdiri dari sebuah atom oksigen yang berikatan
kovalen dengan dua atom hidrogen. Secara fisika, air tidak berbau, tidak berwarna
dan tanpa rasa. Air merupakan pelarut yang baik. Air memuai jika suhunya
diturunkan dari 4 oC ke bawah. Titik didih air bergantung pada tekanan udara dan
titik didih air pada 1 atm adalah 100 oC. Titik didih air turun setiap kenaikan 270
meter dari permukaan laut, karena tekanan udara yang menurun. Untuk
menaikkan suhu sebesar 1 oC dari 1 gram air, dibutuhkan energi 1 kalori yang
disebut panas jenis. Untuk mengubah 1 gram es menjadi air dibutuhkan 80 kalori
yang disebut panas peleburan. Untuk mengubah 1 gram air pada suhu 100 oC
menjadi uap air dibutuhkan energi 540 kalori yang disebut panas penguapan
(WINARNO, 1992). Sumber air adalah wadah air yang terdapat di atas dan di
bawah permukaan tanah, termasuk dalam pengertian ini akuifer, mata air, sungai,
rawa, danau, situ, waduk, dan muara.

Mutu dan Kelas Air

Mutu air adalah kondisi kualitas air yang diukur dan atau diuji berdasarkan
parameter-parameter tertentu dan metoda tertentu berdasarkan peraturan
perundang-undangan yang berlaku. Klasifikasi mutu air ditetapkan menjadi 4
(empat) kelas:
1. Kelas satu, air yang peruntukannya dapat digunakan untuk air baku air
minum, dan atau peruntukan lain yang mempersyaratkan mutu air yang
sama;

2
 3

2. Kelas dua, air yang peruntukannya dapat digunakan untuk

prasarana/sarana rekreasi air, pembudidayaan ikan air tawar,
peternakan , air untuk mengairi pertanaman, dan atau peruntukkan lain
yang mempersyaratkan mutu air yang sama dengan kegunaan tersebut;
3. Kelas tiga, air yang peruntukannya dapat digunakan untuk
pembudidayaan ikan air tawar, peternakan, air untuk mengairi
pertanaman, dan atau peruntukan lain yang mempersyaratkan air yang
sama dengan kegunaan tersebut;
4. Kelas empat, air yang peruntukannya dapat digunakan untuk
mengairi,pertanaman dan atau peruntukan lain yang mempersyaratkan
mutu air yang sama dengan kegunaan tersebut (PP NOMOR 82
TAHUN 2001).

Air Permukaan

Penggolongan Air Permukaan

Sungai

Sungai adalah saluran alami yang berfungsi mengalirkan air hujan, air tanah,
air salju yang mencair ke danau atau ke laut. Jenis-jenis sungai antara lain:
a. Berdasarkan jenis sumber airnya
- Sungai hujan
- Sungai mata air
- Sungai gletser (dari salju yang mencair)
- Sungai campuran (campuran dari ketiga sumber di atas)
b. Berdasarkan volume airnya
- Sungai ephemeral (sungai yang mengalir saat terjadinya hujan atau setelah
hujan)
- Sungai intermiten (sungai yang mengalir hanya pada saat musim
penghujan)
- Sungai pherenial (sungai yang mengalir sepanjang tahun)
c. Berdasarkan arah aliran airnya
- Sungai konsekuen (arah alirannya sesuai dengan struktur geologisnya)
 4

- Sungai subsekuen (arah aliran tegak lurus dengan sungai konsekuen)

- Sungai obsekuen (arah alirannya berlawanan dengan sungai konsekuen
dan menuju sungai subsekuen)
- Sungai resekuen (arah alirannya sesuai dengan sungai konsekuen)
- Sungai insekuen (sungai yang arah alirannya tidak teratur)
d. Berdasarkan struktur geologinya
- Sungai antiseden (sungai yang mampu mempertahankan alirannya)
- Sungai reverse (sungai yang tidak mampu mengimbangi pengangkatan
sehingga terjadi perubahan arah aliran)
- Sungai superposed (sungai yang mengalir pada suatu daratan paneplain
sehingga struktur batuan tersingkap)

Danau

Danau adalah tubuh air dalam jumlah besar yang menempati basin di wilayah
daratan. Suatu genangan dapat disebut danau jika paling tidak memiliki tiga
kriteria yaitu :
a. Mempunyai permukaan air yang cukup luas sehingga mampu
menimbulkan gelombang
b. Air cukup dalam sehingga terdapat strata suhu pada kedalaman air tersebut
c. Vegetasi yang mengapung tidak cukup untuk menutupi seluruh permukaan
danau
Jenis-jenis danau antara lain:
a. Danau Tektonik, yaitu danau yang terjadi akibat adanya peristiwa tektonik
seperti gempa. Danau jenis ini contohnya danau Poso, danau Tempe,
danau Tondano, dan danau Towuti di Sulawesi. Danau Singkarak, danau
Maninjau, dan danau Takengon di Sumatera.
b. Danau Vulkanik atau danau kawah, yaitu danau yang terdapat pada kawah
lubang kepunden bekas letusan gunung berapi. Contoh danau jenis ini
ialah danau Kelimutu di Flores, Kawah Bromo, danau gunung Lamongan
di Jawa Timur, danau Batur di Bali, danau Kerinci di Sumatera Barat serta
Kawah gunung Kelud.
 5

c. Danau Tekto-Vulkanik, yaitu danau yang terjadi akibat proses gabungan

antara proses vulkanik dengan proses tektonik. Contoh danau jenis ini
adalah danau Toba di Sumatera Utara
d. Danau Karst, Danau jenis ini disebut juga doline, yaitu danau yang
terdapat di daerah berbatu kapur. Danau jenis ini terjadi akibat adanya
erosi atau pelarutan batu kapur. Bekas erosi membentuk cekungan dan
cekungan terisi air sehingga terbentuklah danau.
e. Danau Glasial, danau yang terjadi karena adanya erosi gletser. Pencairan
es akibat erosi mengisi cekungan-cekungan yang dilewati sehingga
terbentuk danau. Contoh danau jenis ini terdapat di perbatasan antara
Amerika dengan Kanada yaitu danau Superior, danau Michigan dan danau
Ontario.
f. Waduk atau bendungan, adalah danau yang sengaja dibuat oleh manusia.
Pembuatan waduk biasanya berkaitan dengan kepentingan pengadaan
listrik tenaga air, perikanan, pertanian dan rekreasi. Contoh danau jenis ini
misalnya Saguling, Citarum dan Jatiluhur di Jawa Barat, Riam Kanan dan
Riam Kiri di Kalimantan Selatan, Rawa Pening, Kedung Ombo dan Gajah
Mungkur di Jawa Tengah.

Telaga

Telaga hampir sama dengan danau, hanya luasnya lebih sempit. Telaga
tidak memiliki tingkatan suhu pada kedalamannya dan belum ada gelombang
yang mengabrasi. Munculnya telaga sama dengan awal terjadinya sebuah danau

Rawa

Daerah rawa banyak ditemukan di pantai timur pulau Sumatera dan pantai
selatan pulau Kalimantan. Secara ringkas dapat dikatakan bahwa: Rawa atau
paya-paya adalah daerah rendah yang selalu tergenang air. Air yang menggenangi
rawa bisa berupa air hujan, air sungai maupun dari sumber mata air tanah. Ada
dua jenis rawa yaitu:
 6

a. Rawa yang airnya tidak mengalami pergantian, rawa ini tidak memiliki
pintu pelepasan air sehingga airnya selalu tergenang ciri-cirinya sebagai
berikut:
- Airnya asam atau payau, berwarna merah, kurang bagus untuk mengairi
tanaman dan tidak dapat dijadikan air minum. Kadar keasaman air
(pH) mencapai 4,5.
- Karena airnya asam, maka tidak banyak organisme (hewan maupun
tumbuh-tumbuhan) yang hidup.
b. Rawa yang airnya selalu mengalami pergantian. Rawa ini memiliki pintu
pelepasan air sehingga airnya berganti. Keberadaan rawa banyak
manfaatnya bagi kehidupan kita, manfaat rawa bagi kehidupan kita antara
lain:
- Tumbuhan rawa seperti eceng gondok dapat dijadikan bahan baku
pembuatan biogas dan barang-barang kerajinan anyaman seperti tas,
dompet, hiasan dinding dan lain-lain,
- Dapat dijadikan daerah pertanian pasang surut,
- Sebagai lahan untuk usaha perikanan darat, dan
- Sebagai tempat wisata alam.

Pencemaran Air

Pencemaran air adalah memasuknya atau dimasukkannya makhluk hidup,

zat, energi dan atau komponen lain ke dalam air oleh kegiatan manusia, sehinga
kualitas air turun sampai ke tingkat tertentu yang menyebabkan air tidak dapat
berfungsi sesuai dengan peruntukannya (PP NOMOR 82 TAHUN 2001). Dalam
air biasanya ditemukan pengotor yang beragam jenis dan bentuknya serta
jumlahnya. Adanya pengotor akan memengaruhi mutu dari air tersebut. Pengotor
yang terdapat di air dapat berupa pengotor organik dan anorganik. Pengotor
organik misalnya oil and grease, surfaktan, fenol, protein, karbohidrat. Pengotor
anorganik misalnya logam berat, fosfor, nitrogen, zat beracun.
 7

Fosfat

Fosfor terdapat di air dan air limbah hampir selalu sebagai fosfat. Antara
lain sebagai ortofosfat, fosfat terkondensasi (piro-, meta-, dan polifosfat lainnya)
dan fosfat yang terikat secara organik. Fofat-fosfat tersebut dalam bentuk larutan,
partikel, atau terdapat di dalam tubuh makhluk air.
Bentuk-bentuk fosfat tersebut terbentuk dari bermacam sumber. Sejumlah
kecil ortofosfat atau beberapa fosfat terkondensasi masuk ke badan air selama
proses pengolahan limbah. Jumlah yang lebih besar dari senyawa yang sama
dapat ditambahkan selama pencucian atau pembersihan lainnya, karena senyawa-
senyawa ini adalah bahan baku dari pembersih. Fosfat digunakan secara ekstensif
dalam pengolahan air pendidih. Ortofosfat digunakan untuk pertanian atau taman
sebagai pupuk, lalu terbawa ke air permukaan oleh badai atau salju yang meleleh.
Fosfat organik utamanya terbentuk dari proses biologi. Fosfat organik masuk ke
pembuangan dari ekskresi manusia dan residu makanan, serta dapat terbentuk dari
ortofosfat dalam proses pengolahan biologi dari biota air.
Fofor penting bagi pertumbuhan organisme dan dapat menjadi nutrien
yang terbatas dari produktivitas badan air. Fosfat yang merupakan nutrien penting
bagi pertumbuhan, terdapat di akhir dari pengolahan limbah dan drainase
pertanian, atau limbah dari beberapa industri ke perairan dapat menstimulasi
pertumbuhan organisme fotosintetik air mikro dan makro dalam jumlah yang
menganggu.
Fosfat juga terdapat di dasar sedimen dan di lumpur biologis, keduanya
dalam bentuk endapan anorganik dan menyatu menjadi senyawa organik
(STANDARD METHODS COMMITTEE, 1999).

Penetapan Fosfat Metode Asam Askorbat

Pada metode ini sampel setelah ditambahkan dengan larutan campuran

yang terdiri dari amonium molibdat, asam sulfat, antimonil tartrat, dan asam
askorbat langsung berubah menjadi larutan asam. Menurut (ALIANTO, dkk,
2009) pada kondisi larutan asam ini, amonium molibdat dan antimonil tartrat
bereaksi dengan ortofosfat yang terdapat dalam sampel air laut menjadi bentuk-
bentuk asam heteropoli dan fosfolibdit. Keberadaan asam askobat dalam sampel
 8

air laut mereduksi bentuk-bentuk asam ini menjadi senyawa asam fosfomolibdat.
Selanjutnya asam fosfomolibdat direduksi menjadi warna biru yang terbentuk
sempurna yang dikenal sebagai molibdenum biru. Terdapat dua tahap reaksi
kimia yang terjadi sebelum terbentuknya molibdenum biru, yaitu pembentukan
senyawa kompleks amonium molibdat yang berwarna kuning terjadi menurut
reaksi berikut:
H2SO4 + (NH4)2MoO4.4H2O + PO43+ NH4P(Mo3O10)4
Dengan keberadaan asam askorbat senyawa kompleks yang berwarna kuning
tersebut direduksi menjadi molibdenum biru berdasarkan reaksi berikut:

OH OH

O O

OH CH OH CH

NH4P(Mo3O10)4 + HO C OH H3PO4.(MoO3.MoO2)2.4H2O + O C OH

CH2 CH2

HO CH HO CH

H2 C OH H2 C OH

Jumlah molibdenum biru yang terbentuk adalah proporsional dengan

konsentrasi ortofosfat dalam sampel.

Spektrofotometer Sinar Tampak

Spektrofotometer sesuai dengan namanya adalah alat yang terdiri dari

spektrometer dan fotometer. Spektrometer menghasilkan sinar dari spektrum
dengan panjang gelombang tertentu dan fotometer adalah alat pengukur intensitas
cahaya yang ditransmisikan atau yang diabsorpsi. Spektrofotometer sinar tampak
menggunakan cahaya tampak (visible) sebagai sumber sinar atau energi. Cahaya
tampak termasuk spektrum elektromagnetik yang dapat ditangkap oleh mata
manusia. Panjang gelombang sinar tampak adalah 380 750 nm. Sehingga
semua sinar yang dapat dilihat oleh mata manusia, maka sinar tersebut termasuk
ke dalam sinar tampak (visible).
 9

Hukum Lambert-Beer

Hukum Lambert-Beer menyatakan bahwa jika suatu berkas sinar melewati

suatu medium homogen, sebagian dari cahaya datang (Po) diabsorbsi sebagian
(Pa), sebagian dapat diabaikan (Pr), sedangkan sisanya ditransmisikan
(dipantulkan) (Pt) dengan efek intensitas murni sebesat: Po= Pa + Pt + Pr.
Keterangan: Po = intensitas radiasi yang masuk
Pa = intensitas cahaya yang diabsorbsi
Pt = intensitas cahaya yang dipantulkan
Pr = intensitas cahaya yang ditransmisikan
Pada prakteknya, nilai Pr kecil sekali (4%), sehingga untuk tujuan praktis
Po = Pa + Pt. Hukum Beer menyatakan bila seberkas cahaya monokromatik
dipancarkan melalui suatu media tembus cahya, maka laju turunnya intensitas
cahaya akan berbanding lurus dengan kepekatan (KHOPKAR, 1990)

Penyimpangan Hukum Lambert-Beer

Menurut hukum Lambert-Beer, suatu plot absorbansi dengan konsentrasi

molar akan berupa garis linier. Pada prakteknya, pengukuran akan menghasilkan
plot hukum Beer yang tidak linier sepanjang seluruh rentang konsentrasi yang
diminati. Hukum ini berlaku jika sumber sinar yang digunakan monokromatis
dan bekerja baik pada kepekatan kurang dari 0,01 M (KHOPKAR, 1990).
Elektron dalam suatu ikatan kovalen tunggal terikat dengan kuat dan diperlukan
radiasi berenergi tinggi atau panjang gelombang pendek untuk eksitasinya (DAY
& UNDERWOOD, 1996)

Prinsip Kerja Spektrofotometer Sinar Tampak

Jumlah cahaya atau energi radiasi yang diserap memungkinkan

pengukuran jumlah zat penyerap dalam larutan secara kuantitatif. Suatu sumber
cahaya dipancarkan melalui monokromator. Monokromator menguraikan sinar
yang masuk dari sumber cahaya tersebut menjadi pita-pita panjang gelombang
yang diinginkan untuk pengukuran suatu zat tertentu, yang menunjukkan bahwa
setiap gugus kromofor mempunyai panjang gelombang maksimum yang berbeda.
 10

Dari monokromator tadi cahaya atau energi radiasi diteruskan dan diserap oleh
suatu larutan yang akan diperiksa di dalam kuvet. Kemudian jumlah cahaya yang
diserap oleh larutan akan menghasilkan sinyal elektrik pada detektor, sinyal
elektrik ini sebanding dengan cahaya yang diserap oleh larutan tersebut. Besarnya
sinyal elektrik yang dialirkan ke pencatat dapat dilihat sebagai angka (TRIYATI,
1985).

Instrumentasi Spektrofotometer

Spektrofotometer sinar tampak memiliki beberapa komponen penting

dalam sistem instrumentasinya. Sistem tersebut membentuk suatu rangkaian
seperti yang digambarkan pada Gambar 1:

Sumber Monokromator Detektor

Sel Sampel
Sinar

Penguat

Pembaca

Gambar 1. Instrumentasi Spektrofotometer

(DAY & UNDERWOOD, 2002)

Sumber cahaya

Sumber sinar tampak biasanya terbuat dari lampu tungsten yang memiliki
rentang sinar dari 350-2500 nm. Arus cahaya tergantung pada tegangan lampu,
variasi tegangan masih dapat diterima 0,20% pada suatu sumber DC, misalnya:
baterai. Untuk menghasilkan tegangan yang stabil digunakan transformator.
Untuk sumber sinar ultraviolet adalah lampu hidrogen dan deuterium yang
menghasilkan sinar sekitar 180 hingga 350 nm. Lampu xenon yang menghasilkan
sinar ultraviolet yang biasanya lebih baik, tetapi kurang stabil dalam jumlah
variasi sumber intensitas terhadap panjang gelombang.
 11

Monokromator

Monokromator digunakan memperoleh sumber sinar yang monokromatis

dengan memisahkan panjang gelombang polikromatis dari sumber. Ada dua tipe
dasar elemen pendispersi, prisma dan grating. Selain itu digunakan juga filter
optik untuk mengisolasi panjang gelombang cahaya tertentu. Jenis filter yang ada
antara lain narrow-bandpass, sharp-cut, interference, biasanya terbuat dari gelas
dan mengandung zat kimia yang menyerap semua sinar kecuali yang diinginkan
untuk lewat.

Sel atau Kuvet

Kuvet merupakan tempat bahan yang akan diukur serapannya. Pada

pengukuran di daerah tampak digunakan kuvet kaca corex, tetapi untuk
pengukuran pada daerah ultraviolet kita harus menggunakan sel kuarsa karena
gelas tidak tembus cahaya pada sinar ini. Sel atau kuvet yang biasa digunakan
berbentuk persegi, tetapi bentuk silinder dapat juga digunakan. Sel yang baik
adalah kuarsa atau gelas hasil leburan serta seragam keseluruhannya, beberapa hal
yang harus diperhatikan dalam penggunaan kuvet adalah kuvet harus bersih dan
kering bagian luarnya, kuvet harus bersih bagian dalamnya, kuvet diletakkan
dengan arah tertentu, larutan yang diukur harus jernih, kuvet diisi sama tinggi
setiap kali pengukuran, dan bila ada pilihan, pilihlah kuvet persegi.

Detektor

Dalam sebuah detektor untuk suatu spektrofotometer, kita menginginkan

kepekaan yang tinggi dalam daerah spektral yang diminati, respons yang linear
terhadap daya radiasi, waktu respons yang cepat, dapat digandakan, dan kestabilan
tinggi atau tingkat noise rendah, meskipun dalam praktiknya perlu untuk
mengkompromikan faktor-faktor ini. Macam-macam deteksi yang telah
digunakan didasarkan pada fotokimia (terutama fotografi), efek fotolistrik, dan
efek termolistrik. Secara umum detektor fotolistrik digunakan dalam daerah
tampak dan ultraviolet.
Permasalahan analisis dengan metode spektrofotometri UV-Vis adalah
kesalahan pengukuran detektor yang disebabkan antara lain oleh adanya radiasi
 12

sesatan (stray radiation) yang ditimbulkan oleh peralatan di dalam

spektrofotometer itu sendiri dan ditimbulkan oleh faktor-faktor dari lingkungan
seperti debu dan sebagainya, selain oleh adanya radiasi sesatan kesalahan
pengukuran juga dapat disebabkan oleh adanya pergeseran panjang gelombang
pengukuran ( maks) yang disebabkan oleh gerakan mekanis untuk mengatur
panjang gelombang.

Penguat

Penguat atau amplifier berfungsi untuk memperkuat sinyal yang berasal

dari detektor menjadi suatu potensial yang cukup besar untuk menggerakkan alat
pencatat. Suatu alat penguat menangkap sinyal masuk (input) dari rangkaian
detektor dan melalui proses elektronik tertentu menghasilkan suatu sinyal keluar
(output) dan secara langsung dicatat sebagai unit absorban atau unit transmitan.

Penampil data

Penampil data berfungsi mengeluarkan atau merekam hasil pengukuran.

Hasil analisis yang dikeluarkan dapat melalui printer, digital recorder, atau
komputer yang dilengkapi layar monitor.

Verifikasi Metode

Verifikasi metode adalah konfirmasi kembali melalui pengujian dan

penyajian bukti bahwa persyaratan yang telah ditetapkan telah dipenuhi
(MAGNUSSON & RNEMARK, 2014).
Untuk metode standar, seperti yang dipublikasi oleh ISO atau ASTM,
validasi oleh laboratorium pengguna metode tidaklah penting. Tapi, laboratorium
harus memverifikasi unjuk kerja metode tersebut. Verifikasi juga dibutuhkan
ketika ada perubahan penting seperti instrumen baru tapi serupa atau pemindahan
letak alat (MAGNUSSON & RNEMARK, 2014). Oleh karena itu, tujuan dari
verifikasi metode adalah untuk menentukan apakah metode analisis tersebut
memiliki ketelitian kepekaan ketepatan, limit deteksi, dan linieritas yang baik atau
 13

tidak yang dikerjakan di laboratorium pengujian metode tersebut (SUMARDI,

2002).

Linieritas dan Daerah Kerja

Linieritas

Linieritas adalah kemampuan metode analisis yang memberikan respon

yang secara langsung atau dengan bantuan transformasi matematik yang baik,
proporsional terhadap konsentrasi analit dalam sampel. Linieritas biasanya
dinyatakan dalam istilah variansi sekitar arah garis regresi yang dihitung
berdasarkan persamaan matematik data yang diperoleh dari hasil uji analit dalam
sampel dengan berbagai konsentrasi analit. Perlakuan matematik dalam pengujian
linieritas adalah melalui persamaan garis lurus dengan metode kuadrat terkecil
antara hasil analisis terhadap konsentrasi analit. Sebagai parameter adanya
hubungan linier digunakan koefisien korelasi r pada analisis regresi linier Y = a +
bX. Hubungan linier yang ideal dicapai jika nilai b = 0 dan r = +1 atau 1
bergantung pada arah garis (HARMITA, 2004).

Daerah Kerja

Daerah kerja adalah pernyataan batas terendah dan tertinggi analit yang
sudah ditunjukkan dapat ditetapkan dengan kecermatan, presisi, dan linearitas
yang dapat diterima (HARMITA, 2004). Batas terendah daerah kerja adalah limit
kuantitasi, sedangkan batas tertingginya ditentukan dengan konsentrasi yang tidak
memberikan keanehan signifikan dalam kurva linieritasnya (MAGNUSSON &
RNEMARK, 2014).

Limit Deteksi Instrumen

Limit deteksi instrumen atau instrument detection limit (IDL) merupakan

konsentrasi terkecil dari suatu senyawa yang dapat dideteksi oleh suatu instrumen.
Batas deteksi instrumen dapat ditentukan dengan menggunakan senyawa target
dalam bentuk murni atau senyawa turunan (derivatized compound) dari senyawa
target tersebut.
 14

Limit Deteksi Metode

Ketika pengukuran dilakukan pada konsentrasi rendah, penting untuk

mengetahui sebuah nilai dari hasil yang dipertimbangkan untuk mengindikasikan
level konsentrasi analit yang secara signifikan berbeda dari nilai nol
(MAGNUSSON & RNEMARK, 2014). Limit deteksi metode (LDM) adalah
nilai terendah yang dapat diukur metode dimana nilainya lebih besar dari nilai
ketidakpastiannya. Seluruh gangguan dari matriks harus diperhitungkan ketika
menentukan LDM tersebut (STANDARD METHODS COMMITEE, 2012).
Penentuan LDM suatu metode berbeda-beda tergantung pada metode analisis itu
menggunakan instrumen atau tidak. Pada analisis instrumen LDM dapat dihitung
dengan mengukur respon blanko beberapa kali lalu dihitung simpangan baku
respon blanko (HARMITA, 2004). LDM juga dapat dihitung dengan mengukur
respon standar terkecil jika respon blanko menunjukkan hasil negatif.

Limit Kuantitasi

Limit kuantitasi (LK) adalah konsentrasi terendah dari analit yang dapat
ditetapkan dengan tingkat akurasi dan presisi yang baik. LK ditentukan dengan
menguji analit dengan berbagai konsentrasi yang nilainya berasal dari nilai blanko
ditambah 5, 6, atau 10 simpangan baku dari rata-rata pembacaam blanko. LK
adalah nilai indikatif dan sebaiknya tidak digunakan dalam pengambilan
keputusan (MAGNUSSON & RNEMARK, 2014).

Presisi (Ripitabilitas dan Reprodusibilitas)

Presisi adalah ukuran yang menunjukkan derajat kesesuaian antara hasil

uji individual, diukur melalui penyebaran hasil individual dari rata-rata jika
prosedur diterapkan secara berulang pada sampel-sampel yang diambil dari
campuran yang homogen (HARMITA, 2004).
Presisi diukur sebagai simpangan baku atau simpangan baku relatif
(koefisien variasi). Presisi dapat dinyatakan sebagai ripitabilitas atau
reprodusibilitas. Ripitabilitas adalah Presisi metode jika dilakukan berulang kali
oleh analis yang sama pada kondisi sama dan dalam interval waktu yang pendek.
 15

Ripitabilitas dinilai melalui pelaksanaan penetapan terpisah lengkap terhadap

sampel-sampel identik yang terpisah dari batch yang sama, jadi memberikan
ukuran presisi pada kondisi yang normal.
Reprodusiblitas adalah presisi metode jika dikerjakan pada kondisi yang
berbeda. Biasanya analisis dilakukan dalam laboratorium-laboratorium yang
berbeda menggunakan peralatan, pereaksi, pelarut, dan analis yang berbeda pula.
Analisis dilakukan terhadap sampel-sampel yang diduga identik yang dicuplik
dari batch yang sama. Reprodusiblitas dapat juga dilakukan dalam laboratorium
yang sama dengan menggunakan peralatan, pereaksi, dan analis yang berbeda.

Akurasi (% perolehan kembali)

Akurasi adalah ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan hasil analis

dengan kadar analit yang sebenarnya. Akurasi dinyatakan sebagai %perolehan
kembali (recovery) analit yang ditambahkan. Akurasi hasil analis sangat
tergantung kepada sebaran galat sistematik di dalam keseluruhan tahapan analisis.
Oleh karena itu untuk mencapai kecermatan yang tinggi hanya dapat dilakukan
dengan cara mengurangi galat sistematik tersebut seperti menggunakan peralatan
yang telah dikalibrasi, menggunakan pereaksi dan pelarut yang baik,
pengontrolan suhu, dan pelaksanaannya yang cermat, taat asas sesuai prosedur.
(HARMITA, 2004).
Akurasi ditentukan dengan dua cara yaitu metode simulasi (spiked-placebo
recovery) atau metode penambahan baku (standard addition method). Dalam
metode simulasi, sejumlah analit bahan murni (senyawa pembanding kimia CRM
atau SRM) ditambahkan ke dalam blanko lalu campuran tersebut dianalisis dan
hasilnya dibandingkan dengan kadar analit yang ditambahkan (kadar yang
sebenarnya). Dalam metode penambahan baku, sampel dianalisis lalu sejumlah
tertentu analit yang diperiksa ditambahkan ke dalam sampel dicampur dan
dianalisis lagi. Selisih kedua hasil dibandingkan dengan kadar yang sebenarnya
(hasil yang diharapkan). Dalam kedua metode tersebut, %perolehan kembali
dinyatakan sebagai rasio antara hasil yang diperoleh dengan hasil yang
sebenarnya. Persen perolehan kembali dapat ditentukan dengan cara membuat
sampel blanko kemudian ditambah analit dengan konsentrasi tertentu (biasanya
 16

80% sampai 120% dari kadar analit yang diperkirakan), kemudian dianalisis
dengan metode yang akan diverifikasi.
Pada percobaan penetapan akurasi, sedikitnya lima sampel yang
mengandung analit yang harus disiapkan dengan kadar antara 50% sampai 150%
dari kandungan yang diharapkan.
 PERCOBAAN

Percobaan ini bertujuan memastikan unjuk kerja metode analisis total

fosfat pada air permukaan dengan metode asam askorbat yang diadopsi dari
American Public Health Association (APHA), Method 4500-P secara
spektrofotometri sinar tampak. Jika data yang dihasilkan memenuhi persyaratan,
maka motode ini tetap dapat digunakan sebagai analisis rutin di laboratorium uji
Bogor Labs, pt.

Tempat dan Waktu

Percobaan ini dilakukan di Bogor Labs, pt yang berlokasi di Ruko Yasmin

Sektor VI No.198 Jalan Ring Road Bogor Utara (Jalan KH. R. Abdullah Bin
Nuh), Bogor. Percobaan berlangsung pada Maret sampai Mei 2016.

Bahan dan Alat

Bahan

Bahan yang digunakan dalam percobaan ini meliputi bahan uji dan bahan
kimia. Bahan uji yang digunakan yaitu larutan standar fosfor 326 mg/L dan CRM
Simple Nutrients. Bahan kimia yang digunakan yaitu asam sulfat 1:1, ammonium
persulfat heptahidrat, indikator fenolftalein, natrium hidroksida 10 N, dan pereaksi
campuran (asam sulfat 5 N, kalium antimonil tartrat hemihidrat, ammonium
molibdat tetrahidrat, dan asam askorbat 0,1 M). Pembuatan pereaksi campuran
dapat dilihat pada Lampiran 1.

Alat

Peralatan yang digunakan meliputi spektrofotometer sinar tampak Agilent

Cary 60, spektrofotometer sinar tampak Hach DR2000, neraca analitik Precisa,
hot plate JISICO, pipet mohr 1; 5; dan 10 mL, pipet volumetri 5 mL, labu takar 50
mL, gelas piala 150 mL, dan erlenmeyer 250 mL.

17
 18

Metode Percobaan

Percobaan dilakukan melalui tiga tahap yaitu tahap preparasi, pengujian,

dan pengolahan data. Tahap preparasi meliputi pembuatan larutan deret standar,
preparasi uji limit deteksi, limit kuantitasi, presisi, dan akurasi. Tahap pengujian
meliputi pembuatan kurva kalibrasi, uji linieritas, uji limit kuantitasi, uji limit
deteksi (instrumen dan metode), uji presisi (ripitabilitas dan reprodusibilitas), dan
uji akurasi (%perolehan kembali) menggunakan spektrofotometer sinar tampak
pada panjang gelombang 880 nm. Tahap pengolahan data dilakukan secara
statistika.

Cara Kerja

Tahap Persiapan

Pembuatan Larutan Intermediet Fosfor 5 mg/L

Larutan standar fosfor 326 mg/L dipipet sebanyak 0,77 mL ke dalam labu
takar 50 mL, ditera dengan air destilat dan dihomogenkan.

Pembuatan Kurva Kalibrasi

Larutan intermediet fosfor 5 mg/L dipipet sebanyak 0,2; 0,4; 0,8; 1,6; 3,2;
dan 6,4 mL ke dalam labu takar 50 mL, ditera dengan air destilat dan
dihomogenkan. Larutan deret standar fosfor masing-masing dipindahkan ke gelas
piala 150 mL, kemudian ditambahkan 8,0 mL pereaksi campuran.

Uji Linieritas dan Rentang Kerja

Larutan intermediet fosfor 5 mg/L dipipet sebanyak 0,02; 0,04; 0,08; 0,1;
0,2; 0,4; 0,8; 1,6; 3,2; 6,4; 1,0; 1,2; 1,4; 1,6; dan 2,0 mL ke dalam labu takar 50
mL, ditera dengan akuades dan dihomogenkan. Larutan deret standar fosfor
masing-masing dipindahkan ke gelas piala 150 mL, kemudian ditambahkan 8,0
mL pereaksi campuran. Larutan dibuat tujuh seri untuk masing-masing
konsentrasi.
 19

Uji Limit Deteksi dan Limit Kuantitasi

Larutan intermediet fosfor 5 mg/L dipipet sebanyak 0,02 mL ke labu takar

50 mL, ditera dengan air destilat dan dihomogenkan. Larutan dipreparasi seperti
sampel, yaitu dipindahkan ke gelas piala 150 mL, kemudian ditambahkan 1,0 mL
asam sulfat 1:1 dan 0,4 g ammonium persulfat. Larutan dipanaskan selama 30-40
menit atau sampai volume 10 mL tercapai. Dinding gelas piala bagian dalam
dibilas dengan air destilat kemudian larutan ditambahkan 1 tetes indikator
fenolftalein dan natrium hidroksida 10 N sampai merah muda. Larutan
ditambahkan air destilat sampai 50 mL lalu ditambahkan 8,0 mL pereaksi
campuran. Larutan dibuat sebanyak sepuluh seri.

Uji Presisi

Larutan intermediet fosfor 5 mg/L dipipet sebanyak 0,6 mL ke dalam labu

takar 50 mL, ditera dengan air destilat dan dihomogenkan. Larutan dipreparasi
seperti sampel dan dibuat sebanyak sepuluh seri.

Uji Akurasi

Spiked-Placebo

Larutan intermediet fosfor 5 mg/L dipipet sebanyak 0,2; 0,6; dan 1,0 mL
ke dalam labu takar 50 mL, ditera dengan air destilat dan dihomogenkan.
Larutan dipreparasi seperti sampel dan dibuat sebanyak tujuh seri untuk masing-
masing konsentrasi.

CRM Simple Nutrients

Larutan CRM Simple Nutrients dipipet sebanyak 5 mL ke dalam labu takar

50 mL, ditera dengan air destilat dan dihomogenkan. Larutan dipreparasi seperti
sampel dan dibuat sebanyak sepuluh seri.
 20

Tahap Pengujian

Pembuatan Kurva Kalibrasi

Setelah paling sedikit 10 menit tetapi tidak lebih dari 30 menit, diukur
absorbansi dari masing-masing larutan deret standar menggunakan
spektrofotometer sinar tampak pada panjang gelombang 880 nm.

Uji Linieritas dan Rentang Kerja

Setelah paling sedikit 10 menit tetapi tidak lebih dari 30 menit, tujuh seri
larutan uji linieritas diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer sinar
tampak pada panjang gelombang 880 nm.

Uji Limit Deteksi dan Kuantitasi

Setelah paling sedikit 10 menit tetapi tidak lebih dari 30 menit, sepuluh
seri larutan uji limit deteksi dan kuantitasi diukur absorbansinya menggunakan
spektrofotometer sinar tampak pada panjang gelombang 880 nm.

Uji Presisi

Setelah paling sedikit 10 menit tetapi tidak lebih dari 30 menit, sepuluh
seri larutan uji presisi diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer sinar
tampak Agilent Cary 60 dan Hach DR 2000 pada panjang gelombang 880 nm.

Uji Akurasi

Setelah paling sedikit 10 menit tetapi tidak lebih dari 30 menit, sepuluh
seri larutan CRM Simple Nutrients 10 kali pengenceran dan masing-masing tujuh
seri larutan 0,02; 0,06; dan 1,0 mg/L diukur absorbansinya menggunakan
spektrofotometer sinar tampak pada panjang gelombang 880 nm.

Tahap Pengolahan Data

Data analisis yang diperoleh kemudian diolah secara statistika pada

beberapa parameter verifikasi kemudian hasilnya dibandingkan dengan syarat
keberterimaan yang telah ditetapkan oleh laboratorium uji Bogor Labs, pt.
 21

Kurva Kalibrasi dan Linieritas

Data yang diperoleh dibuat kurva linieritas yaitu kurva hubungan antara
konsentrasi larutan standar dengan absorbansi, kemudian ditentukan nilai
koefisien korelasi (r), slope (b), dan intersep (a), kemudian diperoleh sebuah
persamaan dengan rumus berikut.
Persamaan regresi: y = a + bx

- Koefisien korelasi (r)

=1 =1
=1
=
2 2
=1 2 (=1 ) =1 2 (=1 )

- Slope (b)
=1 =1
=1
=

( )2
=1 2 =1

- Intersep (a)
[=1 ( =1 )]
=

Keterangan:
- xi = konsentrasi pada data ke-i (mg/L)
- yi = absorbansi pada data ke-i
- i = 1,2,3, ..., 10
- n = banyak data

Limit Deteksi Metode dan Limit Kuantitasi

Data yang diperoleh dari hasil pengujian dihitung nilai rata-rata konsentrasi,
simpangan baku (SB), simpangan baku relatif (%SBR), limit deteksi metode
(LDM), dan limit kuantitasi (LK). Nilai tersebut dihitung dengan menggunakan
rumus sebagai berikut.
 22

- Rata-rata konsentrasi
=1
=

- Simpangan baku

( )2
= =1
1

- Limit deteksi metode (LDM)

= + (3 x )

- Limit kuantitasi (LK)

= + (10 x )

Keterangan:
- = rata-rata konsentrasi
- xi = konsentrasi pada ulangan ke-i (mg/L)
- i = 1, 2, 3, ..., 10
- n = banyaknya ulangan
- SB = Simpangan baku (mg/L)
- %SBR = Simpangan baku relatif (mg/L)

Presisi

Ripitabilitas

Data hasil pengujian dihitung nilai rata-rata konsentrasi, simpangan baku

(SB), dan %simpangan baku relatif (%SBR). Nilai tersebut diperoleh dengan
menggunakan rumus sebagai berikut.

- Rata-rata konsentrasi
=1
=

 23

- Simpangan baku

( )2
= =1
1

- Simpangan baku relatif (%SBR)

% = x 100%

Reprodusibilitas

Membandingkan Rata-rata Hasil Uji (Uji-t)

Perbedaan rata-rata hasil uji penetapan total fosfat menggunakan

instrumen baru dan lama dapat diketahui melalui uji beda nyata rata-rata (uji-t).
Pada percobaan ini dilakukan uji-t berpasangan disebabkan contoh uji yang
seragam. Langkah-langkah dalam uji-t berpasangan yaitu dengan menghitung
selisih hasil uji kedua instrumen lalu mencari rata-rata dan simpangan baku,
membuat hipotesis nol dan alternatif, menghitung nilai-t, mencari nilai ttabel pada
tingkat kepercayaan 95%, dan membandingkan nilai thitung dan ttabel.
- thitung

=

Keterangan:
- = rata-rata konsentrasi
- xi = konsentrasi pada ulangan ke-i (mg/L)
- i = 1, 2, 3, ..., 10
- n = banyaknya ulangan
- SB = Simpangan baku (mg/L)
- %SBR = Simpangan baku relatif (mg/L)
- = rata-rata selisih hasil uji menggunakan instrumen baru dan lama
 24

Akurasi

Data hasil pengujian dihitung nilai rata-rata konsentrasi dan nilai %

perolehan kembali. Nilai tersebut dipeoleh dengan menggunakan rumus sebagai
berikut.
- Rata-rata konsentrasi
=1
=

- % perolehan kembali

% = x fp x 100%

Keterangan:
- = rata-rata konsentrasi
- xi = konsentrasi pada ulangan ke-i (mg/L)
- i = 1, 2, 3, ..., 10
- n = banyaknya ulangan
 HASIL DAN PEMBAHASAN

Pembuatan Kurva Kalibrasi

Kurva kalibrasi dibuat pada awal pengukuran untuk mengetahui hubungan

antara konsentrasi dan absorbansi dalam bentuk persamaan yang digunakan untuk
mengukur konsentrasi sampel.

0,4500
0,4000
0,3500 y = 0,65014x + 0,0003
0,3000 r = 0,9999
Absorbansi

0,2500
0,2000
0,1500
0,1000
0,0500
0,0000
0,0000 0,1000 0,2000 0,3000 0,4000 0,5000 0,6000 0,7000

Konsentrasi PO4 (mg/L)

Gambar 2. Kurva Kalibrasi Hubungan Konsentrasi dan Absorbansi

Dari hasil pengukuran didapatkan persamaan yaitu Y=0,65014x +0,0003

dan koefisien korelasi sebesar 0,9999. Perhitungan dapat dilihat pada Lampiran 3.
Nilai koefisien korelasi sebesar 0,9999 menggambarkan bahwa antara konsentrasi
dan absorbansi mempunyai hubungan positif berbanding lurus dan erat. Syarat
koefisien korelasi yang diterima adalah lebih dari sama dengan 0,9950, maka
kurva kalibrasi adalah kurva kalibrasi ideal dan analisis dapat dilanjutkan.

Uji Linieritas dan Rentang Kerja

Uji linieritas suatu metode analisis digunakan untuk membuktikan adanya

hubungan linier antara konsentrasi dan absorbansi. Penetapan linieritas dilakukan
dengan mengukur deret standar fosfor konsentrasi 0,0020; 0,0040; 0,0080;
0,0100; 0,0200; 0,0400; 0,0800; 0,1600; 0,3200; 0,6400; 1,0000; 1,2000; 1,4000;
1,6000; dan 2.0000 mg/L sebanyak tujuh seri untuk tiap-tiap konsentrasi. Dari

25
 26

hasil pengukuran diperoleh absorbansi dari masing-masing konsentrasi yang

kemudian dapat diketahui kelinierannya. Perhitungan Konsentrasi sebenarnya
larutan uji linieritas dapat dilihay pada Lampiran 2.

0,9000
0,8000
0,7000
y = 0,5828x + 0,0085
0,6000 r = 0,9980
Absorbansi

0,5000
0,4000
0,3000
0,2000
0,1000
0,0000
0,0000 0,5000 1,0000 1,5000

Konsentrasi PO4 (mg/L)

Gambar 3. Kurva Linieritas dan Rentang Kerja

Berdasarkan Gambar 3, diperoleh nilai koefisien korelasi sebesar 0,9980

yang perhitungannya dapat dilihat pada Lampiran 4. Nilai dari koefisien korelasi
telah memenuhi syarat keberterimaan yaitu lebih dari atau sama dengan 0,9950.
Nilai koefisien korelasi menunjukkan bahwa grafik tersebut memiliki hubungan
yang linier dari konsentrasi 0,0080 sampai 1,4000 mg/L, artinya metode yang
akan diuji akan memberikan hubungan antara absorbansi dan konsentrasi yang
baik sehingga nilai dari data yang didapatkan dapat representatif dari konsentrasi
0,0080 sampai 1,4000 mg/L. Konsentrasi 0,0080 sampai 1,4000 mg/L merupakan
daerah kerja dari metode tersebut.

Uji Limit Deteksi Instrumen

Limit deteksi instrumen (LDI) ditetapkan dengan mengukur sepuluh seri

larutan standar terkecil yang dipreparasi seperti sampel dan diuji menggunakan
 27

spektrofotometer sinar tampak pada panjang gelombang 880,0 nm. Hasil

pengukuran dapat dilihat pada Tabel 1.

Tabel 1. Uji Limit Deteksi Instrumen

Ulangan Konsentrasi Terukur (mg/L)
1 0,0004
2 0,0004
3 0,0002
4 0,0002
5 0,0011
6 0,0010
7 0,0010
8 0,0041
9 0,0038
10 0,0041
Rata-rata 0,0016
Simpangan Baku 0,0017
%SBR 102,45
Syarat Keberterimaan Absorbansi, konsentrasi positif dan
LDI: %SBR besar
Simpulan: LDI sebesar 0,002 mg/L

Berdasarkan Tabel 1, baik konsentrasi maupun absorbansi dari standar

terkecil memberikan respon positif dengan nilai simpangan baku relatif yang
besar sehingga dapat disimpulkan bahwa 0,002 mg/L adalah nilai LDI metode
penetapan total fosfat. Perhitungan simpangan baku relatif LDI terdapat pada
Lampiran 5.

Uji Limit Deteksi Metode

Limit deteksi metode (LDM) menunjukkan batas nilai terendah yang dapat
dianalisis melalui metode secara lengkap. LDM diuji dengan mengukur sepuluh
seri larutan blanko yang dipreparasi seperti sampel dan diuji menggunakan
spektrofotometer sinar tampak pada panjang gelombang 880,0 nm.
Pada pengukuran sepuluh seri larutan blanko terdapat absorbansi dan
konsentrasi negatif. Sehingga, LDM dihitung menggunakan hasil pengukuran
 28

standar terkecil, yaitu konsentrasi 0,002 mg/L. Hasil pengukuran larutan blanko
dan standar 0,002 mg/L dapat dilihat pada Lampiran 6.

Tabel 2. Uji Limit Deteksi Metode

Ulangan Konsentrasi Terukur (mg/L)
1 0,0004
2 0,0004
3 0,0002
4 0,0002
5 0,0011
6 0,0010
7 0,0010
8 0,0041
9 0,0038
10 0,0041
Rata-rata 0,0016
Simpangan Baku 0,0017
LDM 0,007

Berdasarkan Tabel 2 didapat nilai LDM sebesar 0,007 mg/L. Perhitungan

LDM dapat dilihat pada Lampiran 6. Maka, jika pada saat penetapan didapatkan
konsentrasi kurang dari 0,007 mg/L dianggap sebagai noise alat. Sementara itu,
jika pada saat penetapan didapatkan konsentrasi lebih dari 0,007 mg/L tapi masih
di bawah limit kuantitasi adalah benar analit namun konsentrasinya belum dapat
dipertanggung jawabkan.

Uji Limit Kuantitasi dan Evaluasi Nilai Limit Kuantitasi

Limit kuantitasi (LK) menunjukkan konsentrasi terendah analit yang dapat

ditentukan secara kuantitatif dengan presisi dan akurasi yang dapat diterima. LK
ditetapkan bersamaan dengan pengukuran LDM, dilakukan dengan mengukur
sepuluh seri larutan standar 0,002 mg/L yang dipreparasi seperti sampel dan diuji
menggunakan spektrofotometer sinar tampak pada panjang gelombang 880,0 nm.
Hasil perhitungan LK dapat dilihat di Tabel 3 dan Lampiran 6.
 29

Tabel 3. Nilai Limit Kuantitasi

Konsentrasi Terukur
Ulangan
(mg/L)
1 0,0004
2 0,0004
3 0,0002
4 0,0002
5 0,0011
6 0,0010
7 0,0010
8 0,0041
9 0,0038
10 0,0041
Rata-rata 0,0016
Simpangan Baku 0,0017
Limit Kuantitasi (mg/L) 0,018

Berdasarkan perhitungan, nilai LK yang didapat adalah 0,018 mg/L.

Maka, dilakukan uji presisi dan akurasi terhadap larutan standar 0,018 mg/L untuk
mempertanggungjawabkan nilai LK. Hasil evaluasi nilai LK dilakukan dengan
menghitung presisi dan akurasi konsentrasi 0,018 mg/L.

Tabel 4. Uji Akurasi Nilai Limit Kuantitasi

Konsentrasi Teoritis Konsentrasi Terukur %perolehan
Ulangan
(mg/L) (mg/L) kembali
1 0,018 0,0155 85,76
2 0,018 0,0163 90,03
3 0,018 0,0158 87,47
4 0,018 0,0160 88,33
5 0,018 0,0203 112,25
6 0,018 0,0183 101,14
7 0,018 0,0169 93,45
8 0,018 0,0195 107,97
9 0,018 0,0172 95,16
10 0,018 0,0169 93,45
Rata-rata 95,50
Syarat Keberterimaan Akurasi (%perolehan kembali) 100 15
 30

Tabel 5. Uji Presisi Evaluasi Nilai Limit Kuantitasi

Konsentrasi Terukur
Ulangan
(mg/L)
1 0,0167
2 0,0178
3 0,0174
4 0,0175
5 0,0169
6 0,0183
7 0,0169
8 0,0169
9 0,0172
10 0,0169
Rata-rata 0,0173
Simpangan Baku 0,0016
%SBR 2,90
Persyaratan %SBR 5,00 %

Berdasarkan Tabel 4 dan Tabel 5, nilai akurasi dan presisi pengukuran

larutan standar 0,018 mg/L memenuhi persyaratan. Pada konsentrasi 0,018 mg/L
%perolehan kembali berada pada rentang keberterimaan (85,00 115,00)% yaitu
85,76% sampai 112,25%. Hasil uji presisi, nilai %SBR sebesar 2,90% telah
memenuhi persyaratan yaitu kurang dari %RSD yaitu 5,00%. Sehingga 0,018
mg/L adalah konsentrasi terkecil yang dapat dipertanggung jawabkan dan
dipercaya.

Uji Presisi

Ripitabilitas

Uji presisi ripitabilitas dilakukan dengan cara mengukur konsentrasi

laurutan blanko yang telah dipreparasi dan dilakukan spiking dengan larutan
standar fosfor 5,0 mg/L sebanyak 0,6 mL sehingga konsentrasi larutan sebesar
0,06 mg/L, kemudian dilakukan pengukuran menggunakan spektrofotometer sinar
tampak pada panjang gelombang 880 nm. Pengukuran ini dilakukan sebanyak
 31

sepuluh kali ulangan. Pengujian ripitabilitas dilakukan satu rangkaian dengan

penetapan akurasi.

Tabel 6. Hasil Uji Ripitabilitas

Konsentrasi Terukur
Ulangan
(mg/L)
1 0,0594
2 0,0606
3 0,0601
4 0,0594
5 0,0550
6 0,0604
7 0,0606
8 0,0603
9 0,0601
10 0,0607
Rata-rata 0,0550
Simpangan Baku 0,0075
%SBR 2,84
Persyaratan %SBR5,00%

Berdasarkan Tabel 6, nilai ripitabilitas dapat diketahui berdasarkan nilai

%simpangan baku relatif. Setelah dilakukan pengukuran terhadap sepuluh seri
larutan standar fosfor 0,06 mg/L diperoleh nilai simpangan baku relatif sebesar
2,84%. Nilai simpangan baku relatif yang diperoleh dibandingkan dengan syarat
keberterimaan yaitu kurang dari sama dengan 5,00%. Nilai simpangan baku
relatif yang didapat telah memenuhi syarat keberterimaan dan metode memiliki
ketelitian tinggi.

Reprodusibilitas

Reprodusibilitas dilakukan dengan mengukur larutan fosfor konsentrasi

0,06 mg/L, konsentrasi yang sama dengan konsentrasi pada uji ripitabilitas.
Larutan uji diukur menggunakan spektrofotometer Hach DR2000, atau instrumen
lama, yang berbeda dengan yang digunakan pada pengujian ripitabilitas untuk
 32

mengetahui ada atau tidaknya perbedaan signifikan pada penggunaan instrumen

baru.
Tabel 7 adalah hasil uji-t penggunaan instrumen lama dan baru.
Perhitungan uji-t dapat dilihat di Lampiran 8.

Tabel 7. Hasil Uji-t

thitung 0,405
ttabel (9; 0,025) 2,262

Berdasarkan Tabel 7 H0 : 0 = m atau 0 - m = 0 atau = 0, rata-rata

hasil penetapan total fosfat menggunakan instrumen baru dan lama tidak berbeda
nyata. Sehingga penggunaan instrumen baru tidak memengaruhi hasil penetapan
total fosfat.

Uji Akurasi

Uji Akurasi Spike-Placebo Recovery

Uji akurasi Spike-Placebo Recovery dilakukan dengan teknik spiking

terhadap blanko dengan tiga level konsentrasi yang berbeda yaitu rendah, sedang,
dan tinggi. Akurasi dinyatakan sebagai %perolehan kembali. Perhitungan dan
contoh perhitungan dapat dilihat pada Lampiran 9.
Dari data pada Tabel 8, diperoleh nilai %perolehan kembali sebesar (85,71
113,85)%. Contoh perhitungan dan perhitungan selengkapnya dapat dilihat
pada Lampiran 9. Nilai ini masuk pada rentang yang ditetapkan laboratorium uji
Bogor Labs, pt yaitu sebesar (85,00 115,00)%. Dalam percobaan absorbansi
yang diperoleh fluktuatif sehingga konsentrasi dan %perolehan kembali juga tidak
stabil. Hal tersebut diakibatkan mudahnya kontaminasi dari udara terhadap
larutan yang sedang diuji selama proses analisis.
Interferensi pada penetapan fosfat antara lain arsenat bereaksi dengan
pereaksi molibdat membentuk warna biru yang sama dengan warna yang
dihasilkan oleh fosfat. Pada konsentrasi rendah sekitar 0,1 mg As/L dapat
mengganggu penetapan fosfate. Krom heksavalen dan NO2 mengganggu dan
memberikan hasil lebih rendah 3% pada konsentrasi 1 mg/L dan 15% pada
 33

konsentrasi 10 mg/L. Sulfida (Na2S) dan silikat tidak mengganggu pada

konsentrasi 1,0 dan 10 mg/L.

Tabel 8. Hasil Uji Akurasi Spike-Placebo Recovery

Konsentrasi Konsentrasi %
Level
Teoritis Ulangan Terukur perolehan
Konsentrasi
(mg/L) (mg/L) kembali
1 0,0197 97,95
2 0,0201 100,25
3 0,0209 104,10
Rendah 0,0201 4 0,0198 98,71
5 0,0207 103,33
6 0,0204 101,79
7 0,0181 90,26
1 0,0594 98,52
2 0,0550 91,34
3 0,0604 100,31
Sedang 0,0602 4 0,0606 100,57
5 0,0603 100,05
6 0,0601 99,80
7 0,0607 100,82
1 0,0861 85,71
2 0,0862 85,87
3 0,0862 85,87
Tinggi 0,1004 4 0,1128 112,32
5 0,1143 113,85
6 0,1143 113,85
7 0,0892 88,79
Rata-rata 98,76

Uji Akurasi CRM Simple Nutrients Recovery

Uji Akurasi CRM Simple Nutrients dilakukan dengan mengukur sepuluh

seri larutan CRM Simple Nutrients sepuluh kali pengenceran. Pengenceran
sebanyak sepuluh kali dilakukan agar konsentrasi larutan uji masuk dalam
konsentrasi pada kurva kalibrasi. Perhitungan akurasi CRM Simple Nutrients
dapat dilihat pada Lampiran 9.
 34

Tabel 9. Hasil Uji Akurasi CRM Simple Nutrients

Konsentrasi Konsentrasi %
Level
Teoritis Ulangan Fp Terukur perolehan
Konsentrasi
(mg/L) (mg/L) kembali
1 10 2.4464 88,00
2 10 2.4448 87,94
3 10 2.6378 94,89
4 10 2.6625 95,77
CRM 10x 5 10 2.6193 94,22
2,78
pengenceran 6 10 2.8154 101,27
7 10 2.7351 98,38
8 10 2.6224 94,33
9 10 2.7382 98,50
10 10 2.7428 98,66
Rata rata 95,20

Dari data pada Tabel 9, diperoleh nilai % perolehan kembali sebesar

(88,00 101,27)%. Nilai ini masuk pada rentang yang ditetapkan Laboratorium
Uji Bogor Labs, pt yaitu sebesar (85,00 115,00)%. Selain itu, dalam percobaan
semua larutan uji memiliki konsentrasi yang masuk ke dalam rentang konsentrasi
di Certificate of Analysis (CoA) CRM Simple Nutrients yaitu dari 2,44 sampai
3,11 mg/L.
 SIMPULAN

Berdasarkan percobaan didapatkan rentang kerja linier dari konsentrasi

0,008 mg/L sampai 1,400 mg/L, limit deteksi metode sebesar 0,007 mg/L, limit
kuantitasi 0,018 mg/L, presisi ripitabilitas sebagai %simpangan baku relatif (SBR)
sebesar 2,84% dengan standar keberterimaan kurang dari sama dengan 5,00%,
presisi reprodusibilitas sebagai uji beda nyata pada rata-rata adalah tidak berbeda
nyata, akurasi Spike-Placebo Recovery sebagai %perolehan kembali sebesar
(85,71 113,85)% dan akurasi CRM Simple Nutrients sebagai %perolehan
kembali sebesar (88,00 101,27)% dengan standar keberterimaan (85,00
115,00)%. Maka, dapat disimpulkan bahwa metode penetapan total fosfat metode
asam askorbat secara spektrofotometri sinar tampak mempunyai unjuk kerja yang
baik dan dapat dipertanggung jawabkan karena telah memenuhi syarat
keberterimaan yang telah ditetapkan, sehingga metode ini dapat tetap digunakan
sebagai analisis rutin di Bogor Labs, pt.

35
 DAFTAR PUSTAKA

ALIANTO, ADIWILAGA, E. A., DAMAR, A. & HARRIS, E. 2009.

Pengukuran Nutrien Inorganik Terlarut di Zona Eufotik Perairan Teluk
Banten. Indo. J. Chem 2:217-225.

DAY, R. A. & UNDERWOOD, A. L. 2002. Analisis Kimia Kuantitatif Edisi

Keenam. Diterjemahkan oleh Dr. Ir. Sopyan, M. Eng. Erlangga. Jakarta.

HARMITA. 2004. Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara

Perhitungannya. Jurnal Farmasi UI Volume1 3:117-135.

KHOPKAR S. M. 1990. Konsep Dasar Kimia Analitik. Diterjemahkan oleh A.

Saptorahardjo. Penerbit Universitas Indonesia (UI-Press). Jakarta.

MAGNUSSON, B. & RNEMARK, U. 2014. Eurachem Guide: The Fitness

for Purpose of Analytical Methods A Laboratory Guide to Method
Validation and Related Topics. Ed. ke-2. Eurachem Working Group.
Ontario.

REPUBLIK INDONESIA. 2001. Peraturan Pemerintah RI No. 82 tahun 2001,

tentang Pengelolaan Kualitas Air dan Pengendalian Pencemaran Air.
Lembaran Negara RI Tahun 2001. Sekretariat Negara. Jakarta.

SIREGAR, S. A. 2005. Instalasi Pengolahan Air Limbah: menuntaskan

pengenalan alat-alat dan sistem pengolahan air limbah. Kanisius.
Yogyakarta.

STANDARD METHODS COMMITTEE. 1999. Standard Methods for the

Examination of Water and Wastewater. Ed. ke-22. American Public
Health Association. New York.

SUGIHARTO. 1987. Dasar-dasar Pengolahan Air Limbah. Penerbit

Universitas Indonesia (UI-Press). Jakarta

SUMARDI. 2002. Validasi Metode. Pengujian Pusat Standardisasi dan

Akreditasi. Sekretariat Jenderal Departemen Pertanian. Jakarta.

TRIYATI, E. 1985. Spektrofotometer Ultra-Violet dan Sinar Tampak Serta

Aplikasinya dalam Oseanologi. Oseana X:39-47.

WARDHANA, W. A. 2004. Dampak Pencemaran Lingkungan. Penerbit Andi.

Yogyakarta.
WINARNO, F. G. 1989. Air untuk Industri Pangan. PT. Gramedia. Jakarta.

xi
LAMPIRAN

xii
 36

Lampiran 1. Pembuatan Pereaksi

1. Pembuatan asam sulfat 5 N
Larutan asam sulfat pekat sebanyak 70 mL diencerkan menjadi 500
mL dengan air destilat.
2. Larutan Kalium antimonil tartrat :
Sebanyak 1,3715 gram K(SbO)C4H4O6.H2O dilarutkan dalam 500
mL air destilat
3. Larutan amonium molibdat
Sebanyak 20 gram (NH4)6Mo7O24.4H2O dilarutkan dalam 500 mL air
destliat.
4. Larutan asam askorbat
Sebanyak 1,76 gram asam askorbat dilarutkan dalam 100 mL air
destilat. Larutan stabil selama 1 minggu pada 4 oC.
5. Pembuatan pereaksi campuran
Pereaksi campuran dibuat dari 50 mL H2SO4 5 N, 5 mL larutan kalium
antimonil tartrat, 15 mL larutan ammonium molibdat , dan 30 mL
larutan asam askorbat. Setelah penambahan masing-masing pereaksi
diaduk. Pereaksi stabil selama 4 jam.
 37

Lampiran 2. Perhitungan Konsentrasi Teoritis

1. Pembuatan Larutan Intermediet Fosfor 5 mg/L

1 1 = 2 2

2 2
1 =
1
50 5 /
1 =
326 /

1 = 0,766

2. Konsentrasi Sesungguhnya Larutan Intermediet 5 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

0,77 5 /
2 =
50
2 = 5,0204 /

3. Konsentrasi Sesungguhnya Deret Standar Fosfor (Linieritas dan Kurva

Kalibrasi)
- 0,002 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

0,02 5 /
2 =
50
2 = 0,0020 /

- 0,004 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

0,04 5 /
2 =
50
 38

Lampiran 2. (Lanjutan)

2 = 0,0040 /

- 0,008 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

0,08 5 /
2 =
50
2 = 0,0020 /

- 0,01 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

0,1 5 /
2 =
50
2 = 0,0100 /

- 0,02 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

0,2 5 /
2 =
50
2 = 0,0201 /

- 0,04 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

0,4 5 /
2 =
50
 39

Lampiran 2. (Lanjutan)

2 = 0,0402 /

- 0,08 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

0,8 5 /
2 =
50
2 = 0,0803 /

- 0,16 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

1,6 5 /
2 =
50
2 = 0,1607 /

- 0,32 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

3.2 5 /
2 =
50
2 = 0,3213 /

- 0,64 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

6,4 5 /
2 =
50
 40

Lampiran 2. (Lanjutan)

2 = 0,6426 /

- 1,00 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

10 5 /
2 =
50
2 = 1,0041 /

- 1,20 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

12 5 /
2 =
50
2 = 1,2049 /

- 1,40 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

14 5 /
2 =
50
2 = 1,4057 /

- 1,6 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

16 5 /
2 =
50
 41

Lampiran 2. (Lanjutan)

2 = 1,6065 /

- 2,00 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

20 5 /
2 =
50
2 = 2,0082 /

4. Konsentrasi Sesungguhnya Larutan Uji Presisi dan Akurasi

- 0,02 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

0,2 5 /
2 =
50
2 = 0,0201 /

- 0,06 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2

0,6 5 /
2 =
50
2 = 0,0602 /

- 0,10 mg/L

1 1 = 2 2

1 1
2 =
2
 42

Lampiran 2. (Lanjutan)

1 5 /
2 =
50
2 = 0,1004 /

Keterangan:
V1 = Volume awal (mL)
V2 = Volume akhir (mL)
C1 = Konsentrasi awal (mg/L)
C2 = Konsentrasi akhir (mg/L)
 43

Lampiran 3. Hasil Perhitungan Kurva Kalibrasi

Tabel hasil perhitungan kurva kalibrasi

Konsentrasi Absorbansi
No xi.yi xi2 yi2
(mg/L) (xi) (yi)
1 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
2 0,0201 0,0117 0,0002 0,0004 0,0001
3 0,0402 0,0247 0,0010 0,0016 0,0006
4 0,0803 0,0529 0,0042 0,0065 0,0028
5 0,1607 0,1065 0,0171 0,0258 0,0113
6 0,3213 0,2105 0,0676 0,1032 0,0443
7 0,6426 0,4149 0,2666 0,4129 0,1721
1,2651 0,8212 0,3568 0,5505 0,2313

- Koefisien korelasi (r)

=1 =1
=1
=
2 2
=1 2 (=1 ) =1 2 (=1 )

r = 0,9999

- Slope (b)
=1 =1
=1
=

( )2
=1 2 =1

b = 0,65104

- Intersep (a)
[=1 ( =1 )]
=

a = 0,0003
Keterangan:
- xi = konsentrasi pada data ke-i (mg/L)
- yi = absorbansi pada data ke-i
- i = 1,2,3, ..., 10
- n = banyak data
 44

Lampiran 4. Hasil Perhitungan Uji Linieritas

Tabel Perhitungan Uji Linieritas

Konsentrasi Absorbansi
No xi.yi xi2 yi2
(mg/L) (xi) (yi)
1 0,0080 0,0077 0,0001 0,0001 0,0001
2 0,0100 0,0061 0,0001 0,0001 0,0000
3 0,0201 0,0126 0,0003 0,0004 0,0002
4 0,0402 0,0263 0,0011 0,0016 0,0007
5 0,0803 0,0494 0,0040 0,0065 0,0024
6 0,1607 0,1055 0,0169 0,0258 0,0111
7 0,3213 0,2096 0,0673 0,1032 0,0439
8 0,6426 0,3956 0,2542 0,4129 0,1565
9 1,0041 0,6338 0,6364 1,0082 0,4017
10 1,2049 0,7148 0,8613 1,4518 0,5109
11 1,4057 0,7872 1,1066 1,9760 0,6197
4,8978 2,9486 2,9481 4,9866 1,7473

- Koefisien korelasi (r)

=1 =1
=1
=
2 2
=1 2 (=1 ) =1 2 (=1 )

r = 0,9980
 45

Lampiran 5. Data Uji Limit Deteksi Instrumen

Tabel hasil pengukuran standar terkecil fosfor 0,002 mg/L

Konsentrasi Terukur
Ulangan Absorbansi
(mg/L)
1 0,0005 0,0004
2 0,0005 0,0004
3 0,0004 0,0002
4 0,0004 0,0002
5 0,0010 0,0011
6 0,0009 0,0010
7 0,0009 0,0010
8 0,0029 0,0041
9 0,0027 0,0038
10 0,0029 0,0041
Rata-rata 0,0016
Simpangan Baku 0,0017
%SBR 102,45
Syarat Keberterimaan LDI: Absorbansi dan konsentrasi positif dan %SBR besar
Simpulan: LDI sebesar 0,002 mg/L

- Rata-rata konsentrasi
=1
=

= 0,0016 mg/L

- Simpangan baku
=1( )2
=
1
SB = 0,0017 mg/L

- %SBR

% = x 100%

%SBR = 102,45 %
 46

Lampiran 6. Data dan Perhitungan Uji Limit Deteksi Metode dan Kuantitasi

Tabel pengukuran blanko

Konsentrasi Terukur
Ulangan Absorbansi
(mg/L)
1 0,0004 0,0002
2 0,0005 0,0004
3 -0,0022 -0,0038
4 -0,0022 -0,0038
5 0,0089 0,0133
6 0,0086 0,0129
7 -0,0009 -0,0018
8 -0,0001 -0,0006
9 0,0059 0,0087
10 0,0065 0,0096

Tabel perhitungan uji limit deteksi metode dan kuantitasi

Konsentrasi
Ulangan Absorbansi ( ) ( )2
Terukur (mg/L)
1 0,0005 0,0004 -0,0013 1,6 x 10-6
2 0,0005 0,0004 -0,0013 1,6 x 10-6
3 0,0004 0,0002 -0,0014 2,0 x 10-6
4 0,0004 0,0002 -0,0014 2,0 x 10-6
5 0,0010 0,0011 -0,0005 2,3 x 10-7
6 0,0009 0,0010 -0,0006 4,0 x 10-7
7 0,0009 0,0010 -0,0006 4,0 x 10-7
8 0,0029 0,0041 0,0025 6,0 x 10-6
9 0,0027 0,0038 0,0021 4,6 x 10-6
10 0,0029 0,0041 0,0025 6,0 x 10-6
0,0016
SB 0,0017
LDM 0,007
LK 0,018

- Rata-rata konsentrasi
=1
=

= 0,0016 mg/L
 47

Lampiran 6. (Lanjutan)
- Simpangan baku

( )2
= =1
1

SB = 0,0017 mg/L

- Limit deteksi metode (LDM)

= + (3 x )
LDM = 0,007 mg/L

- Limit kuantitasi (LK)

= + (10 x )
LK = 0,018 mg/L

Keterangan:
- = rata-rata konsentrasi
- xi = konsentrasi pada ulangan ke-i (mg/L)
- i = 1, 2, 3, ..., 10
- n = banyaknya ulangan
- SB = Simpangan baku (mg/L)
- %SBR = Simpangan baku relatif (mg/L)
 48

Lampiran 7. Data dan Perhitungan Uji Presisi (ripitabilitas)

Tabel Hasil Perhitungan Presisi

Konsentrasi
Ulangan Abs Terukur ( ) ( )2
(mg/L)
1 0,0387 0,0594 -0,0003 9,5 x 10-8
2 0,0395 0,0606 0,0009 8,6 x 10-7
3 0,0392 0,0601 0,0005 2,1 x 10-7
4 0,0387 0,0594 -0,0003 9,5 x 10-8
5 0,0359 0,0550 -0,0046 2,1 x 10-5
6 0,0394 0,0604 0,0008 6,0 x 10-7
7 0,0395 0,0606 0,0009 8,6 x 10-7
8 0,0393 0,0603 0,0006 3,8 x 10-7
9 0,0392 0,0601 0,0005 2,1 x 10-7
10 0,0396 0,0607 0,0011 1,2 x 10-6
0,5966 2,6 x 10-5
Rata-rata 0,0597 2,6 x 10-6
SB 0,0017
%SBR 2,84

- Rata-rata konsentrasi
=1
=

= 0,0597 mg/L

- Simpangan baku

=1( )2
=
1

SB = 0,0017 mg/L

- Simpangan baku relatif (%SBR)

% = x 100%

%SBR = 2,84%
 49

Lampiran 7. (Lanjutan)

Keterangan:
- = rata-rata konsentrasi
- xi = konsentrasi pada ulangan ke-i (mg/L)
- i = 1, 2, 3, ..., 10
- n = banyaknya ulangan
- SB = Simpangan baku (mg/L)
- %SBR = Simpangan baku relatif (mg/L)
 50

Lampiran 8. Perhitungan uji-t

Instrumen Baru Instrumen Lama

Selisih
Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi
Ulangan Abs Terukur Ulangan Abs Terukur (a) dan (b)
(mg/L) (a) (mg/L) (b)
1 0,0387 0,0594 1 0,039 0,0598 -0,0005
2 0,0395 0,0606 2 0,038 0,0583 0,0023
3 0,0392 0,0601 3 0,039 0,0598 0,0003
4 0,0387 0,0594 4 0,040 0,0614 -0,0020
5 0,0359 0,0550 5 0,041 0,0629 -0,0079
6 0,0394 0,0604 6 0,039 0,0598 0,0006
7 0,0395 0,0606 7 0,037 0,0567 0,0039
8 0,0393 0,0603 8 0,036 0,0552 0,0051
9 0,0392 0,0601 9 0,039 0,0598 0,0003
10 0,0396 0,0607 10 0,038 0,0583 0,0025
Rata-rata 0,0005
Simpangan Baku 0,0036
Derajat Bebas (n 1) 9

1. Hipotesis
H0 : 0 = m atau 0 - m = 0 atau = 0
Rata-rata hasil penetapan total fosfat menggunakan instrumen baru dan lama
tidak berbeda nyata

H0 : 0 = m atau 0 - m = 0 atau 0
Rata-rata hasil penetapan total fosfat menggunakan instrumen baru dan lama
berbeda nyata

2. Nilai thitung

=

0,000510
=
0,0036
= 0,405
 51

Lampiran 8. (Lanjutan)

5%
3. Nilai ttabel pada = (db, )
2

db = n 1 = 10 1 = 9
ttabel = 9; 0,025
ttabel = 2,262
Keterangan:
db = derajat bebas
n = banyaknya ulangan

4. Thitung < ttabel, maka terima H0 : 0 = m atau 0 - m = 0 atau = 0

5. Simpulan

Rata-rata hasil penetapan total fosfat menggunakan instrumen baru dan lama
tidak berbeda nyata.
 52

Lampiran 9. Data dan Perhitungan Uji Akurasi (% perolehan kembali)

Tabel hasil perhitungan uji akurasi spiked-palecebo

Konsentrasi Konsentrasi %
Level
Teoritis Ulangan Absorbansi Terukur perolehan
Konsentrasi
(mg/L) (mg/L) kembali
1 0,0130 0,0197 97,95
2 0,0133 0,0201 100,25
3 0,0138 0,0209 104,10
Rendah 0,0201 4 0,0131 0,0198 98,71
5 0,0137 0,0207 103,33
6 0,0135 0,0204 101,79
7 0,0120 0,0181 90,26
1 0,0387 0,0594 98,52
2 0,0359 0,0550 91,34
3 0,0394 0,0604 100,31
Sedang 0,0602 4 0,0395 0,0606 100,57
5 0,0393 0,0603 100,05
6 0,0392 0,0601 99,80
7 0,0396 0,0607 100,82
1 0,0560 0,0861 85,71
2 0,0561 0,0862 85,87
3 0,0561 0,0862 85,87
Tinggi 0,1004 4 0,0733 0,1128 112,32
5 0,0743 0,1143 113,85
6 0,0743 0,1143 113,85
7 0,0580 0,0892 88,79
Rata-rata 98,76

Contoh perhitungan akurasi fosfat pada konsentrasi 0,0201 mg/L

% = x 100%

0,0197 mg/L
% = x 100%
0,0201 mg/L

% = 97,95%
 53

Lampiran 9. (Lanjutan)

Tabel hasil perhitungan uji akurasi CRM Simple Nutrients

Konsentrasi Konsentrasi %
Level
Teoritis Ulangan Absorbansi Fp Terukur perolehan
Konsentrasi
(mg/L) (mg/L) kembali
1 0,1587 10 2.4464 88,00
2 0,1586 10 2.4448 87,94
3 0,1711 10 2.6378 94,89
4 0,1727 10 2.6625 95,77
CRM 10x 5 0,1699 10 2.6193 94,22
2,78
pengenceran 6 0,1826 10 2.8154 101,27
7 0,1774 10 2.7351 98,38
8 0,1701 10 2.6224 94,33
9 0,1776 10 2.7382 98,50
10 0,1779 10 2.7428 98,66
Rata-rata 95,20

Contoh perhitungan akurasi fosfat

% = x fp x 100%

2,4464 mg/L
% = x 10 x 100%
2,78 mg/L

% = 88,00%