EKSPRESI TUMOR NECROSIS FACTOR ALPHA (TNF - ) DAN JUMLAH SPERMA

PADA TIKUS (RATTUS NORVEGICUS) MODEL DIABETES MELLITUS TIPE 1

HASIL INDUKSI STREPTOZOTOCIN YANG DITERAPI DENGAN
EKSTRAK ETANOL RIMPANG KUNYIT (CURCUMA LONGA L.)

Expression of Tumor Necrosis Factor - Alpha (TNF - ) and Sperm Count in Type 1
Diabetes Mellitus Rat (Rattus norvegicus) Model Inducted by Streptozotocin
Treated with Turmeric Rhizome Ethanol Extract (Curcuma longa L.)

Bernadhita Gaudia Sabirosi*, Pratiwi Trisunuwati, Djoko Winarso

Program Studi Kedokteran Hewan, Program Kedokteran Hewan
Universitas Brawijaya
*bernadhete.cha@gmail.com

ABSTRAK

Diabetes mellitus tipe 1 adalah salah satu tipe diabetes yang terjadi di sebabkan oleh
kerusakan pada sel - pankreas yang memproduksi insulin. Diabetes mellitus (DM) Tipe 1
mengakibatkan inflamasi pada pankreas dan berakibat pada organ reproduksi jantan dapat
menurunkan kualitas dan kuantitas sperma. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui
pengaruh pemberian ekstrak etanol rimpang kunyit (Curcuma longa L.) terhadap jumlah
spermatozoa dan ekspresi tumor necrosis factor - alpha (TNF-) pada organ pankreas.
Rancangan penelitian menggunakan RAL dan penelitian murni. Pembuatan hewan coba tikus
(Rattus norvegicus) DM tipe 1 dilakukan dengan induksi multi low dose - streptozotocin (MLD-
STZ) melalui intraperitoneal 20 mg/BB selama 5 hari. Penelitian ini menggunakan tikus (Rattus
norvegicus) strain Wistar jantan berumur 3 bulan yang dibagi dalam 5 kelompok yaitu kelompok
kontrol negatif (A), kelompok diabetes mellitus tipe 1 (B), kelompok DM Tipe 1 dengan terapi
1,2 g/kgBB (C), kelompok DM Tipe 1 dengan terapi 1,8 g/kgBB (D), dan kelompok DM Tipe 1
dengan terapi 2,7 g/kgBB (E) selama 42 hari. Masing masing kelompok terdiri atas 4 ekor
tikus. Penghitungan jumlah spermatozoa dengan menggunakan hemocytometer dan pengukuran
ekspresi TNF- dengan menggunakan metode imunohistokimia. Hasil penelitian dianalisis
dengan One Way ANOVA (=0,05) menunjukan adanya signifikansi (P<0,05) terhadap
peningkatan jumlah spermatozoa sampai 56,43% dan penurunan ekspresi TNF- sampai 56,16%
pada tikus yang diterapi ekstrak etanol rimpang kunyit dosis 2,7 g/kgBB. Kesimpulan dari
penelitian ini adalah pemberian ekstrak rimpang kunyit dapat meningkatkan jumlah spermatozoa
dan menurunkan ekspresi TNF- tikus diabetes mellitus tipe 1.

Kata kunci : DM Tipe 1, rimpang kunyit, TNF- dan spermatozoa

ABSTRACT

Diabetes mellitus type 1 (DM Type 1) is a type of diabetes that occurs because of
pancreatic cells damaged which producing insulin. Animal DM Type 1 resulted by
inflammation of the pancreas and its impact in the male reproductive organs may decrease the
quality and quantity of sperm. This research was conducted to determine the effect of turmeric
rhizome ethanol extract (Curcuma longa L.) based on sperm count and expression of tumor
necrosis factor - alpha (TNF-) in the pancreas organ. This true experiment was design by
Completely Randomized Design. Induction of DM Type 1 in rats doing by injecting Multiple
Low Dosage - Streptozotocin (MLD-STZ) in intraperitonially (i.p) at dosage of 20 mg/Kg BW in
5 days.This study used male rats (Rattus norvegicus) aged 3 months Wistar strain which divided
into 5 groups: negative control (A), DM Type 1 (B), DM Type 1 treated with Turmeric Rhizome
Extract 1,2 g /kg BW (C), 1,8 g/kg BW (D) and 2,7 g/kg BW (E) for 42 days. Each group
consisted of 4 rats. Spermatozoa counted with hemocytometer and measurement of TNF-
expression used immunohistochemical methods. The result of the analysis on one way ANOVA
( = 0,05) data showed that spermatozoa count was significantly increased up to 56,43% and
TNF- expression was decreased ip to 56,16% in rats which treated with turmeric rhizome
ethanol extract 2,7 g/kgBW. These result provide that turmeric rhizome extract may increase the
amount of spermatozoa and decrease the expression of TNF- of DM Type 1 rats.

Keywords: DM Type 1, turmeric rhizome, TNF- and spermatozoa

PENDAHULUAN mempengaruhi adalah obesitas, umur, jenis

Diabetes mellitus (DM) merupakan
penyakit gangguan metabolisme karbohidrat
yang gejala umumnya berupa hiperglikemia.
Diabetes mellitus tipe 1 (DM tipe 1) atau
Insulin Dependent Diabetes Mellitus
(IDDM) adalah salah satu tipe diabetes yang
tergantung pada produksi insulin atau terjadi
karena adanya kerusakan pada sel -
pankreas yang memproduksi insulin
(Mayfield,1998). Faktor faktor yang dapat
memicu terjadinya diabetes pada hewan,
antara lain umur, jenis kelamin, ras, dan
lingkungan (Fall et al., 2007).
Prevalensi kejadian Diabetes mellitus
pada manusia menurut International
Diabetes Federasion adalah 8,39%.
Diabetes mellitus pada hewan terjadi pada
pet animal seperti anjing dan kucing, hal ini
disebabkan oleh pemberian pakan yang
tinggi lemak maupun pemberian pakan
melebihi kebutuhan tubuhnya. Menurut Fall
et al. (2007), terjadi 13 kasus DM per
10.000 anjing tiap tahunnya pada anjing
umur lebih dari lima tahun dan ras yang
sering mengalami DM adalah Australian
Terriers, Samoyeds, Swedish Elkhounds dan
Swedish Lapphunds. Pada kucing prevalensi
kejadian DM sebesar 0,5%, faktor yang
kelamin, dan sterilisasi (Hoenig, 2002).
Diabetes mellitus tipe 1 merupakan
penyakit yang disebabkan adanya
inflammasi pada pankreas atau yang biasa
disebut insulitis. Adanya faktor genetik dan
lingkungan pada DM tipe 1 memicu
terjadinya respon imun yang dimediasi oleh
sel T limfosit dan bereaksi pada sel-
pankreas sebagai self-antigen. Makrofag dan
sel T yang bersifat cytotoxic memproduksi
sitokin, tumor necrosis factor - (TNF-)
dan interferon- (IFN-) yang menyebabkan
kerusakan sel - pankreas (LeRoith et al.,
2004). Pada penderita DM tipe 1 akan
mengalami kenaikan kadar maupun ekspresi
TNF - . Penderita DM tipe 1 memiliki
kadar insulin yang rendah yang dapat
mempengaruhi menurunnya sekresi hormon
hormon lain termasuk hormon reproduksi
seperti, LH dan FSH. Turunnya kadar
Follicle Stimulating Hormone (FSH) akan
mempengaruhi produksi spermatozoa
sehingga jumlah spermatozoa menurun
(Rachmadi, 2008).
Kunyit (Curcuma longa L.) yang
selama ini dijadikan bumbu masak memiliki
beberapa bahan aktif antara lain, minyak
atsiri, kurkumin, demetoksikurkiumin,
bisdemetoksikurkumin, saponin, flavonoid,
dan polifenol. Bioaktif dalam kunyit yang
digunakan untuk terapi adalah kurkumin,
karena merupakan zat antioksidan dan
antiinflamasi. Pemberian kunyit (Curcuma
longa L.) diharapkan mampu menurunkan
ekspresi TNF - pankreas dan
meningkatkan jumlah spermatozoa tikus
(Rattus norvegicus) model diabetes mellitus
tipe 1 hasil induksi streptozotocin.
MATERI DAN METODE
Persiapan Hewan Coba
Hewan coba diadaptasi terhadap
lingkungan selama tujuh hari dengan
pemberian pakan berupa pakan ayam buras
dewasa dari Wonokoyo Jaya Corpindo dan
minum ad libitum pada semua tikus. Hewan
model dibagi menjadi lima kelompok
perlakuan, yaitu : kelompok kontrol negatif
(A), kelompok kontrol positif diabetes
mellitus tipe 1 (B), kelompok DM 1 yang
diterapi ekstrak etanol rimpang kunyit 1,2
g/kgBB (C), kelompok DM 1 yang diterapi
ekstrak etanol rimpang kunyit 1,8 g/kgBB
(D), dan kelompok DM 1 yang diterapi
ekstrak etanol rimpang kunyit 2,7 g/kgBB
(E).
Pembuatan Hewan Model Diabetes Mellitus
Tipe 1
Seminggu pasca adaptasi, dilakukan
pengukuran kadar gula darah dengan
menggunakan glucometer pada semua
kelompok perlakuan. Pemberian injeksi
streptozotocin (STZ) pada kelompok B, C,
D, dan E dengan dosis 20 mg/kgBB selama
lima hari berturut turut, injeksi dilakukan
dengan rute intraperitoneal (IP). Pada proses
diabetes mellitus, dilakukan pengukuran
kadar gula darah tiap tujuh hari sekali untuk
memastikan tikus telah mengalami kenaikan
kadar gula darah. Kadar gula darah normal
pada tikus adalah 126 mg/dL (Barik et al.,
2008). Hasil pengukuran pada tikus model
diabetes mellitus tipe 1 pada penelitian ini
terjadi kenaikan kadar gula darah > 600
mg/dL, maka dipastikan bahwa sampel tikus
tersebut telah menderita diabetes mellitus
pada hari ke-14 setelah pemberian STZ.
Pembuatan Ekstrak Etanol Rimpang Kunyit
Pembuatan ekstrak etanol rimpang
kunyit ini dengan menggunakan metode
maserasi, tahapannya dimulai dengan
mencuci bersih kunyit dan dipotong tipis
tipis, kemudian dimasukkan oven dengan
suhu 40-60C hingga kunyit kering.
Tahapan selanjutnya yaitu proses ekstraksi,
kunyit yang telah kering dihaluskan dengan
blender sampai halus, ditimbang sebanyak
100 gram dan dimasukkan ke dalam gelas
erlenmeyer ukuran 1 liter. Kunyit kering
tersebut ditambahkan dengan etanol 96%
sampai menjadi 1 liter dan dikocok hingga
benar benar tercampur. Rendaman kunyit
dan etanol didiamkan selama satu hari
hingga mengendap, kemudian diambil
lapisan atas campuran etanol (pelarut)
dengan zat aktif yang sudah tercampur
dengan penyaringan menggunakan kertas
saring. Larutan campuran etanol dan zat
aktif kunyit tersebut kemudian dievaporasi
menggunakan penangas air dengan suhu
80C hingga ekstrak menjadi kental dan
ditimbang berat ekstraknya, kemudian di
evaporasi kembali dengan menggunakan
oven untuk menghilangkan etanol yang
tersisa. Evaporasi dengan oven dengan suhu
70C, setiap 15 menit ekstrak ditimbang
hingga sebanyak tiga kali penimbangan
berat ekstrak sama. Ekstrak kunyit yang
telah dievaporasi diencerkan dengan
akuades dan Na2CO3 agar mudah untuk
disondekan.
Pemberian Terapi Hewan Model
Pemberian perlakuan terapi ekstrak
etanol rimpang kunyit dimulai pada hari ke-
15 setelah pemberian STZ. Terapi ekstrak
etanol rimpang kunyit (Curcuma Longa L.)
diberikan pada kelompok B, kelompok C,
dan kelompok D. Pemberian terapi
dilakukan secara per oral melalui sonde
lambung dengan dosis ekstrak etanol
rimpang kunyit sesuai dengan kelompok.
Pemberian terapi rutin dilakukan sehari
sekali selama 42 hari. Selama pemberian
terapi, dilakukan pengukuran kadar gula
darah setiap tujuh hari sekali pada semua
kelompok perlakuan.
Penghitungan Jumlah Spermatozoa
Ujung dari kauda epididimis dipotong
dengan gunting dan diurut agar sperma
keluar dan ditampung di cawan petri. Cairan
sperma yang keluar diambil 50 l dan
diletakkan pada obyek glass untuk melihat
jumlah sperma per lapang pandang. Pada
penelitian ini diperkirakan jumlah sperma
per lapang pandang adalah >40 sehingga
menggunakan perbandingan sperma dan
larutan phosphat buffer saline (PBS) untuk
pengenceran adalah 1:20. 1 tetes cairan
sperma diambil dan dihomogenkan dengan
1000 l larutan PBS pH 7,4. Sperma dan
PBS yang telah homogen diambil
menggunakan pipet dan diteteskan ke dalam
kamar hitung improved Neubauer dan
ditutup dengan cover glass, dipastikan tidak
terdapat gelembung udara. Spermatozoa
diamati dan dihitung dibawah mikroskop
cahaya (Nugroho, 2010).
Pembuatan Preparat Imunohistokimia
Organ pankreas tikus dimasukkan ke
dalam larutan paraformaldehid (PFA) 4%.
Pembuatan preparat histopatologi meliputi
proses dehidrasi, clearing, embedding,
sectioning, penempelan pada obyek glass
dan pewarnaan imunohistokimia. Ekspresi
TNF - pada preparat imunohistokimia
pankreas diamati dan difoto pada perbesaran
40x dan 400x dengan 5 lapangan pandang
untuk setiap kelompok. Dihitung presentase
ekspresi TNF - per lapangan pandang
untuk setiap kelompok dengan software
Axio Vision.
Analisis Data
Penelitian ini merupakan penelitian
murni dengan Rancangan acak lengkap.
Data yang digunakan dalam penelitian ini
berupa data kuantitatif. Data kuantitatif
jumlah spermatozoa tikus dan ekspresi
Tumor Necrosis Factor - alpha (TNF-)
yang disajikan dan dianalisis dengan SPSS
16.0 Edition for Windows dengan analisis
ragam ANOVA dengan = 0.05 dan
dilanjutkan dengan uji Tukey atau Beda
Nyata Jujur (BNJ) apabila ternyata
signifikan.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh Pemberian Ekstrak etanol
Rimpang Kunyit (Curcuma longa L.)
Terhadap Ekspresi Tumor Necrosis
Factor Alpha (TNF-) Pada Tikus
Model Diabetes Mellitus Tipe 1
Diabetes mellitus tipe 1 (DM Type 1) pada
tikus model dilihat dari kadar gula darah
yang diukur menggunakan glucometer.
Hasil induksi STZ untuk pembentukan
hewan model diabetes mellitus tipe 1
menunjukkan peningkatan kadar gula darah
sebesar > 600 mg/dL, dibandingkan dengan
sebelum perlakuan menunjukkan rata rata
sebesar 121 mg/dL sesuai dengan barik et al.
(2008) bahwa kadar gulah darah normal
tikus yaitu 126 mg/dL. Hal ini
menunjukkan bahwa hewan model telah
menderita DM Tipe 1. Pemberian terapi
ekstrak etanol rimpang kunyit memberikan
pengaruh berupa penurunan ekspresi TNF-
pankreas, dengan presentase penurunan rata
rata ekspresi TNF- kelompok C,
kelompok D, dan kelompok E dibandingkan
kelompok B secara berturut turut yaitu
25,21%, 37,72% dan 56,16% (Tabel 1).
Perhitungan rata rata ekspresi TNF-a
pankreas tikus menunjukkan perbedaan
nyata kelompok A dibandingkan dengan rata
rata ekspresi TNF- tikus kelompok B.
Hal ini disebabkan induksi STZ pada
pembuatan hewal model diabetes mellitus
tipe 1. Streptozotocin sebagai agen
diabetonik menyebabkan teraktivasinya
limfosit T terutama CD4+ yang
menghasilkan interferon - (IFN - ).
Interferon - akan mengaktivasi makrofag
yang menstimulasi produksi sitokin pro
inflamasi seperti IL 1 dan TNF - serta
memproduksi radikal bebas seperti
superperoksida (O2-), hydrogen peroksida
(H2O2) dan nitrit oxide (NO) (LeRoith,
2004). Interferon - juga mengaktivasi
limfosit T CD8+ sitotoksik. Sitokin pro
inflamasi yang diproduksi akibat
teraktivasinya makrofag menjadi sitotoksik
ke sel pankreas dengan mengirimkan
death signals pada sel sehingga terjadi
nekrosis pada sel b pankreas. Radikal bebas
yang diproduksi dari teraktivasinya
makrofag juga memicu terjadinya nekrosis
sel b pankreas dengan adanya ikatan antara
superperoksida (O2-) dan nitrit oxide (NO)
Tabel 1. Rata rata ekspresi TNF- pankreas tikus pada masing masing kelompok perlakuan
Rata rata TNF-
Kelompok
standar deviasi TNF -
a
Kontrol - ( A ) 3,92 0,38
c
Kontrol + ( B ) 17,54 7,98
bc
1,2g/kgBB ( C ) 13,12 1,66
abc
1,8g/kgBB ( D ) 10,93 0,31
2,7g/kgBB ( E ) 7,69 0,38 ab
Keterangan: Notasi a, b, c dan d menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan antar perlakuan (p<0,05).
Perhitungan statistika menunjukkan
tidak terdapat perbedaan nyata antara
kelompok kontrol positif (kelompok B)
dengan kelompok C dan kelompok D. Hasil
tersebut menunjukkan bahwa rata rata
ekspresi TNF- setelah pemberian terapi
ekstrak etanol rimpang kunyit (Curcuma
longa L.) dengan dosis 1,2 g/kgBB dan
1,8/kgBB masih sama dengan ekspresi TNF-
kontrol positif (B). Kelompok D dan
kelompok A menunjukkan hasil yang tidak
berbeda nyata dengan kontrol positif
(kelompok B), namun pemberian terapi
ekstrak etanol rimpang kunyit pada dosis
menjadi peroxinitrite (ONOO-). Peroxinitrite
menyebabkan fragmentasi DNA pada sel b
pankreas dan menginduksi terjadinya
nekrosis sel (Nugroho, 2006). Sel b pankreas
yang mengalami nekrosis akan
mengeluarkan protein yang dikenal dengan
b-protein. Selanjutnya b-protein ini akan
dikenali sebagai antigen (b-Ag) oleh APC
dan dipresentasi oleh MHC-2 pada reseptor
sel T spesifik b-Ag yang mengaktivasi
kembali CD4+ TH1 (LeRoith, 2004).
Kejadian ini akan terjadi secara terus
menerus mengakibatkan meningkatkan
ekspresi TNF- di sel pankreas dan
tingkat keparahan kerusakan sel pankreas.
Mekanisme tersebut menyebabkan
munculnya ekspresi TNF- meningkat
77,64% pada kelompok kontrol positif (B)
dibandingkan dengan kelompok kontrol
negatif (A).
% Peningkatan % penurunan
TNF -
- -
77,64 -
- 25,21
- 37,72
- 56,16
tersebut telah mendekati kondisi normal. Hal
ini menunjukkan pemberian terapi dosis 1,8
g/kgBB (kelompok D) dan dosis 2,7 g/kgBB
(kelompok E) efektif untuk menurunkan
ekspresi TNF- pankreas tikus model
diabetes mellitus tipe 1.
Rimpang kunyit merupakan tanaman
yang dapat dimanfaatkan sebagai
antioksidan eksogen karena mengandung
senyawa kurkumin yang tinggi. Hal ini
sesuai dengan Sharma (2005) yang
menunjukkan bahwa kurkumin yang
terdapat dalam rimpang kunyit dapat
berperan sebagai antioksidan dan
antiinflamasi. Kurkumin sebagai antioksidan terapi ekstrak etanol rimpang kunyit yang
akan menstabilkan radikal bebas yang mengandung senyawa kurkumin mampu
diproduksi akibat aktivasi makrofag. menurunkan ekspresi TNF- pankreas tikus
Sebagai antiinflamasi, Kurkumin menekan model diabetes mellitus tipe 1.
aktivasi dari nuclear factor kappa B (NF-
B) yang merupakan faktor transkripsi
eukoryotik yang meliputi regulasi inflamasi,
proliferasi selular, tranformasi dan
tumorigenesis. Aktivasi NF-B akan
menginduksi ekspresi gen inflamatori dan
meningkatkan produksi COX-2, sel adhesi
dan sitokin pro-inflamasi (Bernd, 2000).
Aktivasi NF-B yang ditekan oleh kurkumin
akan menghambat induksi transkripsi dari
sitokin pro inflamasi, sehingga terjadi
penurunan ekspresi dari TNF-. Kurkumin
juga dapat menghambat induksi
cyclooxygenase-2 (COX-2) dan
lypoxygenase (Sharma, 2005). Kurkumin
menghambat secara langsung aktivitas
enzimatik dari COX-2 yang berperan dalam
produksi prostaglandin selama proses Gambar 1. Ekspresi TNF- pada pulau
inflamasi, nyeri dan respon demam. Jalur langerhans pankreas tikus.
Keterangan : A: Pulau langerhans tikus kontrol
lypoxygenase berperan dalam produksi
negatif; B: Pulau langerhans tikus DM, C: Pulau
arachidonic acid yang akan menjadi langerhans tikus terapi ekstrak etanol rimpang
prostaglandin sebagai mediator inflamasi. kunyit dosis 1,2 g/kgBB; D: Pulau langerhans
Pada Gambar 1 menunjukkan bahwa tikus terapi ekstrak etanol rimpang kunyit dosis
gambar B terdapat ekspresi TNF- yang 1,8 g/kgBB; E: Pulau langerhans tikus terapi
banyak di bagian pulau langerhans ditandai ekstrak etanol rimpang kunyit dosis 2,7 g/kgBB.
dengan adanya warna coklat yang tersebar di Pembesaran 400 x; Panah hitam: sel beta tanpa
pulau langerhans pankreas dan adanya ekspresi TNF-;Panah merah: sel beta
rongga atau ruang interseluler. Warna coklat mengekspresikan TNF- dengan spot warna
yang muncul disebabkan adanya ikatan coklat.
antigen (TNF-) dan antibodi (anti TNF-)
Pengaruh Pemberian Ekstrak etanol
yang berlabel biotin. Ekspresi TNF- pada
Rimpang Kunyit (Curcuma longa L.)
gambar B lebih banyak dibandingkan
Terhadap Jumlah Spermatozoa Pada
dengan gambar A karena pada tikus diabetes
Tikus Model Diabetes Mellitus Tipe 1
mellitus produksi sitokin pro-inflamasi
Hasil penghitungan jumlah
seperti TNF- meningkat. Pada gambar C,
spermatozoa menunjukkan adanya
gambar D, dan gambar E terjadi penurunan
perbedaan yang nyata (p<0,05) dari kelima
ekspresi TNF- ditandai dengan kelompok perlakuan tersebut. Hal ini
berkurangnya warna coklat pada pulau menunjukan bahwa pemberian ekstrak
langerhans dan terjadinya penghambatan etanol rimpang kunyit (Curcuma longa L.)
kerusakan pulau langerhans pankreas yang pada masing-masing kelompok perlakuan
ditandai dengan bekurangnya rongga dapat mempengaruhi peningkatan jumlah
interseluler. Hal ini disebabkan adanya spermatozoa tikus model diabetes mellitus
tipe 1 (Tabel 2).Perhitungan rata rata disebabkan karena diabetes mellitus tipe 1
jumlah spermatozoa tikus kelompok kontrol mengakibatkan penurunan jumlah insulin
negatif (A) jumlah spermatozoa dalam tubuh, sehingga dapat terjadi
menunjukkan perbedaan yang nyata komplikasi pada organ reproduksi salah
dibandingkan dengan rata rata jumlah satunya pada jumlah spermatozoa.
spermatozoa tikus kelompok B. Hal ini

Tabel 2. Rata-rata jumlah spermatozoa tikus pada masing-masing kelompok perlakuan

Rata rata jumlah % Peningkatan % Penurunan

Kelompok
spermatozoa standar deviasi jumlah sperma jumlah sperma

Kontrol - (A) 81.400 4056,3 c - -

Kontrol + (B) 26.775 24596,8 a - 67,11
Dosis 1,2g/kgBB ( C ) 26.913 14780,1 a 0,51 -
Dosis 1,8g/kgBB ( D ) 43.713 4226,6 ab 38,75 -
Dosis 2,7g/kgBB ( E ) 61.450 10337,5bc 56,43 -
Keterangan: Notasi a, b, c dan d menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan antar perlakuan (p<0,05).

kadar insulin mengakibatkan terhambatnya

Gambar 2. Spermatozoa tikus dalam 1
lapang pandang
Insulin diproduksi dan disintesis oleh
sel pankreas, sehingga apabila terjadi
kerusakan sel pankreas seperti pada
keadaan diabetes mellitus tipe 1 akan terjadi
penurunan jumlah insulin. Salah satu peran
insulin dalam tubuh adalah untuk meransang
sintesa protein di hati. Kadar insulin yang
menurun akibat keadaan DM1 akan
menghambat kerja organ yang dipengaruhi
oleh insulin. Pada organ hati penurunan
sintesa protein oleh hati, salah satunya
sintesis IGF 1. Insulin like Growth Factor
1 (IGF 1) berperan dalam meningkatkan
efek gonadotropin pada sel sertoli dan sel
leydig (Guyton, 2006). Penurunan IGF 1
mengakibatkan terjadinya penurunan efek
gonadotropin (LH dan FSH) pada sel sertoli
dan sel leydig yang berperan dalam proses
spermatogenesis.
Hormon LH menstimulasi sel leydig
untuk berproliferasi dan memproduksi
testosteron, sedangkan FSH berpengaruh
langsung terhadap proses spermatogenesis
dan terhadap proliferasi sel sertoli yang
menghasilkan ABP. Androgen Binding
Protein (ABP) yang diproduksi oleh sel
sertoli dengan rangsangan FSH berfungsi
untuk transport hormon testosteron. Pada
kondisi diabetes mellitus, terjadi penurunan
efek LH dan FSH pada sel sertoli dan sel
leydig. Hal ini mengakibatkan menurunnya
produksi testosteron dan ABP yang
digunakan dalam proses pembentukan
spematozoa, sehingga proses
spermatogenesis akan terhambat. Proses
spermatogenesis yang terhambat akan
berefek pada jumlah spermatozoa yang
dihasilkan. Penurunan jumlah spermatozoa
pada keadaan diabetes mellitus disebabkan
oleh terhambatnya proses spermatogenesis
akibat penurunan produksi testosteron dan
Androgen Binding Protein. Hal tersebut
yang menyebabkan terjadi penurunan
jumlah spermatozoa pada kelompok kontrol
positif (B) sebesar 67,11% dibandingkan
dengan kelompok kontrol negatif (A).
Proses spermatogenesis terjadi di
tubulus seminiferus testis terdiri dari dua
tahapan, yaitu spermacytogenesis dan
spermiogenesis. Spermacytogenesis adalah
proses pembentukan spermatosit primer dan
sekunder dari spermatogonia tipe A, proses
ini dipengaruhi oleh hormon FSH yang
memicu berlangsungnya proses
spermatogenesis dan testosteron berperan
dalam mengaktivasi gen di sel sertoli yang
memicu diferensiasi spermatogonia untuk
memulai proses spermatogenesis.
Spermiogenesis adalah proses pembentukan
spermatozoa dari spermatid yang
diperngaruhi oleh FSH dan testosteron, FSH
berpengaruh terhadap proliferasi sel sertoli
yang menghasilkan ABP untuk transport
hormon testosteron (Cheng, 2008). Pada
kejadian diabetes mellitus, terjadi penurunan
hormon LH dan FSH pada testis sehingga
produksi ABP dan testosteron menurun. Hal
ini mengakibatkan terjadinya gangguan pada
proses spermacytogenesis maupun
spermiogenesis yang menyebabkan
penurunan produksi spermatozoa.
Pemberian ekstrak etanol rimpang
kunyit (Curcuma longa L.) pada tikus
model diabetes mellitus tipe 1 kelompok C
dan kelompok D tidak berbeda nyata dengan
kontrol positif. Hasil tersebut menunjukkan
bahwa rata rata jumlah spermatozoa
setelah pemberian terapi ekstrak etanol
rimpang kunyit (Curcuma longa L.) dengan
dosis 1,2 g/kgBB dan 1,8/kgBB masih sama
dengan jumlah spermatozoa kontrol positif
(B). Hal ini disebabkan karena kandungan
bioaktif kurkumin dalam ekstrak etanol
rimpang kunyit yang bertindak sebagai
antioksidan dan antiinflamasi tidak cukup
untuk menstabilkan radikal bebas dan
menekan jumlah sitokin pro inflamasi.
Ekstrak etanol rimpang kunyit
(Curcuma longa L.) memiliki kandungan
bioaktif kurkumin yang tinggi sebagai
antioksidan dan antiinflamasi. Antioksidan
adalah zat yang mampu memperlambat atau
mencegah proses oksidasi. Kurkumin
sebagai antioksidan (AH) memberikan atom
hidrogen secara cepat ke radikal bebas (R*,
ROO*) atau mengubahnya ke bentuk lebih
stabil, sementara turunan radikal antioksidan
(A*) tersebut memiliki keadaan lebih stabil
dibanding radikal bebas. Kurkumin juga
memperlambat laju autooksidasi dengan
cara menurunkan kadar enzim xanthine
oxidase yang mengkatalis reaksi
pembentukan anion superoksida aktif.
Kurkumin sebagai antiinflamasi, bekerja
dengan cara menekan produksi sitokin pro
inflamasi yang memicu kerusakan pada sel
pankreas, sehingga mampu mengurangi
tingkat kerusakan sel. Penurunan radikal
bebas dan sitokin pro-inflamasi dalam tubuh
dapat mengurangi tingkat kerusakan sel
pankreas dan meningkatkan produksi
insulin.
Kurkumin sebagai anti-diabetik mampu
menstimulasi sel pankreas untuk
memproduksi dan mensekresi insulin. Kadar
insulin yang meningkat dapat memicu
sintesa IGF 1 pada hati yang
meningkatkan efek LH dan FSH pada sel
leydig dan sel sertoli. Peningkatan tersebut
dapat memicu peningkatan kadar testosteron
dan ABP yang digunakan dalam proses
spermatogenesis. Proses spermatogenesis
yang tidak terhambat akan menghasilkan
spermatozoa dengan kuantitas yang lebih
tinggi.
KESIMPULAN
Pemberian ekstrak etanol rimpang
kunyit (Curcuma longa L) pada dosis 2,7
g/kgBB dapat menurunkan ekspresi Tumor
Necrosis Factor - Alpha (TNF - ) pada
organ pankreas dan meningkatkan jumlah
spermatozoa tikus (Rattus norvegicus)
model diabetes mellitus tipe 1.
Ucapan Terima Kasih
Terima kasih kepada supervisor dan staff
Laboratorium Farmakologi FK Universitas
Brawijaya yang memfasilitasi pelaksanaan
penelitian ini.
DAFTAR PUSTAKA
Barik, R., S. Jain, D. Qwatra, A. Joshi, G.S.
Tripathi and R. Goyal.
2008. Antidiabetic activity of aqueous
root extract of Ichnocarpus
frutescens in streptozotocin-
nicotinamide induced type II diabetes
in rats. Indian Journal of
Pharmacology 40:1 19.
Bernd, A., C. Theilig, S. Kippenberger, A.
Ramirez-Bosca, J. Diaz, J. Miquel,
and R. Kaufmann. 2000. Effect of
Curcuma longa extract on the
expression of proinflammatory
cytokines. Skin Pharmacol App. Skin
Physiol 13, 226234.
Cheng, C.Y. 2008. Molecular Mechanisms
in Spermatogenesis. United States of
America : Landes Bioscience and
Springer Science+Business Media,
LLC.
Fall, T., H.H. Hamlin, A. Hedhammar, O.
Kampe and A. Egenvall. 2007.
Diabetes Mellitus in a Population of
180.000 Insured Dogs: Incidence,
Survival, and Breed Distribution. J Vet
Intern Med 21:1209-1216.
Hoenig, M. 2002. Comparative Aspects of
Diabetes Mellitus in Dogs and Cats.
Molecular and Endocrinology 197 :
221-229.
LeRoith, D., S. Taylor and J.M. Olefsky.
2004. Diabetes Mellitus : A
Fundamentaland Clinical Text 3rd
Edition. Lippincott Williams &
Wilkins, Philadelphia. 519-538.
Mayfield J. 1998. Diagnosis and
classification of diabetes mellitus :
new criteria. American Family
Phyician 58 (6) : 1-8
Nugroho, A.E. 2006. Hewan Percobaan
Diabetes Mellitus : Patologi dan
Mekanisme Aksi Diabetogenik.
Biodiversitas, 7(4) : 378-382.
Rachmadi, A. 2008. Kadar Gula Darah dan
Kadar Hormon Testosteron Pada Pria
Penderita Diabetes Melitus,
Hubungannya Dengan Disfungsi
Seksual dan Perbedaannya Dengan
Yang Tidak Mengalami Disfungsi
Seksual [M.Biomed. Thesis]. Program
Studi Ilmu Biomedik. Universitas
Diponegoro.
Rees, D, A and J.C. Alcolado. 2005. Animal
Models of Diabetes Mellitus, Diabetic
Medicine, 22 : 359-370.
Sharma, R.A., A. J. Gescher, W. P. Steward.
2005. Curcumin: The Story So Far.
European Journal of Cancer,
41:19551968.
Szkudelski, T. 2001. The Mechanism Of
Alloxan And Streptozotocin Action In
Cells Of The Rat Pankreas.
Physiology Research, 50: 536-54.