1.

Pendahuluan dan Ruang Lingkup Aplikasi genipin yang paling penting dalam
hubungannya dengan kitosan adalah pembuatan pengganti kartilago elastis, pembuatan
pembawa untuk pelepasan obat yang terkontrol, enkapsulasi produk biologis dan sel
hidup, biofabrikasi jaringan seperti dinding otot dan arteri, dan saus luka pada hewan dan
manusia. Genipin telah pasti menggantikan glutaraldehida dan ikatan silang lainnya
terutama karena pentingnya biokimia diperluas dari hidrogel berikatan silang (GEN-
chitosan), namun juga karena keunggulan stabilitas, biokompatibilitas, kimiawi dan
keamanan umum produk yang manipulasi, penanganan dan penilaian kualitas saat ini
dilakukan dengan teknik canggih dan protokol yang jelas yang menjamin tidak adanya
sitotoksisitas. 1.1. Sifat Karakteristik Genipin Artikel review pertama tentang genipin
diterbitkan pada tahun 2009 [1], namun dua makalah awal [2,3] mengenai isolasi dan
struktur genipin layak dikutip di sini karena ini merupakan contoh penelitian lengkap dan
kesehatan ilmiah yang benar-benar diperoleh dengan peralatan canggih. . Bekerja di awal
tahun 1950an dengan Syntex S.A. di Mexico City, Carl Djerassi pertama kali mensintesis
etetiletosteron 19-nor-17α (norethisterone). Steroid ini, yang berasal dari ubi yang tidak
dapat dimakan dari tanaman dioscorea yang liar, terbukti menjadi agen progestasional
oral yang paling efektif yang ditemukan pada saat itu. Ini adalah awal dari sebuah
program penelitian yang sangat beruntung yang menghasilkan ratusan dan ratusan artikel
jurnal dan paten. Syntex bisa membanggakan peralatan yang paling canggih seperti
spektrometer inframerah dan NMR, pada saat industri farmasi tidak, seperti yang ditulis
Djerassi, "atau Alma Mater, University of Wisconsin, memiliki peralatan seperti itu yang
terbukti sangat berguna untuk steroid. penelitian "[4]. Pekerjaan yang dilakukan
membuka jalan menuju sintesis pertama alat kontrasepsi steroid pada tahun 1953, "pil
KB" yang mengubah kebiasaan manusia [4]. Dalam kerangka program penelitian
tersebut, beberapa tanaman lainnya diselidiki dan beberapa ekstrak dijelaskan secara
ilmiah dengan data yang longgar, sehingga memulai evolusi obat empiris obat tradisional
menjadi ekstrak tumbuhan yang dinilai secara ilmiah, seperti yang terjadi pada Genipa
americana dan Gardenia jasminoides Ellis yang menghasilkan genipin komersial. Contoh
yang lebih baru adalah suplemen makanan dari Serenoa repens (Permixon ™ Pierre
Fabre, Giem, Prancis). Dengan demikian genipin merupakan bagian warisan budaya dari
Carl Djerassi. Karena diketahui bahwa genipin, bukan geniposida, adalah senyawa utama
 yang memberikan aktivitas farmakologis [5], ada ketertarikan untuk isolasi dan
pemurniannya untuk penggunaan dalam terapi dan dalam pembuatan komoditas makanan
[6]. Genipin adalah choleretic; anti depresan; antidiabetes; antikanker; antitrombotik;
anti-inflamasi; antibakteri; gastro-, hepato-, dan neuro-protective [7]; Ini mencegah
peroksidasi lipid; dan melindungi neuron hippocampus melawan protein beta amyloid
Alzheimer [8]. Pentingnya biokimia genipin muncul sebenarnya dari sejumlah proyek
penelitian di bidang terapi penyakit vaskular, diabetes, disfungsi hati, serta biofabrikasi,
kedokteran gigi, oftalmologi, penyembuhan luka dan regenerasi saraf, tendon dan
jaringan lainnya, hanya untuk menyebutkan beberapa
[9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20]. Spesifikasi utama genipin (CAS 6902-77,8) adalah
sebagai berikut: serbuk kristal putih larut dalam air, metanol, etanol dan aseton; rumus
kimia C11H14O5; massa molar 226.226 g / mol; titik lebur 120-121 ° C; UV (CH3OH)
λmax 240 nm. Meskipun rasio molar minor genipin terhadap kitosan diperlukan untuk
mengikat silang polimer yang terakhir atau polimer aminasi lainnya, genipin mahal
karena selama penyiapan sejumlah besar terbuang karena homopolimerisasi. Oleh karena
itu, Fusarium solani diputar sebagai sumber β-glukosidase yang efisien untuk persiapan
genipin dari geniposida melalui ekstraksi dengan sistem biphasic etil asetat 10-L. Data
HPLC menunjukkan bahwa segera setelah genetika hidrolisis diekstraksi dari fasa berair
menjadi etil asetat sehingga melepaskan homopolimerisasi yang tidak dapat dihindari
dalam fase berair. Dengan Fusarium solani ACCC 36223, genipin dalam fase etil asetat
adalah 15,7 g / L, sesuai dengan hasil 0,65 g · L-1 · h-1. Konversi substrat yang efisien
dan eliminasi reaksi samping merupakan aspek kunci dari kemajuan yang dibuat; Apalagi
genipin mudah dimurnikan melalui rekristalisasi tunggal. Pendekatan konseptual dan
teknis terbaru ini tentu akan memungkinkan produksi yang lebih nyaman dengan harga
lebih rendah [21]. Metode yang tersedia untuk pemulihan genipin dan geniposida
dijelaskan, serta metode untuk identifikasi genipin dan geniposida dan kuantifikasi
berdasarkan analisis instrumental. Metode analisis genipin diimplementasikan mengingat
protokol pemulihan yang efektif [22,23,24,25,26,27,28,29,30,26,27,33,34,35,36,37]. 1.2.
Sifat Karakteristik Chitosans Kitin dan chitos dari berbagai asal dan beberapa turunannya
sekarang protagonis saat ini dalam skenario penyembuhan luka, rekayasa jaringan, terapi
gen, dan area biomedis lanjut lainnya, karena sifat uniknya. Informasi dasar tentang
 polisakarida ini, yang relevan dengan topik judul, dapat ditemukan di buku dan artikel
ulasan [38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49]. Menjadi biokompatibel, tidak beracun,
stabil, dapat disterilkan dan dapat terurai secara hayati, khitosan menunjukkan sifat yang
paling dihargai yang meningkatkan fleksibilitasnya di bidang biomedis dan bioteknologi,
seperti imunostimulasi, pengaktifan makrofag, mucoadhesion, aktivitas antimikroba, dan
kimia yang dinilai dengan baik [50]. Selain itu, chitosan juga dapat disiapkan dalam
berbagai bentuk, yaitu hidrogel dan xerogel, serbuk, manik-manik, film, tablet, kapsul,
mikrosfer, mikropartikel, nanofibril, serat tekstil, dan komposit anorganik. Chitosan saat
ini adalah seorang protagonis di bidang lanjut, misalnya itu adalah vektor non-viral
berkinerja tinggi untuk pengiriman DNA dan gen. 1.3. Hidrogel Kitosan Genipin-
Crosslinked Genipin bereaksi segera dengan kitosan, serta dengan protein atau amina
pada umumnya [51], sebagai senyawa pengikat silang bi-fungsional, yang menghasilkan
hidrogel neon berwarna biru. Reaksi antara kitosan dan genipin dipahami dengan baik
untuk berbagai kondisi percobaan dan menghasilkan komposit dan kompleks tanpa
sitotoksisitas untuk sel manusia dan hewan (Gambar 1). Gambar 1 Gambar 1 Genipin
menghubungkan kitosan secara spontan pada rasio molar yang cukup kecil. Di sebelah
kanan, dua rantai kitosan (diwakili oleh unit strukturalnya) bereaksi secara kovalen
dengan satu mol genipin untuk menghasilkan dua fungsi kimia yang baru dibentuk, yaitu
senyawa monosubstitusi Nanopartikel Chitosan yang disambung dengan genipin dibuat
dengan mikroemulsi balik yang memungkinkan perolehan nanogel monodisperse.
Sementara 13C · NMR memberikan bukti reaksi seperti yang ditunjukkan pada Gambar
2, penggabungan genipin ke dalam kitosan juga dikonfirmasi dan dievaluasi secara
kuantitatif oleh 1H · NMR [52,53]. Diameter hidrodinamik dari nanogels genipin-
chitosan berkisar antara 270 sampai 390 nm dan tidak ada perbedaan yang ditemukan
saat tingkat ikatan silang bervariasi. Diameter hidrodinamik nanopartikel meningkat
sedikit pada pH asam. Data TEM menunjukkan bahwa partikel nano memiliki diameter
rata-rata dari 3 sampai 20 nm dan warnanya bulat, memiliki distribusi ukuran partikel
yang hampir seragam, dan tidak terpengaruh oleh aglomerasi partikel; Ini adalah kualitas
menarik untuk pengiriman obat. Protonasi progresif gugus amino karena pH menurun
dikonfirmasi dengan mengukur potensial elektrokinetik nanogel. Variasi kelarutan air
kitosan karena ikatan silang dengan genipin adalah kompromi antara penurunan
 kristalinitas dan gaya elastis dalam jaringan yang dihasilkan. Ada variasi yang tidak
signifikan dari diameter hidrodinamika rata-rata nanopartikel dengan pH, namun variasi
progresif potensial zeta yang besar (dari 30 sampai -7 mV) pada interval pH 4-9,
menunjukkan fakta bahwa hidrogel ini adalah pH -sensitif [53]. Gambar 2 Gambar 2
Spektrum 13C NMR dari film chitosan berikatan silang dengan genipin 0,10%. Pada 23,0
ppm sinyal resonansi gugus alkil dalam kitosan silang dikaitkan dengan hubungan
kitosan + genipin. Sinyal pada 170,5 ppm, ditugaskan ke kelompok ester polos ... Polimer
biodegradable seperti kitosan perlu diikat silang untuk memodulasi sifat umum dan
bertahan cukup lama untuk mengantarkan obat selama periode waktu yang diinginkan.
Bahan kimia tertentu telah digunakan untuk mengikat ikatan khitosan seperti
glutaraldehida, tripolifosfat, etilen glikol, diglisidil eter dan diisosianat. Namun, reagen
pengikat silang sintetik kurang lebih bersifat sitotoksik dan dapat mengganggu
biokompatibilitas sistem pengiriman chitosan. Oleh karena itu, upaya dilakukan untuk
memberikan pereaksi silang yang memiliki sitotoksisitas rendah dan yang membentuk
produk silang yang stabil dan biokompatibel, misalnya tirosinase digunakan untuk
menengahi penyamakan quinone pada chitosans [54]. Chitosan dapat digunakan sebagai
perancah untuk regenerasi jaringan dalam bentuk berpori atau film. Namun, sebagai
perancah berpori itu menunjukkan kelemahan mekanis: misalnya, ketika fibroblas tikus
dikultur pada perancah chitosan berpori, situs lampiran yang sempit dan kelemahan
umum secara drastis menekan adhesi, dan sel-sel cenderung menjadi bulat sehingga
kehilangan hak prerogatif mereka. Di sisi lain, ketika sel-sel berlabuh ke permukaan yang
dianugerahi kekakuan, tingkat pertumbuhan dan diferensiasi seluler lebih baik, migrasi
dan agregasi menjadi nyata, dan bentuk seluler yang disukai oleh pendukungnya adalah
hubungan yang terkait dengan proliferasi, diferensiasi, dan apoptosis. Sejumlah tim
peneliti tertarik menggunakan genipin untuk mendapatkan hidrogel kitosan yang stabil
dan biokompatibel. Yao dkk. menunjukkan bahwa fibroblas yang menempel pada
perancah GEN-chitosan adalah 2,29 kali lebih banyak dibandingkan dengan fibroblas
pada permukaan perancah yang masih asli, modulus karakteristik permukaan khitosan
berikatan dengan genosin, ≈2,3 GPa, yang hampir dua kali lipat dari kontrol [55 ].
Sebuah genipin crosslinked scaffold mempertahankan komposisi kimianya sendiri
sementara memiliki modulus dan kekerasan Young secara signifikan lebih besar. Dengan
 demikian, sifat mekanik perancah chitosan berpori dalam bentuk film diperkuat oleh
genipin. Pada gilirannya sifat umum yang disempurnakan menginduksi adhesi sel dan
proliferasi dalam perancah berpori yang dimodifikasi. Menariknya, ukuran pori dan sifat
mekanik kitosan dapat disetel untuk regenerasi jaringan tertentu. Selain itu, kelangsungan
hidup dan proliferasi L929 fibroblas diregulasi setelah ikatan silang dengan genipin,
terutama larutan genipin 0,5%. Data analog dipresentasikan oleh Bao et al. untuk
karboksimetilkitosan yang dihubungkan silang dengan genipin dalam sebuah artikel yang
ditujukan untuk sifat mekanik dari kelas hidrogel dan biokompatibilitasnya [56].
Hidrogel GEN-Chitosan disiapkan dengan inkubasi larutan yang mengandung campuran
genipin dan chitosan dalam rasio yang berbeda. Mereka berubah menjadi biru tua dan
menjadi buram, karena jumlah genipin yang berlebihan. Setelah liofilisasi, mereka
menghasilkan perancah mirip spons seperti makropor [57]. Sitokompatibilitas in vitro
dari hidrogel ditunjukkan dengan L929 fibroblas dengan metode MTT, sesuai dengan
penulis lain [58]. Struktur makrofor hidrokel chitosan dapat disesuaikan sehingga mereka
meningkatkan modulus penyimpanannya, dan juga mengubah sifat hidrofilisitas dan
pembengkakannya. Hidrogel berikatan silang tidak menginduksi efek sitotoksik. Flow
cytometry menunjukkan bahwa fibroblas memiliki viabilitas yang baik pada permukaan
gel berikatan silang (88,4% -90,9%) yang mendekati lempeng kosong (93,7%) dan film
chitosan (92,8%). Tidak ada perbedaan kuantitatif pada sel apoptosis atau sel mati,
sehingga ikatan silang memiliki sedikit pengaruh terhadap viabilitas, namun kekakuan
merupakan parameter terpenting yang mempengaruhi pertumbuhan sel dan
memungkinkan untuk mengganti sel dengan bentuk bulat dan menyebar pada modulasi
kekakuan hidrogel. . Keselamatan penggunaan cukup dikonfirmasi, sehingga komposit
kitosan telah dipertimbangkan mengingat produksi biomaterial dengan sifat fisikokimia
dan biologis yang diinginkan untuk rekayasa jaringan. Perlu ditekankan bahwa keamanan
genipin telah ditunjukkan oleh sejumlah pendekatan, misalnya, meskipun pigmen biru
yang berasal dari genipin dan aminoacids telah digunakan sebagai pewarna nilai tambah
untuk makanan selama 20 tahun terakhir di Asia Timur, biokimia mereka. signifikansi
telah dieksplorasi baru-baru ini seperti tahun 2012 oleh Wang, QS et al. yang
menunjukkan bahwa pigmen biru tidak hanya menghambat ekspresi gen iNOS dan COX-
2 yang diinduksi oleh LPS dan produksi NO dan PGE2 berikutnya, namun mengurangi
 produksi sitokin (TNF-α, IL-6) yang diinduksi oleh LPS pada makrofag oleh
penghambatan dari signaling cascades yang mengarah ke aktivasi NF-κB [33]. Oleh
karena itu, hasil penelitian terbaru memberikan bukti ilmiah yang kuat untuk pigmen biru
untuk dikembangkan sebagai nutraceuticals untuk pencegahan dan pengobatan penyakit
radang kronis. Oksida nitrat diakui sebagai mediator dan pengatur respon inflamasi yang
diproduksi dalam jumlah tinggi oleh iNOS dalam sel inflamasi yang diaktifkan. Pigmen
biru ditemukan untuk menghambat produksi NO yang diinduksi LPS (Gambar 3). Juga
ekspresi mRNA iNOS diturunkan oleh pigmen biru, yang memastikan efek
penghambatan pigmen biru pada produksi NO. Pekerjaan itu juga menunjukkan bahwa
pigmen biru menghambat ekspresi mRNA iNOS pada makrofag yang distimulasi LPS.
Efek pigmen biru pada ekspresi iNOS yang dipicu oleh LPS mungkin dihasilkan dari
penghambatan transkripsi gen iNOS. Selanjutnya, efek anti-inflamasi pigmen biru dapat
dikaitkan dengan efek penghambatannya pada produksi PGE2 melalui pencekikan gen
COX-2 dan ekspresi protein. Oleh karena itu, selain aman, genipin juga bermanfaat
karena tindakan positifnya saat hadir dalam makanan fungsional. Gambar 3 Gambar 3
Efek antiinflamasi pigmen genipin + glisin biru pada edema pada tikus. Depresi edema
maksimum diamati 1 jam setelah induksi edema. Khususnya, perawatan dengan pigmen
biru pada edema 120 mg / kg dikurangi dengan ca. 22% (dari sekitar 60% sampai 38%)
pada 1 jam, sedangkan ... 1.4. Cakupan Oleh karena itu, cakupan artikel ulasan ini adalah
evaluasi data terkini mengenai judul hidrogel dan perancah silang untuk (i) deskripsi dan
apresiasi terhadap kemajuan eksperimental yang diramalkan pada artikel ulasan
sebelumnya oleh Muzzarelli [1], dan benar-benar dilakukan paling banyak. tahun
terakhir; (ii) khasiat senyawa tersebut dalam upgradisifat kimia dan karakteristik
biokimia dan kapasitasnya untuk memodulasi perilaku sel dan sel induk secara in vitro
dan in vivo; (iii) perawatan untuk regenerasi kartilago sendi; dan (iv) pengobatan dan
bahan untuk osteogenesis yang ditingkatkan dan untuk regenerasi tulang, secara opsional
termasuk komposit anorganik. Aspek yang terkait dengan sumber bahan baku, kimia
analitik, pengiriman obat, dan ekonomi juga dipertimbangkan. Memahami sinergi kedua
bahan kelas komposit ini dalam memberikan keamanan penggunaan dan khasiat dalam
uji coba pra-klinis merupakan tujuan lebih lanjut dari karya ini. Pergi ke: 2. Terapi
Berdasarkan Genipin-Crosslinked Chitosan Alginate Complex Teknologi enkapsulasi
 memungkinkan pengiriman jangka panjang dari produk terapeutik yang diinginkan ke
bagian tubuh tertentu tanpa menggunakan obat penekan immuno. Dalam penelitian oleh
Nayak dkk. mikrokapsul yang tersusun dari mikroba sericin dan alginate sebagai inti
bagian dalam dengan kulit luar chitosan disiapkan untuk aplikasi terapeutik [59]. Biji
mikro sericin-alginate disiapkan melalui gelatin ionotropika dengan voltase tinggi dan
dilapisi dengan chitosan dan terikat silang dengan genipin, ukurannya (300-800 μm)
bergantung pada laju alir dan tegangan yang diberikan. Alamar Blue assay dan confocal
microscopy menunjukkan viabilitas sel yang tinggi dan distribusi sel yang seragam di
dalam mikrokapsul serikin-alginat-chitosan yang mengindikasikan lingkungan mikro
internal yang baik untuk sel-selnya. Sebenarnya konsumsi glukosa, tingkat sekresi urea
dan kandungan albumin intraseluler meningkat pada mikrokapsul. Kitosan berkhasiat
genipin menyediakan lapisan fluoresen di sekitar kapsul, yang tampak berwarna biru
muda dalam cahaya tampak. Lapisan ini wajib untuk stabilitas kimia kapsul, terutama
saat menangani pengiriman in vivo untuk tujuan terapeutik: sebenarnya, hepatosit yang
dienkapsulasi menghasilkan populasi yang diperkaya sel metabolisme dan fungsional
aktif dari kegunaan terapeutik pada gagal hati akut. Kaitan balik kovalen dengan genipin
mikrokapsul chitosan alginat memberikan peningkatan signifikan kekuatan dan
ketahanan mikrokapsul sambil mempertahankan permeabilitas. Aldana dkk. melaporkan
kompatibilitas genipin dengan polimer lain seperti polivinilpirolidon dan kesesuaiannya
dalam pembuatan bahan keras dan keras untuk pelepasan obat yang dikendalikan [60].
Penyerapan uap dapat dimodulasi bahkan di poliamida 6,6 kain bila permukaan
difungsikan dengan bantuan hidrogel GEN-chitosan [61]. Perancah alginat berlapis
kitosan dibuat dengan cara lapisan demi lapis oleh Colosi et al. untuk pengiriman obat
Sistem dispensasi berdasarkan dua jarum koaksial menghasilkan larutan alginat dan
kalsium klorida yang menghasilkan serat alginat sesuai dengan pola yang dirancang.
Lapisan serat alginat dengan kitosan dan ikatan silang berikutnya dengan genipin
memastikan daya tahan perancah. Keterikatan silang tersebut diberikan ke perancah
struktur kimia hirarkis. Fungsi hati yang khas seperti sekresi albumin dan urea dan
induksi aktivitas enzim CYP3A4 setelah pemberian obat cukup baik [62]. Karakteristik
kimia lebih lanjut dari kombinasi GEN-chitosan alginate dilaporkan oleh sejumlah
penulis: Silva et al. [63,64] menilai kelebihan teknik LbL untuk menghasilkan permukaan
 biomimetik fungsional dengan sifat mekanik dan kimia yang disetel, dan untuk
pembuatan tabung multilayer berstrukturnano yang menggabungkan LBL dan pencucian
template. Karya-karya tersebut menunjukkan fleksibilitas dan kelayakan perakitan LbL
untuk menghasilkan perangkat berstrukturnano termasuk membran bebas dengan
permeabilitas merdu, selain sifat mekanik dan biologis, dengan menggunakan rasio molar
masing-masing polisakarida dan genipin. Mikrokapsula dengan inti kalsium alginat dan
lapisan antitosan alginat berganda genipin disiapkan oleh Ranganath et al. [65] dengan
kontrol yang baik terhadap ukuran, ketebalan membran dan densitasnya. Yang penting,
penulis saling terkait ketebalan membran, konstanta laju reaksi chitosan + alginat, dan
koefisien difusi. Immunoglobulin dan karbonat anhidrase besar ditemukan untuk segera
menyebar. Dibandingkan dengan mikrokapsul lainnya, mikrokapsul yang diberi genipin
menunjukkan permselektivitas yang meningkat dari senyawa nutrisi dan protein kecil,
sementara tidak termasuk antibodi. Pergi ke: 3. Sel Induk dalam Pengobatan Regeneratif
Banyak penelitian telah menunjukkan bahwa sel induk yang berasal dari adiposa berasal
dengan mudah diperoleh dari limbah sedot lemak atau artroskopi, dan dipertahankan
dalam keadaan yang tidak berdiferensiasi stabil selama ekspansi in vitro [66]. Meskipun
ASC dapat diinduksi ke fenotip chondrogenik dengan faktor pertumbuhan, hal itu akan
membuat mereka cocok untuk regenerasi tulang rawan, penggunaan faktor pertumbuhan
eksogen mungkin tidak praktis untuk penggunaan klinis karena masalah ekonomi atau
peraturan. Sebagai gantinya, perancah bioaktif yang memamerkan apsinyal lingkungan
yang tepat dapat memberikan pendekatan alternatif untuk mendorong ASC
chondrogenesis. Transplantasi sel induk memiliki potensi yang sangat besar dalam
pengobatan regeneratif [67,68]. Mikroenkapsulasi sel punca merupakan prosedur yang
efisien untuk pelestarian viabilitas dan sifat biokimia terutama untuk terapi penyakit
jantung. Paul dkk. melaporkan penggunaan mikrokapsul yang terbuat dari GEN-chitosan
alginat untuk pengiriman sel induk adiposa manusia (hASC) dengan tujuan untuk
meningkatkan retensi implan pada miokard infark miokard untuk manfaat terapeutik
maksimum [69]. Pada kondisi hipoksia in vitro, sel mikroenkapsulasi mengalami
peningkatan jumlah faktor pertumbuhan endotel vaskular aktif biologis yang lebih aktif
(VEGF), sehingga potensi in vivo diteliti dengan menggunakan tikus imunokompeten
setelah induksi infark miokard. Untuk ini, kelompok tikus menerima mikrokapsul kontrol
 kosong, atau hassoc bebas 1,5 × 106, atau heng 1,2 mikrosukapasitas 1,5 × 106. Hasil
menunjukkan retensi yang signifikan (3,5 kali lipat lebih tinggi) dari hias
mikroenkapsulasi dibandingkan dengan hASC gratis 10 minggu setelah transplantasi.
HASC mikroenkapsulasi menyebabkan ukuran infark yang dilemahkan dibandingkan
dengan kelompok hASC bebas dan kelompok mikrokapsul yang kosong, disamping
meningkatkan vaskulogenesis dan peningkatan fungsi jantung. Oleh karena itu,
mikrokapsul GEN-chitosan alginat dianggap sebagai bantuan yang valid untuk
peningkatan signifikan fungsi jantung. Poros kartilago berpori (CDM) dari kartilago
artikular porcine menginduksi diferensiasi chondrogenik in vitro sel punca manusia
dewasa atau kondrosit tanpa faktor pertumbuhan eksogen. Cheng et al. 2011 menyelidiki
perancah CDM yang dihubungkan silang dengan genipin, diunggulkan dengan ASC, dan
kemudian dikultur selama empat minggu [70]. Dengan menggunakan larutan genipin
0,05%, tingkat ikatan silang 50% dicapai (melibatkan sekitar satu setengah dari unit lisin
atau hidroksilisitas yang tersedia dalam hubungan silang), dan konstruksi unggulan ASC
tidak menunjukkan kontraksi yang signifikan selama kultur. Selain itu, ekspresi gen
spesifik tulang rawan, akumulasi makromolekul kartilago dan pengembangan sifat
mekanik sebanding dengan CDM asli, sehingga membuat matriks yang diturunkan dari
tulang rawan yang dihubungkan silang dengan genipin merupakan biomaterial bebas
kontraksi yang sesuai untuk rekayasa jaringan tulang rawan. [71]. Kontraksi tulang rawan
rekayasa in vivo selalu menciptakan celah antara konstruksi dan kartilago asli di
dekatnya. Fakta bahwa integrasi perancah yang direkayasa dengan jaringan asli di
sekitarnya sangat penting untuk kedua fungsi langsung dan kinerja jangka panjang dari
jaringan ini memungkinkan seseorang untuk menghargai kontribusi penting genipin
dalam memecahkan masalah ini yang sangat penting untuk perbaikan kartilago artikular
karena tulang rawan asli sekitarnya telah Potensi regenerasi yang langka. Pergi ke: 4.
Genipin-Crosslinked Chitosan dalam Infeksi Lambung Mikrosfer Chitosan telah
dieksplorasi untuk aplikasi farmasi sebagai hidrogel pengiriman obat khususnya untuk
pengobatan infeksi lambung Helicobacter pylori, karena kapasitas mukoadesifnya. H.
pylori adalah patogen manusia yang penting yang mengenali reseptor karbohidrat
tertentu, seperti reseptor fucose, dan menghasilkan sitotoksin vacuolasi, yang
menginduksi respons inflamasi dan memodulasi integritas sel sel epitel gastrik. Nogueira
 dkk. [72] mengajukan aplikasi mikrosfer chitosan yang berbeda yang menangkap dan
menyingkirkan bakteri tersebut dari pasien yang terinfeksi, memanfaatkan kapasitas
perekat untuk mucin dan bakteri: mereka mempelajari pengaruh genipin pada stabilitas,
ukuran, muatan dan mucoadhesion mikrosfer chitosan dalam asam. media. Mikrosfer
Chitosan (sekitar 170 μm) diproduksi dengan gelatin ionotropika dan kemudian terikat
secara kovalen dengan genipin ke berbagai luapan. Potensi zeta dan kapasitas
pembengkakan mikrosfer chitosan menurun seiring dengan meningkatnya ikatan silang.
Ketika direndam dalam cairan lambung yang disimulasikan dengan pepsin selama tujuh
hari, mikrosfer yang berkaut silang dengan genotida 10 mM selama 1 jam menghasilkan
keseimbangan antara kapasitas untuk mengikat mucin, dan kelompok amino bebas yang
diperlukan untuk menjaga stabilitas kitosan di lingkungan asam, dan memiliki waktu
retensi lambung. ca. 2 jam in vivo; mereka tidak larut tetapi hanya dua kali lipat ukuran
mereka untuk ca. 345 μm Meskipun mereka mempertahankan mucoadhesion in vitro
mereka untuk lambung lambung yang mudah larut pada pH 3.6 dan 6.5 dan menyajikan
waktu retensi in vivo ca. 2 jam di perut tikus, mereka tidak dapat menyebabkan hasil
yang memuaskan karena adanya pepsin [72]. Delmar dkk. menemukan bahwa meskipun
reaksi antara kitosan dan genipin tampaknya lambat dan mungkin memerlukan waktu
hingga empat hari untuk menyelesaikannya, perubahan pH dalam kisaran kecil 4,00-5,50
secara dramatis mempengaruhi reaksi, menghasilkan hidrogel yang berbeda dalam
penampilan dan sifat [73] . Kemampuan memanipulasi properti hydrogel es, sementara
menyesuaikan kondisinya sedikit, menyediakan alat yang kuat dan berguna saat
merancang hidrokel kitosan. Selanjutnya, ketergantungan sifat pada modifikasi pH kecil
sangat penting bila hasil yang dapat diulang dan dapat diandalkan dicari. Di sisi lain, Lin,
Y.H. et al. [74] menggabungkan kitosan terkonjugasi fasa dengan genipin pada
nanopartikel fasa-chitosan / heparin genulin untuk merangkum amoksisilin dan secara
langsung membuat kontak dengan bakteri di epitel gastrik. Nanopartikel secara efektif
mengurangi pelepasan obat ke asam lambung, dan kemudian melepaskan amoksisilin
untuk menghambat pertumbuhan H. pylori, dan mengurangi gangguan protein sel di
daerah yang terinfeksi. Dengan demikian, dengan nanopartikel amoksisilin, efek
pembersihan H. pylori yang lebih lengkap diamati, dan peradangan lambung H. pylori
terkait pada model hewan yang terinfeksi pasti berkurang. Thakur dkk. juga
menggunakan manik-manik GEN-chitosan yang sangat stabil dalam cairan lambung dan
usus yang disimulasikan untuk pelepasan amoksisilin [75]. Aspek lebih lanjut dari Efikasi
Antibakteri yang Disempurnakan Efektivitas antibakteri GEN-chitosan telah dinilai
dengan baik oleh Wang R et al. yang mencampur poli polimer antifouling (sulfobetaine
methacrylate) dan kitosan N - [(2 - hidroksi - trimetilamonium) propil] chitosan, dalam
satu lapisan ke permukaan silikon, dengan menggunakan genipin [76]. Yu, S.H. et al.
Kacang kitosan yang diolah dengan fucoidan dengan tujuan pemberian oral berberine
untuk menghambat pertumbuhan bakteri [20]. Selanjutnya, kompleks partikel
nanopartikel + dikembangkan dengan menggabungkan nanopartikel chitosan + fucoidan
berberine pada manik-manik chitosan yang dikupas fukoid. Ini berfungsi sebagai
pembawa obat untuk menunda pelepasan berberin dalam cairan lambung simulasi,
dengan waktu tempuh 2 jam, dan secara efektif menghambat pertumbuhan patogen klinis
yang umum. Pemberian obat melalui mukosa oral adalah strategi yang menarik karena
kepatuhan pasien yang baik, efek obat terlarang yang berkepanjangan, dan penghindaran
metabolisme obat gastrointestinal dan eliminasi first-pass. Sistem pengiriman obat oral
perlu mempertahankan kontak intim dengan lapisan mukosa dalam kondisi basah rongga
mulut cukup lama untuk memungkinkan pelepasan dan penyerapan obat. Chitosan dan
turunannya telah diperiksa untuk tujuan ini. Secara khusus, kitosan carboxymethyl-
hexanoyl yang diberi genosin, turunan kitosan amphiphil dengan kemampuan
pembengkakan yang cukup baik, sitokompatibilitas dan kelarutan dalam air, dipelajari
pada kondisi fisiologis [15]. Terinspirasi oleh adhesi basah protein perekat kerang laut,
Xu, J.K. et al. [77] mengembangkan sistem pengiriman obat oral menggunakan katekol-
chitosan hidrogel. Kelompok fungsional katekol secara kovalen dihubungkan dengan
kitosan, dan kitosan modifikasi yang dihasilkan saling terkait dengan genipin. Kelompok
katekol secara signifikan memperbaiki mucoadhesion in vitro saat bersentuhan dengan
membran mukosa porselen sampai 6 jam, sedangkan hidrogel kitosan kehilangan kontak
setelah 1,5 jam. Sistem hidrogel baru mempertahankan pelepasan lidokain selama sekitar
3 jam. Secara in vivo, tambalan bukal menempel pada mukosa bukal kelinci, sehingga
lidokain dipantau dengan mudah pada serum kelinci karena kontak intim yang diberikan
oleh katekol-GEN-chitosan yang sangat mucoadhesen [77]. Pergi ke: 5. Genipin-
Crosslinked Collagen / Gelatin untuk Regenerasi Cartilage Kolagen dan gelatin telah
 diobati dengan genipin dalam sejumlah kasus dengan maksud untuk melibatkan mereka
dalam pengobatan tulang rawan: dalam tinjauan mereka Elzoghby dkk. melaporkan
bahwa mekanisme ikatan silang protein oleh genipin melibatkan kelompok amino bebas
lisin dalam protein [78]. Kemajuan terbaru pada regenerasi tulang rawan telah ditinjau
oleh Muzzarelli dkk. [79] dan Bottegoni dkk. [80]. Karena crosslinker diperlukan untuk
memperbaiki dan mengoptimalkan kekuatan mekanik, porositas dan degradabilitas
biopolimer tunggal dan kompositnya, Bi, L. et al. perekat chitosan + kolagen berikatan
silang dengan menggunakan genipin [81]: kekuatan tekan secara langsung bergantung
pada konsentrasi genipin dalam interval 0,1% sampai 1,0% dan pada waktu silang.
Ukuran pori, tingkat degradasi dan rasio pembengkakan berubah secara signifikan
dengan kondisi pengikatan silang yang berbeda. Untuk bahan kolagen antitosan +
kolagen genipin yang serupa, Yan, L.P. et al. menemukan bahwa kondrosit kelinci
menempel dengan baik ke permukaan perancah dan mencapai pertemuan, sehingga
mereka menyarankan agar kolagen silang berikatan silang plus kolagen bisa menjadi
formulasi yang menjanjikan untuk perangko kartilago artikular [82]. Genitina-silang
berkelok-kelok rekombinan manusia (lebih disukai karena homogenitasnya dalam berat
molekul dan sifat yang didefinisikan secara tepat) secara efisien diinternalisasi dalam sel
tanpa menginduksi sitotoksisitas. Genipin juga digunakan untuk menstabilkan struktur
gelelet-dekstran gelatin yang mengenkapsulasi teh polifenol untuk menghindari
disintegrasi setelah pengenceran: misel berikatan silang stabil tanpa perubahan ukuran.
Kuo dkk. lebih disukai ekstrak hipofisis sapi untuk mempelajari pembentukan
neocartilage pada perancah chitosan / gelatin, dan kovalgia sapi jantan yang dikuduskan
di dalamnya selama 28 hari; kolagen-II disintesis dalam konstruksi, sehingga
menunjukkan fenotipe chondrositik dari kondrosbosit yang berkembang biak [83]. Yin
dkk. dicampur chitosan plus polylactide dengan kolagen-II untuk membuat komposit
berlapis yang berpotensi berlaku dalam perbaikan tulang rawan [84]. Pembuatan struktur
berpori kolagen laut yang berkaut silang dengan genipin di bawah tekanan tinggi CO2
diselidiki oleh Fernandes-Silva et al .: kolagen kulit ikan hiu digunakan untuk
menyiapkan prescaffolds dengan pengeringan beku. Di bawah atmosfer CO2 yang padat,
ikatan silang kolagen dengan genipin berlarut-larut selama 16 jam [85]. Modulasi
proliferasi dan sintesis matriks kondrosit dengan kompresi dinamis pada kitosan berganda
 genipin ditambah perancah kolagen juga diamati [86]. Kompresi dinamis merupakan
rangsangan fisik penting untuk fisiologi kondrosit dan rekayasa kartilago artikular.
Kromosom kelinci diunggulkan dalam kitosan berganda genipin plus kolagen dan
kemudian dikultur selama tiga hari sebelum kompresi siklik dua minggu dengan
regangan 40%, 0,1 Hz, dan 30 menit / hari. Proliferasi sel dan deposisi GAG total secara
langsung bergantung pada kuantitas genipin dan kompresi dinamis. Sementara mikrosfer
gelatin biokompatibel sepenuhnya untuk pemberian obat intra-artikular disiapkan oleh
Kawadkar dkk. [87], ikatan silang emulsi digunakan oleh Kawadkar dan Chauhan [88]
untuk menyiapkan mikrosfer chitosan dengan berbagai konsentrasi genipin dan rasio
obat-ke-polimer untuk pemberian flurbiprofen intra-artikular. Ukuran partikel rata-rata
berada pada kisaran 5,18-9,74 μm dengan jebakan obat hingga 81%. Mikrosfer yang
dioptimalkan mampu melepaskan obat ini lebih dari 108 jam. Biokompatibilitas
mikrosfer pada sendi lutut tikus dikonfirmasi oleh histopatologi. Data farmakokinetik
menunjukkan pelepasan diperpanjang flurbiprofen dari mikrosfer dibandingkan dengan
larutan, sehingga GEN-chitosan memenuhi syarat sebagai kendaraan obat suntik.
Menurut data in vivo, mikrosfer yang terbuat dari kitosan dan genipin aman untuk
synovia dan mempertahankan konsentrasi obat di dalam sendi lutut rematik. Sebenarnya,
Sarem dkk. menjelaskan bagaimana genipin membantu chitosan dengan perancah agar-
agar bertindak sebagai pengganti jaringan lunak beban-beban dan menyimpulkan bahwa
kitosan berikatan dengan 1% genipin 40 dengan perekat gelatin 60, disiapkan pada suhu
kamar selama 24 jam adalah pengganti yang menjanjikan dari segmen load- membawa
jaringan lunak. Karena karakteristik hidrogel dari biopolimer tersebut, sejumlah besar
cairan dapat dipertahankan dalam strukturnya. Oleh karena itu, mereka dapat
menghasilkan modulus tekan tinggi yang sebanding dengan jaringan lunak bantalan
muatan asli: bahan ini dapat digunakan untuk perawatan atau perbaikan kartilago
artikular dan meniskus. Hal ini dikaitkan dengan pembentukan kompleks polielektrolit
melalui interaksi ionik antara gugus amino kitosan dan gugus anion dalam gelatin.
Akhirnya, keberadaan genipin menekan depolimerisasi kitosan oleh lisozim, sementara
masih memungkinkan degradasi dan pembentukan jaringan terbentuk yang memadai,
yaitu, remodeling jaringan di bawah kondisi beban [89]. Perekat chitosan + gelatin
antagonis genipin yang mengandung ekstrak hipofisis sapi cukup efektif dalam regenerasi
neokartilase. Pewarnaan histologis dan imunokimia menunjukkan chondrogenesis dalam
kultur kondrosit lutut sapi dengan menggunakan perancah tersebut dalam media yang
mengandung ekstrak hipofisis sapi. Sebagai tambahan, kolagen-II disintesis dalam
konstruksi, menunjukkan fenotipe chondrositik dari kondom lutut sapi yang berkembang
biak di cerobong tersebut selama 28 hari budaya. Dalam prakteknya, penambahan ekstrak
ke medium kultur mempercepat regenerasi kartilago artikular [83]. Perancah yang terbuat
dari kitosan, kolagen dan gelatin disiapkan dengan bantuan larutan jenuh karbon dioksida
[90], pelarutan kitosan dalam asam karbonat tidak lagi menjadi keingintahuan
laboratorium. Chitosan dilarutkan pada saturasi suspensi chitosan koloid berair dengan
gas CO2 dalam kondisi ringan: tekanan atmosfir dan suhu kamar. Karena CO2 larut
dalam air, pH menurun karena pembentukan asam karbonat. Ini adalah demonstrasi yang
baik yang biasa digunakan asam anorganik dan organik tidak lagi diperlukan untuk
pembubaran kitosan. Selain itu, pendekatan ini menyederhanakan dan mengoptimalkan
persiapan bahan pembungkus luka, di mana adanya ion penghambat yang tidak
diinginkan dan sitotoksik seperti asetat dihindari. Penggunaan CO2 untuk pembubaran
chitosan membuat persiapan perancah lebih mudah direproduksi dan berkelanjutan secara
ekonomi. Data porositas ada pada Tabel 1; nilai parameter lainnya adalah: derajat disolusi
(30%), degradasi yang disebabkan lisozim (5% setelah 168 jam), sifat antioksidan yang
baik, dan terutama tidak adanya sitotoksisitas terhadap fibroblas NIH 3T3 tikus, viabilitas
berada pada tingkat kontrol. Fibroblas tumbuh secara merata di pori-pori struktur protein
kitosan karena pembengkakan perancah dan distribusi kolagen yang optimal, dimana sel-
sel memiliki afinitas tinggi. Ketika perancah chitosan + protein diobati dengan genipin,
intensitas warna menunjukkan tingkat ikatan silang, seperti yang ditunjukkan pada
Gambar 4. Tabel 1 Tabel 1 Rata-rata luas penampang pori dan porositas cerobong
chitosan-protein yang dihubungkan silang dengan konsentrasi genipin yang berbeda.
Waktu dan suhu reaksi tidak ditentukan dan tergantung pada protokol yang diadopsi.
Gambar 4 Gambar 4 Perancah protein Chitosan berkaut silang dengan genipin pada
berbagai konsentrasi, dalam kondisi yang sama. Intensitas warna biru merupakan indikasi
tingkat ikatan silang. 5.1. Fibrin, Poli-l-Lysine, Heparin, Hyaluronan Fibrin adalah
biopolimer lain yang dipelajari bersamaan dengan kitosan dan genipin, untuk
mengembangkan mikrosfer biokompatibel. Manusia chondrocytes yang dikultur pada
substrat komposit dapat bertahan selama periode kultur (28 hari): pada akhirnya substrat
komposit menunjukkan produksi kolagen-II dan 13% lebih tinggi dari glikosaminoglikan
sulfat dengan jumlah yang ditemukan pada 14 hari. The de-differentiated chondrocytes
yang dikultur dalam monolayer pada komposit dapat memperoleh kembali karakteristik
sel yang berbeda tanpa menggunakan substrat tiga dimensi atau media khondrogenik
[91]. Nihn dkk. membentuk kerangka kerja kuantitatif untuk sistem pelepasan terkontrol
untuk mengantarkan genipin ke dalam hidrogel berbasis protein. Kopling kovalen antara
genipin dan amina primer pada gel fibrin memenuhi kinetika orde kedua dalam
konsentrasi genipin dengan energi aktivasi efektif -71,9 ± 3,2 kJ · mol-1. Gumpalan
fibrin berikatan dengan genulin resisten terhadap degradasi fibrinolitik yang diukur
dengan reologi. Menariknya, genipin aktif dapat dikirim dari matriks poli (d, laktida-ko-
glikolida) ke gel pada tingkat yang sebanding dengan tingkat karakteristik penggabungan
jaringan fibrin. Poli-l-lisin, homopolimer dari Lys aminoacid esensial, telah digunakan
dalam karya lain sebagai lapisan kultur jaringan standar untuk meningkatkan adhesi
seluler. Film yang diproduksi setelah mencampurnya dengan chitosan meningkatkan
pelekatan seluler ke kitosan. Genipin meningkatkan dan mempertahankan kentalitas
campuran kitosan + poli-l-lysine [92]. Dalam artikel oleh Mekhail dkk, viabilitas
fibroblas ditingkatkan lebih dari enam kali lipat setelah diobati dengan genipin gel yang
mengandung berat hampir sama dari dua polimer; proliferasi ditingkatkan hingga lima
lipatan. Fibroblast viabilitas meningkat secara signifikan setelah mengikat silang gel
60:40 dan 50:50; sementara itu tidak pada 100 dan 80:20 gel [93]. Hal ini sesuai dengan
data kelompok lain yang melaporkan bahwa genipin meningkatkan biokompatibilitas
berbagai formulasi chitosan [94,95,96]. Heparin terikat secara kovalen ke perancah
chitosan dengan menggunakan genipin, yang terikat faktor pertumbuhan fibroblas-2
(FGF-2) sambil mempertahankan aktivitas biologisnya. Pada 1 μg / mL sekitar 80% FGF-
2 terikat pada perancah yang menunjukkan sitokompatibilitas yang baik dan oleh karena
itu dapat digunakan untuk pengiriman sel induk saraf dan faktor pertumbuhan untuk
perbaikan sistem saraf pusat [97]. Demikian juga, karaginan dan karboksimetilselulosa
telah dipelajari bersamaan dengan genipin [98,99]. Akhirnya, beberapa kata di
hyaluronan, polisakarida memiliki aspek kesamaan kimia dengan kitosan. Jalani dkk.
[100] melaporkan sebuah metode untuk menghasilkan hidrogel injeksi yang keras,
 termogger, aman, yang terbuat dari chitosan dan hyaluronan yang saling terkait silang
dengan β-gliserilofilia dan genipin. Gel yang sangat homogen terbentuk dalam waktu
setengah jam, yaitu lebih cepat dari pada gel yang terikat silang dengan genipin atau β-
gliserofosfat. Kekuatan geser hidrogel silang silang adalah 3,5 kPa, lebih tinggi dari pada
gel gel berbasis kitosan yang dilaporkan. Sel kondrosit dan nukleus pulposus berkembang
di dalam gel dan menghasilkan sejumlah besar kolagen-II. Gelasi berlangsung secara in
vivo dalam waktu singkat setelah injeksi pada tikus dan tetap terlokalisir selama lebih
dari satu minggu sementara tikus-tikus itu sehat dan aktif [100]. Pembengkakan dan
degradasi kompleks chitosan + hyaluronan dapat dikendalikan dengan bantuan genipin.
Optimalisasi parameter tersebut penting karena sel harus terlebih dahulu mematuhi
perancah dan kemudian berkembang biak. BMP-2 diimobilisasi di kompleks dengan daya
tarik elektrostatik. Dengan demikian, pembebanan tinggi dan pelepasan BMP-2 yang
berkelanjutan tercapai. Reverse transcriptase PCR menunjukkan bahwa BMP-2 yang
difasilitasi difasilitasi osteogenesis pada semua tahap, ini menjadi faktor kunci untuk
regenerasi tulang [101]. 5.2. Genipin Pengobatan Sel Tendon dan Matriks Fesse l et al.
mempelajari efek pengobatan genipin pada sel tendon dan matriksnya, dengan melihat ke
aplikasi in vivo untuk memperbaiki air mata tendon parsial [102]. Mereka mengamati
bahwa kelangsungan hidup sel pasca-perawatan mungkin memadai untuk akhirnya
mengisi kembali dan menstabilkan jaringan. Pigmentasi biru superfisial yang secara
kualitatif menunjukkan genipin didokumentasikan. Fluoresensi sampel yang melekat (λex
510-560 nm; λem 590 nm) diukur dengan bantuan mikroskop fluoresensi: fluoresensi
seragam di seluruh bagian potong menunjukkan ikatan silang homogen. Menurut model,
viabilitas sel pada eksplan tendon bergantung pada konsentrasi, namun kelangsungan
hidup sel tidak tergantung waktu. Model tersebut memperkirakan bahwa ca. 50% sel akan
tetap bertahan pada konsentrasi genipin 6,2 mM yang diterapkan selama 72 jam, dengan
menurunkan viabilitas sel setelah inkubasi berkepanjangan. Sementara banyak sel tetap
hidup dengan genipin 5 mM atau kurang untuk rentang waktu yang dipelajari, efek pada
metabolisme sel terjadi pada konsentrasi yang lebih rendah. Model ini memperkirakan
penurunan aktivitas metabolisme 50% pada 0,4 mM setelah 72 jam, ini konsisten dengan
motilitas sel berkurang pada konsentrasi yang sama. Meski mengurangi ekspresi kolagen-
I juga konsisten dengan aktivitas metabolik yang berkurang, penanda apoptosis dan
 penanda degradasi matriks tidak terpengaruh, ini merupakan temuan yang
menguntungkan mengenai potensi genipin untuk aplikasi in vivo. Ternyata 5 mM (dan
mungkin konsentrasi yang lebih rendah) dapat menyebabkan ikatan silang yang relatif
cepat sambil membiarkan sub populasi sel penduduk tetap hidup. Mengingat aplikasi
klinis dari ikatan silang in situ untuk menangkap perambatan tendon, diperkirakan bahwa
konsentrasi genipin 5 mM atau sedikit lebih rendah dengan paparan 72 jam akan masuk
akal untuk studi in vivo. Perlu ditambahkan bahwa studi tersebut hanya berfokus pada
efek silang yang akut dan relatif cepat, namun tidak menyelidiki apakah pemberian
genipin jangka panjang pada dosis rendah (<1 mM) dapat mencapai efek fungsional
kumulatif, atau mengamati kontinuitas dokumen yang terdokumentasi. efek. Pada tingkat
yang lebih mendasar, sejauh ini para penulis tidak menyelidiki bagaimana hubungan
genipin sebenarnya terbentuk atau tetap stabil di dalam jaringan, aspek-aspek ini
bergantung pada waktu dan konsentrasi [102]. Pergi ke: 6. Regenerasi tulang Chitosan
menghormati pembentukan tulang fisiologis dan proses penyembuhan, dan yang
terpenting, hal itu meningkatkan respons biokimia yang baik, karena sifat imunostimulan
dan kerentanannya terhadap lisozim. Penyembuhan tulang melibatkan sekumpulan
kejadian yang seharusnya tidak diganggu dengan adanya komposit atau perancah. Pada
saat patah tulang, gangguan arsitektur tulang dan jaringan vaskular menyebabkan
hilangnya stabilitas mekanis dan penurunan oksigen dan nutrisi lokal. Respon inflamasi
disertai dengan aktivasi makrofag dan infiltrasi trombosit yang melepaskan berbagai
sitokin, yang mungkin berperan dalam inisiasi proses perbaikan dengan bekerja pada
berbagai sel: sel osteoprogenitor postpartum rekahan tulang dan osteoblas berdiferensiasi
untuk menghasilkan tulang baru. . Proses ini melibatkan faktor pertumbuhan fibroblas
dan protein morfogenetik tulang. Untuk menyediakan persediaan nutrisi penting ke sel,
pembuluh darah baru berkembang menjadi kalus fraktur. Matriks yang terdiri dari
berbagai isotipe kolagen berkembang, yang mungkin penting untuk mempresentasikan
sitokin ke sel reseptor. Fluktuasi kimiawi dan teknologi kitosan memungkinkan peneliti
untuk menyiapkan komposit yang diuraikan: misalnya, penelitian yang bekerja pada
regenerasi tulang dengan bantuan semen tulang telah menjadi lebih halus dalam hal efek
komposit chitosan pada sel yang terlibat dalam proses penyembuhan. Dengan munculnya
nanoteknologi, aplikasi hidroksiapatit nanocrystallite yang tidak beracun secara tidak
 sengaja memanjang dari perbaikan tulang dan penambahan hingga pemberian obat-
obatan, faktor pertumbuhan dan bahan genetik ke tulang: untuk tujuan ini, partikel
dengan ukuran seragam dengan morfologi terkontrol dapat diproduksi oleh menggunakan
makromolekul sebagai template. Sejumlah keuntungan menjadi jelas, terutama bila nano-
hidroksiapatit dikristalisasi dengan menggunakan metode biomimetik, atau bila
biopolimer diserahkan ke biomineralisasi. Nanopartikel hidroksiapatit sangat
mempengaruhi morfologi sel terlampir, sebagai konsekuensi dari adsorpsi protein matriks
ekstraselular dari serum, yang pada gilirannya mengikat prekursor osteoblas. Dengan
demikian, keganjilan tambahan chitosan muncul dari studi terbaru, yaitu kapasitas untuk
mempengaruhi mineralisasi dan aktivitas sel. Chitosan, N-carboxymethyl chitosan,
fibroin dan poly (l-lactic acid) didasarkan pada strategi baru yang berguna untuk
merangsang sel induk menjadi osteoblas, dan membuat ko-kultur osteoblas dan osteoklas.
Dengan bantuan chitosan dan chitosan sulfat, kemajuan penting telah dilakukan pada fase
Penggunaan protein morfogenetik tulang manusia dan rekombinan, khususnya protein
morfogenetik-2 yang menunjukkan efek positif pada setiap tahap regenerasi tulang.
Sekali lagi, kemajuan yang dibuat dalam histologi, kultur sel, dan sitologi disertai oleh
kontribusi penting dari bahan kimia [103,104,105]. 6.1. Osteogenesis yang
disempurnakan Efikasi antibakteri gabungan dan modulasi perilaku osteoblas sangat
penting untuk aplikasi ortopedi. Misalnya, Wu, F. et al. [106] memasukkan genipin
berkaut silang karboksimetilkitosan hidrogel dengan gentamisin dan meningkatkan
adhesi, proliferasi, dan diferensiasi osteoblas selain penghambatan penuh Staphylococcus
aureus. Waktu degradasi kitosan CM dan juga respons seluler bergantung pada kuantitas
genipin. Pembebanan gentamisin tentu saja meningkatkan efisiensi antibakteri, namun
juga bermanfaat untuk respons sel osteoblastik. Secara keseluruhan, biokompatibilitas
hidrogel yang disiapkan dapat disetel dengan menggunakan konsentrasi genipin dan
gentamisin, yang berinteraksi dengan kelompok kimia kitosan yang ada [106]. Cacat
tulang yang diproduksi secara operasi pada model domba dan kelinci telah diobati dengan
chigaans modifikasi kering yang dikekstrusi karena mereka mempromosikan pengerasan
endokondral langsung. Selain itu, pola regenerasi tulang telah dipelajari dalam model
eksperimental osteoporosis dengan protein morfogenetik tulang yang terkait dengan
kitosan [107]. Perancah chitosan + kolagen memiliki efek proliferatif tinggi jika kadar
 asetilasi chitosan tinggi, berapapun berat molekulnya. SEM menunjukkan bahwa
osteoblas MC3T3-E1 tumbuh dengan baik pada semua perancah yang telah diuji. Untuk
menyediakan sistem pengiriman obat baru dan efektif yang dapat meningkatkan
osteogenesis, Wang, G.C. et al. [108.109] mengevaluasi adsorpsi BMP-2 dan pelepasan
protein morfogenetik tulang-2 (BMP-2) pada struktur nano hidroksiapatit superfisial dari
GEN-chitosan yang dilapisi yang menunjukkan efisiensi pemuatan 65% (1,30 μg).
Pelepasan BMP-2 berlangsung selama lebih dari 14 hari dalam cairan tubuh simulasi, dan
menginduksi peningkatan fosfatase alkali, menunjukkan diferensiasi osteogenik BMSC
unggulan. Hydroxyapatite + Perancah GEN-chitosan juga merangsang ekspresi mRNA
dari penanda diferensiasi osteogenik, yaitu osteopontin selama tiga hari, dan osteocalcin
selama 14 hari. Dengan demikian struktur nano biomimetik biomassa superfisial di dalam
perancah komposit mempromosikan diferensiasi osteogenik secara in vitro. Struktur nano
hidroksiapatit di dalam perancah berpori organik bekerja sebagai sumber kalsium dan
agen pelepasan / pelepasan yang menyarankan disain perancah bioaktif untuk rekayasa
tulang. Nano-hidroksiapatit termasuk dalam film GEN-chitosan yang terbukti kehilangan
sitotoksisitas terhadap sel L929 [110]. Chitosan meningkatkan pembentukan tulang dan
tulang rawan karena kesamaan strukturalnya dengan matriks ekstraselular sel tulang.
Ukuran pori dari perancah tradisional bagaimanapun, jarang berada dalam kisaran
optimal untuk pertumbuhan sel (100-400 μm), dan pori-pori tidak cukup saling
berhubungan untuk memungkinkan infiltrasi sel. Selain itu, porositas dan degradabilitas
tinggi dari perancah chitosan membuat mereka terlalu lemah untuk memperbaiki tulang.
Untuk memenuhi syarat untuk aplikasi ini, membran dan perancah harus stabil di
lingkungan yang basah, dan harus tahan terhadap tekanan kimia dan mekanik secara
bersamaan, sehingga perlu distabilkan. Membiarkan infiltrasi sel dan pertukaran nutrisi
dan limbah yang efisien telah menjadi tujuan penting dalam membuat perancah jaringan
yang baik. Pori-pori yang saling berhubungan tidak hanya mencapai tujuan ini tetapi juga
memungkinkan neovaskularisasi yang mencegah terbentuknya inti nekrotik di perancah.
Dalam prakteknya, komputer mikro mengendalikan gerakan lengan robot di arah x dan z
dan platform ke arah y. Jarum dinaikkan 400 μm selama setiap lapisan-langkah ke arah z.
Dengan mengangkat jarum suntik satu lapisan ke arah z, lapisan berturut-turut serat
hidrogel diendapkan ke lapisan sebelumnya dalam pola 0 ° -90 °. Menurut data yang
 diperoleh Liu, I.H. dkk, osteoblas mensekresikan kolagen-I pada minggu pertama dan
secara bertahap dibedakan menjadi osteosit; Selanjutnya, mereka mengekspresikan
fosfatase alkali yang memulai proses mineralisasi dengan menyediakan lingkungan
alkalin dan memfasilitasi pembentukan dan nukleasi kalsium fosfat di perancah 3D-
plitew Gen-chitosan [111]. Dalam hal ini menarik untuk dicatat bahwa artikel yang
disebutkan di atas oleh Colosi et al. [62] berisi informasi terperinci yang berharga
mengenai pendekatan teknologi yang disederhanakan pada pembuatan perancah 3D.
Kehilangan struktur berserat pada kontak dengan larutan berair dapat membatasi
pemanfaatan praktis nanofibers chitosan 3D-diplot atau electrospun. Untuk memenuhi
tuntutan rekayasa jaringan menggunakan [112], ikatan silang pasca elektroda dapat
dilakukan untuk menghambat kelarutan dan memperbaiki sifat mekanik [113]. Penemuan
oleh Lelkes dan Frohbergh menyediakan perancah yang terdiri dari chitosan nanofiber
mineralisasi bergeser genotida, yang dimurnikan secara elektroforesis dan dapat
mendukung pematangan osteoblas [114]. Sel osteoprogenitor, sel mesenkim, sel induk,
dan osteosit, sama-sama cocok. Di daerah ini rangsangan sensitif (cerdas) biomaterial
yang dapat memudahkan regenerasi lesi tulang ukuran kritis, Frohbergh dkk. [115] diuji
perancah biomimetik electrospun dari chitosan yang diharapkan dapat meningkatkan
perbaikan jaringan pada cacat kalvarial ukuran kritis. Tikar serat Chitosan tidak beracun
dan mudah terbakar biokompatibel, dan oleh karena itu nyaman seperti membran filtrasi
dan perancah untuk teknik jaringan. Mereka membandingkan kemampuan in vitro dari
chitosan berkhasiat genipin elektrospun ke perancah analog yang mengandung
hidroksiapatit. Aktivitas metabolisme seluler menunjukkan perilaku biphasic,
menunjukkan proliferasi awal yang diikuti oleh diferensiasi berikutnya untuk semua
perancah. Setelah tiga minggu dalam medium pemeliharaan, aktivitas ALP mMSC yang
diunggulkan ke perancah GEN-chitosan + HAp kira-kira dua kali lipat dari sel yang
dikultur pada GEN-chitosan biasa. Perancah termineralisasi tersebut juga bersifat
osseointegratif in vivo, seperti yang disimpulkan dari regenerasi tulang yang
disempurnakan pada model murine dengan cacat kalvarial ukuran kritis. Pengobatan lesi
menginduksi peningkatan 38% di daerah de novo yang menghasilkan jaringan mineral
setelah tiga bulan, sedangkan perancah polos menyebabkan kenaikan 10%. Perancah
mineral pra-unggulan dengan mMSC menghasilkan 45% pembentukan jaringan mineral
baru dalam cacat. Kehadiran HAp di perancah secara signifikan meningkatkan kapasitas
osseointegratif mereka: sehingga kitosan GEN-chitosan dapat mewakili biomaterial unik
dengan kemungkinan relevansi klinis untuk memperbaiki cacat tulang kistik kritis.
Faktanya, autografts jarang tersedia, dan bahan alternatif menyebabkan integrasi yang
buruk dengan tulang inang, karena tidak adanya periosteum yang mengandung sel
osteoprogenitor dan sangat penting untuk pertumbuhan dan pemodelan ulang jaringan
tulang. Penulis yang sama [116] mengembangkan platform satu langkah untuk membuat
sapu nano elektroda dari chitosan, yang juga mengandung nanopartikel hidroksiapatit dan
saling terkait dengan genipin, untuk merangsang diferensiasi osteoblas dan pematangan
yang mirip dengan periosteum. Diameter serat rata-rata perancah electrospun adalah 227
± 154 nm sebagai putaran, dan meningkat menjadi 335 ± 119 nm setelah ikatan silang
dengan genipin. Modulus Young dari perancah fibrosa komposit adalah 142 ± 13 MPa,
yang serupa dengan periosteum alami [49]. Sementara genipin sangat memperbaiki sifat
mekanik batang komposit, Pu et al. melaporkan bahwa jaringan GEN-chitosan membuat
batang komposit hidroksiapatit jauh lebih stabil daripada kontrol terhadap depolimerisasi
enzimatik. Yang terakhir diuji dengan lisozim selama 72 jam dan hasilnya menunjukkan
tingkat penurunan berat badan sebesar 4% untuk sampel yang kekurangan genipin,
dibandingkan 0,5% untuk sampel yang mengandung genosida. Kekuatan tekuk dan tekuk
tekuk batang berikatan silang bisa mencapai 161 MPa dan 7,2 GPa, masing-masing
dengan ca. 60% dan kenaikan 26% dibandingkan dengan yang tidak berikatan silang.
Oleh karena itu, batang komposit GEN-chitosan + hydroxyapatite dengan sifat mekanik
yang sangat baik berguna untuk fiksasi internal fraktur tulang [117]. Studi rheologi oleh
Pandit dkk. [118] menunjukkan bahwa kekakuan hidrogel yang terbuat dari metilselulosa,
chitosan dan agarosa meningkat pada ikatan silang chitosan dengan peningkatan jumlah
genipin. Berdasarkan hasil ini, gel diikat silang dengan genipin 0,5% (b / v), memiliki
sepertiga kelompok amino dari ikatan silang chitosan, menunjukkan kekakuan 502 ± 64,5
Pa seiring dengan karakteristik optimal untuk mendukung regenerasi tulang. Waktu
gelling menurun dengan meningkatnya konsentrasi genipin. Sekali lagi, efek kimia yang
menguntungkan ini disertai oleh perilaku seluler termodulasi: pada kenyataannya,
proliferasi sel endotel vaskular umbilikalis manusia mengalami penurunan sebesar 10,7
kali dengan meningkatnya kekakuan gel, berbeda dengan fibroblas dan osteoblas, di
 mana ia meningkat dengan kekakuan gel pada 6,37 dan 7,8 kali. , masing-masing.
Ekspresi penanda diferensiasi oleh osteoblas (osteocalcin, osteopontin dan alkaline
phosphatase) meningkat secara signifikan pada gel berikatan silang 0,5% (w / v), yang
juga menunjukkan peningkatan mineralisasi pada hari ke 25. Gels berkaut silang dengan
genipin 0,5% (b / v) menunjukkan penghambatan bakteri yang signifikan [118]. Ge S.H.
et al. mengeksplorasi viabilitas dan diferensiasi sel induk ligamen periodontal pada
perancah GEN-chitosan nanohidroksiapatit in vitro dan in vivo [119]. Perancah sel benih
digunakan dalam model cacat calvarial tikus, dan pembentukan tulang baru dinilai
dengan pewarnaan hematoxylin dan eosin pada 12 minggu pasca operasi. Saat
diunggulkan di scaffol itu sel punca menunjukkan viabilitas yang jauh lebih besar, dan
mengatur penanda tulang yang terkait dengan tingkat yang lebih tinggi daripada kontrol,
sehingga perbaikan tulang calvarial diperoleh. 6.2. Kemajuan Teknis, Pengetahuan dan
Cara Mengenal Novel Genipin secara spontan menyilang silang gel, mikrosfer, dan serat
(Gambar 5), bahkan dengan adanya PVA, PVP, PEO, fibroin atau gelatin. Data oleh
Nwosu dkk. menunjukkan bahwa mampu memperbaiki kestabilan smart-chitosan + PVP
cerdas dengan manipulasi fisik semata tanpa mengubah komposisi kimia awal adalah
aspek aplikasi medis potensial, misalnya pada pembalaan luka dan pemberian obat [120].
Gambar 5 Gambar 5 Serat serat khitosan genulin berikatan silang yang khas yang
diperoleh dari matras kitosan electrospun kemudian diobati dengan genipin: bentuk
nanofibrous diawetkan. Perancah GEN-Chitosan + bioglass + PVP disiapkan oleh Yao
Q.Q. et al. [121]. Peningkatan ketahanan terhadap degradasi enzimatik dari perancah
diperoleh sambil meningkatkan biokompatibilitas dan porositas perancah bioglass untuk
adhesi yang baik dan proliferasi sel-sel MC3T3-E1 pra-osteoblas. Yang terakhir di dalam
perancah menunjukkan bundel F-actin yang terbentang dengan baik setelah inkubasi
empat hari. Struktur ini, yang dikenal sebagai tunneling nanotube, dapat menengahi
transfer antarelel organel, komponen membran plasma dan zat sitoplasma. Selanjutnya,
perancah tersebut memenuhi syarat untuk pengiriman vaksin vankomisin yang terkontrol.
Sementara beberapa laboratorium melaporkan bahwa genosin 0,025% cukup untuk
sepenuhnya menyambung chitosan, Austero et al. [122] dan Donius dkk. [123]
menggunakan 0,10% untuk dua alasan: pertama, kelebihan pengikat silang ditambahkan
untuk bereaksi dengan semua gugus amino chitosan; Kedua, pada konsentrasi kurang dari
 0,10%, tikar larut dalam larutan asam dan netral. Konsentrasi 0,10% memungkinkan
dilakukannya perbaikan stabilitas dan fleksibilitas. Nilai tipikal untuk tikar serat kitosan-
genipin adalah diameter serat 176 ± 106 nm; porositas serat serat 55,5% ± 6,8%; kontak
serat serat per satuan volume 4,45 μm-3 [122,123]. Tim riset yang sama [124]
memproduksi perekat komposit chitosan + hidroksiapatit berserat dengan kandungan
mineral 1 dan 10% berat dengan electrospinning. Serat, berkait silang dengan genipin,
mengandung hidroksiapatit kristalin dengan aditif 10%. Serat Electrospun memiliki
diameter 122-249 nm, di kisaran kolagen berserat yang ditemukan di matriks
ekstraselular tulang. Modulus Young dan kekuatan tarik akhir dari berbagai komposit
berikatan silang berada pada kisaran 2-15 MPa. Osteosit yang diunggulkan ke serat
mineral menunjukkan biokompatibilitas yang baik. Dalam aparatus kultur perfusi dinamis
laju aliran media kultur melalui perancah chitosan mempengaruhi proliferasi sel dan
ekspresi gen penanda tulang. Kelayakan pembiakan sel MG-63 osteoblast pada perancah
chitosan + genipin ditunjukkan oleh Su, W.T. et al. [125] yang mengkonfirmasi bahwa
perfusi aliran budaya dapat meningkatkan distribusi dan kelimpahan seluler pada
perancah berpori. Sebenarnya, jaringan mineral didistribusikan ke seluruh area perancah
yang dikultur di bawah perfusi aliran; Sebaliknya pada perancah yang dikultur dalam
kondisi statis, depot mineral lebih sedikit terdeteksi. Hasil ini menunjukkan bahwa sel
MG-63 osteoblas yang diunggulkan dalam cerobong chitosan menghasilkan lebih banyak
kalsium dan fosfat dalam kultur dinamis. Pada sel terakhir, sel yang diunggulkan ke
dalam perancah menerima stimulasi mekanis yang disediakan oleh cairan bergerak, dan
menjalani pertumbuhan dan organisasi 3D berlapis-lapis, sehingga meningkatkan gen
yang terkait dengan tulang dan ekspresi fenotipik [126,127]; Dengan demikian ekspresi
gen kolagen-I dan OCN lebih tinggi dalam budaya dinamis daripada pada budaya statis.
Sebuah tabung silikon permeabel yang terus-menerus memompa memungkinkan
pertukaran gas yang optimal, sehingga tekanan parsial O2 dalam medium lebih tinggi
daripada pada pelat kultur konvensional. Hasil ini sesuai dengan artikel sebelumnya,
yang melaporkan bahwa penanaman sel-sel mirip osteoblas dan sel induk sumsum tulang
tikus pada perancah 3D dalam sistem kultur perfusi meningkatkan pertumbuhan,
diferensiasi, dan produksi matriks mineral in vitro. Perancah yang dicirikan penuh dalam
hal porositas, ukuran pori, pembengkakan, ketahanan lemah, kekuatan tekan, dan
 kehilangan massa diunggulkan dengan sel induk mesenkim manusia dan dievaluasi
sehubungan dengan diferensiasi osteogenik dengan waktu inkubasi [128]. Kelompok
eksperimen termasuk fosfat Gen-chitosan + β-trikalsium yang menunjukkan
mikrostruktur seperti sarang lebah yang saling berhubungan dengan porositas> 65%. Ada
ketergantungan linier dari kedua sudut kontak air dan ukuran pori dengan konsentrasi
silang. Aktivitas metabolik hMSCs yang diunggulkan di perancah tersebut secara
signifikan lebih tinggi daripada kontrol, dan juga mineralisasi mereka setelah 21 hari
inkubasi pada media osteogenik. Dipandu membran regenerasi tulang mencegah infiltrasi
jaringan lunak ke dalam gr Bagian belakang ruang selama intervensi gigi yang
melibatkan pencangkokan tulang. Bahan-bahan kitosan telah menunjukkan harapan di
bidang ini, karena biokompatibilitas dan biodegradabilitasnya yang dapat diprediksi,
namun diperlukan waktu degradasi yang lebih lama untuk aplikasi klinis. Membran
Chitosan adalah electrospun menggunakan chitosan (70% deacetylated, 312 kDa, 5,5%
b / v), dengan atau tanpa penambahan genipin 5 atau 10 mM, untuk memperpanjang
degradasi untuk memenuhi waktu klinis empat bulan [129] . Penambahan Genipin
menghasilkan diameter serat median 144 nm, 154 nm masing-masing untuk 5 mm dan 10
mm terikat silang, dan 184 nm untuk sampel yang tidak saling silang. Kekuatan tarik
tertinggi dari tikar meningkat sebesar 165% sampai 32 MPa dengan ikatan silang 10 mm
dibandingkan dengan tikar yang tidak bertautan. Sampel Genipin-chitosan hanya
menunjukkan degradasi 22% berdasarkan kehilangan massa, dibandingkan dengan 34%
untuk tikar yang tidak bertulang belakang pada empat bulan in vitro. Oleh karena itu,
chitosa electrospun dapat diuntungkan dari reaksi dengan genipin dan dapat memenuhi
kerangka waktu degradasi klinis untuk regenerasi tulang yang dipandu. Pergi ke: 7.
Kesimpulan Karya terbaru menghasilkan banyak data tentang keunggulan yang
ditawarkan oleh bentuk fisik baru kitosan yang distabilkan dengan genipin
[95,130,131,132,133,134,133,136,137,138,139,140]. Uang muka yang dibuat menjadi
sangat nyata ketika karya-karya bertanggal 2010-2015 (sekitar> 82% dari daftar pustaka
di bawah ini) dibandingkan dengan beberapa artikel penting yang paling penting
[5,11,27,41,50,141,142,143,144,145,146] yang diterbitkan di kuwein 2000-2005 . Topik
penelitian yang saat ini dipertimbangkan berkisar dari ekstraksi genipin hingga persiapan
perangkat canggih yang sesuai untuk rekayasa jaringan. Proses biokimia yang diadopsi
 dalam pembuatan pigmen bertujuan peningkatan drastis hasil proses, dan pengurangan
biaya. Demikian juga, pandangan baru tentang manipulasi sel manusia memungkinkan
untuk memperbaiki persiapan perancah yang dimaksudkan untuk kinerja maksimal:
misalnya pada lapisan chitosan electrospun tahun ini telah dipasarkan oleh Advanced
BioMatrix, San Diego, CA, AS, untuk lengkapi katalog produk analog berdasarkan
kolagen, gelatin, alginat, hyaluronan dan lebih, dan ditujukan untuk kultur sel dan teknik
jaringan. Setelah perancah lapis demi lapis, saat ini dimungkinkan untuk menghasilkan
permukaan biomimetik fungsional dengan sifat mekanis dan biokimia yang disetel.
Pendekatan teknologi yang disederhanakan untuk pembuatan perancah 3D diplot
memberikan perkembangan yang menarik. Penulis dengan suara bulat mengakui bahwa
perancah chitosan nano nanofibrosa nanotube yang berkaut silang dengan genipin paling
menarik untuk rekayasa jaringan. Meskipun demikian, persiapan yang dijelaskan dalam
artikel yang dikutip di atas paling sering menghilangkan rincian yang sangat diperlukan.
Ini harus digarisbawahi bahwa jumlah genipin dalam jumlah kecil diperlukan bila yang
terakhir adalah ramuan perancah, dan perancah terakhir diperkirakan berwarna biru muda
dan bukan hitam seperti yang ditunjukkan pada beberapa ilustrasi. Selain itu, menjadi
wajib untuk mengungkapkan perhitungan rasio rasio molar antara komponen perancah
yang kualitasnya harus dinilai dengan analisis instrumental lanjutan jika diharapkan
dikenali untuk kemurnian, fungsionalitas dan konsistensi.

Ucapan Terima Kasih Penulis berterima kasih kepada Marilena Falcone dan Simonetta Pirani,
Perpustakaan Pusat, Universitas Politeknik, Ancona, Italia, atas bantuan dalam menangani
informasi bibliografi, dan kepada Maria Weckx untuk mendapatkan bantuan dalam pembuatan
manuskrip tersebut. Pergi ke: Kontribusi Penulis R.A.A. Muzzarelli, M. El Mehtedi., C.
Bottegoni dan A. Gigante memberikan kontribusi yang sama terhadap elaborasi ilmiah tinjauan
ini. A. Aquili memberikan bantuan. Proyek ini dikoordinasikan oleh R.A.A. Muzzarelli. Pergi ke:
Konflik kepentingan Penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan. Karya ini berasal dari
inisiatif pribadi penulis, yang tidak mengajukan permohonan untuk mendapatkan dukungan
finansial.