Teknologi DNA

Rekombinan
Sogandi, M.Si
Definisi . . . ?

Teknologi DNA rekombinan adalah teknologi untuk

merekayasa molekul DNA secara in vitro guna
menghasilkan DNA dengan kombinasi baru.

Juga dikenal dengan istilah: rekayasa genetika, gene

cloning

Molekul DNA rekombinan adalah hasil penggabungan

fragmen DNA yang berasal dari sumber yang
berbeda. Misalnya DNA manusia disisipkan pada
DNA bakteri
 Aplikasi Teknologi DNA Rekombinan

Bidang Aplikasi Manfaat

Mengetahui struktur gen, fungsi gen, dan hubungan kekerabatan gen maupun
Sekuensing DNA
organisme
Biologi dasar
Mutagenesis
Mengetahui fungsi gen
terarah
Menghasilkan protein untuk mengobati penyakit seperti diabetes, dwarfism,
Protein obat
hemofilia

Terapi gen Mengobati penyakit genetik seperti cystic fibrosis

Kesehatan Perbaikan vaksin Menghasilkan vaksin yang lebih efektif dengan efek samping lebih rendah

Diagnosis Memungkinkan diagnosis penyakit infeksi secara cepat dan akurat

Memungkinkan diagnosis, pencegahan, dan pengobatan penyakit hewan

Obat hewan
secra lebih baik
Mengubah Meningkatkan produksi antibiotik, asam amino, vitamin, enzim, juga untuk
Industri
mikroorganisme penanganan limbah dan degradasi senyawa kimia
Mengubah
Menghasilkan tanaman unggul
tanaman
Pertanian
Mengubah
Menghasilkan ternak unggul
hewan
Investigasi DNA
Dapat mengindentifikasi seseorang melaluisampel darah, semen, jaringan, dsb.
kejahatan fingerprinting
 Tahapan
Pengklonan
Gen
Manipulasi DNA

Ragam manipulasi DNA:

pemotongan,
penyambungan,
pemendekan,
pemanjangan,
penyalinan menjadi molekul RNA,
penggandaan DNA, serta modifikasi
penambahan gugus tertentu
penghilangan gugus tertentu.
 VEKTOR
Vektor, yang juga disebut vektor pengklon (cloning
vector) merupakan molekul DNA yang bisa berreplikasi secara
mandiri dan dapat digunakan sebagai pembawa molekul DNA
lain yang tidak memiliki kemampuan untuk berreplikasi sendiri
didalam sel.

Vektor diperlukan agar DNA asing yang disisipkan direplikasi

dan dipertahankan didalam sel inang dari generasi ke generasi

Vektor dirancang untuk digunakan pada sel inang tertentu

Sel inang: bakteri, yeast, fungi, insekta, tanaman, hewan

Plasmid

DNA melingkar utas

ganda di luar kromosom
Mampu berrepliasi
(memperbanyak diri)
secara mandiri
Prinsip Dasar Pengklonan Gen

Istilah penting:
DNA, gen, genom,
Enzim restriksi
Situs restriksi
Vektor, plasmid
DNA rekombinan
Sel kompeten
Transformasi, transfeksi
Sel inang
fermentasi
bioreaktor, fermentor
 TUGAS 1
Carilah pengertian dari beberapa istilah berikut !
Istilah penting:

DNA, gen, genom,

Enzim restriksi

Situs restriksi

Vektor, plasmid

DNA rekombinan

Sel kompeten

Transformasi, transfeksi

Sel inang

fermentasi

bioreaktor, fermentor

Tugas dikirimkan ke Gandi.kimia08@gmail.com dengan subject tugas biotek

farmasi paling lambat Jumat,
Contoh Protein Rekombinan yang
Dibuat pada Sel Bakteri

Insulinmanusia
Hormon pertumbuhan manusia

Interferon manusia

Berbagai jenis enzim

Antibodi

Dan sebagainya
Ekspresi Gen
Insulin Manusia
pada E. coli
Tahapan Umum Pengembangan Produk Biofarmasi
Aplikasi dalam Pertanian

Tanaman tahan herbisida glyphosate

13
Diagram Teknik Pembuatan Tikus Transgenik melalui
Transfeksi Vektor
Transgenic Mammals

15
Terapi Gen

Dilakukan dengan memasukkan

transgen normal kedalam kromosom
untuk menggantikan alel yang
mengalami kelainan
Dibedakan menjadi 2 kategori:

1. germ line gene therapy

2. somatic gene therapy
 Gene Therapy

Treatment of SCID (severe combined immunodeficiency). SCID affects the

maturation of immune cells that develop in bone marrow. SCID sufferers lack the
17
enzyme ADA (adenosine deaminase).
Bioetika
Pemasukan DNA
Ke Dalam Sel
Prinsip Cloning
Cloning
Pembuatan Sel Kompeten
Seleksi Transforman
Seleksi Transforman
Identifikasi Sel Rekombinan
Seleksi Rekombinan Melalui
Inaktivasi Insersi
 Seleksi Rekombinan Melalui
Inaktivasi Gen Resistensi Antibiotik
Seleksi rekombinan melalui inaktivasi
insersi gen lacZ
Prinsip Inaktivasi Insersi Gen
LacZ
Blue-white Selection
Transformasi Kultur Sel Tanaman
TUGAS 2

Gen interferon (IFN) akan diklon

(disisipkan) kedalam vektor pBK1.
Situs restriksi yang tersedia pada
segmen DNA yang membawa
gen IFN dan situs restriksi yang
tersedia pada vektor
diperlihatkan pada gambar.
Jelaskan:
1.Enzim restriksi yang Anda
pilih untuk mengklon gen IFN
kedalam vektor pBK1 (berikan
alasan)!
2.Cara menapis (screening)
koloni yang membawa
plasmid pBK1 dengan insert
gen IFN
 TUGAS 3
Gen insulin (INS) akan diklon
EcoRI INS (disisipkan) kedalam vektor pBK1. Situs
restriksi yang tersedia pada segmen
BamHI BamHI PstI DNA yang membawa gen INS dan
situs restriksi yang tersedia pada vektor
diperlihatkan pada gambar.
Jelaskan:
BamHI 1. Enzim restriksi yang Anda pilih
untuk mengklon gen INS kedalam
EcoRI vektor pBK1 (berikan alasan)!
2. cara menyisipkan gen INS
R
amp
tetR
kedalam vektor pBK1 !
pBK1
3. Cara menapis (screening) koloni yang
membawa plasmid pBK1 dengan insert
ori PstI gen INS ?

Tugas dikirimkan ke Gandi.kimia08@gmail.com dengan subject tugas biotek

farmasi paling lambat Jumat,