PEMERIKSAAN SEMEN

(ANALISIS SPERMA)
DIAN ARININGRUM
FAKULTAS KEDOKTERAN UNS-RSUD Dr MOEWARDI SURAKARTA
2016
PEMERIKSAAN
MIKROSKOPIS
2
Learning Objectives
o Melakukan pemeriksaan semen secara mikroskopis,
meliputi :
1) Motilitas, konsentrasi/ jumlah, motilitas, morfologi dan
viabilitas spermatozoa,
2) Menghitung sel selain spermatozoa,
3) Menilai adanya agregasi dan aglutinasi spermatozoa
o Mengidentifikasi dan memberikan ekspertise thd
pemeriksaan semen berdasarkan :
1) Konsentrasi/ jumlah spermatozoa
2) Motilitas spermatozoa
3) Morfologi spermatozoa

3
Preparat ◦ Homogenisasi sampel : sgt
basah
penting utk motilitas, vitalitas,
Motilitas konsentrasi & morfologi 
Vitalitas aspirasi sampel +10x dg pipet
Konsentrasi/ Pasteur, jangan spi terbentuk
jumlah
gelembung
Morfologi

Sel selain
◦ 10 uL sampel homogen  ke
spermatozoa atas object glass bersih  tutup
Agregasi & dg coverslip 22x22 (kedalaman
Aglutinasi
spermatozoa 20.7 um), hindarkan gelembung
udara  tunggu 60” spi sampel
Ekspertise
berhenti mengalir  mikroskop
Kontrol kualitas
obj 40x

Referensi
Preparat
basah Yang dinilai ….
Motilitas
o Motilitas
Vitalitas
o Perkiraan jumlah  menentukan dilusi
Konsentrasi/
jumlah o Agregasi spermatozoa (random
clumping) – “beberapa” adlh normal.
Morfologi
o Aglutinasi sperma
Sel selain
spermatozoa o Round cells : <1 per LPB
Agregasi &
o Sel epithelial : sedikit
Aglutinasi
spermatozoa
o Eritrosit : 0 -- tidak boleh ada
o Debris : partikel lbh kecil drpd head
Ekspertise
spermatozoa
Kontrol kualitas
o Bacteria dan protozoa

Referensi
Preparat basah

◦ Diperiksa dlm 30-60 menit, stlh

Motilitas liquefaksi sempurna
◦ Homogenisasi sampel
Vitalitas
◦ Preparat basah  amati dg obj
Konsentrasi/
jumlah 40x, + 5 mm dr tepi coverslip
Morfologi ◦ Amati 200 spermatozoa intak
(utuh), dr bbrp lapang pandang
Sel selain
spermatozoa sec random
Agregasi & ◦ Dg bantuan tally-counter, di tiap
Aglutinasi
spermatozoa lapang pandang hitung yg
progresif (PR) dulu, kmd non-
Ekspertise
progresif (NP) dan non-motil (NM),
Kontrol kualitas

Referensi 6
Preparat basah o Periksa in replicate
o Jika perbedaan observer acceptable,
Motilitas laporkan rerata persentase kategori motilitas
(PR, NP, NM)
Vitalitas o Potensi eror : dehidrasi sampel, pH, suhu,
Konsentrasi/ gelembung udara
jumlah
o Nilai rujukan : PR + NP > 40% (IK 95% 38-42%);
Morfologi PR > 32% (IK 95% 31-34)
Sel selain Kategori Kriteria
spermatozoa
Progresif (PR) Spermatozoa bergerak aktif,
Agregasi & linier (maju) atau berputar dlm
Aglutinasi
spermatozoa
lingkaran besar
Non-progresif Spermatozoa bergerak kurang
Ekspertise (NP) aktif (lingkaran kecil; hanya
bergetar di tempat)
Kontrol kualitas Non-motil Tidak bergerak
(NM)
Referensi 7
Perbedaan rerata (%) antara 2 observer
yg dpt diterima (tabel 1)

Digunakan utk menilai akseptabilitas beda penghitungan 2 observer dlm

pmx motilitas; pmx morfologi normal
Contoh 1
◦ Menilai motilitas spermatozoa
◦ Dari 200 sp :
PR : N1 = 30%, N2 = 50%
NP: N1 = 5%, N2 = 15%
NM : N1 = 65%, N2 = 35%

 Kategori terbanyak : imotil, dg rerata = 50%, beda

30%
 Akseptabilitas : (tabel 1)dg rerata 50%, beda yang
diterima max 10%  hasil penghitungan di atas tdk
dpt diterima  ulang pemeriksaan motilitas
Contoh 2
◦ Menilai motilitas spermatozoa
◦ Dari 200 sp :
PR : N1 = 37%, N2 = 28%
NP : N1 = 3%, N2 = 6%
NM : N1 = 60%, N2 = 66%

 Kategori terbanyak : imotil, dg rerata = 63%,

beda 6%
 Akseptabilitas : (tabel 1)dg rerata 63%, beda
yang diterima max 10%  hasil penghitungan
di atas dpt diterima
 Dilaporkan :
Motilitas : PR 33%, NP 4%, NM 63%
Preparat basah
o Penting utk sampel dg sperma motil PR <
Motilitas 40%
o Menilai integritas membran sel
Vitalitas o Prinsip : spermatozoa dg membran sel
intak adalah spermatozoa hidup
Konsentrasi/
jumlah
o Metode :
Morfologi 1. Dye exclusion (Eosin atau Eosin-
Sel selain Nigrosin) : membran sel rusak (sel non
spermatozoa viabel)  menyerap cat
Agregasi & 2. Hypotonic/ hypoosmotic swelling
Aglutinasi
spermatozoa (HOS)test : membran sel intak (sel
viabel)  oedem, bila dipaparkan pd
Ekspertise cairan hipotonis
o Nilai rujukan : sel viabel > 58% (IK 95% 55-
Kontrol kualitas
63%)
Referensi 11
Pengecatan Eosin-Nigrosin
Dengan cat Eosin-Nigrosin :
o Tabung rx : 50 uL semen +
50 uL cat Eosin-Nigrosin 
tunggu 30” homogenkan
 buat apusan pd object
glass  lihat mikroskop obj
100x
o Amati 200 spermatozoa
o Laporkan % sel viabel dan
non viabel
o Lakukan in replicate
Dengan cat Eosin saja :
o Object glass : 5 uL
semen + 5 uL cat Eosin
 homogenkan 
tutup dg coverslip 22 x
22  tunggu 30 “ 
lihat mikroskop obj 40x
o Amati 200 spermatozoa
o Laporkan % sel viabel
dan non viabel
o Lakukan in replicate
12
 Spermatozoa dg kepala merah (D1) atau
pink gelap (D2)  sem mati/ non-viabel
(kerusakan membran)

o Persentase sel viabel normalnya melebihi persentase sel motil

o Persentase sel non-viabel tidak boleh melebihi persentase non-
motil
o Sel viabel banyak, tapi non-motil  kemungkinan defek
struktur flagella
o Persentase sel non-motil dan non viabel tinggi 
Necrozoospermia  kemungkinan kelainan epididimis
13
 Hypotonic/ hypoosmotic swelling (HOS) test

o 100 uL semen + 1 mL lar hipoosmotik  inkubasi 30’  ambil 10

uL  object glass, tutup cover slip  mikroskop obj 20/ 40x.
o Lihat 200 spermatozoa :
Sel yg oedem  viabel
Sel yg tdk oedem  non-viabel

Oedem sel (area abu2)  sel

yg viabel

14
Preparat basah

Motilitas Bilik hitung Improved

Neubauer
Vitalitas

Konsentrasi
/ jumlah
Morfologi
Bilik hitung Makler
Sel selain
spermatozoa

Agregasi &
Aglutinasi
spermatozoa

Ekspertise Bilik hitung disposable

Kontrol kualitas

15
Referensi
Preparat basah

Motilitas

Vitalitas

Konsentrasi
/ jumlah
Morfologi

Sel selain
spermatozoa

Agregasi &
Aglutinasi
spermatozoa

Ekspertise

Kontrol kualitas

Referensi 16
o Diluen :
Larutkan 50 g sodium bicarbonate (NaHCO3) dan
10 ml formalin 35% dlm1000 mL akuades – saring –
simpan pd 4oC.

o Jika dg dilusi 1:20 msh terlalu padat  dilusi 1:50

o 10 uL suspensi  bilik hitung, diamkan 4’ dlm petri
lembab  mikroskop obj 40x, hitung di area 5
17
 o Mulai baris 1, 2, dst spi terhitung 200
spermatozoa
o Bila 200 spermatozoa tercapai di pertengahan
baris  selesaikan spi akhir baris
o Jika dr slrh kotak area 5 belum tercapai 200
spermatozoa, teruskan di area 4 dan 6
o Catat baris ke berapa tercapai jumlah 200
spermatozoa
o Pemeriksaan hrs selesai dalam 10-15 menit
o In replicate

C = N1 + N2 x 1 x faktor dilusi x 106 spermatozoa/mL semen

n1 + n2 20

18
Perbedaan jumlah antara 2 observer yg dpt
diterima (tabel 2)

Digunakan utk menilai akseptabilitas beda penghitungan 2 observer dlm

pemeriksaan konsentrasi spermatozoa
Contoh 1
o Pengenceran 1:20
o N1 = 201 sp dalam 7 baris
o N2 = 245 sp dalam 7 baris
Akseptabilitas penghitungan :
• Dari penghitungan didapat 446 sp dalam 14 baris,
perbedaan hitungan antara N1dan N2 adalah 44.
• Dari tabel 2 : bila hasil penghitungan 446 (427-448) 
perbedaan yg dpt diterima maksimal adalah 41
• Maka perbedaan penghitungan oleh 2 pengamat di
atas melebihi perbedaan by chance  hasil
penghitungan tdk dpt diterima  ulang
penghitungan
Contoh 2
o Pengenceran 1:20
o N1 = 220 sp dalam 4 baris
o N2 = 218 sp dalam 4 baris
Akseptabilitas perhitungan :
• Hasil penghitungan adlh 438 sp dlm 8 baris, beda = 2 
(tabel 2) utk hasil penghitungan 427-448, beda yg diterima
maksimal adlh 41  hasil penghitungan dpt diterima.
• Konsentrasi spermatozoa dilaporkan :

C = N1 + N2 x 1 x faktor dilusi x 106 spermatozoa/mL semen

n1 + n2 20

 438/8 x 1/20 x 20 x 106  55 x 106 spermatozoa/mL semen

Jika dalam prep basah hanya
didapat 0-4 sp/LPB ….
A. Jika jumlah akurat tidak diperlukan :
1. Dilaporkan sebagai <2 x 106 spermatozoa/mL
2. Lakukan sentrifugasi (1 mL semen, sentrifugasi
3000 rpm 15 menit, buang supernatan ambil
pellet, resuspensikan dg 50 uL semen), ulang
hitung preparat basah  jika +, dilaporkan sbg
Cryptozoospermia, jika -, dilaporkan sbg
Azoospermia
3. Ambil 40 uL semen tanpa dilusi  object glass,
cover slip 24x50 mm  mikroskop dg obj 20,
hitung seluruh lapang pandang
Jika dalam prep basah hanya
didapat 0-4 sp/LPB ….
B. Jika jumlah akurat diperlukan :
1. Pergunakan lower dilution (1:2)
2. Hitung di 9 area bilik hitung
3. Masukkan 25 uL suspensi semen

Jika dihitung di area 5 atau 5, 4 dan 6 :

C = N x 1 x 2 x 106 spermatozoa/mL semen
n 100

= N x 1 x 106 spermatozoa/mL semen

n 50

Jika dihitung di 9 area  C = N x 2 x 103 spermatozoa/mL semen

1.8
Perbedaan jumlah antara 2 observer yg dpt
diterima : konsentrasi spermatozoa rendah (tabel 3)

Digunakan utk menilai akseptabilitas penghitungan 2 observer dlm menghitung

jml spermatozoa bila terhitung rendah; menghitung round cell dan lekosit
Contoh 1 :
o Pengenceran 1:2
o N1 = 200 sp dlm 2 area
o N2 = 250 sp dlm 2 area

Akseptabilitas :
• Hasil perhitungan adlh 450 dlm 4 area, beda = 50
 (tabel 3) utk hasil penghitungan 449-470, beda
yg diterima maksimal adlh 42  perhitungan tdk
dpt diterima  ulang pengamatan.
Contoh 2 :
o Pengenceran 1:2
o N1 = 210 sp dlm 3 area
o N2 = 200 sp dlm 3 area

Akseptabilitas :
• Hasil perhitungan adlh 410 dlm 6 area, beda = 10 
(tabel 3) utk hasil penghitungan 407-426, beda yg
diterima maksimal adlh 40  perhitungan dpt
diterima.

C = N x 1 x 2 x 106 spermatozoa/mL semen

n 100

Konsentrasi = 410/6 x 1/50 x 106 spermatozoa/mL semen

= 1.4 x 106 spermatozoa/mL semen
Contoh 3 :
o Pengenceran 1:2
o N1 = 10 sp dlm 9 area
o N2 = 8 sp dlm 9 area

Pelaporan :
“Didapat <25 spermatozoa dalam 2 kali
pengamatan, jumlah spermatozoa terlalu sedikit
untuk penentuan konsentrasi spermatozoa
secara akurat (<56000 spermatozoa/mL semen)”
o Normal : >15 juta/mL (IK 95% = 12-16 juta/mL)
o <12 juta/ mL : Oligozoospermia/
Cryptozoospermia/ Azoospermia
o Kausa oligozoospermia/ azoospermia :
1. Kelainan kromosom,
2. Obstruksi duktus,
3. Obat,
4. Defisiensi gonadotropin,
5. Hyalinisasi tubulus seminiferus,
6. Maturation arrest,
7. Gangguan hipofisis,
8. Radiasi,
9. Renal failure,
10. Sertoli-cell-only syndrome.
28
Preparat basah
Pembuatan preparat :
Motilitas
o Semen tanpa dilusi, homogenkan
Vitalitas
o Pipet 5-10 uL sampel – buat
Konsentrasi/
jumlah
apusan, minimal 2 buah slide
o Keringudarakan
Morfologi o Fiksasi dg etanol 95% 15’
Sel selain o Bila konsentrasi spermatozoa
spermatozoa
rendah, sentrifugasi sampel 600 g
Agregasi &
Aglutinasi 10’ – buang sebagian besar
spermatozoa
supernatan – pellet diresuspensikan
Ekspertise kembali dg sisa supernatan
Kontrol kualitas

Referensi 29
Preparat basah

Motilitas

Vitalitas

Konsentrasi/
jumlah

Morfologi

Sel selain o Pengecatan Papanicolau

spermatozoa
o Pengecatan Shorr
Agregasi &
o Pengecatan H-E
Aglutinasi o Pengecatan Giemsa-modified Giemsa
spermatozoa

Ekspertise

Mikroskop, obj 100x, dg imersi

Kontrol kualitas

Referensi 30
 and smooth with
in the head of the
orange. Flagella’s
assessment could not be done but the middle part and flagella
can be evaluated as very clear Therefore, all AKSOY, E.; AKTAN, T. M.; DUMAN, S. & CUCE, G. Evaluación de la morfología de los espermatozoides bajo microscopía óptica con difer
mediciones morfométricas. Int. J. Morphol., 30(4):1544-1550, 2012.
the morphological defects of spermatozoa could be easily
evaluated (Fig. 7).

ación de la morfología de los espermatozoides bajo microscopía óptica con diferentes tinciones histológicas y comparación de las
diciones morfométricas. Int. J. Morphol., 30(4):1544-1550, 2012. DISCUSSION

sa, Diff-Quick for RESULTS Assessment of sp

phological features important parameter in th
merical values. to the use of increasing am
a slight change in Head, middle piece and tails of spermatozoa were techniques, studies are a
because fixatives seen clearly with HE. Acrosome core rate was extremely of spermatozoa about the
ple, 3-5 mm length good in the form of light and dark purple (condensation). can be done with stainin
idered normal for The stain was homogeneously distributed on the head and methods from the fresh sem
of Papanicolaou. dark purple color was seen. The middle piece and tail were light microscope. There
5 mm in the Diff- seen clearly and can be evaluated very well (Fig. 1). The evaluate the morphology o
García-Herreros et al. (
e piece
rous should be
Haematoxylin.
ld be up to 1.5 ti- Spermatozoa pengecatan
ideal
Fig. 5.image was obtained
Spermatozoa stainedby staining
with spermatozoa with 0.1%
Papanicolau.
TB. The condensation of the head can be chosen by the
Fig. 7. Spermatozoa stained with Shorr .
Spermatozoa pengecatan Shorr haematoxylin and PanOpti
hould be 45 mm
). Because of these
Papanicolau
whitish blue color. Condensation and morphology of the head
can be selected clearly (Fig. 2).
standardization of the samp
and staining for the head o
spermatozoa with assisted morphometric ana
o find the better that Haematoxylin and H
tudy. methods for evaluation of

Soler et al. (2005) c

for assessment of spe
computerized Integrated
They evaluated 200 sp
men samples were Hemacolor, Diff-Quik and
h were admitted to found all techniques were
Medicine, Assisted of spermatozoa but Diff-Q
se patients have Fig. 8. Spermatozoa stained with Janus Green. difference.
Fig. 6. Spermatozoa stained with Light Green.
mia (n=20) and
TB is used in the ev
stained with H-E, TB, Shorr and Papanicolau were assessed of spermatozoa by identi
ght-dark-blue with The heads ofstained
Fig. 1. Spermatozoa spermatozoa
with H-Ewere stained
(FMBx 330).pale pink-lilac
dedthefrom washed
condensation Spermatozoa pengecatan H-E
color with Berg Method. Morphology of spermatozoa was clear, Spermatozoa pengecatan Modified Giemsa.
according to Kruger’s criteria. Spermatozoa were measured in
terms of 4 parameters as head length, head width, middle part
disulfide bonds. Belet
relationship between s
d the flagella’s and
temperature can but condensation of head could not be evaluated. Morphology
length and tail length. Statistical analysis were made using one- spermatozoa chromatin co
dstheofstudy, smears
spermatozoa of the spermatozoa was clear but condensation at the head was
ht, ferrousdye
Weigert way variance analysis (ANOVA) and Post hoc Tukey HSD reaction. TB is a effective s
nicalou and not evaluated with AO stain. When AO stain applied with
ne blue dye, Shorr test and which stain showed better spermatozoa morphology in spermatozoa chromatin
and the flagella’s haematoxylin, haematoxylin only stained the membrane around
ight Green stain, and which was more appropriate for Kruger’s strict criteria knowledge of the literatu
nucleus and spermatozoa observed like Y letter.
dyes. Preparations were determined. The smallest values belonged to TB simple method and allo
e. well with light according to measurements of head of the spermatozoa. There morphology and condensat
en Morphology of spermatozoa with the supra vital dye
 able.1 Reference range of functional test parameters
>40
36-40
31-35
26-30
21-25
AGE

Int.J.Curr.Res.Aca.Rev.2014; 2(11):47-63
Table.2 Different age groups with gradient

< 1 million

NORMAL
Figure.1 Structure of normal sperm

>58%
>60
4%
G1
1
2
8
4
3

SUBNORMAL
G2

Is Genital
25-58%
59

40-60
<4%
1
1
6
5
1
G3
0
1
1
2
0

POOR QUALITY VERY POOR

G4

15 to 25%
20 to 40
Tract
MORFOLOGI SPERMATOZOA NORMAL

0
0
1
2
1

3%
Kepala - Oval, tepi halus, reguler
(head) - Akrosom 40-70% area kepala
- Akrosom : tdk ada vakuola besar, vakuola kecil tdk boleh >2,

infection
<15%
<20
menempati <20% area kepala
- Regio post-akrosom : tdk boleh ada vakuola
Mid piece - Ramping, reguler
- Panjangnya sama dg kepala
- Aksis mid piece sejajar dg aksis kepala
- Residu sitoplasma boleh ada, asal tdk melebihi 30% ukuran
kepala
Ekor (tail) - Diameter sama (kecuali end piece)
- Lbh tipis dibandingkan mid piece
- Panjang + 10 kali panjang kepala
- End piece melengkung alamiah, tidak patah 32
 Defek morfologi spermatozoa
Letak Defek
Kepala (head) Lbh besar; lbh kecil; tapered (meruncing);
round (membulat); amorf; vakuolisasi;
vakuola post akrosom; acr >70% (luas
akrosom >70% luas kepala); acr <40% (luas
akrosom <40% luas kepala); double head;
pyriform (bentuk spt buah pir)

Neck dan Mid piece Asimetri (insersi midpiece ke dlm head

asimetris); tebal; ireguler; bengkok; kurus;
ERC > 1/3 (excess residual cytoplasm >1/3
luas kepala)
Ekor (tail) Pendek; multipel; patah; coiled (keriting);
bengkok; tebal ireguler

33
Preparat basah
o Tidak perlu mendeskrispsikan semua kelainan
morfologi
Motilitas
o Dilihat 200 spermatozoa, laporkan :
Vitalitas • %H (abnormalitas head)
Konsentrasi/
• %M (abnormalitas midpiece)
jumlah • %P (abnormalitas principal piece)
• %C (ERC)
Morfologi o Pergunakan 6 diff tally counter

Sel selain N Abn H M P C

spermatozoa

Agregasi & o Laporkan proporsi spermatozoa normal dan

Aglutinasi abnormal
spermatozoa
o Normal + abnormal = 100%
Ekspertise o H + M + P + C = bisa lbh dr 100% (krn multiple
defect pd 1 spermatozoa)
Kontrol kualitas
o Nilai rujukan : morfologi normal >4%
Referensi 34
 Contoh
o N1 (200 spermatozoa) o Akseptabilitas utk morfologi normal :
Normal = 42 N1 42 dlm 200 sp
Abnormal = 158 N2 36 dlm 200 sp
Rerata 39; beda 6  dr tabel 1,
- H 140
maksimal beda yg dpt diterima
- M 102 adlh 10  hasil pengamatan dpt
- P 30 diterima
- C 44 Pelaporan :
o N2 (200 spermatozoa) Morfologi normal =
Normal = 36 (42 + 36) / 400 = 20%
Abnormal = 164 Morfologi abnormal :
- H 122 (158 + 164) / 400 = 80%
- M 108 H = (140 + 122) / 400 = 66%
- P 22 M = (102 + 108) / 400 = 53%
P = (30 + 22) / 400 = 13%
- C 36
C = (44 + 36) / 400 = 20%
35
Referensi : WHO manual, 2010 36
ERC A, B, C, spermatozoa double-headed.
C, double head + excessive residual
cytoplasm (ERC)

Spermatozoa double-tailed.

37
 Flat-
headed
sperm, tdk
memiliki
acrosome

Variasi ukuran head spermatozoa

A: Normal. B: Large head. C: Small
atau pinhead

Coiled-tailed spermatozoa
38
Round heads spermatozoa

Vacuola dalam head

spermatozoa

A. Tapered heads spermatozoa. Leher : excessive

B. Tapered head + excessive residual cytoplasm. residual cytoplasm
C. Tapered head + coiled tail (ERC)
39
 Head Midpiece Principal Overall
piece
26 normal normal normal normal

27 normal normal normal normal

28 normal tebal normal abn

29 monosit

30 netrofil

31 monosit

32 netrofil

33 monosit
No Sel
10 Spermatid degenerasi
11 Makrofag
12 Spermatid degenerasi
13 Spermatid degenerasi
14 Spermatid degenerasi
15 Spermatid degenerasi
16 Makrofag
Preparat basah
1. Menggunakan sediaan apus dg
pengecatan
Motilitas
o Dilihat dg mikroskop perbesaran 100x obj
Vitalitas
o Sel selain spermatozoa berupa :
Konsentrasi/
jumlah 1. Sel epithel dr traktus genitourinarius
Morfologi 2. Sel darah : lekosit, eritrosit
3. Immature germ cells
Sel selain
spermatozoa o Immature germ cell + lekosit = round cell

Agregasi &
Aglutinasi Rumus :
spermatozoa C = S x (N/400)
di mana C = jml round cell/mL
Ekspertise S = konsentrasi spermatozoa ( x106/mL)
N = jml round cell (sel/200 spermatozoa)
Kontrol kualitas

Referensi 42
Contoh 1 :
o N1 = 21 round cell/ 200 spermatozoa
o N2 = 39 round cell/ 200 spermatozoa
o Konsentrasi spermatozoa = 70 x 106 sel/mL

Akseptabilitas :
• Hasil perhitungan adlh 60 dlm 400
spermatozoa, beda = 18  (tabel 3) utk
hasil penghitungan 55-62, beda yg
diterima maksimal adlh 15  perhitungan
tdk dpt diterima  ulang pengamatan.
Contoh 2 :
o N1 = 24 round cell/ 200 spermatozoa
o N2 = 36 round cell/ 200 spermatozoa
o Konsentrasi spermatozoa = 70 x 106 sel/mL

Akseptabilitas :
• Hasil perhitungan adlh 60 round cell dlm 400
spermatozoa, beda = 12  (tabel 3) utk hasil
penghitungan 55-62, beda yg diterima maksimal
adlh 15  perhitungan dpt diterima.

C = S x (N/400) = 70 x 106 (60/400)

= 10.5 x 106 sel/mL
Preparat basah

2. Menggunakan Hemositometer
Motilitas

Vitalitas
o Pengenceran 1:20  jml round
cell/ lekosit terlalu sedikit 
Konsentrasi/
jumlah
pergunakan pengenceran 1:10
o Prosedur spt menghitung
Morfologi
konsentrasi spermatozoa
Sel selain o Rekomendasi : pengecatan
spermatozoa
peroxidase
Agregasi &
Aglutinasi
spermatozoa
C = N1 + N2 x 1 x faktor dilusi x 106 lekosit/mL
n1 + n2 100
Ekspertise

Kontrol kualitas

Referensi 45
Contoh
o Pengenceran 1:10
o N1 = 204 sel dalam 5 area
o N2 = 198 sel dalam 5 area
Akseptabilitas perhitungan :
• Hasil penghitungan adlh 402 dlm 10 area, beda = 6 
(tabel 3) utk hasil penghitungan 386-406, beda yg diterima
maksimal adlh 39  hasil penghitungan dpt diterima.
• Jumlah lekosit dilaporkan :

C = N1 + N2 x 1 x faktor dilusi x 106 sel/mL semen

n1 + n2 100

 402/10 x 1/100 x 10 x 106  4 x 106 sel/mL semen

Preparat basah
Agregasi spermatozoa
Motilitas

Vitalitas o Agregasi non spesifik spermatozoa motil

dengan :
Konsentrasi/
jumlah a. Benang mukus,

Morfologi
b. Sel2 non spermatozoa (mis epitel, lekosit),
c. Debris,
Sel selain
spermatozoa d. Antar non motile-spermatozoa
Agregasi &
Aglutinasi
spermatozoa

Ekspertise

Kontrol kualitas
Agregasi spermatozoa dengan a) sel epitel, b)
Referensi
debris, c,d) spermatozoa lain 47
Aglutinasi spermatozoa
o Aglutinasi spermatozoa motil satu sama lain
o Mengganggu motilitas
o Menunjukkan kemungkinan adanya anti-sperm
antibodies

Grade
1 Isolated <10 spermatozoa per aglutinat, msh banyak
spermatozoa bebas
2 Moderate 10-50 spermatozoa per aglutinat
3 Large >50 spermatozoa per aglutinat, sedikit
spermatozoa bebas
4 Gross Seluruh spermatozoa mengalami aglutinasi

48
 Aglutinasi head to head

Aglutinasi tail to tail

Aglutinasi tail tip to tail tip

Campuran

Kusut

Referensi : WHO Manual 2010 49

Preparat basah
Nilai rujukan semen (WHO,
Motilitas 2010)
Vitalitas
Parameter Batas bawah 95% CI
Konsentrasi/
normal
jumlah
Volume (mL) 1.5 1.4 – 1.7
Morfologi
Konsentrasi (x 106 15 12 – 16
Sel selain spermatozoa/mL)
spermatozoa Jumlah spermatozoa 39 33 – 46
total (juta)
Agregasi &
Aglutinasi Vitalitas (%) 58 55 – 63
spermatozoa
Motilitas progresif (%) 32 31 – 34
Motilitas total (%) 40 38 -- 42
Ekspertise Morfologi normal (%) 4 3 -- 4
Lekosit (juta/mL) <1
Kontrol kualitas

Referensi 50
 Klasifikasi abnormalitas
Terminologi Arti Kausa
Normozoospermia Jumlah, motilitas dan --
morfologi normal
Aspermia Tdk dihasilkan semen Ejakulasi retrograd, obstruksi
duktus ejakulatorius,
defisiensi androgen
Azoospermia Tdk didapat Hypogonadotropism, ggn
spermatozoa dlm genetik, obat, obstruksi
semen duktus ejakulatorius
Hypospermia Volume semen < 1.5 Obstruction of the seminal
ml vesicles
Hyperspermia Volume semen > 5.5 Ejakulasi multipel
ml
Oligozoospermia Jml spermatozoa Hipogonadism, obat,
kurang dr normal alkohol, merokok
51
 Klasifikasi abnormalitas
Terminologi Arti Kausa
Asthenozoosper jml sperma motil Gangguan metabolik,
mia kurang dr normal defek flagella,
necrozoospermia
Teratozoospermia banyak defek Hodgkin's disease,
morfologi coeliac disease, Crohn's
spermatozoa disease, varicocele,
merokok
Necrozoospermia banyak Spermisida, kontaminasi
spermatozoa mati kontainer
Leucospermia jml lekosit dlm Infeksi
semen > 1 juta/mL
Haemospermia semen mgd eritrosit Infeksi, trauma, tumor

52
Preparat basah

Eror dalam analisis semen :

Motilitas

Vitalitas
1. Random errors : berasal dr
“chance” saat sampling atau
Konsentrasi/
jumlah pembacaan, dpt dinilai dg
Morfologi
repeated measurements oleh
observer yg sama, dg alat yg
Sel selain
spermatozoa sama.
Agregasi & 2. Systematic errors (bias) : lbh
Aglutinasi
spermatozoa samar, tdk terdeteksi dg
repeated measurements.
Ekspertise
3. Distribusi random dr spermatozoa
Kontrol  presisi analisis semen rendah
kualitas
Referensi
Sampel utk QC

◦ Sampel QC komersial
• Keuntungan : akurasi dan presisi terjamin
• Kerugian : mahal, blm tersedia secara luas
◦ Sampel QC yg dibuat oleh laboratorium
• Keuntungan : lbh murah, dpt dibuat sesuai
kebutuhan laboratorium, dpt disimpan utk
jangka waktu lama
• Kerugian : target values tdk diketahui
Sampel QC yg dibuat oleh
laboratorium
◦ Konsentrasi spermatozoa
◦ Sampel semen dr berbagai konsentrasi, didilusi
dan disimpan
◦ Morfologi & vitalitas spermatozoa
◦ Slide yg dikering-udarakan, preparat apus yg
difiksasi, preparat yg dicat, preparat Eosin-
Nigrosin utk vitalitas.
◦ Slide diambil dr pemeriksaan rutin (semen dg
kualitas good, medium and poor)
◦ Motilitas spermatozoa
◦ Rekaman video
Preparat basah

o Dikerjakan in replicate
Motilitas
o 2 observer yg berbeda, hasil
Vitalitas
penghitungan dlm rentang
Konsentrasi/ akseptabilitas, dilaporkan rata-
jumlah
ratanya
Morfologi
o Kalibrasi alat2
Sel selain
spermatozoa o Training analis
Agregasi & o Standard Operating Procedure (SOP)
Aglutinasi
spermatozoa o Program kontrol kualitas internal
Ekspertise
o Program kontrol kualitas eksternal

Kontrol
kualitas
Referensi 56
Preparat basah
1. Brunzel, N.A, 2013, Fundamentals of Urine and
Motilitas Body Fluid Analysis, 3rd edition, Elsevier-
Saunders, 287-300.
Vitalitas
2. Mundt, L.A, Shanahan, K, 2016, Graff’s
Konsentrasi/ Textbook of Urinalysis and Body Fluids, 3rd
jumlah
edition, Wolters Kluwer: 231-245.
Morfologi
3. Rothman, S.A, Reese, A.A, 2007, Semen
Sel selain Analysis: the test techs love to hate, MLO Med
spermatozoa Lab Obs., 39 (4): 18-20, 22-27.
Agregasi & 4. World Health Organization, 2010, WHO
Aglutinasi Laboratory Manual for the Examination and
spermatozoa
Processing of Human Semen, 5th edition,
WHO Press, Geneva.
Ekspertise

Kontrol kualitas

Referensi 57
Semoga bermanfaat…