abstrak

Exocytosis dan sekresi Granula Sekretori (SG) mengandung mekanisme utama sel mast dalam
respon kekebalan protektif pada sel host, dan fungsi pada reaksi alegi dan anafilaksis.

Sel mast adalah sel sumsum tulang yang diturunkan dari ruang vaskular dan masuk ke jaringan.Sel
granul mengikat antibodi IgE spesifik ke reseptor sel mast , diikuti oleh agregasi reseptor antigen,
memulai rangkaian kaskade pensinyalan yang digabung dalam peleburan granula sekretori (SGs)
dengan membran plasma (PM) yang menyebabkan pelepasan isi . Sel mast juga diaktifkan, terlepas
dari IgE, oleh neuropeptida, toksin, antigen bakteri dan, sel kekebalan , dan juga oleh banyak
mediator yang disekresikan sendiri, yang selanjutnya memperkuat respons inflamasi . Sementara re-
sponsor inflamasi ini dikenal sebagai alergi pada individu indinitif hipersensitif, secara fisiologis,
mereka memediasi fungsi sel mast dalam kekebalan bawaan dan adaptif

Sel mast sel eksositosis

Mekanisme dimana sel mast mensekresikan mediator disintesis de novo mereka masih perlu
dipecahkan. Mekanisme yang digunakan untuk mensekresikan isi SG mereka lebih baik ditandai,
walaupun jalur dan entitas molekuler yang terlibat tetap kurang dipahami. Karakter terbaik adalah
IgE-dependent exocytosis, yang jaringan kopling stimulus-sekresi telah digambarkan (Benhamou dan
Blank, 2010; Rivera et al., 2008). Yang terakhir mungkin melibatkan exocytosis penuh, dimana
perpaduan PM merapat SG dengan PM memungkinkan pengusiran isinya secara tuntas, atau fusi
ciuman dan lari yang melepaskan sebagian kargo SG melalui pori fusi yang relatif sempit dan
sementara. Bergantung pada kekuatan sinyal, kemanjuran eksositosis dapat meningkat secara
signifikan oleh sekresi majemuk, yang merupakan gabungan fusi homotip dari SG sehingga
memungkinkan pelepasan SG yang cepat yang secara distal melewati kebutuhan akan
pengangkutannya ke PM (Deng et al ., 2009; Blank, 2011; Cohen et al., 2012). Analisis EM (Anderson
et al., 1973) dikombinasikan dengan pengukuran kapasitansi membran (Alvarez de Toledo dan
Fernandez, 1990a, 1990b) telah mengidentifikasi penggabungan homotip dari SG sebagai bagian
integral dari proses eksositik. Modus eksositosis majemuk berurutan dan multisfik dicatat
menunjukkan bahwa fusi homotip terjadi setelah perpaduan awal SG dengan PM, namun SG yang
sudah prefused mungkin ada juga. Konsisten dengan kompleksitas eksositosis sel mast, beberapa
protein SNARE telah terlibat dalam memainkan peran dalam eksositosis sel mast. Yang terakhir
mencakup VAMP 2, 3, 4, 7, dan 8, SNAP23 dan Syntaxins 3, 4, dan 6 (Puri dan Roche, 2008; Sander et
al., 2008; Tiwari et al., 2008; Lorentz et al., 2012; Woska dan Gillespie, 2012; Brochetta et al., 2014).

SGs dari Sel Mast

SGs sel mast menampilkan fitur lisosom. Jadi, selain muatan khusus mediator inflamasi mereka,
seperti histamin, SGs mengandung enzim lisosom (Schwartz dan Austen, 1980) dan protein
membran lisosom (Suarez, 1987), memiliki pH asam (Johnson et al., 1980, Lagunoff dan Rickard,
1983), menerima dan membuang karbohidrat en-dokitik dalam cara yang teratur (Cohen et al.,
2012), mendaur ulang protein SG (Bonifacino et al., 1989), dan diregulasi oleh pengendalian daur
ulang endositik synaptotagmins (Grimberg et al., 2003; Haberman dkk., 2007). Oleh karena itu, SG
sel induk dianggap sebagai organel lisosom (LROs) atau lisosom sekretori. Namun, tidak seperti sel
pembunuh alami atau limfosit T sitotoksik di mana LRO timbul dari lisosom, sel mast tampaknya
mengandung lisosom konvensional dan SG yang memiliki aktivitas likosomal (Schwartz dan Austen,
1980). Memang, normal SGs bersama sisi abnormal lisosom terdeteksi dalam sel mast di bi-opsies
yang berasal dari pasien penyakit penyimpanan lysosomal (Hammel et al., 1993a), dan analisis
fraksinasi dem-onstrated distribusi lisosomal b-heksosaminidase antara histamin- mengandung SGs
dan bebas histamin frac-tions, yang kemungkinan besar sesuai dengan ly-sosomes konvensional
(Baram et al., 1999; Grimberg et al., 2003; Haberman dkk., 2007).

Secara mencolok, terlepas dari peran sentral mereka dalam fungsi sel mast di bawah kondisi
fisiologis (yaitu pertahanan host) dan patologi-kal (yaitu, alergi), mekanisme molekuler yang
mendasari biogenesis sel mast SG tetap tidak terpecahkan. Temuan morfometrik yang berasal dari
studi EM sel mast mendukung sebuah model, di mana perpaduan antara SG terjadi tidak hanya
selama eksototasi senyawa mereka di sel yang dipicu tetapi juga merupakan mekanisme paska-Golgi
utama untuk menghasilkan SG matang. Menurut model ini (Gambar 1), butiran unit yang baru
terbentuk (UG) homotipis membentuk granul yang volumenya merupakan kelipatan volume UG
(Hammel et al., 2010). Butiran im-matang yang terbentuk (IG) kemudian dapat disatukan lebih lanjut
dengan IG lain atau dengan SG matang (Gambar 1). Keuntungan yang jelas dari mekanisme semacam
itu adalah bahwa SGs lebih besar dari UG terbentuk yang dapat menyimpan sejumlah besar muatan
sekretori yang siap digunakan selama degranulasi; Namun, fusi dengan UG memungkinkan
penggabungan muatan baru yang diperbarui yang dibentuk secara khusus untuk mengatasi tuntutan
lingkungan baru (Hammel dan Gambar 1. Model untuk fusi yang dimediasi oleh rab5 dari sel granular
seukuran kastor sel induk (SGs). Menurut model ini, butiran unit keluar dari agregat Golgi (angka
menunjukkan ukuran progranule yang sama) dan menjalani fusi homo-typika yang diperantarai rab5
(langkah a) menciptakan butiran sekretori yang belum matang (IGs). Yang terakhir ini dapat lebih
menyatu dengan IG lainnya sebelum pematangannya menjadi SGs, sebuah proses dimediasi oleh
penghapusan kargo dan disosiasi Rab5 (langkah b) IG yang terikat I5 dapat menyatu dengan IG lain
atau dengan SG matang atau dengan endosom yang terbentuk dengan cara yang tergantung pada
Rab5 (langkah I-III). Langkah terakhir ini memungkinkan integrasi kargo endositik ke dalam SG.

Meilijson, 2012). Namun, sementara anomali morfologi mendukung model ini dengan kuat,
mekanisme yang mendasari fusi homotip SG selama biogenesis tetap elu-sive. Siapa yang
mengendalikan proses ini? SNAREs mana yang memediasi proses fusi? Bagaimana SG mendapatkan
kargo endositik dan fitur lisosom? Bagaimana mereka dewasa? Bagaimana mereka mendapatkan
kompetensi exocytosis? Bagaimana mereka pindah ke PM? Apa yang menentukan mode eksositosis
mana yang akan terjadi? Apa komponen inti dari mesin fusi? Pertanyaan-pertanyaan ini tetap
terbuka.

Rab GTPases dan Mast Cell Exocytosis

Untuk mulai menangani pertanyaan yang belum terselesaikan dari eksositosis sel mast, baru-baru ini
kita mengembangkan metodologi berbasis pencitraan resolusi tinggi yang memungkinkan analisis
genomik fungsional dari eksositosis sel mast. Metodologi kami didasarkan pada cotransfections dari
gen yang diminati, digabungkan ke GFP, dan Neuropeptide Y (NPY) yang digabungkan dengan
protein morfin merah monomer (mRFP) -mRFP. Yang terakhir (NPY-mRFP) disortir ke dalam SG dan
disekresikan bersama mediator endogen, sehingga berfungsi sebagai reporter yang tepat untuk
visualisasi SG dan kuantifikasi proses eksositik (Azouz et al., 2012). Kami menggunakan metode ini
untuk menyaring Rab GTPases, yang merupakan regulator utama perdagangan vesikular (Fukuda,
2008), untuk dampak fenotipik dan fungsionalnya pada eksositosis sel mast (Azouz et al., 2012).
Layar ini telah mengidentifikasi 30 Rabs sebagai potensial regu-lators eksositosis pada sel leukemia
tikus basofilik (RBL), garis sel tiang yang umum dipelajari (Azouz et al., 2012). Daftar ini termasuk
Rabs (yaitu Rab4A, Rab13, Rab32, Rab37, Rab38) yang secara eksklusif memusatkan sekresi IgE yang
dimediasi oleh eksositosis cela dan lari (Deng et al., 2009), Rabs (yaitu Rab3A, Rab6A Rabbi Rabbi
Rabbi Rabbi Rabbi Rabbi Rabbi Rab30 Rab Rab Rab Rabbi Rabbi Rabbi Rabter Rabbs Rabbi Rabbi
Rabbi Rabbi Rabb Rab Rab, Rab. .), Dan Rabs (yaitu Rab7, Rab8A, Rab9, Rab10, Rab11A, Rab12,
Rab19, Rab20, Rab22A, Rab27, Rab42, Rab43) yang mempengaruhi kedua jenis sekresi yang dipicu
oleh stimulus (Azouz et al., 2012). Yang menggelitik, kelompok yang terakhir termasuk Rabs yang
melokalisasi SG dan Rab yang terlibat dalam mengatur transportasi dari kompartemen re-bersepeda
endositik (ERC), organawan endosomal terpisah yang terlibat dalam daur ulang endositik lambat.
Oleh karena itu, sementara SG yang dilokalisir, Rabs mungkin mengatur langkah akhir dari
eksositosis yang dimiliki oleh eksposisi ciuman dan lari, dan eksositosis penuh, keterlibatan
pengendali ERC melibatkan transportasi melalui ERC dalam memainkan peran yang belum diketahui
sebelumnya dalam eksositosis sel mast. Selain itu, yang patut dicatat adalah keterlibatan selektif
Rabs (yaitu Rab2A, Rab6, Rab14, dan Rab39), yang diketahui mengatur langkah-langkah di sepanjang
jalur biosintesis / sekretori, dalam mengendalikan sekresi yang diinduksi Ion / TPA, alasan yang
menunggu bulu- ada investigasi

Kontrol Rab5 SG Fusion

Di antara Rabs yang menunjukkan dampak fenotipik yang luar biasa, kami mengidentifikasi Rab5
sebagai pengatur fusi SG (Azouz et al., 2014). Coexpression mutan yang terkunci pada GDP yang
terkunci secara konstitutif dari isoform endogen yang diekspresikan dengan jelas pada Rab5 (Rab5A,
Rab5B, dan Rab5C) atau ekspresionasi dari Rab5A / B / C yang menargetkan shRNA, mengurangi
ukuran SGs secara signifikan dengan peningkatan yang sama pada mereka. angka (Azouz et al.,
2014). Sebaliknya, ekspresi mutan Rab5A GTP yang terkunci secara konstitutif aktif (Rab5A Q79L, di
sini: CA Rab5A), yang diketahui memfasilitasi penggabungan homotip awal endosom (Stenmark et
al., 1994), menghasilkan pembentukan raksasa Vesikel yang dihiasi dengan Rab5A, yang kami
identifikasi sebagai SG berdasarkan kandungan kargo NPY-mRFP dan serotonin seketika (Gambar 2)
dan kapasitasnya untuk exocytose secara teratur (Azouz et al., 2014). Hubungan terbalik antara
jumlah dan ukuran SG menunjukkan bahwa fusi homotip yang diperantarai Rab5 dari SGs. Memang,
resolusi tinggi im-aging dari SG raksasa oleh mikroskop confocal sel hidup, yang mendeteksi SG
pengubah dekorasi Rab5A, dan mikrograf elektron yang menggambarkan SG yang jauh lebih besar
dan fusi homotipik antara dua atau lebih butiran pada sel ekspres CA Rab5A, memiliki memperkuat
kesimpulan ini (Azouz et al., 2014). Interaksi Rab5 dengan SG sementara dan terjadi tidak lama
setelah keluar Golgi mereka (Azouz et al., 2014).
Daur ulang SGs

Sementara Rab5 mengendalikan ukuran SG dengan memfasilitasi SG SG, sebuah mekanisme

alternatif untuk mengatur ukuran SG adalah dengan daur ulang kargo. Mutasi yang mengganggu
proses ini, misalnya, mutasi pada sindrom perdagangan Chediak-Higashi / regulator perdagangan
lysosomal (CHS / Lyst) pada manusia, dengan sindrom Chediak-Higashi, dan pada tikus krem (Lystbg
/ Lystbg) (Durchfort et al., 2012) menghasilkan SG raksasa dan dapat menyebabkan patologi yang
signifikan. Memang, kami telah menunjukkan bahwa fenotip yang sama dengan SG berukuran lebih
besar disebabkan oleh knockdown synaptotagmin 3, anggota keluarga protein pengatur lalu lintas
synapto-tagmin (Grimberg et al., 2003) yang mengatur daur ulang endositik (Grimberg dkk. , 2003;
Masztalerz et al., 2007). Oleh karena itu, ukuran akhir sel mast SG didikte oleh keseimbangan antara
Rab5-

dimediasi SG fusi dan daur ulang diatur oleh synaptotagmin 3 dan protein Lyst. Kami berhipotesis
bahwa dengan mengendalikan ukuran SG, sel mast mengatur rasio antara

Kargo SG dan mesin exocytic granular. Oleh karena itu, pergantian ukuran SG berpotensi
mempengaruhi tingkat dan kinetika eksositosis. Konsisten dengan konsep ini, ukuran vesikel baru-
baru ini terbukti memainkan peran penting dalam mendikte mode eksositosis pada laktotrof (Flasker
et al., 2013). Dengan demikian, butiran besar yang mengandung prolaktin mengeluarkan isinya
dengan fusi penuh, berlawanan dengan yang lebih kecil

vesikula, yang menunjukkan eksositosis transien (Flaskeret al., 2013). Apakah mekanisme kontrol ini
juga berlaku untuk eksositosis sel mast tetap harus ditentukan.