LAPORAN RESMI

PRAKTIKUM DASAR TEKNIK KIMIA I

Materi : Kromatografi

Oleh :

Kelompok : 5 / Kamis Siang

Adelia TR Hutapea NIM : 21030117130158
Jovita Cahyonugroho NIM : 21030117120062
Muhammad Miftahur Rahman NIM : 21030117120055
Zaky Faisal Uqbah NIM : 21030117130147

Laboratorium Dasar Teknik Kimia I

Departemen Teknik Kimia
Fakultas Teknik Universitas Diponegoro
Semarang
2017
 KROMATOGRAFI

LEMBAR PENGESAHAN
LAPORAN RESMI
PRAKTIKUM DASAR TEKNIK KIMIA I

Materi : Kromatografi
Kelompok : 5 / Kamis Siang
Anggota : Adelia TR Hutapea
Jovita Cahyonugroho
Muhammad Miftahur Rahman
Zaky Faisal Uqbah

Semarang, November 2017

Mengesahkan,
Asisten Pembimbing

Naufarrel Kaviandhika
21030114120036

Laboratorium dasar teknik kimia 1

 KROMATOGRAFI

PRAKATA

Puji syukur kami panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah
memberikan rahmat serta karunianya kepada kami sehingga dapat menyelesaikan
Laporan Resmi Praktikum Dasar Teknik Kimia I. Oleh karena berkat dan rahmat-Nya
pula kami dapat menyelesaikan delapan materi praktikum dengan baik dan lancar
tanpa hambatan yang berarti.
Laporan Resmi Praktikum Dasar Teknik Kimia I ini berisi materi
Kromatografi. Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran yang berdasarkan
kecepatan perambatan komponen dalam medium tertentu. Pada kromatografi,
komponen komponen yang akan dipisahkan berada dalam dua fase diam (stationary)
dan fase gerak (mobile). Fase diam adalah fase yang akan menahan komponen Commented [NK1]: Italic.

campuran sedangkan fase gerak adalah fase yang akan melarutkan zat komponen Cek seluruh laporan, yang bahsa asing italic

campuran. Tujuan dari praktikum ini adalah mampu mengisolasi pigmen klorofil serta
mampu melakukan pemisahan campuran menjadi komponen komponennya.
Terselesaikannya laporan resmi ini tidak lepas dari beberapa pihak. Oleh karena
itu, praktikan mengucapkan terima kasih kepada bapak dan ibu laboran yang
mendampingi kami di laboratorium, koordinator asisten PDTK, Cryspalina Dwiocta
Caroline , asisten laporan resmi kromatografi kami, Naufarrel Kaviandhika, dan semua
asisten yang telah membimbing kami selama praktikum. Kepada teman-teman yang
telah membantu memberikan motivasi dan kerjasama yang baik.
Kami berharap semoga laporan ini dapat berguna bagi para pembaca. Kami
memohon maaf apabila ada salah kata ataupun hal-hal yang kurang berkenan di hati
pembaca.
Semarang, November 2017

Penyusun

Laboratorium dasar teknik kimia 1

 KROMATOGRAFI

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ......................................................................................... i

HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................... ii
PRAKATA ......................................................................................................... iii
DAFTAR ISI ..................................................................................................... iv
PRAKATA ......................................................................................................... v
DAFTAR TABEL ............................................................................................. vi
DAFTAR GABAR............................................................................................. vii
RINGKASAN .................................................................................................... viii
SUMMARY ....................................................................................................... xi
BAB I PENDAHULUAN .................................................................................. 1
1.1 Latar Belakang ..................................................................................... 1
1.2 Tujuan Percobaan ................................................................................ 2
1.3 Manfaat Percobaan .............................................................................. 2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ....................................................................... 3
BAB III METODE PERCOBAAN .................................................................. 4
3.1 Alat dan Bahan .................................................................................... 4
3.1.1 Bahan .......................................................................................... 4
3.1.2 Alat .............................................................................................. 5
3.1.3 Gambar dan Fungsi Alat ............................................................. 6
3.2 Prosedur Percobaan ............................................................................. 7
1. Isolasi Pigmen Klorofil Daun ........................................................... 7
2. Analisis Komponen Hasil Isolasi dengan KLT ................................ 8
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .......................................................... 9
4.1 Mekanisme Proses Elusi dan Pemisahan Warna ................................. 9
4.2 Hasil Percobaan ................................................................................... 9
4.3. Sikloheksana Sebagai Fase Gerak dalam KLT.................................. 11
4.4. Pembuatan Plat (Lamging) Silika Gel............................................ 12
BAB V PENUTUP ............................................................................................. 14
5.1 Kesimpulan .......................................................................................... 14

Laboratorium dasar teknik kimia 1

 KROMATOGRAFI

5.2 Saran .................................................................................................... 14

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 15
LAMPIRAN A ................................................................................................. A-1
LAMPIRAN B ................................................................................................. B-1
LAMPIRAN C ................................................................................................ C-1

Laboratorium dasar teknik kimia 1

 KROMATOGRAFI

DAFTAR TABEL

Gambar dan Fungsi Alat............................................................................. 6

Laboratorium dasar teknik kimia 1

 KROMATOGRAFI

DAFTAR GAMBAR

Plat KLT Percobaan I ........................................................................................ 10

Plat KLT Percobaan II........................................................................................ 10
Tabel Index Polaritas dan Kekuatan Elusi Pelarut............................................. 11

Laboratorium dasar teknik kimia 1

 KROMATOGRAFI

RINGKASAN

Kromatografi digunakan sebagai untuk memisahkan substansi campuran

menjadi komponen komponennya. Tipe tipe kromatografi adsorps, kromatografi
partisi cairan, dan pertukaran ion. Tujuan dari percobaan ini yaitu mampu
mengisolasi pigmen klorofil serta mampu melakuka pemisahan campuran menjadi
komponen komponennya.
Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran yang berdasarkan
kecepatan perambatan komponen dalam medium tertentu. Pada kromatografi,
komponen komponen yang akan dipisahkan berada dalam dua fase diam (stationary)
dan fase gerak (mobile). Fase diam adalah fase yang akan menahan komponen
campuran sedangkan fase gerak adalah fase yang akan melarutkan zat komponen
campuran. KrOmatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan pemisahan suatau komponen
organik dalam KLT fase geraknya adalah pelarut rganik dan fase diamnya adalah
silika gel GE254.
Alat yang digunakan pada percobaan ini adalah pipet tetes, corong, kurs
porselin, plat KLT, dan lain-lain. Serta bahan yang dibutuhkan adalah etanol, natrium
sulfat andhidrat, n heksana, etil asetat dan aquadest. Hal pertama yang dilakukan
dalam percobaan ini yaitu mengsolasi pigmen klorofil daun denga menggunakan
pelarut etanol 96%. Seteah itu dilanjutkan dengan menganalisis komponen hasil
isolasi KLT.
Dari percobaan ini digunakan dua plat KLT. Pada plat KLT I terdapat empat
bercak warna yaitu bercak warna hijau, kuning, hijau biru, jingga. Sedangkan pada
plat KLT II diperoleh warna hijau-biru, hijau, dan warna kuning. Adanya perbedaan
jarak antara warna dikarenakan setiap komponen memiliki kepolaran yang berbeda.
Dapat disimpulkan komponen yang dapat terisolasi pada plat KLT I adalah
klorofil b (hijau), klorifil a (hijau-biru), xantofil (kuning), dan karoten (jingga).
Serta KLT II adalah klorifil a (hijau-biru), klorofil-b ( hijau), dan xantofil (kuning).
Disarankan untuk praktikan selanjutnya agar menggunakan daun yang masih segar,
menumbuk daun sampai halus, melakukan ekstraksi dengan waktu yang lebih lama,
menunggu ekstrak yang ditotolkan pada plat KLT, dan memilikih pelarut sebagai fase
gerak yang sesuai dengan zat yang akan dielusi.

Laboratorium dasar teknik kimia 1

 KROMATOGRAFI

SUMMARY

Chromatography is used to separate the substance as a component of the

mixture of its components. the types of chromatography liquid partition
chromatography, adsorps, and ion exchange. The purpose of this experiment
that is able to isolate chlorophyll pigments as well as being able to do the
separation of a mixture into its component.
Chromatography is a separation technique based on the propagation velocity
of mixture components in a particular medium. In chromatography,
components components will be separated in two phases,stationary
phase(stationary) and motion phase (mobile). The silent phase is the phase
that will hold the components of the mixture while the motion phase is the phase
that will dissolve a substance component of the mixture.Thin layer
chromatography (TLC) is the separation of the organic components.In the
TLC,the motion phase is the solvent organic and phase silica gel GE254 is
stationary phase.
Tools that we used in this experiment is the dropper drops, funnel, porcelain,
the TLC plat, and others. As well as the materials needed are ethanol, sodium
sulfate andhidrat, n hexane, ethyl acetate, and aquadest. The first thing that
is done in the experiment is to isolate the pigments chlorophyll of leaves by
using solvent ethanol 96%. After that proceed by analyzing the results of
component isolation and TLC.
From these experiments used two TLC. On the TLC I there are four patches of
color that is the color patches of green, yellow, green, blue, orange. While in
the TLC II retrieved color is green-blue, green, and yellow color. The existence
of a difference in the distance between the color because each component has
a moderately different.
It can be concluded that components can be isolated on the TLC I is chlorophyll
b (green), klorifil a (green-blue), xantofil (yellow), and carotene (an
orange). As well as TLC II is a klorifil (green-blue), chlorophyll-b (green), and
xantofil (yellow). It is recommended for the next praktikan to use the fresh
leave, mashing until smooth leaves, doing extraction with longer periods of
time, waiting for a added extract on TLC, and selecting a solvent as the
appropriate motion phases with substances that would be eluted.

Laboratorium dasar teknik kimia 1

 KROMATOGRAFI

BAB I
PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Kromatografi digunakan sebagai untuk memisahkan substansi campuran

menjadi komponen-komponennya, misalnya senyawa flavonoid yang terdapat pada
tahu, tempe, bubuk isoflavon memiliki banyak manfaat. Beberapa kelebihan senyawa
isoflavon yang potensioal bagi kesehatan manusia, diantaranya adalah sebagai
antioksidan, antitumor/antikanker, antikolestrol, antivirus, antialergi, dan dapat
mencegah osteoporosis. Dan semua kromatografi bekerja berdasarkan metode
kromatografi. Kromatografi telah didefinisikan terutama sebagai suatu proses
pemisahan yang digunakan untuk pemisahan campuran yang pada hakekatnya
molekular. Kromatografi bergantung pada pembagian-ulang molekul-molekul
campuran antara dua fase atau lebih. Tipe tipe kromatografi mencakup kromatografi
adsorbs, kromatografi partisi cairan, dan pertukaran ion. Sistem utama yang digunakan
dalam kromatografi partisi adalah : partisi gas, partisi cairan yang menggunakan alas
tak bergerak (misalnya kromatografi kolom), kromatografi kertas dan lapis tipis.
Analisis dengan menggunakan KLT dapat digunakan untuk mengidentifikasi simplisa
yang kelompok kandungan kimianya sudah diketahui. Kelompok kandungan kimia
seperti :alkaloid, antraglikosida, arbutin, glikosida jantung, zat pahit, flavonoid,
saponin, minyak atsiri, kumarin, dan asam fenol karboksilat.
Adapun perkembangan pesat dari beberapa jenis sistem kromatografi
diantaranya adalah; Kromatografi kertas, kromatografi lapisan tipis (Thin Layer
Chromatography), kromatografi gas (Gas Chromatography), dan kromatografi cair
kinerja tinggi (High Performance liquid Chromatography).
Pada kromatografi lapisan tipis, terdapat lapisan tipis (tebal 0.1-2 mm) yang
terdiri atas bahan padat yang dilapiskan kepada permukaan penyangga datar (plat),
yang biasanya terbuat dari kaca, tetapi dapat pula terbuat dari polimer atau logam.
Lapisan yang melekat pada permukaan dengan bantuan bahan pengikat, biasanya
kalsium sulfat dan kromatografi lapisan tipis dapat digunakan untuk keperluan yang
luas dalam pemisahan-pemisahan.

Laboratorium dasar teknik kimia 1

 KROMATOGRAFI

1.2. Tujuan Percobaan

a. Mampu mengisolasi pigmen klorofil
b. Mampu melakukan pemisahan campuran menjadi komponennya dengan
kromatografi lapis tipis
1.3. Manfaat Percobaan
Mahasiswa dapat mengetahui tekik pembuatan plat KLT dan dapat
memisahkan campuran menjadi komponennya dengan kromatografi lapis tipis

Laboratorium dasar teknik kimia 1

 KROMATOGRAFI

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran yang berdasarkan kecepatan

perambatan komponen dalam medium tertentu. Uraian mengenai kromatografi
pertama kali dijelaskan oleh Michael Tswett, seorang ahli biotani Rusia yang bekerja
di Universitas Warsawa pada saat itu, Michael Tsweet melakukan pemisahan klorofil
dari pigmen-pigmen lain dari ekstrak tanaman menggunakan kromatografi kolom yang
berisi dengan kalsium karbonat. Pada kromatografi, komponen-komponen yang akan
dipisahkan berada diantara dua fase yaitu fase diam (stationary) dan fase bergerak
(mobile). Fase diam adalah fase yang akan menahan komponen campuran sedangkan
fase gerak adalah fase yang akan melarutkan zat komponen campuran. Komponen
yang mudah tertahan pada fase diam akan tertinggal atau tidak bergerak sedangkan
komponen yang mudah larut dalam fase gerak akan bergerak lebih cepat (Sudamadji,
2007).
Kromatografi lapis tipis (KLT) dikembangkan oleh Izmailoff dan Schariber
pada tahun 1938. KLT merupakan bentuk kromatografi planar, selain kromatografi
kertas dan elektroforesis. Berbeda dengan kromatografi kolom yang mana fase
diamnya diisikan atau dikemas di dalamnya, pada kromatografi lapis tipis, fase
diamnya berupa lapisan yang seragam (uniform) pada permukaan bidang datar yang
didukung oleh lempeng kaca, pelat alumunium atau pelat plastik. Meskipun demikian,
kromatografi planar ini dapat dikatakan sebagai bentuk terbuka dari kromatografil
kolom (Rohman, 2007).
Kromatografi digunakan sebagai untuk memisahkan substansi campuran
menjadi komponen-komponennya, misalnya senyawa Flavonoida dan isoflavonoida
yang terdapat pada tahu tempe, bubuk kedelai, dan tauco serta Scoparia dulcis,
Lindernia anagalis, dan Torenia violacea. Yang pada senyawa isoflavon memiliki
banyak manfaat. Beberapa kelebihan senyawa isoflavon yang potensial bagi kesehatan
manusia, di antaranya adalah sebagai antioksidan, antitumor/ antikanker,
antikolesterol, antivirus, antialergi, dan dapat mencegah osteoporosis. Fase gerak yang
dikenal sebagai pelarut pengembang akan bergerak sepanjang fase diam karena
pengaruh kapiler pada pengembangan secara menaik (ascending) atau karena
pengaruh pada pengembangan secara menurun (descending). Kromatografi lapis tipis

Laboratorium dasar teknik kimia 1

 KROMATOGRAFI

dalam pelaksanaannya lebih mudah dan lebih murah dibandingkan dengan

kromatografi kolom. Demikian juga peralatan yang digunakan. Dalam kromatografi
lapis tipis, peralatan yang digunakan lebih sederhana dan dapat dikatakan hampir
semua laboratorium dapat melaksanakan setiap saat secara cepat (Rohman,2007).
Kromatografi lapis tipis (KLT) merupakan salah satu jenis kromatografi yang
paling sering dilakukan untuk analisis untuk analisis dan pemisahan suatu komponen
organic. Adanya beberapa keuntungan, seperti peralatan sederhana, murah, waktu
analisi cepat dan daya pisah yang sangat baik menyebabkan metode ini tetap popular.
Kromatografi secara garis besarnya tersusun atas fase gerak dan fase diam. Dalam
KLT fase diamnya adalah silica gel GF254 sedangkan fase geranya ada pelarut
organik.
Klorofil adalah zat yang memberi warna hijau daun pada tanaman. Klorofil
berguna bagi tanaman untuk proses fotosintesis yang memungkinkan cahaya dapat
diserap tanaman. Klorofil kaya akan zat nutrisi seperti mineral, vitamin, protein, unsur-
unsur hara dan mikronutrien. Klorofil sendiri merupakan molekul yang didapat dari
ekstrak tumbuh tumbuhan dan dapat berfungsi sebagai sumber energy.

BAB III

Laboratorium dasar teknik kimia 1

 KROMATOGRAFI

METODE PERCOBAAN

3.1 Bahan dan Alat yang Digunakan

3.1.1 Bahan yang digunakan

1. Silika gel 4. N - Heksana

2. Etanol 5. Etil asetat

3. Natrium Sulfat anhidrat

3.1.2 Alat yang digunakan

1. Slide mikroskop 5. Pipet tetes

2. Botol mulut lebar 6. Gelas beaker

3. Corong pisah 7. Erlenmeyer

4. Pipa kapiler 8. Kurs porselin

Laboratorium dasar teknik kimia 1

 kromatografi

3.1.3 Gambar dan Fungsi Alat

Tabel 3.1 Gambar dan Fungsi Alat

No Nama Alat Gambar Alat Fungsi Alat

1 Slide Meletakkan
Mikroskop preparat

2 Botol Tempat
mulur lebar meletakkan
larutan

3 Corong Memisahkan
pisah ekstrak

4 Pipa Untuk
kapiler mengalirkan
gas ke
tempat
tertentu

5 Pipet Tetes Mengambil

larutan
dengan
volume kecil

Laboratorium Dasar Teknik Kimia

 kromatografi

6 Corong Memisahkan
Gelas larutan satu
tempat ke
tempat lain

7 Gelas Wadah
beaker untuk
larutan

8 Erlenmeyer Wadah
untuk
larutan

9 Kurs Tempat
porselin untuk
menggerus

Laboratorium Dasar Teknik Kimia

 kromatografi

3.2. Prosedur Percobaan

1. Isolasi Pigmen Klorofil Daun

Gerus daun segar menggunakan kurs porselin, kemudian masukkan
pelarut etanol 96% lalu tunggu 1 jam. Pipet larutan tersebut dan saring. Ekstrak
filtrate dengan pelarut kloroform dalam corong pisah. Kocok sampai terbentuk
emulsi. Pisahkan dua fase yang diperoleh, ambil fase kloroform (lapisan bawah).
Tambahkan aquades pada lapisan kloroform (jika tidak terbentuk dua lapisan
tambahkan dengan natrium sulfat anhidrat).
2. Analisis Komponen Hasil Isolasi dengan KLT
Totolkan larutan zat hijau daun hasil isolasi diatas ke plat KLT yang
telah disediakan. Penotolan dilakukan pada jarak 1 cm dari tepi bawah plat KLT.
Biarkan hingga kering, kemudian dielusi dengan campuran pelarut n eksana :
etil asetat (7 : 3). Setelah mencapai 0,5 cm dari batas atas, ambil platnya,
keringkan dan amati bercak berak yang Nampak di bawah sinar ultraviolet dan
sinar tampak. Pada umumnya akan terlihat bercak ercak berwarna, seperti
jingga ( karotenid ), hijau biru (klorofil a), hijau ( klorofil b), dan kuning
(xantofil).

Laboratorium Dasar Teknik Kimia

 kromatografi

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1.Mekanisme Proses Elusi dan Pemisahan Warna

Hampir semua kromatografi lapis tipis dikembangkan dengan cara menaik

dalam bejana (chamber) pengembang. Di dalam bejana, dimasukkan fase gerak
hingga kedalaman 0,5 cm. Sampel yang biasanya berupa campuran senyawa
organik diteteskan didekat salah satu sisi lempengan dicelupkan ke dalam
bejana. Pelarut bergerak naik di sepanjang lapisan lapisan tipis zat padat pada
lempengan, bersamaan dengan pergerakan pelarut, zat terlarut sampel tipis zat
pada pada lempengan, bersamaan dengan pergerakan pelarut, zat terlarut sampel
dibawa dengan laju tergantung pada kelarutan zat terlarut di diam fase gerak
(underwood, 1999). Komponen yang membentuk ikatan hidrogen lebih kuat
dengan fase gerak akan terelusi lebih cepat atau merambat lebih cepat. Proses
elusi dihentikan saar fase gerak mencapai jarak tertentu, biasanya 1 cm sebelum
ujung akhir lempengan/ plat. (Anonim).
Dari proses elusi, didapat bercak-bercak warna yang berbeda. Pemisahan
warna ini terjadi untuk mengidentifikasi komponen pigmen dalam senyawa
organic sampel. Munculnya pemisahan warna ini merupakan hasil dari proses
adsorpsi molekul-molekul lain dalam senyawa. Gaya yang berperan dalam
adsorpsi tergantung ada sifat dasar kimia permukaan dan struktur spesies
teradsorpsi. Contohnya dalam praktikum ini, senyawa (pigmen) yang lebih
mudah larut dalam n-heksana : etil asetat (fase gerak) yang bersifat semi polar
akan terbawa cepat. Sebaliknya molekul lain yang bersifat polar dan kurang
larut, akan tertinggal. Dengan demikian, campuran zat warna terpisah
(Underwood, 1999).

Laboratorium Dasar Teknik Kimia

 kromatografi

4.2. Hasil Percobaan

Gambar 4.1 Plat KLT Percobaan I Gambar 4.2. Plat KLT Percobaan II

Percobaan Bercak yang Timbul Waktu Jarak Bercak dari titik awal
I Hijau 3 menit 2 cm
Kuning 3 menit 1,8 cm
Hijau Biru 3 menit 2,5 cm
Jingga 3 menit 3 cm
II Hijau Biru 3 menit 5 detik 2,5 cm
Hijau 3 menit 5 detik 2 cm Commented [NK2]:

Kuning 3 menit 5 detik 1,8 cm Commented [NK4]: bi

Tabel 4.1. Hasil Percobaan

Berdasarkan hasil percobaan diatas, dapat diketahui bahwa pada percobaan
KLT I dan II mengandung banyak spot diantaranya adalah klorofil a, klorofil b,
xantofil, dan karoten (kecuali pada KLT II). Hal tersebut didasarkan pada warna
bercak yang timbul pada plat luas tipis. Maka dapat diketahui bahwa pigmen
pigmen yang terdapat pada sampel daun kersen yang sebelumnya telah diekstraksi
oleh etanol 90%. Berinteraksi kuat dengan eluen yaitu n-heksana : etil asetat dengan
perbandingan 7 : 3 sebagai fase gerak.
Dalam percobaan ini n-heksana dan etil asetat berfungsi sebagai fase gerak
yang berperan dalam proses elusi untuk melewati silica gel (fase alam) dan membawa
senyawa/ pigmen yang mudah larut, yang ditotolkan plat lapis tipis. Proses elusi
ditandai dengan senyawa dari sampel bergerak naik dengan adanya gaya kapiler,

Laboratorium Dasar Teknik Kimia

 kromatografi

dimana senyawa polar akan melekat lebih kuat pada plat lapis tipis dari pada senyawa
non polar yaitu pigmen pigmen dalam daun kersen. Sehingga pada saat sampel
senyawa organic dimasukkan dalam bejana, molekul molekul lain yang bersifat
polar semakin ketahan silica gel pada plat lapis tipis karena eluen yang bersifat semi
polar. Senyawa yang non polar (pigmen)pun kurang melekat pada plat lapis tipis
sehingga memiliki laju air yang besar ke atas plat (Mangidi, 2015).
Senyawa hanya dapat bergerak ketas pada plat lapis tipis selama waktu terlarut
dalam pelarut. DAlam percobaan KLT II membutuhkan waktu tersebut sebesar 3
menit 5 detik ketika senyawa bergerak lalu terjerap oleh silica, menandakan bahwa
semakin kuat senyawa dijerap, semakin kurang jarak yang ditempuh ke atas plat.
Dalam percobaan KLT I didapatkan bercak hijau yang berjarak 2cm dari titik awal
penotolan, bercak kuning yang berjarak 1,8 cm dari titik awal, hijau biru yang
berjarak 2,5 cm da jingga yang ditandai dengan warna jingga bersifat sangat non-
polar. Dalam percobaan KLT II didapatkan bercak hijau biru yang berjarak 2,5 cm,
hijau yang berjarak 2 cm dan kuning yang berjarak 1,8 cm dari titik awal penotolan.
Sebenarnya bercak jingga muncul namun karena terlalu lama dibiarkan dalam beaker
glass, bercak menjadi hilnag. Hal ini dikarenakan penjerapan bersifat tidak peranen.
Sehingga terdapat pergerakan yang tetap dari molekul antara yang terjerap pada
permukaan siliga gel dan yang kembali pada larutan dalam pelarut (Haqiqi, 2008).
Percobaan yang dilakukan terdapat perbedaan dengan jurnal hasil percobaan
oleh Maryari Gafur, Ishak Isa, Nurhayati Bialngi dalam mengidentifikasi senyawa
dari daun jomblang. Pada percobaan yang terdapat dalam jurnal, maserasi dilakukan
selama 4 x 24 jam dengan pelarut methanol. Pemilihan teknik ekstraksi tersebut
dipilih berdasarkan beberapa factor seperti daya penyesuaian dengan bahan yang
diekstraksi dan kepentingan dalam memperoleh ekstrak yang sempurna (Ansel,
1989). Proses maserasi dilakukan selama 4 x 24 jam dengan maksud untuk
mendapatkan ekstrak dari daun yang mampu terekstraksi sebesar 50% dan untuk
mengedapkan zat-zat yang tidak diperlukan tetapi larut dalam cairan penyari (Sarwi,
2010). Jika ekstraksi dilakukan pada waktu lama, maka semakin banyak cairan
penyari/ pelarut yang menembus dinding sel daun dan masuk dalam rongga sel yang
mengandung zat aktif. Zat aktif akan larut karena adanya perbedaan konsentrasi

Laboratorium Dasar Teknik Kimia

 kromatografi

antara larutan zat aktif di dalam dan luar sel, maka larutan pekat dari zat aktif akan
keluar.
Hasil percobaan jurnal berbeda dengan percobaan yang kami lakukan selain
karena zat aktif lebih terekstraksi banyak pada waktu ekstraksi lebih lama, yaitu pada
percobaan jurnal dilakukan beberapa uji fitokimia untuk menganalisa kandungan
basa dan lemak pada daun jomblang. Contohnya uji flavonoid dimana ekstrak yang
telah dimaserasi ditambahkan NaOH, H2SO4 pekat, dan serbuk Mg-HCl pekat.
Setelah itu, ekstrak ditotolka pada kromatografi kolamdap dan menghasilkan bercak.
Untuk lebih mengidentifikasi, isolasi diidentifikasi dengan spektrofotometer UV-
Vcs dan IR. Berdasarkan analisis spektron infremerah, nantinya aka nada beberapa
gugus fungsi yang mengindikasi senyawa yang ingin diidentifikasi.
4.3. Hikloheksana Sebagai Fase Gerak KLT
Fase gerak dalam KLT tidak hanya n-heksana, etil asetat, tetapi ada pelarut
lainnya yang dapat dijadikan sebagai fase gerak KLT. Karena fase gerak
mempengaruhi keberhasilan pemisahan komponen dalam KLT, maka ada petunjuk
dalam memilih fase gerak, diantaranya yaitu fase gerak harus mempunyai kemurnian
yang tinggi karena KLT merupakan teknik yang sensitive, daya elusi fase gerak harus
diarus sedemikian rupa sehingga harga Rf terletak antara 0,2 0,8 untuk
memaksimalkan pemisahan, dan untuk menentukan kecepatan migrasi salut yang
berarti juga menentukan nilai pH. Penambahan pelarut yang bersifat sedkit polar
seperti dietil eter ke dalam pelarut non polar, seperti metal benzene akan meningkatkan
harga Rf secara signifikan (Gandjar & Rohman, 2007).
Sebagai contoh fase gerak selain n-heksana adalah sikloheksana. Sikloheksana
merupakan pelarut organik bersifat non-polar. Sikloheksana dapat dicampur dengan
etil asetat yang merupakan pelarut organik yang bersifat polar dengan perbandingan
sikloheksana : etil asetat 4 : 1. Perbandingan yang digunakan 4 :1 karena dengan
perbandingan ini pernah didapat hasil pemisahan. Komposisi ekstrak daun purwoceng
yang optimal yaitu 12 komponen dengan fase diamnya silica gel.
Fase gerak sikloheksana digunakan ketika senyawa yang akan dielusi bersifat
non polar karena sikloheksana bersifat non polar. Sehingga senyawa non polar akan
lebih cepat dielusi ketika fase geraknya juga non polar (Anonim, 2007).

Laboratorium Dasar Teknik Kimia

 kromatografi

Sedangkan menurut Gibbons (2006), pelarut n-heksana dengan ditambahkan

sedikit etil aseton dapat digunakan secara universal. Tidak seperti pelarut lain yang
bekerja optimal pada larutan tertentu yang akan dielusi. Selain itu, berdasarkan gambar
4.3. , kepolaran n-heksana adalah 0,1 yang artinya n-heksana merupakan pelarut
organik non polar sama seperti sikloheksana yang non polar akan tetapi besar kekuatan
elusi dan index polaritasnya berbeda 0,1 dapat menggunakan pelarut n-heksana. Etil
asetat juga laju perambatan komponen dapat bergerak lebih cepat dan optimal.

Gambar 4.3. Tabel Index Polaritas dan Kekuatan Elusi Pelarut

Menurut Gibbons (2006), konstanta dielektrik sikloheksana adalah 2,0. Nilai

konstanta dielektrik yang tinggi menunjukkan pelarut polar dengan kekuatan elusi
tinggi, sedangkan konstanta dielektrik yang rendah menunjukkan pelarut non polar

Laboratorium Dasar Teknik Kimia

 kromatografi

dengan kemampuan elusi yang rendah. Sehingga sikloheksana ketika digunakan dalam
kromatografi adsorp tidak menghasilkan pemisahan yang optimum.

Laboratorium Dasar Teknik Kimia

 kromatografi

BAB V
PENUTUP

5.1 Kesimpulan
1. Pada KLT I zat yang terisolasi adalah klorofil-a (hijau-biru), klorofil-b
(hijau), xantofil (kuning), dan karoten (jingga).
2. Pada KLT II zat yang terisolasi adalah klorofil-a (hijau-biru), klorofil-b
(hijau), dan xantofil (kuning).

5.2 Saran
1. Disarankan untuk menggunakan daun yang masih segar agar tidak banyak
klorofil yang mati.
2. Disarankan untuk menumbuk daun dengan lebih halus agara klorofil
mudah larut dalam etanol.
3. Disarankan untuk melakukan ekstraksi dengan waktu lebih lama dengan
mengganti etanol beberapa kali agar klorofil terekstrak seluruhnya.
4. Disarankan ketika setelah menotolkan ekstrak ke KLT, menunggu sampai
kering dahulu baru dimasukkan dalam pelarut agar hasil leih optimal.
5. Disarankan untuk memilih pelarut dengan kebolaran yang sesuai dengan
zat yang akan dielusi agar hasil lebih optimal dan proses elusi dapat
berlangsung dengan cepat.

Laboratorium Dasar Teknik Kimia

 kromatografi

DAFTAR PUSTAKA

Anonim. (2007). Kromatografi Lapis Tipis

Ansel, H. C. (1989). Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi Edisi IV. Jakarta : Universitas
Indonesia Press.
Gandjar, I. G. & Rahman, A. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Penerbit Pustaka Pelajar
: Yogyakarta.
Gibbons, S. (2006). An Introduction to Planar Chroma to Graphy. Human Press. Ner
Jersey.
Haqiqi, Sohibul Himam. (2008). Kromatografi Lapis Tipis.
Mangidi, Alfahru. (2015). Kromatografi Kertas dan Lapis Tipis. Penerbit
Universitas Maluoleo : Kendari.
Maryari, dkk. (2013). Isolasi dan Identifikasi Senyawa Flavonoid dari Daun Jomblang
(Syzgrum Cumini).
Sarwi. (2010). Pengembangan Keterampilan Kerja Ilmiah Calon Guru Fisika Melalui
Eksperimen Gelombang Open Inquiry. Jurnal Pendidikan Fisika Indonesia.
Sukmasari, May & Haryani, Eni. (2010). Teknik Pemisahan Komponen Ekstrak
Purwoceng Secara Kromatografi Lapis Tipis. Penerbit Universitas Negeri
Gorontalo : Gorontalo.
Sulistyaningrum, dkk. (2011). Laporan Praktikum Galenika Maserasi Curcuma
aerugenusa. Penerbit Universitas Sebelas Maret : Solo.
Underwood, A. I & Day, R. A. (1983). Analisa Kimia Kuantitatif 5th edition
diterjemahkan oleh R. Soendoro. Penerbit Erlangga : Jakarta.

Laboratorium Dasar Teknik Kimia

 LAMPIRAN
A

[Type text] [Type text]

 LAPORAN SEMENTARA
PRAKTIKUM DASAR TEKNIK KIMIA I

Materi:

KROMATOGRAFI

NAMA : ADELIA TR HUTAPEA

JOVITA CAHYO NUGROHO

MUHAMMAD MIFTAHUR RAHMAN

ZAKY FAISAL UQBAH

GROUP : V / KAMISSIANG

A-1
 LABORATORIUM DASAR
TEKNIKKIMIA TEKNIK KIMIA
FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG

I. TUJUAN PERCOBAAN
a. Maampu mengisolasi pigmen klorofil
b. Mampu melakukan pemisahan campuran menjadi komponennya dengan
kromatografi lapis tipis

II. PERCOBAAN

2.1 Bahan yang diperlukan

1. Silika gel 4. n-heksana

5. Etil asetat
2. Etanol

3. Natrium sulfat anhidrat

2.2 Alat yang Dipakai

1. Slide mikroskop 6. Corong gelas

2. Botol mulut lebar 7. Gelas bearker

3. Corong pisah 8. Erlenmeyer

4. Pipa kapiler 9. Kurs porselin

5. Pipa tetes

2.2 Cara Kerja

1. Isolasi Pigmen Klorofil Daun

Gerus daun segarmenggunakan kurs porselin, kemudian masukkan pelarut etanol

A-2
 96% lalu tunggu 1 jam. Pipet larutan tersebut dan saring. Ekstrak filtrate dengan
pelarut kloroform dalam corong pisah. Kocok sampai terbentuk emulsi.Pisahkan dua
fase yang diperoleh, ambil fase kloroform (lapisan bawah). Tambahkan aquades pada
lapisan kloroform (jika tidak terbentuk dua lapisan tambahkan dengan natrium sulfat
anhidrat).

2. Analisis Komponen Hasil

Totolkan larutan zat hijau daun hasil isolasi diatas ke plat KLT yang telah disediakan.
Penotolan dilakukan pada jarak 1 cm dari tepi bawah plat KLT. Biarkan hingga
kering, kemudian dielusi dengan campuran pelarut n-heksana : etil asetat (7 : 3).
Setelah mencapai 0,5 cm dari batas atas, ambil platnya, keringkan dan amati bercak-
bercak yang Nampak di bawah sinar ultraviolet dan sinar tampak. Pada umumnya
akan terlihat bercak-bercak berwarna, seperti jingga (karatenoid), hijau biru (klorofil-
a), hijau (klorofil-b), dan kuning (xantofil).
2.4 Hasil Percobaan

Percobaan Bercak yang Timbul Waktu Jarak Bercak dari titik awal

I Hijau 3 menit 2 cm

Kuning 3 menit 1,8 cm

Hijau Biru 3 menit 2,5 cm

Jingga 3 menit 3 cm

II Hijau Biru 3 menit 5 detik 2,5 cm

Hijau 3 menit 5 detik 2 cm

Kuning 3 menit 5 detik 1,8 cm

Filtrat yang didapat : 10 ml

Kloroform yang ditambahkan : 10 ml

A-3
LAMPIRAN

B-16
B-13
 REFERENSI KROMATOGRAFI

2. Fase Gerak

Fase gerak pada KLT dapat dipilih dari pustaka, tetapi lebih sering dengan mencoba-
coba karena waktu yang diperlukan hanya sebentar. Sistem yang paling sederhana ialah
campuran 2 pelarut organik karena daya elusi campuran kedua pelarut ini dapat mudah
diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi secara optimal. Berikut
adalah beberapa petunjuk dalam memilih dan mengoptimasi fase gerak :

1. Fase gerak harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena KLT
merupakan teknik yang sensitif.

2. Daya elusi fase gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf terletak
antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan.

3. Untuk pemisahan dengan menggunakan fase diam polar seperti silika gel,
polaritas fase gerak akan menentukan kecepatan migrasi solut yang berarti juga
menentukan nilai Rf. Penambahan pelarut yang bersifat sedikit polar seperti dietil eter
ke dalam pelarut non polar seperti metil benzene akan meningkatkan harga Rf secara
signifikan (Gandjar & Rohman, 2007).

B-13
LAPORAN PRAKTIKUM GALENIKA

MASERASI Curcuma aerugenusa

oleh

kelompok 6

1. MeynaSulistyaningrum M3511037

2. NinaAnindyawati M3511040

3. Okky Mareta M3511042

4. PebriAndriyanto M3511043

5. PratiwiHeningP M3511044

6. Previ RahmaA M3511045

D3 FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS SEBELAS MARET 2011

B-13
 MASERASI

Curcuma aerugenusa

I. TUJUAN

1. Mahasiswa diharapkan mampu membuat serbuk dengan derajat

kehalusantertentu.

2. Mahasiswa diharapkan memahami dan mampu melakukan

penyarian bahan

3. Mahasiswa diharapkan mampu melakukan kontrol kualitas terhadap

ekstrak.

II. DASARTEORI

Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif
dari simplisia nabati atau hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua
atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan
sedemikian hingga memenuhibaku yang telah ditetapkan (Anonim,1995).
Metode ekstraksi dipilih berdasarkan beberapa faktor seperti sifat dari bahan
mentah obat, daya penyesuaian dengan tiap macam metode ekstraksi dan kepentingan
dalam memperoleh ekstrak yang sempurna (Ansel, 1989).
Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan pelarut
dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan
(kamar). Secara teknologi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian
konsentrasi pada keseimbangan.Maserasi digunakan untuk penyarian simplisia yang
mengandung zat aktif yang mudah larut dalam cairan penyari, tidak mengandung zat
yang mudah mengembang dalam cairan penyari, tidak mengandung benzoin, sitrak,
dan lain-lain.Maserasi dilakukan dengan merendam

B-13
serbuksimplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari yang digunakan dapat berupa air, etanol,
air-etanol, atau pelarut lain. (Sidik dan Mudahar, 2000).
Cairan penyari akanmenembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang
mengandung zat aktif, zat aktif akan larut dan karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan
zat aktif didalam sel dan diluar sel, maka larutan terpekat akan terdesak keluar. Peristiwa ini
berulang sehingga terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan diluar sel dan didalam sel.
Pada umumnya maserasi dilakukan dengan cara 10 bagian simplisia dengan derajat
kehalusan yang cocok, dimasukkan kedalam bejana kemudian dituangi dengan 75 bagian cairan
penyari, ditutup dan dibiarkan selama 5 hari terlindung daricahaya, sambil berulang-ulang
diaduk. Setelah 5 hari diserkai, ampas diperas.Pada ampas ditambahkan cairan penyari
secukupnya, diaduk dan diserkai sehingga diperoleh seluruh sari sebanyak 100 bagian.Bejana
ditutup, dibiarkan ditempat sejuk, terlindung dari cahaya, selama 2 hari kemudian
endapandipisahkan.
Pengadukan pada proses maserasi dapat menjamin keseimbangan konsentrasi bahan yang
diekstraksi lebih cepat didalam cairan penyari. Hasil penyarian dengan cara maserasi perlu
dibiarkan selama waktu tertentu. Hal ini dilakukan untuk mengendapkan zat-zat yang tidak
diperlukan tetapi ikut terlarutdalam cairan penyari, seperti: malam dan lain-lain.
(Sarwi. 2010) Modifikasi maserasi
antara lain:
1. Remaserasi.

Cairan penyari dibagi menjadi dua.Seluruh serbuk dimaserasi dengan cairan pertama.
Kemudian filtrat yang didapat dituang dan diperas.Kemudian dimaserasi lagi dengan cairan
penyarikedua.
2. Digesti.
Digesti adalah cara maserasi dengan menggunakan pemanasan lemah, yaitu pada suhu 400-
500C. Cara maserasi ini hanya dapat dilakukan untuk simplisia yang zat aktifnya tahan terhadap
pemanasan.Dengan pemanasan diperoleh keuntungan antara lain:

B-13
 Chapter6

An Introduction to Planar Chromatography

and Its Application to Natural Products Isolation

Simon Gibbons

Abstract

Thin-layerchromatography(TLC)isaneasy,inexpensive,rapid,andthemostwidelyusedmethodforthe
analysisandisolationofsmallorganicnaturalandsyntheticproducts.Italsohasuseinthebiologicalevalu-
ationoforganiccompounds,particularlyintheareasofantimicrobialandantioxidantmetabolitesandfor the
evaluation of acetylcholinesterase inhibitors which have utility in the treatment of Alzheimers disease.
Theeaseandinexpensivenessofuseofthistechnique,coupledwiththeabilitytorapidlydevelopsepara-
tionandbioassayprotocolswillensurethatTLCwillbeusedforsomeconsiderabletimealongsidecon-
ventionalinstrumentalmethods.ThischapterdealswiththebasicprinciplesofTLCanddescribesmethods
fortheanalysisandisolationofnaturalproducts.Examplesofmethodsforisolationofseveralclassesof natural
product are detailed and protocols for TLC bioassays aregiven.

Key words: Thin-layer chromatography, TLC, HPTLC, Bioassays, Natural product isolation

1. Introduction

Planar chromatography utilizes the separation of mixtures of

organiccompoundsonthin-layersofadsorbentswhichareinmost
casescoatedonglass,plastic,oraluminumsheets.Themostwidely used form of planar
chromatography is thin-layerchromatography
(TLC)whichistheeasiestandcheapesttechniquefortheisolation
ofnaturalproducts.TLCisoneoftheoldestformsofchromatog-
B-13
 raphy,thesimplestexamplebeingtheschoolexperimentofspot-
tingaplantextractnearthebottomofthinstripsofblottingpaper
anddevelopinginajarwithwateroralcohol.Asthewatermoves
uptheblottingpaper,thedarkextractisseparatedintoitscompo-
nentcolorsoflightanddarkgreens.Thisistheessenceofsepara- tionbyTLCasthethin-
layerinthiscaseistheblottingpaperon which the separationoccurs.

Table 1

Compounds denoted by an asterisk were recorded at 25C (2)

Solvent Dielectricconstant(20C) Solvent Dielectricconstant(20C)

Pentane 1.8 Ethylacetate* 6.0

Hexane 1.9 Aceticacid 6.2

Cyclohexane 2.0 Dichloromethane9.1

Benzene* 2.3 Pyridine 12.3

Toluene 2.4 Acetone* 20.7

Diethylether 4.3 Methanol 32.6

Dimethylsulfoxide 4.7 Acetonitrile 37.5

Chloroform 4.8 Water 78.5

stationaryphase,willmovecomparativelyquicklyuptheplate,and
willhaverelativelylargerRfvalues.Asaconsequenceofdevelop- ment, compounds of a mixture will
separate according to their relative polarities. Polarity is related to the type and number of functional
groups present on a molecule capable of hydrogen- bondin.
Artemisininisarelativelynonpolarcompoundwhencompared with psilocybin (Fig. 2), but it should be noted
that this relative polarity willvary according to the type of stationary and mobilephaseuse

B-13
Table 3
Simple systems for TLC
Solventsystem
Hexane:ethyl acetate
(EtOAc)
Petrol:diethyl ether (Et2O)
Petrol:chloroform
(CHCl3)
Toluene:EtOAc:aceticacid(TEA)
80:18:2or
CHCl3:acetone
Benzene:acetone
Butanol:acetic acid:water
Sorbent Notes
Silica gel Universal systemcan substitute hexane
for light petroleum spirit or pentane
Silica gel A universal system for relatively nonpolar
metabo-
lites.Excellentforterpenesandfattyacid
s.Care
shouldbetakenwithEt2Oasexplosivem
ixtures are formed inair
Silica gel Considerably useful for the separation of
cinnamic acid derivatives, in
particular the coumarins
Silicagel Vary the composition, i.e.,
60:38:2excellent for acidic
metabolites
Silica gel A general system for medium polarity
products
Silica gel Usefulfortheseparationofaromaticpro
ducts.
Careshouldbetakenasbenzeneisahig
hly
carcinogenicsolvent.Substitutetolue
nefor benzene
Silica gel A polar system for flavonoids and
B-13
 glycosides

Butanol:water:pyridine:tol Silica gel Sugaranalysissystem.Try10:6:6:1.Devel

uene opment may take 4h

Methanol (MeOH):water C18 Start with 100% MeOH to determine if

metabolites will move from the origin.
Increase the water concentration to
slow products down. The addition of
small amounts of acid or base may
improve chromatography

Acetonitrile:water C18/C2 A universal simple reverse-phase system

MeOH:water Polyamid Universal

e

MeOH:water Cellulose Usedfortheseparationofhighlypolarcomp

ounds, such as sugars andglycosides

B-13
Table 3

Simple systems for TLC

Solventsystem Sorbent Notes

Hexane:ethyl acetate (EtOAc) Silica gel Universal systemcan substitute hexane for light
petroleum spirit or pentane

Petrol:diethyl ether (Et2O) Silica gel A universal system for relatively nonpolar metabo-
lites.Excellentforterpenesandfattyacids.Care
shouldbetakenwithEt2Oasexplosivemixtures

are formed inair

Petrol:chloroform (CHCl3) Silica gel Considerably useful for the separation of cinnamic
acid derivatives, in particular the coumarins

Toluene:EtOAc:aceticacid(TEA) Silicagel Vary the composition, i.e., 80:18:2or

60:38:2excellent for acidic metabolites

CHCl3:acetone Silica gel A general system for medium polarity products

Benzene:acetone Silica gel Usefulfortheseparationofaromaticproducts.

Careshouldbetakenasbenzeneisahighly
carcinogenicsolvent.Substitutetoluenefor
benzene

Butanol:acetic acid:water Silica gel A polar system for flavonoids and glycosides

Butanol:water:pyridine:toluene Silica gel Sugaranalysissystem.Try10:6:6:1.Development

may take 4h

Methanol (MeOH):water C18 Start with 100% MeOH to determine if metabolites

will move from the origin. Increase the water
concentration to slow products down. The
addition of small amounts of acid or base may
improve chromatography

Acetonitrile:water C18/C2 A universal simple reverse-phase system

MeOH:water Polyamide Universal

MeOH:water Cellulose Usedfortheseparationofhighlypolarcompounds,

such as sugars andglycosides

B-13
 LAPORAN PRAKTIKUM
DASAR-DASAR PEMISAHAN ANALITIK
PERCOBAAN IV DAN V
(KROMATOGRAFI KERTAS DAN LAPIS TIPIS)

OLEH :

NAMA : ALFAHRU MANGIDI

STAMBUK : A1C4 13 050
KELOMPOK : III B
ASISTEN PEMBIMBING :L.M. SADAM AL-ARAF, S. Pd

LABORATORIUM UNIT PENDIDIKAN KIMIA

FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN
UNIVERSITAS HALU OLEO
KENDARI
2015

B-13
 yang digoreskan pada kertas dengan sampel. Setelah itu, ketiga cuplikan sampel yang
mengandung karbohidrat yaitu laktosa dan sukrosa ditotolkan pada plat KLT kemudian dikeringkan agar
sampel teradsorbsi dengan baik oleh fasa diam serta untuk mencegah terjadinya rekasi antara sampel
dengan pelarut. selajutnya dimasukkan ke dalam chamber untuk mengembangkan kromatogram (elusi).
Proses elusi sampel bergerak naik dengan adanya gaya kapiler. Senyawa polar akan melekat lebih
kuat pada lempengan dari pada senyawa non polar akibat interaksi dipol-dipol. Senyawa non polar kurang
melekat erat pada fasa diam sehingga memiliki laju alir yang lebih besar ke atas lempeng begitu sebaliknya
dengan senyawa non polar, dimana jarak tempuh ke atas lempeng merupakan cermin polaritas senyawa
(like dissolved like).
Untuk percobaan kali ini, hanya dilakukan pengamatan pada pemisahan cuplikan yang
mengandung karbohidrat, yakni laktosa dan sukrosa. Eluen yang digunakan adalah campuran aseton dan
air 9:1.Setelah eluen mencapai garis batas atas yang telah ditentukan, plat KLT kemudian dikeringkan.
Proses pengeringan ini bertujuan agar sampel teradsorbsi dengan baik oleh fasa diam (KLT) serta untuk
mencegah terjadinya rekasi antara sampel dengan eluen (fase gerak) / pelarut. Setelah proses mengeringkan
kromatogram selesai langkah selanjutnya adalah mendeteksi noda-noda. Tidak munculnya noda dalam
percobaan kali ini dapat disebabkan oleh faktor faktor yang mempengaruhi nilai Rf, akan tetapi ada juga
kemungkinan lain misalnya noda yang tidak nampak, sehingga untuk menampakkan noda tersebut harus
direaksikan dengan reagen penampak warna berupa ion logam transisi untuk membentuk kompleks, karena
salah satu ciri senyawa kompleks adalah berwarna akibat adanya bilangan koordinasi dari atom pusatnya.
Adapun reagen yang digunakan sebagai penampak noda yaitu asam sulfat 10%.
Berdasarkan pengamatan setelah dilakukan pengukuran pada pemisahan ion logam jarak gerak
pelarut adalah 6,0 cm dan untuk jarak noda pada ion Pb2+adalah 0 cm, jarak noda

B-13
 ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA FLAVONOID DARI

DAUN JAMBLANG (Syzygium cumini)

Maryati Abd Gafur, Ishak Isa, Nurhayati Bialangi

Jurusan Kimia Fakultas MIPA Universitas Negeri Gorontalo
e-mail : maryatiabdgafur@yahoo.co.id

ABSTRAK: Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa

flavonoid yang terkandung dalam daun jamblang. Penelitian ini diawali dengan
mengekstrak serbuk daun jamblang (Syzygium cumini) dengan pelarut metanol.
Teknik yang digunakan adalah maserasi. Ekstrak metanol tersebut dipekatkan
kemudian dipartisi, dilakukan kromatografi kolom, dan diuji KLT. Isolat murni yang
menunjukkan hasil positif pada uji flavonoid kemudian di analisis keberadaan gugus
fungsinya dengan spektrofotometer IR dan panjang gelombang dengan
spektrofotometer UV-Vis. Hasil analisis spektrofotometer IR menunjukkan gugus
fungsi O-H, C=C, C=O, C-O, dan C-H alifatik serta didukung oleh adanya serapan
UV-Vis pada panjang gelombang 290,00 nm yang mengalami transisi elektron (n
*) oleh suatu gugus C=O dan 216,00 nm yang mengalami transisi electron (n *)
oleh suatu gugus O-H.

Kata Kunci : isolasi, jamblang, syzygium cumini, Flavonoid

ABSTRACT: The aim of research is to isolate and identifiy the compounds of

flavonoids contained in the leaves Jamblang. Thisresearchbegins
withjamblangleafextractpowderwithsolventmethanol.

Extractiontechniqueused ismaceration. Themethanolextractwas concentratedand

thenpartitioned, performedcolumn chromatographyandthin layer
chromatographywere tested.

B-13
 Pureisolatesshowedpositive resultson thetestand thenanalyzedthe presence
offlavonoidgroupfunctionswithan infraredspectrophotometerandUV-Vis
spectrophotometer. InfraredanalysisshowedspectrophotometerOHfunctional group,
C=C, C=O, CO, andCHaliphaticand supportedbytheUV-Vis absorptionat a
wavelength of290.0nmin transitionof
elektronsbyagroupC=Oand216,0nmelektrontransitionbyagroupO-H.

Key Words : isolation, jamblang, syzygium cumini, flavonoids

PENDAHULUAN

Indonesia merupakan salah satu negara yang memiliki keanekaragaman obat di dunia.Wilayah
hutan tropika Indonesia memiliki keanekaragaman hayati tertinggi ke-2 di dunia setelah Brazili.
Sebanyak 40.000 jenis flora yang ada di dunia, terdapat 30.000 jenis dapat dijumpai di Indonesia
dan 940 jenis diantaranya diketahui berkhasiat sebagai obat dan telah dipergunakan dalam
pengobatan tradisional secara turun-temurun oleh berbagai etnis di Indonesia. Jumlah tumbuhan
obat tersebut sekitar 90% dari jumlah tumbuhan obat yang terdapat dikawasan Asia
(Masyhud,2010).
Salah satu dari sekian banyak tumbuhan yang digunakan sebagai obat tradisional adalah
tumbuhan jamblang (Eugenia cumini Merr merupakan nama dulu dari Syzygium cumini).
Tumbuhan ini dikenal dengan berbagai macam nama seperti di India dan Malaysia dikenal dengan
nama jaman, jambul, jambu, jamelong, di Indonesia dikenal sebagai jambulan, jamblang (Jawa
Barat), juwet atau duwet (Jawa Timur), dan jambu kaliang (Sumatra Barat) (Arifin, 2006).

Tumbuhan jamblang ini dilaporkan mengandung senyawa kimia antara lain suatu
alkaloid, flavonoid, resin, tannin, dan minyak atsiri (Arifin, 2006). Tumbuhan ini memiliki
banyak khasiat tidak lain karena memiliki kandungan kimia yang fungsinya dapat mengobati
suatu penyakit. Salah satunya adalah senyawa flavonoid. Flavonoid meru- pakan salah satu
metabolit sekunder yang terdapat pada tumbuhan. Senyawa ini dapat digunakan sebagai anti
mikroba, obat infeksi pada luka, anti jamur, anti virus, anti kanker, dan anti tumor. Selain itu
flavonoid juga dapat digunakan sebagai anti bakteri, anti alergi, sitotoksik, dan anti hipertensi
B-13
(Sriningsih, 2008). Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa
Flavonoid dari daun Jamblang (Syzygium cumini).
Syzygium cumini termasuk kedalam keluarga suku jambu-jambuan (Myrtaceae). Jenis ini
termasuk jenis asli kawasan Indo-Malaysiana, termasuk Indonesia. Masyarakat di kawasan ini
telah lama mengenalnya sebagai tanaman buah yang dapat di konsumsi. Informasi terakhir
menge- nai tumbuhan jenis ini adalah kegunaannya sebagai bahan baku obat diabetes militus
(Mudiana, 2007).Menurut Mahmoud et. al (2001) bahwa secara umum genus Syzygium
mengandung metabolit sekunder berupa flavonoid, alkaloid, tannin, terpenoid, yang digunakan
di dalam dunia pengobatan antara lain untuk antiradang, penahan rasa sakit, dan anti jamur.
Flavonoid adalah suatu kelompok senyawa fenol yang terbesar ditemukan di alam.

Senyawa-senyawa ini merupakan zat warna merah, ungu, dan biru, dan sebagian zat warna
kuning yang ditemukan dalam tumbuh-tumbuhan. Flavonoid mem- punyai kerangka dasar
karbon yang terdiri dari 15 atom karbon, dimana dua cincin benzene (C6) terikat pada suatu
rantai propan (C3) sehingga membentuk suatu susunan C6-C3-C6. Susunan ini dapat
menghasilkan tiga jenis struktur, yakni 1,3-diarilpropan atau neoflavonoid.Senyawa-senyawa
flavonoid terdiri dari beberapa jenis tergantung pada tingkat oksidasi dari rantai propane dari
sistem 1,3-diarilpropana.Flavon, flavonol dan antosianidin adalah jenis yang banyak ditemukan
dialam sehingga sering disebut sebagai flavonoida utama. Banyaknya senyawa flavonoida ini
disebabkan oleh berbagai tingkat hidroksilasi, alkoksilasi atau glikosilasi dari struktur
tersebut.Penggolongan flavonoid berdasarkan penambahan rantai oksigen dan perbedaan

B-13
 Kromatografi Lapis Tipis

Oleh: Sohibul Himam Haqiqi 2008

Kromatografi digunakan untuk memisahkan substansi campuran menjadi

komponen-komponennya.Seluruh bentuk kromatografi berkerja berdasarkan
prinsip ini.
Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran berdasarkan perbedaan
kecepatan perambatan komponen dalam medium
tertentu.Padakromatografi,komponen-komponennyaakandipisahkanantaradua buah
fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam akan menahan komponen campuran
sedangkan fase gerak akan melarutkan zat komponen campuran. Komponen yang
mudah tertahan pada fase diam akan tertinggal. Sedangkan komponen yang mudah
larut dalam fase gerak akan bergerak lebihcepat.
Semua kromatografi memiliki fase diam (dapat berupa padatan,
ataukombinasicairan-padatan)dan fase gerak (berupa cairan atau gas).Fase gerak
mengalir melalui fase diam dan membawa komponen- komponen yang terdapat
dalam campuran. Komponen-komponen yang berbeda bergerak pada laju
yangberbeda
Proses kromatografi juga digunakan dalam metode pemisahan komponen
gula dari komponen non gula dan abu dalam tetes menjadifraksi-
fraksiterpisahyangdiakibatkanolehperbedaanadsorpsi,difusidan eksklusi komponen
gula dan non gula tersebut terhadap adsorbent dan
eluentyangdigunakan(HongistodanHeikkila,1977;Kantasubrata,1993;Schneider,19
87).

FASE DIAM

Pelaksaanan kromatografi lapis tipis menggunakan sebuah lapis tipis silika

atau alumina yang seragam pada sebuah lempeng gelas atau logam atau plastik yang
B-16
keras.
Jel silika (atau alumina) merupakan fase diam. Fase diam untuk
kromatografilapistipisseringkalijugamengandungsubstansiyangmana dapat
berpendar flour dalam sinar ultraviolet.Fase gerak merupakan pelarut atau campuran
pelarut yangsesuai.
FASE GERAK
Dalam kromatografi, eluent adalah fasa gerak yang berperan penting pada
proses elusi bagi larutan umpan (feed) untuk melewati fasa diam (adsorbent).
Interaksi antara adsorbent dengan eluent sangat

B-17
Eluent dapat digolongkan menurut ukuran kekuatan teradsorpsinya pelarut atau
campuran pelarut tersebut pada adsorben dan dalam hal ini yang banyak digunakan
adalah jenis adsorben alumina atau sebuah lapis tipis silika. Penggolongan ini
dikenal sebagai deret eluotropik pelarut. Suatu pelarut yang bersifat larutan relatif
polar, dapat mengusir pelarut yang relatif tak polar dari ikatannya dengan alumina
(jel silika).(Kantasubrata,1993).

Kecepatan gerak senyawa-senyawa ke atas pada lempengan itu tergantung

pada:
Bagaimana kelarutan senyawa dalam pelarut.Hal ini bergantung pada
bagaimana besar atraksi antara molekul-molekul senyawa dengan
pelarut.
Bagaimana senyawa melekat pada fase diam, misalnya jel silika.Hal ini
tergantung pada bagaimana besar atraksi antara senyawa dengan jel
silika.

Anggaplah bercak awal pada alumina mengandung dua senyawa, yang satu dapat
membentuk ikatan hidrogen, dan yang lainnya hanyadapat mengambil tiap-tiap
bagian interaksi van der Waals yang lemah.
Senyawa yang dapat membentuk ikatan hidrogen akan melekatpada jel silika
lebih kuat dibanding senyawa lainnya. Kita mengatakanbahwa senyawa ini terjerap
lebih kuat dari senyawa yang lainnya.Penjerapan merupakan pembentukan suatu
ikatan dari satu substansipada permukaan.
Penjerapan bersifat tidak permanen, terdapat pergerakan yang tetap dari
molekul antara yang terjerap pada permukaan jel silika dan yang kembali pada
larutan dalam pelarut.
Dengan jelas senyawa hanya dapat bergerak ke atas pada lempengan selama
waktu terlarut dalam pelarut. Ketika senyawa dijerap padajelsilika-
untuksementarawaktuprosespenjerapanberhenti-dimana
pelarutbergeraktanpasenyawa.Ituberartibahwasemakinkuatsenyawa
dijerap,semakinkurangjarakyangditempuhkeataslempengan.

B-16
 Dalam contoh yang sudah kita bahas, senyawa yang dapat membentuk ikatan
hidrogen akan menjerap lebih kuat daripada yang tergantung hanya pada interaksi
van der Waals, dan karenanyabergerak lebih jauh padalempengan.

Bagaimana jika komponen-komponen dalam campuran dapat

membentuk ikatan-ikatan hidrogen?

Terdapat perbedaan bahwa ikatan hidrogen pada tingkatan yang sama dan
dapat larut dalam pelarut pada tingkatan yang sama pula. Ini tidak hanya merupakan
atraksi antara senyawa dengan jel silika. Atraksi
antarasenyawadanpelarutjugamerupakanhalyangpenting-haliniakan

B-17
 BAB
III

Kromatografi Lapis Tipis

Thin Layer Chromatography (TLC)

Kromatografi lapis tipis adalah salah satu contoh kromatografi

planar.Fase diamnya (Stationary Phase) berbentuk lapisan tipis yang
melekat pada gelas/kaca, plastik, aluminium.Sedangkan fase geraknya
(Mobile Phase) berupa cairan atau campuran cairan, biasanya pelarut
organi dan kadang- kadang juga air.Fase diam yang berupa lapisan
tipis ini dapat dibuat dengan membentangkan /meratakan fase diam
(adsorbent=penjerap=sorbent) diatas plat/lempeng kaca plastik
ataupunaluminium.

Fase diam

Sifat fase diam yang satu dengan fase diam yang lain berbeda
karena strukturnya, ukurannya, kemurniannya, zat tambahan sebagai
pengikat dll. Fasa diam yang digunakan TLC tidak sama dengan yang
digunakan untuk kromatografi kolom, terutama karena ukuran dan zat
yang ditambahkan. Fase diam dijual dengan spesifikasi tertentu, iaitu
ukuran (diameter) dalam mesh atau j^m dan untuk kegunaannya (mis:
untuk TLC atau kromatografi kolom). Beberapa fase diam yang
banyak dijualdipasaran:

Silika gel

Silika gel merupakan fase diam yang sering digunakan pada

TLC. Dalam perdagangan dijual dengan variasi ukuran (diameter) 10-
40m. Makin kecil diameter akan makin lambat kecepatan alir fase

B-18
geraknya dengan demikian mempengaruhi kualitas pemisahan. Luas
permukaan silica gel bervariasi dari 300-1000 m2/g. Bersifat
higroskopis, pada kelembaban relatif 45-75% dapat mengikat air 7-
20%. Macam-macam silka gel yang dijual dipasaran:
Silika gel dengan pengikat.Pada umumnya digunakan pengikat gypsum,
(CaSO4 5-15%). Jenis ini diberi nama Silika gel G. Ada juga menggunakan
pengikat pati (starch) dan dikenal Silika gel S, penggunaan pati sebagai
pengikat mengganggu penggunaan asam sulfat sebagai pereaksi penentuan

B-19
 LEMBAR ASISTENSI
DIPERIKSA
KETERANGAN TANDA TANGAN
NO TANGGAL

1. 23/11/2017 Headernya disesuaikan

Numberingnya dihilangkan pada

2. 23/11/2017
daftar gambar dan tabel
Judul pada Summary di italic dan
3. 23/11/2017
isi pada ringkasan di italic
Line spacing after dan before
4. 23/11/2017
dihilangin

5. 23/11/2017 Kenapa ada 2x Lampiran B

6. 23/11/2017 Tulisan LDTKnya dibenerin

7. 23/11/2017 Awal paragraph di kedalamin

Alat dan Bahan di columnsnya di 2

8. 23/11/2017
kan
Lampiran C ditambahkan
9. 23/11/2017
halamannya
10. 23/11/2017 Lembar asistensi diisi sendiri

C-1